CN110907648A - 一种脂蛋白相关磷脂酶加工工艺 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种脂蛋白相关磷脂酶加工工艺，涉及脂蛋白相关磷脂酶加工技术领域，为解决现有脂蛋白相关性磷脂酶A2作为检测试剂加工处理样本的方式精密度较低的问题。步骤1：制备0.1mol/L的三羟甲基氨基甲烷缓冲液，且溶液PH为7.5，作为脂蛋白相关性磷脂酶A2检测试剂的R1溶剂；步骤2：制备0.2g/L致敏胶乳微球，作为脂蛋白相关性磷脂酶A2检测试剂的R2溶剂；步骤3：取适量样本、蒸馏水或生理盐水、R1试剂、R2试剂，且样本、蒸馏水或生理盐水、R1试剂、R2试剂的比例为1：1：20：5；在样本中加入生理盐水，稀释后加入R1试剂，搅拌均匀，在恒温状态静置5min。
Description
技术领域
本发明涉及脂蛋白相关磷脂酶加工技术领域，具体为一种脂蛋白相关磷脂酶加工工艺。
背景技术
脂蛋白相关性磷脂酶A2(Lp-PLA2)，又称血小板活化因子乙酰水解酶(PAF-AH)，以PAF和氧化磷脂为底物。是近年来发现的一种与动脉粥样硬化和缺血性心脑血管病相关的磷脂酶A2超家族(新的炎性标记物)。Lp-PLA2主要由炎症细胞产生，其催化产生的促炎产物溶血磷脂酰胆碱(LysoPC)和氧化非酯化脂肪酸(OxFA)，具有促进动脉粥样硬化作用。Lp-PLA2不仅参与了动脉粥样硬化斑块的形成和发展，并且与斑块稳定性丧失以及最终破裂相关。
但是，现有脂蛋白相关性磷脂酶A2作为检测试剂加工处理样本的方式精密度较低；因此，不满足现有的需求，对此我们提出了一种脂蛋白相关磷脂酶加工工艺。
发明内容
本发明的目的在于提供一种脂蛋白相关磷脂酶加工工艺，以解决上述背景技术中提出的现有脂蛋白相关性磷脂酶A2作为检测试剂加工处理样本的方式精密度较低的问题。
为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：一种脂蛋白相关磷脂酶加工工艺，包括以下步骤：
步骤1：制备0.1mol/L的三羟甲基氨基甲烷缓冲液，且溶液PH为7.5，作为脂蛋白相关性磷脂酶A2检测试剂的R1溶剂；
步骤2：制备0.2g/L致敏胶乳微球，作为脂蛋白相关性磷脂酶A2检测试剂的R2溶剂；
步骤3：取适量样本、蒸馏水或生理盐水、R1试剂、R2试剂，且样本、蒸馏水或生理盐水、R1试剂、R2试剂的比例为1：1：20：5；
步骤4：在样本中加入蒸馏水或生理盐水，稀释后加入R1试剂，搅拌均匀，在恒温状态静置5min；
步骤5：5min后添加R2试剂再次混和均匀，并在30sec测定吸光度得到数值A1；在恒温环境下继续静置4.5min后，测定吸光度，得出数值A2，并计算A＝A2-A1；
步骤6：利用校准品吸光度值和其浓度值建立对应工作曲线，将对应样本的A代入工作曲线，求得相应的浓度值，完成脂蛋白相关性磷脂酶A2试剂的检测工作。
优选的，所述步骤1中0.1mol/L的三羟甲基氨基甲烷缓冲液，PH＝7.5的制备方法为,称取50ml0.1mol/L的三羟甲基氨基甲烷溶液,三羟甲基氨基甲烷的分子量为121.14，所以0.1mol/L溶液为12.114g/L,此时PH值应该大于10，在溶液内缓慢加入浓盐酸，直至PH达到7.5后加水稀释至100ml,即可得到该缓冲液。
优选的，所述步骤2中的致敏胶乳微球为大粒径高羧基微球，且表面偶联有两种高亲和力高特异性的鼠抗人蛋白相关性磷脂酶A2单克隆抗体，分别针对抗原的不同表位。
优选的，所述步骤3中的样本为待检测的血清或血浆。
优选的，所述步骤3和步骤4中的恒温环境为37摄氏度，脂蛋白相关磷脂酶试剂在37摄氏度的环境温度下会加速反应，且稳定性良好。
与现有技术相比，本发明的有益效果是：
1、本发明的原理为利用表面偶联有两种鼠抗人蛋白相关性磷脂酶A2单克隆抗体的敏感胶乳微球与样本中的脂蛋白相关磷脂酶A2抗原产生凝集反应，形成抗原抗体复合物，从而导致反应体系浊度上升，当脂蛋白相关磷脂酶A2抗体浓度处于一定范围内时，浊度上升的程度与样本中脂蛋白相关磷脂酶A2抗原的浓度呈正比关系，因此可以利用检测浊度的变化情况来测定样本中脂蛋白相关磷脂酶A2抗原的含量，且其稳定性会优于其它检测方式。
2、通过在致敏胶乳微球表面偶联两种高亲和力高特异性的鼠抗人蛋白相关性磷脂酶A2单克隆抗体，因两种抗体的特异性结合彼此连接，所以能够让分析灵敏度大幅提升，提高该加工方式的精密度。
附图说明
图1为本发明的脂蛋白相关性磷脂酶A2检测试剂成分示意图；
具体实施方式
下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。
请参阅图1，本发明提供的一种实施例：一种脂蛋白相关磷脂酶加工工艺，包括以下实施例：
实施例1：
步骤1：制备0.1mol/L的三羟甲基氨基甲烷缓冲液，且溶液PH为7.5，作为脂蛋白相关性磷脂酶A2检测试剂的R1溶剂；
步骤2：制备0.2g/L致敏胶乳微球，作为脂蛋白相关性磷脂酶A2检测试剂的R2溶剂；
步骤3：取样本4ul、蒸馏水4ul、R1试剂80ul、R2试剂20ul；
步骤4：在样本中加入4ul蒸馏水，稀释后加入80ul R1试剂，搅拌均匀，在恒温状态静置5min；
步骤5：5min后添加20ul R2试剂再次混和均匀，并在30sec测定吸光度得到数值A1；在恒温环境下继续静置4.5min后，测定吸光度，得出数值A2，并计算A＝A2-A1；
步骤6：利用校准品吸光度值和其浓度值建立对应工作曲线，将对应样本的A代入工作曲线，求得相应的浓度值，完成脂蛋白相关性磷脂酶A2试剂的检测工作。
进一步，步骤1中0.1mol/L的三羟甲基氨基甲烷缓冲液，PH＝7.5的制备方法为,称取50ml0.1mol/L的三羟甲基氨基甲烷溶液,三羟甲基氨基甲烷的分子量为121.14，所以0.1mol/L溶液为12.114g/L,此时PH值应该大于10，在溶液内缓慢加入浓盐酸，直至PH达到7.5后加水稀释至100ml,即可得到该缓冲液。
进一步，步骤2中的致敏胶乳微球为大粒径高羧基微球，且表面偶联有两种高亲和力高特异性的鼠抗人蛋白相关性磷脂酶A2单克隆抗体，分别针对抗原的不同表位。
进一步，步骤3中的样本为待检测的血清。
进一步，步骤3和步骤4中的恒温环境为37摄氏度，脂蛋白相关磷脂酶试剂在37摄氏度的环境温度下会加速反应，且稳定性良好。
实施例2：
步骤1：制备0.1mol/L的三羟甲基氨基甲烷缓冲液，且溶液PH为7.5，作为脂蛋白相关性磷脂酶A2检测试剂的R1溶剂；
步骤2：制备0.2g/L致敏胶乳微球，作为脂蛋白相关性磷脂酶A2检测试剂的R2溶剂；
步骤3：取样本8ul、生理盐水8ul、R1试剂160ul、R2试剂40ul；
步骤4：在样本中加入8ul生理盐水，稀释后加入160ul R1试剂，搅拌均匀，在恒温状态静置5min；
步骤5：5min后添加40ul R2试剂再次混和均匀，并在30sec测定吸光度得到数值A1；在恒温环境下继续静置4.5min后，测定吸光度，得出数值A2，并计算A＝A2-A1；
步骤6：利用校准品吸光度值和其浓度值建立对应工作曲线，将对应样本的A代入工作曲线，求得相应的浓度值，完成脂蛋白相关性磷脂酶A2试剂的检测工作。
进一步，步骤1中0.1mol/L的三羟甲基氨基甲烷缓冲液，PH＝7.5的制备方法为,称取50ml0.1mol/L的三羟甲基氨基甲烷溶液,三羟甲基氨基甲烷的分子量为121.14，所以0.1mol/L溶液为12.114g/L,此时PH值应该大于10，在溶液内缓慢加入浓盐酸，直至PH达到7.5后加水稀释至100ml,即可得到该缓冲液。
进一步，步骤2中的致敏胶乳微球为大粒径高羧基微球，且表面偶联有两种高亲和力高特异性的鼠抗人蛋白相关性磷脂酶A2单克隆抗体，分别针对抗原的不同表位。
进一步，步骤3中的样本为待检测的血浆。
进一步，步骤3和步骤4中的恒温环境为37摄氏度，脂蛋白相关磷脂酶试剂在37摄氏度的环境温度下会加速反应，且稳定性良好。
对于本领域技术人员而言，显然本发明不限于上述示范性实施例的细节，而且在不背离本发明的精神或基本特征的情况下，能够以其他的具体形式实现本发明。因此，无论从哪一点来看，均应将实施例看作是示范性的，而且是非限制性的，本发明的范围由所附权利要求而不是上述说明限定，因此旨在将落在权利要求的等同要件的含义和范围内的所有变化囊括在本发明内。不应将权利要求中的任何附图标记视为限制所涉及的权利要求。
Claims (5)
1.一种脂蛋白相关磷脂酶加工工艺，其特征在于，包括以下步骤：
步骤1：制备0.1mol/L的三羟甲基氨基甲烷缓冲液，且溶液PH为7.5，作为脂蛋白相关性磷脂酶A2检测试剂的R1溶剂；
步骤2：制备0.2g/L致敏胶乳微球，作为脂蛋白相关性磷脂酶A2检测试剂的R2溶剂；
步骤3：取适量样本、蒸馏水或生理盐水、R1试剂、R2试剂，且样本、蒸馏水或生理盐水、R1试剂、R2试剂的比例为1：1：20：5；
步骤4：在样本中加入蒸馏水或生理盐水，稀释后加入R1试剂，搅拌均匀，在恒温状态静置5min；
步骤5：5min后添加R2试剂再次混和均匀，并在30sec测定吸光度得到数值A1；在恒温环境下继续静置4.5min后，测定吸光度，得出数值A2，并计算A＝A2-A1；
步骤6：利用校准品吸光度值和其浓度值建立对应工作曲线，将对应样本的A代入工作曲线，求得相应的浓度值，完成脂蛋白相关性磷脂酶A2试剂的检测工作。
2.根据权利要求1所述的一种脂蛋白相关磷脂酶加工工艺，其特征在于：所述步骤1中0.1mol/L的三羟甲基氨基甲烷缓冲液，PH＝7.5的制备方法为,称取50ml0.1 mol/L的三羟甲基氨基甲烷溶液,三羟甲基氨基甲烷的分子量为121.14，所以0.1mol/L溶液为12.114g/L,此时PH值应该大于10，在溶液内缓慢加入浓盐酸，直至PH达到7.5后加水稀释至100ml,即可得到该缓冲液。
3.根据权利要求1所述的一种脂蛋白相关磷脂酶加工工艺，其特征在于：所述步骤2中的致敏胶乳微球为大粒径高羧基微球，且表面偶联有两种高亲和力高特异性的鼠抗人蛋白相关性磷脂酶A2单克隆抗体，分别针对抗原的不同表位。
4.根据权利要求1所述的一种脂蛋白相关磷脂酶加工工艺，其特征在于：所述步骤3中的样本为待检测的血清或血浆。
5.根据权利要求1所述的一种脂蛋白相关磷脂酶加工工艺，其特征在于：所述步骤3和步骤4中的恒温环境为37摄氏度，脂蛋白相关磷脂酶试剂在37摄氏度的环境温度下会加速反应，且稳定性良好。
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