CN110917341A - 一种小鼠肿瘤疫苗及其制备方法 - Google Patents
一种小鼠肿瘤疫苗及其制备方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN110917341A CN110917341A CN201811101997.4A CN201811101997A CN110917341A CN 110917341 A CN110917341 A CN 110917341A CN 201811101997 A CN201811101997 A CN 201811101997A CN 110917341 A CN110917341 A CN 110917341A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- solution
- poly
- oil phase
- tumor
- vaccine
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 title claims abstract description 79
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 title claims abstract description 54
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title abstract description 14
- 229940115272 polyinosinic:polycytidylic acid Drugs 0.000 claims abstract description 36
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims abstract description 28
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 claims abstract description 27
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 claims abstract description 23
- 235000014680 Saccharomyces cerevisiae Nutrition 0.000 claims abstract description 23
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 claims abstract description 20
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 claims abstract description 14
- 229920001503 Glucan Polymers 0.000 claims abstract description 13
- 108010082974 polysarcosine Proteins 0.000 claims abstract description 8
- 238000003756 stirring Methods 0.000 claims description 13
- 238000002156 mixing Methods 0.000 claims description 12
- 238000005406 washing Methods 0.000 claims description 12
- XDTMQSROBMDMFD-UHFFFAOYSA-N Cyclohexane Chemical compound C1CCCCC1 XDTMQSROBMDMFD-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 10
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 10
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 7
- 229920001661 Chitosan Polymers 0.000 claims description 5
- SXRSQZLOMIGNAQ-UHFFFAOYSA-N Glutaraldehyde Chemical compound O=CCCCC=O SXRSQZLOMIGNAQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 238000001132 ultrasonic dispersion Methods 0.000 claims description 5
- 238000005303 weighing Methods 0.000 claims description 5
- 239000000725 suspension Substances 0.000 claims description 2
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 abstract description 12
- 230000007547 defect Effects 0.000 abstract description 12
- 102000043129 MHC class I family Human genes 0.000 abstract description 7
- 108091054437 MHC class I family Proteins 0.000 abstract description 7
- 230000004913 activation Effects 0.000 abstract description 7
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 abstract description 7
- 238000012827 research and development Methods 0.000 abstract description 7
- 230000004614 tumor growth Effects 0.000 abstract description 6
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 54
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 37
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 15
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 14
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 14
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 14
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 10
- 239000008367 deionised water Substances 0.000 description 8
- 229910021641 deionized water Inorganic materials 0.000 description 8
- 238000011161 development Methods 0.000 description 8
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 8
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 8
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 8
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 6
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 6
- 210000001165 lymph node Anatomy 0.000 description 6
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 5
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 5
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 5
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 5
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 5
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N Isopropanol Chemical compound CC(C)O KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 108700018351 Major Histocompatibility Complex Proteins 0.000 description 4
- 210000001185 bone marrow Anatomy 0.000 description 4
- 238000009566 cancer vaccine Methods 0.000 description 4
- 229940022399 cancer vaccine Drugs 0.000 description 4
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 4
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 4
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 4
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 4
- 238000003753 real-time PCR Methods 0.000 description 4
- 230000020382 suppression by virus of host antigen processing and presentation of peptide antigen via MHC class I Effects 0.000 description 4
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 4
- GOZMBJCYMQQACI-UHFFFAOYSA-N 6,7-dimethyl-3-[[methyl-[2-[methyl-[[1-[3-(trifluoromethyl)phenyl]indol-3-yl]methyl]amino]ethyl]amino]methyl]chromen-4-one;dihydrochloride Chemical compound Cl.Cl.C=1OC2=CC(C)=C(C)C=C2C(=O)C=1CN(C)CCN(C)CC(C1=CC=CC=C11)=CN1C1=CC=CC(C(F)(F)F)=C1 GOZMBJCYMQQACI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000011740 C57BL/6 mouse Methods 0.000 description 3
- 102000003777 Interleukin-1 beta Human genes 0.000 description 3
- 108090000193 Interleukin-1 beta Proteins 0.000 description 3
- 108090001005 Interleukin-6 Proteins 0.000 description 3
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 3
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 3
- 239000012228 culture supernatant Substances 0.000 description 3
- 210000004443 dendritic cell Anatomy 0.000 description 3
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 3
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 3
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 3
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 2
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 2
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 2
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 2
- 230000008859 change Effects 0.000 description 2
- 239000003517 fume Substances 0.000 description 2
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 2
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 2
- 210000002865 immune cell Anatomy 0.000 description 2
- 238000009169 immunotherapy Methods 0.000 description 2
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 2
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 2
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 2
- 230000005012 migration Effects 0.000 description 2
- 238000013508 migration Methods 0.000 description 2
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 2
- 238000007481 next generation sequencing Methods 0.000 description 2
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 2
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 2
- 239000000047 product Substances 0.000 description 2
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 2
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 2
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 2
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 2
- 230000008685 targeting Effects 0.000 description 2
- SSOORFWOBGFTHL-OTEJMHTDSA-N (4S)-5-[[(2S)-1-[[(2S)-1-[[(2S)-1-[[(2S)-1-[[(2S)-1-[[(2S)-1-[[(2S)-1-[[(2S)-6-amino-1-[[(2S)-1-[[(2S)-1-[[(2S)-1-[[(2S)-1-[[2-[(2S)-2-[[(2S)-1-[[(2S)-1-[[(2S)-1-[[(2S)-1-[[(2S)-1-[[(2S)-1-[[(2S)-6-amino-1-[[(2S)-1-[[(2S)-1-[[(2S,3S)-1-[[(2S)-1-[[(2S)-1-[[(2S)-6-amino-1-[[(2S)-1-[[(2S)-1-[[(2S)-1-[[(2S)-1-[[(2S)-1-[[(2S)-5-amino-1-[[(2S)-1-[[(2S)-1-[[(2S)-6-amino-1-[[(2S)-6-amino-1-[[(2S)-1-[[(2S)-1-[[(2S)-5-amino-1-[[(2S)-5-carbamimidamido-1-[[(2S)-5-carbamimidamido-1-[[(1S)-4-carbamimidamido-1-carboxybutyl]amino]-1-oxopentan-2-yl]amino]-1-oxopentan-2-yl]amino]-1,5-dioxopentan-2-yl]amino]-5-carbamimidamido-1-oxopentan-2-yl]amino]-5-carbamimidamido-1-oxopentan-2-yl]amino]-1-oxohexan-2-yl]amino]-1-oxohexan-2-yl]amino]-5-carbamimidamido-1-oxopentan-2-yl]amino]-4-methyl-1-oxopentan-2-yl]amino]-1,5-dioxopentan-2-yl]amino]-4-methyl-1-oxopentan-2-yl]amino]-3-hydroxy-1-oxopropan-2-yl]amino]-3-hydroxy-1-oxopropan-2-yl]amino]-3-hydroxy-1-oxopropan-2-yl]amino]-1-oxopropan-2-yl]amino]-1-oxohexan-2-yl]amino]-3-hydroxy-1-oxopropan-2-yl]amino]-1-oxo-3-phenylpropan-2-yl]amino]-3-methyl-1-oxopentan-2-yl]amino]-3-methyl-1-oxobutan-2-yl]amino]-5-carbamimidamido-1-oxopentan-2-yl]amino]-1-oxohexan-2-yl]amino]-3-methyl-1-oxobutan-2-yl]amino]-5-carbamimidamido-1-oxopentan-2-yl]amino]-3-methyl-1-oxobutan-2-yl]amino]-4-methyl-1-oxopentan-2-yl]amino]-1-oxopropan-2-yl]amino]-5-carbamimidamido-1-oxopentan-2-yl]carbamoyl]pyrrolidin-1-yl]-2-oxoethyl]amino]-3-(1H-indol-3-yl)-1-oxopropan-2-yl]amino]-4-methyl-1-oxopentan-2-yl]amino]-1-oxo-3-phenylpropan-2-yl]amino]-5-carbamimidamido-1-oxopentan-2-yl]amino]-1-oxohexan-2-yl]amino]-3-methyl-1-oxobutan-2-yl]amino]-5-carbamimidamido-1-oxopentan-2-yl]amino]-4-methyl-1-oxopentan-2-yl]amino]-1-oxo-3-phenylpropan-2-yl]amino]-3-(1H-imidazol-4-yl)-1-oxopropan-2-yl]amino]-3-methyl-1-oxobutan-2-yl]amino]-4-methyl-1-oxopentan-2-yl]amino]-4-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2,6-diaminohexanoyl]amino]-3-methylbutanoyl]amino]propanoyl]amino]-5-oxopentanoic acid Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@@H]1CCCN1C(=O)CNC(=O)[C@H](Cc1c[nH]c2ccccc12)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](Cc1ccccc1)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](Cc1ccccc1)NC(=O)[C@H](Cc1c[nH]cn1)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](N)CCCCN)C(C)C)C(C)C)C(C)C)C(C)C)C(C)C)C(C)C)C(=O)N[C@@H](Cc1ccccc1)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O SSOORFWOBGFTHL-OTEJMHTDSA-N 0.000 description 1
- 102000008096 B7-H1 Antigen Human genes 0.000 description 1
- 108010074708 B7-H1 Antigen Proteins 0.000 description 1
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 1
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 1
- 238000001712 DNA sequencing Methods 0.000 description 1
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 description 1
- 206010059866 Drug resistance Diseases 0.000 description 1
- 206010064571 Gene mutation Diseases 0.000 description 1
- 101001133056 Homo sapiens Mucin-1 Proteins 0.000 description 1
- 102100034256 Mucin-1 Human genes 0.000 description 1
- 238000003559 RNA-seq method Methods 0.000 description 1
- 210000001015 abdomen Anatomy 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 description 1
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 1
- 230000005859 cell recognition Effects 0.000 description 1
- 206010052015 cytokine release syndrome Diseases 0.000 description 1
- 210000001151 cytotoxic T lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000007812 deficiency Effects 0.000 description 1
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 1
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 1
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 1
- 238000010353 genetic engineering Methods 0.000 description 1
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 238000003384 imaging method Methods 0.000 description 1
- 230000008076 immune mechanism Effects 0.000 description 1
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 1
- 208000026278 immune system disease Diseases 0.000 description 1
- 230000006058 immune tolerance Effects 0.000 description 1
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 description 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 1
- 238000011503 in vivo imaging Methods 0.000 description 1
- 230000002757 inflammatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 1
- 230000035800 maturation Effects 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 201000001441 melanoma Diseases 0.000 description 1
- 239000004005 microsphere Substances 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 230000000750 progressive effect Effects 0.000 description 1
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 1
- 229940034080 provenge Drugs 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- 238000001890 transfection Methods 0.000 description 1
- 238000002255 vaccination Methods 0.000 description 1
- 238000012800 visualization Methods 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/0005—Vertebrate antigens
- A61K39/0011—Cancer antigens
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/39—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the immunostimulating additives, e.g. chemical adjuvants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
- A61K2039/55511—Organic adjuvants
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Immunology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Oncology (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Abstract
本发明公开了一种小鼠肿瘤疫苗及其制备方法，其中，疫苗包含啤酒酵母外壳葡聚糖葡聚糖GP、佐剂聚肌胞苷酸Poly(I:C)和多肽M30，分别按照1:20‑25:10‑12的质量比进行连接。本发明提供了一种小鼠肿瘤疫苗及其制备方法，克服了现有技术中MHCⅠ类分子与短肽结合不能激活CD4+T细胞的技术缺陷，首次通过引入特异性的肿瘤佐剂，实现了激活CD4+T细胞的目的，使得小鼠肿瘤疫苗具有抑制肿瘤生长的功能；同时对用于治疗人类肿瘤疫苗的研发提供新的思路和基础。
Description
技术领域
本发明涉及疫苗开发技术领域，特别是涉及一种小鼠肿瘤疫苗及其制备方法。
背景技术
目前，肿瘤疫苗的研究呈现白炽化状态，进入2017年，PD-1疗法囊括多个适应症；CAR-T治疗在获得FDA专委会推荐后，成为免疫治疗又一里程碑事件，但是PD-1/PD-L1药物的作用机制非常复杂，受益群体相对有限，部分患者还可能存在耐药和加速进展的风险；而CAR-T疗法涉及基因工程改造，还可能会引发细胞因子风暴，而且靶点过于单一，且在实体瘤中效果不佳。为此，学者们努力尝试寻找新的治疗方法，以弥补上述两种免疫疗法的不足。研究肿瘤新抗原，并借此开发个性化肿瘤疫苗，就成为了一个重要而又热门的方向。
全球癌症疫苗研究已有近20年的历史，目前在美国ClinicalTrials.gov注册CancerVaccine的临床研发项目累计多达947项。2011年前后，肿瘤疫苗产品的研发达到一段黄金期。2013年下半年以来，多个重磅疫苗的三期临床试验遭遇滑铁卢，在耗费大量精力财力后，不得不放弃，其中不乏Stimuvax(靶向MUC1，默克公司)以及GSK1572932A(靶向MAGE-A3，GSK)这样的具有知名度的产品。即便是被FDA批准上市的首个肿瘤疫苗Provenge，也因为成本和有效性的问题，暂时被搁置。从研发策略来看，这些疫苗选择的都是肿瘤相关性抗原(TAA)。TAA是机体自身具有的蛋白(只是在癌症细胞上大量表达而已)，因此病人对这些抗原应该是早就有“中枢免疫耐受”了。因此无论如何刺激，也不能达到疗效。所以这类被称为“癌症相关抗原”的蛋白并非理想“抗原”。在肿瘤疫苗研制方面所面临的问题有：疫苗很难找到理想的、能够诱发强烈免疫应答的癌细胞抗原，且癌症疫苗没有绕过复杂的免疫机制，高度依赖患者的免疫系统状态和肿瘤状态，目前无法成为主导性的治疗方式；同时癌症疫苗针对一个或几个癌细胞靶点发挥作用，但癌细胞高度可变，随时变异。而在用肿瘤相关抗原来制备抗肿瘤疫苗时也会产生新的问题，如自身抗原具有免疫耐受，很难诱导免疫反应，免疫原性很低或诱发免疫反应之后容易导致免疫性疾病的风险。
随着新技术的发展，neoantigen(肿瘤新抗原)逐步进入科学家视野，它通常由肿瘤细胞基因组突变产生，仅存在肿瘤细胞，所以又称为肿瘤特异性抗原(TSA)。由于正常细胞不会产生和表达TSA，所以能更有效的激发机体免疫反应。《Nature》杂志同期发表两项独立临床I期试验结果，就是通过对肿瘤细胞进行DNA和RNA测序，寻找肿瘤细胞因基因突变而特异表达的neoantigen，然后构建个性化的肿瘤疫苗，回输到体内激活免疫细胞，并杀死带有上述抗原的肿瘤细胞。随着NGS测序技术的发展，筛选肿瘤特异性抗原实现了技术上的突破。2013年，Rosenberg团队率先利用外显子技术，在肿瘤细胞系上发现neoantigens，并验证了其免疫反应。通过使用NGS技术和构建算法模型，外显子测序和转录组测序能准确表征肿瘤细胞的DNA和RNA，找出可能引起免疫细胞识别的肿瘤突变，生物信息学工具的发展则提高了肿瘤新生抗原的筛选能力，基因组大数据和计算机算法加速了肿瘤表位预测以及MHC(主要组织相容性复合体)亲和力预测，推动了个体化肿瘤疫苗的发展。
目前，个体化疫苗的核心问题是免疫策略，当前占有主流地位的方法是长肽免疫(多肽加Poly IC佐剂)和RNA免疫(新抗原多肽编码的RNA)，利用RNA转染直接免疫。利用多肽直接做抗原进行免疫，具有更好的针对性和特异性以及能够有效应对肿瘤突变抗原的免疫应答，如M30多肽，其中M30多肽小鼠肿瘤细胞系B16F10突变基因筛选第30号的突变基因对应合成的多肽片段，由于受到HLA的限制，使得不表达共有型HLA的患者不能接受多肽疫苗的治疗。此外，常见的MHCⅠ类分子与短肽结合不能激活CD4+T细胞，这就限制了CD8+细胞毒T细胞的效应。
因此，针对上述技术缺陷，发明一种小鼠肿瘤疫苗，克服现有技术中MHCⅠ类分子与短肽结合不能激活CD4+T细胞的技术缺陷，使得小鼠肿瘤疫苗具有抑制肿瘤生长的功能是本领域技术人员亟需解决的问题。
发明内容
有鉴于此，本发明提供了一种小鼠肿瘤疫苗及其制备方法，克服了现有技术中MHCⅠ类分子与短肽结合不能激活CD4+T细胞的技术缺陷，首次通过引入特异性的肿瘤佐剂，实现了激活CD4+T细胞的目的，使得小鼠肿瘤疫苗具有抑制肿瘤生长的功能；同时对用于治疗人类肿瘤疫苗的研发提供新的思路和基础。
为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案：
一种小鼠肿瘤疫苗，包含啤酒酵母外壳葡聚糖GP、佐剂聚肌胞苷酸Poly(I:C)和多肽M30；其中所述啤酒酵母外壳葡聚糖GP、所述佐剂聚肌胞苷酸Poly(I:C)和所述多肽M30分别按照1:20-25:10-12的质量比进行连接，得到GP—Poly(I:C)—M30小鼠肿瘤疫苗。
其中，酒酵母外壳葡聚糖GP的制备方法如下：
(1)取5袋(15g/袋)安琪高效活性干酵母置于1L玻璃烧杯中，加入1L去离子水重悬酵母。
(2)将重悬酵母溶液置于离心瓶中并配平，2000rpm离心5min，弃上清。再次加入去离子水重复洗涤两次(去除酵母中的添加剂)。
(3)收集酵母菌体至烧杯中，加入1L NaOH(1M/L)置于磁力搅拌器上90℃加热搅拌1h。
(4)5000rpm离心5min，收集沉淀。加入900mL去离子水后，用盐酸调pH至4.5，并定容至1L，然后置于磁力搅拌器上75℃加热搅拌1h。
(5)离心收集沉淀，去离子水洗涤3次。
(6)5000rpm离心5min，收集沉淀。异丙醇洗涤4次。
(7)离心收集沉淀，丙酮洗涤2次。
(8)将沉淀放置于通风厨中干燥，然后收集白色粉末置于容器内备用。
本发明克服了现有技术中MHCⅠ类分子与短肽结合不能激活CD4+T细胞的技术缺陷，通过引入特异性的肿瘤佐剂，实现了激活CD4+T细胞的目的，使得小鼠肿瘤疫苗具有抑制肿瘤生长的功能；同时对用于治疗人类肿瘤疫苗的研发提供新的思路和基础。
一种小鼠肿瘤疫苗的制备方法，包括以下步骤：
(1)称取GP至EP管中，向管中接入1-5ml油相溶液，至GP的浓度为5mg/ml置于超声波清洗仪超声分散50min。
(2)向管中加入荧光标记的多肽M30溶液和Poly溶液，搅拌过夜。
(3)取5-10μl 0.5％的壳聚糖溶液，加入到200-250μl油相溶液中混匀，然后将其与步骤(2)中的溶液混匀，并继续搅拌2-3h。
(4)取5-10μl 1％的戊二醛溶液，加入到200-250μl油相溶液中混匀，然后将其混匀加入到(3)中的溶液，继续搅拌2-3h，
(5)5000rpm，离心5-10min，收集目的油相溶液1-5ml备用。
(6)利用环己烷洗涤步骤(5)所述目的油相溶液3次去除Igepal，并利用空气泵吸取所述目的油相溶液后利用PBS洗涤3次，并加入1-2ml的PBS重悬，置于-20℃备用。
进一步的，所述油相溶液为环己烷与Igepal体积比为85：15的溶液。
经由上述的技术方案可知，与现有技术相比，本发明提供了一种小鼠肿瘤疫苗及其制备方法，具有如下技术优点：
克服了现有技术中MHCⅠ类分子与短肽结合不能激活CD4+T细胞的技术缺陷，首次通过引入特异性的肿瘤佐剂，制得了GP—Poly(I:C)—M30小鼠肿瘤疫苗，实现了激活CD4+T细胞的目的，使得小鼠肿瘤疫苗具有抑制肿瘤生长的功能；同时对用于治疗人类肿瘤疫苗的研发提供新的思路和基础。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据提供的附图获得其他的附图。
图1附图为本发明提供的啤酒酵母外壳葡聚糖GP在电子显微镜下的结构示意图；
图2附图为本发明提供的体外GP—Poly(I:C)—M30稳定实验检测图；
图3附图为本发明提供的免疫后小鼠淋巴结中药物积累图；
图4附图为本发明提供的免疫后小鼠淋巴结中药物迁移图；
其中，A为近端淋巴结；B为远端淋巴结；
图5附图为本发明提供的不同药物刺激下对BMDC细胞的刺激作用图；
图6附图为本发明提供的Realtime-PCR检测IL-6含量柱状图；
图7附图为本发明提供的Realtime-PCR检测TNF-α含量柱状图；
图8附图为本发明提供的Realtime-PCR检测IL-1β含量柱状图；
图9附图为本发明提供的GP-Poly(I:C)-M30抑制肿瘤效果图。
具体实施方式
下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
实施例1
本发明实施例公开了一种小鼠肿瘤疫苗，其中啤酒酵母外壳葡聚糖GP、佐剂聚肌胞苷酸Poly(I:C)和多肽M30分别按照1:20:10的质量比进行连接，得到GP—Poly(I:C)—M30小鼠肿瘤疫苗。
其中，酒酵母外壳葡聚糖GP的制备方法如下：
(1)取5袋(15g/袋)安琪高效活性干酵母置于1L玻璃烧杯中，加入1L去离子水重悬酵母。
(2)将重悬酵母溶液置于离心瓶中并配平，2000rpm离心5min，弃上清。再次加入去离子水重复洗涤两次(去除酵母中的添加剂)。
(3)收集酵母菌体至烧杯中，加入1L NaOH(1M/L)置于磁力搅拌器上90℃加热搅拌1h。
(4)5000rpm离心5min，收集沉淀。加入900mL去离子水后，用盐酸调pH至4.5，并定容至1L，然后置于磁力搅拌器上75℃加热搅拌1h。
(5)离心收集沉淀，去离子水洗涤3次。
(6)5000rpm离心5min，收集沉淀。异丙醇洗涤4次。
(7)离心收集沉淀，丙酮洗涤2次。
(8)将沉淀放置于通风厨中干燥，然后收集白色粉末置于容器内备用。
啤酒酵母外壳葡聚糖GP在电子显微镜下的结构如图1所示。
其制备方法为(1)称取5mg GP至2ml的EP管中，向管中接入1ml油相溶液(环己烷/Igepal＝体积比85：15)置于超声波清洗仪超声分散50min。
(2)向管中放入磁子后，然后加入10μl10mg/ml的荧光标记的多肽M30溶液和5μl10mg/ml的Poly(I:C)溶液，磁力搅拌器上搅拌过夜。
(3)取5μl0.5％的壳聚糖溶液，加入到200μl油相溶液中混匀，然后将其混合均后与步骤(2)中的溶液进行混匀，继续搅拌2h。
(4)取5μl1％的戊二醛溶液，加入到200μl油相溶液中混匀，然后将其混匀加入到步骤(3)中的溶液，继续搅拌2h，
(5)5000rpm，离心5min，收集收集目的油相溶液1ml备用。
(6)环己烷洗涤收集目的油相溶液3次去除Igepal，空气泵吸取收集目的油相溶液，后用PBS洗涤3次，并加入1ml的PBS重悬，得到GP—Poly(I:C)—M30小鼠肿瘤疫苗置于-20℃，备用。
实施例2
本发明实施例公开了一种小鼠肿瘤疫苗，其中啤酒酵母外壳葡聚糖GP、佐剂聚肌胞苷酸Poly(I:C)和多肽M30分别按照1:25:11的质量比进行连接，得到GP—Poly(I:C)—M30小鼠肿瘤疫苗。其中啤酒酵母外壳葡聚糖GP在电子显微镜下的结构如图1所示。
其制备方法为(1)称取5mg GP至2ml的EP管中，向管中接入2ml油相溶液(环己烷/Igepal＝体积比85：15)置于超声波清洗仪超声分散50min。
(2)向管中放入磁子后，然后加入12.5μl10mg/ml的荧光标记的多肽M30溶液和5.5μl10mg/ml的Poly(I:C)溶液，磁力搅拌器上搅拌过夜。
(3)取10μl0.5％的壳聚糖溶液，加入到250μl油相溶液中混匀，然后将其混合均后与步骤(2)中的溶液进行混匀，继续搅拌3h。
(4)取5μl1％的戊二醛溶液，加入到250μl油相溶液中混匀，然后将其混匀加入到步骤(3)中的溶液，继续搅拌2h。
(5)5000rpm，离心10min，收集收集目的油相溶液5ml备用。
(6)环己烷洗涤收集目的油相溶液3次去除Igepal，空气泵吸取收集目的油相溶液，后用PBS洗涤3次，并加入2ml的PBS重悬，得到GP—Poly(I:C)—M30小鼠肿瘤疫苗置于-20℃，备用。
实施例3
本发明实施例公开了一种小鼠肿瘤疫苗，其中啤酒酵母外壳葡聚糖GP、佐剂聚肌胞苷酸Poly(I:C)和多肽M30分别按照1:22:12的质量比进行连接，得到GP—Poly(I:C)—M30小鼠肿瘤疫苗。其中啤酒酵母外壳葡聚糖GP在电子显微镜下的结构如图1所示。
其制备方法为(1)称取5mg GP至2ml的EP管中，向管中接入5ml油相溶液(环己烷/Igepal＝体积比85：15)置于超声波清洗仪超声分散50min。
(2)向管中放入磁子后，然后加入11μl10mg/ml的荧光标记的多肽M30溶液和6μl10mg/ml的Poly(I:C)溶液，磁力搅拌器上搅拌过夜。
(3)取7μl0.5％的壳聚糖溶液，加入到220μl油相溶液中混匀，然后将其混合均后与步骤(2)中的溶液进行混匀，继续搅拌2h。
(4)取7μl 1％的戊二醛溶液，加入到220μl油相溶液中混匀，然后将其混匀加入到步骤(3)中的溶液，继续搅拌3h，
(5)5000rpm，离心6min，收集收集目的油相溶液2ml备用。
(6)环己烷洗涤收集目的油相溶液3次去除Igepal，空气泵吸取收集目的油相溶液，后用PBS洗涤3次，并加入1ml的PBS重悬，得到GP—Poly(I:C)—M30小鼠肿瘤疫苗置于-20℃，备用。
实施例4
根据实施例1得到的GP—Poly(I:C)—M30小鼠肿瘤疫苗，加入1mLPBS重悬。放置于37℃恒温摇床，振荡孵育7d，每隔48h离心观察上清中颜色的变化，并用拍照记录，结果如图2所示。由图2可知，随着时间的推移，M30缓慢的释放到外部，且具有足够的稳定性。
实施例5
将C57BL/6小鼠分成5组，每组10只，雌性不限，根据实施例1得到的GP—Poly(I:C)—M30小鼠肿瘤疫苗，加入1mLPBS重悬。按照100μL/只的量接种至C57BL/6小鼠腹部皮下，并分别在0、1、3、5、7天乙醚麻醉小鼠，使用动物活体成像观察注射位点荧光强度的变化，并使用计算机拍照记录实验结果，结果如图3所示；同时分别在1、3、5和7天处死小鼠，取出近端淋巴结和远端淋巴结，利用小动物活体成像系统观察微球向淋巴结迁移和积累的效果，结果如图4所示。由图3和图4可知，强烈的荧光信号来自于接种位点，并维持一周，甚至更长时间；且GP—Poly(I:C)—M30小鼠肿瘤疫苗能够控制抗原的释放，防止抗原的降解，具有很好的体内体外稳定性。
实施例6
利用小鼠股骨骨髓，根据常规的诱导方法，诱导产生小鼠骨髓来源树突状细胞(BMDC)。用DC培养基将诱导产生的BMDC细胞(小鼠骨髓来源的树突状细胞)调至浓度为2×106个/mL，并向24孔板中加入250μL细胞悬液，共分为5组，分别为生理盐水组、M30组、GP组、GP-Poly(I:C)-M30组和LPS组(阳性对照)，每组设3重复。向对应的各组中加入250μLDC培养基，其中含有GP浓度为50μg/mL；M30为3μg/mL；GP-Poly(I:C)-M30为50μg/mL；LPS浓度为2μg/mL。放入培养箱中孵育24h后1400rpm离心7min，收集细胞培养上清，备用。
将每孔细胞重悬入流式管中，加入PBS至4mL，1400rpm离心7min，弃上清，并向其中加入PE anti-mouse MHCⅡ抗体和APC anti-mouse CD86抗体，其中抗体利用PBS溶液稀释，比例为1:100，室温下孵育20min。最后向各管加入4mL PBS洗涤一次，1400rpm离心7min，弃上清，并加入300μL PBS重悬，流式上机检测，结果如图5所示。由图5可知GP组和GP-Poly(I:C)-M30组显著地增加CD86+MHC II+的比例，且具有统计学意义。而生理盐水组和M30组具有相同的比例。这些结果表明GP-M30能够激活BMDC细胞，促进BMDC细胞的成熟，且抗原的包裹不影响GP对BMDC细胞的活化能力。
实施例7
用DC培养基将诱导产生的BMDC细胞(小鼠骨髓来源的树突状细胞)调至浓度为2×106个/mL，并向24孔板中加入250μL细胞悬液，共分为6组，分别为PBS组、M30组、Poly(I:C)-M30组、GP-M30组、GP-Poly(I:C)-M30组和LPS组(阳性对照)，每组设3重复。向对应的各组中加入250μLDC培养基，其中含有PBS浓度为1μg/mL；M30浓度为1μg/mL；Poly(I:C)-M30为1μg/mL；GP-M30为1μg/mL；GP-Poly(I:C)-M30为1μg/mL；LPS浓度为1μg/mL。放入培养箱中孵育24h后1400rpm离心7min，收集细胞培养上清，备用。
利用分别提取各组细胞培养上清液的RNA，并反转录为DNA，利用Real-time PCR分别检测在肿瘤治疗过程中众多炎症细胞因子中，起主要作用的TNF-α、IL-1β、IL-6的含量，结果如图6-8。由图6-8可知，GP-Poly(I:C)-M30和GP-M30能够有效促进TNF-α、IL-1β、IL-6的分泌，增加了对T细胞活化增殖、分化的诱导。
实施例8
将C57BL/6小鼠分成4组，每组10只，雌性不限，分别小鼠背部皮下接种7.5×104个黑色素瘤细胞，此时即为第0天。从接种肿瘤第4天时候开始免疫，4组分别接种PBS每只100μL、M30每只100μg、Poly(I:C)-M30 100μg/只、GP-Poly(I:C)-M30 100μg/只，每隔7天免疫一次，从肿瘤可见开始测量肿瘤大小，每隔1天测量一次，直到第22天。按照的公式计算肿瘤的体积并绘制肿瘤抑制曲线，结果如图9所示，其中公式为：肿瘤体积＝肿瘤的长度×肿瘤的宽度2×0.5。由图9可知，GP-Poly(I:C)-M30能够显著抑制肿瘤的生长。
本发明提供了一种小鼠肿瘤疫苗及其制备方法，克服了现有技术中MHCⅠ类分子与短肽结合不能激活CD4+T细胞的技术缺陷，首次通过引入特异性的肿瘤佐剂，实现了激活CD4+T细胞的目的，使得小鼠肿瘤疫苗具有抑制肿瘤生长的功能；同时对用于治疗人类肿瘤疫苗的研发提供新的思路和基础。
本说明书中各个实施例采用递进的方式描述，每个实施例重点说明的都是与其他实施例的不同之处，各个实施例之间相同相似部分互相参见即可。对于实施例公开的装置而言，由于其与实施例公开的方法相对应，所以描述的比较简单，相关之处参见方法部分说明即可。
对所公开的实施例的上述说明，使本领域专业技术人员能够实现或使用本发明。对这些实施例的多种修改对本领域的专业技术人员来说将是显而易见的，本文中所定义的一般原理可以在不脱离本发明的精神或范围的情况下，在其它实施例中实现。因此，本发明将不会被限制于本文所示的这些实施例，而是要符合与本文所公开的原理和新颖特点相一致的最宽的范围。
Claims (3)
1.一种小鼠肿瘤疫苗，其特征在于，包含啤酒酵母外壳葡聚糖GP、佐剂聚肌胞苷酸Poly(I:C)和多肽M30；其中所述啤酒酵母外壳葡聚糖GP、所述佐剂聚肌胞苷酸Poly(I:C)和所述多肽M30分别按照1:20-25:10-12的质量比进行连接，得到GP—Poly(I:C)—M30小鼠肿瘤疫苗。
2.根据权利要求1所述的一种小鼠肿瘤疫苗的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)称取GP至EP管中，向管中接入1-5ml油相溶液，至GP的浓度为5mg/ml置于超声波清洗仪超声分散50min；
(2)向管中加入荧光标记的多肽M30溶液和Poly溶液，搅拌过夜；
(3)取5-10μl 0.5％的壳聚糖溶液，加入到200-250μl油相溶液中混匀，然后将其与步骤(2)中的溶液混匀，并继续搅拌2-3h；
(4)取5-10μl 1％的戊二醛溶液，加入到200-250μl油相溶液中混匀，然后将其混匀加入到(3)中的溶液，继续搅拌2-3h；
(5)5000rpm，离心5-10min，收集目的油相溶液1-5ml备用；
(6)利用环己烷洗涤步骤(5)所述目的油相溶液3次去除Igepal，并利用空气泵吸取所述目的油相溶液后利用PBS洗涤3次，并加入1-2ml的PBS重悬，置于-20℃备用。
3.根据权利要求2所述的一种小鼠肿瘤疫苗的制备方法，其特征在于，所述油相溶液为环己烷与Igepal体积比为85：15的溶液。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201811101997.4A CN110917341A (zh) | 2018-09-20 | 2018-09-20 | 一种小鼠肿瘤疫苗及其制备方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201811101997.4A CN110917341A (zh) | 2018-09-20 | 2018-09-20 | 一种小鼠肿瘤疫苗及其制备方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN110917341A true CN110917341A (zh) | 2020-03-27 |
Family
ID=69855530
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201811101997.4A Pending CN110917341A (zh) | 2018-09-20 | 2018-09-20 | 一种小鼠肿瘤疫苗及其制备方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN110917341A (zh) |
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20090004201A1 (en) * | 2006-01-17 | 2009-01-01 | Rolf Einar Engstad | Therapy-Enhancing Glucan |
| US20110070298A1 (en) * | 2008-06-05 | 2011-03-24 | Immunovaccine Technologies Inc. | Compositions Comprising Liposomes, An Antigen, A Polynucleotide and A Carrier Comprising a Continuous Phase of a Hydrophobic Substance |
| US20160331821A1 (en) * | 2015-05-13 | 2016-11-17 | Agenus Inc. | Vaccines for treatment and prevention of cancer |
-
2018
- 2018-09-20 CN CN201811101997.4A patent/CN110917341A/zh active Pending
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20090004201A1 (en) * | 2006-01-17 | 2009-01-01 | Rolf Einar Engstad | Therapy-Enhancing Glucan |
| US20110070298A1 (en) * | 2008-06-05 | 2011-03-24 | Immunovaccine Technologies Inc. | Compositions Comprising Liposomes, An Antigen, A Polynucleotide and A Carrier Comprising a Continuous Phase of a Hydrophobic Substance |
| US20160331821A1 (en) * | 2015-05-13 | 2016-11-17 | Agenus Inc. | Vaccines for treatment and prevention of cancer |
Non-Patent Citations (4)
| Title |
|---|
| JOHN C ET AL.: "Exploiting the mutanome for tumor vaccination", 《CANCER RESEARCH》 * |
| 宋美等: "基于β-glucan(葡聚糖)对黑色素瘤多肽疫苗的研究", 《第八届泛环渤海生物化学与分子生物学会2018年学术交流会论文集》 * |
| 张丽等: "壳聚糖载药微球的制备及应用研究进展", 《海洋科学》 * |
| 靳晓慧等: "水溶性酵母葡聚糖对猪细小病毒灭活疫苗免疫效果的影响", 《河南农业科学》 * |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Shi et al. | Enhanced antitumor immunity by targeting dendritic cells with tumor cell lysate-loaded chitosan nanoparticles vaccine | |
| KR101294290B1 (ko) | 예방 또는 치료를 위해 제ｉ류 주조직 적합성복합체〔ｍｈｃ〕-제한 에피토프에 대한 면역 반응을 유발,향상 및 지속하는 방법 | |
| EP2257301B1 (en) | Allogeneic cancer cell-based immunotherapy | |
| CN103502439A (zh) | 用于抗原特异性t细胞增殖的方法 | |
| US6228640B1 (en) | Programmable antigen presenting cell of CD34 lineage | |
| JP2011046742A (ja) | 腫瘍ワクチン | |
| Pan et al. | Spleen-selective co-delivery of mRNA and TLR4 agonist-loaded LNPs for synergistic immunostimulation and Th1 immune responses | |
| AU2008303453B2 (en) | An ex vivo, fast and efficient process to obtain activated antigen-presenting cells that are useful for therapies against cancer and immune system-related diseases | |
| JP2015520129A (ja) | 多価乳がんワクチン | |
| Pandya et al. | The future of cancer immunotherapy: DNA vaccines leading the way | |
| Yang et al. | Buccal injection of synthetic HPV long peptide vaccine induces local and systemic antigen-specific CD8+ T-cell immune responses and antitumor effects without adjuvant | |
| WO2017177907A1 (zh) | 抗免疫检查点pd-l1和pd-l2肿瘤疫苗 | |
| Tewari et al. | Dendritic cell therapy in advanced gastric cancer: a promising new hope? | |
| CN114807048A (zh) | 一种基因工程化的抗原提呈细胞外囊泡及其制备方法和应用 | |
| CN110917341A (zh) | 一种小鼠肿瘤疫苗及其制备方法 | |
| WO2017177908A1 (zh) | Pd-l1和pd-l2重组蛋白及其用途 | |
| JP4688254B2 (ja) | 腫瘍ワクチン | |
| Triozzi et al. | Antitumor activity of the intratumoral injection of fowlpox vectors expressing a triad of costimulatory molecules and granulocyte/macrophage colony stimulating factor in mesothelioma | |
| Xu et al. | CpG oligodeoxynucleotides enhance the efficacy of adoptive cell transfer using tumor infiltrating lymphocytes by modifying the Th1 polarization and local infiltration of Th17 cells | |
| US10232036B2 (en) | Vaccine formulation, preparation method therefor and use thereof | |
| CN110680918B (zh) | 一种以atp为佐剂的hpv纳米疫苗组合物及其制备方法 | |
| CN111518216B (zh) | 多肽、含有多肽的组合物及其在肿瘤免疫中的应用 | |
| Peng et al. | Induction of cytotoxic T-lymphocyte responses using dendritic cells transfected with hepatocellular carcinoma mRNA | |
| Martindale | T Cell Triumph. | |
| JP2017101012A (ja) | 免疫治療製剤 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication | ||
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |
Application publication date: 20200327 |