CN110891596A - 抗体可变结构域及抗体构建体 - Google Patents

Abstract

本发明提供了用于治疗癌症的组合物和方法。所述组合物包括例如抗体可变结构域或抗体构建体，可用于靶向和杀死癌细胞。由于其区别地结合癌细胞与非癌细胞的能力，本发明提供的组合物可用于例如治疗和诊断目的。

Description

抗体可变结构域及抗体构建体

相关申请的交叉参考

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发明背景

新的癌症免疫疗法由于其前景广阔的潜力而迅速进入临床。单克隆抗体和基于抗体的免疫治疗因其高特异性和业已证明的抗肿瘤作用而成为特别有吸引力的平台。目前正在开发的免疫治疗剂已被设计针对一系列靶；然而，这些肿瘤相关靶通常由癌细胞和健康细胞二者表达。因此，这些免疫治疗剂在消除肿瘤的过程中不可避免地消耗了健康细胞。因此，本领域中需要免疫治疗剂，其可以区分并选择性地杀死癌细胞而不会损害健康细胞。本发明提供了抗体构建体及其使用方法，以解决本领域中的这些和其它问题。

发明概述

一方面，本发明提供了一种抗体可变结构域，其包括SEQ ID NO:1所示的CDR1、SEQID NO:2所示的CDR2和SEQ ID NO:3所示的CDR3。

另一方面，本发明提供了一种包括第一抗体肽的抗体构建体，所述第一抗体肽包括：(i)第一抗体可变结构域，其包括SEQ ID NO:1所示的CDR1、SEQ ID NO:2所示的CDR2和SEQ ID NO:3所示的CDR3；及(ii)与第一抗体可变结构域结合的第一抗体结构域。

一方面，本发明提供了编码本发明提供的抗体可变结构域(包括其实施方案)的分离的核酸。

另一方面，本发明提供了编码本发明提供的第一抗体肽(包括其实施方案)的分离的核酸。

另一方面，本发明提供了编码本发明提供的第二抗体肽(包括其实施方案)的分离的核酸。

另一方面，本发明提供了编码本发明提供的第一轻链抗体肽(包括其实施方案)的分离的核酸。

另一方面，本发明提供了编码本发明提供的第二轻链抗体肽(包括其实施方案)的分离的核酸。

一方面，本发明提供了一种药物组合物，其包括治疗有效量的本发明提供的抗体可变结构域(包括其实施方案)以及药学上可接受的赋形剂。

另一方面，本发明提供了药物组合物，其包括治疗有效量的本发明提供的抗体构建体(包括其实施方案)以及药学上可接受的赋形剂。

一方面，本发明提供了一种在有需要的对象中治疗癌症的方法，所述方法包括给对象施用治疗有效量的本发明提供的抗体可变结构域(包括其实施方案)，从而治疗该对象的癌症。

另一方面，本发明提供了一种在有需要的对象中治疗癌症的方法，所述方法包括给对象施用治疗有效量的本发明提供的抗体构建体(包括其实施方案)，从而治疗该对象的癌症。

附图简述

图1A-1C。套细胞淋巴瘤特异性抗体噬菌体克隆的鉴别和鉴定。过滤人抗体噬菌体文库以排除结合正常人B细胞的噬菌体。然后将过滤的文库用于筛选人套细胞淋巴瘤系Jeko-1。对与JeKo-1细胞结合的噬菌体进行洗脱、滴定和扩增，以进行随后轮的生物淘选。对于四轮生物淘选循环的每一次，生物淘选富集结果以噬菌体“输出/输入比”(×10^-8)(图1A)或者“噬菌体数目/10⁶个细胞”(图1B)表示。鉴别显著富集的含有轻链可变结合结构域(VL)的噬菌体克隆(4-4)。图1C：基于如下不同淋巴瘤细胞系染色示出4-4噬菌体结合特异性的FACS直方图：套细胞淋巴瘤(MCL)细胞系-JeKo-1、Mino、MAVER-1和NCEB-1；非MCL细胞系-HBL-1(弥漫型大b细胞淋巴瘤，DLBCL)、RL(滤泡型淋巴瘤，FL)、Raji(Burkitt淋巴瘤，BL)和BJAB(BL)。通过FITC缀合的抗M13噬菌体抗体检测连续滴定的4-4噬菌体克隆，未染色的细胞用作阴性对照。

图2A-2B。产生并测试抗体变体(抗体构建体)。图2A：在整个研究过程中工程化和实施的四个重组4-4人抗体变体(抗体构建体)的示意图。单特异性VL代表已鉴别的4-4VL序列。重链和轻链恒定Fc区(CH2和CH3)分别基于鼠和人IgG1。二价VL鼠Fc融合抗体构建体称为“LCmFc-Ab”。二价VL人Fc融合抗体构建体称为“LC-Ab”。四价的接头连接的双VL人Fc融合抗体构建体称为“(LC)₂-Ab。四价的VL取代的Fv人IgG抗体构建体称为“LCFv-Ab”。图2B：蛋白A亲和纯化的重组4-4抗体变体(抗体构建体)的SDS凝胶图像。

图3A-3C。通过4-4人抗体构建体鉴定MCL特异性结合。FACS直方图示出4-4LCmFc-Ab在不同细胞上及在不同浓度下的结合，这是通过APC缀合的抗小鼠IgG二抗检测的。未染色的细胞和二抗单独用作阴性对照。图3A：在JeKo-1细胞上连续滴定的LCmFc-Ab。图3B：在MCL系(JeKo-1，Mino，MAVER-1，NCEB-1和REC-1)以及非MCL系[HBL-1(DLBCL)，RL(FL)，Raji(BL)，BJAB(BL)和Jurkat(T细胞淋巴瘤)]上200ng LCmFc-Ab/10⁶细胞。图3C：在JeKo-1(MCL)和PBMC纯化的正常人B和T淋巴细胞以及门控髓样细胞上10ng LCmFc-Ab/10⁶细胞。

图4A-4B。通过点突变证实4-4VL结合特异性。图4A：互补决定区(CDR)3的4-4VL氨基酸序列。对亲本4-4VL(如上述)的CDR3上Kabat编号的轻链氨基酸残基91和92进行两个点突变(W91A和D92S)，成为4-4VL突变体(如下)。图4B：示出4-4LCmFc-Ab与4-4突变LCmFc-Ab相比在JeKo-1细胞上的结合的FACS直方图。使用0.1μg抗体/10⁶个细胞，并通过FITC缀合的抗小鼠Fc二抗检测结合。未染色的细胞和二抗单独用作阴性对照。

图5。4-4LC-Ab构建体特异性结合MCL。FACS直方图示出Alexa Fluor 647缀合的4-4LC-Ab在MCL、非MCLB细胞NHL和白血病细胞上的结合。非MCL细胞系包括：RL，滤泡型淋巴瘤，Raji和Ramos、Burkitt淋巴瘤；SU-DHL-6和CLI-LY3，弥漫型大B细胞淋巴瘤；MEC1、慢性淋巴细胞性白血病，RS4；11，急性淋巴细胞性白血病。未染色的细胞和Alexa Fluor 647缀合的同种型抗体作为对照。

图6A-6C。4-4LC-Ab构建体显示出特异性针对MCL的细胞毒性。铬51(⁵¹Cr)释放测定的结果。特异性裂解测量了靶细胞(T)被效应子(E)NK细胞在E:T比率20:1及添加或不添加4-4LC-Ab条件下的裂解。百分比反映了去污剂的完全细胞裂解作用，及针对自发释放的⁵¹Cr进行校正。对照包括仅NK细胞和仅4-4LC-Ab。套细胞淋巴瘤(MCL)系JeKo-1和Mino与非MCL系RL和Raji相比的特异性裂解(图6A)；(图6B)四个MCL初次患者样品(primary patientsample)。图6C：使用图2A和2B中描述的人抗体变体在不同浓度的特异性裂解。

图7A-7B。4-4LC-Ab构建体显示出对正常人B细胞无体外细胞毒性。图7A：铬51(⁵¹Cr)释放测定的结果。特异性裂解测量靶细胞(T)被效应子(E)NK细胞以E:T比率20:1的裂解。通过添加4-4LC Ab构建体确定正常B细胞的特异性裂解。Rituximab、单独的抗体或单独的NK细胞用作对照。图7B：将人PBMC与系列稀释的4-4LC-Ab构建体温育24小时。利妥昔单抗和无关抗体用作对照。用抗CD20-APC染色的PBMC中人B细胞的FACS图。

图8A-8B。4-4LC-Ab构建体在人源化小鼠中未引起B细胞耗竭。图8A：通过IV注射施用了200μg/小鼠单剂抗体治疗(4-4LC-Ab)的人源化小鼠的抗-CD20-APC门控的人B细胞的FACS图。在抗体治疗的第-1、1和3天通过眼球后抽血采集血液。FACS图代表每个治疗组n＝4只小鼠。对照组施用利妥昔单抗或无关对照抗体。图8B：示出相对于对照Ab组，每个治疗组中CD45门控的人白细胞中CD20+B细胞的百分比的平均值和标准差的线图。

图9A-9J。MCL特异性抗体构建体的生物学功能的体内鉴定。图9A：在MCL模型中4-4抗体构建体治疗的治疗方案。NSG小鼠用最小致死剂量的肿瘤细胞经IV攻击并随机分组，每组n＝5。经IV注射给每只小鼠施用具有10×10⁶NK细胞和5×10⁴IU IL2的600μL抗体。对照小鼠仅单独施用PBS或NK细胞。在第3、8、13和18天进行治疗。将肿瘤细胞进行工程化以表达红色荧光素酶，从而可以使用生物发光成像监测肿瘤生长。图9B-9D：抗体构建体处理后，MCL肿瘤异种移植小鼠中肿瘤的生物发光图像。图9E-9J：追踪90天的用4-4抗体构建体处理的肿瘤异种移植小鼠的无肿瘤(图9E，9G，9I)和总体(图9F，9H，9J)存活曲线。**P<0.001。图9B和9E：实验组在Z-138依鲁替尼(ibrutinib)抗性MCL模型中比较了每种治疗在300μg和600μg之间的4-4LC-Ab剂量效果。示出在肿瘤攻击后第13、17、20、28、41和90天拍摄的图像。图9C和9F：实验组在Z-138依鲁替尼抗性MCL模型中比较了300μg的4-4LC-Ab与4-4LCFv-Ab构建体的抗体治疗。图中示出肿瘤攻击后第14、24、34、50、70和80天的图像。图9D和9G：实验组在JeKo-1-CD20-KO利妥昔单抗抗性MCL模型中比较了300μg的4-4LC-Ab构建体与4-4LCFv-Ab构建体的抗体治疗。示出肿瘤攻击后第15、26、38、50、70和90天的图像。加入另外的利妥昔单抗阴性对照。

图10。编码图2A所示抗体构建体的表达载体。

发明详述

尽管本文示出和描述了本发明的各个实施例和各方面，但是对于本领域技术人员而言显而易见的是这些实施例和方面仅以示例的方式提供。本领域技术人员在不偏离本发明的情况下可以对本发明进行多种变化、改变和替代。应当理解，本文描述的本发明实施方案的各种替代方案可以用于实施本发明。

本文使用的章节标题仅用于组织目的，而不应解释为限制所描述的主题。本申请中引用的所有文件或文件的一部分，包括但不限于专利、专利申请、文章、书籍、手册和论著，以其全部内容出于任何目的明确并入本文参考。

本文使用的缩写具有其在化学和生物学领域的常规含义。本文阐述的化学结构和化学式是根据化学领域已知的化学价的标准规则构建的。

除非另有定义，否则本文使用的技术和科学术语具有与本领域普通技术人员通常理解的相同含义。见例如Singleton et al.,DICTIONARY OF MICROBIOLOGY ANDMOLECULARBIOLOGY 2nd ed.,J.Wiley&Sons(New York,NY 1994)；Sambrook et al.,MOLECULARCLONING,A LABORATORY MANUAL,Cold Springs Harbor Press(ColdSprings Harbor,NY1989)。与本文描述的那些方法、装置和材料相似或等价的任何方法、装置和材料都可以用于实施本发明。提供以下定义以便于理解本文中经常使用的某些术语，并不意味着限制本发明的范围。

当取代基由其从左至右书写的常规化学式指定时，其同样涵盖由从右至左写书写所述结构所得的化学相同的取代基，例如-CH₂O-等价于-OCH₂-。

除非另有说明，否则术语“烷基”自身或作为另一取代基的一部分，是指可以完全饱和的、单不饱和或多不饱和的直链(即无分支)或支链的非环状碳链(或碳)或其组合，及可以包括具有指定碳原子数(即C₁-C₁₀表示1-10个碳)的二价和多价基团。饱和烃基的实例包括但不限于：甲基，乙基，正丙基，异丙基，正丁基，叔丁基，异丁基，仲丁基，(环己基)甲基，例如正戊基、正己基、正庚基、正辛基的同系物和异构体等。不饱和烷基是具有一或多个双键或三键的烷基。不饱和烷基的实例包括但不限于乙烯基，2-丙烯基，巴豆基，2-异戊烯基，2-(丁二烯基)，2,4-戊二烯基，3-(1,4-戊二烯基)，乙炔基，1-和3-丙炔基，3-丁炔基以及更高级的同系物和异构体。烷氧基是经氧接头(-O-)附着于分子其余部分的烷基。烷基部分可以是烯基部分。烷基部分可以是炔基部分。烷基部分可以是完全饱和的。

除非另有说明，术语“亚烷基”自身身或作为另一个取代基的一部分是指衍生自烷基的二价基团，例如但不限于-CH₂CH₂CH₂CH₂-。通常，烷基(或亚烷基)具有1-24个碳原子，在本发明中优选具有10个或更少碳原子的那些基团。“低级烷基”或“低级亚烷基”是通常具有8个或更少碳原子的较短链烷基或亚烷基。除非另有说明，术语“亚烯基”自身或作为另一取代基的一部分是指衍生自烯烃的二价基团。

除非另外说明，术语“杂烷基”自身或与另一术语组合是指稳定的非环状直链或支链或其组合，包括至少一个碳原子和至少一个杂原子(例如O、N、P、Si或S)，及其中氮和硫原子可任选被氧化，氮杂原子可任选被季铵化。杂原子O、N、P、S和Si可位于杂烷基的任何内部位置或者位于烷基附着分子的其余部分的位置。例子包括但不限于：-CH₂-CH₂-O-CH₃，-CH₂-CH₂-NH-CH₃，-CH₂-CH₂-N(CH₃)-CH₃，-CH₂-S-CH₂-CH₃，-CH₂-CH₂，-S(O)-CH₃，-CH₂-CH₂-S(O)₂-CH₃，-CH＝CH-O-CH₃，-Si(CH₃)₃，-CH₂-CH＝N-OCH₃，-CH＝CH-N(CH₃)-CH₃，-O-CH₃，-O-CH₂-CH₃和-CN。最多两个或三个杂原子可以是连续的，例如-CH₂-NH-OCH₃和–CH₂-O-Si(CH₃)₃。杂烷基部分可包括一个杂原子(例如O、N、S、Si或P)。杂烷基部分可包括2个任选不同的杂原子(例如O、N、S、Si或P)。杂烷基部分可包括3个任选不同的杂原子(例如O、N、S、Si或P)。杂烷基部分可包括4个任选不同的杂原子(例如O、N、S、Si或P)。杂烷基部分可包括5个任选不同的杂原子(例如O、N、S、Si或P)。杂烷基部分可包括多达8个任选不同的杂原子(例如O、N、S、Si或P)。

相似地，除非另有说明，否则术语“杂亚烷基”自身或作为另一取代基的一部分，是指衍生自杂烷基的二价基团，例如但不限于-CH₂-CH₂-S-CH₂-CH₂-和-CH₂-S-CH₂-CH₂-NH-CH₂-。对于杂亚烷基，杂原子也可以占据任一链末端或两端(例如亚烷氧基，亚烷基二氧基，亚烷基氨基，亚烷基二氨基等)。更进一步，对于亚烷基和杂亚烷基连接基团，连接基团化学式的书写方向不提示该连接基团的方向。例如，化学式-C(O)₂R'-既表示-C(O)₂R'-也表示-R'C(O)₂-。如上所述，如本文所用，杂烷基基团包括通过杂原子附着于分子其余部分的那些基团，例如-C(O)R'、-C(O)NR'、-NR'R”、-OR'、-SR'和/或-SO₂R'。当列举“杂烷基”，随后列举特定的杂烷基基团，例如-NR'R”等时，应理解术语杂烷基和-NR'R”不是冗余的或互斥的。而是列举特定杂烷基以更清晰指示。因此，术语“杂烷基”在本文中不应解释为排除特定的杂烷基，例如-NR'R”等。

除非另有说明，否则术语“环烷基”和“杂环烷基”自身或与其它术语组合分别表示“烷基”和“杂烷基”的非芳族环状形式，其中构成一或多个环的碳不必需需要与氢键合，因为所有碳化合价均参与与非氢原子的键合。另外，对于杂环烷基而言，杂原子可以占据杂环附着于分子其余部分的位置。环烷基的实例包括但不限于环丙基，环丁基，环戊基，环己基，1-环己烯基，3-环己烯基，环庚基，3-羟基-环丁-3-烯基-1,2-二酮，1H-1,2,4-三唑基-5(4H)-酮、4H-1,2,4-三唑基等。杂环烷基的实例包括但不限于1-(1,2,5,6-四氢吡啶基)，1-哌啶基，2-哌啶基，3-哌啶基，4-吗啉基，3-吗啉基，四氢呋喃-2-基，四氢呋喃-3-基，四氢噻吩-2-基，四氢噻吩-3-基，1-哌嗪基，2-哌嗪基等。单独或作为另一取代基的一部分的“环亚烷基”和“杂环亚烷基”是指分别衍生自环烷基和杂环烷基的二价基团。杂环烷基部分可包括一个环杂原子(例如O、N、S、Si或P)。杂环烷基部分可包括2个任选不同的环杂原子(例如O、N、S、Si或P)。杂环烷基部分可包括3个任选不同的环杂原子(例如O、N、S、Si或P)。杂环烷基部分可包括4个任选不同的环杂原子(例如O、N、S、Si或P)。杂环烷基部分可包括5个任选不同的环杂原子(例如O、N、S、Si或P)。杂环烷基部分可包括多达8个任选不同的环杂原子(例如O、N、S、Si或P)。

除非另有说明，否则术语“卤代”或“卤素”自身或作为另一取代基的一部分是指氟、氯、溴或碘原子。另外，如术语“卤代烷基”是指包括单卤代烷基和多卤代烷基。例如，术语“卤代(C₁-C₄)烷基”包括但不限于氟甲基，二氟甲基，三氟甲基，2,2,2-三氟乙基，4-氯丁基，3-溴丙基等。

除非另有说明，否则术语“酰基”是指-C(O)R，其中R是取代或未取代的烷基、取代或未取代的环烷基、取代或未取代的杂烷基、取代或未取代的杂环烷基、取代或未取代的芳基、或者取代或未取代的杂芳基。

除非另有说明，否则术语“芳基”是指多不饱和的芳族烃取代基，其可以是单环或者稠合在一起(即稠环芳基)或共价连接的多环(优选1-3个环)。稠环芳基是指稠合在一起的多个环，其中至少一个稠合的环是芳基环。术语“杂芳基”是指含有至少一个杂原子如N、O或S的芳基(或环)，其中氮和硫原子任选地被氧化，且氮原子任选地被季铵化。因此，术语“杂芳基”包括稠环杂芳基基团(即多个稠合在一起的环，其中至少一个稠合的环是杂芳族环)。5,6-稠环杂亚芳基是指稠合在一起的两个环，其中一个环具有5元且另一个环具有6元，且其中至少一个环是杂芳基环。同样，6,6-稠环杂亚芳基是指稠合在一起的两个环，其中一个环具有6元且另一个环具有6元，且其中至少一个环是杂芳基环。6,5-稠环杂亚芳基是指稠合在一起的两个环，其中一个环具有6元且另一个环具有5元，且其中至少一个环是杂芳基环。杂芳基可通过碳或杂原子附着于分子的其余部分。芳基和杂芳基的非限制性实例包括苯基，1-萘基，2-萘基，4-联苯基，1-吡咯基，2-吡咯基，3-吡咯基，3-吡唑基，2-咪唑基，4-咪唑基，吡嗪基，2-唑基，4-唑基，2-苯基-4-唑基，5-唑基，3-异唑基，4-异唑基，5-异唑基，2-噻唑基，4-噻唑基，5-噻唑基，2-呋喃基，3-呋喃基，2-噻吩基，3-噻吩基，2-吡啶基，3-吡啶基，4-吡啶基，2-嘧啶基，4-嘧啶基，5-苯并噻唑基，嘌呤基，2-苯并咪唑基，5-吲哚基，1-异喹啉基，5-异喹啉基，2-喹噁啉基，5-喹噁啉基，3-喹啉基和6-喹啉基。上述每个芳基和杂芳基环系统的取代基选自下述可接受的取代基。单独或作为另一取代基的一部分的“亚芳基”和“杂亚芳基”分别是指衍生自芳基和杂芳基的二价基团。芳基和杂芳基的非限制性实例包括吡啶基，嘧啶基，苯硫基，噻吩基，呋喃基，吲哚基，苯并恶二唑基，苯并二氧杂环戊烯基(benzodioxolyl)，苯并二恶烷基，噻萘烷基，吡咯吡啶基，吲唑基，喹啉基，喹噁啉基，吡啶并吡啶基，喹唑酮基，苯并异噁唑基，咪唑并吡啶基，苯并呋喃基，苯并噻吩基，苯并苯硫基，苯基，萘基，联苯基，吡咯基，吡唑基，咪唑基，吡嗪基，噁唑基，异噁唑基，噻唑基，呋喃基噻吩基，吡啶基，嘧啶基，苯并噻唑基，嘌呤基，苯并咪唑基，异喹唑基，噻二唑基，噁二唑基，吡咯基，二唑基，三唑基，四唑基，苯并噻二唑基，异噻唑基，吡唑并嘧啶基，吡咯并嘧啶基，苯并三唑基，苯并噁唑基或喹啉基。上述实例可以是取代的或未取代的，及上述每个杂芳基实例的二价基团是杂亚芳基的非限制性实例。杂芳基部分可包括一个环杂原子(例如O，N或S)。杂芳基部分可包括2个任选不同的环杂原子(例如O，N或S)。杂芳基部分可包括3个任选不同的环杂原子(例如O，N或S)。杂芳基部分可包括4个任选不同的环杂原子(例如O，N或S)。杂芳基部分可包括5个任选不同的环杂原子(例如O，N或S)。芳基部分可具有一个环。芳基部分可具有2个任选不同的环。芳基部分可具有3个任选不同的环。芳基部分可具有4个任选不同的环。杂芳基部分可具有一个环。杂芳基部分可具有2个任选不同的环。杂芳基部分可具有3个任选不同的环。杂芳基部分可具有4个任选不同的环。杂芳基部分可具有5个任选不同的环。

稠环杂环烷基-芳基是与杂环烷基稠合的芳基。稠环杂环烷基-杂芳基是与杂环烷基稠合的杂芳基。稠环杂环烷基-环烷基是与环烷基稠合的杂环烷基。稠环杂环烷基-杂环烷基是与另一个杂环烷基稠合的杂环烷基。稠环杂环烷基-芳基、稠环杂环烷基-杂芳基、稠环杂环烷基-环烷基或者稠环杂环烷基-杂环烷基可各自独立地是未取代的或者由本文所述的一或多个取代基取代。

如本文所用，术语“-氧-”是指与碳原子双键合的氧。

如本文所用，术语“烷基磺酰基”是指具有式-S(O₂)-R'的部分，其中R'是如上定义的取代或未取代的烷基。R'可具有指定数目的碳(例如C₁-C₄烷基磺酰基)。

上述每个术语(例如“烷基”，“杂烷基”，“环烷基”，“杂环烷基”，“芳基”和“杂芳基”)均包括所示基团的取代和未取代形式。下文提供了每种类型基团的优选取代基。

烷基和杂烷基的取代基(包括通常称为亚烷基，烯基，杂亚烷基，杂烯基，炔基，环烷基，杂环烷基，环烯基和杂环烯基的那些基团)可以是选自但不限于如下的多种基团的一或多个：-OR'，＝O，＝NR'，＝N-OR'，-NR'R”，-SR'，-卤素，-SiR'R”R”'，-OC(O)R'，-C(O)R'，-CO₂R'，-CONR'R”，-OC(O)NR'R”，-NR”C(O)R'，-NR'-C(O)NR”R”'，-NR”C(O)₂R'，-NR-C(NR'R”)＝NR”'，-S(O)R',-S(O)₂R'，-S(O)₂N(R)('R”-NRSO₂R')，-CN及-NO₂，数目从0至(2m'+1)，其中m'是这种基团中碳原子的总数。R'、R”、R”'和R””各自优选独立地是指氢、取代或未取代的杂烷基、取代或未取代的环烷基、取代或未取代的杂环烷基、取代或未取代的芳基(例如由1-3卤素取代的芳基)、取代或未取代的烷基、烷氧基或硫代烷氧基、或者芳基烷基。例如当本发明的化合物包括一个以上的R基团时，当存在一个以上的这些基团时，每个R基团独立地被选择为R'、R”、R”'和R””基团。当R'和R”附着于相同的氮原子时，其可以与氮原子组合形成4-、5-、6-或7-元环。例如，-NR'R”包括但不限于1-吡咯烷基和4-吗啉基。从上述对取代基的讨论中，本领域技术人员将理解术语“烷基”是指包括与除了氢基团以外的基团结合的碳原子的基团，如卤代烷基(例如-CF₃和-CH₂CF₃)和酰基(例如-C(O)CH₃，-C(O)CF₃，-C(O)CH₂OCH₃等)。

与针对烷基所述的取代基相似，芳基和杂芳基的取代基是不同的，选自例如：-OR'，-NR'R”，-SR'，-卤素，-SiR'R”R”'，-OC(O)R'，-C(O)R'，-CO₂R'，-CONR'R”，-OC(O)NR'R”，-NR”C(O)R'，-NR'-C(O)NR”R”'，NR”C(O)₂R'，NRC(NR'R”)＝NR”'，S(O)R'，-S(O)₂R'，-S(O)₂N(R')(R”,-NRSO₂R')，-CN，-NO₂，-R'，-N₃，-CH(Ph)₂，氟(C₁-C₄)烷氧基及氟(C₁-C₄)烷基，数目为零至芳族环系统上的开放化合价总数；其中R'、R”、R”'和R””优选独立地选自氢、取代或未取代的烷基、取代或未取代的杂烷基、取代或未取代的环烷基、取代或未取代的杂环烷基、取代或未取代的芳基以及取代或未取代的杂芳基。当本发明的化合物包括一个以上的R基团时，当存在一个以上的这些基团时，每个R基团独立地被选择为R'、R”、R”'和R””。

当一个部分由R取代基取代时，该基团可被称为“R-取代的”。当一个部分是R-取代的时，该部分被至少一个R取代基取代，且每个R取代基任选是不同的。例如，在本文所述部分是R^1A取代或未取代的烷基的情况下，多个R^1A取代基可以附着于烷基部分，其中每个R^1A取代基任选是不同的。在R-取代的部分被多个R取代基取代的情况下，本文所述每个R-取代基可以使用如R'、R”等主符号(prime symbol)(')来区分。例如，在一个部分是R^3A取代或未取代的烷基的情况中，及该部分被多个R^3A取代基取代，所述多个R^3A取代基可以区分为是R^3A'、R^3A”、R^3A”'等。在一些实施方案中，R取代基数是3。

两或多个取代基可以任选地结合形成芳基、杂芳基、环烷基或杂环烷基。尽管不是必须的，但是通常发现这种所谓的成环取代基附着于环状基础结构。在一个实施方案中，成环取代基附着于所述基础结构的相邻成员。例如，附着于环状基础结构的相邻成员的两个成环取代基产生稠环结构。在另一个实施方案中，成环取代基附着于基础结构的单个成员。例如，附着于环状基础结构的单个成员的两个成环取代基产生螺环结构。在另一个实施方案中，成环取代基附着于基础结构的不相邻成员。

芳基或杂芳基环的相邻原子上的两个取代基可任选形成如式-T-C(O)-(CRR')_q-U-所示的环，其中T和U独立地是-NR-、-O-、-CRR'，或单键，及q是0-3的整数。或者，芳基或杂芳基环的相邻原子上的两个取代基可任选由式-A-(CH₂)_r-B-所示取代基置换，其中A和B独立地为-CRR'-、-O-、-NR-、-S-、-S(O)-、-S(O)₂-、-S(O)₂NR'-，或者单键，及r为1-4的整数。如此形成的新环的单键之一可任选地由双键置换。或者，芳基或杂芳基环的相邻原子上的两个取代基可以任选地用式-(CRR')_s-X'-(C”R”R”')_d-所示取代基置换，其中变量s和d独立地是从0-3的整数，及X'是-O-、-NR'-、-S-、-S(O)-、-S(O)₂-或者-S(O)₂NR'-。取代基R、R'、R”和R”'优选独立地选自氢、取代或未取代的烷基、取代或未取代的杂烷基、取代或未取代的环烷基、取代或未取代的杂环烷基、取代或未取代的芳基及取代或未取代的杂芳基。

如本文所用，术语“杂原子”或“环杂原子”是指包括氧(O)、氮(N)、硫(S)、磷(P)和硅(Si)。

如本文所用，“取代基”是指选自如下部分的基团：

(A)氧，卤素，-CF₃，-CN，-OH，-NH₂，-COOH，-CONH₂，-NO₂，-SH，-SO₂Cl，-SO₃H，-SO₄H，-SO₂NH₂，-NHNH₂，-ONH₂，-NHC＝(O)NHNH₂，-NHC＝(O)NH₂，-NHSO₂H，-NHC＝(O)H，-NHC(O)-OH，-NHOH，-OCF₃，-OCHF₂,未取代的烷基，未取代的杂烷基，未取代的环烷基，未取代的杂环烷基，未取代的芳基，未取代的杂芳基，及

(B)由至少一个选自以下的取代基取代的烷基、杂烷基、环烷基、杂环烷基、芳基、杂芳基：

(i)氧，卤素，-CF₃，-CN，-OH，-NH₂，-COOH，-CONH₂，-NO₂，-SH，-SO₂Cl，-SO₃H，-SO₄H，-SO₂NH₂，-NHNH₂，-ONH₂，-NHC＝(O)NHNH₂，-NHC＝(O)NH₂，-NHSO₂H，-NHC＝(O)H，-NHC(O)-OH，-NHOH，-OCF₃，-OCHF₂，未取代的烷基，未取代的杂烷基，未取代的环烷基，未取代的杂环烷基，未取代的芳基，未取代的杂芳基，及，

(ii)由至少一个选自以下的取代基取代的烷基、杂烷基、环烷基、杂环烷基、芳基、杂芳基：

(a)氧，卤素，-CF₃，-CN，-OH，-NH₂，-COOH，-CONH₂，-NO₂，-SH，-SO₂Cl，-SO₃H，-SO₄H，-SO₂NH₂，-NHNH₂，-ONH₂，-NHC＝(O)NHNH₂，-NHC＝(O)NH₂，-NHSO₂H，-NHC＝(O)H，-NHC(O)-OH，-NHOH，-OCF₃，-OCHF₂，未取代的烷基，未取代的杂烷基，未取代的环烷基，未取代的杂环烷基，未取代的芳基，未取代的杂芳基，及

(b)由至少一个选自以下的取代基取代的烷基、杂烷基、环烷基、杂环烷基、芳基、杂芳基：氧，卤素，-CF₃，-CN，-OH，-NH₂，-COOH，-CONH₂，-NO₂，-SH，-SO₂Cl，-SO₃H，-SO₄H，-SO₂NH₂，-NHNH₂，-ONH₂，-NHC＝(O)NHNH₂，-NHC＝(O)NH₂，-NHSO₂H，-NHC＝(O)H，-NHC(O)-OH，-NHOH，-OCF₃，-OCHF₂，未取代的烷基，未取代的杂烷基，未取代的环烷基，未取代的杂环烷基，未取代的芳基，未取代的杂芳基。

如本文所用，“化学接头”是共价接头、非共价接头、肽接头(包括肽部分的接头)、可裂解的肽接头、取代或未取代的亚烷基、取代或未取代的杂亚烷基、取代的或未取代的亚环烷基、取代或未取代的杂环亚烷基、取代或未取代的亚芳基或者取代或未取代的杂亚芳基或者其任何组合。因此，本文提供的化学接头可以包括多个化学部分，其中多个化学部分中的每一个在化学上是不同的。或者，所述化学接头可以是非共价接头。非共价接头的实例包括但不限于离子键、氢键、卤素键、van der Waals相互作用(例如偶极-偶极，偶极诱导的偶极，London分散)，环堆积(π效应)和疏水性相互作用。在实施方案中，化学接头是使用缀合化学形成的，包括但不限于亲核取代(例如胺和醇与酰基卤、活性酯的反应)，亲电子取代(例如烯胺反应)以及加入碳-碳和碳-杂原子多键(例如Michael反应，Diels-Alder加成)。

如本文所用，“大小受限的取代基”或“大小受限的取代基团”是指选自上述关于“取代基”的所有取代基的基团，其中每个取代或未取代的烷基是取代或未取代的C₁-C₂₀烷基，每个取代或未取代的杂烷基是取代或未取代的2-20元杂烷基，每个取代或未取代的环烷基是取代或未取代的C₃-C₈环烷基，每个取代或未取代的杂环烷基是取代或未取代的3-8元杂环烷基，每个取代或未取代的芳基是取代或未取代的C₆-C₁₀芳基，以及每个取代或未取代的杂芳基是取代或未取代的5-10元杂芳基。

如本文所用，“低级取代基”或“低级取代基团”是指选自上述关于“取代基”的所有取代基的基团，其中每个取代或未取代的烷基是取代或未取代的C₁-C₈烷基，每个取代或未取代的杂烷基是取代或未取代的2-8元杂烷基，每个取代或未取代的环烷基是取代或未取代的C₃-C₇环烷基，每个取代或未取代的杂环烷基是取代或未取代的3-7元杂环烷基，每个取代或未取代的芳基是取代或未取代的C₆-C₁₀芳基，以及每个取代或未取代的杂芳基是取代或未取代的5-9元杂芳基。

在一些实施方案中，本文化合物中描述的每个取代基被至少一个取代基取代。更具体地，在一些实施方案中，本文化合物中描述的每个取代的烷基、取代的杂烷基、取代的环烷基、取代的杂环烷基、取代的芳基、取代的杂芳基、取代的亚烷基、取代的杂亚烷基、取代的环亚烷基、取代的杂环亚烷基、取代的亚芳基和/或取代的杂亚芳基被至少一个取代基取代。在其它实施方案中，这些基团中的至少一个或所有被至少一个大小受限的取代基取代。在其它实施方案中，这些基团中的至少一个或所有被至少一个低级取代基取代。

在本文化合物的其它实施方案中，每个取代或未取代的烷基可以是取代或未取代的C₁-C₂烷基，每个取代或未取代的杂烷基是取代或未取代的2-20元杂烷基，每个取代或未取代的环烷基是取代或未取代的C₃-C₈环烷基，每个取代或未取代的杂环烷基是取代或未取代的3-8元杂环烷基，每个取代或未取代的芳基是取代或未取代的C₆-C₁₀芳基，和/或每个取代或未取代的杂芳基是取代或未取代的5-10元杂芳基。在本文化合物的一些实施方案中，每个取代或未取代的亚烷基是取代或未取代的C₁-C₂₀亚烷基，每个取代或未取代的杂亚烷基是取代或未取代的2-20元杂亚烷基，每个取代或未取代的环亚烷基是取代或未取代的C₃-C₈环亚烷基，每个取代或未取代的杂环亚烷基是取代或未取代的3-8元杂环亚烷基，每个取代或未取代的亚芳基是取代或未取代的C₆-C₁₀亚芳基，和/或每个取代或未取代的杂亚芳基是取代或未取代的5-10元杂亚芳基。

在一些实施方案中，每个取代或未取代的烷基是取代或未取代的C₁-C₈烷基，每个取代或未取代的杂烷基是取代或未取代的2-8元杂烷基，每个取代或未取代的环烷基是取代或未取代的C₃-C₇环烷基，每个取代或未取代的杂环烷基是取代或未取代的3-7元杂环烷基，每个取代或未取代的芳基是取代或未取代的C₆-C₁₀芳基，和/或每个取代或未取代的杂芳基是取代或未取代的5-9元杂芳基。在一些实施方案中，每个取代或未取代的亚烷基是取代或未取代的C₁-C₈亚烷基，每个取代或未取代的杂亚烷基是取代或未取代的2-8元杂亚烷基，每个取代或未取代的环亚烷基是取代或未取代的C₃-C₇环亚烷基，每个取代或未取代的杂环亚烷基是取代或未取代的3-7元杂环亚烷基，每个取代或未取代的亚芳基是取代或未取代的C₆-C₁₀亚芳基，和/或每个取代或未取代的杂亚芳基是取代或未取代的5-9元杂亚芳基。在一些实施方案中，所述化合物是在以下实施例章节、图或表中列出的化学物质。

如本文所用，术语“缀合物”是指原子或分子之间的关联(association)。所述关联可以是直接或间接的。例如，核酸和蛋白质之间的缀合物可以是直接的，例如通过共价键，或者是间接的，例如通过非共价键(例如静电相互作用(例如离子键，氢键，卤素键)，vander Waals相互作用(例如偶极-偶极，偶极诱导的偶极，London分散)，环堆积(π效应)，疏水相互作用等)。在实施方案中，使用缀合化学方法形成缀合物，包括但不限于亲核取代(例如胺和醇与酰基卤素、活性酯的反应)、亲电取代(例如烯胺反应)以及加入碳-碳和碳-杂原子多键(例如Michael反应，Diels-Alder加成)。这些和其它有用的反应在例如March,ADVANCED ORGANIC CHEMISTRY,3rd Ed.,John Wiley&Sons,New York,1985；Hermanson,BIOCONJUGATE TECHNIQUES,Academic Press,San Diego,1996；及Feeney et al.,MODIFICATION OF PROTEINS；Advances in Chemistry Series,Vol.198,AmericanChemical Society,Washington,D.C.,1982中论述。

例如，本文中用于缀合化学(包括本领域已知的“点击化学”)的有用的反应部分或官能团包括：

(a)羧基及其各种衍生物，包括但不限于N-羟基琥珀酰亚胺酯、N-羟基苯并三唑酯、酰基卤、酰基咪唑、硫酯、对硝基苯基酯、烷基、烯基、炔基和芳族酯；

(b)可以转化为酯、醚、醛等的羟基基团；

(c)卤代烷基，其中卤化物可随后被亲核基团例如胺、羧酸根阴离子、硫醇阴离子、碳负离子或烃氧化物离子取代，从而导致新基团共价附着于卤素原子的位置；

(d)能参与Diels-Alder反应的亲二烯基团，例如马来酰亚胺基团；

(e)醛或酮基团，由此可以通过形成羰基衍生物例如亚胺、腙、缩氨基脲或肟、或者通过如Grignard加成或烷基锂加成等机制而随后衍生化；

(f)磺酰卤基团，其随后与胺反应，例如形成磺酰胺；

(g)硫醇基团，其可以被转化为二硫化物，与酰基卤反应或者与金属如金键合；

(h)胺或巯基，其可以被例如酰化、烷基化或氧化；

(i)烯烃，其可以经历例如环加成、酰化、Michael加成等；

(j)环氧化物，其可以与例如胺和羟基化合物反应；

(k)可用于核酸合成的亚磷酰胺及其它标准官能团；

(l)金属氧化硅键合；

(m)金属与反应性磷基团(例如膦)键合以形成例如磷酸二酯键；及

(n)砜，例如乙烯基砜。

通过使用缀合(点击)化学方法连接小的模块单元以化学合成组合物是本领域熟知的并例如在H.C.Kolb,M.G.Finn and K.B.Sharpless((2001)."Click Chemistry:Diverse Chemical Function froma Few Good Reactions".Angewandte ChemieInternational Edition 40(11):2004–2021)；R.A.Evans((2007)."The Rise of Azide–Alkyne 1,3-Dipolar'Click'Cycloaddition and its Application to Polymer Scienceand Surface Modification".Australian Journal of Chemistry 60(6):384–395；W.C.Guida et al.Med.Res.Rev.p 31996；Spiteri,Christian and Moses,John E.((2010)."Copper-Catalyzed Azide–Alkyne Cycloaddition:Regioselective Synthesisof 1,4,5-Trisubstituted 1,2,3-Triazoles".Angewandte Chemie InternationalEdition 49(1):31–33)；Hoyle,Charles E.and Bowman,Christopher N.((2010)."Thiol–Ene Click Chemistry".Angewandte Chemie International Edition 49(9):1540–1573)；Blackman,Melissa L.and Royzen,Maksim and Fox,Joseph M.((2008)."Tetrazine Ligation:Fast Bioconjugation Based on Inverse-Electron-DemandDiels-Alder Reactivity".Journal of the American Chemical Society 130(41):13518–13519)；Devaraj,Neal K.and Weissleder,Ralph and Hilderbrand,Scott A.((2008)."Tetrazine Based Cycloadditions:Application to Pretargeted Live CellLabeling".Bioconjugate Chemistry 19(12):2297–2299)；

Henning；Neves,Andre；Stairs,Shaun；Brindle,Kevin；Leeper,Finian((2011)."Exploring isonitrile-based click chemistry for ligation with biomolecules".Organic&BiomolecularChemistry)中描述，所有这些文献均以其全部内容和目的并入本文作参考。

可以选择反应性官能团，由此其不参与或干扰本文所述蛋白质或核酸的化学稳定性。举例来说，核酸可以包括乙烯基砜或其它反应性部分(例如马来酰亚胺)。任选地，核酸可以包括具有式-S-S-R的反应性部分。R可以是例如保护基团。任选地，R是己醇。如本文所用，术语己醇包括具有式C₆H₁₃OH所示的化合物，包括1-己醇，2-己醇，3-己醇，2-甲基-1-戊醇，3-甲基-1-戊醇，4-甲基-1-戊醇，2-甲基-2-戊醇，3-甲基-2-戊醇，4-甲基-2-戊醇，2-甲基-3-戊醇，3-甲基-3-戊醇，2,2-二甲基-1-丁醇，2,3-二甲基-1-丁醇，3,3-二甲基-1-丁醇，2,3-二甲基-2-丁醇，3,3-二甲基-2-丁醇和2-乙基-1-丁醇。任选地，R是1-己醇。

如本文所用，术语“大约”是指包括指定值的数值范围，本领域技术人员认为该范围合理地类似于指定值。在实施方案中，术语“大约”是指在使用本领域通常可接受的量度的标准偏差内。在实施方案中，大约是指扩展到指定值的+/-10％的范围。在实施方案中，大约是指指定值。

“核酸”是指单链或双链形式的脱氧核糖核苷酸或核糖核苷酸及其聚合物，及其互补体。术语“多核苷酸”是指核苷酸的线性序列。术语“核苷酸”通常是指多核苷酸的单个单元，即单体。核苷酸可以是核糖核苷酸、脱氧核糖核苷酸或其修饰形式。本文涵盖的多核苷酸的实例包括单链和双链DNA、单链和双链RNA(包括siRNA)，以及具有单链和双链DNA和RNA混合物的杂合分子。如本文所用，核酸还指与天然存在的核酸具有相同的基本化学结构的核酸。这样的类似物具有修饰的糖和/或修饰的环取代基，但是保留了与天然存在的核酸相同的基本化学结构。核酸模拟物是指具有与核酸的一般化学结构不同的结构但以与天然存在的核酸相似的方式起作用的化合物。这种类似物的实例包括但不限于硫代磷酸酯，氨基磷酸酯，甲基膦酸酯，手性甲基膦酸酯，2-O-甲基核糖核苷酸和肽核酸(PNA)。

术语“基因”是指参与产生蛋白质的DNA节段；其包括编码区之前和之后的区域(前导序列和尾随序列)以及各个编码节段(外显子)之间的插入序列(内含子)。前导序列、尾随序列和内含子均包括在基因转录和翻译期间所需的调控元件。此外，“蛋白质基因产物”是从特定基因表达的蛋白质。

如本文所用，关于基因的词语“表达”或“表达的”是指该基因的转录和/或翻译产物。DNA分子在细胞中的表达水平可以基于细胞内存在的相应mRNA的量或者细胞产生的该DNA编码的蛋白质的量而确定。非编码核酸分子(例如siRNA)的表达水平可以通过本领域熟知的标准PCR或Northern印迹方法检测。见Sambrook et al.,1989 Molecular Cloning:ALaboratory Manual,18.1-18.88所述。

转染的基因的表达可以在细胞中瞬时或稳定地发生。在“瞬时表达”期间，转染的基因在细胞分裂期间未转移至子代细胞。由于其表达仅限于转染的细胞，因此该基因的表达会随时间而丢失。相反，当转染基因与另一个赋予转染细胞选择优势的基因共转染时，可以发生转染基因的稳定表达。这种选择优势可以是呈递给细胞的对于某种毒素的抗性。

术语“质粒”或“表达载体”是指编码基因和/或基因表达所需调控元件的核酸分子。来自质粒的基因表达可以顺式或反式发生。如果基因以顺式表达，则基因和调控元件由同一质粒编码。反式表达是指基因和调控元件由分别质粒编码的情况。

术语“氨基酸”是指天然存在的和合成的氨基酸，以及与天然存在的氨基酸以相似方式起作用的氨基酸类似物和氨基酸模拟物。天然存在的氨基酸是由遗传密码编码的氨基酸，以及后来被修饰的氨基酸，例如羟脯氨酸、γ-羧基谷氨酸和O-磷酸丝氨酸。氨基酸类似物是指与天然存在的氨基酸具有相同的基本化学结构的化合物，即与氢结合的α碳、羧基、氨基和R基团，例如高丝氨酸，正亮氨酸，甲硫氨酸亚砜，甲硫氨酸甲基锍。这种类似物具有修饰的R基团(例如正亮氨酸)或修饰的肽主链，但是保留与天然存在的氨基酸相同的基本化学结构。氨基酸模拟物是指具有与氨基酸的一般化学结构不同的结构但与天然存在的氨基酸以相似方式起作用的化学化合物。

在本文中，氨基酸可以用其通常已知的三字母符号或者由IUPAC-IUB生物化学命名委员会推荐的单字母符号指代。同样，核苷酸可以用其普遍接受的单字母代码指代。

氨基酸或核苷酸碱基的“位置”由一个数字表示，基于其相对于N末端(或5'末端)的位置而顺序鉴别参考序列中的每个氨基酸(或核苷酸碱基)。由于在确定最佳比对时可能会考虑缺失、插入、截短、融合等，因此通常通过从N端简单计数确定的测试序列中氨基酸残基数字非必须与参考序列中其对应位置的数字相同。例如，在变体相对于比对的参考序列具有缺失的情况下，变体中将不存在相应于参考序列中缺失位点的位置的氨基酸。在比对的参考序列中有插入的情况下，该插入不相应于参考序列中编号的氨基酸位置。在截短或融合的情况下，参考序列或比对序列中可能存在不相应于相应序列中任何氨基酸的一段氨基酸序列。

当在给定氨基酸或多核苷酸序列编号的语境中使用时，术语“参考……编号”或“相应于”是指当将给定氨基酸或多核苷酸序列与参考序列进行比较时，指定的参考序列的残基的编号。当蛋白质中一个氨基酸残基占据在蛋白质中与给定残基占据相同的基本结构位置时，其“相应于”所述给定残基。本领域技术人员将立即识别具有不同编号系统的其它蛋白质中相应于蛋白质(例如本文提供的抗体构建体或抗原结合结构域)中特定位置的残基的身份和位置。例如，通过与蛋白质(例如本文提供的抗体构建体或抗原结合结构域)进行简单的序列比对，在与所述蛋白质比对的其它蛋白质序列中鉴别出相应于所述蛋白质特定位置的残基的身份和位置。例如，当选择的残基占据与Kabat 40位的轻链苏氨酸相同的基本空间或其它结构关系时，选择的抗体构建体(或抗原结合结构域)中选择的残基相应于Kabat 40位的轻链苏氨酸。在一些实施方案中，在选择的蛋白质与抗体(或抗原结合结构域)的轻链进行最大同源性比对的情况下，与苏氨酸40比对的选择的蛋白质中的位置被称作相应于苏氨酸40。代替一级序列比对，也可以使用三维结构比对，例如其中将选择的蛋白质的结构与在Kabat 40位的轻链苏氨酸进行最大对应性比对，并比较整体结构。在这种情况下，在结构模型中占据与苏氨酸40相同的基本位置的氨基酸被认为对应于苏氨酸40残基。

“保守修饰的变体”适用于氨基酸和核酸序列。关于特定核酸序列，保守修饰的变体是指编码相同或基本相同氨基酸序列的那些核酸，或其中核酸不编码基本相同的氨基酸序列的那些核酸。由于遗传密码的简并性，大量功能相同的核酸序列编码任何给定的氨基酸残基。例如，密码子GCA、GCC，GCG和GCU均编码氨基酸丙氨酸。因此，在丙氨酸由密码子指定的每个位置，可以将密码子改变为所述任何相应密码子而不改变编码的多肽。这种核酸变异是“沉默变异”，其是保守修饰变异的一种。本文中编码多肽的每个核酸序列也描述了核酸的每个可能的沉默变异。本领域技术人员将认识到，可以修饰核酸中的每个密码子(除了AUG之外，其通常是甲硫氨酸的唯一密码子，以及除了TGG之外，其通常是色氨酸的唯一密码子)以产生功能相同的分子。因此，关于表达产物而不是关于实际探针序列，编码多肽的核酸的每个沉默变异均包含在每个所述序列中。

关于氨基酸序列，本领域技术人员将认识到在编码的序列中改变、添加或缺失一个氨基酸或少部分氨基酸的核酸、肽、多肽或蛋白质序列的各个取代、缺失或添加是“保守修饰的变体”，其中所述改变导致一个氨基酸被化学上相似的氨基酸取代。提供功能相似氨基酸的保守取代表为本领域熟知。这种保守修饰的变体是本发明另外的及不除外的多态性变体、种间同系物和等位基因。

如下八组均含有彼此保守取代的氨基酸：1)丙氨酸(A)，甘氨酸(G)；2)天冬氨酸(D)，谷氨酸(E)；3)天冬酰胺(N)，谷氨酰胺(Q)；4)精氨酸(R)，赖氨酸(K)；5)异亮氨酸(I)，亮氨酸(L)，甲硫氨酸(M)，缬氨酸(V)；6)苯丙氨酸(F)，酪氨酸(Y)，色氨酸(W)；7)丝氨酸(S)，苏氨酸(T)；和8)半胱氨酸(C)，甲硫氨酸(M)(见例如Creighton，Proteins(1984))。

术语“多肽”、“肽”和“蛋白质”在本文可互换使用，是指氨基酸残基的聚合物，其中所述聚合物可任选与不由氨基酸组成的部分缀合。该术语适用于其中一或多个氨基酸残基是相应天然存在的氨基酸的人工化学模拟物的氨基酸聚合物，以及适用于天然存在的氨基酸聚合物和非天然存在的氨基酸聚合物。“融合蛋白”是指编码两或更多个单独蛋白质序列(这些蛋白质序列重组表达为单个部分)的嵌合蛋白。

术语“肽基”、“肽基部分”或“肽部分”是指单价肽，且可另外被称为肽的一部分或多肽的一部分。

当涉及例如细胞、核酸、蛋白质或载体时，术语“重组”表示该细胞、核酸、蛋白质或载体已通过实验室方法修饰或者是实验室方法的结果。因此，例如，重组蛋白包括通过实验室方法产生的蛋白。重组蛋白可以包括在蛋白质的天然(非重组)形式中未发现的氨基酸残基，或者可以包括已被修饰例如标记的氨基酸残基。

当涉及核酸部分使用时，术语“异源”表示该核酸包含两或更多个未发现在天然情况中彼此处于相同关系的子序列。例如，所述核酸通常是重组产生的，具有来自不相关基因的两或更多个序列，排列产生新的功能核酸，例如来自一个来源的启动子和来自另一个来源的编码区。相似地，异源蛋白质表示该蛋白质包含两或更多个未发现在天然情况中彼此处于相同关系的子序列(例如融合蛋白)。

当应用于核酸或蛋白质时，术语“分离的”是指该核酸或蛋白质基本上不含在自然状态下与其关联的其它细胞成分。例如，其可以处于均质状态及可以处于干燥状态或水性溶液中。通常使用分析化学技术例如聚丙烯酰胺凝胶电泳或高效液相色谱法确定纯度和均一性。在制备物中是存在的主要物质的蛋白质是基本上纯化的。

在两或更多个核酸或多肽序列的语境中，术语“相同”或百分比“相同性”是指当与比较窗或指定区域上进行最大对应比较和比对时，使用以下序列比较算法之一或通过手动比对和目测测量的两或更多个序列或子序列是相同的或具有指定百分比的氨基酸残基或核苷酸是相同的(即与例如本发明完整多肽序列的指定区域或者本发明多肽的各个结构域具有60％相同性，任选65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、98％或99％相同性)。这种序列然后被称为“基本上相同”。这个定义也指测试序列的互补序列。任选地，相同性存在于长度至少大约50个核苷酸的区域上，或更优选地存在于长度为100-500或1000或更多个核苷酸的区域上。本发明包括与SEQ ID NO:1、2、3、4和5中任一序列基本上相同的多肽。

“序列相同性百分比”通过在比较窗比较两个最佳比对的序列确定，其中比较窗中多核苷酸或多肽序列的一部分与参考序列(不包含添加或缺失)相比可包括添加或缺失(即缺口)以最佳比对这两个序列。通过确定两个序列中存在的相同核酸碱基或氨基酸残基的位置数以产生匹配位置数，将匹配位置数除以比较窗口中的位置总数并将结果乘以100产生序列相同性百分比，由此计算所述百分比。

为进行序列比较，通常将一个序列用作参考序列，将其与测试序列进行比较。当使用序列比较算法时，将测试序列和参考序列输入计算机，必要时指定子序列坐标，及指定序列算法程序参数。可以使用默认程序参数，也可以指定其它参数。然后，序列比较算法基于程序参数计算测试序列相对于参考序列的序列相同性百分比。

如本文所用，“比较窗口”包括对选自例如由全长序列或20至600、大约50至大约200或大约100至大约150个氨基酸或核苷酸的任一连续位置数目的一段序列，其中在将两个序列最佳比对后可以将序列与相同连续位置数目的参考序列进行比较。用于比较的序列比对方法是本领域熟知的。可以通过如下方法进行用于比较的序列最佳比对，例如Smithand Waterman(1970)Adv.Appl.Math.2:482c的局部同源算法，Needleman and Wunsch(1970)J.Mol.Biol.48:443的同源比对算法，Pearson and Lipman(1988)Proc.Nat’l.Acad.Sci.USA 85:2444的相似性方法搜索，计算机执行这些算法(GAP、BESTFIT、FASTA和TFASTA，Wisconsin Genetics Software Package,Genetics Computer Group,575Science Dr.,Madison,WI)，或者通过人工比对和目测(见例如Ausubel et al.,Current Protocols in Molecular Biology(1995supplement))。

适于确定序列相同性百分比和序列相似性的算法的一个示例是BLAST和BLAST2.0算法，这些算法分别在Altschul et al.(1977)Nuc.Acids Res.25:3389-3402和Altschul et al.(1990)J.Mol.Biol.215:403-410中描述。进行BLAST分析的软件可通过国家生物技术信息中心(http://www.ncbi.nlm.nih.gov/)公开获得。这个算法包括首先通过识别查询序列中长度为W的短字以识别高分序列对(HSP)，其当与数据库序列中相同长度的字比对时匹配或满足一些正值阈值得分T。T被称为邻域字分数阈值(Altschul et al.,supra)。这些最初的邻域字hits充当启动搜索以查找包含其的较长HSP的种子。只要可以增加累积比对得分，所述字hits就沿着每个序列在两个方向上延伸。对于核苷酸序列，使用参数M(一对匹配残基的奖励分数；始终>0)和N(错配残基的罚分；始终<0)计算累积分数。对于氨基酸序列，使用得分矩阵计算累积得分。在以下情况下，字hits停止在每个方向上的延伸：累积比对分数比其最大实现值减少数量X；由于一或多个负分残基比对的累积，累积得分变为零或更低；或到达任一序列的末端。BLAST算法参数W、T和X确定比对的灵敏度和速度。BLASTN程序(用于核苷酸序列)默认使用字长(W)为11，预期(E)或10，M＝5，N＝-4以及比较两条链。对于氨基酸序列，BLASTP程序默认使用字长为3及期望值(E)为10，以及BLOSUM62评分矩阵(见Henikoff and Henikoff(1989)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 89:10915)比对(B)为50，预期(E)为10，M＝5，N＝-4，以及比较两条链。

BLAST算法还对两个序列之间的相似性进行统计分析(见例如Karlin andAltschul(1993)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 90:5873-5787)。BLAST算法提供的一种相似性测量是最小总和概率(P(N))，其提供了两个核苷酸或氨基酸序列之间偶然发生匹配的概率指示。例如，如果在测试核酸与参考核酸的比较中最小总和概率小于大约0.2、更优选小于大约0.01、最优选小于大约0.001，则认为该核酸与参考序列相似。

如下所述，两个核酸序列或多肽基本相同的指示是由第一个核酸编码的多肽与针对由第二个核酸编码的多肽产生的抗体是免疫交叉反应性的。因此，多肽通常与第二个多肽基本相同，例如其中两个肽仅由于保守取代而不同。如下所述，两个核酸序列基本相同的另一个指示是两个分子或其互补序列在严格条件下彼此杂交。两个核酸序列基本相同的另一个指示是可以使用相同引物来扩增序列。

“标记”或“可检测部分”是可通过光谱、光化学、生物化学、免疫化学、化学或其它物理手段可检测的组合物。例如，有用的标记包括³²P、荧光染料、电子致密剂、酶(例如ELISA中常用的酶)、生物素、洋地黄毒苷或半抗原以及可通过例如在肽中掺入放射性标记或者与靶肽特异性反应的抗体而变得可检测的蛋白质或其它实体。可以使用本领域已知的将抗体与标记缀合的任何合适方法，例如使用在Hermanson，Bioconjugate Techniques 1996，Academic Press，Inc.，San Diego中描述的方法。

抗体是具有复杂内部结构的大而复杂的分子(分子量为～150,000或大约1320个氨基酸)。天然抗体分子含有两对相同的多肽链，每对具有一条轻链和一条重链。每个轻链和重链又由两个区域组成：参与结合靶抗原的可变(“V”)区，和与免疫系统其它成分相互作用的恒定(“C”)区。轻链和重链可变区在3维空间中汇聚在一起，形成结合抗原(例如细胞表面上的受体)的可变区。在每个轻链或重链可变区内，存在三个短序列节段(平均长度为10个氨基酸)，称为互补决定区(“CDR”)。抗体可变结构域中的六个CDR(三个来自轻链，三个来自重链)在3维空间中折叠在一起，形成锚定靶抗原上的实际抗体结合位点。CDR的位置和长度已由Kabat,E.et al.,Sequences of Proteins of Immunological Interest,U.S.Department of Health and Human Services,1983,1987精确定义。CDR中未包含的可变区部分称为构架(FR)，其形成CDR的环境。

如本文所提供的“抗体变体”是指能够结合抗原且包括抗体或其片段的一或多个结构域的多肽。抗体变体的非限制性实例包括单域抗体或纳米抗体、亲和体(比单克隆抗体小的多肽(例如约6kDA)及能够以高亲和力结合抗原并模仿单克隆抗体的多肽)，单特异性Fab₂，双特异性Fab₂，三特异性Fab₃，一价IgGs，scFv，双特异性二抗体，三特异性三抗体，scFv-Fc，微抗体，IgNAR，V-NAR，hcIgG，VhH或肽抗体(peptibodies)。如本文所述的“纳米抗体”或“单域抗体”为本领域熟知，是指由单一单体可变抗体结构域组成的抗体片段。如完整抗体一样，其能够选择性地结合特定抗原。如本文提供的“肽抗体”是指(通过共价或非共价接头)附着于抗体的Fc结构域的肽部分。本领域已知的抗体变体的其它非限制性实例包括软骨鱼或骆驼科动物产生的抗体。来自骆驼科动物的抗体及其可变区的一般描述及其生产、分离和使用方法可见参考文献WO97/49805和WO 97/49805，其以全文及为所有目的并入本文作参考。同样地，来自软骨鱼的抗体及其可变区及其生产、分离和使用方法可见于WO2005/118629，其以全文及为所有目的并入本文作参考。

术语“抗体”以其在本领域中众所周知的含义使用。抗体例如以完整免疫球蛋白形式存在或者以各种肽酶消化产生的许多充分鉴定的片段形式存在。因此，例如胃蛋白酶消化铰链区中二硫键下方的抗体以产生F(ab)'₂，这是Fab的二聚体，其自身是通过二硫键与V_H-C_H1连接的轻链。F(ab)'₂可以在适度条件下还原以破坏铰链区中的二硫键，从而将F(ab)'₂二聚体转化为Fab'单体。Fab'单体基本上是具有部分铰链区的Fab(参见Fundamental Immunology(Paul ed.,3d ed.1993)。虽然根据完整抗体的消化来定义了各个抗体片段，但本领域技术人员将理解这种片段可以化学方法或者通过重组DNA方法从头合成。因此，本文所用术语抗体还包括通过修饰整个抗体产生的抗体片段，或使用重组DNA方法从头合成的那些(例如单链Fv)或使用噬菌体展示文库鉴定的那些(参见例如McCafferty et al.,Nature 348:552-554(1990))。

示例的免疫球蛋白(抗体)结构单元包含四聚体。每个四聚体由两个相同的多肽链对组成，每对具有一条“轻链”(约25kD)和一条“重链”(约50-70kD)。每条链的N末端定义了大约100-110个或更多个氨基酸的可变区，主要负责抗原识别。术语可变轻链(VL)和可变重链(VH)分别是指这些轻链和重链。Fc(即片段可结晶区域)是免疫球蛋白的“基础”或“尾部”，通常由两条重链组成，其根据抗体的类别可提供两个或三个恒定结构域。通过与特定蛋白质结合，Fc区可确保每个抗体针对给定抗原产生适当的免疫应答。Fc区还结合各种细胞受体例如Fc受体，及其它免疫分子例如补体蛋白。

如本文提供的术语“抗原”是指能够结合本文提供的抗体结合结构域的分子。如本文提供的“抗原结合结构域”是与抗原(表位)结合的抗体区域。如上所述，抗原结合结构域可包括每个重链和轻链中的一个恒定结构域和一个可变结构域(分别为VL，VH，CL和CH1)。在实施方案中，抗原结合结构域包括轻链可变结构域和重链可变结构域。在实施方案中，抗原结合结构域包括轻链可变结构域及不包括重链可变结构域和/或重链恒定结构域。互补位或抗原结合位点在抗原结合结构域的N-末端形成。抗原结合结构域的两个可变结构域可以结合抗原的表位。

抗体例如以完整免疫球蛋白存在，或者以各种肽酶消化产生的许多充分鉴定的片段存在。因此，例如胃蛋白酶消化铰链区中二硫键下方的抗体以产生F(ab)’2，这是Fab的二聚体，其自身是通过二硫键与VH-CH1连接的轻链。F(ab)’2可以在适度条件下还原以破坏铰链区的二硫键，从而将F(ab)’2二聚体转化为Fab’单体。Fab’单体基本上是具有部分铰链区的抗原结合部分(参见Fundamental Immunology(Paul ed.,3d ed.1993))。虽然各个抗体片段以完整抗体的消化定义，但是技术人员可以理解这些片段可以化学方法或通过重组DNA方法从头合成。因此，本文所用的术语抗体还包括通过修饰整个抗体产生的抗体片段，或者使用重组DNA方法从头合成的那些(例如单链Fv)，或者使用噬菌体展示库鉴别的那些(参见例如McCafferty et al.,Nature 348:552-554(1990))。

单链可变片段(scFv)通常是免疫球蛋白的重链(VH)和轻链(VL)的可变区的融合蛋白，其用10至大约25个氨基酸的短接头肽连接。所述接头通常可富含甘氨酸以利于柔性，以及富含丝氨酸或苏氨酸以利于溶解性。所述接头可以将VH的N末端与VL的C末端连接，反之亦然。

抗体的表位是与抗体结合的其抗原区域。如果两种抗体之一竞争性地抑制(阻断)另一种与抗原的结合，则这两种抗体结合相同或重叠表位。也就是说，在竞争性结合测定中测量，1x、5x、10x、20x或100x过量的一种抗体使另一种抗体的结合抑制至少30％、但优选50％、75％、90％或甚至99％(参见例如Junghans et al.,Cancer Res.50:1495,1990)。或者，如果抗原中减少或消除一种抗体的结合的基本上所有氨基酸突变均减少或消除另一种抗体的结合，则这两种抗体具有相同表位。如果减少或消除一种抗体结合的一些氨基酸突变减少或消除另一种抗体的结合，则这两种抗体具有重叠表位。

为制备本发明合适的抗体及用于根据本发明的用途，例如重组、单克隆或多克隆抗体，可以使用本领域已知的许多技术(见例如Kohler&Milstein,Nature 256:495-497(1975)；Kozbor et al.,Immunology Today 4:72(1983)；Cole et al.,pp.77-96inMonoclonal Antibodies and Cancer Therapy,Alan R.Liss,Inc.(1985)；Coligan,Current Protocols in Immunology(1991)；Harlow&Lane,Antibodies,A LaboratoryManual(1988)；以及Goding,Monoclonal Antibodies:Principles and Practice(2ded.1986))。编码感兴趣的抗体的重链和轻链的基因可以自细胞克隆，例如编码单克隆抗体的基因可以自杂交瘤克隆并用于生产重组单克隆抗体。编码单克隆抗体的重链和轻链的基因文库也可以从杂交瘤或浆细胞制备。随机组合重链和轻链基因产物产生具有不同抗原特异性的大抗体库(pool)(见例如Kuby,Immunology(3rd ed.1997))。生产单链抗体或重组抗体的技术(美国专利4,946,778、美国专利号4,816,567)可以适于生产本发明多肽的抗体。而且，转基因小鼠或其他生物体如其他哺乳动物可以用于表达人源化或人抗体(见例如美国专利号5,545,807；5,545,806；5,569,825；5,625,126；5,633,425；5,661,016,Marks etal.,Bio/Technology 10:779-783(1992)；Lonberg et al.,Nature 368:856-859(1994)；Morrison,Nature 368:812-13(1994)；Fishwild et al.,Nature Biotechnology 14:845-51(1996)；Neuberger,Nature Biotechnology 14:826(1996)；以及Lonberg&Huszar,Intern.Rev.Immunol.13:65-93(1995))。或者，噬菌体展示技术可以用于鉴别特异性结合选择的抗原的抗体和杂聚Fab片段(见例如McCafferty et al.,Nature 348:552-554(1990)；Marks et al.,Biotechnology 10:779-783(1992))。抗体也可以制成双特异性，即能够识别两张不同抗原(见例如WO 93/08829,Traunecker et al.,EMBO J.10:3655-3659(1991)；以及Suresh et al.,Methods in Enzymology 121:210(1986))。抗体也可以是异种缀合物(heteroconjugate)，例如两种共价连接的抗体，或免疫毒素(见例如美国专利号4,676,980，WO 91/00360；WO 92/200373；以及EP 03089)。

非人抗体的人源化或灵长动物化的方法为本领域熟知(例如美国专利号4,816,567；5,530,101；5,859,205；5,585,089；5,693,761；5,693,762；5,777,085；6,180,370；6,210,671；和6,329,511；WO 87/02671；欧洲专利申请0173494；Jones et al.(1986)Nature321:522；及Verhoyen et al.(1988)Science 239:1534)。人源化抗体在例如Winter andMilstein(1991)Nature 349:293中进一步描述。通常，人源化抗体具有从非人来源引入的一或多个氨基酸残基。这些非人氨基酸残基通常被称为输入残基，其通常取自输入可变结构域。人源化可以基本上根据Winter和同事的方法进行(见例如Morrison et al.,PNASUSA,81:6851-6855(1984)，Jones et al.,Nature 321:522-525(1986)；Riechmann etal.,Nature 332:323-327(1988)；Morrison and Oi,Adv.Immunol.,44:65-92(1988)，Verhoeyen et al.,Science 239:1534-1536(1988)和Presta,Curr.Op.Struct.Biol.2:593-596(1992)，Padlan,Molec.Immun.,28:489-498(1991)；Padlan,Molec.Immun.,31(3):169-217(1994))，通过用啮齿动物CDR或CDR序列代替相应人抗体序列。因此，这样的人源化抗体是嵌合抗体(美国专利号4,816,567)，其中大大少于完整人可变结构域已被来自非人物种的相应序列取代。在实践中，人源化抗体通常是人抗体，其中一些CDR残基和可能的某些FR残基被啮齿动物抗体中类似位点的残基取代。例如，可以合成地或通过组合适当的cDNA和基因组DNA区段产生多核苷酸，所述多核苷酸包含编码人源化免疫球蛋白构架区的第一序列和编码希望的免疫球蛋白互补决定区的第二序列组。可以根据熟知的方法从各种人细胞中分离人恒定区DNA序列。

“嵌合抗体”是这样的抗体分子，其中(a)恒定区或其一部分被改变、置换或交换，由此抗原结合位点(可变区)连接于不同的或改变的类别、效应子功能和/或种类的恒定区，或赋予嵌合抗体新特性的完全不同的分子，例如酶、毒素、激素、生长因子、药物等；或者(b)可变区或其一部分被改变、置换或交换为具有不同或改变的抗原特异性的可变区。本发明和用于本发明用途的优选抗体包括人源化和/或嵌合单克隆抗体。

将治疗剂与抗体缀合的技术是熟知的(见例如Arnon et al.,"MonoclonalAntibodies For Immunotargeting Of Drugs In Cancer Therapy",in MonoclonalAntibodies And Cancer Therapy,Reisfeld et al.(eds.),pp.243-56(Alan R.Liss,Inc.1985)；Hellstrom et al.,"Antibodies For Drug Delivery"in Controlled DrugDelivery(2^nd Ed.),Robinson et al.(eds.),pp.623-53(Marcel Dekker,Inc.1987)；Thorpe,"Antibody Carriers Of Cytotoxic Agents In Cancer Therapy:A Review"inMonoclonal Antibodies‘84:Biological And Clinical Applications,Pinchera et al.(eds.),pp.475-506(1985)；及Thorpe et al.,"The Preparation And CytotoxicProperties Of Antibody-Toxin Conjugates",Immunol.Rev.,62:119-58(1982))。

如本文所用，术语“抗体-药物缀合物”或“ADC”是指与抗体缀合或另外共价结合的治疗剂。

如本文所用，“治疗剂”或“治疗部分”是指这样的物质(例如化合物或组合物)，其当给予对象时具有预期的预防作用，例如预防或延迟损伤、疾病、病理或状况的发生(或复发)，或者降低损伤、疾病、病理或状况发生(或复发)的可能性，或者其症状或预期的治疗效果，例如治疗或缓解损伤、疾病、病理或状况，或其症状包括治疗的任何客观或主观参数例如消减、缓解；减轻症状或使患者更耐受所述损伤、病理或状况；减慢退变或衰退的速度；使退变的终点不太虚弱；或者改善患者的身心健康。在实施方案中，所述治疗剂是可用于治疗或预防疾病如癌症的组合物。

当提及蛋白质或肽时，短语“特异性(或选择性)结合抗体”或“与……特异性(或选择性)免疫反应”是指一种结合反应，其确定了通常在蛋白质和其它生物制品的异质群体中所述蛋白质的存在。因此，在指定的免疫测定条件下，指定的抗体与特定蛋白质的结合至少是背景结合的两倍，更通常是多于背景结合的10-100倍。在这种条件下，与抗体的特异性结合通常需要根据对特定蛋白质的特异性选择的抗体。例如，可以选择多克隆抗体以获得仅与所选抗原特异性免疫反应而不与其它蛋白质特异性免疫反应的抗体子集。这种选择可以通过减去与其它分子交叉反应的抗体而实现。可以使用多种免疫测定形式选择与特定蛋白质特异性免疫反应的抗体。例如，通常使用固相ELISA免疫测定选择与蛋白质特异性免疫反应的抗体(见例如Harlow&Lane,Using Antibodies,A Laboratory Manual(1998)关于可用于确定特异性免疫反应性的免疫测定形式和条件的描述)。

“接触”按照其普通含义使用，是指使至少两种不同的物质(例如化学化合物，包括生物分子或细胞)足够近地反应、相互作用或物理接触的过程。应当理解，所得反应产物可以直接由添加的试剂之间的反应产生，或者由一种或多种添加的试剂的可以在反应混合物中产生的中间体产生。

术语“接触”可以包括使得两种物质反应、相互作用或物理接触(例如结合)，其中所述两种物质可以是例如本文所述的抗体构建体和癌蛋白。在实施方案中，接触包括，例如使得抗体构建体与癌细胞上表达的癌蛋白结合。

如本文所用，“细胞”是指执行足以维持或复制其基因组DNA的代谢或其它功能的细胞。细胞可以通过本领域熟知的方法来鉴定，包括例如完整膜的存在，特定染料的染色，产生子代的能力，或者在配子的情况下，与第二配子组合产生活的后代的能力。细胞可以包括原核和真核细胞。原核细胞包括但不限于细菌。真核细胞包括但不限于酵母细胞和源自植物和动物的细胞，例如哺乳动物，昆虫(例如夜蛾)和人细胞。当细胞天然不贴壁或已被处理例如通过胰蛋白酶消化为不粘附于表面时，它们可以有用。

“生物学样品”或“样品”是指得自或衍生自对象或患者的材料。生物学样品包括组织切片，例如活检和尸检样品，以及用于组织学目的的冷冻切片。此类样品包括体液，例如血液和血液级分或产品(例如血清、血浆、血小板、红细胞等)、痰、组织、培养细胞(例如原代培养物、外植体和转化细胞)、粪便、尿、滑液、关节组织、滑膜组织、滑膜细胞、成纤维细胞样滑膜细胞、巨噬细胞样滑膜细胞、免疫细胞、造血细胞、成纤维细胞、巨噬细胞、T细胞等。生物学样品典型地得自真核生物，例如哺乳动物如灵长类动物，例如黑猩猩或人；牛；狗；猫；啮齿动物，例如豚鼠、大鼠、小鼠；兔；或鸟；爬行动物；或鱼。在一些实施方案中，所述样品得自人。

“对照”样品或值是指用作参考的样品，通常是已知参考，用于与测试样品进行比较。例如，可以从测试条件下例如在存在测试化合物的情况下获取测试样品，并与已知条件下的样品进行比较，例如在没有测试化合物的情况下(阴性对照)或在存在已知化合物的情况下(阳性对照)。对照也可以代表从多个测试或结果收集的平均值。本领域技术人员将认识到，可以将对照设计为用于评估任何数量的参数。例如，可以设计一种对照，以基于药理学数据(例如半衰期)或治疗措施(例如比较副作用)比较治疗益处。本领域技术人员将理解哪些对照在给定情况下是有价值的，并且能够基于与对照值的比较来分析数据。对照对于确定数据的显著性也很有价值。例如，如果给定参数的值在对照中变化很大，则测试样品中的变化将不被认为是显著的。

“患者”或“有此需要的对象”是指患有或易患可以通过施用本文提供的组合物或药物组合物来治疗的疾病或状况的活生物体。非限制性实例包括人、其它哺乳动物、牛、大鼠、小鼠、狗、猴子、山羊、绵羊、奶牛、鹿和其它非哺乳动物动物。在一些实施方案中，患者是人。

术语“疾病”或“状况”是指能够用本文提供的化合物、药物组合物或方法治疗的患者或对象的状态或健康状态。在实施方案中，所述疾病是癌症(例如肺癌、卵巢癌、骨肉瘤、膀胱癌、宫颈癌、肝癌、肾癌、皮肤癌(例如Merkel细胞癌)、睾丸癌、白血病、淋巴瘤(套细胞淋巴瘤)、头颈癌、结肠直肠癌、前列腺癌、胰腺癌、黑色素瘤、乳腺癌、神经母细胞瘤)。

如本文所用，术语“癌症”是指在哺乳动物中发现的所有类型的癌症、赘生物或恶性肿瘤，包括白血病、淋巴瘤、黑色素瘤、神经内分泌肿瘤、癌和肉瘤。可以用本文提供的化合物、药物组合物或方法治疗的示例性癌症包括淋巴瘤(例如套细胞淋巴瘤、滤泡型淋巴瘤、弥漫型大B细胞淋巴瘤、边缘带淋巴瘤、Burkitt’s淋巴瘤)、肉瘤、膀胱癌、骨癌、脑肿瘤、宫颈癌、结肠癌、食道癌、胃癌、头颈癌、肾癌、骨髓瘤、甲状腺癌、白血病、前列腺癌、乳腺癌(例如三阴性、ER阳性、ER阴性、化疗抗性、赫赛汀抗性、HER2阳性、多柔比星抗性、他莫昔芬抗性、导管癌、小叶癌、原发性、转移性)、卵巢癌、胰腺癌、肝癌(例如肝细胞癌)、肺癌(例如非小细胞肺癌、鳞状细胞肺癌、腺癌、大细胞肺癌、小细胞肺癌、类癌、肉瘤)、多形性胶质母细胞瘤、胶质瘤、黑色素瘤、前列腺癌、去势抵抗性前列腺癌、乳腺癌、三阴性乳腺癌、胶质母细胞瘤、卵巢癌、肺癌、鳞状细胞癌(例如头、颈或食道)、结直肠癌、白血病(例如成淋巴细胞性白血病、慢性淋巴细胞性白血病、毛细胞白血病)、急性髓细胞性白血病、淋巴瘤、B细胞淋巴瘤或多发性骨髓瘤。额外例子包括甲状腺癌、内分泌系统癌症、脑癌、乳腺癌、子宫颈癌、结肠癌、头颈癌、食道癌、肝癌、肾癌、肺癌、非小细胞肺癌、黑色素瘤、间皮瘤、卵巢癌、肉瘤、胃癌、子宫癌或髓母细胞瘤、霍奇金病、非霍奇金淋巴瘤、多发性骨髓瘤、神经母细胞瘤、胶质瘤、多形性胶质母细胞瘤、卵巢癌、横纹肌肉瘤、原发性血小板增多症、原发性巨球蛋白血症、原发性脑瘤、癌症、恶性胰腺胰岛素瘤(insulanoma)、恶性类癌、膀胱癌、恶性前皮肤病变、睾丸癌、淋巴瘤、甲状腺癌、神经母细胞瘤、食道癌、泌尿生殖道癌、恶性高钙血症、子宫内膜癌、肾上腺皮质癌、内分泌或外分泌胰腺肿瘤、甲状腺髓样癌、甲状腺髓样癌、黑色素瘤、结直肠癌、甲状腺乳头状癌、肝细胞癌、佩吉特乳头病、叶状肿瘤、小叶癌、导管癌、胰腺星状细胞癌、肝星状细胞癌或前列腺癌。

术语“白血病”广义上是指血液形成器官的进行性恶性疾病，并且通常以血液和骨髓中白细胞及其前体的增殖和发育畸变为特征。通常根据以下方面对白血病进行临床分类：(1)疾病的持续时间和特征--急性或慢性；(2)所涉及的细胞类型；骨髓性的(骨髓源的)，淋巴样的(淋巴源的)或单核细胞的；和(3)血液中异常细胞的数量增加或不增加--白血病的或白细胞缺乏的(亚白血病的)。P388白血病模型被广泛认为是体内抗白血病活性的预测指标。据信无论所治疗的白血病类型是什么，在P388测定中测试阳性的化合物通常将在体内表现出一定水平的抗白血病活性。因此，本申请包括一种治疗白血病的方法，且优选地包括一种治疗如下疾病的方法：急性非淋巴细胞性白血病、慢性淋巴细胞性白血病、急性粒细胞性白血病、慢性粒细胞性白血病、急性早幼粒细胞性白血病、成人T细胞白血病、非白血性白血病、白细胞不增多性白血病、嗜碱性白血病(basophylicleukemia)、干细胞性白血病(blast cell leukemia)、牛白血病、慢性粒细胞性白血病、皮肤白血病、干细胞性白血病(embryonal leukemia)、嗜酸性粒细胞性白血病、Gross白血病、毛细胞白血病、成血细胞性白血病(hemoblastic leukemia)、成血细胞性白血病(hemocytoblastic leukemia)、组织细胞性白血病、干细胞白血病(stem cell leukemia)、急性单核细胞性白血病、白细胞减少性白血病、淋巴性白血病、成淋巴细胞性白血病、淋巴细胞性白血病、淋巴源性白血病、淋巴样白血病、淋巴肉瘤细胞白血病、肥大细胞白血病、巨核细胞性白血病、小原粒型白血病、单核细胞性白血病、成髓细胞性白血病、髓细胞性白血病、髓细胞性白血病、髓单核细胞性白血病、Naegeli白血病、浆细胞白血病、多发性骨髓瘤、浆细胞性白血病、早幼粒细胞性白血病、Rieder细胞白血病、Schilling's白血病、干细胞白血病、亚白血性白血病和未分化细胞白血病。

如本文所用，术语“转移”，“转移性”和“转移癌”可以互换使用，是指增殖性疾病或失调例如癌症从一个器官或另一不相邻器官或身体部分的扩散。癌症发生在起源部位，例如乳腺，该部位称为原发肿瘤，例如原发性乳腺癌。原发肿瘤或起源部位中的某些癌细胞获得穿透和浸润局部区域中周围正常组织的能力和/或穿透淋巴系统或血管系统的壁、通过该系统循环至机体其它部位和组织的能力。由原发性肿瘤的癌细胞形成的第二临床上可检测的肿瘤称为转移性或继发性肿瘤。当癌细胞转移时，推测转移性肿瘤及其细胞与原始肿瘤的相似。因此，如果肺癌转移到乳腺，则乳腺部位的继发性肿瘤由异常的肺细胞而不是异常的乳腺细胞组成。乳腺中的继发性肿瘤被称为转移性肺癌。因此，短语转移性癌症是指患有或患过原发性肿瘤并患有一种或多种继发性肿瘤的对象中的疾病。短语非转移性癌症或患有非转移性癌症的对象是指其中对象患有原发性肿瘤但没有一或多种继发性肿瘤的疾病。例如，转移性肺癌是指患有原发性肺肿瘤或具有原发性肺肿瘤病史并且在第二位置或多个位置(例如在乳腺中)具有一或多个继发性肿瘤的对象中的疾病。

在与疾病(例如癌症(例如白血病、淋巴瘤、B细胞淋巴瘤或多发性骨髓瘤))相关的物质或物质活性或功能的上下文中，术语“相关”或“与...相关”是指疾病(例如癌症(例如白血病、淋巴瘤、B细胞淋巴瘤或多发性骨髓瘤)是(全部或部分)由该物质或物质活性或功能引起的，或者疾病的症状(全部或部分)是由该物质或物质活性或功能引起的。

如本文所用，“治疗”或“缓解”或“改善”在本文可互换使用。这些术语是指获得有益或期望结果包括但不限于治疗益处和/或预防益处的方法。治疗益处是指消除或改善所治疗的基础失调。同样，消除或改善与基础失调相关的一种或多种生理学症状获得了治疗益处，从而在患者中观察到了改善，尽管患者仍可能患有基础失调。为预防益处，可以将组合物施用给有发生特定疾病风险的患者，或施用给报告疾病的一种或多种生理学症状的患者，即使可能尚未对该疾病进行诊断。治疗包括预防疾病，即通过在诱发该疾病之前施用保护性组合物来使该疾病的临床症状不发展；阻抑(suppressing)疾病，即在诱导事件之后但是在疾病的临床出现或再出现之前通过施用保护性组合物来使疾病的临床症状不发展；抑制(inhibiting)疾病，即通过在临床症状最初出现后施用保护性组合物来阻止临床症状的发展；预防疾病的复发和/或缓解疾病，即通过在临床症状最初出现后施用保护性组合物来引起临床症状的消退。例如，本文的某些方法治疗癌症(例如肺癌、卵巢癌、骨肉瘤、膀胱癌、宫颈癌、肝癌、肾癌、皮肤癌(例如Merkel细胞癌)、睾丸癌、白血病、淋巴瘤、头颈癌、结直肠癌、前列腺癌、胰腺癌、黑色素瘤、乳腺癌、神经母细胞瘤)。例如，本文的某些方法通过减少或降低或预防癌症的发生、生长、转移或进展来治疗癌症；或通过减少癌症症状来治疗癌症。癌症(例如肺癌、卵巢癌、骨肉瘤、膀胱癌、宫颈癌、肝癌、肾癌、皮肤癌(例如Merkel细胞癌)、睾丸癌、白血病、淋巴瘤、头颈癌、结直肠癌、前列腺癌、胰腺癌、黑色素瘤、乳腺癌、神经母细胞瘤)的症状是已知的或可以由本领域普通技术人员确定。

如本文所用，术语“治疗”是指减少以蛋白酶表达为特征的疾病或状况的一种或多种症状的作用或以蛋白酶表达为特征的疾病或状况的症状的方法。因此，在本文公开的方法中，治疗可以指已确定疾病、状况的严重性或者疾病或状况的症状降低10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％或100％。例如，如果与对照相比，对象中的一种或多种疾病症状降低了10％，则认为该疾病的治疗方法为治疗。因此，与天然或对照水平相比，降低可以是10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、100％，或者10％和100％之间的任何百分比的降低。应当理解，治疗不一定是指疾病、状况或者疾病或状况的症状的治愈或完全消除。此外，如本文所用，减少、降低或抑制包括与对照水平相比10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％或更大的变化，这些术语可以包括但不一定包括完全消除。

“有效量”是足以实现所述目的(例如达到其施用效果，治疗疾病，降低酶活性，减轻疾病或状况的一种或多种症状)的量。“有效量”的例子是足以有助于治疗、预防或减轻疾病的一或多种症状的量，其也可以称为“治疗有效量”。一或多种症状的“减轻”(和该短语的语法等价形式)是指降低所述一或多种症状的严重程度或频率，或消除所述一或多种症状。药物的“预防有效量”是当施用给对象时具有预期的预防作用的药物量，例如预防或延迟损伤、疾病、病理学或状况的发作(或复发)，或减少损伤、疾病、病理或状况或其症状的发作(或复发)的可能性。完全预防作用不一定通过施用一次剂量而发生，并且可以仅在施用一系列剂量后才发生。因此，预防有效量可以在一或多次施用中施用。如本文所用，“活性降低量”是指相对于不存在拮抗剂，降低酶或蛋白质的活性所需的拮抗剂的量。如本文所用，“功能破坏量”是指相对于不存在拮抗剂，破坏酶或蛋白质的功能所需的拮抗剂的量。对于给定类别的药品，可以在文献中找到适当剂量的指南。例如，对于给定参数，有效量将显示至少5％、10％、15％、20％、25％、40％、50％、60％、75％、80％、90％或至少100％的增加或减少。功效也可以表示为“倍数”增加或减少。例如，治疗有效量可具有相对于对照的至少1.2倍、1.5倍、2倍、5倍或更多倍的作用。确切的量将取决于治疗目的，并且本领域技术人员可以使用已知技术来确定(参见例如Lieberman,Pharmaceutical Dosage Forms(vols.1-3,1992)；Lloyd,The Art,Science and Technology of Pharmaceutical Compounding(1999)；Pickar,Dosage Calculations(1999)；及Remington:The Science and Practiceof Pharmacy,20th Edition,2003,Gennaro,Ed.,Lippincott,Williams&Wilkins)。

如本文所用，术语“施用”是指给对象：口服施用，作为栓剂、局部接触、静脉内、腹膜内、肌肉内、病变内、鞘内、鼻内或皮下施用而施用，或植入缓释装置，例如微型渗透泵。施用可以通过任何途径进行，包括肠胃外和透粘膜的(例如颊、舌下、腭、牙龈、鼻、阴道、直肠或经皮)。肠胃外施用包括例如静脉内、肌内、小动脉内、皮内、皮下、腹膜内、心室内和颅内。其它递送方式包括但不限于使用脂质体配制物、静脉内输注、透皮贴剂等。“共同施用”是指本文所述的组合物在施用一或多种其它治疗例如癌症治疗如化疗、激素治疗、放疗或免疫治疗的同时、仅仅之前或仅仅之后施用。本发明的化合物可以单独施用或可以共同施用给患者。共同施用意指包括化合物的单独或联合(一种以上化合物)的同时或顺序施用。因此，当需要时，制剂也可以与其它活性物质联合(例如以减少代谢降解)。本发明的组合物可以通过经皮、局部途径递送，配制成涂抹棒、溶液、悬液、乳剂、凝胶、乳膏、软膏、糊剂、果冻、涂料、粉末和气雾剂。

适用于口服施用的配制物可以由(a)液体溶液，例如有效量的本文提供的抗体悬浮在稀释剂例如水、盐水或PEG 400中；(b)分别含有预定量的做为液体、固体、颗粒或明胶的活性成分的胶囊、小袋或片剂；(c)在适当液体中的悬浮液；和(d)合适的乳剂组成。片剂形式可以包括乳糖、蔗糖、甘露醇、山梨糖醇、磷酸钙、玉米淀粉、马铃薯淀粉、微晶纤维素、明胶、胶体二氧化硅、滑石粉、硬脂酸镁、硬脂酸中的一种或多种，以及其它赋形剂、着色剂、填充剂、粘合剂、稀释剂、缓冲剂、润湿剂、防腐剂、调味剂、染料、崩解剂和药学上相容载体。锭剂形式可包含在调味剂例如蔗糖中的活性成分，以及包含在惰性基质例如明胶和甘油或蔗糖和阿拉伯胶乳剂、凝胶等中的活性成分的软锭剂，其除了活性成分还包含本领域已知的载体。

药物组合物还可包括大的缓慢代谢的大分子，例如蛋白质、多糖如壳聚糖、聚乳酸、聚乙醇酸和共聚物(如乳胶官能化的sepharose^TM、琼脂糖、纤维素等)、聚合氨基酸、氨基酸共聚物和脂质聚集体(例如油滴或脂质体)。另外，这些载体可以用作免疫刺激剂(即佐剂)。

用于直肠施用的合适配制物包括例如栓剂，其由包装的核酸和栓剂基质组成。合适的栓剂基质包括天然或合成的甘油三酯或石蜡烃。另外，也可以使用明胶直肠胶囊，其由所选化合物与基质的组合组成，所述基质包括例如液体甘油三酯、聚乙二醇和石蜡烃。

适用于肠胃外施用的配制物、例如通过关节内(在关节内)、静脉内、肌内、肿瘤内、真皮内、腹膜内和皮下途径施用的制剂包括水性和非水性等渗无菌注射溶液，其可以含有抗氧化剂、缓冲剂、抑菌剂和使配制物与预期接受者的血液等渗的溶质，以及水性和非水性无菌混悬液，其可以包括悬浮剂、增溶剂、增稠剂、稳定剂和防腐剂。在本发明的实践中，组合物可以例如通过静脉内输注、口服、局部、腹膜内、膀胱内或鞘内施用。肠胃外施用、口服施用和静脉内施用是优选施用方法。化合物的配制物可以存在于单位剂量或多剂量密封的容器如安瓿和小瓶中。

注射溶液和悬浮液可以由前述无菌粉剂、粒剂和片剂制备。如上所述，通过核酸转导的用于离体疗法的细胞也可以静脉内或肠胃外施用。

药物制剂优选为单位剂型。以这种形式，将制剂分为包含适当量活性成分的单位剂量。单位剂型可以是包装的制剂，该包装含有离散量的制剂，例如包装的片剂、胶囊和小瓶或安瓿中的粉剂。同样，单位剂型本身可以是胶囊、片剂、扁囊剂或锭剂，或者可以是包装形式的任何这些的适当数量。如果需要，组合物还可包含其它相容的治疗剂。

联合施用包括使用分开的配制物或单一药物配制物共同施用，以及以任一顺序连续施用，其中优选在一定时间段内两种(或所有)活性剂同时发挥其生物学活性。

本文提供的组合物的有效剂量根据许多不同因素而变化，这些因素包括施用方式、靶位点、患者的生理状态、患者是人还是动物、施用的其它药物以及治疗是预防性还是治疗性的。然而，本领域普通技术人员在看到指导治疗和预防癌症的被批准组合物的剂量后，将立即认识到适当和/或等效剂量。

“药学上可接受的赋形剂”和“药学上可接受的载体”是指有助于给对象施用活性剂并使其吸收的物质，并且可以被包括在本发明的组合物中而不会对患者产生明显的不良毒理作用。药学上可接受的赋形剂的非限制性实例包括水、NaCl、生理盐水溶液、乳酸林格氏液、正常蔗糖、生理葡萄糖、粘合剂、填充剂、崩解剂、润滑剂、包衣、甜味剂、调味剂、盐溶液(如林格氏溶液)、醇、油、明胶、碳水化合物例如乳糖、直链淀粉或淀粉、脂肪酸酯、羟甲基纤维素、聚乙烯吡咯烷酮和色素等。可以将这样的制剂灭菌，并且如果需要，可以与不与本发明的化合物有害地反应的助剂混合，所述助剂例如润滑剂、防腐剂、稳定剂、润湿剂、乳化剂、用于影响渗透压的盐、缓冲剂、着色剂和/或芳香族物质等。本领域技术人员将认识到其它药物赋形剂可用于本发明。

术语“药学上可接受的盐”是指衍生自本领域公知的各种有机和无机抗衡离子的盐，仅作为示例包括钠、钾、钙、镁、铵、四烷基铵等；当分子含有碱性官能性时，是指有机或无机酸的盐如盐酸盐、氢溴酸盐、酒石酸盐、甲磺酸盐、乙酸盐、马来酸盐、草酸盐等。

术语“制剂”旨在包括具有包封材料作为载体的活性化合物的配制物，该载体提供胶囊，其中具有或不具有其它载体的活性成分被载体包围，因此与其关联。类似地，包括扁囊剂和锭剂。片剂、粉末、胶囊、丸剂、扁囊剂和锭剂可以用作适合口服施用的固体剂型。

药物制剂任选地为单位剂型。以这种形式，将制剂分为包含适当量的活性成分的单位剂量。单位剂型可以是包装的制剂，该包装包含离散量的制剂，例如包装的片剂、胶囊和在小瓶或安瓿中的粉剂。同样，单位剂型本身可以是胶囊、片剂、扁囊剂或锭剂，或者可以是包装形式的任何这些的适当数量。单位剂型可以是冷冻分散体。

本发明的组合物可另外包括提供持续释放和/或舒适性的组分。这样的组分包括高分子量阴离子伪粘膜(mucomimetic)聚合物、胶凝多糖和细分的药物载体基质(finely-divided drug carrier substrates)。这些组分在美国专利号4,911,920；5,403,841；5,212,162；和4,861,760中详细讨论。这些专利的全部内容出于所有目的以其全文并入本文参考。本发明的组合物也可以作为微球递送，以在体内缓慢释放。例如，可以通过皮内注射含药物的微球来施用微球，其在皮下缓慢释放(参见Rao,J.Biomater Sci.Polym.Ed.7:623-645,1995)；作为可生物降解和可注射的凝胶配制物施用(参见例如GaoPharm.Res.12:857-863,1995)；或者，作为口服施用的微球施用(参见例如Eyles,J.Pharm.Pharmacol.49:669-674,1997)。在实施方案中，本发明组合物的配制物可以通过使用与细胞膜融合或被内吞的脂质体而递送，即通过使用附着于脂质体的与细胞表面膜蛋白受体结合的受体配体而导致内吞。通过使用脂质体，特别是脂质体表面带有对靶细胞特异的受体配体或另外优先针对特定器官，可以专注于将本发明的组合物在体内递送到靶细胞(参见例如Al-Muhammed,J.Microencapsul.13:293-306,1996；Chonn,Curr.Opin.Biotechnol.6:698-708,1995；Ostro,Am.J.Hosp.Pharm.46:1576-1587,1989)。本发明的组合物也可以作为纳米颗粒递送。

抗体构建体

本文特别提供用于治疗癌症的组合物。本文提供的抗体可变结构域和包括其的抗体构建体特别用于靶向和杀死癌细胞，同时使健康细胞不受损害。本文提供的组合物(包括其实施方案)能够特异性结合人套细胞淋巴瘤(MCL)并且导致在效应细胞(例如NK细胞)存在下MCL细胞的靶向裂解。令人惊奇地，本文提供的抗体可变结构域和抗体构建体不结合非癌(健康)细胞，由此防止非特异性杀死健康细胞所导致的负作用。由于它们能相对于非癌细胞有区分地结合癌细胞，本文提供的抗体可变结构域和抗体构建体是用于治疗和诊断目的的高效药物。

在一个方面，提供了抗体可变结构域，其包括如SEQ ID NO:1所示的CDR 1、如SEQID NO:2所示的CDR 2和如SEQ ID NO:3所示的CDR 3。列出的CDR的顺序相应于它们在抗体可变结构域中从N-末端到C-末端的顺序。因此，在N-末端到C-末端方向，抗体可变结构域可以包括如SEQ ID NO:1所示的CDR1、如SEQ ID NO:2所示的CDR 2和如SEQ ID NO:3所示的CDR 3。在实施方案中，抗体可变结构域包括SEQ ID NO:5的序列。在实施方案中，抗体可变结构域是SEQ ID NO:5的序列。

本文提供的“抗体可变结构域”是指能结合抗原的肽(例如肽结构域)或肽基部分。本文提供的抗体可变结构域包括轻链可变(VL)结构域或者重链可变(VH)结构域的CDR序列和构架区(FR)序列。本文提供的抗体可变结构域可以包括轻链可变(VL)结构域或者重链可变(VH)结构域。因此，在实施方案中，抗体可变结构域包括轻链可变(VL)结构域。在实施方案中，抗体可变结构域包括重链可变(VH)结构域。在实施方案中，抗体可变结构域是轻链可变(VL)结构域。在实施方案中，抗体可变结构域是重链可变(VH)结构域。

本文提供的“重链可变(VH)结构域”是抗体或其片段的重链的抗体可变结构域。类似地，本文提供的“轻链可变(VL)结构域”是抗体或其片段的轻链的抗体可变结构域。在实施方案中，轻链可变(VL)结构域包括抗体可变轻链的CDR 1、CDR 2、CDR 3和FR 1、FR 2、FR3和FR4(构架区)。因此，抗体可变结构域可以是抗体轻链的可变结构域。在实施方案中，抗体可变结构域是抗体轻链的可变结构域。在实施方案中，抗体可变结构域是抗体片段的轻链的可变结构域。在实施方案中，抗体可变结构域是抗体变体的轻链的可变结构域。在实施方案中，抗体可变结构域是Fab的轻链的可变结构域。抗体可变结构域可以是抗体重链的可变结构域。在实施方案中，抗体可变结构域是抗体片段的重链的可变结构域。在实施方案中，抗体可变结构域是抗体变体的重链的可变结构域。在实施方案中，抗体可变结构域是Fab的重链的可变结构域。鉴于以上，本文提供的抗体可变结构域可以包括或者是抗体、其片段或变体的轻链的可变结构域或者抗体、其片段或变体的重链的可变结构域。因此，在实施方案中，抗体可变结构域是抗体轻链可变结构域。在实施方案中，抗体可变结构域是抗体重链可变结构域。

本文提供的抗体可变结构域可以形成抗体、抗体变体或抗体片段的一部分。本文提供的抗体可变结构域(包括其实施方案)可以形成单链可变片段(scFv)的部分。在实施方案中，本文提供的抗体可变结构域(包括其实施方案)形成抗体构建体的一部分。抗体构建体可以是本文描述的抗体构建体(包括其实施方案)。因此，在另一方面，本发明提供了抗体构建体，其包括第一抗体肽，所述第一抗体肽包括：(i)第一抗体可变结构域，其包括如SEQID NO:1所示的CDR1、如SEQ ID NO:2所示的CDR 2和如SEQ ID NO:3所示的CDR 3；和(ii)与所述第一抗体可变结构域结合的第一抗体结构域。在实施方案中，抗体构建体是如图2A所示的构建体。

本文提供的“抗体构建体”是指重组多肽或重组多肽复合物，其包括抗体肽(例如第一抗体肽)，所述抗体肽包括抗体可变结构域(例如第一抗体可变结构域)和抗体结构域。在实施方案中，抗体构建体是本文所述的抗体。在实施方案中，抗体构建体是如本文所述的抗体变体。抗体构建体能够通过所述抗体可变结构域至少部分结合抗原，并且可以是单价或多价(例如二价或四价)多肽复合物。本文提供的抗体构建体可以包括一或多个抗体可变结构域(例如第一、第二、第三或第四抗体可变结构域)，形成一或多个抗体肽(例如第一抗体肽或第二抗体肽)的一部分。因此，抗体构建体能够通过一或多个(例如2、3或4个)抗体可变结构域至少部分结合抗原，并且可以因此被分别称为单价、二价或四价抗体构建体。

本文提供的抗体构建体包括至少一个抗体肽。如本文提供的“抗体肽”是包括本文提供的抗体可变结构域与一或多个重链恒定结构域(例如CH1、CH2或CH3)或其片段或变体的组合的多肽。本文提供的“重链恒定(CH)结构域”是形成抗体或其片段的重链的恒定区的一部分的结构域(例如重链恒定1(CH1)结构域、重链恒定2(CH2)结构域、重链恒定3(CH3)结构域)。

在实施方案中，抗体肽(例如第一抗体肽)包括抗体轻链可变结构域(例如第一抗体轻链可变结构域)、重链恒定2(CH2)结构域(例如第一CH2结构域)和重链恒定3(CH3)结构域(例如第一CH3结构域)。在实施方案中，抗体肽包括第一抗体轻链可变结构域、第二抗体轻链可变结构域、重链恒定2(CH2)结构域和重链恒定3(CH3)结构域。在实施方案中，抗体肽包括抗体轻链可变结构域、重链恒定1(CH1)结构域、重链恒定2(CH2)结构域和重链恒定3(CH3)结构域。对于以上实施方案，结构域和区域的列出顺序相应于它们在抗体肽中从N末端到C末端的顺序。因此，在N端至C端方向，抗体肽可包括抗体轻链可变结构域、重链恒定2(CH2)结构域和重链恒定3(CH3)结构域。此外，在N端至C端方向，抗体肽可包括第一抗体轻链可变结构域、第二抗体轻链可变结构域、重链恒定2(CH2)结构域和重链恒定3(CH3)结构域或者抗体轻链可变结构域、重链恒定1(CH1)结构域、重链恒定2(CH2)结构域和重链恒定3(CH3)结构域。

如上所述，抗体构建体可包括一种以上的抗体肽。在实施方案中，抗体构建体包括彼此结合的第一抗体肽和第二抗体肽。第一抗体肽可以通过化学接头与第二抗体肽结合。第一抗体肽可以通过共价键与第二抗体肽结合。第一抗体肽可以通过非共价键与第二抗体肽结合。第一抗体肽可以与第二抗体肽结合以形成二聚体。

抗体构建体可以进一步包括第一轻链抗体肽和第二轻链抗体肽，其中第一轻链抗体肽和第一抗体肽结合在一起，并且第二轻链抗体肽和第二抗体肽结合在一起。本文提供的轻链抗体肽是指包括本文提供的抗体可变结构域和轻链恒定区/结构域(CL)的多肽。本文提供的“轻链恒定(CL)结构域”是指抗体或其片段的轻链的恒定区。在实施方案中，轻链抗体肽(第一或第二轻链抗体肽)包括抗体轻链可变结构域和轻链恒定结构域(CL)。因此，在N端至C端方向，轻链抗体肽可包括抗体轻链可变结构域和轻链恒定结构域(CL)。第一轻链抗体肽可以通过化学接头(共价或非共价)结合至第一抗体肽，且第二轻链抗体肽可以通过化学接头(共价或非共价)结合至第二抗体肽。

如本文所提及，“抗体结构域”是包括如上所述的重链恒定区(CH)的多肽的一部分。抗体结构域可包括一或多个重链恒定结构域(例如CH1、CH2和CH3)。在实施方案中，抗体结构域包括恒定重链2(CH2)结构域和恒定重链3(CH3)结构域。在实施方案中，抗体结构域包括恒定重链1(CH1)结构域、恒定重链2(CH2)结构域和恒定重链3(CH3)结构域。在N端至C端方向，抗体结构域可包括恒定重链2(CH2)结构域和恒定重链3(CH3)结构域。在实施方案中，抗体结构域在N端至C端方向上包括恒定重链1(CH1)结构域、恒定重链2(CH2)结构域和恒定重链3(CH3)结构域。在实施方案中，抗体结构域是人抗体结构域。在实施方案中，抗体结构域是小鼠抗体结构域。在实施方案中，抗体结构域是恒定重链。本文提供的“恒定重链”是包括抗体的一或多个重链恒定结构域的肽基部分。

在实施方案中，抗体构建体是单价抗体构建体。本文提供的单价抗体构建体是指抗体构建体，其包括第一抗体肽，所述第一抗体肽包括一个抗体可变结构域(例如第一抗体可变结构域)，其中所述构建体通过所述一个抗体可变结构域至少部分结合抗原。本文提供的单价抗体构建体可以是单链抗体(scFv)，其中抗体可变结构域(例如第一抗体可变结构域)通过化学接头(例如肽接头)与可变重链结构域(例如第一可变重链结构域)结合。如本文提供的“可变重链结构域”是包括FR(构架区)和CDR并且能够结合抗原的肽基部分。在实施方案中，可变重链结构域包括可变重链(VH)。在实施方案中，可变重链结构域是可变重链(VH)。因此，在实施方案中，第一抗体结构域是第一可变重链结构域。在实施方案中，抗体构建体是单链抗体(scFv)。在实施方案中，抗体构建体是单域抗体(纳米抗体)。

本文提供的单价抗体构建体可以包括第一抗体肽，该第一抗体肽包括通过化学接头与第一抗体结构域结合的第一抗体可变结构域。在实施方案中，化学接头是共价接头。在实施方案中，接头是键。在实施方案中，第一抗体结构域是第一恒定重链。在实施方案中，第一恒定重链包括结合至第一恒定重链3(CH3)结构域的第一恒定重链2(CH2)结构域。在实施方案中，第一CH3结构域通过第一CH2结构域结合至第一抗体可变结构域。在实施方案中，第一恒定重链2(CH2)结构域通过共价接头与所述第一恒定重链3(CH3)结构域结合。在进一步的实施方案中，第一恒定重链2(CH2)结构域通过键与所述第一恒定重链3(CH3)结构域结合。

本文提供的第一抗体肽可包括一或多个恒定重链结构域(例如CH1，CH2，CH3)。在实施方案中，第一抗体肽还包括第一恒定重链1(CH1)结构域。在实施方案中，第一CH1结构域形成第一抗体结构域的一部分。在实施方案中，第一抗体可变结构域通过第一CH1结构域结合至第一抗体结构域。在实施方案中，第一抗体可变结构域通过化学接头与第一CH1结构域结合。在实施方案中，第一抗体可变结构域通过键结合至第一CH1结构域。在实施方案中，第一抗体可变结构域通过第一CH1结构域结合至第一CH2结构域。在实施方案中，第一CH 2结构域通过化学接头与第一CH1结构域结合。在实施方案中，第一CH2结构域通过肽接头与第一CH1结构域结合。

在一个实施方案中，第一抗体可变结构域是抗体轻链可变结构域，第一抗体结构域是第一恒定重链，其由与第一CH3结构域结合的第一CH2结构域组成，其中第一抗体可变结构域通过第一CH2结构域与第一CH3结构域结合。在另一个实施方案中，第一抗体可变结构域是抗体轻链可变结构域，第一抗体结构域是第一恒定重链，其由通过第一CH2结构域与第一CH3结构域结合的第一CH1结构域组成，其中第一抗体可变结构域通过CH1结构域与CH2结构域结合。

本文提供的抗体构建体(包括其实施方案)可以是二价抗体构建体。当本文提供的抗体构建体是二价构建体时，抗体构建体包括第二抗体可变结构域。在二价抗体构建体中，第二抗体可变结构域可以形成第一抗体肽的一部分。当第二抗体可变结构域形成第一抗体肽的一部分时，第二抗体可变结构域通过第一抗体可变结构域与抗体结构域结合。因此，在实施方案中，第一抗体肽包括通过第一抗体可变结构域与抗体结构域结合的第二抗体可变结构域。在一个实施方案中，第一抗体可变结构域是第一抗体轻链可变结构域，第二抗体可变结构域是第二抗体轻链可变结构域并且第一抗体结构域是第一恒定重链，其由结合至第一CH3结构域的第一CH2结构域组成，其中第二抗体可变结构域通过第一抗体可变结构域结合至第一抗体结构域。

或者，第二抗体可变结构域可以形成第二抗体肽的一部分。因此，在实施方案中，抗体构建体是二价抗体构建体，其还包括与第一抗体肽结合的第二抗体肽。第二抗体肽可以通过化学接头与第一抗体肽结合以形成二聚体。化学接头可以是共价接头。在实施方案中，化学接头是二硫化物接头(disulfide linker)。在实施方案中，第二抗体肽结合至第一抗体结构域。在实施方案中，第二抗体肽结合至第一CH2结构域。在实施方案中，第二抗体肽通过二硫化物接头与第一抗体结构域结合。

在实施方案中，第二抗体肽和第一抗体肽在化学上是相同的。在实施方案中，第二抗体肽和第一抗体肽在化学上是不同的。因此，在实施方案中，第一抗体肽与第二抗体肽结合形成同二聚体。在实施方案中，第一抗体肽与第二抗体肽结合形成异二聚体。

如上所述，第一抗体肽和第二抗体肽可以在化学上是相同的。因此，本文提供的第二抗体肽可包括具有与第一抗体肽相同的化学组成的相同结构域(例如抗体可变结构域和抗体结构域)。因此，本文提供的第二抗体肽可包括(i)第二抗体可变结构域；和(ii)与第二抗体可变结构域结合的第二抗体结构域。因此，在实施方案中，第二抗体可变结构域包括SEQ ID NO:1所示的CDR 1、SEQ ID NO:2所示的CDR 2和SEQ ID NO:3所示的CDR3。

在实施方案中，第二抗体结构域是第二恒定重链。在实施方案中，第二恒定重链包括与第二恒定重链3(CH3)结构域结合的第二恒定重链2(CH2)结构域。在实施方案中，第二恒定重链2(CH2)结构域通过化学接头与第二抗体可变结构域结合。在实施方案中，第二恒定重链2(CH2)结构域通过键与第二抗体可变结构域结合。在实施方案中，第二CH3结构域通过第二CH2结构域与第二抗体可变结构域结合。在实施方案中，第二CH3结构域通过化学接头与第二CH2结构域结合。在实施方案中，第二CH3结构域通过键与第二CH2结构域结合。

在一个实施方案中，第一抗体可变结构域是抗体轻链可变结构域，第二抗体可变结构域是第二抗体轻链可变结构域，第一抗体结构域是第一恒定重链，该第一恒定重链由与第一CH3结构域结合的第一CH2结构域组成，以及第二抗体结构域是第二恒定重链，该第二恒定重链由与第二CH3结构域结合的第二CH2结构域组成，其中第一抗体肽和第二抗体肽结合在一起。

在实施方案中，第二抗体肽进一步包括第二恒定重链1(CH1)结构域。在实施方案中，第二CH1结构域形成第二抗体结构域的一部分。在实施方案中，第二抗体可变结构域通过第二CH1结构域与第二抗体结构域结合。在实施方案中，第二抗体可变结构域通过化学接头与第二CH1结构域结合。在实施方案中，第二抗体可变结构域通过键与第二CH1结构域结合。在实施方案中，第二抗体可变结构域通过第二CH1结构域与第二CH2结构域结合。在实施方案中，第二CH2结构域通过化学接头与第二CH1结构域结合。在实施方案中，第二CH2结构域通过肽接头与第二CH1结构域结合。

在实施方案中，第一CH1结构域和第二CH1结构域结合在一起。在实施方案中，第一CH1结构域和第二CH1结构域通过化学接头结合。

本文提供的抗体构建体(包括其实施方案)可以是四价抗体构建体。当本文提供的抗体构建体(包括其实施方案)是四价抗体构建体时，抗体构建体包括本文提供的四个抗体可变结构域(例如第一、第二、第三和第四抗体可变结构域)。在四价抗体构建体中，第三抗体可变结构域可以形成第一抗体肽的一部分，第四抗体可变结构域可以形成第二抗体肽的一部分。当第三抗体可变结构域形成第一抗体肽的一部分及第四抗体可变结构域形成第二抗体肽的一部分时，第三抗体可变结构域通过第一抗体可变结构域与第一抗体结构域结合，第四抗体可变结构域通过第二抗体可变结构域与第二抗体结构域结合。因此，第一抗体肽可以包括通过第一抗体可变结构域与第一抗体结构域结合的第三抗体可变结构域，第二抗体肽可以包括通过第二抗体可变结构域与第二抗体结构域结合的第四抗体可变结构域。因此，在实施方案中，抗体构建体是四价抗体构建体，其进一步包括与第一抗体肽结合的第三抗体可变结构域和与第二抗体肽结合的第四抗体可变结构域。在实施方案中，第三抗体可变结构域形成第一抗体肽的一部分，第四抗体可变结构域形成第二抗体肽的一部分。在实施方案中，第三抗体可变结构域通过第一抗体可变结构域与第一抗体结构域结合。在实施方案中，第三抗体可变结构域通过第一抗体可变结构域与第一CH2结构域结合。在实施方案中，第四抗体可变结构域通过第二抗体可变结构域与第二抗体结构域结合。在实施方案中，第四抗体可变结构域通过第二抗体可变结构域与第二CH2结构域结合。

在一个实施方案中，第一抗体可变结构域是第一抗体轻链可变结构域，第二抗体可变结构域是第二抗体轻链可变结构域，第三抗体可变结构域是第三抗体轻链可变结构域，第四抗体可变结构域是第四抗体轻链可变结构域，第一抗体结构域是由与第一CH3结构域结合的第一CH2结构域组成的第一恒定重链，以及第二抗体结构域是由与第二CH3结构域结合的第二CH2结构域组成的第二恒定重链，其中第一抗体肽和第二抗体肽结合在一起。

或者，第三抗体可变结构域可以形成第一轻链抗体肽的一部分，第四抗体可变结构域可以形成第二轻链抗体肽的一部分，其中第一轻链抗体肽与第一抗体肽结合，并且第二轻链抗体肽与第二抗体肽结合。第一轻链抗体肽可以通过化学接头与第一抗体肽结合。第一轻链抗体肽可以通过共价接头与第一抗体肽结合。第一轻链抗体肽可以通过二硫化物接头与第一抗体肽结合。第二轻链抗体肽可以通过化学接头与第二抗体肽结合。第二轻链抗体肽可以通过共价接头与第二抗体肽结合。第二轻链抗体肽可以通过二硫化物接头与第二抗体肽结合。因此，在实施方案中，第三抗体可变结构域形成与第一抗体肽结合的第一轻链抗体肽的一部分，第四抗体可变结构域形成与第二抗体肽结合的第二轻链抗体肽的一部分。

在实施方案中，第一轻链抗体肽包括与第三抗体可变结构域结合的第一恒定轻链1(CL1)结构域。在实施方案中，第一轻链抗体肽通过第一CL1结构域与第一抗体肽结合。在实施方案中，第一CL1结构域通过化学接头与第一CH1结构域结合。在实施方案中，第一CL1结构域通过二硫化物接头与第一CH1结构域结合。在实施方案中，第三抗体可变结构域通过第一CL1结构域与第一抗体肽结合。

在实施方案中，第二轻链抗体肽包括与第四抗体可变结构域结合的第二恒定轻链1(CL1)结构域。在实施方案中，第二轻链抗体肽通过第二CL1结构域与第二抗体肽结合。在实施方案中，第二CL1结构域通过化学接头与第二CH1结构域结合。在实施方案中，第二CL1结构域通过二硫化物接头与第二CH1结构域结合。在实施方案中，第四抗体可变结构域通过第二CL1结构域与第二抗体肽结合。

在一个实施方案中，第一抗体可变结构域是第一抗体轻链可变结构域，第二抗体可变结构域是第二抗体轻链可变结构域，第三抗体可变结构域是第三抗体轻链可变结构域，第四抗体可变结构域是第四抗体轻链可变结构域，第一抗体结构域是由通过第一CH2结构域与第一CH3结构域结合的第一CH1结构域组成的第一恒定重链，第二抗体结构域是由通过第二CH2结构域与第二CH3结构域结合的第二CH1结构域组成的第二恒定重链，其中第三抗体可变结构域形成第一抗体轻链肽的一部分，第四抗体可变结构域形成第二抗体轻链肽的一部分，第一抗体轻链肽与第一抗体肽结合，第二抗体轻链肽与第二抗体肽结合。在另一个实施方案中，第一抗体肽和第二抗体肽结合在一起。

本文提供的抗体构建体是重组多肽，其可以包括抗体的部分或片段(例如CDR，FR，VL，VH，CH1，CH2，CH3结构域)。在实施方案中，抗体构建体是抗体。在实施方案中，抗体构建体是抗体变体。

在实施方案中，抗体构建体是Fab'片段。在实施方案中，抗体构建体是嵌合抗体。在实施方案中，抗体构建体是人源化抗体。在实施方案中，抗体构建体是人抗体。

本文提供的抗体构建体涉及治疗用途。本文提供的抗体构建体特异性靶向癌细胞并避免健康细胞的能力使其尤其可用于癌症治疗。本文提供的抗体构建体(包括其实施方案)，在使癌细胞裂解的同时，可以包括其它治疗剂和/或与用于治疗或预防疾病如癌症的其它治疗剂一起施用。在实施方案中，抗体构建体或抗体可变结构域与治疗剂缀合或以其它方式共价结合。在实施方案中，抗体构建体或抗体可变结构域是抗体-药物缀合物。

本文提供的抗体构建体进一步涉及用于诊断。本文提供的抗体构建体特异性靶向癌细胞并避免健康细胞的能力使它们独特地用于精确诊断癌症。因此，本文提供的抗体构建体(包括其实施方案)可以配有一或多个可检测部分以允许检测癌细胞。

在实施方案中，抗体构建体包括可检测部分。可检测部分可通过如上所述的化学接头与抗体构建体结合。在实施方案中，可检测部分是荧光部分。

在实施方案中，抗体构建体与癌蛋白结合。如本文所提供的“癌蛋白”是指由癌细胞而非健康细胞表达的任何蛋白质(例如表面受体，分泌的肽或信号传导肽)。在实施方案中，癌蛋白形成癌细胞的一部分。在实施方案中，癌细胞是淋巴样细胞。在实施方案中，癌细胞是B细胞。在实施方案中，癌细胞是套细胞淋巴瘤(MCL)细胞。在实施方案中，抗体构建体不结合非癌细胞。在实施方案中，相对于标准对照，抗体构建体不结合非癌细胞。在实施方案中，抗体构建体与非癌细胞的结合不可检测。

在一个实施方案中，抗体构建体是二价抗体构建体，其包括与第二抗体肽结合的第一抗体肽，其中第一抗体肽包括通过第一恒定重链2(CH2)结构域与第一恒定重链3(CH3)结构域结合的第一抗体轻链可变结构域，第二抗体肽包括通过第二恒定重链2(CH2)结构域与第二恒定重链3(CH3)结构域结合的第二抗体轻链可变结构域。在实施方案中，第一CH2结构域是鼠CH2结构域，第一CH3结构域是鼠CH3结构域，第二CH2结构域是鼠CH2结构域，以及第二CH3结构域是鼠CH3结构域。

在一个实施方案中，抗体构建体是二价抗体构建体，其包括与第二抗体肽结合的第一抗体肽，其中第一抗体肽包括通过第一恒定重链2(CH2)结构域与第一恒定重链3(CH3)结构域结合的第一抗体轻链可变结构域，第二抗体肽包括通过第二恒定重链2(CH2)结构域与第二恒定重链3(CH3)结构域结合的第二抗体轻链可变结构域。在实施方案中，第一CH2结构域是人CH2结构域，第一CH3结构域是人CH3结构域，第二CH2结构域是人CH2结构域，以及第二CH3结构域是人CH3结构域。

核酸组合物

本发明还提供了编码本文描述的抗体构建体(包括其实施方案)的分离的核酸。术语“编码”以其惯常含义使用，是指核酸包括产生蛋白质所需的遗传密码。

在实施方案中，提供了编码本文所述的抗体可变结构域(包括其实施方案)的分离的核酸。一方面，提供了编码本文所述的第一抗体肽(包括其实施方案)的分离的核酸。一方面，提供了编码本文所述的第二抗体肽(包括其实施方案)的分离的核酸。一方面，提供了编码本文所述的第一轻链抗体肽(包括其实施方案)的分离的核酸。一方面，提供了编码本文所述的第二轻链抗体肽(包括其实施方案)的分离的核酸。

在实施方案中，分离的核酸包括SEQ ID NO:4，SEQ ID NO:6，SEQ ID NO:7，SEQ IDNO:8或SEQ ID NO:9的序列。在实施方案中，分离的核酸包括SEQ ID NO:6的序列。在实施方案中，分离的核酸包括SEQ ID NO:7的序列。在实施方案中，分离的核酸包括SEQ ID NO:8的序列。在实施方案中，分离的核酸包括SEQ ID NO:9的序列。

在实施方案中，抗体构建体由包括SEQ ID NO:4，SEQ ID NO:6，SEQ ID NO:7，SEQID NO:8或SEQ ID NO:9的序列的分离的核酸编码。在实施方案中，抗体构建体由包括SEQID NO:4的序列的分离的核酸编码。在实施方案中，抗体构建体由包括SEQ ID NO:6的序列的分离的核酸编码。在实施方案中，抗体构建体由包括SEQ ID NO:7的序列的分离的核酸编码。在实施方案中，抗体构建体由包括SEQ ID NO:8的序列的分离的核酸编码。在实施方案中，抗体构建体由包括SEQ ID NO:9的序列的分离的核酸编码。在实施方案中，抗体可变结构域由包含SEQ ID NO:4的核酸编码。在实施方案中，抗体可变结构域由SEQ ID NO:4编码。

在一个实施方案中，提供了分离的核酸，其在5'至3'方向编码第一抗体轻链可变结构域、肽接头、第一CH2结构域和第一CH3结构域。在另一个实施方案中，第一抗体轻链可变结构域由包括SEQ ID NO:4的核酸编码。在另一个实施方案中，第一CH2结构域和第一CH3结构域由包括SEQ ID NO:6的核酸编码。在另一个实施方案中，SEQ ID NO:4和SEQ ID NO:6形成同一核酸的一部分。在一个实施方案中，分离的核酸包括SEQ ID NO:4和SEQ ID NO:6。

在一个实施方案中，提供了分离的核酸，其在5'至3'方向编码第一抗体轻链可变结构域、第二抗体轻链可变结构域、第一CH2结构域和第一CH3结构域。在另一个实施方案中，第一抗体轻链可变结构域由包括SEQ ID NO:4的核酸编码，第二抗体轻链可变结构域由包括SEQ ID NO:4的核酸编码。在另一个实施方案中，第一CH2结构域和第一CH3结构域由包括SEQ ID NO:6的核酸编码。在另一个实施方案中，SEQ ID NO:4和SEQ ID NO:6形成同一核酸的一部分。在一个实施方案中，分离的核酸包括SEQ ID NO:4和SEQ ID NO:6。

在一个实施方案中，提供了分离的核酸，其在5'至3'方向编码第一抗体轻链可变结构域、第一CH1结构域、肽接头、第一CH2结构域和第一CH3结构域。在另一个实施方案中，第一抗体轻链可变结构域由包括SEQ ID NO:4的核酸编码。在另一个实施方案中，第一CH1结构域、第一CH2结构域和第一CH3结构域由包括SEQ ID NO:8的核酸编码。在另一个实施方案中，SEQ ID NO:4和SEQ ID NO:8形成同一核酸的一部分。在一个实施方案中，分离的核酸包括SEQ ID NO:4和SEQ ID NO:8。

在一个实施方案中，提供了分离的核酸，其在5'至3'方向编码第一抗体轻链可变结构域和第一恒定轻链(CL1)。在另一个实施方案中，第一抗体轻链可变结构域由包括SEQID NO:4的核酸编码。在另一个实施方案中，第一恒定轻链(CL1)由包括SEQ ID NO:9的核酸编码。在另一个实施方案中，SEQ ID NO:4和SEQ ID NO:9形成同一核酸的一部分。在一实施方案中，分离的核酸包括SEQ ID NO:4和SEQ ID NO:9。

药物组合物

在实施方案中，提供了药物组合物，其包括治疗有效量的本文所述的抗体可变结构域(包括其实施方案)，或本文所述的抗体构建体(包括其实施方案)，以及药学上可接受的赋形剂。在实施方案中，提供了药物组合物，其包括治疗有效量的本文所述的抗体可变结构域(包括其实施方案)，以及药学上可接受的赋形剂。在实施方案中，提供了药物组合物，其包括治疗有效量的本文所述的抗体构建体(包括其实施方案)，以及药学上可接受的赋形剂。

本文提供的“治疗有效量”是指有效实现其预期目的的量。对于特定应用有效的实际量将例如取决于所治疗的状况。当在治疗疾病的方法中施用时，本文所述的药物组合物含有一定量的活性抗体构建体，其有效地实现所需结果，例如减轻、消除或减慢疾病症状(例如癌症)的进展。确定本文提供的抗体构建体的治疗有效量完全在本领域技术人员的能力范围内，特别是考虑到本文的详细公开内容。

可接受的载体、赋形剂或稳定剂在所采用的剂量和浓度下对接受者无毒，并包括pH典型为5.0-8.0、最通常为6.0-7.0的缓冲剂如磷酸盐、柠檬酸盐或乙酸盐；使得等渗的盐如氯化钠、氯化钾等；抗氧化剂，防腐剂，低分子量多肽，蛋白质，亲水聚合物如聚山梨醇酯80，氨基酸如甘氨酸，碳水化合物，螯合剂，糖和其它本领域技术人员已知的标准成分(Remington's Pharmaceutical Science，第16版，Osol,A.Ed.1980)。抗体构建体典型以0.1-100mg/ml，例如1-10mg/ml或10-50mg/ml，例如5、10、20、30、40、50或60mg/ml的浓度存在。

包括本文所述的抗体构建体的药物组合物可以通过本领域已知的多种方法施用。施用途径和/或方式根据所需结果而变化。在实施方案中，施用是静脉内、肌内、腹膜内或皮下施用，或在靶部位附近施用。药学上可接受的赋形剂可以适合于静脉内、肌内、皮下、肠胃外、脊柱或表皮施用(例如通过注射或输注)。

抗体构建体的药物组合物可以根据本领域公知和常规实践的方法来制备。参见例如Remington:The Science and Practice of Pharmacy,Mack Publishing Co.，第20版，2000；及Sustained and Controlled Release Drug Delivery Systems,J.R.Robinson,ed.,Marcel Dekker,Inc.,New York,1978。药物组合物优选在GMP条件下制备。通常，将治疗有效剂量或有效剂量的抗体构建体用于本发明的药物组合物中。可以通过本领域技术人员已知的常规方法将本文提供的抗体构建体配制成药学上可接受的剂型。调整剂量方案以提供最佳的希望应答(例如治疗应答)。例如，可以施用单次推注，可以随时间施用数个分开的剂量，或者可以根据治疗情况的迫切需要按比例减少或增加剂量。抗体构建体与其它疗法或药物联合配制可能是有利的。为了易于施用和剂量均匀，以剂量单位形式配制肠胃外组合物可能是有利的。如本文所用，剂量单位形式是指适合于作为用于待治疗对象的单位剂量的物理上离散的单位；每个单位包含预定数量的抗体构建体，该预定数量经计算与所需的药物赋形剂一起产生所需的治疗效果。

可以改变本发明药物组合物中活性成分的实际剂量水平，以便活性成分的量对特定患者、组合物和施用方式实现希望的治疗应答且对患者无毒。选择的剂量水平取决于多种药代动力学因素，包括所用本发明特定组合物的活性，施用途径，施用时间，所用特定抗体的排泄速率，治疗持续时间，与所用特定组合物联合使用的其它药物、化合物和/或材料，年龄，性别，体重，状况，一般健康状况以及所治疗患者的既往病史，以及类似因素。

医师或兽医开始时可以将药物组合物中使用的本发明的抗体构建体的剂量低于达到期望的治疗效果所需的水平，并逐渐增加剂量直至达到期望的效果。通常，本发明组合物的有效剂量根据许多不同因素而变化，所述因素包括待治疗的具体疾病或状况，施用手段，靶部位，患者的生理状态，患者是人还是动物，施用的其它药物以及治疗是预防性还是治疗性的。需要调整治疗剂量以优化安全性和功效。为与抗体一起施用，剂量范围为约0.0001至约100mg/kg宿主体重，更通常为0.01至5mg/kg宿主体重。例如，剂量可以是1mg/kg体重或10mg/kg体重或在1-10mg/kg的范围内。一种示例性的治疗方案是每两周一次或每月一次或每3至6个月一次施用。

本文提供的抗体构建体可以多次施用。单一剂量之间的间隔可以是每周、每月或每年。如通过测量患者中抗体构建体的血液水平所指示，间隔也可以是不规则的。在某些方法中，调整剂量以使血浆抗体构建体浓度达到1-1000μg/ml，在某些方法中为25-300μg/ml。或者，抗体可以作为缓释配制物施用，在这种情况下，需要较低频率施用。剂量和频率根据抗体构建体在患者体内的半衰期而变化。通常，人源化抗体(例如抗体构建体)显示出比嵌合抗体和非人抗体更长的半衰期。施用的剂量和频率可以根据治疗是预防性还是治疗性而变化。在预防性应用中，在很长一段时间内以相对不频繁的间隔施用相对低的剂量。一些患者终生持续接受治疗。在治疗应用中，有时需要以相对短的时间间隔使用相对高的剂量，直到疾病的进展降低或终止，并且优选直到患者显示出疾病症状的部分或完全缓解。此后，可以给患者施用预防方案。

治疗方法

在实施方案中，提供了一种在有需要的对象中治疗癌症的方法，该方法包括给所述对象施用治疗有效量的本文所述的抗体可变结构域(包括其实施方案)，或本文所述的抗体构建体(包括其实施方案)，由此治疗所述对象的癌症。

在实施方案中，提供了一种在有需要的对象中治疗癌症的方法，该方法包括给所述对象施用治疗有效量的本文所述的抗体可变结构域(包括其实施方案)，从而治疗所述对象的癌症。

在实施方案中，提供了一种在有需要的对象中治疗癌症的方法，该方法包括给对象施用治疗有效量的本文所述的抗体构建体(包括其实施方案)，从而治疗所述对象的癌症。

在实施方案中，所述癌症是淋巴瘤、白血病或骨髓瘤。在实施方案中，所述癌症是淋巴瘤。在实施方案中，所述癌症是骨髓瘤。

在实施方案中，淋巴瘤是套细胞淋巴瘤、滤泡型淋巴瘤、弥漫型大B细胞淋巴瘤、边缘带淋巴瘤或Burkitt’s淋巴瘤。在实施方案中，淋巴瘤是套细胞淋巴瘤。在实施方案中，淋巴瘤是滤泡型淋巴瘤。在实施方案中，淋巴瘤是弥漫型大B细胞淋巴瘤。在实施方案中，淋巴瘤是边缘带淋巴瘤。在一些实施方案中，淋巴瘤是Burkitt’s淋巴瘤。

在实施方案中，白血病是成淋巴细胞性白血病、慢性淋巴细胞性白血病或毛细胞白血病。在实施方案中，白血病是成淋巴细胞性白血病。在实施方案中，白血病是慢性淋巴细胞性白血病。在实施方案中，白血病是毛细胞白血病。

在实施方案中，所述方法进一步包括给对象施用第二种治疗剂。如上所述，治疗剂是可用于治疗或预防疾病如癌症的组合物。在实施方案中，所述第二种治疗剂是抗癌剂。

“抗癌剂”按照其直接的普通含义使用，是指具有抗肿瘤性质或抑制细胞生长或增殖的能力的组合物(例如化合物，药物，拮抗剂，抑制剂，调节剂)。在一些实施方案中，抗癌剂是化疗剂。在一些实施方案中，抗癌剂是本文指明的在治疗癌症的方法中有用的药物。在一些实施方案中，抗癌剂是由FDA或美国以外的国家的类似监管机构批准的用于治疗癌症的药物。抗癌剂的实例包括但不限于MEK(例如MEK1，MEK2或MEK1和MEK2)抑制剂(例如XL518，CI-1040，PD035901，司美替尼(selumetinib)/AZD6244，GSK1120212/曲美替尼(trametinib)，GDC-0973，ARRY-162，ARRY-300，AZD8330，PD0325901，U0126，PD98059，TAK-733，PD318088，AS703026，BAY 869766)，烷化剂(例如环磷酰胺，异环磷酰胺，苯丁酸氮芥，白消安，美法仑，氮芥(mechlorethamine)，乌拉莫司汀，塞替派，亚硝基脲，氮芥(例如mechloroethamine，环磷酰胺，苯丁酸氮芥，meiphalan)，乙撑亚胺和甲基三聚氰胺(例如六甲基三聚氰胺，噻替派)，烷基磺酸盐(例如白消安)，亚硝基脲(例如卡莫司汀，洛莫司汀，司莫司汀，链脲霉素)，三氮烯(去卡巴嗪)，抗代谢物(例如5-硫唑嘌呤，亚叶酸，卡培他滨，氟达拉滨，吉西他滨，培美曲塞，雷替曲塞，叶酸类似物(例如甲氨蝶呤)或嘧啶类似物(例如氟尿嘧啶，氟瑞啶(floxouridine)，阿糖胞苷)，嘌呤类似物(例如巯基嘌呤，硫代鸟嘌呤，喷司他汀等)，植物生物碱(例如长春新碱，长春碱，长春瑞滨，长春地辛，鬼臼毒素，紫杉醇，多西他赛等)，拓扑异构酶抑制剂(例如伊立替康，托泊替康，安吖啶，依托泊苷(VP16)，磷酸依托泊苷，替尼泊苷等)，抗肿瘤抗生素(例如多柔比星，阿霉素，柔红霉素，表柔比星，放线菌素，博来霉素，丝裂霉素，米托蒽醌，普卡霉素等)，铂基化合物(例如顺铂，奥沙利铂，卡铂)，蒽二酮(例如米托蒽醌)，取代的尿素(例如羟基脲)，甲基肼衍生物(例如丙卡巴肼)，肾上腺皮质激素抑制剂(例如米托坦，氨鲁米特)，表鬼臼毒素(例如依托泊苷)，抗生素(例如柔红霉素，多柔比星，博来霉素)，酶(例如L-天冬酰胺酶)，丝裂原活化蛋白激酶信号传导抑制剂(例如U0126，PD98059，PD184352，PD0325901，ARRY-142886，SB239063，SP600125，BAY 43-9006，渥曼青霉素，或者LY294002，Syk抑制剂，mTOR抑制剂，抗体(例如美罗华(rituxan))，棉酚(gossyphol)，genasense，多酚E，Chlorofusin，所有反式维甲酸(ATRA)，苔藓抑素，肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)，5-氮-2'-脱氧胞苷，所有反式视黄酸，多柔比星，长春新碱，依托泊苷，吉西他滨，伊马替尼(Gleevec.RTM.)，格尔德霉素，17-N-烯丙基氨基-17-去甲氧基格尔德霉素(17-AAG)，黄酮哌啶醇(flavopiridol)，LY294002，硼替佐米，曲妥珠单抗，BAY11-7082，PKC412，PD184352，20-epi-1，25二羟基维生素D3；5-乙炔尿嘧啶；阿比特龙；阿柔比星；酰基富烯；adecypenol；阿多来新；阿地白介素；ALL-TK拮抗剂；六甲蜜胺；氨莫司汀；amidox；氨磷汀；氨基酮戊酸；氨柔比星；安吖啶；阿那格雷；阿那曲唑；穿心莲内酯；血管生成抑制剂；拮抗剂D；拮抗剂G；antarelix；抗背突形态发生蛋白-1(anti-dorsalizing morphogenetic protein-1)；抗雄激素，前列腺癌；抗雌激素；抗瘤物(antineoplaston)；反义寡核苷酸；阿非科林甘氨酸盐；凋亡基因调节剂；凋亡调节剂；脱嘌呤核酸；ara-CDP-DL-PTBA；精氨酸脱氨酶；asulacrine；阿他美坦；阿莫司汀；axinastatin1；axinastatin 2；axinastatin 3；阿扎司琼；阿扎毒素；重氮酪氨酸；浆果赤霉素III衍生物；balanol；巴马司他；BCR/ABL拮抗剂；benzochlorins；苯酰基星状孢子素(benzoylstaurosporine)；β内酰胺衍生物；beta-alethine；betaclamycin B；白桦脂酸；bFGF抑制剂；比卡鲁胺；比生群；双氮丙定基精胺(bisaziridinylspermine)；双奈法德；双枸橼酸环己噻卓酯A(bistratene A)；比折来新；breflate；溴匹立明；布度钛；丁硫氨酸硫酸亚胺；卡泊三醇；calphostin C；喜树碱衍生物；金丝雀痘IL-2；卡培他滨；咪唑羧酰胺-氨基-三唑；羧基酰胺三唑；CaRestM3；CARN 700；软骨衍生抑制剂；卡折来新；酪蛋白激酶抑制剂(ICOS)；栗精胺；杀菌肽B；西曲瑞克；二氢卟酚类；氯喹噁啉氨苯磺胺(chloroquinoxaline sulfonamide)；西卡前列素；顺式卟啉；克拉屈滨；氯米芬类似物；克霉唑；collismycin A；collismycin B；考布他汀A4；考布他汀类似物；conagenin；crambescidin 816；克立那托；cryptophycin8；cryptophycin A衍生物；curacin A；环五蒽醌类(cyclopentanthraquinones)；cycloplatam；cypemycin；cytarabine ocfosfate；溶细胞因子；磷酸己烷雌酚；达昔单抗；地西他滨；脱氢代代宁B；地洛瑞林；地塞米松；dexifosfamide；右雷佐生；右维拉帕米；地吖醌；代代宁B；didox；二乙基正精胺(diethylnorspermine)；二氢-5-氮胞苷；9-dioxamycin；二苯基螺莫司汀；二十二醇；多拉司琼；去氧氟尿苷；屈洛昔芬；屈大麻酚；多卡米星SA；依布硒；依考莫司汀；依地福新；依决洛单抗；依氟鸟氨酸；榄香烯；乙嘧替氟；表柔比星；爱普列特；雌氮芥类似物；雌激素激动剂；雌激素拮抗剂；依他硝唑；磷酸依托泊苷；依西美坦；法倔唑；法扎拉滨；芬维A胺；非格司亭；非那雄胺；黄酮哌啶醇(flavopiridol)；氟卓斯汀；fluasterone；氟达拉滨；fluorodaunorunicin hydrochloride；福酚美克；福美坦；福司曲星；福莫司汀；gadoliniumtexaphyrin；硝酸镓；加洛他滨；加尼瑞克；明胶酶抑制剂；吉西他滨；谷胱甘肽抑制剂；hepsulfam；神经生长因子(heregulin)；六亚甲基二乙酰胺；金丝桃素；伊班膦酸；伊达比星；艾多昔芬；伊决孟酮；伊莫福新；伊洛马司他；咪唑并吖啶酮类(imidazoacridones)；咪喹莫特；免疫刺激肽；胰岛素样生长因子-1受体抑制剂；干扰素激动剂；干扰素；白介素；碘苄胍；碘阿霉素；甘薯苦醇，4-；伊罗普拉；伊索拉定；isobengazole；isohomohalicondrinB；伊他司琼；jasplakinolide；kahalalide F；lamellarin-N triacetate；兰瑞肽；leinamycin；来格司亭；硫酸香菇多糖；leptolstatin；来曲唑；白血病抑制因子；白细胞α干扰素；亮丙瑞林+雌激素+孕酮；亮丙瑞林；左旋咪唑；利阿唑；线性多胺类似物；亲脂性二糖肽；亲脂性铂化合物；lissoclinamide 7；洛铂；胍乙基磷酸丝氨酸(lombricine)；洛美曲索；氟尼达明；洛索蒽醌；洛伐他汀；洛索立宾；勒托替康；lutetium texaphyrin；lysofylline；溶解肽；美坦辛；mannostatin A；马立马司他；马索罗酚；maspin；基质溶解因子抑制剂；基质金属蛋白酶抑制剂；美诺立尔；merbarone；美替瑞林；甲硫氨酸酶；甲氧氯普胺；MIF抑制剂；米非司酮；米替福新；米立司亭；错配双链RNA；米托胍腙；二溴卫矛醇；丝裂霉素类似物；米托萘胺；mitotoxin成纤维细胞生长因子-皂草素；米托蒽醌；莫法罗汀；莫拉司亭；单克隆抗体，人绒毛膜促性腺激素；单磷酰脂质A+分支杆菌细胞壁sk；莫哌达醇；多药耐药基因抑制剂；基于多肿瘤抑制基因1的疗法；芥子抗癌药；mycaperoxide B；分支杆菌细胞壁提取物；myriaporone；N-乙酰基地那林；N-取代的苯甲酰胺类；那法瑞林；nagrestip；纳洛酮+喷他佐辛；napavin；naphterpin；那托司亭；奈达铂；奈莫柔比星；奈立膦酸；中性内肽酶；尼鲁米特；nisamycin；一氧化氮调节剂；一氧化二氮抗氧化剂；nitrullyn；O6-苄基鸟嘌呤；奥曲肽；okicenone；寡核苷酸；奥那司酮；昂丹司琼；昂丹司琼；oracin；口服细胞因子诱导物；奥马铂；奥沙特隆；奥沙利铂；oxaunomycin；palauamine；棕榈酰根霉素(palmitoylrhizoxin)；帕米磷酸；人参三醇(panaxytriol)；帕诺米芬；parabactin；帕折普汀；培门冬酶；培得星；木聚硫钠；喷司他丁；pentrozole；全氟溴烷；培磷酰胺；紫苏子醇；吩嗪霉素(phenazinomycin)；乙酸苯酯；磷酸酶抑制剂；溶链菌制剂(picibanil)；盐酸毛果芸香碱；吡柔比星；吡曲克辛；placetin A；placetin B；纤溶酶原激活物抑制剂；铂复合物；铂化合物；铂-三胺复合物；卟吩姆钠；泊非霉素；泼尼松；丙基双吖啶酮；前列腺素J2；蛋白酶体抑制剂；基于蛋白A的免疫调节剂；蛋白激酶C抑制剂；蛋白激酶C抑制剂，microalgal；蛋白酪氨酸磷酸酶抑制剂；嘌呤核苷磷酸化酶抑制剂；红紫素；吡唑啉吖啶；吡啶氧基化血红蛋白聚氧乙烯缀合物(pyridoxylated hemoglobin polyoxyethylerie conjugate)；raf拮抗剂；雷替曲塞；雷莫司琼；ras法尼基蛋白转移酶抑制剂；ras抑制剂；ras-GAP抑制剂；去甲基化瑞替普汀；铼Re 186依替膦酸；根霉素；核酶；RII retinamide；罗谷亚胺；rohitukine；罗莫肽；罗喹美克；rubiginone B1；ruboxyl；沙芬戈；saintopin；SarCNU；sarcophytol A；沙格司亭；Sdi 1模拟物；司莫司汀；衰老衍生抑制剂1；有义寡核苷酸；信号转导抑制剂；信号转导调节剂；单链抗原结合蛋白；sizofuran；索布佐生；硼卡钠；苯乙酸钠；solverol；生长调节素结合蛋白；索纳明；磷乙天冬氨酸(sparfosic acid)；spicamycin D；螺莫司汀；splenopentin；spongistatin 1；角鲨胺；干细胞抑制剂；干细胞分裂抑制剂；stipiamide；基质溶素抑制剂；sulfinosine；强效血管活性肠肽拮抗剂；suradista；舒拉明；苦马豆素；合成葡糖氨基聚糖类；他莫司汀；tamoxifen methiodide；牛磺莫司汀；他扎罗汀；替可加兰钠；喃氟啶；tellurapyrylium；端粒酶抑制剂；替莫泊芬；替莫唑胺；替尼泊苷；tetrachlorodecaoxide；tetrazomine；thaliblastine；噻可拉林；血小板生成素；血小板生成素模拟物；胸腺法新；胸腺生成素受体激动剂；胸腺曲南；促甲状腺激素；锡乙基初红紫素(tin ethyl etiopurpurin)；替拉扎明；二氯环戊二烯钛；topsentin；托瑞米芬；全能干细胞因子；翻译抑制剂；维甲酸；三乙酰基尿苷；曲西立滨；三甲曲沙；曲普瑞林；托烷司琼；妥罗雄脲；酪氨酸激酶抑制剂；酪氨酸磷酸化抑制剂；UBC抑制剂；乌苯美司；泌尿生殖窦衍生生长抑制因子；尿激酶受体拮抗剂；伐普肽；variolin B；载体系统，红细胞基因疗法；维拉雷琐；藜芦明(veramine)；verdins；维替泊芬；长春瑞滨；vinxaltine；vitaxin；伏氯唑；扎诺特隆；折尼铂；亚苄维c(zilascorb)；净司他丁斯酯，亚德里亚霉素，放线菌素D，博来霉素，长春碱，顺铂，阿西维辛；阿柔比星；盐酸阿考达唑；阿克罗宁；阿多来新；阿地白介素；六甲蜜胺；安波霉素；醋酸阿美蒽醌；氨鲁米特；安吖啶；阿那曲唑；氨茴霉素；天冬酰胺酶；曲林菌素；阿扎胞苷；阿替派；阿佐霉素；巴马司他；苯佐替派；比卡鲁胺；盐酸比生群；bisnafide dimesylate；比折来辛；硫酸博来霉素；布喹那钠；溴匹立明；白消安；放线菌素c；卡普睾酮；卡醋胺；卡贝替姆；卡铂；卡莫司汀；盐酸卡柔比星；卡折来辛；西地芬戈；苯丁酸氮芥；西罗霉素；克拉屈滨；crisnatolmesylate；环磷酰胺；阿糖胞苷；达卡巴嗪；盐酸柔红霉素；地西他滨；右奥马铂；地扎胍宁；dezaguanine mesylate；地吖醌；多柔比星；盐酸多柔比星；屈洛昔芬；柠檬酸屈洛昔芬；丙酸甲雄烷酮；达佐霉素；依达曲沙；盐酸依氟鸟氨酸；依沙芦星；恩洛铂；恩普氨酯；依匹哌啶；盐酸表柔比星；厄布洛唑；盐酸依索比星；雌氮芥；雌氮芥磷酸钠；依他硝唑；依托泊苷；磷酸依托泊苷；氯苯乙嘧胺；盐酸法罗唑啉；法扎拉滨；芬维A胺；氟尿苷；磷酸氟达拉滨；氟尿嘧啶；氟西他滨(fluorocitabine)；磷喹酮；福司曲星钠；吉西他滨；盐酸吉西他滨；羟基脲；盐酸伊达比星；异环磷酰胺；iimofosine；白介素I1(包括重组白介素II，或rlL.sub.2)，干扰素α-2a；干扰素α-2b；干扰素α-n1；干扰素α-n3；干扰素β-1a；干扰素γ-1b；异丙铂；盐酸伊立替康；醋酸来瑞肽；来曲唑；醋酸亮丙瑞林；盐酸利阿唑；洛美曲索钠；洛莫司汀；盐酸洛索蒽醌；马索罗酚；美坦辛；盐酸氮芥；醋酸甲地孕酮；美仑孕酮乙酸盐；美法仑；美诺立尔；巯嘌呤；甲氨喋呤；甲氨喋呤钠；氯苯氨啶；美妥替哌；米丁度胺；mitocarcin；丝裂红素；米托洁林；米托马星；丝裂霉素；米托司培；米托坦；盐酸米托蒽醌；霉酚酸；nocodazoie；诺拉霉素；奥马铂；奥昔舒仑；培门冬酶；培利霉素；戊氮芥；硫酸培洛霉素；培磷酰胺；哌泊溴烷；哌泊舒凡；盐酸吡罗蒽醌；普利霉素；普洛美坦；卟吩姆钠；泊非霉素；泼尼氮芥；盐酸丙卡巴肼；嘌呤霉素；盐酸嘌呤霉素；吡唑霉素；利波腺苷；罗谷亚胺；沙芬戈；盐酸沙芬戈；司莫司汀；辛曲秦；磷乙酰天冬氨酸钠；司帕霉素；盐酸螺旋锗；螺莫司汀；螺铂；链黑霉素；链脲菌素；磺氯苯脲；他利霉素；替可加兰钠；喃氟啶；盐酸替洛蒽醌；替莫泊芬；替尼泊苷；替罗昔隆；睾内酯；硫咪嘌呤；硫鸟嘌呤；噻替派；噻唑羧胺核苷；替拉扎明；柠檬酸托瑞米芬；醋酸曲托龙；磷酸曲西立滨；三甲曲沙；葡糖醛酸三甲曲沙；曲普瑞林；盐酸妥布氯唑；尿嘧啶氮芥；乌瑞替派；伐普肽；维替泊芬；硫酸长春碱；硫酸长春新碱；长春地辛；硫酸长春地辛；硫酸长春匹定；硫酸长春甘酯；硫酸环氧长春碱；酒石酸长春瑞滨；硫酸异长春碱；硫酸长春利定；伏氯唑；折尼铂；净司他丁；盐酸佐柔比星，停滞细胞在G2-M期和/或调节微管形成或稳定性的物质(例如Taxol.^TM(即紫杉醇)，Taxotere.^TM，包含紫杉烷骨架的化合物，厄布洛唑(即R-55104)，多拉司他汀10(即DLS-10和NSC-376128)，羟乙基磺酸米伏布林(即作为CI-980)，长春新碱，NSC-639829，Discodermolide(即as NVP-XX-A-296)，ABT-751(Abbott，即E-7010)，Altorhyrtins(例如Altorhyrtin A和Altorhyrtin C)，Spongistatins(例如Spongistatin 1，Spongistatin2，Spongistatin 3，Spongistatin 4，Spongistatin 5，Spongistatin 6，Spongistatin 7，Spongistatin 8和Spongistatin 9)，盐酸西马多丁(即LU-103793和NSC-D-669356)，埃博霉素(Epothilone)(例如埃博霉素A，埃博霉素B，埃博霉素C(即脱氧埃博霉素A或dEpoA)，埃博霉素D(即KOS-862，dEpoB及脱氧埃博霉素B)，埃博霉素E，埃博霉素F，埃博霉素B N-氧化物，埃博霉素A N-氧化物，16-氮杂-埃博霉素B，21-氨基埃博霉素B(即BMS-310705)，21-羟基埃博霉素D(即脱氧埃博霉素F和dEpoF)，26-氟埃博霉素，Auristatin PE(即NSC-654663)，Soblidotin(即TZT-1027)，LS-4559-P(Pharmacia，即LS-4577)，LS-4578(Pharmacia，即LS-477-P)，LS-4477(Pharmacia)，LS-4559(Pharmacia)，RPR-112378(Aventis)，硫酸长春新碱，DZ-3358(Daiichi)，FR-182877(Fujisawa，即WS-9885B)，GS-164(Takeda)，GS-198(Takeda)，KAR-2(Hungarian Academy ofSciences)，BSF-223651(BASF，即ILX-651和LU-223651)，SAH-49960(Lilly/Novartis)，SDZ-268970(Lilly/Novartis)，AM-97(Armad/Kyowa Hakko)，AM-132(Armad)，AM-138(Armad/Kyowa Hakko)，IDN-5005(Indena)，Cryptophycin 52(即LY-355703)，AC-7739(Ajinomoto，即AVE-8063A和CS-39.HCl)，AC-7700(Ajinomoto，即AVE-8062，AVE-8062A，CS-39-L-Ser.HCl及RPR-258062A)，Vitilevuamide，Tubulysin A，Canadensol，矢车菊黄素(即NSC-106969)，T-138067(Tularik，即T-67，TL-138067和TI-138067)，COBRA-1(Parker Hughes Institute，即DDE-261和WHI-261)，H10(Kansas State University)，H16(Kansas State University)，Oncocidin A1(即BTO-956和DIME)，DDE-313(Parker Hughes Institute)，Fijianolide B，Laulimalide，SPA-2(Parker Hughes Institute)，SPA-1(Parker Hughes Institute，即SPIKET-P)，3-IAABU(Cytoskeleton/Mt.Sinai School of Medicine，即MF-569)，那可丁(Narcosine)(也称为NSC-5366)，Nascapine，D-24851(Asta Medica)，A-105972(Abbott)，Hemiasterlin，3-BAABU(Cytoskeleton/Mt.Sinai School of Medicine，即MF-191)，TMPN(Arizona State University)，Vanadocene acetylacetonate，T-138026(Tularik)，Monsatrol，lnanocine(即NSC-698666)，3-IAABE(Cytoskeleton/Mt.Sinai School ofMedicine)，A-204197(Abbott)，T-607(Tuiarik，即T-900607)，RPR-115781(Aventis)，Eleutherobins(如Desmethyleleutherobin，Desaetyleleutherobin，lsoeleutherobin A，和Z-Eleutherobin)，Caribaeoside，Caribaeolin，软海绵素B，D-64131(Asta Medica)，D-68144(Asta Medica)，Diazonamide A，A-293620(Abbott)，NPI-2350(Nereus)，Taccalonolide A，TUB-245(Aventis)，A-259754(Abbott)，Diozostatin，(-)-Phenylahistin(即NSCL-96F037)，D-68838(Asta Medica)，D-68836(Asta Medica)，Myoseverin B，D-43411(Zentaris，即D-81862)，A-289099(Abbott)，A-318315(Abbott)，HTI-286(即SPA-110，三氟乙酸盐)(Wyeth)，D-82317(Zentaris)，D-82318(Zentaris)，SC-12983(NCI)，Resverastatin phosphate sodium，BPR-OY-007(National Health ResearchInstitutes)，和SSR-250411(Sanofi))，甾类(例如地塞米松)，非那雄胺，芳香酶抑制剂，促性腺激素释放激素激动剂(GnRH)如戈舍瑞林或者亮丙瑞林，肾上腺皮质类固醇类(例如泼尼松)，孕激素(例如己酸羟孕酮，醋酸甲地孕酮，醋酸甲羟孕酮)，雌激素(例如己烯雌酚，炔雌醇)，抗雌激素(例如他莫昔芬)，雄激素(例如丙酸睾酮，氟甲睾酮)，抗雄激素(例如氟他胺)，免疫刺激剂(例如卡介苗(BCG)，左旋咪唑，白介素-2，α-干扰素等)，单克隆抗体(例如抗CD20，抗HER2，抗CD52，抗HLA-DR，和抗VEGF单克隆抗体)，免疫毒素(例如抗CD33单克隆抗体-加利车霉素缀合物，抗CD22单克隆抗体-假单胞菌外毒素缀合物等)，放射免疫疗法(例如缀合于¹¹¹In，⁹⁰Y或¹³¹I的抗CD20单克隆抗体等)，雷公藤内酯，高三尖杉酯碱，更生霉素，多柔比星，表柔比星，托泊替坎，伊曲康唑，长春地辛，西立伐他汀，长春新碱，脱氧腺苷，舍曲林，匹伐他汀，伊立替康，氯法齐明，5-壬基氧色胺，维罗非尼(vemurafenib)，达拉菲尼(dabrafenib)，埃罗替尼，吉非替尼，EGFR抑制剂，表皮生长因子受体(EGFR)靶向治疗或治疗剂(例如吉非替尼(Iressa^TM)，埃罗替尼(Tarceva^TM)，西妥昔单抗(Erbitux^TM)，拉帕替尼(Tykerb^TM)，帕尼单抗(Vectibix^TM)，凡德他尼(Caprelsa^TM)，阿法替尼/BIBW2992，CI-1033/卡奈替尼，来那替尼/HKI-272，CP-724714，TAK-285，AST-1306，ARRY334543，ARRY-380，AG-1478，达可替尼(dacomitinib)/PF299804，OSI-420/去甲基埃罗替尼，AZD8931，AEE788，培利替尼(pelitinib)/EKB-569，CUDC-101，WZ8040，WZ4002，WZ3146，AG-490，XL647，PD153035，BMS-599626)，索拉非尼，伊马替尼，舒尼替尼，达沙替尼等。

一方面，提供了一种在癌细胞中诱导细胞裂解的方法。该方法包括使癌细胞接触有效量的本文所述的抗体可变结构域(包括其实施方案)或本文所述的抗体构建体(包括其实施方案)和效应细胞，从而在癌细胞中诱导细胞裂解。在实施方案中，接触发生在癌症患者中。在实施方案中，接触发生在体外。在实施方案中，效应细胞是天然杀伤(NK)细胞。

实施例

实施例1:套细胞淋巴瘤特异性全人抗体的开发

新的癌症免疫疗法由于它们的前景优势正在快速进入临床。单克隆抗体和基于抗体的免疫治疗剂因为高特异性及已证实的抗肿瘤效果而是特别有吸引力的平台。免疫治疗剂目前针对一系列靶点在开发，但是，全部都是寻找肿瘤相关靶点，它们同时存在于恶性细胞及其良性同伴上。结果，这些治疗药物在消除肿瘤过程中都不可避免地耗竭健康的非恶性细胞。不能区分癌细胞和良性细胞限制了抗体开发并且降低了免疫治疗的成功。因此，开发特异性靶向肿瘤细胞的治疗剂是有吸引力但难以实现的概念。

采用申请人的全新细胞筛选技术，申请人成功地鉴别了不识别正常人B细胞的新的套细胞淋巴瘤(MCL)特异性人抗体轻链结合结构域(VL)。所述细胞筛选技术将申请人独特的人抗体文库掺入设计用于发现新靶点的噬菌体展示技术中。该文库包含已过滤除去结合正常人组织的Fv序列的高多样性人抗体可变片段(Fv)。申请人筛选了人MCL细胞系JeKo-1，成功地鉴别了MCL特异性VL。所述VL被工程化为新的人轻链结构域抗体变体：LC-Ab、(LC)₂-Ab和LCFv-Ab。这些变体通过从一组B细胞和T细胞非霍奇金淋巴瘤(NHL)区分出所有MCL而证实所述基于VL的抗体的特异性，并且明显不结合或者杀死正常人B淋巴细胞。由抗体介导的细胞毒性消除MCL在体外被证实，并且在体内通过在人MCL异种移植模型中的显著延长的整体存活率而证实。重要的是，在人源化小鼠中进行的体内人B细胞耗竭实验证实我们的MCL特异性抗体显示对正常人B细胞无细胞毒性。

申请人成功开发出新的基于全人抗体的药物，其能够特异性鉴别和杀死人MCL。这是首次已知报道具有抗MCL的诊断和临床治疗适应症的肿瘤特异性药物。

材料和方法

产生人抗体噬菌体展示文库从20个健康献血者的血沉棕黄层分离人B细胞。从分离的B细胞mRNA中拷贝出编码抗体重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)的cDNA。随机组合VH和VL cDNA以形成抗体单链可变片段(scFv)。根据制造商指导将每个scFv DNA序列工程化进重组噬菌体抗体系统噬粒pCANTAB 5E(GE Healthcare Life Sciences LittleChalfont,UK)中用于在M13噬菌体上表达。测序>200个克隆的scFv，证实噬菌体多样性。

噬菌体展示文库筛选：生物淘选人抗体scFv噬菌体展示文库经历了4轮生物淘选。每一轮后对噬菌体进行人抗体scFv测序及分析。计算噬菌体富集并鉴别了占优势的序列。

每一轮生物淘选如下：过滤噬菌体文库以排除结合正常人B细胞的噬菌体。来自正常PBMC的分离的B细胞与噬菌体文库保温。弃掉B细胞结合的噬菌体，提取未结合的噬菌体用于进一步生物淘选。提取的噬菌体进行保温以用于竞争结合，使用的CD20标记的恶性人细胞系(MCL JeKo-1,ATCC,Manassas,VA)和人正常B细胞的比例为1:5。结合恶性细胞系的噬菌体从分选的JeKo-1细胞洗脱并扩增用于测序和后续的生物淘选。噬菌体在噬菌体展示感受态TG1细胞(Lucigen,Middleton,WI)中根据制造商指导扩增。

产生抗体变体如图2A所示，将鉴别的轻链可变区(VL)与鼠或人IgG1恒定区进行基因融合。将表达质粒根据制造商指导转染进Freestyle 293表达系统(Thermo FisherScientific,Waltham,MA)。培养物上清中的重组抗体用HiTrap Protein A亲和层析柱(GEHealthcare,Marlborough,MA)根据制造商指导纯化。纯化的抗体经SDS凝胶确认。

表1：抗体/质粒及相应基因和登记号

非正式序列表

SEQ ID NO:1(CDR L1)

SGHSTYA

SEQ ID NO:2(CDR L2)

INSDGSH

SEQ ID NO:3(CDR L3)

QTWDTGIRV

SEQ ID NO:4(4-4轻链可变区DNA序列)

5’-CAGCCTGTGCTGACTCAATCGCCCTCTGCCTCTGCCTCCCTGGGAGCCTCGGTCAAGCTCACCTGCACTCTGAGCAGTGGCCACAGTACATACGCCGTCGCATGGCATCAATACCAGCCAGAGAAGGGCCCTCGATATTTGATGAAGATTAACAGTGATGGCAGCCACATCAAGGCGGTCGGGATTCCTGATCGATTCTCAGGCTCCAGCTCTGGGGCTGAGCGCTACCTCACCATCTCCAGCCTCCAATTTGAGGATGAGGGTGACTTTTATTGTCAGACGTGGGACACTGGCATTCGAGTGTTCGGCGGAGGGACCAAATTGACCGTCCTCGGTCAGCCCAAGGCT-3’

SEQ ID NO:5(4-4轻链可变区蛋白质序列[CDR以粗体示出])

SEQ ID NO:6(小家鼠(Mus musculus)IgG2b mRNA重链，克隆Mab23.1.3)

SEQ ID NO:7(智人(Homo sapiens)免疫球蛋白重链恒定G1m标记mRNA，cDNA克隆IMAGE:4851063)

SEQ ID NO:8(智人免疫球蛋白重链恒定G1m标记mRNA，cDNA克隆IMAGE:6295732)

SEQ ID NO:9(智人免疫球蛋白κ恒定mRNA，cDNA克隆IMAGE:5215019)

实施方案

实施方案1：一种抗体可变结构域，其包含SEQ ID NO:1所示的CDR1、SEQ ID NO:2所示的CDR 2和SEQ ID NO:3所示的CDR 3。

实施方案2：包含第一抗体肽的抗体构建体，所述第一抗体肽包含：(i)第一抗体可变结构域，其包含SEQ ID NO:1所示的CDR 1、SEQ ID NO:2所示的CDR 2和SEQ ID NO:3所示的CDR 3；和(ii)与所述第一抗体可变结构域结合的第一抗体结构域。

实施方案3：实施方案1的抗体可变结构域或者实施方案2的抗体构建体，其中所述抗体可变结构域是抗体轻链可变结构域。

实施方案4：实施方案1的抗体可变结构域或者实施方案2的抗体构建体，其中所述抗体可变结构域是抗体重链可变结构域。

实施方案5：实施方案2-4之一的抗体构建体，其中所述抗体构建体是单价抗体构建体。

实施方案6：实施方案2-5之一的抗体构建体，其中所述第一抗体结构域是第一可变重链结构域。

实施方案7：实施方案6的抗体构建体，其中所述抗体构建体是单链抗体(scFv)。

实施方案8：实施方案2的抗体构建体，其中所述第一抗体结构域是第一恒定重链。

实施方案9：实施方案8的抗体构建体，其中所述第一恒定重链包含与第一恒定重链3(CH3)结构域结合的第一恒定重链2(CH2)结构域。

实施方案10：实施方案9的抗体构建体，其中所述第一CH3结构域通过所述第一CH2结构域与所述第一抗体可变结构域结合。

实施方案11：实施方案10的抗体构建体，其中所述第一抗体肽进一步包含第一恒定重链1(CH1)结构域。

实施方案12：实施方案11的抗体构建体，其中所述第一CH1结构域形成所述第一抗体结构域的一部分。

实施方案13：实施方案11-12之一的抗体构建体，其中所述第一抗体可变结构域通过所述第一CH1结构域与所述第一抗体结构域结合。

实施方案14：实施方案11-13之一的抗体构建体，其中所述第一抗体可变结构域通过所述第一CH1结构域与所述第一CH2结构域结合。

实施方案15：实施方案2-14之一的抗体构建体，其中所述抗体构建体是进一步包含与所述第一抗体肽结合的第二抗体肽的二价抗体构建体。

实施方案16：实施方案15的抗体构建体，其中所述第二肽与所述第一抗体结构域结合。

实施方案17：实施方案15的抗体构建体，其中所述第二抗体肽与所述第一CH2结构域结合。

实施方案18：实施方案15-17之一的抗体构建体，其中所述第二抗体肽与所述第一抗体肽在化学上是相同的。

实施方案19：实施方案15-17之一的抗体构建体，其中所述第二抗体肽与所述第一抗体肽在化学上是不同的。

实施方案20：实施方案15-17之一的抗体构建体，其中所述第二抗体肽包含：(i)第二抗体可变结构域；和(ii)与所述第二抗体可变结构域结合的第二抗体结构域。

实施方案21：实施方案20的抗体构建体，其中所述第二抗体可变结构域包含SEQID NO:1所示的CDR 1、SEQ ID NO:2所示的CDR 2和SEQ ID NO:3所示的CDR 3。

实施方案22：实施方案20或21的抗体构建体，其中所述第二抗体结构域是第二恒定重链。

实施方案23：实施方案22的抗体构建体，其中所述第二恒定重链包含与第二恒定重链3(CH3)结构域结合的第二恒定重链2(CH2)结构域。

实施方案24：实施方案23的抗体构建体，其中所述第二CH3结构域通过所述第二CH2结构域与所述第二抗体可变结构域结合。

实施方案25：实施方案24的抗体构建体，其中所述第二抗体肽进一步包含第二恒定重链1(CH1)结构域。

实施方案26：实施方案25的抗体构建体，其中所述第二CH1结构域形成所述第二抗体结构域的一部分。

实施方案27：实施方案25-26之一的抗体构建体，其中所述第二抗体可变结构域通过所述第二CH1结构域与所述第二抗体结构域结合。

实施方案28：实施方案25-27之一的抗体构建体，其中所述第二抗体可变结构域通过所述第二CH1结构域与所述第二CH2结构域结合。

实施方案29：实施方案28的抗体构建体，其中所述第一CH1结构域和所述第二CH1结构域结合在一起。

实施方案30：实施方案15-29的抗体构建体，其中所述抗体构建体是进一步包含与所述第一抗体肽结合的第三抗体可变结构域和与所述第二抗体肽结合的第四抗体可变结构域的四价抗体构建体。

实施方案31：实施方案30的抗体构建体，其中所述第三抗体可变结构域形成所述第一抗体肽的一部分，以及所述第四抗体可变结构域形成所述第二抗体肽的一部分。

实施方案32：实施方案30或31的抗体构建体，其中所述第三抗体可变结构域通过所述第一抗体可变结构域与所述第一抗体结构域结合。

实施方案33：实施方案30-32之一的抗体构建体，其中所述第三抗体可变结构域通过所述第一抗体可变结构域与所述第一CH2结构域结合。

实施方案34：实施方案30-33之一的抗体构建体，其中所述第四抗体可变结构域通过所述第二抗体可变结构域与所述第二抗体结构域结合。

实施方案35：实施方案30-34之一的抗体构建体，其中所述第四抗体可变结构域通过所述第二抗体可变结构域与所述第二CH2结构域结合。

实施方案36：实施方案30的抗体构建体，其中所述第三抗体可变结构域形成与所述第一抗体肽结合的第一轻链抗体肽的一部分，以及所述第四抗体可变结构域形成与所述第二抗体肽结合的第二轻链抗体肽的一部分。

实施方案37：实施方案36的抗体构建体，其中所述第一轻链抗体肽包含与所述第三抗体可变结构域结合的第一恒定轻链1(CL1)结构域。

实施方案38：实施方案37的抗体构建体，其中所述第一轻链抗体肽通过所述第一CL1结构域与所述第一抗体肽结合。

实施方案39：实施方案37或38的抗体构建体，其中所述第三抗体可变结构域通过所述第一CL1结构域与所述第一抗体肽结合。

实施方案40：实施方案36-39之一的抗体构建体，其中所述第二轻链抗体肽进一步包含与所述第四抗体可变结构域结合的第二恒定轻链1(CL1)结构域。

实施方案41：实施方案40的抗体构建体，其中所述第二轻链抗体肽通过所述第二CL1结构域与所述第二抗体肽结合。

实施方案42：实施方案37或38的抗体构建体，其中所述第四抗体可变结构域通过所述第二CL1结构域与所述第二抗体肽结合。

实施方案43：实施方案2-42之一的抗体构建体，其中所述抗体构建体是抗体。

实施方案44：实施方案2-42之一的抗体构建体，其中所述抗体构建体是抗体变体。

实施方案45：实施方案2-42之一的抗体构建体，其中所述抗体构建体是Fab'片段。

实施方案46：实施方案2-42之一的抗体构建体，其中所述抗体构建体是嵌合抗体。

实施方案47：实施方案2-42之一的抗体构建体，其中所述抗体构建体是人源化抗体。

实施方案48：实施方案2-42之一的抗体构建体，其中所述抗体构建体是人抗体。

实施方案49：实施方案2-48之一的抗体构建体，其中所述抗体构建体包含可检测部分。

实施方案50：实施方案49的抗体构建体，其中所述可检测部分是荧光部分。

实施方案51：实施方案2-50之一的抗体构建体，其中所述抗体构建体与癌蛋白结合。

实施方案52：实施方案2-51之一的抗体构建体，其中所述癌蛋白质形成癌细胞的一部分。

实施方案53：实施方案52的抗体构建体，其中所述癌细胞是淋巴样细胞。

实施方案54：实施方案52或53的抗体构建体，其中所述癌细胞是B细胞。

实施方案55：分离的核酸，其编码实施方案1的所述抗体可变结构域、实施方案2-54之一的所述第一抗体肽、实施方案15-54之一的所述第二抗体肽、实施方案36-54之一的所述第一轻链抗体肽或者实施方案36-54之一的所述第二轻链抗体肽。

实施方案56：药物组合物，其包含治疗有效量的实施方案1的所述抗体可变结构域或者实施方案2-54之一的所述抗体构建体以及药学上可接受的赋形剂。

实施方案57：一种在有需要的对象中治疗癌症的方法，所述方法包括给对象施用治疗有效量的实施方案1的所述抗体可变结构域或者实施方案2-54之一的所述抗体构建体，从而在所述对象中治疗癌症。

实施方案58：实施方案57的方法，其中所述癌症是淋巴瘤、白血病或骨髓瘤。

实施方案59：实施方案58的方法，其中所述淋巴瘤是套细胞淋巴瘤、滤泡型淋巴瘤、弥漫型大B细胞淋巴瘤、边缘带淋巴瘤或Burkitt’s淋巴瘤。

实施方案60：实施方案58的方法，其中所述白血病是成淋巴细胞性白血病、慢性淋巴细胞性白血病或毛细胞白血病。

实施方案61：实施方案57-60之一的方法，所述方法进一步包括给所述对象施用第二种治疗剂。

序列表

<110> 希望之城

德克萨斯大学系统董事会

<120> 抗体可变结构域及抗体构建体

<130> 048440-660001WO

<150> 62/501,649

<151> 2017-05-04

<160> 9

<170> PatentIn version 3.5

<210> 1

<211> 7

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Synthetic polypeptide

<400> 1

Ser Gly His Ser Thr Tyr Ala

1 5

<210> 2

<211> 7

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Synthetic polypeptide

<400> 2

Ile Asn Ser Asp Gly Ser His

1 5

<210> 3

<211> 9

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Synthetic polypeptide

<400> 3

Gln Thr Trp Asp Thr Gly Ile Arg Val

1 5

<210> 4

<211> 348

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Synthetic polynucleotide

<400> 4

cagcctgtgc tgactcaatc gccctctgcc tctgcctccc tgggagcctc ggtcaagctc 60

acctgcactc tgagcagtgg ccacagtaca tacgccgtcg catggcatca ataccagcca 120

gagaagggcc ctcgatattt gatgaagatt aacagtgatg gcagccacat caaggcggtc 180

gggattcctg atcgattctc aggctccagc tctggggctg agcgctacct caccatctcc 240

agcctccaat ttgaggatga gggtgacttt tattgtcaga cgtgggacac tggcattcga 300

gtgttcggcg gagggaccaa attgaccgtc ctcggtcagc ccaaggct 348

<210> 5

<211> 116

<212> PRT

<213> Artificial sequence

<220>

<223> Synthetic polypeptide

<400> 5

Gln Pro Val Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ala Ser Ala Ser Leu Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Leu Thr Cys Thr Leu Ser Ser Gly His Ser Thr Tyr Ala

20 25 30

Val Ala Trp His Gln Tyr Gln Pro Glu Lys Gly Pro Arg Tyr Leu Met

35 40 45

Lys Ile Asn Ser Asp Gly Ser His Ile Lys Ala Val Gly Ile Pro Asp

50 55 60

Arg Phe Ser Gly Ser Ser Ser Gly Ala Glu Arg Tyr Leu Thr Ile Ser

65 70 75 80

Ser Leu Gln Phe Glu Asp Glu Gly Asp Phe Tyr Cys Gln Thr Trp Asp

85 90 95

Thr Gly Ile Arg Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly

100 105 110

Gln Pro Lys Ala

115

<210> 6

<211> 1440

<212> DNA

<213> Mus musculus

<400> 6

atggacaggc ttacttcttc attcctgctg ctgattgtcc ctgcatatgt cttgtcccaa 60

gttactctaa aagagtctgg ccctgggata ttgaagccct cacagaccct cagtctgact 120

tgttctttct ctgggttttc actgagcact tctggtatgg gtgtaggctg gattcgtcag 180

ccttcaggga agggtctgga gtggctggca cacatttggt gggatgatga taagcactat 240

aacccatccc taaagagcca gctcacaatc tccaaggatt cctccagaaa ccaggttttc 300

ctcaagatca ccagtgtgga cactgcagat actgccactt actactgtgt tcgaagatcc 360

ttttcatacg gtagtagccg ggactacttt gactactggg gccaaggcac cactctcaca 420

gtctcctcag ccaaaacaac acccccatca gtctatccac tggcccctgg gtgtggagat 480

acaactggtt cctccgtgac tctgggatgc ctggtcaagg gctacttccc tgagtcagtg 540

actgtgactt ggaactctgg atccctgtcc agcagtgtgc acaccttccc agctctcctg 600

cagtctggac tctacactat gagcagctca gtgactgtcc cctccagcac ctggccaagt 660

cagaccgtca cctgcagcgt tgctcaccca gccagcagca ccacggtgga caaaaaactt 720

gagcccagcg ggcccatttc aacaatcaac ccctgtcctc catgcaagga gtgtcacaaa 780

tgcccagctc ctaacctcga gggtggacca tccgtcttca tcttccctcc aaatatcaag 840

gatgtactca tgatctccct gacacccaag gtcacgtgtg tggtggtgga tgtgagcgag 900

gatgacccag acgtccagat cagctggttt gtgaacaacg tggaagtaca cacagctcag 960

acacaaaccc atagagagga ttacaacagt actatccggg tggtcagcac cctccccatc 1020

cagcaccagg actggatgag tggcaaggag ttcaaatgca aggtcaacaa caaagacctc 1080

ccatcaccca tcgagagaac catctcaaaa attaaagggc tagtcagagc tccacaagta 1140

tacatcttgc cgccaccagc agagcagttg tccaggaaag atgtcagtct cacttgcctg 1200

gtcgtgggct tcaaccctgg agacatcagt gtggagtgga ccagcaatgg gcatacagag 1260

gagaactaca aggacaccgc accagtcctg gactctgacg gttcttactt catatatagc 1320

aagctcaata tgaaaacaag caagtgggag aaaacagatt ccttctcatg caacgtgaga 1380

cacgagggtc tgaaaaatta ctacctgaag aagaccatct cccggtctcc gggtaaatga 1440

<210> 7

<211> 1679

<212> DNA

<213> Homo sapiens

<400> 7

cttagccctg gactccaagg cctttccact tggtgatcag cactgagcac agaggactca 60

ccatggaatt ggggctgagc tgggttttcc ttgttgctat tttagaaggt gtccagtgtg 120

aggtgcagct ggtggagtct gggggaggct tggtccagcc tggggggtcc ctgagactct 180

cctgtgtagt ctctggattc acctttagta gttattggat gagctgggtc cgccaggctc 240

cagggaaggg gctggagtgg gtggccaaca taaagcaaga tggaagtgag aaatactatg 300

tggactctgt gaagggccga ttcaccatct ccagagacaa cgccaagaac tcactgtatc 360

tgcaaatgaa cagcctgaga gccgaggaca cggctgtgta ttactgtgcg agagatggca 420

gcagctggta cagggactgg ttcgacccct ggggccaggg aaccctggtc accgtctcct 480

cagcctccac caagggccca tcggtcttcc ccctggcacc ctcctccaag agcacctctg 540

ggggcacagc ggccctgggc tgcctggtca aggactactt ccccgaaccg gtgacggtgt 600

catggaactc aggcgccctg accagcggcg tgcacacctt cccggctgtc ctacagtcct 660

caggactcta ctccctcagc agcgtggtga ccgtgccctc cagcagcttg ggcacccaga 720

cctacatctg caacgtgaat cacaagccca gcaacaccaa ggtggacaag aaagttgagc 780

ccaaatcttg tgacaaaact cacacatgcc caccgtgccc agcacctgaa ctcctggggg 840

gaccgtcagt cttcctcttc cccccaaaac ccaaggacac cctcatgatc tcccggaccc 900

ctgaggtcac atgcgtggtg gtggacgtga gccacgaaga ccctgaggtc aagttcaact 960

ggtacgtgga cggcgtggag gtgcataatg ccaagacaaa gccgcgggag gagcagtaca 1020

acagcacgta ccgtgtggtc agcgtcctca ccgtcctgca ccaggactgg ctgaatggca 1080

aggagtacaa gtgcaaggtc tccaacaaag ccctcccagc ccccatcgag aaaaccatct 1140

ccaaagccaa agggcagccc cgagaaccac aggtgtacac cctgccccca tcccgggatg 1200

agctgaccaa gaaccaggtc agcctgacct gcctggtcaa aggcttctat cccagcgaca 1260

tcgccgtgga gtgggagagc aatgggcagc cggagaacaa ctacaagacc acgcctcccg 1320

tgctggactc cgacggctcc ttcttcctct acagcaagct caccgtggac aagagcaggt 1380

ggcagcaggg gaacgtcttc tcatgctccg tgatgcatga ggctctgcac aaccactaca 1440

cgcagaagag cctctccctg tctccgggta aatgagtgcg acggccggca agcccccgct 1500

ccccgggctc tcgcggtcgc acgaggatgc ttggcacgta ccccctgtac atacttcccg 1560

ggcgcccagc atggaaataa agcacccagc gctgccctgg gcccctgcga aaaaaaaaaa 1620

aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaa 1679

<210> 8

<211> 1641

<212> DNA

<213> Homo sapiens

<400> 8

cccgccctgg gattcccagg tgttttcatt tggtgatcag cactgaacac agaagagtca 60

tgatggagtt tgggctgagc tgcgttttcc ttgttgccat ttttaaaggt gtccactgtg 120

aggtgcagct ggtggagtct gggggaggct tggtccagcc gggggggtcc ctgagactct 180

cctgtgtagc ctctgcattc accctcagta ggcatgcgat gcactgggtc cgccaggctc 240

cagggaaggg actggaatat gtttcaggta ttagtaatag tgaaaatagc acatattatg 300

cagactctgt gaagggcaga ttcaccatct ccagagacaa ctacaagaac acgctttatc 360

ttcaactggg cagcctgaga gctgaggaca aggctgtgta ttactgtgcg agagcgaggt 420

gtagaggaga cacatgcctc aacttctact acggtttgga cgtctggggc caagggacca 480

cggtcatcgt ctcctcagcc tccaccaagg gcccatcggt cttccccctg gcaccctcct 540

ccaagagcac ctctgggggc acagcggccc tgggctgcct ggtcaaggac tacttccccg 600

aaccggtgac ggtgtcgtgg aactcaggcg ccctgaccag cggcgtgcac accttcccgg 660

ctgtcctaca gtcctcagga ctctactccc tcagcagcgt ggtgaccgtg ccctccagca 720

gcttgggcac ccagacctac atctgcaacg tgaatcacaa gcccagcaac accaaggtgg 780

acaagaaagt tgagcccaaa tcttgtgaca aaactcacac atgcccaccg tgcccagcac 840

ctgaactcct ggggggaccg tcagtcttcc tcttcccccc aaaacccaag gacaccctca 900

tgatctcccg gacccctgag gtcacatgcg tggtggtgga cgtgagccac gaagaccctg 960

aggtcaagtt caactggtac gtggacggcg tggaggtgca taatgccaag acaaagccgc 1020

gggaggagca gtacaacagc acgtaccgtg tggtcagcgt cctcaccgtc ctgcaccagg 1080

actggctgaa tggcaaggag tacaagtgca aggtctccaa caaagccctc ccagccccca 1140

tcgagaaaac catctccaaa gccaaagggc agccccgaga accacaggtg tacaccctgc 1200

ccccatcccg ggatgagctg accaagaacc aggtcagcct gacctgcctg gtcaaaggct 1260

tctatcccag cgacatcgcc gtggagtggg agagcaatgg gcagccggag aacaactaca 1320

agaccacgcc tcccgtgctg gactccgacg gctccttctt cctctacagc aagctcaccg 1380

tggacaagag caggtggcag caggggaacg tcttctcatg ctccgtgatg catgaggctc 1440

tgcacaacca ctacacgcag aagagcctct ccctgtctcc gggtaaatga gtgcgacggc 1500

cggcaagccc ccgctcccca ggctctcggg gtcgcgcgag gatgcttggc acgtaccccg 1560

tgtacatact tcccgggcgc ccagcatgga aataaagcac ccagcgctgc cctgggcccc 1620

tgcaaaaaaa aaaaaaaaaa a 1641

<210> 9

<211> 986

<212> DNA

<213> Homo sapiens

<400> 9

ggactcctca gttcaccttc tcacaatgag gctccctgct cagctcctgg ggctgctaat 60

gctctgggtc ccaggatcca gtggggatgt tgtgatgact cagtctccac tctccctgcc 120

cgtcaccctt ggacagccgg cctccatctc ctgcaggtct agtcaaagcc tcgtatacag 180

tgatggaaac acctacttga attggtttca gcagaggcca ggccaatctc caaggcgcct 240

aatttataag gtttctatcc gggactctgg ggtcccagac aaattcagcg gcagtgggtc 300

aggcactgat ttcacactga aaatcagcag ggtggaggct gaggatgttg gggtttatta 360

ctgcatgcaa ggttcacact ggcctccgat caccttcggc caagggacac gactggagat 420

taaacgaact gtggctgcac catctgtctt catcttcccg ccatctgatg agcagttgaa 480

atctggaact gcctctgttg tgtgcctgct gaataacttc tatcccagag aggccaaagt 540

acagtggaag gtggataacg ccctccaatc gggtaactcc caggagagtg tcacagagca 600

ggacagcaag gacagcacct acagcctcag cagcaccctg acgctgagca aagcagacta 660

cgagaaacac aaagtctacg cctgcgaagt cacccatcag ggcctgagct cgcccgtcac 720

aaagagcttc aacaggggag agtgttagag ggagaagtgc ccccacctgc tcctcagttc 780

cagcctgacc ccctcccatc ctttggcctc tgaccctttt tccacagggg acctacccct 840

attgcggtcc tccagctcat ctttcacctc acccccctcc tcctccttgg ctttaattat 900

gctaatgttg gaggagaatg aataaataaa gtgaatcttt gcaaaaaaaa aaaaaaaaaa 960

aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaa 986

Claims (61)

1.一种抗体可变结构域，其包含SEQ ID NO:1所示的CDR 1、SEQ ID NO:2所示的CDR 2和SEQ ID NO:3所示的CDR 3。

2.一种抗体构建体，其包含第一抗体肽，所述第一抗体肽包含：

(i)第一抗体可变结构域，其包含SEQ ID NO:1所示的CDR 1、SEQ ID NO:2所示的CDR 2和SEQ ID NO:3所示的CDR 3；及

(ii)与所述第一抗体可变结构域结合的第一抗体结构域。

3.权利要求1的抗体可变结构域或者权利要求2的抗体构建体，其中所述抗体可变结构域是抗体轻链可变结构域。

4.权利要求1的抗体可变结构域或者权利要求2的抗体构建体，其中所述抗体可变结构域是抗体重链可变结构域。

5.权利要求2的抗体构建体，其中所述抗体构建体是单价抗体构建体。

6.权利要求2的抗体构建体，其中所述第一抗体结构域是第一可变重链结构域。

7.权利要求6的抗体构建体，其中所述抗体构建体是单链抗体(scFv)。

8.权利要求2的抗体构建体，其中所述第一抗体结构域是第一恒定重链。

9.权利要求8的抗体构建体，其中所述第一恒定重链包含与第一恒定重链3(CH3)结构域结合的第一恒定重链2(CH2)结构域。

10.权利要求9的抗体构建体，其中所述第一CH3结构域通过所述第一CH2结构域与所述第一抗体可变结构域结合。

11.权利要求10的抗体构建体，其中所述第一抗体肽进一步包含第一恒定重链1(CH1)结构域。

12.权利要求11的抗体构建体，其中所述第一CH1结构域形成所述第一抗体结构域的部分。

13.权利要求11的抗体构建体，其中所述第一抗体可变结构域通过所述第一CH1结构域与所述第一抗体结构域结合。

14.权利要求11的抗体构建体，其中所述第一抗体可变结构域通过所述第一CH1结构域与所述第一CH2结构域结合。

15.权利要求2的抗体构建体，其中所述抗体构建体是进一步包含与所述第一抗体肽结合的第二抗体肽的二价抗体构建体。

16.权利要求15的抗体构建体，其中所述第二肽与所述第一抗体结构域结合。

17.权利要求15的抗体构建体，其中所述第二抗体肽与所述第一CH2结构域结合。

18.权利要求15的抗体构建体，其中所述第二抗体肽和所述第一抗体肽在化学上是相同的。

19.权利要求15的抗体构建体，其中所述第二抗体肽和所述第一抗体肽在化学上是不同的。

20.权利要求15的抗体构建体，其中所述第二抗体肽包含：

(i)第二抗体可变结构域；和

(ii)与所述第二抗体可变结构域结合的第二抗体结构域。

21.权利要求20的抗体构建体，其中所述第二抗体可变结构域包含SEQ ID NO:1所示的CDR 1、SEQ ID NO:2所示的CDR 2和SEQ ID NO:3所示的CDR 3。

22.权利要求20的抗体构建体，其中所述第二抗体结构域是第二恒定重链。

23.权利要求22的抗体构建体，其中所述第二恒定重链包含与第二恒定重链3(CH3)结构域结合的第二恒定重链2(CH2)结构域。

24.权利要求23的抗体构建体，其中所述第二CH3结构域通过所述第二CH2结构域与所述第二抗体可变结构域结合。

25.权利要求24的抗体构建体，其中所述第二抗体肽进一步包含第二第一恒定重链1(CH1)结构域。

26.权利要求25的抗体构建体，其中所述第二CH1结构域形成所述第二抗体结构域的部分。

27.权利要求25的抗体构建体，其中，所述第二抗体可变结构域通过所述第二CH1结构域与所述第二抗体结构域结合。

28.权利要求25的抗体构建体，其中所述第二抗体可变结构域通过所述第二CH1结构域与所述第二CH2结构域结合。

29.权利要求28的抗体构建体，其中所述第一CH1结构域和所述第二CH1结构域结合在一起。

30.权利要求15的抗体构建体，其中所述抗体构建体是进一步包含与所述第一抗体肽结合的第三抗体可变结构域和与所述第二抗体肽结合的第四抗体可变结构域的四价抗体构建体。

31.权利要求30的抗体构建体，其中所述第三抗体可变结构域形成所述第一抗体肽的部分，以及所述第四抗体可变结构域形成所述第二抗体肽的部分。

32.权利要求30的抗体构建体，其中所述第三抗体可变结构域通过所述第一抗体可变结构域与所述第一抗体结构域结合。

33.权利要求30的抗体构建体，其中所述第三抗体可变结构域通过所述第一抗体可变结构域与所述第一CH2结构域结合。

34.权利要求30的抗体构建体，其中所述第四抗体可变结构域通过所述第二抗体可变结构域与所述第二抗体结构域结合。

35.权利要求30的抗体构建体，其中所述第四抗体可变结构域通过所述第二抗体可变结构域与所述第二CH2结构域结合。

36.权利要求30的抗体构建体，其中所述第三抗体可变结构域形成与所述第一抗体肽结合的第一轻链抗体肽的部分，以及所述第四抗体可变结构域形成与所述第二抗体肽结合的第二轻链抗体肽的部分。

37.权利要求36的抗体构建体，其中所述第一轻链抗体肽包含与所述第三抗体可变结构域结合的第一恒定轻链1(CL1)结构域。

38.权利要求37的抗体构建体，其中所述第一轻链抗体肽通过所述第一CL1结构域与所述第一抗体肽结合。

39.权利要求37的抗体构建体，其中所述第三抗体可变结构域通过所述第一CL1结构域与所述第一抗体肽结合。

40.权利要求36的抗体构建体，其中所述第二轻链抗体肽进一步包含与所述第四抗体可变结构域结合的第二恒定轻链1(CL1)结构域。

41.权利要求40的抗体构建体，其中所述第二轻链抗体肽通过所述第二CL1结构域与所述第二抗体肽结合。

42.权利要求37的抗体构建体，其中所述第四抗体可变结构域通过所述第二CL1结构域与所述第二抗体肽结合。

43.权利要求2的抗体构建体，其中所述抗体构建体是抗体。

44.权利要求2的抗体构建体，其中所述抗体构建体是抗体变体。

45.权利要求2的抗体构建体，其中所述抗体构建体是Fab'片段。

46.权利要求2的抗体构建体，其中所述抗体构建体是嵌合抗体。

47.权利要求2的抗体构建体，其中所述抗体构建体是人源化抗体。

48.权利要求2的抗体构建体，其中所述抗体构建体是人抗体。

49.权利要求2的抗体构建体，其中所述抗体构建体包含可检测部分。

50.权利要求49所述的抗体构建体，其中所述可检测部分是荧光部分。

51.权利要求2的抗体构建体，其中所述抗体构建体与癌蛋白结合。

52.权利要求2的抗体构建体，其中所述癌蛋白形成癌细胞的部分。

53.权利要求52的抗体构建体，其中所述癌细胞是淋巴样细胞。

54.权利要求52的抗体构建体，其中所述癌细胞是B细胞。

55.一种分离的核酸，其编码权利要求1的所述抗体可变结构域、权利要求2的所述第一抗体肽、权利要求15的所述第二抗体肽、权利要求36的所述第一轻链抗体肽或者权利要求36的所述第二轻链抗体肽。

56.一种药物组合物，其包含治疗有效量的权利要求1的所述抗体可变结构域或者权利要求2的所述抗体构建体以及药学上可接受的赋形剂。

57.一种在有需要的对象中治疗癌症的方法，所述方法包括给对象施用治疗有效量的权利要求1的所述抗体可变结构域或者权利要求2的所述抗体构建体，从而治疗所述对象的癌症。

58.权利要求57的方法，其中所述癌症是淋巴瘤、白血病或骨髓瘤。

59.权利要求58的方法，其中所述淋巴瘤是套细胞淋巴瘤、滤泡型淋巴瘤、弥漫型大B细胞淋巴瘤、边缘带淋巴瘤或Burkitt’s淋巴瘤。

60.权利要求58的方法，其中所述白血病是成淋巴细胞性白血病、慢性淋巴细胞性白血病或毛细胞白血病。

61.权利要求57的方法，所述方法进一步包括给所述对象施用第二治疗剂。

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