CN110904040A - 一种细胞剥离方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提供一种细胞剥离方法，具体涉及医药技术领域，S1、把尼龙毛40至80g放入烧杯中，加入蒸馏水80至160ml，用铝箔盖上烧杯并煮沸15至20min；然后冷却至常温，倒入设有滤纸的漏斗内，把水过滤掉后；S2、把尼龙毛摊在铺有纱布的托盘内，30至45℃温箱并干燥30～40h；S3、取50ml注射器，并在注射器口配置设有夹头的橡胶管，将尼龙毛装入注射器内，然后将注射器用锡箔纸包好，放入灭菌箱内灭菌。S4、往注射器内填入35至40℃的细胞培养液，静置30分钟，将待剥离的细胞液用35至40℃的的培养液稀释成4.9×107个细胞/ml至5.1×107个细胞/ml。S6、将S5中的细胞液倒入注射器内，35至40℃温育50min至70min，离心即T淋巴细胞剥离。本发明可提高T淋巴细胞的剥离效率和剥离质量。
Description
技术领域
本发明属于医药技术领域，具体涉及一种细胞剥离方法。
背景技术
细胞剥离即细胞分离是生物技术领域常用的实验手段，对于细胞的研究有着不可忽视的作用，其中T淋巴细胞来源于骨髓的多能干细胞(胚胎期则来源于卵黄囊和肝)。在人体胚胎期和初生期，骨髓中的一部分多能干细胞或前T细胞迁移到胸腺内，在胸腺激素的诱导下分化成熟，成为具有免疫活性的T细胞。成熟的T细胞经血流分布至外周免疫器官的胸腺依赖区定居，并可经淋巴管、外周血和组织液等进行再循环，发挥细胞免疫及免疫调节等功能。T细胞的再循环有利于广泛接触进入体内的抗原物质，加强免疫应答，较长期保持免疫记忆。对T细胞进行剥离检测，对人体的健康监测有着举足轻重的作用；现有的T细胞剥离方法，其剥离效率和剥离质量仍有待进一步的提升。
针对上述不足，本发明的目的是提供一种细胞剥离方法，可提高T淋巴细胞的剥离效率和剥离质量。
发明内容
针对上述不足，本发明的目的是提供一种细胞剥离方法，可提高T淋巴细胞的剥离效率和剥离质量。
本发明提供了如下的技术方案：
一种细胞剥离方法，具体步骤如下：S1、把尼龙毛40至80g放入烧杯中，加入蒸馏水80至160ml，用铝箔盖上烧杯并煮沸15至20min；然后冷却至常温，倒入设有滤纸的漏斗内，把水过滤掉后，再次把尼龙毛放入烧杯中，重复上述步骤5至7次；
S2、把尼龙毛摊在铺有纱布的托盘内，30至45℃温箱并干燥30～40h；
S3、取50ml注射器，并在注射器口配置设有夹头的橡胶管，将尼龙毛装入注射器内，然后将注射器用锡箔纸包好，放入灭菌箱内灭菌。
S4、把注射器固定，往注射器内填入35至40℃的细胞培养液，静置30分钟，然后打开夹头，把细胞培养液放掉，重复上述步骤2至4次。
S5、将待剥离的细胞液用35至40℃的的培养液稀释成4.9×107个细胞/ml至5.1×107个细胞/ml
S6、将S5中的细胞液倒入注射器内，且细胞液液面没过尼龙毛；用锡箔纸包住注射器，35至40℃温育50min至70min。
S7、然后打开橡胶管的夹头，将细胞液收集于离心管中；然后离心即T淋巴细胞剥离。
优选的，S1步骤中，把尼龙毛60g放入烧杯中，加入蒸馏水120ml，用铝箔盖上烧杯并煮沸18min；然后冷却至常温，倒入设有滤纸的漏斗内，把水过滤掉后，再次把尼龙毛放入烧杯中，重复上述步骤6次。
优选的，S2步骤中，把尼龙毛摊在铺有纱布的托盘内，35℃温箱并干燥35h后，使用铝箔将托盘上方盖住
优选的，S4步骤中，把注射器固定，往注射器内填入38℃的细胞培养液，静置30分钟，然后打开夹头，把细胞培养液放掉，重复上述步骤3次
优选的，S5步骤中，将待剥离的细胞液用38℃的的培养液稀释成5×107个细胞/ml
优选的，S6步骤中，将S5中的细胞液倒入注射器内，且细胞液液面没过尼龙毛；用锡箔纸包住注射器，38℃温育60min。
优选的，S7步骤中，打开橡胶管的夹头2滴/分钟的速度，将细胞液收集于离心管中。
本发明的有益效果：
本发明可提高T淋巴细胞的剥离效率和剥离质量，且实验流程简单，可有效提高剥离纯化效率；降低人员的工作强度，大大提高了工作效率。
具体实施方式
实施例1：
S1、把尼龙毛40g放入烧杯中，加入蒸馏水80ml，用铝箔盖上烧杯并煮沸15min；然后冷却至常温，倒入设有滤纸的漏斗内，把水过滤掉后，再次把尼龙毛放入烧杯中，重复上述步骤5次；
S2、把尼龙毛摊在铺有纱布的托盘内，30℃温箱并干燥30h；
S3、取50ml注射器，并在注射器口配置设有夹头的橡胶管，将尼龙毛装入注射器内，然后将注射器用锡箔纸包好，放入灭菌箱内灭菌。
S4、把注射器固定，往注射器内填入35℃的细胞培养液，静置30分钟，然后打开夹头，把细胞培养液放掉，重复上述步骤2次。
S5、将待剥离的细胞液用35℃的的培养液稀释成4.9×107个细胞/ml
S6、将S5中的细胞液倒入注射器内，且细胞液液面没过尼龙毛；用锡箔纸包住注射器，35℃温育50min至70min。
S7、然后打开橡胶管的夹头，将细胞液收集于离心管中；然后离心即T淋巴细胞剥离。
实施例2：
S1、把尼龙毛60g放入烧杯中，加入蒸馏水120ml，用铝箔盖上烧杯并煮沸18min；然后冷却至常温，倒入设有滤纸的漏斗内，把水过滤掉后，再次把尼龙毛放入烧杯中，重复上述步骤6次；
S2、把尼龙毛摊在铺有纱布的托盘内，35℃温箱并干燥35h后，使用铝箔将托盘上方盖住；
S3、取50ml注射器，并在注射器口配置设有夹头的橡胶管，将尼龙毛装入注射器内，然后将注射器用锡箔纸包好，放入灭菌箱内灭菌。
S4、把注射器固定，往注射器内填入38℃的细胞培养液，静置30分钟，然后打开夹头，把细胞培养液放掉，重复上述步骤3次。
S5、将待剥离的细胞液用38℃的的培养液稀释成5×107个细胞/ml
S6、将S5中的细胞液倒入注射器内，且细胞液液面没过尼龙毛；用锡箔纸包住注射器，38℃温育60min。
S7、打开橡胶管的夹头2滴/分钟的速度，将细胞液收集于离心管中；然后离心即T淋巴细胞剥离。
实施例3：
S1、把尼龙毛80g放入烧杯中，加入蒸馏水160ml，用铝箔盖上烧杯并煮沸20min；然后冷却至常温，倒入设有滤纸的漏斗内，把水过滤掉后，再次把尼龙毛放入烧杯中，重复上述步骤7次；
S2、把尼龙毛摊在铺有纱布的托盘内，45℃温箱并干燥40h；
S3、取50ml注射器，并在注射器口配置设有夹头的橡胶管，将尼龙毛装入注射器内，然后将注射器用锡箔纸包好，放入灭菌箱内灭菌。
S4、把注射器固定，往注射器内填入40℃的细胞培养液，静置30分钟，然后打开夹头，把细胞培养液放掉，重复上述步骤4次。
S5、将待剥离的细胞液用40℃的的培养液稀释成5.1×107个细胞/ml
S6、将S5中的细胞液倒入注射器内，且细胞液液面没过尼龙毛；用锡箔纸包住注射器，340℃温育70min。
S7、然后打开橡胶管的夹头，将细胞液收集于离心管中；然后离心即T淋巴细胞剥离。
实验数据分析：
具体测试过程如下：
实施例1剥离后的样品随机取样三份编号为A1、A2、A3；
实施例2剥离后的样品随机取样三份编号为B1、B2、B3；
实施例3剥离后的样品随机取样三份编号为C1、C2、C3；
分别测试上述细胞的剥离率，具体数据如下：
本发明可提高T淋巴细胞的剥离效率和剥离质量，且实验流程简单，可有效提高剥离纯化效率；降低人员的工作强度，大大提高了工作效率；
以上仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，对于本领域的技术人员来说，其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
Claims (7)
1.一种细胞剥离方法，其特征在于，具体步骤如下：
S1、把尼龙毛40至80g放入烧杯中，加入蒸馏水80至160ml，用铝箔盖上烧杯并煮沸15至20min；然后冷却至常温，倒入设有滤纸的漏斗内，把水过滤掉后，再次把尼龙毛放入烧杯中，重复上述步骤5至7次；
S2、把尼龙毛摊在铺有纱布的托盘内，30至45℃温箱并干燥30～40h；
S3、取50ml注射器，并在注射器口配置设有夹头的橡胶管，将尼龙毛装入注射器内，然后将注射器用锡箔纸包好，放入灭菌箱内灭菌；
S4、把注射器固定，往注射器内填入35至40℃的细胞培养液，静置30分钟，然后打开夹头，把细胞培养液放掉，重复上述步骤2至4次；
S5、将待剥离的细胞液用35至40℃的的培养液稀释成4.9×107个细胞/ml至5.1×107个细胞/ml；
S6、将S5中的细胞液倒入注射器内，且细胞液液面没过尼龙毛；用锡箔纸包住注射器，35至40℃温育50min至70min；
S7、然后打开橡胶管的夹头，将细胞液收集于离心管中；然后离心即T淋巴细胞剥离。
2.根据权利要求1所述的一种细胞剥离方法，其特征在于：S1步骤中，把尼龙毛60g放入烧杯中，加入蒸馏水120ml，用铝箔盖上烧杯并煮沸18min；然后冷却至常温，倒入设有滤纸的漏斗内，把水过滤掉后，再次把尼龙毛放入烧杯中，重复上述步骤6次。
3.根据权利要求1所述的一种细胞剥离方法，其特征在于：S2步骤中，把尼龙毛摊在铺有纱布的托盘内，35℃温箱并干燥35h后，使用铝箔将托盘上方盖住。
4.根据权利要求1所述的一种细胞剥离方法，其特征在于：S4步骤中，把注射器固定，往注射器内填入38℃的细胞培养液，静置30分钟，然后打开夹头，把细胞培养液放掉，重复上述步骤3次。
5.根据权利要求1所述的一种细胞剥离方法，其特征在于：S5步骤中，将待剥离的细胞液用38℃的的培养液稀释成5×107个细胞/ml。
6.根据权利要求1所述的一种细胞剥离方法，其特征在于：S6步骤中，将S5中的细胞液倒入注射器内，且细胞液液面没过尼龙毛；用锡箔纸包住注射器，38℃温育60min。。
7.根据权利要求1所述的一种细胞剥离方法，其特征在于：S7步骤中，打开橡胶管的夹头2滴/分钟的速度，将细胞液收集于离心管中。
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| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
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| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication | ||
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Application publication date: 20200324 |