CN100494356C - 用配子体克隆法繁育能源海藻—巨藻孢子体的方法 - Google Patents

用配子体克隆法繁育能源海藻—巨藻孢子体的方法 Download PDF

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Abstract

本发明涉及海藻养殖，具体地说是用配子体克隆法繁育能源海藻——巨藻孢子体的方法，将雌雄配子体按鲜重比1∶1的比例放入带有棕帘或尼龙帘的容器中，使其附着，静止培养，配子体繁育成孢子体；培养温度为12-18℃；光照强度1500-3000lux，光时为12:12的循环光照，培养液组成为：天然海水经过滤煮沸消毒，加入营养盐，使其中的N为3-8mg/L，P为0.3-0.8mg/L，Fe3+为0.5μg/L，pH值为7.5-8。本发明将巨藻雌雄配子体分别扩增，然后再使其发育成孢子体，减少了海上培养苗种的流程，大大缩短了孢子体的繁育周期，并降低了发生病害的几率，并可以降低育苗成本。

Description

用配子体克隆法繁育能源海藻——巨藻孢子体的方法
技术领域
本发明涉及海藻养殖，具体地说是用配子体克隆法繁育能源海藻——巨藻孢子体的方法，其先将配子体分别扩增，然后附着基质繁育能源海藻——巨藻孢子体的技术。
背景技术
巨藻原产于北美洲大西洋沿岸，澳大利亚、新西兰、秘鲁、智利及南非沿岸都有分布。我国在1978年从墨西哥把巨藻引进。巨藻养殖已经在我国沿海地区获得成功。但是，由于育苗等的原因，目前我国的巨藻的养殖已基本上停滞。常规的巨藻的繁育的方法时间长，成本高，并且繁育过程中容易出现病害等现象，严重影响巨藻的繁育及新品种的推广。同时，为解决当前的能源危机也急需大力发展巨藻的繁育技术。因此，发展一种新型的繁育方法，缩短繁育周期，克服当前巨藻繁育的不足，是进一步发展巨藻养殖业所需解决的关键问题。
发明内容
本发明的主要目的是解决当前巨藻常规繁育方法的不足，提供一种新型、快速的用配子体克隆法繁育能源海藻——巨藻孢子体的方法。
为实现以上目的，本发明采用的技术方案为：
利用巨藻配子体进行繁育，包括配子体的培育、分别扩增、孢子体的繁育等，就是要通过人工控制光照、温度、培养液分别扩增巨藻雌雄配子体，再利用大量繁殖的配子体进行孢子体的繁育。
可按如下过程操作：
巨藻孢子体的繁育：将雌雄配子体按鲜重比1：1的比例放入带有棕帘或尼龙帘的容器(如：广口培养瓶)中，使其附着(配子体附着基质为棕帘或尼龙帘)，静止培养，两周后，约有85-90％的配子体繁育成孢子体；培养温度为12-18℃；光照强度1500-3000lux，光时为12:12的循环光照，培养液组成为：天然海水经过滤(可采用沙滤器)煮沸消毒，加入营养盐，使其中的N为3-8mg/L，P为0.3-0.8mg/L，Fe3+为0.5μg/L，pH值为7.5-8。巨藻的种苗繁育可将其应用于能源、化工和医药等领域中。
所述配子体按如下过程进行培养操作，
1)初始培养：起始培养时将巨藻配子体细胞粉碎(约200μm)(破碎后使其分散成3-5个细胞，最好为1-2个细胞)，每瓶有效水体为15-20L，以接种密度为0.3-0.6g/L接种进行通气悬浮培养；
2)扩培：培养25-35天后，以密度0.5-1.5g/L分瓶，每瓶有效水体为15-20L，进行通气悬浮培养；
培养条件：培养温度为18-20℃；光照强度1500-2000lux，光时为10-12:10-12的循环光照；培养液组成：天然海水经沙滤器过滤煮沸消毒，加入营养盐，使其中的N为1-8mg/L、P为0.1-0.8mg/L、pH值为7.5-8。
配子体的培养操作过程中每天24小时充气；每周换水1-2次。
本发明具有如下优点：
1.孢子体的繁育周期短。应用本发明进行的巨藻繁育可将繁育期由5个月缩短为2个月，大大缩短了孢子体的繁育周期；可大大减少病害的发生；可在一年内进行多次育苗，提高繁育的效率；同时，巨藻的种苗繁育后可将其应用于能源、化工和医药领域中。
2.成本低。本发明将巨藻雌雄配子体分别扩增，然后再使其发育成孢子体，减少了海上培养苗种的流程，大大缩短了孢子体的繁育周期，并降低了发生病害的几率，并可以降低育苗(巨藻的生产性繁育和遗传育种)成本；可以将巨藻的杂种优势成功的推广到生产中。
3.本发明成功的进行了巨藻配子体的培养，进而就可对巨藻进行种质保藏、杂交和遗传学研究、细胞工程化育苗、发育生物学研究、转基因等的研究。
附图说明
图1为巨藻雌雄配子体照片，其中：A为雄配子体，B为雌配子体；
图2为巨藻孢子体照片，其中：A巨藻孢子体幼体；B一个有多个孢子体的配子体。
具体实施方式
实施例：
(一)巨藻配子体的培养
1.初始培养：起始培养时将巨藻配子体细胞粉碎(约200μm)(破碎后使其分散成3-5个细胞，最好为1-2个细胞)，每瓶有效水体为15L，以接种密度为0.5g/L接种进行培养；
2.扩培：培养1个月后，不粉碎，以密度1g/L分瓶，每瓶有效水体仍为15L，进行通气悬浮培养。
培养条件与方法：培养温度为18-20℃；光照强度1500-2000lux，光源为大功率(150W)荧光灯，通过光照距离调节光强，光时为12:12的循环光照；
培养液组成：天然海水经沙滤器过滤煮沸消毒，进入培养室预冷后加入营养盐，使其中的N为1-8mg/L、P为0.1-0.8mg/L、pH值为7.5-8(本例培养液中：KNO3.0.022g/L，KH2PO4 0.0013g/L，pH值为7.5-8；)；
充气悬浮培养，供给气体经1％硫酸铜溶液过滤；每周换水2次，换水时提前1小时停止充气，待丝状体沉降瓶底，吸出上清夜，加入新鲜培养液。
(二)孢子体的繁育
繁育技术：将雌雄配子体按鲜重比1：1的比例放入带有尼龙帘的广口培养瓶中，使其附着于基质上，静止培养，两周后，约有85-90％的配子体繁育成孢子体。
培养条件与方法：培养温度为12-18℃；光照强度2000-3000lux，光源为大功率(150W)荧光灯，通过光照距离调节光强，光时为12:12的循环光照，
培养液组成为：天然海水经沙滤器过滤煮沸消毒，进入培养室预冷后加入营养盐使用，使其中的N为3-8mg/L，P为0.3-0.8mg/L，Fe3+为0.5μg/L，pH值为7.5-8(本例培养液中：KNO3 0.043g/L，KH2PO4 0.0026g/L，柠檬酸铁3μg/L，pH值为7.5-8)；每周换水2次。

Claims (3)

1.用配子体克隆法繁育巨藻孢子体的方法，其特征在于：将雌雄配子体按鲜重比1：1的比例放入带有棕帘或尼龙帘的容器中，使其附着，静止培养，配子体繁育成孢子体；培养温度为12-18℃；光照强度1500-3000lux，光时为12:12的循环光照，培养液组成为：天然海水经过滤煮沸消毒，加入营养盐，使其中的N为3-8mg/L，P为0.3-0.8mg/L，Fe3+为0.5μg/L，pH值为7.5-8。
2.按照权利要求1所述用配子体克隆法繁育巨藻孢子体的方法，其特征在于：所述配子体按如下过程进行培养操作，
1)初始培养：起始培养时将巨藻配子体细胞粉碎，每瓶有效水体为15-20L，以接种密度为0.3-0.6g/L接种进行通气悬浮培养；
2)扩培：培养25-35天后，以密度0.5-1.5g/L分瓶，每瓶有效水体为15-20L，进行通气悬浮培养；
培养条件：培养温度为18-20℃；光照强度1500-2000lux，光时为10-12:10-12的循环光照；培养液组成：天然海水经沙滤器过滤煮沸消毒，加入营养盐，使其中的N为1-8mg/L、P为0.1-0.8mg/L、pH值为7.5-8。
3.按照权利要求2所述用配子体克隆法繁育巨藻孢子体的方法，其特征在于：所述配子体的培养操作过程中每天24小时充气；每周换水1-2次。
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