CN110898075B - 聚六亚甲基双胍在制备抑制和/或杀灭犬小孢子菌的药物中的应用 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及微生物技术领域,具体公开了聚六亚甲基双胍在抑制、杀灭红色毛癣菌、须癣毛癣菌、犬小孢子菌及白念珠菌中的应用。本发明提供了聚六亚甲基双胍在抑制和/或杀灭红色毛癣菌中的应用、聚六亚甲基双胍在抑制和/或杀灭须癣毛癣菌中的应用、聚六亚甲基双胍在抑制和/或杀灭犬小孢子菌中的应用、聚六亚甲基双胍在抑制和/或杀灭白念珠菌中的应用。本发明扩大了聚六亚基双胍的应用范围,并为制备由上述真菌引起的疾病的药物、抗真菌医疗器械或抗真菌医用材料提供了新思路。
Description
技术领域
本发明涉及微生物技术领域,具体地说,涉及聚六亚甲基双胍在抑制、杀灭红色毛癣菌、须癣毛癣菌、犬小孢子菌及白念珠菌中的应用。
背景技术
真菌是一种广泛存在于自然界中的真核生物,总量约有160万种,其中约500种左右可感染人类,引起真菌感染性疾病。并且随着科技进步以及气候变化,致病真菌的种类及数量还在增加。致病真菌主要通过吸入、食入播散或直接与人类接触而引起感染,依感染部位的不同,又分为浅表感染和深部感染。
其中浅部感染又称浅部真菌病,是指真菌感染皮肤、毛发、甲等浅部组织所导致的一组疾病,可发生于各个年龄段,具有发病率高,复发率高的临床特点。通过大样本研究表明,浅表真菌感染的致病菌主要是皮肤癣菌和念珠菌,占总致病菌的85~90%。其中又以红色毛癣菌、须癣毛癣菌、犬小孢子菌和白念珠菌感染率最高。由其引起的瘙痒、继发感染、甲板变形等问题,给患者的生活质量带来了极大的影响。对于部分免疫受损的病人,病原菌甚至可以播散,引起深部感染,危及生命。对于浅部真菌感染的治疗,以局部使用抗真菌药物为主。但由于患者用药依从性差导致的疾病迁延不愈,长期反复用药引起的菌株耐药增多,以及甲癣的复发都是临床需要解决的一个难题。寻找新型抗真菌药物或可杀伤真菌的消毒剂势在必行。
聚六亚甲基双胍(PolyhexaMethylene biguanidine,PHMB;CAS:32289-58-0)是一种环保型高分子聚合物杀菌消毒剂。其中的胍基有很高的活性,能使聚合物成正电性,很容易被呈负电性的各类微生物所吸附,从而使其丧失生殖能力,加上聚合物形成的薄膜堵塞了微生物的呼吸通道,使微生物迅速死亡。其为非特定式物理式杀菌,微生物不容易产生耐药性,并且有缓蚀作用,可长效杀菌。在使用浓度下,PHMB安全无毒,对皮肤、黏膜、眼睛无刺激性,无致敏性。且无色、无味、不挥发、不含重金属、卤素、酚类、醛类物质,对各类表面处理无腐蚀。目前在餐具及果蔬的清洗消毒、隐形眼镜护理液等产品中均有较好应用。
现有研究表明聚六亚甲基双胍对金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌及大肠杆菌等均有较好的杀菌作用,但针对常见皮肤癣菌的杀菌效果尚无相关研究,从而限制了它的应用范围。
发明内容
为了解决现有技术中存在的问题,本发明的目的是提供聚六亚甲基双胍在抑制和/或杀灭红色毛癣菌、须癣毛癣菌、犬小孢子菌及白念珠菌中的应用。
为了实现本发明该目的,本发明的技术方案如下:
聚六亚甲基双胍在抑制和/或杀灭红色毛癣菌(Trichophyton rubrum)中的应用。
本发明中,当将所述聚六亚甲基双胍应用于红色毛癣菌 (Trichophyton rubrum)的抑制时,所述聚六亚甲基双胍的浓度为1-4 μg/ml;当将所述聚六亚甲基双胍应用于红色毛癣菌(Trichophyton rubrum)的杀灭时,所述聚六亚甲基双胍的浓度为2-8μg/ml。
聚六亚甲基双胍在抑制和/或杀灭须癣毛癣菌(Trichophyton mentagrophytes)中的应用。
本发明中,当将所述聚六亚甲基双胍应用于须癣毛癣菌(Trichophytonmentagrophytes)的抑制时,所述聚六亚甲基双胍的浓度为2-4μg/ml;当将所述聚六亚甲基双胍应用于须癣毛癣菌 (Trichophyton mentagrophytes)的杀灭时,所述聚六亚甲基双胍的浓度为4μg/ml。
聚六亚甲基双胍在抑制和/或杀灭犬小孢子菌(Microsporum canis)中的应用。
本发明中,当将所述聚六亚甲基双胍应用于犬小孢子菌 (Microsporum canis)的抑制或杀灭时,所述聚六亚甲基双胍的浓度为2-4μg/ml。
聚六亚甲基双胍在抑制和/或杀灭白念珠菌(Candida albicans)中的应用。
本发明中,当将所述聚六亚甲基双胍应用于白念珠菌(Candida albicans)的抑制时,所述聚六亚甲基双胍的浓度为0.3-5μg/ml;当将所述聚六亚甲基双胍应用于白念珠菌(Candida albicans)的杀灭时,所述聚六亚甲基双胍的浓度为5-10μg/ml。
本发明还提供了聚六亚甲基双胍在制备抗真菌药物、抗真菌医疗器械或抗真菌医用材料中的应用,所述真菌为红色毛癣菌 (Trichophyton rubrum)、须癣毛癣菌(Trichophyton mentagrophytes)、犬小孢子菌(Microsporum canis)或白念珠菌(Candidaalbicans)中的一种或多种;
优选地,所述抗真菌药物为涂抹剂、乳剂、膏剂、气雾剂或膜剂;
所述抗真菌医疗器械或所述抗真菌医用材料的制备方法为:将包含所述聚六亚甲基双胍的药物涂覆于所述抗真菌医疗器械或所述抗真菌医用材料上。
本发明所述的抗真菌药物形式不限于上述的涂抹剂、乳剂、膏剂、气雾剂或膜剂,本领域的其他药剂形式也可适用于本发明。
本发明还提供一种抗真菌药物,所述抗真菌药物的活性成分包括聚六亚甲基双胍。
此外,所述抗真菌药物还可包括其他具有抗真菌活性的药物组分。
本发明的有益效果至少在于:
本发明发现了聚六亚基双胍对常见致病真菌红色毛癣菌、须癣毛癣菌、犬小孢子菌及白念珠菌的抑制和杀灭作用,从而扩大了聚六亚基双胍的应用范围,并为制备由上述真菌引起的疾病的药物、医疗器械或医用材料提供了新思路。
附图说明
图1为本发明实施例1红色毛癣菌的琼脂稀释法试验结果;
图2为本发明实施例2须癣毛癣菌的琼脂稀释法试验结果;
图3为本发明实施例3犬小孢子菌的琼脂稀释法试验结果;
图4为本发明实施例4白念珠菌的琼脂稀释法试验结果。
具体实施方式
下面将结合实施例对本发明的优选实施方式进行详细说明。需要理解的是以下实施例的给出仅是为了起到说明的目的,并不是用于对本发明的范围进行限制。本领域的技术人员在不背离本发明的宗旨和精神的情况下,可以对本发明进行各种修改和替换。
下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明,均为常规方法。下述实施例中所用的材料、试剂等,如无特殊说明,均可从商业途径得到。
在本发明中,所用的真菌可以通过常规方法取得或培养,也可以通过市售途径得到,如从患有相应疾病的患者的体细胞或组织中分离,或从任何市售标准菌株的机构或公司,如ATCC购买得到。应理解,在本发明的实施例中所使用的菌株样本仅为示范性的例子,任何红色毛癣菌、须癣毛癣菌、犬小孢子菌以及白念珠菌菌株均可以用聚六亚甲基双胍予以抑制或杀灭,而不受实施例范围的限制。
本发明具体实施方式中试验方法如下:
试验菌株:皮肤癣菌:10株红色毛癣菌TR1-10,10株须癣毛癣菌 TM1-9、ATCC4439,5株犬小孢子菌MC1-5。13株白念珠菌CA1-12, SC5314。其中,红色毛癣菌TR1-10、须癣毛癣菌TM1-9以及白念珠菌 CA1-12来自文献:何文婧,高志琴,徐红,等.82株甲真菌病致病菌分布及药敏结果分析[J].中国真菌学杂志,2016,11(5):289-291,295. DOI:10.3969/j.issn.1673-3827.2016.05.010.中所描述菌株,犬小孢子菌为上海市皮肤病医院真菌病科临床分离菌株。菌株均经形态学和生理学鉴定。药敏试验前,所有皮肤癣菌(红色毛癣菌、须癣毛癣菌、犬小孢子菌)菌株均在沙保氏葡萄糖琼脂(SDA)培养基上活化7d,所有白念珠菌菌株均在SDA培养基上活化48h。
试验用药物:PHMB粉剂,购自上海德兼化工有限公司,批号 20190110,于-20℃保存。PHMB溶液(质量浓度20%),购自上海德兼化工有限公司,批号20190110,于-4℃保存。氮酮,购自浙江省天宏生物技术有限公司,批号20180413,于常温保存。
菌悬液制备:
皮肤癣菌(红色毛癣菌、须癣毛癣菌、犬小孢子菌):受试菌接种在SDA培养基于28℃培养7d,活化2次。取2ml无菌生理盐水加入试管,用加样枪将培养基上的菌丝和孢子刮下,混匀于2ml无菌生理盐水中,将有孢子和菌丝片段的菌悬液吸到研磨器进行研磨,研磨好的菌液再用尖端开口并带纱布的EP管渗漏至无菌玻璃管,在无菌玻璃管中取10μl菌悬液于血细胞计数板计数。调整终浓度为(1~5)× 104CFU/ml。
白念珠菌:受试菌接种在SDA培养基于30℃培养48h,活化2次。取2ml无菌生理盐水加入试管,用加样枪将培养基上的菌落刮下,混匀于2ml无菌生理盐水中,先与0.5麦氏浓度的比浊,将浓度调整为0.5 麦氏,后取10μl菌悬液于血细胞计数板计数,调整终浓度为(1~5) ×103CFU/ml。
体外药物敏感性试验:
微量液基稀释法:
1、药敏板的配制:以灭菌水溶解PHMB粉剂,配制成浓度为1600 μg/mL的储存液,再用RPMI-1640培养基倍比稀释,使其浓度范围为 0.125~64μg/ml(皮肤癣菌),0.08~40μg/ml(白念珠菌)。将不同浓度的药液依次加入无菌96孔板中,每孔100μl,第11孔设为生长对照不加药液,第12孔设为阴性对照,只有培养基。所有操作都在超净台中进行。
2、加菌孵育:将配置好的菌液100μl加入相应各孔。轻轻混匀后将药敏板放入35℃培养箱孵育,皮肤癣菌(红色毛癣菌、须癣毛癣菌、犬小孢子菌)96h判读最低抑菌浓度(MIC),犬小孢子菌MIC的判读时间可延长到120h(参照生长对照孔生长情况),酵母菌(白念珠菌) 48h判读MIC。用肉眼观察法判定终点,与生长对照孔比较,取80%的生长抑制作为终点判定。MFC(最低杀菌浓度)测定:在96孔板 MIC浓度上下2个浓度取20μl培养基分别接种到SDA培养基中,35℃孵育培养,7d后观察是否有菌落生长,无菌落生长平皿所对应的药物浓度为该菌的MFC。
琼脂稀释法:
把PHMB溶液稀释为2.5%、1.25%、0.63%、0.32%、0.16%、0.08%的质量浓度,分别取0.5ml均匀涂至直径为7cm的沙堡氏平板(SDA) 上。待平皿晾干后,取上述制备好的菌悬液0.5ml均匀涂布于含不同浓度PHMB的培养基上,以不含PHMB的培养基作为阳性对照(生长对照)。另设置一组加入透皮剂氮酮,观察透皮剂对PHMB作用有无影响。所有平皿放入35℃培养箱孵育,皮肤癣菌96h观察结果,犬小孢子菌观察时间可延长到120h,白念珠菌72h观察结果。
实施例1-PHMB对红色毛癣菌的抑制、杀灭
本实施例提供一种聚六亚甲基双胍在抑制和杀灭红色毛癣菌中的应用。具体的,将PHMB溶液与红色毛癣菌接触,从而实现对红色毛癣菌的抑制和杀灭。本实施例进一步对抑制和杀灭效果进行试验。
所有操作都在超净台中进行,各株红色毛癣菌试验方法相同:
将红色毛癣菌菌株接种在SDA培养基于28℃培养7d,活化2次。取2ml无菌生理盐水加入试管,用加样枪将培养基上的菌丝和孢子刮下,混匀于2ml无菌生理盐水中。将有孢子和菌丝片段的菌悬液吸到研磨器进行研磨,研磨好的菌液再用尖端开口并带纱布的EP管渗漏至无菌玻璃管,在无菌玻璃管中取10μl菌悬液于血细胞计数板计数(终浓度1~5×104CFU/ml)。
应用及效果检测:
1、微量液基稀释法:
首先配制药敏板,将PHMB粉剂先使用灭菌水配制为浓度 1600μg/ml的储存液,再使用RPMI-1640培养基倍比稀释成64μg/ml、 32μg/ml、16μg/ml、8μg/ml、4μg/ml、2μg/ml、1μg/ml、0.5μg/ml、 0.25μg/ml、0.125μg/ml这10个浓度梯度。将这10个浓度梯度加入无菌 96孔板的第1~10孔中,每孔100μl,第11孔作为生长对照不加药液,待下一步直接加菌液100μl。第12孔作为阴性对照加入100μl RPMI-1640培养基。
加菌孵育:将上述配制好的菌液100μl加入相应各孔,第12孔除外。轻轻混匀后将药敏板放入35℃培养箱孵育。
MIC判定:用肉眼观察法判定,菌株生长96h后,与生长对照孔比较,80%的生长抑制的浓度。MFC判定:在MIC浓度上下2个稀释度取红色毛癣菌培养液20μl接种到SDA培养基中,35℃孵育培养,7d 后观察是否有菌生长,培养基上无菌落生长的为该菌的MFC,结果参见表1。
2、琼脂稀释法:
把PHMB溶液稀释为2.5%、1.25%、0.63%、0.32%、0.16%、0.08%的质量浓度,分别取0.5ml均匀涂至直径为7cm的SDA平皿上。待平皿晾干后,取上述制备好的菌悬液0.5ml均匀涂布于含不同浓度PHMB 的培养基上,以不含PHMB的培养基作为阳性对照(生长对照),同时设置加入透皮剂氮酮组进行对照。所有平皿放入35℃培养箱孵育, 96h观察结果,结果参见图1。
结果:表1为使用微量液基稀释法检测PHMB粉剂对红色毛癣菌的抑制、杀灭能力结果,结果显示PHMB对红色毛癣菌的抑菌范围为 1-4μg/ml,杀菌范围为2-8μg/ml。图1为PHMB溶液对红色毛癣菌抑制、杀灭能力检测结果,可见在溶液浓度为1.25%时已无肉眼可见菌落长出。此外,加入透皮剂氮酮后,发现杀菌效果并无改变。
表1 PHMB对红色毛癣菌MIC以及MFC结果
实施例2-PHMB对须癣毛癣菌的抑制、杀灭
本实施例提供一种聚六亚甲基双胍在抑制和杀灭须癣毛癣菌中的应用。具体的,将PHMB溶液与须癣毛癣菌接触,从而实现对须癣毛癣菌的抑制和杀灭。本实施例进一步对抑制和杀灭效果进行试验。
所有操作都在超净台中进行,各株须癣毛癣菌试验方法相同:
将须癣毛癣菌接种在SDA培养基于28℃培养7d,活化2次。取2ml 无菌生理盐水加入试管,用加样枪将培养基上的菌丝和孢子刮下,混匀于2ml无菌生理盐水中。将有孢子和菌丝片段的菌悬液吸到研磨器进行研磨,研磨好的菌液再用尖端开口并带纱布的EP管渗漏至无菌玻璃管,在无菌玻璃管中取10μl菌悬液于血细胞计数板计数(终浓度1~ 5×104CFU/ml)。
应用及效果检测:
1、微量液基稀释法:
首先配制药敏板,将PHMB粉剂先使用灭菌水配制为浓度 1600μg/ml的储存液,再使用RPMI-1640培养基倍比稀释成64μg/ml、 32μg/ml、16μg/ml、8μg/ml、4μg/ml、2μg/ml、1μg/ml、0.5μg/ml、 0.25μg/ml、0.125μg/ml这10个浓度梯度。将这10个浓度梯度加入无菌 96孔板的第1~10孔中,每孔100μl,第11孔作为生长对照不加药液,待下一步直接加菌液100μl。第12孔作为阴性对照加入100μl RPMI-1640培养基。
加菌孵育:将上述配制好的菌液100μl加入相应各孔,第12孔除外。轻轻混匀后将药敏板放入35℃培养箱孵育。
MIC判定:用肉眼观察法判定,菌株生长96h后,与生长对照孔比较,80%的生长抑制的浓度。MFC判定:在MIC浓度上下2个稀释度取须癣毛癣菌培养液20μl接种到SDA培养基中,35℃孵育培养,7d 后观察是否有菌生长,培养基上无菌落生长的为该菌的MFC,结果参见表2。
2、琼脂稀释法:
把PHMB溶液稀释为2.5%、1.25%、0.63%、0.32%、0.16%、0.08%的质量浓度,分别取0.5ml均匀涂至直径为7cm的SDA平皿上。待平皿晾干后,取上述制备好的菌悬液0.5ml均匀涂布于含不同浓度PHMB 的培养基上,以不含PHMB的培养基作为阳性对照(生长对照),同时设置加入透皮剂氮酮组进行对照。所有平皿放入35℃培养箱孵育, 96h观察结果,结果参见图2。
结果:表2为使用微量液基稀释法检测PHMB粉剂对须癣毛癣菌的抑制、杀灭能力结果,结果显示PHMB对须癣毛癣菌的抑菌范围为 2-4μg/ml,杀菌浓度为4μg/ml。图2为PHMB溶液对须癣毛癣菌抑制、杀灭能力检测结果,可见在溶液浓度为1.25%时已无肉眼可见菌落长出。此外,加入透皮剂氮酮后,发现杀菌效果并无改变。
表2 PHMB对须癣毛癣菌MIC以及MFC结果
实施例3-PHMB对犬小孢子菌的抑制、杀灭
本实施例提供一种聚六亚甲基双胍在抑制和杀灭犬小孢子菌中的应用。具体的,将PHMB溶液与犬小孢子菌接触,从而实现对犬小孢子菌的抑制和杀灭。本实施例进一步对抑制和杀灭效果进行试验。
所有操作都在超净台中进行,各株犬小孢子菌试验方法相同:
将犬小孢子菌菌株接种在SDA培养基于28℃培养7天,活化2次。取2ml无菌生理盐水加入试管,用加样枪将培养基上的菌丝和孢子刮下,混匀于2ml无菌生理盐水中。将有孢子和菌丝片段的菌悬液吸到研磨器进行研磨,研磨好的菌液再用尖端开口并带纱布的EP管渗漏至无菌玻璃管,在无菌玻璃管中取10μl菌悬液于血细胞计数板计数(终浓度1~5×104CFU/ml)。
应用及效果检测:
1、微量液基稀释法:
首先配制药敏板,将PHMB粉剂先使用灭菌水配制为浓度 1600μg/ml的储存液,再使用RPMI-1640培养基倍比稀释成64μg/ml、 32μg/ml、16μg/ml、8μg/ml、4μg/ml、2μg/ml、1μg/ml、0.5μg/ml、 0.25μg/ml、0.125μg/ml这10个浓度梯度,将这10个浓度梯度加入无菌 96孔板的第1~10孔中,每孔100μl,第11孔作为生长对照不加药液,待下一步直接加菌液100μl。第12孔作为阴性对照加入100μl RPMI-1640培养基。
加菌孵育:将上述配制好的菌液100μl加入相应各孔,第12孔除外。轻轻混匀后将药敏板放入35℃培养箱孵育。
MIC判定:用肉眼观察法判定,菌株生长96h后(以生长对照的生长情况为准,可延长观察时间至120h),与生长对照孔比较,80%的生长抑制的浓度。MFC判定:在MIC浓度上下2个稀释度取犬小孢子菌培养液20μl接种到SDA培养基中,35℃孵育培养,7d后观察是否有菌生长,培养基上无菌落生长的为该菌的MFC,结果参见表3。
2、琼脂稀释法:
把PHMB溶液稀释为2.5%、1.25%、0.63%、0.32%、0.16%、0.08%的质量浓度,分别取0.5ml均匀涂至直径为7cm的SDA平皿上。待平皿晾干后,取上述制备好的菌悬液0.5ml均匀涂布于含不同浓度PHMB 的培养基上,以不含PHMB的培养基作为阳性对照(生长对照),同时设置加入透皮剂氮酮组进行对照。所有平皿放入35℃培养箱孵育, 96h观察结果(以生长对照的生长情况为准,可延长观察时间至120h),结果参见图3。
结果:表3为使用微量液基稀释法检测PHMB粉剂对犬小孢子菌的抑制、杀灭能力结果,结果显示PHMB对犬小孢子菌的抑菌范围为 2-4μg/ml,杀菌范围为2-4μg/ml。图3为PHMB溶液对犬小孢子菌抑制、杀灭能力检测结果,可见在溶液浓度为1.25%时已无肉眼可见菌落长出。此外,加入透皮剂氮酮后,发现杀菌效果并无改变。
表3 PHMB对犬小孢子菌MIC以及MFC结果
实施例4-PHMB对白念珠菌的抑制、杀灭
本实施例提供一种聚六亚甲基双胍在抑制和杀灭白念珠菌中的应用。具体的,将PHMB溶液与白念珠菌接触,从而实现对白念珠菌的抑制和杀灭。本实施例进一步对抑制和杀灭效果进行试验。
所有操作都在超净台中进行,各株白念珠菌试验方法相同:
将白念珠菌接种在SDA培养基于30℃培养48h,活化2次。取2ml 无菌生理盐水加入试管,用加样枪将培养基上的菌落刮下,混匀于2ml 无菌生理盐水中后吸入无菌玻璃管中,先通过比浊仪将浓度调整为 0.5麦氏,后取10μl菌悬液于血细胞计数板计数,调整终浓度为1~ 5×103CFU/ml。
应用及效果检测:
1、微量液基稀释法:
首先配制药敏板,将PHMB粉剂先使用灭菌水配制为浓度 1600μg/ml的储存液,再使用RPMI-1640培养基倍比稀释成40μg/ml、20μg/ml、10μg/ml、5μg/ml、2.5μg/ml、1.25μg/ml、0.6μg/ml、0.3 μg/ml、0.15μg/ml、0.08μg/ml这10个浓度梯度,将这10个浓度梯度加入无菌96孔板的第1~10孔中,每孔100μl,第11孔作为生长对照不加药液,待下一步直接加菌液100μl。第12孔作为阴性对照加入100μl RPMI-1640培养基。
加菌孵育:将上述配制好的菌液100μl加入相应各孔,第12孔除外。轻轻混匀后将药敏板放入35℃培养箱孵育。
MIC判定:用肉眼观察法判定,菌株生长48h后(以生长对照的生长情况为准),与生长对照孔比较,80%的生长抑制的浓度。MFC 判定:在MIC浓度上下2个稀释度取白念珠菌培养液20μl接种到SDA 培养基中,35℃孵育培养,7d后观察是否有菌生长,培养基上无菌落生长的为该菌的MFC,结果参见表4。
2、琼脂稀释法:
把PHMB溶液稀释为2.5%、1.25%、0.63%、0.32%、0.16%、0.08%的质量浓度,分别取0.5ml均匀涂至直径为7cm的SDA平皿上。待平皿晾干后,取上述制备好的菌悬液0.5ml均匀涂布于含不同浓度PHMB 的培养基上,以不含PHMB的培养基作为阳性对照(生长对照),同时设置加入透皮剂氮酮组进行对照。所有平皿放入35℃培养箱孵育,72h观察结果,结果参见图4。
结果:表4为使用微量液基稀释法检测PHMB粉剂对白念珠菌的抑制、杀灭能力结果,结果显示PHMB对白念珠菌的抑菌范围为 0.3-5μg/ml,杀菌范围为5-10μg/ml。图4为琼脂稀释法检测PHMB溶液对白念珠菌抑制、杀灭能力检测结果,可见在溶液浓度为0.32%时已无肉眼可见菌落长出。此外,加入透皮剂氮酮后,发现杀菌效果并无改变。
表4 PHMB对白念珠菌MIC以及MFC结果
综上所述,实施例1-4的试验观察结果统计如下:
微量液基稀释法结果:
药敏结果(见表5)显示红色毛癣菌的MIC抑菌范围为1.0~ 4.0μg/ml,MFC杀菌范围为2.0~8.0μg/ml;须癣毛癣菌的MIC抑菌范围为2.0~4.0μg/ml,MFC杀菌浓度为4.0μg/ml,犬小孢子菌的MIC抑菌范围为2.0~4.0μg/ml,MFC杀菌范围为2.0~4.0μg/ml,白念珠菌的 MIC抑菌范围为0.3~5μg/ml,MFC杀菌范围为5.0~10.0μg/ml。
表5 PHMB对常见真菌的MIC和MFC范围
注:MIC为最低抑菌浓度;MFC为最低杀菌浓度。
琼脂稀释法结果:
相同菌的不同菌株结果相同,具体结果见表6,在PHMB浓度 1.25%时,红色毛癣菌、犬小孢子菌和须癣毛癣菌已无法生长;在 PHMB浓度0.32%时,白念珠菌已无菌落生长。加入透皮剂氮酮后,发现杀菌效果并无改变。
表6 PHMB对常见真菌的杀菌结果
备注:-,阴性,表示菌落未生长;+,阳性,表示菌落生长。
本发明采用两种国际认可的标准体外药敏检测方法,检测了 PHMB对临床浅表真菌病最常见致病菌的体外药物敏感性,结果表明 PHMB对临床常见的皮肤癣菌及白念珠菌具有较好的抑制和杀菌作用,且敏感性高。结果标准、可信,为该品日后推广使用提供了重要实验基础。
虽然,上文中已经用一般性说明及具体实施方案对本发明作了详尽的描述,但在本发明基础上,可以对之作一些修改或改进,这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此,在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进,均属于本发明要求保护的范围。
Claims (5)
1.聚六亚甲基双胍在制备抑制和/或杀灭犬小孢子菌(Microsporum canis)的药物中的应用。
2.根据权利要求1所述的应用,其特征在于,当将所述聚六亚甲基双胍应用于犬小孢子菌(Microsporum canis)的抑制或杀灭时,所述聚六亚甲基双胍的浓度为2-4μg/ml。
3.根据权利要求2所述的应用,其特征在于,所述药物为涂抹剂、乳剂、膏剂、气雾剂或膜剂。
4.聚六亚甲基双胍在制备抗真菌医用材料中的应用,其特征在于,所述真菌为犬小孢子菌(Microsporum canis)。
5.根据权利要求4所述的应用,其特征在于,所述抗真菌医用材料的制备方法为:将包含所述聚六亚甲基双胍的药物涂覆于所述抗真菌医用材料上。
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