CN110885757A - 一种条纹小环藻培养基 - Google Patents

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张朋龙
陈菲
蒋霞敏
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    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
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Abstract

本发明提供了一种条纹小环藻培养基，包含有氮盐、铁盐、磷盐和多胺组分；其中多胺的浓度为45mg/L；所述氮盐为尿素CO(NH2)2，尿素的浓度为15‑20mg/L；所述铁盐为三氯化铁(FeCl3)，三氯化铁的浓度为0.50‑0.75mg/L；所述磷盐为磷酸二氢钾(KH2PO4)，且取磷酸二氢钾为1.5‑2.0mg/L。本发明所提供的培养基在培养条纹小环藻时具有生长速度快、产量高、成本低的优势。使用本发明所提供的培养基比使用f/2培养基到达最大条纹小环藻藻密度值时间快24h，条纹小环藻能达到的最高浓度也高于对照组的f/2培养基25.35％。

Description

一种条纹小环藻培养基
技术领域
本发明属于藻类培养技术领域，具体涉及到一种条纹小环藻的培养基。
背景技术
条纹小环藻(Cyclotella striata)隶属于硅藻门、中心硅藻纲、圆筛藻目、圆筛藻科、小环藻属，是一种从淡水中新分离出的硅藻。研究发现其具有高蛋白质、富含不饱和脂肪酸。初步研究发现条纹小环藻淡水珍珠贝(三角帆蚌)优质的饵料，在三角帆蚌苗种繁育过程中使用其作为开口饵料，可达到提高育成率。目前在条纹小环藻在培养过程中，使用生产中常用的培养基，但发现使用这两种培养基在培养过程中存在生长速率慢、藻密度低等的现象，严重制约了条纹小环藻快速扩繁。因此研发出一种适用于条纹小环藻自身生长特征的培养基显得尤为关键，以提高条纹小环藻生长速度与藻密度。
发明内容
本发明提供了一种条纹小环藻培养基，从而在培养条纹小环藻时，使条纹小环藻生长速率快，获得更好的细胞密度；从而弥补现有技术的不住。
本发明所提供的条纹小环藻培养基，包含有氮盐、铁盐、磷盐和多胺组分；
作为优选，其中多胺的浓度为45mg/L；
优选的，所述氮盐为尿素CO(NH2)2，尿素的浓度为15-20mg/L；
所述铁盐为三氯化铁(FeCl3)，三氯化铁的浓度为0.50-0.75mg/L；
所述磷盐为磷酸二氢钾(KH2PO4)，且取磷酸二氢钾为1.5-2.0mg/L。
本发明所提供的条纹小环藻培养基，其一种具体的配方如下：15-20mg/L CO(NH2)2；1.5-2.0mg/L KH2PO4；0.50-0.75mg/L FeCl3；0.20mg/L NaHCO3；10mg/L Na2EDTA；0.25-0.30mg/L MnSO4；20mg/L Na2SiO3.10H2O；0.008mg/L VB1；VB12 0.05mg/L；多胺45mg/L。
本发明所提供的培养基在培养条纹小环藻时具有生长速度快、产量高、成本低的优势。使用本发明所提供的培养基比使用f/2培养基到达最大条纹小环藻藻密度值时间快24h，条纹小环藻能达到的最高浓度也高于对照组的f/2培养基25.35％。
附图说明
图1：筛选不同氮源对条纹小环藻生长的照片图，
图2：不同氮源对条纹小环藻生长对条纹小环藻生长的数据分析图；
图3：不同(CO(NH2)2)浓度对条纹小环藻生长的影响图；
图4：不同磷源对条纹小环藻生长的影响图；
图5：不同KH2PO4浓度对条纹小环藻生长的影响图；
图6：不同铁源对条纹小环藻生长的影响图；
图7：不同FeCl3浓度对条纹小环藻生长的影响图；
图8：不同多胺浓度对条纹小环藻生长的影响图；
图9：本发明的实施例1与实例2和f/2培养基的对比试验效果照片图；
图10：本发明的实施例1、实例2、水生硅2号培养基和f/2培养基的对比试验结果图。
具体实施方式
本发明通过对条纹小环藻培养基进行筛选，确定了条纹小环藻培养过程中适宜氮源及氮浓度、铁源及铁浓度、磷源及磷浓度，最终确定了适用于条纹小环藻自身生长特征的培养基，以达到提高条纹小环藻生长速率与藻细胞密度。
具体的筛选流程如下：
(1)氮源及氮浓度对条纹小环藻生长的影响
分别选硝酸钾、尿素(CO(NH2)2)、亚硝酸钠、硫酸铵作为氮源，氮的质量浓度均为30mg/L。以缺氮的f/2为基础培养基，消毒淡水，培养容器为100ml三角烧瓶(图1)，培养总水体为90ml，其中培养液80ml，藻种进行氮饥饿培养72h后，接藻种10ml。藻种进行氮饥饿培养72h后，各三平行，各组放在GXZ–260C型智能型光照培养箱中，培养条件为不充气培养，温度25℃，光照强度为40μmol·m-2.s-1，光暗周期12h:12h，培养时间7d。开始与结束采用血球计数板计数藻细胞，计算K值。最终结果显示最适的氮源为(CO(NH2)2)(如图2)。
筛选得到最适氮源后，设置氮梯度为0、6、12、18、24、30、36mg/L。培养容器为100ml三角烧瓶，培养总水体为90ml，其中培养液80ml，藻种进行氮饥饿培养72h后，接种藻液10ml。各三平行。各组放在GXZ–260C型智能型光照培养箱中，培养条件为不充气培养，温度25℃，光照强度为40μmol·m-2·s-1，光暗周期12h:12h，培养时间7d。开始与结束采用血球计数板计数藻细胞，计算K值。最终研究结果显示最适的氮源(CO(NH2)2)为15-20mg/L(如图3)。
(2)磷源及磷浓度对条纹小环藻生长的影响
分别选磷酸二氢钾、磷酸氢二钾、过磷酸钙作为磷源，其它实验条件同上。研究结果显示最适的磷源为磷酸二氢钾(KH2PO4)(图4)。
筛选得到最适磷源后，设置KH2PO4梯度为0.5mg/L、1mg/L、1.5mg/L、2mg/L、2.5mg/L和3mg/L，其它实验条件同上。研究结果显示最适的磷源(KH2PO4)浓度为1.5-2.0mg/L(如图5)。
(3)铁源及但浓度对条纹小环藻生长的影响
分别选三氯化铁、柠檬酸铁、硫酸亚铁为铁源，其它实验条件同上。研究结果显示最适的铁源为三氯化铁(FeCl3)(如图6)。
筛选得到最适铁源后，设置FeCl3梯度为0.1mg/L、0.25mg/L、0.5mg/L和1mg/L，其它实验条件同上。研究结果显示最适的磷源(FeCl3)浓度为0.5-0.75mg/L(如图7)。
(4)多胺浓度对条纹小环藻生长的影响
设置多胺梯度为35mg/L、40mg/L、45mg/L、50mg/L和55mg/L，其它实验条件同上。研究结果显示最适的多胺浓度为45-55mg/L(如图8)
根据筛选过程获得的结果，确定了本发明的纹小环藻的培养基。
下面结合实施例对本发明进行详细的描述。
实施例1：
一种条纹小环藻培养基配方配置其培养的培养基，其配方如下：15mg/L CO(NH2)2；1.5mg/L KH2PO4；0.50mg/L FeCl3；0.20mg/L NaHCO3；10mg/L Na2EDTA；0.25mg/L MnSO4；20mg/L Na2SiO3.10H2O；0.008mg/L VB1；VB12 0.05mg/L；多胺45mg/L。
为了生产便于方便，提前配制母液，以培养基各营养盐浓度的1000倍为基准配制，现提供以下母液配方：15g/L CO(NH2)2；1.5g/L KH2PO4；0.50g/L FeCl3；0.20g/L NaHCO3；10g/L Na2EDTA；0.25g/L MnSO4；20g/L Na2SiO3.10H2O；0.008g/L VB1；VB12 0.05g/L；多胺45g/L。将配制好的母液以1:1000的比例直接滴加在消毒的淡水中，可应用于大规模生产。
实施例2：
一种条纹小环藻培养基配方配置其培养的培养基，其配方如下：20mg/L CO(NH2)2；2.0mg/L KH2PO4；0.75mg/L FeCl3；0.20mg/L NaHCO3；10mg/L Na2EDTA；0.30mg/L MnSO4；20mg/L Na2SiO3.10H2O；0.008mg/L VB1；VB12 0.05mg/L；多胺55mg/L。
对比实施例3：
使用f/2培养基和水生硅2号培养基作为对照培养基
取对数生长期的条纹小环藻接种到实施例1、实施例2和对比实施例的培养基中进行培养，置于GXZ智能型光照培养箱培养，光照强度80μmol/(m2·s)，光暗周期12h：12h，不充气，试验周期12d。每天定时记录实施例1、实施例2和对照实施例的藻细胞数量。实验结果如图9、图10所示。
从实验结果来看看，本发明所提供的培养基培养条纹小环藻过程比使用f/2培养基和水生硅2号培养基繁殖速率更快，培养藻密度更大，其中达最均大条纹小环藻藻密度值时间快24h，条纹小环藻能达到的最高浓度高于对照组的f/2培养基25.35％，也高于对照组的水生硅2号培养基23.32％。说明本发明提供的培养条纹小环藻的培养基配方具有明显的优势。
本领域技术人员可以根据本发明公开的内容和所掌握的本领域技术对本发明内容做出替换或变型，但是这些替换或变型都不应视为脱离本发明构思的，这些替换或变型均在本发明要求保护的权利范围内。

Claims (9)

1.一种条纹小环藻培养基，其特征在于，所述的培养基包含有氮盐、铁盐、磷盐和多胺。
2.如权利要求1所述的条纹小环藻培养基，其特征在于，所述的多胺的含量为的浓度为45mg/L。
3.如权利要求1所述的条纹小环藻培养基，其特征在于，所述氮盐为尿素。
4.如权利要求1所述的条纹小环藻培养基，其特征在于，所述的尿素在培养基中的浓度为15-20mg/L。
5.如权利要求1所述的条纹小环藻培养基，其特征在于，所述的铁盐为三氯化铁。
6.如权利要求1所述的条纹小环藻培养基，其特征在于，所述的三氯化铁在培养基中的浓度为0.50-0.75mg/L。
7.如权利要求1所述的条纹小环藻培养基，其特征在于，所述的磷盐为磷酸二氢钾。
8.如权利要求1所述的条纹小环藻培养基，其特征在于，所述的磷酸二氢钾在培养基中的浓度为1.5-2.0mg/L。
9.如权利要求1所述的条纹小环藻培养基，其特征在于，所述的条纹小环藻培养基的配方如下：15-20mg/L CO(NH2)2；1.5-2.0mg/L KH2PO4；0.50-0.75mg/L FeCl3；0.20mg/LNaHCO3；10mg/L Na2EDTA；0.25-0.30mg/L MnSO4；20mg/L Na2SiO3·10H2O；0.008mg/L VB1；VB12 0.05mg/L；多胺45mg/L。
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