CN110887965A - 一种用于测试甲霜灵残留的检测卡 - Google Patents

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Abstract

本发明提供一种用于测试甲霜灵残留的检测卡，包括检测卡外壳和试纸条，所述试纸条设于所述检测卡外壳内，所述试纸条包括底板及在所述底板上依次搭接的样品吸收垫、第一结合物释放垫、第二结合物释放垫、硝酸纤维素膜和吸水垫，所述第一结合物释放垫包被有胶体金标记的羊抗鼠抗体，所述第二结合物释放垫包被有甲霜灵药物单克隆抗体，所述硝酸纤维素膜上包被有甲霜灵半抗原‑载体蛋白偶联物的检测区和羊抗鼠抗体的质控区，所述甲霜灵半抗原由甲霜灵与NaOH的水解反应制得。本发明利用抗体和抗原的特异性结合来实现对食品中农药残留物的检测，所制备的检测卡具有专一性好、灵敏度高的优点，且该检测卡便于操作使用，适合现场筛选，方便快捷。

Description

一种用于测试甲霜灵残留的检测卡
技术领域
本发明属于检测技术领域，具体涉及一种用于测试甲霜灵残留的检测卡。
背景技术
甲霜灵，又名阿普隆、雷多米尔、甲霜安、瑞毒霉，化学名称为D,L-N-(2,6-二甲基苯基)-N-(2’-甲氧基乙基)氨基丙酸钾酯，是一种广谱、高效、低毒的内吸性酰胺类杀菌剂，对卵菌引起的病害具有独特的保护和治疗作用。以甲霜灵为代表的酰胺类农药是当今世界生产量及使用量前三的化学农药之一，由于其使用量不断提高、使用范围不断扩大，环境生态、农药残留等问题日益突出，已经成为了当前关注的热点。世界各国均对甲霜灵在食品中的限量做出了规定，我国也在《食品安全国家标准食品中农药最大残留限量》(GB 2763-2019)中，对甲霜灵在谷物、油料和油脂、蔬菜、水果、糖料、饮料和调味料中的36种作物上的最大允许残留量作出了规定。然而目前测定甲霜灵残留的方法多为色谱法，色谱法虽具有灵敏度高的优点，但是需要配备昂贵的色谱仪器和专业的测试人员，且不便于在现场快速检测，无法进行大面积推广应用。因此，急需建立一种应用简单、测定快速、结果准确的用于测试甲霜灵残留的检测卡。
发明内容
本发明的目的是针对现有技术的不足，提供一种具有专一性好、灵敏度高、便于操作的用于测试甲霜灵残留的检测卡。
本发明提供了如下的技术方案：
一种用于测试甲霜灵残留的检测卡，包括检测卡外壳和试纸条，所述试纸条设于所述检测卡外壳内，所述试纸条包括底板及在所述底板上依次搭接的样品吸收垫、第一结合物释放垫、第二结合物释放垫、硝酸纤维素膜和吸水垫，所述第一结合物释放垫包被有胶体金标记的羊抗鼠抗体，所述第二结合物释放垫包被有甲霜灵药物单克隆抗体，所述硝酸纤维素膜上包被有甲霜灵半抗原-载体蛋白偶联物的检测区和羊抗鼠抗体的质控区，所述甲霜灵半抗原由甲霜灵与NaOH的水解反应制得。
优选的，所述载体蛋白为牛血清蛋白、人血清蛋白、鸡卵清蛋白和甲状腺蛋白中的一种。
优选的，所述羊抗鼠抗体是将从鼠源抗体免疫羊得到的。
优选的，所述甲霜灵半抗原的制备过程为：将NaOH溶于去离子水中，然后加入甲霜灵，50-60℃下搅拌6h，反应完全；利用乙酸乙酯洗涤反应液，弃去酯相，并用浓盐酸调节pH至1.0-2.0，析出白色物质；用乙酸乙酯再次萃取混合液，用无水硫酸钠干燥酯相，过夜；抽滤酯相，蒸除溶剂，得到白色固体物质，然后再用正己烷和乙酸乙酯重结晶，抽滤后得到甲霜灵半抗原。
该检测卡的制备方法，包括如下步骤：
S1:用Na2HPO4溶液处理第一结合物释放垫和第二结合物释放垫，然后将胶体金标记的羊抗鼠抗体喷点到第一结合物释放垫上，真空干燥箱内进行烘干，备用。将甲霜灵药物单克隆抗体喷点到第二结合物释放垫上，真空干燥箱内进行烘干，备用；
S2:利用Na2HPO4溶液稀释甲霜灵半抗原-载体蛋白偶联物，并喷点到硝酸纤维素膜，形成检测区，利用Na2HPO4溶液稀释羊抗鼠抗体，并喷点到硝酸纤维素膜，形成质控区；
S3:将样品吸收垫、第一结合物释放垫、第二结合物释放垫、硝酸纤维素膜和吸水垫依次粘结在底板上，切成所需宽度，即得试纸条，然后将试纸条安装在长条扁平状的检测卡外壳内，即得用于测试甲霜灵残留的检测卡。
本发明的有益效果是：
本发明制备的用于测试甲霜灵残留的检测卡是利用抗体和抗原的特异性结合来实现对食品中农药残留物的检测，该检测卡具有专一性好、灵敏度高的优点，且该检测卡便于操作使用，适合现场筛选，方便快捷。
附图说明
附图用来提供对本发明的进一步理解，并且构成说明书的一部分，与本发明的实施例一起用于解释本发明，并不构成对本发明的限制。在附图中：
图1是本发明试纸条的剖面示意图；
图2是本发明检测卡的检测结构判定图。
图中标记为：1、底板；2、样品吸收垫；3、第一结合物释放垫；4、第二结合物释放垫；5、硝酸纤维素膜；6、吸水垫；7、检测区；8、质控区。
具体实施方式
实施例1甲霜灵残留检测卡的制备
一种用于测试甲霜灵残留的检测卡，包括检测卡外壳和试纸条，所述试纸条设于所述检测卡外壳内，所述试纸条包括底板及在所述底板上依次搭接的样品吸收垫、第一结合物释放垫、第二结合物释放垫、硝酸纤维素膜和吸水垫，所述第一结合物释放垫包被有胶体金标记的羊抗鼠抗体，所述第二结合物释放垫包被有甲霜灵药物单克隆抗体，所述硝酸纤维素膜上包被有甲霜灵半抗原-载体蛋白偶联物的检测区和羊抗鼠抗体的质控区，其中载体蛋白为鸡卵清蛋白，羊抗鼠抗体是将从鼠源抗体免疫羊得到的。
所述甲霜灵半抗原由甲霜灵与NaOH的水解反应制得，具体制备过程为：将NaOH溶于去离子水中，然后加入甲霜灵，50-60℃下搅拌6h，反应完全；利用乙酸乙酯洗涤反应液，弃去酯相，并用浓盐酸调节pH至1.0-2.0，析出白色物质；用乙酸乙酯再次萃取混合液，用无水硫酸钠干燥酯相，过夜；抽滤酯相，蒸除溶剂，得到白色固体物质，然后再用正己烷和乙酸乙酯重结晶，抽滤后得到甲霜灵半抗原。
该检测卡的制备方法，包括如下步骤：
S1:用Na2HPO4溶液处理第一结合物释放垫和第二结合物释放垫，然后将胶体金标记的羊抗鼠抗体喷点到第一结合物释放垫上，真空干燥箱内进行烘干，备用。将甲霜灵药物单克隆抗体喷点到第二结合物释放垫上，真空干燥箱内进行烘干，备用；
S2:利用Na2HPO4溶液稀释甲霜灵半抗原-载体蛋白偶联物，并喷点到硝酸纤维素膜，形成检测区，利用Na2HPO4溶液稀释羊抗鼠抗体，并喷点到硝酸纤维素膜，形成质控区；
S3:将样品吸收垫、第一结合物释放垫、第二结合物释放垫、硝酸纤维素膜和吸水垫依次粘结在底板上，切成所需宽度，即得试纸条，然后将试纸条安装在长条扁平状的检测卡外壳内，即得用于测试甲霜灵残留的检测卡。
实施例2甲霜灵残留的检测
甲霜灵残留的检测方法：向1g碎烟叶中加入10mL甲醇溶液，甲醇溶液中甲醇与水的体积比为1：1，然后振荡1min，再离心5min，转速为3000r/min，,取上层清液，并用去离子水进行稀释，上层清液与去离子水的体积比为1：4，然后吸取稀释液，并滴加在检测卡的加样孔，反应5-10min，若检测区显色、质控区显色，判为阴性，若检测区无显色、质控区显色，判为阳性，若质控区不显色，则判断失效。
检测卡灵敏度检测：利用检测卡分别检测添加甲霜灵标准品浓度为1.0、1.5、2.0、3.0mg/kg的干烟叶和鲜烟叶，对于干烟叶样品，甲霜灵浓度为1.0、1.5mg/kg时，检测卡显阴性，甲霜灵浓度为2.0、3.0mg/kg时，检测卡显阳性，说明该检测卡对干烟叶中甲霜灵的检测限为1.5mg/kg；对于鲜烟叶样品，甲霜灵浓度为1.0mg/kg时，检测卡显阴性，甲霜灵浓度为1.5、2.0、3.0mg/kg时，检测卡显阳性，说明该检测卡对鲜烟叶中甲霜灵的检测限为1.0mg/kg。
检测卡专一性检测：取检测呈阴性的干烟叶和鲜烟叶，分别向干烟叶和鲜烟叶中添加50mg/kg的草甘磷、乙草胺、甲草胺、甲胺磷、苯霜灵、三唑酮、吡虫啉、恶霉灵溶液，利用检测卡进行检测，结果显示均为阴性，说明本发明的检测卡具有较好的专一性。
以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，对于本领域的技术人员来说，其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (4)

1.一种用于测试甲霜灵残留的检测卡，包括检测卡外壳和试纸条，所述试纸条设于所述检测卡外壳内，所述试纸条包括底板及在所述底板上依次搭接的样品吸收垫、第一结合物释放垫、第二结合物释放垫、硝酸纤维素膜和吸水垫，其特征在于，所述第一结合物释放垫包被有胶体金标记的羊抗鼠抗体，所述第二结合物释放垫包被有甲霜灵药物单克隆抗体，所述硝酸纤维素膜上包被有甲霜灵半抗原-载体蛋白偶联物的检测区和羊抗鼠抗体的质控区，所述甲霜灵半抗原由甲霜灵与NaOH的水解反应制得。
2.根据权利要求1所述的一种用于测试甲霜灵残留的检测，其特征在于，所述载体蛋白为牛血清蛋白、人血清蛋白、鸡卵清蛋白和甲状腺蛋白中的一种。
3.根据权利要求1所述的一种用于测试甲霜灵残留的检测卡，其特征在于，所述羊抗鼠抗体是将从鼠源抗体免疫羊得到的。
4.根据权利要求1所述的一种用于测试甲霜灵残留的检测卡，其特征在于，所述甲霜灵半抗原的制备过程为：将NaOH溶于去离子水中，然后加入甲霜灵，50-60℃下搅拌6h，反应完全；利用乙酸乙酯洗涤反应液，弃去酯相，并用浓盐酸调节pH至1.0-2.0，析出白色物质；用乙酸乙酯再次萃取混合液，用无水硫酸钠干燥酯相，过夜；抽滤酯相，蒸除溶剂，得到白色固体物质，然后再用正己烷和乙酸乙酯重结晶，抽滤后得到甲霜灵半抗原。
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