CN104013653A - 赶黄草或其提取物的新用途 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了赶黄草或其提取物在制备预防或治疗非酒精性脂肪肝的保健品或药物中的用途。本发明研究表明,赶黄草及其提取物对非酒精性脂肪肝有良好的预防或治疗作用,可以有效降低血清中ALT、TBIL水平,降低血清中TG水平,提高血清中HDL-C水平,降低肝组织中TG、NEAF含量,升高GSH-PX活力,减轻肝脏脂肪变性,为治疗非酒精性脂肪肝的临床用药提供了新的选择。
Description
技术领域
本发明涉及赶黄草或其提取物的新用途。
背景技术
非酒精性脂肪性肝病(nonalcoholic htty liver disease,NAFI.D),是一种与胰岛素抵抗(insulinresistance,IR)和遗传易感密切相关的代谢应激性肝脏损伤,其病理学改变与酒精性肝病(alcoholic liver diseaseALD)相似,但患者无过量饮酒史,疾病谱包括非酒精性单纯性脂肪肝(nonalcoholicsimple faayliVet,NAFL)、非酒精性脂肪性肝炎(nonalcoholicsteatohepatitis,NASH)及其相关肝硬化和肝细胞癌。
临床诊断时,明确NAFLD的诊断需符合以下3项条件:(1)无饮酒史或饮酒折合乙醇量<140g/周(女性<70g/周);(2)除外病毒性肝炎、药物性肝病、全胃肠外营养、肝豆状核变性、自身免疫性肝病等可导致脂肪肝的特定疾病;(3)肝活检组织学改变符合脂肪性肝病的病理学诊断标准。治疗NAFLD的首要目标为改善IR,防治代谢综合征及其相关终末期器官病变,从而改善患者生活质量和延长存活时间;次要目标为减少肝脏脂肪沉积并避免因“二次打击”而导致NASH和肝功能失代偿,NASH患者则需阻止肝病进展,减少或防止肝硬化、肝癌及其并发症的发生。目前治疗非酒精性脂肪肝的主要措施为:锻炼、改善饮食结构,控制体重、减少腰围;改善IR,纠正代谢紊乱,可使用胰岛素增敏剂。对于保肝抗炎药物而言,这类药物在NAFLD防治中的作用和地位至今仍有争论,目前并无足够证据推荐NAFLD/NASH患者常规使用这类药物(《非酒精性脂肪性肝病诊疗指南》2010)。
赶黄草(Penthorum chinense Pursh.),又称水泽兰、水杨柳(《贵州民间药物》),水滓蓝(《天宝本草》),来源于虎耳草科(Saxifragaceae)扯根菜属(Penthorum)植物赶黄草(Penthorum chinense Pursh.)的干燥地上部分。赶黄草是苗族民间治疗肝病的有效药物,苗族人世代习用,称之为“神仙草”;但由于苗医、苗药无文字记载,故其民间应用靠口耳相传继承至今。有文字可寻的关于赶黄草的记载最早见于明代《救荒本草》,名扯根菜,载其“味甘”,并对其植株特征进行了记载;《贵州民间药物》载其“味甘,性微温,无毒”,功效“消肿,利水,祛瘀,行气”;至2000年《全国中草药汇编》收录本药时按中药理论对其进行记载,具有清热解毒、退黄化湿,活血散瘀,利水消肿之功效,主治经闭、水肿、血崩、带下,跌打损伤等。现代多数研究均表明,赶黄草及其提取物可有效预防和治疗酒精性脂肪肝。酒精性肝病是由于长期大量饮酒导致的肝脏疾病,其诊断标准中明确记载:有长期饮酒史,一般超过5年,折合乙醇量男性≥40g/d,女性≥20g/d,或2周内有大量饮酒史,折合乙醇量>80g/d。酒精性脂肪肝的治疗原则为:戒酒和营养支持,减轻酒精性肝病的严重程度;改善已存在的继发性营养不良和对症治疗酒精性肝硬化及其并发症。在对酒精性脂肪肝的治疗过程中,戒酒是治疗的最重要措施,并同时在戒酒的基础上提供高蛋白、低脂饮食,并注意补充维生素B、维生素c、维生素K及叶酸;服用美他多辛可加速酒精从血清中清楚,有助于改善酒精性中毒症和行为异常;还可使用糖皮质激素改善肝炎患者的生存率(《酒精性肝病诊疗指南》2010年)。
对比非酒精性脂肪肝和酒精性脂肪肝可知,两者的发病机制、治疗原则、治疗手段均不相同,两者为不同的疾病种类。目前,还未见将赶黄草用于预防或治疗非酒精性脂肪肝的相关报道。
发明内容
本发明的目的在于提供赶黄草或其提取物的新用途。
具体地,本发明提供了赶黄草或其提取物在制备预防或治疗非酒精性脂肪肝的保健品或药物中的用途。
其中,所述赶黄草的提取物为赶黄草的水或/和乙醇提取物。
进一步地,所述赶黄草的提取物是赶黄草经水提醇沉所得上清液,或此上清液的浓缩品或干燥品。
更进一步地,所述水提醇沉的工艺如下:
(1)提取:取赶黄草,水煎,合并水煎液;
(2)浓缩:将水煎液浓缩至60~70℃测得相对密度为1.15~1.18的水清膏;
(3)醇沉:水清膏中加入乙醇至含醇量达50~70%v/v,静置醇沉,收集上清液,即可。
优选地,步骤(1)中,水煎的具体操作为:取赶黄草,切段5-10cm,第一次加4-8倍量的水,煎煮提取2-4小时,第二次加2-4倍量的水,煎煮提取2-4小时。
本发明一个具体的实施方式中,醇沉过程中加乙醇至含醇量达50%v/v、55%v/v、60%v/v、65%v/v、70%v/v。
进一步地,所述保健品或药物是降低血清中ALT、TBIL水平,降低血清中TG水平,提高血清中HDL-C水平的保健品或药物。
进一步地,所述保健品或药物是降低肝组织中TG、NEAF含量,升高GSH-PX活力的保健品或药物。
进一步地,所述保健品或药物是减轻肝脏脂肪变性的保健品或药物。
进一步地,所述非酒精性脂肪肝为非酒精性单纯性脂肪肝或/和非酒精性脂肪性肝炎。
本发明中,所述的保健品或药物为经胃肠道吸收剂型。例如,口服液、散剂、丸剂、片剂、颗粒剂、胶囊剂等。
本发明中,制备相关剂型时,以赶黄草的药粉、水提物或/和醇提物为活性成分,加上保健品或药物常用的辅料或辅助性成分制备成剂型。
本发明所述药学上可接受的辅料,是指除活性成分以外包含在剂型中的物质,包括但不仅限于填充剂(稀释剂)、润滑剂(助流剂或抗粘着剂)、分散剂、湿润剂、粘合剂、调节剂、增溶剂、抗氧剂、抑菌剂、乳化剂、崩解剂等。粘合剂包含糖浆、阿拉伯胶、明胶、山梨醇、黄芪胶、纤维素及其衍生物(如微晶纤维素、羧甲基纤维素钠、乙基纤维素或羟丙甲基纤维素等)、明胶浆、糖浆、淀粉浆或聚乙烯吡咯烷酮等;填充剂包含乳糖、糖粉、糊精、淀粉及其衍生物、纤维素及其衍生物、无机钙盐(如硫酸钙、磷酸钙、磷酸氢钙、沉降碳酸钙等)、山梨醇或甘氨酸等;润滑剂包含微粉硅胶、硬脂酸镁、滑石粉、氢氧化铝、硼酸、氢化植物油、聚乙二醇等;崩解剂包含淀粉及其衍生物(如羧甲基淀粉钠、淀粉乙醇酸钠、预胶化淀粉、改良淀粉、羟丙基淀粉、玉米淀粉等)、聚乙烯吡咯烷酮或微晶纤维素等;湿润剂包含十二烷基硫酸钠、水或醇等;抗氧剂包含亚硫酸钠、亚硫酸氢钠、焦亚硫酸钠、二丁基苯酸等;抑菌剂包含0.5%苯酚、0.3%甲酚、0.5%三氯叔丁醇等;调节剂包含盐酸、枸橼酸、氢氧化钾(钠)、枸橼酸钠及缓冲剂(包括磷酸二氧钠和磷酸氢二钠)等;乳化剂包含聚山梨酯-80、没酸山梨坦、普流罗尼克F-68,卵磷酯、豆磷脂等;增溶剂包含吐温-80、胆汁、甘油等。
所述药学上可接受的辅助性成分,它具有一定生理活性,但该成分的加入不会改变上述食品、保健品或药物组合物在疾病治疗或对人体生理功能改善过程中的主导地位,而仅仅发挥辅助功效,这些辅助功效仅仅是对该成分已知活性的利用,是医药领域或保健领域惯用的辅助方式。
本发明研究表明,赶黄草及其提取物对非酒精性脂肪肝有良好的预防或治疗作用,可以有效降低血清中ALT、TBIL水平,降低血清中TG水平,提高血清中HDL-C水平,降低肝组织中TG、NEAF含量,升高GSH-PX活力,减轻肝脏脂肪变性,为治疗非酒精性脂肪肝的临床用药提供了新的选择。
显然,根据本发明的上述内容,按照本领域的普通技术知识和手段,在不脱离本发明上述基本技术思想前提下,还可以做出其他多种形式的修改、替换或变更。
以下通过具体实施例的形式,对本发明的上述内容再做进一步的详细说明。但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实施例。凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范围。
附图说明
图1赶黄草提取物对非酒精性脂肪肝大鼠肝组形态学的影响(HE染色,100×)
具体实施方式
实施例1 本发明赶黄草提取物的制备方法:
(1)提取:取赶黄草净药材,切段5-10cm,投入提取罐中,加4-8倍量的水,加热至沸腾提取2-4小时,过滤,药液输入药液储罐;第二次加2-4倍量的水,煮沸煎煮2-4小时,滤过,滤液与第一次合并;
(2)浓缩:真空浓缩至相对比重(60~70℃)1.15~1.18的水清膏。
(3)醇沉:水清膏中加入乙醇,使药液含醇量达到50-70%,搅拌均匀,停止搅拌后将药液静置,待沉淀完全,抽取醇沉上清液,洗涤沉淀,将上清液与洗液合并。
(4)收醇:真空回收乙醇,至药液比重为1.30~1.32时收膏,即得提取物。
实施例2 本发明赶黄草提取物的制备方法:
(1)提取:取赶黄草净药材,切段5-10cm,投入提取罐中,加8-10倍量的水,加热至沸腾提取1-3小时,过滤,药液输入药液储罐;第二次加5-7倍量的水,煮沸煎煮1-3小时,滤过,滤液与第一次合并;
(2)浓缩:真空浓缩至相对比重(60~70℃)1.18~1.20的水清膏。
(3)醇沉:水清膏中加入乙醇,使药液含醇量达到60-70%,搅拌均匀,停止搅拌后将药液静置,待沉淀完全,抽取醇沉上清液,洗涤沉淀,将上清液与洗液合并,即得提取物。
实施例3 本发明赶黄草提取物的制备方法:
(1)提取:取赶黄草净药材,切段5-10cm,投入提取罐中,加10-12倍量的水,加热至沸腾提取1-2小时,过滤,药液输入药液储罐;第二次加2-4倍量的水,煮沸煎煮2-4小时,滤过,滤液与第一次合并;
(2)浓缩:真空浓缩至相对比重(60~70℃)1.13~1.15的水清膏。
(3)醇沉:水清膏中加入乙醇,使药液含醇量达到50-70%,搅拌均匀,停止搅拌后将药液静置,待沉淀完全,抽取醇沉上清液,洗涤沉淀,将上清液与洗液合并。
(4)收醇、干燥:真空回收乙醇,并将所得浸膏干燥,即得提取物。
以下通过试验例具体说明本发明的有益效果。
试验例1 赶黄草提取物对大鼠非酒精性脂肪肝的影响
1.1 实验材料
2.1.1 药物
赶黄草提取物,由成都国嘉投资股份有限公司提供,含量4g生药/ml,使用前用蒸馏水分别配成1.67g、0.84、0.42g生药/ml(分别是人用剂量的20、10、5倍)。提取物制备方法如实施例1。
非诺贝特胶囊,阳性药物,批号18389,由法国利博福尼制药公司生产,使用前用蒸馏水配成3.3mg/ml。胆固醇、胆酸钠均由成都鹏世达实验用品有限公司生产,批号分别为TM0304QA13、20121213;蛋黄粉,由浙江省长兴艾格生物制品有限公司生产,批号20120921;自制猪油。
2.1.2 动物
SD大鼠,清洁级,体重180~220g,雌雄各半,由成都中医药大学动物中心研究中心提供,动物质量合格证号SCXK(川)2008-11,检疫后备用。
2.1.3 主要试剂与仪器
测血清指标的ALT、AST、CHO、TG试剂盒批号分别为120521、130471、121001、120651,均购自中生北控生物科技股份有限公司;TBIL试剂盒由四川迈克生物科技股份有限公司提供,批号0313011;HDL-C、LDL-C试剂盒,由浙江伊利康生物技术有限公司提供,批号分别为130302、130101。测肝组织指标的T-CHO、TG试剂盒由长春汇力生物技术有限公司提供,批号分别为2013021、2013016;NEAF、MDA、T-SOD、GSH-PX检测试剂盒,均由南京建成生物工程研究所提供,批号分别为20130517、20130311、20130424、20130516。全自动生化分析仪(美国BECKMAN COULTER公司,型号AU5400);低速离心机(湖南湘仪实验室仪器开发有限公司,型号TDZ5-WS);多功能酶标仪(美国Thermo公司,VARIOSKAN FLASH);紫外分光光度仪(Techcomp公司,型号UV1100)。
2.2 实验方法
模型复制与给药:取合格健康清洁级大鼠67只,待适应环境后将大鼠按体重随机分为正常对照组(N=9)、模型对照组(N=25)、赶黄草高剂量组(N=9)、赶黄草中剂量组(N=8)、赶黄草低剂量组(N=8)及非诺贝特组(N=9)。造模方法根据文献报道及预试确定,自试验第1天开始,除正常对照组外,其余各组均灌胃脂肪乳(胆固醇、猪油、蛋黄粉、胆酸钠、水按1:5:3:0.5:0.5质量比配制),正常组对照组灌胃蒸馏水,灌胃体积均为10ml/kg,每日1次,连续9周;从第3周起开始预防给药,每日上午灌脂肪乳,下午灌胃给药,其中赶黄草高、中、低剂量组分别灌胃相应赶黄草提取物16.7、8.4、4.2g生药/kg,非诺贝特组管胃非诺贝特溶液33.3mg/kg,正常对照组和模型对照组灌胃蒸馏水,给药体积均为10ml/kg,每日1次,至实验结束。自试验第5周起,于每周给药末模型组取4只动物进行血清ALT、AST、TBIL、TC、TG、HDL-C、LDL-C水平测定和肝组织病理学检查。当肝组织出现明显脂肪变时终止试验,总时间不超过9周。
指标测定:末次给药24h后,各组大鼠随机取8~9只大鼠股动脉取血,离心后取血清采用全自动生化仪测定ALT、AST、TBIL、TC、TG、HDL-C、LDL-C水平;同时每只大鼠立即剖剪一小部分肝组织,称重后用锡箔纸包裹冷冻于-80℃,备用。测定前匀浆后,取匀浆液,用试剂盒测定肝组织TC、TG、NEAF、MDA含量和T-SOD、GSH-PX活力;另外所有大鼠均取一叶肝组织用10%的福尔马林固定后,行病理学检查。
2.3 实验结果
2.3.1 对非酒精性脂肪肝大鼠肝功能和血脂水平的影响
根据模型对照组变化,于第9周末结束试验。正常对照组比较,模型对照组大鼠血清ALT、AST、TBIL和CHO、TG、LDL-C水平均明显升高,而HDL-C明显降低,具有显著或极显著性差异(P<0.05或P<0.01);与模型对照组比较,赶黄草提取物高、中剂量组TBIL和中剂量组ALT均明显降低,非诺贝特也明显降低此两项指标,具有显著或极显著性差异(P<0.05或P<0.01);而在血脂方面,赶黄草提取物各剂量和非诺贝特均明显降低血清TG水平,非诺贝特和赶黄草中剂量明显提高血清HDL-C水平,非诺贝特还升高TC水平,与模型对照组比较均有显著或极显著性差异(P<0.05或P<0.01)。结果详见下表1、表2。
表1赶黄草提取物对非酒精性脂肪肝大鼠肝功能的影响
注:与正常对照组比较:**P<0.01;与模型对照组比较:#P<0.05,##P<0.01。
表2赶黄草提取物对非酒精性脂肪肝大鼠血脂水平影响
注:与正常对照组比较:*P<0.05,**P<0.01;与模型对照组比较:#P<0.05,##P<0.01。
2.3.2 对非酒精性脂肪肝大鼠肝组织中脂质和过氧化物酶活性的影响
与正常对照组比较,模型对照组大鼠肝组织中TG、NEAF、MDA含量明显升高,GSH-PX活力明显下降,具有显著或极显著性差异(P<0.05或P<0.01),此外T-SOD活力也有下降趋势;与模型对照组比较,赶黄草提取物各剂量组均明显降低肝组织中TG、NEAF含量而升高GSH-PX活力,均有极显著性差异(P<0.01),对MDA含量和T-SOD活力影响不大;非诺贝特则明显降低TG含量和升高GSH-PX活力,与模型对照组比较有显著或极显著性差异(P<0.05或P<0.01),但对T-CHO有升高趋势。结果详见下表3。
表3赶黄草提取物对非酒精性脂肪肝大鼠肝组织中肝质含量和过氧化物酶活力的影响
续
注:与正常对照组比较:*P<0.05,**P<0.01;与模型对照组比较:#P<0.05,##P<0.01。
2.3.3 对非酒精性脂肪肝大鼠肝组织形态学的影响
正常对照组大鼠肝脏组织外观红褐色,质软富弹性;模型对照组大鼠肝脏质地较韧,色泽较晦暗,体积明显增大,切面略带油腻感;赶黄草高、中、低剂量组和非诺贝特组肝脏外观均较模型对照组好。
光镜下观察,正常对照组肝小叶轮廓清晰,肝细胞排列呈放射状,肝细胞大小形态正常,肝索排列整齐,核圆,位于细胞中央,胞质均匀,未见肝脂肪变、水肿、坏死等亦异常病变。模型对照组大鼠肝组织镜下出现不同肝细胞弥漫性水肿,胞浆内出现大量大小不等脂肪空泡,细胞核被挤向周边,部分大鼠可见散在坏死灶及炎性细胞浸润。赶黄草高、中、低剂量组同模型对照组比较,肝小叶结构清晰,胞浆脂滴明显减小,肝细胞排列整齐,肝窦基本恢复正常,出现脂肪变、水肿的数量明显减少,且脂肪变性程度转轻;非诺贝特组大鼠肝组织病理组织学与正常对照组相似,未见异常病变。病理图片见下图1。
从脂肪变性分级评分来看,模型对照组评分明显升高,与正常对照组比较有极显著差异(P<0.01)。与模型对照组比较,各给药组大鼠肝脏脂肪变性评分均明显降低,有显著或极显著性差异(P<0.05或P<0.01),其中以非诺贝特效果最好,无脂肪变性。结果见下表4。
表4赶黄草提取物对非酒精性脂肪肝大鼠肝脏脂肪变性的影响
注:与正常对照组比较,**P<0.01;与模型对照组比较,#P<0.05,##P<0.01;
评分标准:(-)为0,(+)为1,(++)为2,(+++)为3。
3.结论
从以上实验结果可见,赶黄草提取物在4.2g~16.7g/kg内对酒精性脂肪肝大鼠和非酒精性脂肪肝大鼠预防给药,均能明显改善大鼠肝功能,减轻肝组织脂肪含量和脂肪变性,且能明显减轻非酒精性脂肪肝大鼠血脂水平和增强肝组织抗氧化能力。结果表明,赶黄草提取物具有治疗脂肪肝作用,机制与可能与调节脂质代谢和抗氧化损伤有关。从本试验结果看,赶黄草对高脂饮食所致非酒精性脂肪肝的防治作用良好。
另外,从肝组织形态学等数据可以看出,本发明使用赶黄草低剂量时,其效果明显较中剂量和高剂量更好,因此,本发明可以优选使用低剂量。
Claims (9)
1.赶黄草或其提取物在制备预防或治疗非酒精性脂肪肝的保健品或药物中的用途。
2.根据权利要求1所述的用途,其特征在于:所述赶黄草的提取物为赶黄草的水或/和乙醇提取物。
3.根据权利要求2所述的用途,其特征在于:所述赶黄草的提取物是赶黄草经水提醇沉所得上清液,或此上清液的浓缩品或干燥品。
4.根据权利要求3所述的用途,其特征在于:所述水提醇沉的工艺如下:
(1)提取:取赶黄草,水煎,合并水煎液;
(2)浓缩:将水煎液浓缩至60~70℃测得相对密度为1.15~1.18的水清膏;
(3)醇沉:水清膏中加入乙醇至含醇量达50~70%v/v,静置醇沉,收集上清液,即可。
5.根据权利要求3所述的用途,其特征在于:步骤(1)中,水煎的具体操作为:取赶黄草,切段5-10cm,第一次加4-8倍量的水,煎煮提取2-4小时,第二次加2-4倍量的水,煎煮提取2-4小时。
6.根据权利要求1所述的用途,其特征在于:所述保健品或药物是降低血清中ALT、TBIL水平,降低血清中TG水平,提高血清中HDL-C水平的保健品或药物。
7.根据权利要求1所述的用途,其特征在于:所述保健品或药物是降低肝组织中TG、NEAF含量,升高GSH-PX活力的保健品或药物。
8.根据权利要求1所述的用途,其特征在于:所述保健品或药物是减轻肝脏脂肪变性的保健品或药物。
9.根据权利要求1所述的用途,其特征在于:所述非酒精性脂肪肝为非酒精性单纯性脂肪肝或/和非酒精性脂肪性肝炎。
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Legal Events
Date | Code | Title | Description |
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C06 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
C10 | Entry into substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
RJ01 | Rejection of invention patent application after publication | ||
RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |
Application publication date: 20140903 |