CN110996991A - haNK西妥昔单抗组合和方法 - Google Patents

Abstract

设想的癌症疗法包括共同施用亚德阿霉素与免疫治疗组合物，该免疫治疗组合物优选包含疫苗组分和细胞毒性细胞组分。

Description

haNK西妥昔单抗组合和方法

本申请要求我们于2017年8月15日提交的具有序列号62/545,744的共同未决的美国临时申请的优先权，该美国临时申请以其整体并入本文中。

技术领域

本发明的领域是用于癌症治疗的组合物和方法，尤其是当该癌症治疗涉及免疫疗法药物与阿霉素(doxorubicin)的靶向形式的组合时。

背景技术

以下描述包括可用于理解本发明的信息。并不承认本文提供的任何信息是现有技术或与当前要求保护的发明相关，也不承认具体地或隐含地引用的任何出版物是现有技术。

本文中鉴别所有出版物均通过引用并入，其程度如同每个单独的出版物或专利申请被具体且单独地指示通过引用并入一样。在并入的参考文献中的术语的定义或用法与本文提供的该术语的定义不一致或相反的情况下，适用本文提供的该术语的定义，而不适用该术语在该参考文献中的定义。

西妥昔单抗(ERBITUX^TM，针对人表皮生长因子受体的单克隆抗体)被批准用于治疗转移性结肠直肠癌、转移性非小细胞肺癌和头颈癌，以及用于与放射疗法组合用于治疗头颈部鳞状细胞癌(SCCHN)或用作已进行先前铂基疗法的患者的单一药物。除了直接抑制EGFR信号转导之外，通过经由抗体的Fc部分募集细胞毒性效应细胞产生的抗体依赖性细胞毒性(ADCC)被认为是西妥昔单抗的重要作用方式。

据报道，利用西妥昔单抗的明显双重靶向，具有基于西妥昔单抗的嵌合抗原受体的经基因修饰的NK92细胞可用于胶质母细胞瘤(参见例如，OncoImmunology[肿瘤免疫学]2016)。类似地，据报道，具有CD16的V158变体的高亲和力NK(haNK)细胞是可能更有效的治疗方式，因为这些细胞即使在照射后也具有高水平的颗粒酶和高水平的裂解活性。这些细胞与西妥昔单抗联合用于针对显示显著的抗体依赖性细胞介导的细胞毒性的多种癌细胞(Oncotarget[肿瘤标靶],2016,第7卷,(第52期),第86359-86373页)。尽管至少在概念上是有前景的，但是使用此类方法的免疫反应仍限于所用抗体的靶向作用。另外，在肿瘤微环境是遏制性环境的情况下，即使此类靶向方法也可能不如预期有效。

亚德阿霉素(aldoxorubicin)(阿霉素的(6-顺丁烯二酰亚胺基己酰基)腙)是阿霉素的前药形式，当注射到个体中时，亚德阿霉素可以与各种蛋白质中的硫醇基团缀合，并且尤其是与白蛋白中的半胱氨酸硫醇C34缀合。由于肼基的酸不稳定性质，一旦阿霉素-白蛋白缀合物遇到癌症微环境中经常发现的酸性环境，阿霉素就会从白蛋白水解裂解。因此，预期亚德阿霉素会将阿霉素特异性地释放到肿瘤微环境中。有利地，循环白蛋白也倾向于优先在肿瘤中积聚，这很可能是由于gp60介导的穿过肿瘤新血管系统内皮的转胞吞作用。因此，认为亚德阿霉素提供了一种特异性靶向肿瘤微环境的有吸引力的治疗方式。

为此，已经进行了各种临床试验，包括胶质母细胞瘤的二线治疗(临床试验识别号NCT02014844)、卡波济氏肉瘤(Kaposi's sarcoma)的治疗(临床试验识别号2029430)、晚期或转移性胰腺导管腺癌(临床试验识别号NCT01580397)和转移性小细胞肺癌(临床试验识别号NCT02200757)。还报道了亚德阿霉素与异环磷酰胺组合用于治疗转移性或局部晚期肉瘤(临床试验识别号NCT02235701)。值得注意的是，可能是由于因暴露于阿霉素的各种细胞中的DNA损伤反应以及表观遗传学和转录组学失调所致的可疑不良作用，所以尚未将亚德阿霉素与免疫治疗剂组合使用。

因此，即使本领域中已知癌症治疗中有限的亚德阿霉素组合，仍需要提供改进的组合疗法，特别是与免疫治疗组合物组合的组合疗法。

发明内容

本发明的主题涉及免疫治疗组合物和化学治疗组合物的组合的各种组合物、该组合用以治疗肿瘤(尤其是在转移性肿瘤中)的方法以及用途。最值得注意的是，共同施用包括亚德阿霉素的化学治疗组合物增强了针对肿瘤的免疫反应，其中免疫治疗组合物包括针对一种或多种肿瘤相关抗原的癌症疫苗和基于NK细胞的治疗剂。有利的是，低氧肿瘤微环境不会不利地影响haNK细胞以及亚德阿霉素的治疗益处。实际上，低氧肿瘤微环境中常见的骨髓来源的遏制细胞(MDSC)可以使用阿霉素(在酸性肿瘤微环境中优先从亚德阿霉素释放)减少或甚至消除。

在本发明主题的一方面，本发明人设想了一种治疗患有肿瘤的患者的方法。在此方法中，提供了包含疫苗组分和细胞毒性细胞组分的免疫治疗组合物以及包含亚德阿霉素的化学治疗组合物。然后，以足以治疗肿瘤(例如，实体肿瘤、转移性肿瘤等)的剂量和方案向患者施用该免疫治疗组合物和该化学治疗组合物。优选地，用此种方法治疗的患者具有先前铂基化学疗法和先前抗PD-1/PD-L1疗法中的至少一种的医疗史。

在尤其优选的方面，该疫苗组分包含经修饰的细菌、经修饰的酵母和经修饰的病毒中的至少一种或两种。优选地，该疫苗组分包含编码肿瘤相关抗原(例如，短尾突变蛋白(brachyury)、MUC1和CEA)的重组核酸。仍进一步优选地，该细胞毒性细胞组分是haNK细胞和T细胞中的至少一种，并且对该haNK细胞或该T细胞进行基因工程化以表达嵌合抗原受体和CD16高亲和力变体中的至少一种。

合适的方法还可以包括施用抗体或者干扰或下调检查点抑制的蛋白质的步骤，该抗体或蛋白质可以例如经由haNK细胞的CD16与细胞毒性细胞组分偶联。例如，合适的抗体将选择性地结合生长因子受体、血管生长受体、肿瘤相关抗原、肿瘤特异性抗原或肿瘤和患者特异性新表位。另外，干扰或下调检查点抑制的该蛋白质可以是CTLA-4、PD-1、TIM1受体、2B4或CD160的抗体或拮抗剂。

需要时，设想的方法还可以包括施用免疫刺激细胞因子(例如，IL-2、IL-15等)或免疫刺激超因子(superkine)(例如，ALT803)的步骤。最典型地，设想相隔至少一天分别施用该疫苗组分和该细胞毒性细胞组分。然而，设想同时或至少在同一天施用该疫苗组分和该细胞毒性细胞组分。任选地，可以在根据此方法治疗之前和之后确定患者的分子谱，尤其是包括HER2表达水平或RAS突变状态的分子谱，该分子谱可以为确定治疗成功的可能性，确定治疗中抗体的类型以及进一步的治疗计划提供指导。

在本发明主题的另一方面，本发明人设想了免疫治疗组合物和包含亚德阿霉素的化学治疗组合物在治疗患有肿瘤的患者中的用途。优选地，用此种方法治疗的患者具有先前铂基化学疗法和先前抗PD-1/PD-L1疗法中的至少一种的医疗史。该免疫治疗组合物包含疫苗组分和细胞毒性细胞组分，并且还任选地包含特异性结合生长因子受体、血管生长受体、癌症相关抗原、癌症特异性抗原或癌症和患者特异性新表位或者干扰或下调检查点抑制的蛋白质的抗体。

在尤其优选的方面，该疫苗组分包含经修饰的细菌、经修饰的酵母和经修饰的病毒中的至少一种或两种。优选地，该疫苗组分包含编码肿瘤相关抗原(例如，短尾突变蛋白(brachyury)、MUC1和CEA)的重组核酸。仍进一步优选地，该细胞毒性细胞组分是haNK细胞和T细胞中的至少一种，并且对该haNK细胞或该T细胞进行基因工程化以表达嵌合抗原受体和CD16高亲和力变体中的至少一种。在一些实施例中，该细胞毒性细胞组分与抗体或者干扰或下调检查点抑制的蛋白质偶联。优选地，该抗体特异性结合生长因子受体、血管生长受体、免疫检查点抑制物、肿瘤相关抗原、肿瘤特异性抗原或肿瘤和患者特异性新表位中的至少一种。同样优选地，干扰或下调检查点抑制的该蛋白质为CTLA-4、PD-1、TIM1受体、2B4或CD160的抗体或拮抗剂。

在一些实施例中，将该疫苗组分和该细胞毒性细胞组分配制成向该患者共同施用。在其他实施例中，将该疫苗组分和该细胞毒性细胞组分配制成向该患者分别施用。

该用途还可以包含免疫刺激细胞因子或免疫刺激超因子在该治疗中的用途。最优选地，该免疫刺激细胞因子或免疫刺激超因子选自下组，该组由以下组成：IL-2、IL-12、IL-15、IL-15超激动物(ALT803)、IL-21、IPS1和LMP1。

本发明主题的各种目标、特征、方面和优点将由以下对优选实施例的详细描述以及附图而变得更清晰。

附图说明

图1显示了对诊断为患有转移性胰腺癌的1号患者进行癌症疫苗和细胞毒性细胞治疗后，患者血液中归一化的碳水化合物抗原(CA)19-9(CA19-9)水平的曲线。x轴表示天数(时间)，并且y轴表示数量。

图2显示了对诊断为患有转移性胰腺癌的2号患者进行癌症疫苗和细胞毒性细胞治疗后，患者血液中归一化的碳水化合物抗原(CA)19-9(CA19-9)水平的曲线。x轴表示天数(时间)，并且y轴表示数量。

图3显示了对诊断为患有转移性胰腺癌的3号患者进行癌症疫苗和细胞毒性细胞治疗后，患者血液中癌胚抗原(CEA)水平的曲线。x轴表示天数(时间)，并且y轴表示数量。

图4显示了对诊断为患有转移性胰腺癌的4号患者进行癌症疫苗和细胞毒性细胞治疗后，患者血液中归一化的碳水化合物抗原(CA)19-9(CA19-9)水平的曲线。x轴表示天数(时间)，并且y轴表示数量。

图5显示了对诊断为患有转移性胰腺癌的5号患者进行癌症疫苗和细胞毒性细胞治疗后，患者血液中归一化的碳水化合物抗原(CA)19-9(CA19-9)水平的曲线。x轴表示天数(时间)，并且y轴表示数量。

图6显示了癌症疫苗和细胞毒性细胞治疗之前和之后6号患者的PET扫描照片。

图7显示了癌症疫苗和细胞毒性细胞治疗之前和之后6号患者的横肌PET扫描照片。

具体实施方式

本发明人现已发现，通过向癌症患者共同施用免疫治疗组合物和包括亚德阿霉素的化学治疗剂，可以增强，在一些情况下甚至协同增强(即，以超过加和的程度)这两种药剂的有效性。从不同的角度来看，本发明人还发现，通过提供包括免疫治疗组合物和包括亚德阿霉素的化学治疗剂的治疗方案，可以更有效地治疗患者的肿瘤，尤其是转移性肿瘤。此种发现是出乎意料的，甚至是出人意料的，因为亚德阿霉素是阿霉素的前体，并且因为据报道阿霉素是一种免疫遏制物(参见例如Ann Plast Surg.[整形外科年鉴]2012年2月；68(2):215-21)。因此，在一个尤其优选的方面，本发明人设想可以提供一种治疗方案，该治疗方案包括包含i)疫苗组分和细胞毒性细胞组分的免疫治疗组合物和ii)包含亚德阿霉素的化学治疗组合物，并且此种治疗方案可以通过以足以治疗肿瘤的剂量和方案施用免疫治疗组合物和化学治疗组合物来治疗肿瘤。

如本文所用，术语“肿瘤”是指以下项并且可与以下项互换使用：一种或多种癌细胞、癌组织、恶性肿瘤细胞或恶性肿瘤组织，它们可以位于或者发现于人体的一个或多个解剖位置中。如本文所用，术语“结合”是指术语以KD等于或小于10-6M或等于或小于10-7M的高亲和力“识别”和/或“检测”两个分子之间的相互作用，并且可以与该术语互换使用。如本文所用，术语“提供(provide)”或“提供(providing)”是指并且包括制造、产生、放置、使得能使用或准备使用的任何行为。

如本文所用，术语“共同施用(co-administering)”或“共同施用(co-administration)”是指在单一治疗方案中向患者施用两种或更多种药剂。因此，共同施用药剂A和药剂B可以指以单一配制品或两种单独配制品向患者同时施用药剂A和药剂B。同样，共同施用药剂A和药剂B可以指出于靶向单一肿瘤的目的根据单一治疗方案施用药剂A和药剂B。例如，用于治疗患者A的肿瘤的治疗方案可以包括在第1天施用药剂A和在第2天施用药剂B，并重复此类施用2周。在此种实例中，药剂A和药剂B被视为向患者A共同施用。

在最优选的方面，疫苗组分是包括编码肿瘤相关抗原的重组核酸的经修饰的细菌、经修饰的酵母或经修饰的病毒中的至少一种或至少两种。设想了可以在肿瘤微环境中引发免疫细胞的免疫反应的任何合适的肿瘤相关抗原。因此，肿瘤相关抗原可以包括但不限于肿瘤相关抗原，诸如MUC1、CEA、短尾突变蛋白、RAS(例如，突变的RAS(例如，具有G12V、Q61R和/或Q61L突变等的RAS))；肿瘤特异性抗原，诸如PSA、PSMA、HER2；或肿瘤和患者特异性新抗原或新表位，该肿瘤相关抗原可以从患者的组学数据鉴别出。在一些实施例中，经修饰的细菌、经修饰的酵母或经修饰的病毒中的每一种可以包括编码单一肿瘤相关抗原的重组核酸。在其他实施例中，经修饰的细菌、经修饰的酵母或经修饰的病毒中的至少一种可以包括编码作为多表位的两种或更多种肿瘤相关抗原的重组核酸。

如本文所用，多表位是指表达为单一个多肽的两种或更多种抗原的串联阵列。优选地，两种或更多种人类疾病相关抗原由接头或间隔肽分开。可以使用接头或间隔肽序列的任何合适的长度和顺序。但是，优选地，接头肽的长度在3-30个氨基酸之间，优选在5-20个氨基酸之间，更优选在5-15个氨基酸之间。本发明人还设想富含甘氨酸的序列(例如，gly-gly-ser-gly-gly等)是优选的，以提供两种抗原之间的多表位的柔性。

在一些实施例中，疫苗组分中的重组核酸还可以包括编码一种或多种共刺激分子的一种或多种核酸序列。共刺激分子可以包括B7.1(CD80)、B7.2(CD86)、CD30L、CD40、CD40L、CD48、CD70、CD112、CD155、ICOS-L、4-1BB、GITR-L、LIGHT、TIM3、TIM4、ICAM-1、LFA3(CD58)和SLAM家族成员。此外，核酸还可以包括编码细胞因子(例如，IL-2、IL-7、IL-12、IL-15、IL-15超激动物(IL-15N72D)和/或IL-15超激动物/IL-15RαSushi-Fc融合复合物)的序列。可替代地或另外地，核酸还可以包括编码SMAC(例如，CD2、CD4、CD8、CD28、Lck、Fyn、LFA-1、CD43和/或CD45或其各个结合对应部分)的至少一种组分的序列。在需要时，核酸可以另外包含编码STING路径的活化物的序列，该活化物诸如EBV的LMP1的跨膜结构域与IPS-1的信号传导结构域融合的嵌合蛋白。认为此类修饰通过提供用于活化适应性免疫反应的额外信号而甚至进一步增强了适应性免疫反应的产生。

设想本文设想的重组核酸不必限于病毒、酵母或细菌表达载体。可替代地，重组核酸还可以包括DNA疫苗载体、线性化的DNA、和mRNA，所有这些重组核酸均可以按照本领域熟知的方案转染到合适的细胞中。

设想了产生疫苗组分的任何合适的方法。最典型地，可以将编码肿瘤相关抗原的核酸序列置于表达载体中。将重组核酸插入载体中，使得核酸可以被递送至患者的抗原呈递细胞(例如树突状细胞等)，或在细菌或酵母中转录该核酸序列，从而使由该核酸序列编码的重组蛋白可以整体或以片段递送至抗原呈递细胞。设想了可以用于表达蛋白质的任何合适的表达载体。尤其优选的表达载体可以包括可携带至少1k，优选2k，更优选5k个碱基对的盒尺寸的表达载体。

因此，在一个实施例中，优选的表达载体包括病毒载体(例如，非复制性重组腺病毒基因组，该基因组任选地具有缺失或无功能的E1和/或E2b基因)。在表达载体是病毒载体(例如，腺病毒，并且尤其是E1和E2b缺失的AdV)的情况下，设想包括重组核酸的重组病毒可以然后在药物组合物中单独或组合地用作治疗疫苗，该药物组合物典型地被配制成无菌可注射组合物，其中病毒滴度为10⁶-10¹³个病毒颗粒/剂量单位之间，并且更典型地10⁹-10¹²个病毒颗粒/剂量单位之间。可替代地，可以离体使用病毒感染患者(或其他HLA匹配者)细胞，然后将如此感染的细胞输注给患者。在进一步的实例中，用病毒治疗以下患者，具有可以伴有同种异体移植、或自体自然杀伤细胞、或处于裸露形式的T细胞或携带表达靶向新表位的抗体、新表位、肿瘤相关抗原或与该病毒相同的有效负载的嵌合抗原受体的T细胞。包括衍生自患者的NK-92细胞系的自然杀伤细胞还可以表达CD16，并且可以与抗体偶联。

在仍其他实施例中，表达载体可以是可在基因工程化细菌中表达的细菌载体，在引入人体时，该基因工程化细菌表达的内毒素的水平足够低而不会在人细胞中引起内毒素反应和/或不足以诱导CD-14介导的败血症。具有经修饰的脂多糖的一种示例性细菌菌株包括

BL21(DE3)电转感受态细胞。此细菌菌株是BL21，其基因型为F–ompT hsdSB(rB-mB-)gal dcm lonλ(DE3[lacI lacUV5-T7基因1ind1 sam7 nin5])msbA148 ΔgutQΔkdsD ΔlpxLΔlpxMΔpagPΔlpxPΔeptA。在此情形下，应理解，若干个特定的缺失突变(ΔgutQ ΔkdsD ΔlpxL ΔlpxMΔpagPΔlpxPΔeptA)编码LPS向脂质IVA的修饰，而另一种补偿突变(msbA148)使得细胞能够在LPS前体脂质IVA的存在下维持活力。这些突变导致寡糖链从LPS中缺失。更具体地，六个酰基链中的两个发生缺失。LPS的六个酰基链是触发物，通过Toll样受体4(TLR4)与髓样分化因子2(MD-2)复合被识别，从而引起

的激活和促炎细胞因子的产生。仅含有四个酰基链的脂质IVA不会被TLR4识别，因此不会触发内毒素反应。尽管提供电感受态BL21细菌作为实例，诸位发明人预期经遗传修饰的细菌也可以是化学感受态细菌。可替代地或另外地，表达载体还可以是酵母载体，该酵母载体可以在酵母中，优选在酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)(例如，GI-400系列重组免疫治疗酵母菌株等)中表达。

本发明人还设想，可以将上述具有重组核酸的重组病毒、细菌或酵母进一步配制在任何药学上可接受的载体中(例如，优选配制成无菌注射组合物)以形成药物组合物。当药物组合物包括重组病毒时，组合物的病毒滴度优选在10⁴-10¹²个病毒颗粒/剂量单位之间。然而，可替代的配制品也被认为适用于本文，并且本文设想了所有已知的施用途径和方式。当药物组合物包括重组细菌时，组合物的细菌滴度优选为10²-10³、10³-10⁴、10⁴-10⁵个细菌细胞/剂量单位。当药物组合物包括重组酵母时，组合物的细菌滴度优选为10²-10³、10³-10⁴、10⁴-10⁵个酵母细胞/剂量单位。

如本文所用，术语“施用”病毒、细菌或酵母配制品是指直接和间接施用病毒、细菌或酵母配制品，其中配制品的直接施用典型地由医疗保健专业人员(例如，医师、护士等)进行，并且其中间接施用包括将配制品提供给医疗保健专业人员或使医疗保健专业人员可获得该配制品以直接施用(例如，经由注射、输注、口服递送、局部递送等)的步骤。

在一些实施例中，经由全身注射施用病毒、细菌或酵母配制品，该全身注射包括皮下、皮下注射或静脉内注射。在其他实施例中，在全身注射可能无效时(例如，对于脑肿瘤等)，设想经由肿瘤内注射来施用配制品。

关于配制品施用的剂量和方案，设想剂量和/或方案可以根据病毒、细菌或酵母的类型、疾病的类型和预后(例如，肿瘤类型、尺寸、位置)、患者的健康状况(例如，包括年龄、性别等)变化。剂量和方案尽管可以变化，但是可以进行选择和调节，从而使配制品不会对宿主正常细胞产生任何显著的毒性作用，但足以引发免疫反应。因此，在一个优选的实施例中，可以基于预定的阈值确定施用配制品的最佳或所需的条件。例如，预定阈值可以是特定类型的细胞因子(例如，IFN-γ、TNF-β、IL-2、IL-4、IL-10等)的预定局部或全身浓度。

例如，在药物组合物包括重组病毒的情况下，溶瘤病毒配制品的设想剂量为至少10⁶个病毒颗粒/天，或至少108个病毒颗粒/天，或至少10¹⁰个病毒颗粒/天，或至少10¹¹个病毒颗粒/天。在一些实施例中，可以每天至少一次或每天两次(每次施用一半剂量)施用单次剂量的病毒配制品至少一天、至少3天、至少一周、至少2周、至少一个月或任何其他所需方案。在其他实施例中，病毒配制品的剂量可以在方案期间逐渐增加，或在方案期间逐渐减少。在仍其他实施例中，病毒配制品的若干系列施用可以分隔一定的间隔时间(例如，每次一个系列施用连续3天，并且间隔7天再每次一个系列施用连续3天等)。

在一些实施例中，药物配制品的施用可以分两个或更多个不同阶段：初次施用和加强施用。设想初次施用的剂量高于随后的加强施用(例如，至少20％，优选至少40％，更优选至少60％)。然而，还设想用于初次施用的剂量低于随后的加强施用。另外，在有多次加强施用时，每次加强施用具有不同的剂量(例如，增加的剂量，减少的剂量等)。

关于设想的细胞毒性细胞组分，应注意，这些细胞组分优选为NK细胞(及其所有衍生物)、NKT细胞和/或细胞毒性T细胞(例如CD8+T细胞等)。在一些实施例中，细胞毒性细胞组分可以包含源自患者或同种异体的NK、NKT或细胞毒性T细胞。例如，NK细胞还可以从患者获得或从患者的前体细胞产生，或从细胞库获得(优选匹配的同种异型)。在其他实例中，细胞组分还可以是活化的T细胞，该活化的T细胞可以从患者(并且任选地在无免疫性时经再活化)，或者从供者或细胞培养物分离。在适当时，此类T细胞还可以经基因修饰以表达嵌合抗原受体和/或CD16，而增加细胞对肿瘤细胞的特异性。在其他实施例中，细胞毒性细胞组分可以包含患者的异源细胞，优选经永生化的基因工程化细胞。例如，尤其设想的NK细胞包括aNK细胞(缺乏多种抑制受体的活化的NK-92衍生细胞)、haNK细胞(具有高亲和力CD16变体(例如，V158变体等)的NK-92衍生细胞)和tank细胞(具有嵌合抗原受体的NK-92衍生细胞)，这些细胞是本领域中已知的(例如，加利福利亚州90232卡尔弗城杰斐逊大道9920号的NantKwest公司(NantKwest,Inc.,9920Jefferson Blvd.；Culver City,CA 90232))。另外，同样优选地，NK92细胞经进一步基因修饰以表达并在细胞内保留IL-2(例如，在内质网中)，使得NK细胞的细胞毒性在低氧条件(例如，肿瘤微环境)下保持活性。

应特别理解，在设想的方法中使用haNK细胞时，在低氧环境中haNK细胞的细胞毒性活性得以很大程度地维持，这在典型的低氧肿瘤微环境中尤其有利。因此，尤其优选的方法包括施用haNK细胞，其中这些haNK细胞与或不与抗体偶联。从不同的角度来看，即使在环境低氧时，也可以在肿瘤微环境中实现靶向的溶细胞活性。此外，亚德阿霉素可以进一步增加或至少保留haNK细胞杀伤活性，这将在下文中更详细地讨论。

典型地将设想的细胞毒性细胞以每次输注1-5×10⁹个细胞之间的量向患者施用，并且在使用haNK细胞时，应理解这些细胞可以’负载’抗体或蛋白质以赋予标靶特异性或引发和/或促进肿瘤中的免疫反应。如将容易理解的那样，此种’负载’通过使抗体与haNK细胞上CD16的高亲和力变体结合来实现。可替代地或另外地，应注意，抗体可以与细胞毒性细胞分开施用，并且认为所有施用方式均适用于本文(例如静脉内注射)。

设想了可以特异性靶向肿瘤细胞的任何合适的抗体。示例性抗体可以包括特异性和/或选择性结合以下项的抗体：生长因子受体(例如，HER2等)、血管生长受体(例如，VEGFR-1、VEGFR-2等)、肿瘤相关抗原、肿瘤特异性抗原以及肿瘤和患者特异性新表位。例如，设想的haNK细胞可以与西妥昔单抗(结合EGFR)结合或与西妥昔单抗共同施用。另外，细胞毒性细胞可以负载免疫检查点抑制物的结合蛋白或与该结合蛋白共同施用，该结合蛋白可以包括CTLA-4、PD-1、TIM1受体、2B4或CD160的抗体或拮抗剂。

在一些实施例中，免疫检查点抑制物的抗体和/或拮抗免疫检查点抑制物的蛋白质可以经由可裂解或不可裂解的接头和/或直接或间接地与细胞毒性免疫细胞偶联。例如，接头可以是短长度肽，该肽在3-30个氨基酸之间，优选在5-20个氨基酸之间，更优选在5-15个氨基酸之间。优选地，此种短肽接头具有富含甘氨酸的序列(例如，gly-gly-ser-gly-gly等)以提供柔性。在另一个实例中，设想了接头可以是在肿瘤微环境中和/或在活化免疫系统后优先裂解的可裂解接头。一种优选的可裂解接头在温和的酸性环境(例如，在3-6之间的pH下，在4-6之间的pH下，在4.5-5.5之间的pH下等)中可裂解，但在中性pH中是稳定的。例如，优选的酸不稳定性接头包括硫基顺丁烯酰胺酸接头和酸可裂解的肼接头(例如，肼接头等)。设想经由酸不稳定性接头与细胞毒性免疫细胞偶联的抗体或结合蛋白/分子在弱酸性肿瘤微环境中可以被释放，使得抗体或结合蛋白/分子可以选择性并特异性地靶向肿瘤微环境中的肿瘤细胞。

因此，设想的接头可以直接或间接地与免疫感受态细胞偶联。关于接头的直接偶联，使接头与细胞偶联的方法可以根据接头的化学结构和组分而变化，并且设想了任何合适的缀合方法。在一些实施例中，接头可以与免疫感受态细胞的膜蛋白直接缀合，优选不干扰细胞的正常功能。进一步优选地，偶联接头的细胞膜蛋白具有相对较长的半衰期，使得偶联的接头由于膜蛋白的再循环而不会被内吞。在此类实施例中，可以使接头与N-羟基丁二酰亚胺基-PEG(PEG-NHS)缀合，接头通过PEG-NHS与细胞表面上具有氨基基团的所有种类的膜蛋白共价键合。可替代地，可以使接头与PEG缀合形成PEG-糖脂或与带有烷基侧链的聚(乙烯醇)(PVA-烷基)缀合，使得缀合的接头可以通过疏水相互作用锚定于免疫感受态细胞的膜脂质双层。

此外，设想可以用一种或多种免疫刺激细胞因子和/或免疫刺激超因子进一步增强本文提出的方法和用途。尤其优选的细胞因子包括IL-2、IL-7、IL-15、IL-17、IL-21、IL-15、IPS1和LMP1及其超激动物形式。例如，在超因子的情况下，IL-15超激动物(IL-15N72D)和/或IL-15超激动物/IL-15RαSushi-Fc融合复合物(ALT803)是尤其优选的。

最优选地，使用免疫治疗产物的组合的时间/空间编排来施用设想的化合物和组合物，以调节肿瘤微环境，活化先天性适应性免疫系统，并进一步诱导免疫原性细胞死亡(ICD)，所有这些作用均可被亚德阿霉素(协同)增强。在此情形下，应特别认识到，亚德阿霉素是阿霉素的顺丁烯二酰亚胺基己酰基腙前药形式，其包含与可利用的硫醇基团(例如，白蛋白中的C34)共价结合，并且具有酸不稳定性肼键的反应性基团，该肼键水解裂解之后释放阿霉素。因此，在将亚德阿霉素暴露于低氧酸性肿瘤微环境后，阿霉素优先释放到肿瘤微环境中。此种偏好通过使亚德阿霉素与白蛋白偶联进一步增强，该白蛋白被循环到肿瘤微环境中(典型地通过gp60介导的转胞吞作用)。已知在某些癌症中，骨髓来源的遏制细胞(MDSC)在促进肿瘤进展中起着至关重要的作用，这主要是由于它们的‘替代性活化’(或M2)表型可以调节免疫遏制。有利地，阿霉素抑制了M2巨噬细胞和MDSC。

为此，并且在其他设想的选择中，优选的治疗组分可以包括(a)进入肿瘤微环境(例如，通过转胞吞作用)以克服肿瘤遏制环境的纳米颗粒白蛋白结合(Nab)化学疗法组合，(b)产生抗原的疫苗实体(例如，重组腺病毒、细菌和/或酵母)，这些疫苗实体直接或间接将肿瘤相关抗原和/或患者和肿瘤特异性新抗原递送至免疫感受态细胞，来以患者和肿瘤特异性方式活化未成熟的树突状细胞以诱导和/或增强适应性免疫反应，(c)诱导和/或增强先天性免疫反应的自然杀伤细胞，这些细胞可以是内源性的(例如，通过用IL-15或IL-15超激动物刺激)和/或外源性的(例如，经基因修饰的NK细胞，诸如aNK、haNK、taNK细胞)，以及(d)维持长期缓解的活化的内源性记忆T细胞和/或NK细胞，这些细胞优选通过疫苗、细胞疗法和融合蛋白(例如，基因工程化的融合蛋白细胞因子刺激物和/或检查点抑制物)活化。

设想了施用免疫治疗组合物(疫苗组分和细胞毒性细胞组分)和化学治疗组合物(亚德阿霉素)的任何合适顺序。例如，可以同时或在同一天(例如，在1小时内、在3小时内、在6小时内、在12小时内、在24小时内等)或不同天(例如，相隔至少1天、至少2天等)向患者施用免疫治疗组合物和化学治疗组合物两者。在以下实例中提供了最优选的组合物施用方案。

本发明人通常设想本文提出的治疗将适用于各种癌症，包括哺乳动物，并且尤其是人的实体癌症和血源性癌症。另外，本发明人还设想本文提出的治疗将适用于如下患者，这些患者的肿瘤细胞表达疫苗组分和/或细胞毒性细胞组分应靶向的肿瘤相关抗原、肿瘤特异性抗原和/或肿瘤和患者特异性新表位。从不同的角度来看，本发明人设想可以在治疗之前和/或之后确定患者肿瘤细胞的分子谱，以鉴别最适用于治疗的疫苗组分和/或细胞毒性细胞组分，预测治疗成功的可能性和/或确定治疗的有效性。因此，分子谱可以包括一种或多种肿瘤相关基因的基因组谱，尤其是从患者的肿瘤中鉴别和/或本领域中已知的这些肿瘤相关基因中的一种或多种突变(例如，RAS中的G12V、Q61R和/或Q61L突变等)。合适的分子谱还可以包括在肿瘤组织中过表达或表达不足的一种或多种肿瘤相关基因(例如，HER2)的转录组谱。设想了获得患者肿瘤的基因组和/或转录组谱的任何合适方法。尤其优选的方法包括鉴别和/或定量衍生自从患者体液(例如，血清、全血等)获得的肿瘤相关基因的一种或多种无细胞DNA和/或无细胞RNA，和确定该一种或多种无细胞DNA和/或无细胞RNA与肿瘤的分子特征和/或肿瘤预后的关系。

实例

实例I：患有晚期脊索瘤的患者的免疫疗法

实例I中使用的治疗组合物和方式包括下表1所示的各种生物分子和组合物。

表1

如下所述，治疗分2个阶段施用，即诱导阶段和维持阶段。受试者持续进行诱导治疗最长1年，或直到其经历进行性疾病(PD)或出现不可接受的毒性(不能通过剂量降低纠正)。在诱导阶段具有完全反应(CR)的那些患者进入研究的维持阶段。受试者可以保持在研究的维持阶段最长1年。在维持阶段持续治疗，直到受试者经历PD或不可接受的毒性(剂量降低无法纠正)。研究治疗(包括诱导和维持阶段两者)的最长时间为2年。

可以在筛选时、在初始诱导阶段结束(治疗开始后8周)时以及在可能延长的诱导和维持阶段(根据反应而定)期间进行肿瘤活检和探索性肿瘤分子谱分析。可以在常规抽血期间在诱导阶段中每4周一次，并且在维持阶段中每8周一次收集单独的血液管，以进行探索性免疫学和ctDNA/ctRNA分析。通过计算机断层扫描(CT)、磁共振成像(MRI)或正电子发射断层扫描(PET)-CT标靶和非标靶病变，根据实体肿瘤反应评价标准(RECIST)1.1版和免疫相关的反应标准(irRC)，在筛选时评估肿瘤，并且在诱导阶段期间每8周一次且在维持阶段期间每12周一次评估肿瘤反应。

诱导阶段：诱导阶段由重复的2周周期组成，最长治疗期为1年。治疗方案包括ALT-803、阿维鲁单抗(avelumab)、贝伐单抗(bevacizumab)、西妥昔单抗、环磷酰胺、亚德阿霉素、ETBX-051、ETBX-061、GI-6301、haNK细胞、nab-紫杉醇、ω-3酸乙酯、曲贝替定和放射疗法。在前四个2周周期期间将进行同时SBRT。使用SBRT向不超过5个可行的肿瘤部位施用放射处理。研究治疗的诱导阶段根据以下给药方案进行：

每天：ω-3-酸乙酯(口服[PO]一天两次[BID][3×1g胶囊和2×1g胶囊])。

第1天，每2周一次：贝伐单抗(5mg/kg IV)。

第1-5天和第8-12天，每2周一次：环磷酰胺(50mg PO BID)。

第1天和第8天，每2周一次：Nab-紫杉醇(75mg IV)；亚德阿霉素(25mg/m²IV)；曲贝替定(0.2mg/m² IV)。

第5天、第19天、第33天(每2周一次，共3剂，此后每8周一次)：ETBX-051和ETBX-061(5×10¹¹个病毒颗粒[VP]/疫苗/皮下[SC]剂量)；施用ETBX-051/ETBX-061之后2小时，GI-6301(40个酵母单位[YU]/疫苗/SC剂量)。

第8天，每周一次：西妥昔单抗(250mg IV)。

第8天，每2周一次：阿维鲁单抗(10mg/kg IV，经1小时)。

第8、22、36、50天(每2周一次，共4剂)：SBRT(不超过8Gy，准确剂量由放射肿瘤医师确定)。

第9天，每2周一次：ALT-803(在输注haNK之前30分钟，10μg/kg SC)。

第9天和第11天，每2周一次：haNK(2×10⁹个细胞/IV剂量)。

维持阶段：维持阶段的持续时间为完成诱导阶段中的最后一次治疗后最长1年。维持阶段包括重复的2周周期。治疗方案由ALT-803、阿维鲁单抗、贝伐单抗、西妥昔单抗、环磷酰胺、ETBX-051、ETBX-061、GI-6301、haNK细胞、nab-紫杉醇、ω-3酸乙酯和曲贝替定组成。研究治疗的维持阶段将根据以下给药方案进行：

每天：ω-3-酸乙酯(PO BID[3×1g胶囊和2×1g胶囊])。

第1天，每2周一次：贝伐单抗(5mg/kg IV)；Nab-紫杉醇(75mg IV)；阿维鲁单抗(10mg/kg IV，经1小时)；西妥昔单抗(250mg IV)；曲贝替定(0.2mg/m²IV)。

第1-5天和第8-12天，每2周一次：环磷酰胺(50mg PO BID)。

第2天，每2周一次：ALT-803(10μg/kg SC)(在输注haNK之前30分钟)；haNK(2×10⁹个细胞/IV剂量)。

第5天，此后每8周一次：ETBX-051和ETBX-061(5×10¹¹VP/疫苗/SC剂量)；施用ETBX-051之后2小时，GI-6301(40个YU/疫苗/SC剂量)。

适用于本文的其他方法、组合物、用途和考虑因素在2017年6月30日提交的我们共同未决的国际专利申请序列号PCT/US17/40297中进行了描述。

实例II：NANT鳞状细胞癌(SCC)疫苗：分子信息综合免疫疗法将先天性高亲和力自然杀伤(haNK)细胞疗法与基于腺病毒和酵母的疫苗组合，以诱导在铂基化学疗法和抗程序性细胞死亡蛋白1(PD-1)/程序性死亡配体1(PD-L1)疗法时或之后进展的患有SCC的受试者中的T细胞反应。

实例II中使用的治疗组合物和形式包括下表2所示的各种生物分子和组合物。

表2

向先前用铂基化学疗法和抗PD-1/PD-L1疗法治疗并且在铂基化学疗法和抗PD-1/PD-L1疗法时或之后肿瘤进展的患者提供此实例中的治疗。如下所述，此实例中的治疗分2个阶段施用，即诱导阶段和维持阶段。受试者持续进行诱导治疗最长1年。在诱导阶段具有完全反应(CR)的那些患者进入研究的维持阶段。在1年时经历持续稳定疾病(SD)或持续部分反应(PR)的受试者可以进入维持阶段。受试者可以保持在研究的维持阶段最长1年。在维持阶段持续治疗，直到受试者经历PD或不可接受的毒性(剂量降低无法纠正)，撤回同意书或如果继续治疗不再符合受试者的最佳利益。研究治疗(包括诱导和维持阶段两者)的时间最长为2年。

对在此研究中治疗之前、治疗开始后8周以及可能延长的诱导和维持阶段(根据反应而定)期间收集的样品进行探索性肿瘤分子谱分析。在常规抽血期间在诱导阶段中每6周一次，并且在维持阶段中每8周一次收集单独的血液管，以进行探索性免疫学和ctDNA/ctRNA分析。

通过计算机断层扫描(CT)、磁共振成像(MRI)或正电子发射断层扫描-计算机断层扫描(PET-CT)标靶和非标靶病变，根据实体肿瘤反应评价标准(RECIST)，在筛选时评估肿瘤，并且在诱导阶段期间每8周一次且在维持阶段期间每12周一次评估肿瘤反应。

进行前瞻性肿瘤分子谱分析以告知HER2表达和RAS突变状态，并用于判定是否施用ETBX-021和GI-4000。一旦获得肿瘤分子谱分析的结果，就可以开始施用ETBX-021和GI-4000。所有受试者均接受所有其他药剂，无论其肿瘤分子谱如何。还可以对FFPE肿瘤组织和此研究中治疗之前收集的全血(受试者匹配的相对于肿瘤组织的正常对照)进行前瞻性肿瘤分子谱分析。如果受试者的肿瘤过表达HER2(≥750埃摩尔/微克肿瘤组织，通过质谱分析法用定量蛋白质组学确定)，则这些受试者接受ETBX-021。如果通过全基因组测序确定，受试者的肿瘤对特定RAS突变呈阳性，则这些受试者接受GI-4000。

此实例中的治疗方案分为2个阶段：诱导阶段和维持阶段。诱导阶段的目的是刺激针对肿瘤细胞的免疫反应并减轻肿瘤微环境中的免疫遏制。维持阶段的目的是维持针对肿瘤细胞的持续免疫系统活性，产生持久的治疗反应。

诱导阶段：诱导阶段的治疗由重复的3周周期组成，最长治疗期为1年，如下治疗方案所示：

第1天，每3周一次：贝伐单抗(5mg/kg IV)、甲酰四氢叶酸(20mg/m² IV推注)、Nab-紫杉醇(125mg IV)、顺铂(40mg/m² IV，经1小时)。

第1-5天，每3周一次：5-FU(1,500mg/m²连续IV输注，经85-96小时)、环磷酰胺(25mg，口服[PO]，一天两次[BID])

第5天(±1天)，每3周一次，共3个周期，此后每9周一次：ETBX-011、ETBX-021、ETBX-051和ETBX-061(1×10¹¹个病毒颗粒[VP]/疫苗/皮下[SC]剂量)。

应理解，如上所述，前瞻性肿瘤分子谱分析可以判定是否施用ETBX-021。

第8天：盐酸亚德阿霉素(80mg/m² IV，经30分钟)、顺铂(20mg/m² IV，经1小时)、SBRT(不超过8Gy，准确剂量由放射肿瘤医师确定；仅前2个周期)和西妥昔单抗(250mg/m²IV)或耐昔妥珠单抗(400mg IV)。请注意，向患有头颈部鳞状细胞癌(HNSCC)的受试者施用西妥昔单抗，而向患有鳞状非小细胞肺癌(NSCLC)的受试者施用耐昔妥珠单抗。

第8-12天，每3周一次：环磷酰胺(25mg PO，每天，[QD])。

第9天，每3周一次：阿维鲁单抗(10mg/kg IV，经1小时)、ALT-803(10μg/kg SC，在haNK输注之前至少30分钟)、haNK(2×10⁹个细胞/IV剂量)。

第11天，每3周一次：haNK(2×10⁹个细胞/IV剂量)。

第11天，每3周一次，共3个周期，此后每9周一次：GI-4000、GI-6207、GI-6301(40个酵母单位[YU]/疫苗/SC剂量)。如上所述，前瞻性肿瘤分子谱分析将判定是否施用GI-4000。

第15天，每3周一次：SBRT(不超过8Gy，准确剂量由放射肿瘤医师确定；仅前2个周期)。

第16天，每3周一次：ALT-803(10μg/kg SC，在haNK输注之前至少30分钟)、haNK(2×10⁹个细胞/IV剂量)、西妥昔单抗(250mg/m² IV)或耐昔妥珠单抗(400mg IV)。

第18天，每3周一次：haNK(2×10⁹个细胞/IV剂量)。

维持阶段：维持阶段的持续时间将为完成诱导阶段中的最后一次治疗后最长1年。维持阶段由重复的2周周期组成，以如下治疗方案显示：

第1天，每2周一次：盐酸亚德阿霉素(60mg/m² IV，经30分钟)、贝伐单抗(5mg/kgIV)、Nab-紫杉醇(100mg IV)。

第1-5天，每2周一次：卡培他滨(650mg/m² PO BID)。

第1-5天和第8-12天，每2周一次：环磷酰胺(25mg PO BID)。

第2天，每2周一次：阿维鲁单抗(10mg/kg IV，经1小时)、西妥昔单抗(250mg/m²IV)或耐昔妥珠单抗(400mg IV)、ALT-803(10μg/kg SC)(在haNK输注之前至少30分钟)、haNK(2×10⁹个细胞/IV剂量)。向患有HNSCC的受试者施用西妥昔单抗，而向患有鳞状NSCLC的受试者施用耐昔妥珠单抗。

第5天(±1天)，此后每8周一次：ETBX-011、ETBX-021、ETBX-051、ETBX-061(1×10¹¹个VP/疫苗/SC剂量)、GI-4000、GI-6207、GI-6301(40个YU/疫苗/SC剂量)，施用Ad-5基疫苗之后2小时。

在不希望受限于任何特定理论下，本发明人设想，组合了低剂量节律化学疗法(LMDC)、贝伐单抗、西妥昔单抗或耐昔妥珠单抗、癌症疫苗、低剂量放射疗法、IL-15超激动物、NK细胞疗法和检查点抑制物的上述治疗方案可以使免疫原性细胞死亡(ICD)达最大，并且增强和维持针对癌细胞的先天性和适应性免疫反应。具体地，发明人设想，此种治疗方案可以通过以下方式来中断免疫编辑的逃逸阶段：1)减轻肿瘤微环境中的免疫遏制，2)诱导和协调ICD信号，3)调节树突状细胞和T细胞，4)增强先天免疫反应，以及5)维持免疫反应。

更具体地，本发明人设想可以减轻肿瘤微环境中的免疫遏制，因为低剂量放射疗法可以降低有助于肿瘤微环境中的免疫遏制的Treg、MDSC和M2巨噬细胞的密度。贝伐单抗也归因于在肿瘤微环境中引起形态改变来促进淋巴细胞运输。可以诱导并协调ICD信号，因为LDMC和低剂量放射疗法可以增加肿瘤细胞的抗原性。此外，贝伐单抗改变TME，从而使抗原特异性T细胞反应更有效，并使肿瘤细胞更易受ICD影响。此外，西妥昔单抗、耐昔妥珠单抗和阿维鲁单抗将用于增强ADCC和细胞毒性T细胞活性。

本发明人还设想树突状细胞和T细胞可以通过增强肿瘤特异性细胞毒性T细胞反应的癌症疫苗和IL-15超激动物来调节。另外，先天性免疫反应可以通过可增强先天性免疫系统的NK细胞疗法并且通过可增强内源性和引入的NK细胞活性的IL-15超激动物来增强。低分次剂量的放射疗法可以上调肿瘤细胞NK配体，以增强NK细胞的肿瘤细胞毒性。最后，免疫反应可以由检查点抑制物维持，该检查点抑制物可以促进长期的抗癌免疫反应。因此，该治疗方案通过组合同时靶向能够使肿瘤生长的不同但互补的机制的药剂，旨在使抗癌活性达最大并延长对治疗的反应持续时间。

本发明人发现，使用疫苗组分、细胞毒性细胞组分和/或亚德阿霉素的此种组合治疗和治疗方案有效治疗一些诊断为患有转移性癌症的患者的肿瘤。在一个实例中，用NANT癌症疫苗和细胞毒性免疫细胞(最初使用aNK，并发展为冷冻保存的haNK)的组合治疗13个周期来治疗一名35岁男性患者，该患者被诊断为患有胰腺癌并转移至肝和肺，并且先前用标准的化学疗法失败。在治疗之前和整个治疗期间测定患者血液中碳水化合物抗原(CA19-9)的水平。如图1所示，在约320天的治疗期间，CA19-9水平从约750显著降低至约220。患者体重也增加了10磅，并且保持无痛状态。另外，自治疗开始以来的6.5个月期间，肿瘤的尺寸减小。在治疗期间未能观察到剂量限制性毒性(DLT)。

在另一个实例中，用NANT胰腺癌疫苗和细胞毒性免疫细胞(最初使用aNK，并发展为冷冻保存的haNK)的组合治疗12个周期来治疗一名50岁女性患者，该患者被诊断为患有胰腺癌，并且先前用标准的化学疗法失败。在治疗之前和整个治疗期间测定患者血液中碳水化合物抗原(CA19-9)的水平。如图2所示，在约220天的治疗期间，CA19-9水平从约1300显著降低至约220(标准化值从129降低至34，超过50％)。患者体重也增加了12磅，并且保持无痛状态。在治疗期间未能观察到剂量限制性毒性(DLT)。

在仍另一个实例中，用NANT胰腺癌疫苗(例如，参见临床试验识别号NCT03136406)和细胞毒性免疫细胞(最初使用aNK，并发展为冷冻保存的haNK)的组合治疗8个周期来治疗一名63岁男性患者，该患者被诊断为患有胰腺癌并转移至肝，并且先前用标准的化学疗法失败。在治疗之前和整个治疗期间测定患者血液中CEA的水平。如图3所示，在约260天的治疗期间，CEA水平从约450显著降低至约200(标准化值从45降低至20，超过50％)。患者保持无痛状态。在治疗期间未能观察到剂量限制性毒性(DLT)。

在仍另一个实例中，用NANT胰腺癌疫苗和细胞毒性免疫细胞(冷冻保存的haNK)的组合治疗4个周期来治疗一名66岁女性患者，该患者被诊断为患有胰腺癌并转移至肝和肺，并且先前用标准的护理化学疗法失败。在治疗之前和整个治疗期间测定患者血液中碳水化合物抗原(CA19-9)的水平。如图4所示，在约85天的治疗期间，CA19-9水平从约1100显著降低至约650。在治疗期间未能观察到剂量限制性毒性(DLT)。在治疗8周中，根据RECIST，患者还显示肿瘤尺寸减小23％。

在仍另一个实例中，用FOLFIRINOX(5-FU、甲酰四氢叶酸、伊立替康(irinotecan)和奥沙利铂(oxaliplatin))的组合治疗17个周期并用NANT胰腺癌疫苗和细胞毒性免疫细胞(冷冻保存的haNK)1个周期来治疗一名40岁男性患者，该患者被诊断为患有胰腺癌并转移至肝和腹膜，并且先前用标准的护理化学疗法失败。在治疗之前和整个治疗期间测定患者血液中碳水化合物抗原(CA19-9)的水平。如图5所示，在约150天的治疗期间，CA19-9水平从约1400显著降低至约100。在治疗期间未能观察到剂量限制性毒性(DLT)。

在仍另一个实例中，一名56岁的男性患者被诊断患有HNSCC(具有HPV史)。该患者最初用顺铂和放射治疗，后来用派姆单抗(Pembrolizumab)和纳武单抗(Nivolumab)治疗。用实例II所示的治疗方案6个周期来治疗该患者。如图6(左图为治疗后)和图7(右图为治疗后)所示，在8周的治疗中，未照射的肾标靶病变的尺寸减小了46％(如图6中的箭头所示和图7中的虚线区域所示)。

在一些实施例中，用于描述和要求保护本发明某些实施例的表示成分的量、特性(如浓度)、反应条件等的数字应被理解为在某些情况下由术语“约”来修饰。因此，在一些实施例中，书面说明书和所附权利要求书中列出的数值参数是近似值，其可以根据特定实施例试图获得的所需特性而变化。在一些实施例中，数值参数应该按照报告的有效数字的数量以及通过应用普通的舍入技术来解释。虽然阐述本发明一些实施例的广泛范围的数字范围和参数是近似值，但是在具体实例中阐述的数值被尽可实行地精确地报道。在本发明的一些实施例中呈现的数值可以含有必然由其各自测试测量中所发现的标准偏差引起的某些误差。

如本文所用，短语“A和B中的至少一个”旨在指‘A’和/或‘B’，而与‘A’和‘B’的性质无关。例如，在一些实施例中，‘A’可以是单一不同物种，而在其他实施例中，‘A’可以表示称为‘A’的属内的单一物种。同样地，在一些实施例中，‘B’可以是单一不同物种，而在其他实施例中，‘B’可以表示称为‘B’的属内的单一物种。

如在此的说明书和贯穿随后的整个权利要求书中所使用，“一个”、“一种”以及“该”的含义包括复数参照物，除非上下文清楚地另外指明。而且，如在此的说明书中所使用，“在…中”的含义包括“在…中”和“在…上”，除非上下文清楚地另外指明。本文中对值的范围的描述仅旨在用作单独提及落入该范围内的每个单独值的简写方法。除非在本文中另外指示，否则具有一定范围的每个单独的值被并入说明书中，如同其在本文中单独陈述一样。

本文所述的所有方法都能够以任何合适的顺序进行，除非本文另外指示或另外与上下文明显矛盾。关于本文某些实施例提供的任何和所有实例或示例性语言(例如，“诸如”)的使用仅旨在更好地说明本发明，而不对另外要求保护的本发明范围进行限制。说明书中的语言不应当被解释为指示任何未要求保护的要素为实践本发明所必需的。

对于本领域技术人员应当清楚的是，在不脱离本文的发明构思的情况下，除了已经描述的那些之外的更多修改是可能的。因此，除了在随附权利要求书的精神中之外，本发明主题不受限制。此外，在解释说明书和权利要求书时，所有术语应当以与上下文一致的尽可能广泛的方式解释。特别地，术语“包含(comprises)”和“包含(comprising)”应当被解释为以非排他性方式指代元素、组分或步骤，从而指示所提及的元素、组分或步骤可以与未明确提及的其他元素、组分或步骤一起存在、或使用、或组合。在说明书权利要求书涉及选自由A、B、C……和N组成的组中的至少一种的情况下，该文字应当被解释为只需要该组中的一个元素，而不是A加N、或B加N等。

Claims (33)

1.一种治疗患有肿瘤的患者的方法，该方法包括：

提供包含疫苗组分和细胞毒性细胞组分的免疫治疗组合物，并且进一步提供包含亚德阿霉素的化学治疗组合物；以及

以足以治疗该肿瘤的剂量和方案施用该免疫治疗组合物和该化学治疗组合物。

2.如权利要求1所述的方法，其中该疫苗组分包含经修饰的细菌、经修饰的酵母和经修饰的病毒中的至少一种，并且其中该疫苗组分还包含编码肿瘤相关抗原的重组核酸。

3.如权利要求2所述的方法，其中该疫苗组分包含经修饰的细菌、经修饰的酵母和经修饰的病毒中的至少两种，并且其中该疫苗组分还包含编码肿瘤相关抗原的重组核酸。

4.如权利要求2或3中任一项所述的方法，其中该肿瘤相关抗原选自由短尾突变蛋白、MUC1和CEA组成的组。

5.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中该细胞毒性细胞组分是haNK细胞和T细胞中的至少一种，其中对该haNK细胞或该T细胞进行基因工程化以表达嵌合抗原受体和CD16高亲和力变体中的至少一种。

6.如前述权利要求中任一项所述的方法，该方法还包括向该患者施用抗体或者干扰或下调检查点抑制的蛋白质。

7.如权利要求6所述的方法，其中该抗体与该细胞毒性细胞组分偶联。

8.如权利要求6或权利要求7所述的方法，其中该抗体特异性结合生长因子受体、血管生长受体、免疫检查点抑制物、肿瘤相关抗原、肿瘤特异性抗原或肿瘤和患者特异性新表位中的至少一种。

9.如权利要求6至8中任一项所述的方法，其中干扰或下调检查点抑制的该蛋白质是CTLA-4、PD-1、TIM1受体、2B4或CD160的抗体或拮抗剂。

10.如权利要求2所述的方法，其中该肿瘤相关抗原选自由短尾突变蛋白、MUC1和CEA组成的组。

11.如权利要求1所述的方法，其中该细胞毒性细胞组分是haNK细胞和T细胞中的至少一种，其中对该haNK细胞或该T细胞进行基因工程化以表达嵌合抗原受体和CD16高亲和力变体中的至少一种。

12.如权利要求1所述的方法，该方法还包括向该患者施用抗体或者干扰或下调检查点抑制的蛋白质。

13.如权利要求12所述的方法，其中该抗体与该细胞毒性细胞组分偶联。

14.如权利要求12或权利要求13所述的方法，其中该抗体特异性结合生长因子受体、血管生长受体、免疫检查点抑制物、肿瘤相关抗原、肿瘤特异性抗原或肿瘤和患者特异性新表位中的至少一种。

15.如权利要求12至14中任一项所述的方法，其中干扰或下调检查点抑制的该蛋白质是CTLA-4、PD-1、TIM1受体、2B4或CD160的抗体或拮抗剂。

16.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中该肿瘤是实体瘤。

17.如前述权利要求中任一项所述的方法，该方法还包括向该患者施用免疫刺激细胞因子或免疫刺激超因子。

18.如权利要求17所述的方法，其中该免疫刺激细胞因子或免疫刺激超因子选自下组，该组由以下组成：IL-2、IL-12、IL-15、IL-15超激动物(ALT803)、IL-21、IPS1和LMP1。

19.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中相隔至少一天分别施用该疫苗组分和该细胞毒性细胞组分。

20.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中该患者具有先前铂基化学疗法和抗PD-1/PD-L1疗法中的至少一种的医疗史。

21.如前述权利要求中任一项所述的方法，该方法还包括确定患者的分子谱，其中该分子谱包含HER2表达水平或RAS突变状态。

22.免疫治疗组合物和包含亚德阿霉素的化学治疗组合物在治疗患有肿瘤的患者中的用途，其中该免疫治疗组合物包含疫苗组分和细胞毒性细胞组分，并且其中该免疫治疗组合物还任选地包含特异性结合生长因子受体、血管生长受体、癌症相关抗原、癌症特异性抗原或癌症和患者特异性新表位的抗体或者干扰或下调检查点抑制的蛋白质。

23.如权利要求22所述的用途，其中该疫苗组分包含经修饰的细菌、经修饰的酵母和经修饰的病毒中的至少一种，并且其中该疫苗组分还包含编码肿瘤相关抗原的重组核酸。

24.如权利要求23所述的用途，其中该肿瘤相关抗原选自由短尾突变蛋白、MUC1和CEA组成的组。

25.如权利要求22至24中任一项所述的用途，其中该细胞毒性细胞组分是haNK细胞和T细胞中的至少一种，其中对该haNK细胞或该T细胞进行基因工程化以表达嵌合抗原受体和CD16高亲和力变体中的至少一种。

26.如权利要求22至25中任一项所述的用途，其中该细胞毒性细胞组分与抗体或者干扰或下调检查点抑制的蛋白质偶联。

27.如权利要求26所述的用途，其中该抗体特异性结合生长因子受体、血管生长受体、免疫检查点抑制物、肿瘤相关抗原、肿瘤特异性抗原或肿瘤和患者特异性新表位中的至少一种。

28.如权利要求26所述的用途，其中干扰或下调检查点抑制的该蛋白质是CTLA-4、PD-1、TIM1受体、2B4或CD160的抗体或拮抗剂。

29.如权利要求22至28中任一项所述的组合物，其中将该疫苗组分和该细胞毒性细胞组分配制成向该患者共同施用。

30.如权利要求22至28中任一项所述的组合物，其中将该疫苗组分和该细胞毒性细胞组分配制成向该患者分别施用。

31.如权利要求22至30中任一项所述的用途，该用途还包含免疫刺激细胞因子或免疫刺激超因子在该治疗中的用途。

32.如权利要求31所述的用途，其中该免疫刺激细胞因子或免疫刺激超因子选自下组，该组由以下组成：IL-2、IL-12、IL-15、IL-15超激动物(ALT803)、IL-21、IPS1和LMP1。

33.如权利要求22至32中任一项所述的用途，其中该患者具有先前铂基化学疗法和抗PD-1/PD-L1疗法中的至少一种的医疗史。

Images