CN110959670B - 一种细菌抑制剂及其制备方法和应用 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种细菌抑制剂及其制备方法和应用，所述细菌抑制剂包括白发藓提取物；所述细菌包括甲氧西林敏感金黄色葡萄球菌、肺炎克雷伯菌或铜绿假单胞菌。本发明创造性地发现多种苔藓植物对细菌尤其是对甲氧西林敏感金黄色葡萄球菌、肺炎克雷伯菌和铜绿假单胞菌具有显著的抑制效果；且这些苔藓植物分布广、生物量大，培养和取材容易，且这些苔藓植物无毒，从其中获得的提取液天然环保，适合应用于食品（果蔬）保鲜剂中，为研发天然新型的果蔬、食品保鲜剂寻找到了新的途径。
Description
技术领域
本发明属于微生物技术领域，具体涉及一种细菌抑制剂及其制备方法和应用。
背景技术
金黄色葡萄球菌广泛存在于自然环境中，在适当的条件下，能够产生肠毒素，引起食物中毒。近几年，金黄色葡萄球菌引发的食物中毒报道层出不穷，由金黄色葡萄球菌引起的食物中毒占食源性微生物食物中毒事件的25%左右，金黄色葡萄球菌成为仅次于沙门氏菌和副溶血杆菌的第三大微生物致病菌。因此，在果蔬等食品中添加天然的且对金黄色葡萄球菌具有显著抑制效果的抑菌剂是非常重要的。
苔藓植物是特殊的高等植物，种数上仅次于被子植物，种类非常丰富，分布十分广泛，在某些生态系统和环境中生物量大。苔藓植物即使紧贴在含有大量微生物的土壤或腐殖质上生长，被真菌和细菌感染的情况也很少被观察到。由于苔藓植物体表不具有起机械屏障作用的角质层，因此一般认为苔藓植物抵御病原微生物侵染主要是靠合成和分泌具抑菌作用的化合物。近年来，随着苔藓植物药理学和植物化学研究的深入，在苔藓植物内发现了一些具有生物活性的新结构化合物。
CN108294060A公开了一种植物源抑菌剂及其制备方法。所述植物源抑菌剂，以重量份计，包括朝鲜白头翁提取物20-33、花椒提取物14-36、西班牙藓苔提取物20-38。本发明提供的植物源抑菌剂具有很好的抑制枯草芽孢杆菌、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、白色念珠菌、绿脓杆菌和黑曲霉菌等生长的特性和防腐性能，同时在高温下的稳定性也有很大的提高。而且在具有抑菌效果和高温稳定性的同时仍然能使化妆品保持温和，对人体无毒、无刺激的特性。但该抑菌剂的制备工艺相对繁琐，对细菌的抑制效果也相对有限。
非专利文件（“三种苔藓植物与甘草的抑菌性比较”，张二芳，《忻州师范学院学报》，第27卷第5期，公开日2011年10月）研究了三种苔藓毛尖羽藓、山羽藓、青藓的抑菌能力，发现其对4种菌株大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、啤酒酵母、灰色链霉菌有不同程度的抑制作用。
也有研究者发现狭叶牛舌藓提取物对金黄色葡萄糖球菌具有抗菌活性。但是狭叶牛舌藓分布范围小，生物量少，从分布广、生物量大的苔藓植物中寻找金黄色葡萄球菌抑制作用的种源，为研发天然新型的果蔬、食品保鲜剂寻找新的途径，有现实价值。
发明内容
针对现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种细菌抑制剂及其制备方法和应用。
为达到此发明目的，本发明采用以下技术方案：
一方面，本发明提供一种细菌抑制剂，所述细菌抑制剂包括白发藓提取物；所述细菌包括甲氧西林敏感金黄色葡萄球菌、肺炎克雷伯菌或铜绿假单胞菌。
优选地，所述细菌抑制剂包括苔藓植物提取物的组合，所述苔藓植物提取物的组合包括白发藓提取物。
优选地，所述苔藓植物提取物的组合还包括匐灯藓提取物、鞭苔提取物、东亚小金发藓提取物、扭叶藓提取物、节茎曲柄藓提取物、丛生真藓提取物、刺叶桧藓提取物、多形小曲尾藓提取物、直叶棉藓提取物或薄壁卷柏藓提取物中的任意一种或至少两种的组合。所述至少两种的组合例如匐灯藓提取物和鞭苔提取物的组合、东亚小金发藓提取物和扭叶藓提取物的组合、茎曲柄藓提取物和丛生真藓提取物的组合等，其他任意的组合方式均可选择，在此不再进行一一阐述。
本发明所涉及的白发藓是指白发藓种，隶属于白发藓属，同样地，匐灯藓、鞭苔、东亚小金发藓、扭叶藓、节茎曲柄藓、丛生真藓、刺叶桧藓、多形小曲尾藓、直叶棉藓和薄壁卷柏藓均为种名。
优选地，所述苔藓植物提取物的组合为白发藓提取物和匐灯藓提取物的组合、白发藓提取物和鞭苔提取物的组合、白发藓提取物和东亚小金发藓提取物的组合、白发藓提取物和扭叶藓提取物的组合、白发藓提取物和节茎曲柄藓提取物的组合、白发藓提取物和丛生真藓提取物的组合、白发藓提取物和刺叶桧藓提取物的组合、白发藓提取物和多形小曲尾藓提取物的组合、白发藓提取物和直叶棉藓提取物的组合或白发藓提取物和薄壁卷柏藓提取物的组合。
另一方面，本发明提供一种如上所述的细菌抑制剂的制备方法，所述制备方法包括：在液氮条件下将苔藓植物粉碎后进行醇提，得到提取液后去醇，得到所述细菌抑制剂。
本发明所涉及的细菌抑制剂的制作步骤简单，无需高档仪器设备。
优选地，所述去醇采用旋转蒸发的方式去醇。
优选地，所述醇提的操作具体包括：在液氮条件下将苔藓植物粉碎后加入乙醇，置于恒温摇床上振荡，2-8℃下离心，得到提取液。
优选地，所述醇提重复进行2-5次，例如2次、3次、4次或5次。
优选地，所述乙醇为92-98%（例如92%、93%、94%、95%、96%、97%或98%等）乙醇。
优选地，所述恒温摇床的温度为35-40℃，例如35℃、36℃、37℃、38℃、39℃或40℃等。
优选地，所述振荡的时间为18-30 h，例如18 h、19 h、20 h、22 h、23 h、25 h、26h、28 h或30 h等。
优选地，所述离心的转速为1200-1800 rpm，例如1200 rpm、1300 rpm、1400 rpm、1500 rpm、1600 rpm、1700 rpm或1800 rpm等。
优选地，所述离心的时间为5-15 min，例如5 min、6 min、8 min、10 min、11 min、12 min、14 min或15 min等。
所述离心的温度为2℃、3℃、4℃、5℃、6℃、7℃或8℃等。
作为本发明的优选方案，所述细菌抑制剂的制备方法包括：在液氮条件下将苔藓植物用组织粉碎机粉碎后，加入92-98%乙醇，置于35-40℃恒温摇床上振荡18-30 h，进行醇提；以1200-1800 rpm的转速2-8℃下离心5-15 min，得到提取液，重复进行2-5次，合并提取液；旋转蒸发仪在2-8℃下蒸发提取液去醇，得到所述细菌抑制剂。
本发明所涉及的细菌抑制剂在上述制备工艺条件下能使抑菌成分获得最大程度的活性保留，使得抑菌效果最大化。
再一方面，本发明提供一种如上所述的细菌抑制剂在制备天然食品保鲜剂中的应用。
本发明所涉及的细菌抑制剂区别于传统的细菌抑制剂（如阿莫西林、头孢氨苄等），它特别适用于作为天然食品保鲜剂进行使用，将其单独或者与其他试剂复配添加入天然食品中，不仅不会影响食品中的天然活性成分，不会影响食品的口感，还能显著地抑制食品中容易残留的金黄色葡萄球菌等细菌的滋生，防止产生肠毒素，防止食物中毒，更重要的是，它不会完全杀灭食品中可能添加的益生菌成分，因此是一种综合能力强、多功能的细菌抑制剂。
与现有技术相比，本发明具有如下有益效果：
本发明创造性地发现本发明涉及的11种苔藓植物对细菌尤其是对甲氧西林敏感金黄色葡萄球菌、肺炎克雷伯菌和铜绿假单胞菌具有显著的抑制效果，其中，白发藓提取物在0.04 g/mL的浓度条件下对甲氧西林敏感金黄色葡萄球菌的抑制率可达50.38%；这些苔藓植物分布广、生物量大，培养和取材容易，且这些苔藓植物无毒，从其中获得的提取液天然环保，适合应用于食品（果蔬）保鲜剂中。本发明为研发天然新型的果蔬、食品保鲜剂寻找到新的途径。
具体实施方式
为更进一步阐述本发明所采取的技术手段及其效果，以下结合本发明的优选实施例来进一步说明本发明的技术方案，但本发明并非局限在实施例范围内。
实施例1
本实施例制备三种菌悬液。
液体培养基的配制：取酵母提取物5 g，胰蛋白胨10 g，氯化钠10 g，加入蒸馏水，磁力搅拌器上搅拌至完全溶解，定容至1000 mL。121℃灭菌20 min。灭菌后，4℃冰箱保存备用。
分别取50 μL保存于甘油中的甲氧西林敏感金黄色葡萄球菌ATCC25933、肺炎克雷伯菌ATCC13883、铜绿假单胞菌ATCC27853，加入灭菌的上述液体培养基中，置于50 mL的锥形瓶中，置恒温摇床37℃振荡培养12 h。置于4℃冰箱保存备用。
实施例2
本实施例制备11种苔藓植物提取液。
野外采集新鲜的白发藓、匐灯藓、鞭苔、东亚小金发藓、扭叶藓、节茎曲柄藓、丛生真藓、刺叶桧藓、多形小曲尾藓、直叶棉藓、薄壁卷柏藓，放进塑料袋子中带回室内，自然风干后，干燥处保存。将苔藓植物清理，获得绿色的苔藓植物，用自来水清洗三遍，蒸馏水清洗三遍，自然条件下风干，自封袋保存。
分别称取10g上述苔藓植物，在液氮条件下用组织粉碎机粉碎。准确称取5g粉末，加入100 mL 95%乙醇中，置于37℃恒温摇床上振荡24 h。在4℃下以1500 rpm离心10 min，收集上清。将残渣再用100 mL 95%乙醇重复抽提两次，合并三次提取液。在4℃下旋转蒸发仪蒸发提取液，得到粉末，即苔藓植物提取物。将其分别加入5 mL无菌的0.2 M Tris缓冲液（pH 7.4）中，使每毫升溶液中含1 g干样。
实施例3
本实施例进行抑菌试验Ⅰ。
分别取实施例2得到的系列提取液200 μL，加入灭菌的液体培养基中，配制成每管总体积为5 mL。每一系列分别接入甲氧西林敏感金黄色葡萄球菌、肺炎克雷伯菌、铜绿假单胞菌，接菌量为20 μL实施例1中制得的菌悬液，同时以含PBS缓冲液的液体培养基为空白对照组，每一系列3个重复。
置于恒温摇床37℃振荡培养6 h，用Nanodrop进行比色测定，吸收波长为600 nm（该测定方法相对于传统的平板计数法更为简单精确）。三次重复取平均值。结果如表1、表2和表3所示（表1是对甲氧西林敏感金黄色葡萄球菌的抑制结果、表2是对肺炎克雷伯菌的抑制结果、表3是对铜绿假单胞菌的抑制结果）。
表1
| 组别 | 平均值 | 标准差 | 与空白对照的差异显著性 | 抑制率(%) |
| 空白对照 | 1.040 | 0.090 | — | — |
| 白发藓 | 0.516 | 0.016 | 0.00 | 50.38** |
| 匐灯藓 | 0.595 | 0.003 | 0.00 | 42.76** |
| 鞭苔 | 0.714 | 0.034 | 0.00 | 31.31** |
| 东亚小金发藓 | 0.718 | 0.035 | 0.00 | 30.93** |
| 扭叶藓 | 0.760 | 0.082 | 0.00 | 26.96** |
| 节茎曲柄藓 | 0.785 | 0.079 | 0.00 | 24.55** |
| 丛生真藓 | 0.788 | 0.082 | 0.00 | 24.26** |
| 刺叶桧藓 | 0.791 | 0.030 | 0.00 | 23.95** |
| 多形小曲尾藓 | 0.798 | 0.021 | 0.00 | 23.30** |
| 直叶棉藓 | 0.798 | 0.054 | 0.00 | 23.27** |
| 薄壁卷柏藓 | 0.826 | 0.051 | 0.00 | 20.54** |
注：**和*分别表示在0.01和0.05水平上有显著差异。
表2
| 组别 | 平均值 | 标准差 | 与空白对照的差异显著性 | 抑制率(%) |
| 空白对照 | 1.042 | 0.070 | — | — |
| 白发藓 | 0.912 | 0.043 | 0.03 | 12.308* |
| 匐灯藓 | 0.854 | 0.035 | 0.002 | 17.853** |
| 鞭苔 | 0.875 | 0.068 | 0.006 | 15.865** |
| 东亚小金发藓 | 0.696 | 0.035 | 0.00 | 33.045** |
| 扭叶藓 | 0.988 | 0.136 | 0.368 | 5.000 |
| 节茎曲柄藓 | 0.894 | 0.049 | 0.014 | 14.038* |
| 丛生真藓 | 0.856 | 0.030 | 0.002 | 17.660** |
| 刺叶桧藓 | 0.945 | 0.061 | 0.104 | 9.135 |
| 多形小曲尾藓 | 0.861 | 0.007 | 0.003 | 17.244** |
| 直叶棉藓 | 0.835 | 0.084 | 0.001 | 19.712** |
| 薄壁卷柏藓 | 0.950 | 0.086 | 0.123 | 8.654 |
注：**和*分别表示在0.01和0.05水平上有显著差异。
表3
| 组别 | 平均值 | 标准差 | 与空白对照的差异显著性 | 抑制率(%) |
| 空白对照 | 1.041 | 0.050 | — | — |
| 白发藓 | 0.878 | 0.040 | 0.00 | 15.545** |
| 匐灯藓 | 0.820 | 0.058 | 0.00 | 21.122** |
| 鞭苔 | 0.842 | 0.031 | 0.00 | 19.038** |
| 东亚小金发藓 | 0.979 | 0.115 | 0.153 | 5.879 |
| 扭叶藓 | 0.948 | 0.040 | 0.034 | 8.878* |
| 节茎曲柄藓 | 0.838 | 0.022 | 0.00 | 19.455** |
| 丛生真藓 | 0.809 | 0.041 | 0.00 | 22.244** |
| 多形小曲尾藓 | 0.803 | 0.021 | 0.00 | 22.756** |
注：**和*分别表示在0.01和0.05水平上有显著差异。
由表1、表2和表3的数据可知：本发明所涉及的细菌抑制剂即苔藓植物提取物对革兰氏阳性菌、革兰氏阴性菌均有显著的抑制效果，尤其是对甲氧西林敏感金黄色葡萄球菌、肺炎克雷伯菌和铜绿假单胞菌有显著的抑制效果，这些细菌抑制剂天然环保，适合应用于食品（果蔬）保鲜剂中，为研发天然新型的果蔬、食品保鲜剂寻找到了新的途径。
实施例4
本实施例制备10种苔藓植物提取液。
野外采集新鲜的白发藓、匐灯藓、鞭苔、东亚小金发藓、扭叶藓、节茎曲柄藓、丛生真藓、刺叶桧藓、多形小曲尾藓、直叶棉藓，放进塑料袋子中带回室内，自然风干后，干燥处保存。将苔藓植物清理，获得绿色的苔藓植物，用自来水清洗三遍，蒸馏水清洗三遍，自然条件下风干，自封袋保存。
提取液的制备方法与实施例2的区别仅在于“所用乙醇的浓度为75%”，其他条件参数均不变。将其分别加入5 mL无菌的0.2 M Tris缓冲液（pH 7.4）中，使每毫升溶液中含1 g干样。
实施例5
本实施例进行抑菌试验Ⅱ。
分别取实施例4得到的10种提取液200 μL，加入灭菌的液体培养基中，配制成每管总体积为5 mL。每一种提取液中接入甲氧西林敏感金黄色葡萄球菌，接菌量为20 μL实施例1中制得的菌悬液，同时以含PBS缓冲液的液体培养基为空白对照组，每一系列3个重复。
置于恒温摇床37℃振荡培养6 h，用Nanodrop进行比色测定，吸收波长为600 nm。三次重复取平均值。结果如表4所示。
表4
| 组别 | 平均值 | 标准差 | 与空白对照的差异显著性 | 抑制率(%) |
| 空白对照 | 1.040 | 0.060 | — | — |
| 白发藓 | 0.558 | 0.012 | 0.00 | 46.35** |
| 匐灯藓 | 0.614 | 0.011 | 0.00 | 40.96** |
| 鞭苔 | 0.758 | 0.012 | 0.00 | 27.12** |
| 东亚小金发藓 | 0.733 | 0.024 | 0.00 | 29.52** |
| 扭叶藓 | 0.789 | 0.025 | 0.00 | 24.13** |
| 节茎曲柄藓 | 0.791 | 0.057 | 0.00 | 23.94** |
| 丛生真藓 | 0.816 | 0.085 | 0.00 | 21.54** |
| 刺叶桧藓 | 0.811 | 0.057 | 0.00 | 22.02** |
| 多形小曲尾藓 | 0.829 | 0.015 | 0.00 | 20.29** |
| 直叶棉藓 | 0.818 | 0.054 | 0.00 | 21.35** |
注：**和*分别表示在0.01和0.05水平上有显著差异。
由表4数据可知，本发明所涉及的细菌抑制剂的制备方法对其的抑菌效果有显著的影响，对比表1和表4的数据可知，提取试剂选择95%乙醇比75%乙醇的效果更好。
实施例6
本实施例制备10种苔藓植物提取液。
野外采集新鲜的白发藓、匐灯藓、鞭苔、东亚小金发藓、扭叶藓、节茎曲柄藓、丛生真藓、刺叶桧藓、多形小曲尾藓、直叶棉藓，放进塑料袋子中带回室内，自然风干后，干燥处保存。将苔藓植物清理，获得绿色的苔藓植物，用自来水清洗三遍，蒸馏水清洗三遍，自然条件下风干，自封袋保存。
提取液的制备方法与实施例2的区别仅在于“置于30℃恒温摇床上振荡24 h”，其他条件参数均不变。将其分别加入5 mL无菌的0.2 M Tris缓冲液（pH 7.4）中，使每毫升溶液中含1 g干样。
实施例7
本实施例进行抑菌试验Ⅲ。
分别取实施例6得到的10种提取液200 μL，加入灭菌的液体培养基中，配制成每管总体积为5 mL。每一种提取液中接入甲氧西林敏感金黄色葡萄球菌，接菌量为20 μL实施例1中制得的菌悬液，同时以含PBS缓冲液的液体培养基为空白对照组，每一系列3个重复。
置于恒温摇床37℃振荡培养6 h，用Nanodrop进行比色测定，吸收波长为600 nm。三次重复取平均值。结果如表5所示。
表5
| 组别 | 平均值 | 标准差 | 与空白对照的差异显著性 | 抑制率(%) |
| 空白对照 | 1.040 | 0.060 | — | — |
| 白发藓 | 0.523 | 0.045 | 0.00 | 49.71** |
| 匐灯藓 | 0.592 | 0.014 | 0.00 | 43.08** |
| 鞭苔 | 0.728 | 0.025 | 0.00 | 30.00** |
| 东亚小金发藓 | 0.715 | 0.012 | 0.00 | 31.25** |
| 扭叶藓 | 0.782 | 0.054 | 0.00 | 24.81** |
| 节茎曲柄藓 | 0.791 | 0.035 | 0.00 | 23.94** |
| 丛生真藓 | 0.783 | 0.057 | 0.00 | 24.71** |
| 刺叶桧藓 | 0.814 | 0.064 | 0.00 | 21.73** |
| 多形小曲尾藓 | 0.820 | 0.026 | 0.00 | 21.15** |
| 直叶棉藓 | 0.803 | 0.045 | 0.00 | 22.79** |
注：**和*分别表示在0.01和0.05水平上有显著差异。
由表5数据可知，本发明所涉及的细菌抑制剂的制备方法对其的抑菌效果有显著的影响，对比表1和表5的数据可知，虽然表5中个别提取液的抑菌效果优于表3，但从整体来看，表1的抑菌效果优于表5，说明提取温度选择37℃比30℃的效果更好。
实施例8
本实施例进行抑菌试验Ⅳ。
本实施例探究苔藓植物提取液的协同抑菌效果。
分别称取10g上述苔藓植物，组织粉碎机粉碎，准确称取5g粉末，加入100 mL 95%乙醇中，置于37℃恒温摇床上振荡24 h。1500 rpm离心10 min，收集上清。将残渣再用100mL 95%乙醇重复抽提两次，合并三次提取液。旋转蒸发仪蒸发提取液，得到粉末，即苔藓植物提取物。取白发藓和匐灯藓的提取物同时加入10 mL无菌的0.2 M Tris缓冲液（pH 7.4）中，使每毫升溶液中含1 g干样，得到溶液1；取白发藓和鞭苔的提取物同时加入10 mL无菌的0.2 M Tris缓冲液（pH 7.4）中，使每毫升溶液中含1 g干样，得到溶液2；取白发藓和东亚小金发藓的提取物同时加入10 mL无菌的0.2 M Tris缓冲液（pH 7.4）中，使每毫升溶液中含1 g干样，得到溶液3；取白发藓和扭叶藓的提取物同时加入10 mL无菌的0.2 M Tris缓冲液（pH 7.4）中，使每毫升溶液中含1 g干样，得到溶液4；取白发藓的提取物加入5 mL无菌的0.2 M Tris缓冲液（pH 7.4）中，使每毫升溶液中含1 g干样，得到溶液5。
溶液6-10的制备方法也参照上述方法。
分别取上述得到的10种溶液200 μL，加入灭菌的液体培养基中，配制成每管总体积为5 mL。每一系列分别接入甲氧西林敏感金黄色葡萄球菌，接菌量为20 μL实施例1中制得的菌悬液，同时以含PBS缓冲液的液体培养基为空白对照组，每一系列3个重复。
置于恒温摇床37℃振荡培养6 h，用Nanodrop进行比色测定，吸收波长为600 nm。三次重复取平均值。结果如表6所示。
表6
| 组别 | 平均值 | 标准差 | 与空白对照的差异显著性 | 抑制率(%) |
| 空白对照 | 1.040 | 0.011 | — | — |
| 白发藓 | 0.523 | 0.024 | 0.00 | 49.71** |
| 白发藓+匐灯藓 | 0.468 | 0.030 | 0.00 | 55.00** |
| 白发藓+鞭苔 | 0.501 | 0.012 | 0.00 | 51.83** |
| 白发藓+东亚小金发藓 | 0.484 | 0.008 | 0.00 | 53.46** |
| 白发藓+扭叶藓 | 0.472 | 0.056 | 0.00 | 54.62** |
| 白发藓+节茎曲柄藓 | 0.482 | 0.015 | 0.00 | 53.65** |
| 白发藓+丛生真藓 | 0.496 | 0.013 | 0.00 | 51.31** |
| 白发藓+刺叶桧藓 | 0.511 | 0.047 | 0.00 | 50.87** |
| 白发藓+多形小曲尾藓 | 0.455 | 0.020 | 0.00 | 56.25** |
| 白发藓+直叶棉藓 | 0.461 | 0.028 | 0.00 | 55.67** |
| 白发藓+薄壁卷柏藓 | 0.518 | 0.032 | 0.00 | 50.19** |
对比表6和表1的数据可知，白发藓提取液分别与匐灯藓、鞭苔、东亚小金发藓、扭叶藓提取液、节茎曲柄藓提取液、丛生真藓提取液、刺叶桧藓提取液、多形小曲尾藓提取液、直叶棉藓提取液、薄壁卷柏藓提取液均具有显著的协同抑菌效果，即在相同的提取物浓度下，使用上述几种提取液进行复配，比单独使用白发藓提取液具有更好的抑菌效果。
申请人声明，本发明通过上述实施例来说明本发明的一种细菌抑制剂及其制备方法和应用，但本发明并不局限于上述实施例，即不意味着本发明必须依赖上述实施例才能实施。所属技术领域的技术人员应该明了，对本发明的任何改进，对本发明产品各原料的等效替换及辅助成分的添加、具体方式的选择等，均落在本发明的保护范围和公开范围之内。
以上详细描述了本发明的优选实施方式，但是，本发明并不限于上述实施方式中的具体细节，在本发明的技术构思范围内，可以对本发明的技术方案进行多种简单变型，这些简单变型均属于本发明的保护范围。
另外需要说明的是，在上述具体实施方式中所描述的各个具体技术特征，在不矛盾的情况下，可以通过任何合适的方式进行组合，为了避免不必要的重复，本发明对各种可能的组合方式不再另行说明。
Claims (4)
1.一种细菌抑制剂，其特征在于，所述细菌抑制剂为苔藓植物提取物的组合，所述苔藓植物提取物的组合由白发藓提取物和其他提取物组成，所述其他提取物为匐灯藓提取物、鞭苔提取物、东亚小金发藓提取物、扭叶藓提取物、节茎曲柄藓提取物、丛生真藓提取物、刺叶桧藓提取物、多形小曲尾藓提取物、直叶棉藓提取物或薄壁卷柏藓提取物中的任意一种或至少两种的组合；所述细菌包括甲氧西林敏感金黄色葡萄球菌、肺炎克雷伯菌或铜绿假单胞菌；
所述细菌抑制剂通过如下制备方法制备得到：
在液氮条件下将苔藓植物用组织粉碎机粉碎后，加入92-98%乙醇，置于35-40℃恒温摇床上振荡18-30 h，进行醇提；以1200-1800 rpm的转速2-8℃下离心5-15 min，得到提取液，重复进行2-5次，合并提取液；旋转蒸发仪2-8℃下蒸发提取液去醇，得到所述细菌抑制剂。
2.如权利要求1所述的细菌抑制剂，其特征在于，所述苔藓植物提取物的组合为白发藓提取物和匐灯藓提取物的组合、白发藓提取物和鞭苔提取物的组合、白发藓提取物和东亚小金发藓提取物的组合、白发藓提取物和扭叶藓提取物的组合、白发藓提取物和节茎曲柄藓提取物的组合、白发藓提取物和丛生真藓提取物的组合、白发藓提取物和刺叶桧藓提取物的组合、白发藓提取物和多形小曲尾藓提取物的组合、白发藓提取物和直叶棉藓提取物的组合或白发藓提取物和薄壁卷柏藓提取物的组合。
3.如权利要求1所述的细菌抑制剂的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括：在液氮条件下将苔藓植物用组织粉碎机粉碎后，加入92-98%乙醇，置于35-40℃恒温摇床上振荡18-30 h，进行醇提；以1200-1800 rpm的转速2-8℃下离心5-15 min，得到提取液，重复进行2-5次，合并提取液；旋转蒸发仪2-8℃下蒸发提取液去醇，得到所述细菌抑制剂。
4.如权利要求1所述的细菌抑制剂在制备天然食品保鲜剂中的应用。
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|---|
| Antimicrobial Activity of Methanol Extracts of Mosses from Serbia;Milan Veljic;等;《Pharmaceutical Biology》;20081231;第46卷(第12期);第871-875页，尤其是第871页右栏最后一段、第872页左栏第2段 * |
| 贵州4种藓类植物的抑菌作用比较;吴昆等;《贵州师范大学学报(自然科学版)》;19981231;第16卷(第4期);第25-28页 * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN110959670A (zh) | 2020-04-07 |
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