CN110938139A - 一种用于法医溶血样本总IgE检测的中空纤维超滤方法 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及检测技术领域，尤其涉及一种中空纤维超滤联合电化学发光技术检测法医溶血样本总IgE。包括中空纤维超滤组件、一号注射器、二号注射器、三号注射器、四号注射器及三通换向阀；所述一号注射器、二号注射器容纳有溶血待处理样品，所述三号注射器容纳有生理盐水，所述四号注射器用于抽取废弃液体；所述一号注射器与三号注射器通过三通换向阀与中空纤维超滤组件的一端相连，中空纤维超滤组件的另一端分别与二号注射器（连接超滤组件内芯）及四号注射器（连接超滤组件外管）相连。是首次提出电化学发光方法应用于死后生化学总IgE的检测。

Description

一种用于法医溶血样本总IgE检测的中空纤维超滤方法
技术领域
本发明涉及检测技术领域，尤其涉及一种中空纤维超滤联合电化学发光技术检测法医溶血样本总IgE。
背景技术
电化学发光 (electrochemiluminescence), 又称电致化学发光, 是通过反应物在电极表面发生电子转移及伴随的化学反应导致的发光现象。该方法是一种重要的电化学及发光分析方法，广泛应用于生物免疫分析、医疗诊断、食品和环境监测等方面，已成为体外诊断的重要方法之一。电化学发光法作为近几年发展迅速的检测方法，与传统检测方法相比，具有线性范围宽、重复性好、精密度高，特异性好等优势，并且已有临床研究报道，电化学发光法在检测乙肝表面抗原、肌钙蛋白时对溶血、脂血、黄疸等具有一定抗干扰能力，但在死后生化学检测方面尚未见其应用。
IgE的死后生化学检测已广泛应用于法医实际工作中。然而，在法医学解剖中，尸体血液受溶血干扰严重无法分离血清。在临床研究中，溶血对多项检测指标均存在重大干扰，而实际情况中死后检材的溶血程度远比临床样本严重，特别是我国大多数死后尸体因冷冻保存而产生的重度溶血，使得常规方法检测总IgE的结果失去了可信价值。因此，建立有效的溶血样本IgE检测的前处理方法对于法医尸体溶血样本总IgE的死后生化学检测具有重要意义。
发明内容
本发明就是针对现有技术存在的缺陷，提供一种用于法医溶血样本总IgE检测的中空纤维超滤方法，其可建立有效的溶血样本IgE检测，对于法医尸体溶血样本总IgE的死后生化学检测具有重要意义。
为实现上述目的，本发明采用中空纤维超滤装置；包括中空纤维超滤组件、一号注射器、二号注射器、三号注射器、四号注射器及三通换向阀。
所述一号注射器、二号注射器容纳有溶血待处理样品，所述三号注射器容纳有生理盐水，所述四号注射器用于抽取废弃液体。
所述一号注射器与三号注射器通过三通换向阀与中空纤维超滤组件的一端相连，中空纤维超滤组件的另一端分别与二号注射器（连接超滤组件内芯）及四号注射器（连接超滤组件外管）相连。
进一步地，所述中空纤维超滤组件采用美国Spectrum Laboratories公司出产的MicroKros® C02-E100-05-N---型号的超滤组件（该组件的孔径为100 KD，接触面积为20cm2）。
进一步地，所述三通换向阀为两位三通换向阀。
进一步地，所述超滤组件的两端各具有一个接头；所述二号注射器通过其中一接头与超滤组件的内管相连，所述四号注射器通过接头与超滤组件的外管相连，所述一号注射器、三号注射器通过另一接头与超滤组件相连。
一种用于法医溶血样本总IgE检测的中空纤维超滤方法，包括以下步骤。
步骤1、利用用于溶血样本处理的中空纤维超滤装置对全溶血样品进行超滤。
步骤2、超滤后取超滤组件内芯液体经离心后提取上清液，作为超滤液。
步骤3、对超滤液通过电化学发光法检测IgE。
步骤4、根据尸体未溶血时血清中总IgE及超滤液中总IgE建立线性回归方程，对超滤液中的IgE进行校正。
步骤5、得到法医溶血样本总IgE含量。
进一步地，所述步骤1内包括以下步骤。
步骤1.1、使用一号注射器抽取2 mL全溶血样品，调节三通换向阀，关闭三号注射器，缓慢推动一号注射器至整个中空纤维超滤组件内芯充满样品，记下此时1号注射器内液体的刻度值。
步骤1.2、调节三通换向阀，关闭一号注射器、打开三号注射器，向超滤组件中推注0.5-1ml生理盐水后关闭三号注射器、打开一号注射器，反复推动一号、二号注射器对超滤组件中液体进行超滤，使用四号注射器抽取外管废液并舍弃。
步骤1.3、重复1.2步操作至超滤组件中外管废液无色，此时调整超滤组件内芯滤液体积至二号注射器排空时一号注射器内液体刻度与步骤1.1内所记录的刻度值相同，保留内芯液体。
进一步地，所述步骤2中，用高速离心机以12 000×g、离心5min提取上清液，作为超滤液；超滤后的滤液呈淡红色。（超滤后的滤液比超滤前全溶血样品颜色浅淡、清亮（图2）。）
进一步地，所述步骤4包括以下步骤。
步骤4.1、取N个利用电化学发光法检测尸体未溶血时血清中IgE浓度样本，分别标记为Y1、Y2、Y3……。
步骤4.2、再取相应的应用电化学发光方法检测超滤液中的IgE浓度，分别标记为X1、X2、X3……。
步骤4.3、利用SPSS软件对每组X与Y值进行统计分析，利用线性回归方程Y=αX+β，得到系数α的值及系数β的值。
步骤4.4、根据系数α、系数β及线性回归方程对超滤液中的IgE进行校正。
与现有技术相比本发明有益效果。
本发明首次采用中空纤维超滤技术对溶血样品进行处理，通过物理性的超滤膜孔径对溶血样品的小分子量干扰杂质进行去除并对目的指标进行截留，获得了良好的处理效果，并通过实际案例的解剖样品建立校正方程，完善地解决了法医实际工作中溶血因素对总IgE死后生化学检测的影响。
本发明采用的电化学发光法为国内外临床检验中通用的检测方法，对溶血等干扰因素具有良好的抗干扰能力，可客观、准确的对超滤液中的总IgE进行检测，在国际法医学领域，这是首次提出电化学发光方法应用于死后生化学总IgE的检测，更是首次提出将中空纤维超滤技术联合电化学发光法用于法医尸体溶血样本总IgE的死后生化学检测。
附图说明
下面结合附图和具体实施方式对本发明做进一步说明。本发明保护范围不仅局限于以下内容的表述。
图1是本发明整体结构示意图。
图2 全血及超滤液性状示意图。
图3 超滤液与血清总IgE检测值线性回归图。
图4为利用电化学发光技术检测超滤液及原血清中总IgE检测值表1。
图中，1为一号注射器、2为二号注射器、3为三号注射器、4为四号注射器、5为超滤组件、6为三通换向阀。
具体实施方式
超滤(ultrafiltration)是指应用固定孔径的超滤膜通过膜两侧压力不同对液体中不同分子量大小的物质进行分离、纯化的技术，在工业净水及废水处理、蛋白质的分离纯化中得到广泛应用。在本方法中，我们选用适当孔径为100 KD的切向流中空纤维超滤膜柱对溶血样本进行超滤处理，不仅能截留住大分子量的IgE（相对分子质量196000），还能有效地去除产生颜色干扰的血红蛋白（相对分子质量64000）及其他小分子量杂质，并通过电化学发光法检测超滤液总IgE,通过以建立的校正方程进行校正，能在很大程度上还原溶血前血清总IgE水平。
如图1-2所示，本发明包括中空纤维超滤组件、一号注射器、二号注射器、三号注射器、四号注射器及三通换向阀。
所述一号注射器、二号注射器容纳有溶血样品，所述三号注射器容纳有生理盐水，所述四号注射器用于抽取废弃液体。
所述一号注射器与三号注射器通过三通换向阀与中空纤维超滤组件的一端相连，中空纤维超滤组件的另一端分别与二号注射器（连接超滤组件内芯）及四号注射器（连接超滤组件外管）相连。
进一步地，所述中空纤维超滤组件采用美国Spectrum Laboratories公司出产的MicroKros® C02-E100-05-N---型号的超滤组件。该组件的孔径为100 KD，接触面积为20cm2。
所述中通纤维超滤组件包括内管（有孔径）和外管，内管内为待超滤液体，外管装有废液。
进一步地，所述三通换向阀为两位三通换向阀。
进一步地，所述超滤组件的两端各具有一个接头；所述二号注射器通过其中一接头与超滤组件的内管相连，所述四号注射器通过接头与超滤组件的外管相连，所述一号注射器、三号注射器通过另一接头与超滤组件相连。
一种用于法医溶血样本总IgE检测的中空纤维超滤方法，包括以下步骤。
步骤1、利用用于溶血样本处理的中空纤维超滤装置对全溶血待处理样品进行超滤。
步骤2、超滤后取超滤组件内芯液体经离心后提取上清液，作为超滤液。
步骤3、对超滤液通过电化学发光法检测IgE。
步骤4、根据尸体未溶血时血清中总IgE及超滤液中总IgE建立线性回归方程，对超滤液中的IgE进行校正。
步骤5、得到法医溶血样本总IgE含量。
进一步地，所述步骤1内包括以下步骤。
步骤1.1、使用一号注射器抽取2 mL全溶血样品，调节三通换向阀，关闭三号注射器，缓慢推动一号注射器至整个中空纤维超滤组件内芯充满样品，记下此时1号注射器内液体的刻度值。
步骤1.2、调节三通换向阀，关闭一号注射器、打开三号注射器，向超滤组件中推注0.5-1ml生理盐水后关闭三号注射器、打开一号注射器，反复推动一号、二号注射器对超滤组件中液体进行超滤，使用四号注射器抽取外管废液并舍弃。
步骤1.3、重复1.2步操作至超滤组件中外管废液无色，此时调整超滤组件内芯滤液体积至二号注射器排空时一号注射器内液体刻度与步骤1.1内所记录的刻度值相同，保留内芯液体。
进一步地，所述步骤2中，用高速离心机以12 000×g、离心5min提取上清液，作为超滤液；超滤后的滤液呈淡红色。超滤后的滤液比超滤前全溶血样品颜色浅淡、清亮（图2）。
进一步地，所述步骤4包括以下步骤。
步骤4.1、取N个利用电化学发光法检测尸体未溶血时血清中IgE浓度样本，分别标记为Y1、Y2、Y3……。
步骤4.2、再取相应的应用电化学发光方法检测超滤液中的IgE浓度，分别标记为X1、X2、X3……。
步骤4.3、利用SPSS软件对每组X与Y值进行统计分析，利用线性回归方程Y=αX+β，得到系数α的值及系数β的值。
步骤4.4、根据系数α、系数β及线性回归方程对超滤液中的IgE进行校正。
作为一种校正过程的具体实施例，应用33例非冷冻尸体解剖案例心血样本，对心血样本进行反复冻融3次致心血样本完全溶血，利用本发明中所述的超滤方法进行超滤，利用电化学发光技术检测超滤液及原血清中总IgE(检测值见图4表1)，对超滤液与血清中的总IgE的检测值进行相关性进行分析，获得了良好的相关性(相关系数r=0.984)（图3）并建立了超滤液与血清总IgE的校正方程：超滤液中IgE浓度 (X)与未溶血血清中IgE浓度(Y) Y=3.0593X + 2.0173。
经过校正后的IgE值可较真实的反应未溶血样品溶血前血清中的真实值。如，我们利用本超滤技术处理了溶血样本，并用电化学发光方法检测了超滤液中IgE的浓度为（X值）15.5IU/mL，代入校正公式后可推测血清中IgE浓度（Y值）约为49.44IU/mL。
可以理解的是，以上关于本发明的具体描述，仅用于说明本发明而并非受限于本发明实施例所描述的技术方案，本领域的普通技术人员应当理解，仍然可以对本发明进行修改或等同替换，以达到相同的技术效果；只要满足使用需要，都在本发明的保护范围之内。

Claims (7)

1.中空纤维超滤装置，包括中空纤维超滤组件、一号注射器、二号注射器、三号注射器、四号注射器及三通换向阀；其特征在于，所述一号注射器、二号注射器容纳有溶血待处理样品，所述三号注射器容纳有生理盐水，所述四号注射器用于抽取废弃液体；
所述一号注射器与三号注射器通过三通换向阀与中空纤维超滤组件的一端相连，中空纤维超滤组件的另一端分别与二号注射器及四号注射器相连。
2.根据权利要求1所述的中空纤维超滤装置，其特征在于：所述中空纤维超滤组件采用美国Spectrum Laboratories公司出产的MicroKros® C02-E100-05-N---型号的超滤组件。
3.根据权利要求1所述的中空纤维超滤装置，其特征在于：所述三通换向阀为两位三通换向阀。
4.根据权利要求1所述的中空纤维超滤装置，其特征在于：所述超滤组件的两端各具有一个接头；所述二号注射器通过其中一接头与超滤组件的内管相连，所述四号注射器通过接头与超滤组件的外管相连，所述一号注射器、三号注射器通过另一接头与超滤组件相连。
5.一种用于法医溶血样本总IgE检测的中空纤维超滤方法，其特征在于：包括以下步骤：
步骤1、利用用于溶血样本处理的中空纤维超滤装置对全溶血样品进行超滤；
步骤2、超滤后取超滤组件内芯液体经离心后提取上清液，作为超滤液；
步骤3、对超滤液通过电化学发光法检测IgE；
步骤4、根据尸体未溶血时血清中总IgE及超滤液中总IgE建立线性回归方程，对超滤液中的IgE进行校正；
步骤5、得到法医溶血样本总IgE含量。
6.根据权利要求5所述的一种用于法医溶血样本总IgE检测的中空纤维超滤方法，其特征在于：所述步骤1内包括以下步骤：
步骤1.1、使用一号注射器抽取2 mL全溶血样品，调节三通换向阀，关闭三号注射器，缓慢推动一号注射器至整个中空纤维超滤组件内芯充满样品，记下此时1号注射器内液体的刻度值；
步骤1.2、调节三通换向阀，关闭一号注射器、打开三号注射器，向超滤组件中推注0.5-1ml生理盐水后关闭三号注射器、打开一号注射器，反复推动一号、二号注射器对超滤组件中液体进行超滤，使用四号注射器抽取外管废液并舍弃；
步骤1.3、重复1.2步操作至超滤组件中外管废液无色，此时调整超滤组件内芯滤液体积至二号注射器排空时一号注射器内液体刻度与步骤1.1内所记录的刻度值相同，保留内芯液体。
7.根据权利要求6所述的一种用于法医溶血样本总IgE检测的中空纤维超滤方法，其特征在于：所述步骤2中，用高速离心机以12 000×g、离心5min提取上清液，作为超滤液；超滤后的滤液呈淡红色。
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