CN110869014B - 脂肪酸酰胺及其在治疗成瘾紊乱和成瘾相关状况中的用途 - Google Patents

Abstract

本发明涉及氨基酸的脂肪酸酰胺，包括其立体异构体和盐，用于治疗罹患任何类型的成瘾紊乱、物质滥用紊乱的患者，包括罹患与所述成瘾紊乱、物质滥用紊乱相关的任何状况和症状的患者，并且包括在所述患者的康复治疗期间和之后的戒断综合征和成瘾复发。

Description

脂肪酸酰胺及其在治疗成瘾紊乱和成瘾相关状况中的用途

发明背景

具有创伤性脑损伤(TBI)诱导的对岛叶皮质显示的损伤的香烟吸烟者显示出尼古丁成瘾的停止(Naqvi等人，2007；Naqvi等人，2014)。Donvito等人使经麻醉的小鼠经历TBI重物坠落模型(weight drop model)，并且在24小时后收获岛叶皮质、海马体和下丘脑。使用靶向脂质组学技术，他们证明了脑损伤小鼠的岛叶皮质中OlGly的显著增加，但海马体或下丘脑中OlGly不增加，假手术(sham)小鼠中OlGly不增加。OlGly本身既不产生位置偏好，也不产生位置厌恶(aversion)，但它在尼古丁依赖小鼠中干扰尼古丁诱导的位置偏好以及减少的催促戒断反应(precipitated withdrawal response)和戒断诱导的位置厌恶。

给社会和个体带来巨大代价的另一种药物滥用紊乱是阿片(opiate)成瘾。在2014年，在患有物质使用紊乱的2150万12岁或12岁以上的美国人中，190万人患有涉及处方镇痛药物(pain reliever)的物质使用紊乱，并且586,000人患有涉及海洛因的物质使用紊乱(国家药物滥用研究所(National Institute on Drug Abuse)，2015)。戒断阿片是维持阿片成瘾的驱动力(例如，Koob，2009a,b)。吗啡戒断(MWD)可以通过终止对于吗啡的慢性暴露或通过向吗啡预处理的动物施用阿片拮抗剂来产生。即使在单次暴露于高剂量的吗啡之后，在若干小时后施用纳洛酮(naloxone)也会在人类(Heishman等人，1990；June等人，1995)和其他动物(Eisenberg，1982；Martin和Eades，1964)中产生戒断症状。戒断不仅在戒断(abstinence)的行为症状方面是明显的，而且在这样的戒断用作厌恶性动机刺激的能力方面也是明显的。Parker等人(Parker&Joshi，1998；Parker等人，2002)证明，在条件性位置厌恶(CPA)范式中，纳洛酮催促的MWD的厌恶特性在单次注射吗啡而不是盐水之后长达48小时是明显的。

发明概述

因此，本发明提供了氨基酸的脂肪酸酰胺，包括其立体异构体和盐，用于治疗罹患成瘾紊乱，包括与所述成瘾紊乱相关的任何状况和症状的患者。

因此，本发明提供了氨基酸的脂肪酸酰胺，包括其立体异构体和盐，用于治疗物质滥用紊乱，包括与所述物质滥用紊乱相关的状况和症状。

在另外的方面中，本发明提供了氨基酸的脂肪酸酰胺，包括其立体异构体和盐，用于治疗罹患物质成瘾，包括与所述物质成瘾相关的任何紊乱、状况和症状的患者。

术语“成瘾”或“成瘾紊乱”应理解为包括脑奖赏、动机、记忆和相关回路的原发性慢性疾病。该术语既指刺激性/强迫性寻求行为，也指物质滥用依赖性。术语“物质成瘾”和/或“物质滥用紊乱”和/或“物质依赖紊乱”和/或“物质依赖”被归入一般成瘾紊乱，并且具体涉及受试者对特定的一种物质或更多种物质的依赖，其相当于如上文定义的成瘾紊乱。

强迫性寻求行为包括但不限于赌博、性成瘾、购物成瘾、强迫性行为成瘾(诸如过度清洁和通常在OCD谱系内的其他强迫性行为)及其任何组合。

物质滥用成瘾包括但不限于药物成瘾(包括但不限于阿片，诸如海洛因或其他吗啡衍生物、可卡因、安非他命(amphetamine)、大麻，任何类型的成瘾药物，包括但不限于睡眠诱导剂、镇痛剂、抗组胺剂等)、吸烟、饮酒、食物消耗及其任何组合。

不受理论束缚，成瘾影响脑奖赏结构(包括伏隔核(nucleus accumben)、前扣带回皮质(anterior cingulate cortex)、基底前脑和杏仁核(amygdala))内的神经传递和相互作用，使得动机层次结构被改变，并且成瘾行为(可能包括或可能不包括酒精和其他药物使用)取代健康的自我护理相关行为。成瘾还影响皮质和海马回路与脑奖赏结构之间的神经传递和相互作用，使得先前暴露于奖赏(诸如食物、性、酒精和其他药物)的记忆导致对于外部诱因(external cues)的生物和行为反应，进而触发渴求和/或参与成瘾行为。

成瘾的特征在于不能够持续地戒除物质或行为模式，受损的行为控制，渴求物质或奖赏经历/行为，受试者行为和人际关系的重大问题的认知减弱；以及功能失调的情绪反应。外部诱因触发渴求和药物使用以及增加参与其他潜在成瘾行为的频率的力量也是成瘾的特征，其中海马体在先前欣快或烦躁经历的记忆方面是重要的，并且杏仁核在使动机集中在选择与这些过往经历相关的行为方面是重要的。

戒断期之后持续的复发风险和/或再次发生是成瘾的另一个基本特征。这可以通过暴露于奖赏物质和行为、通过暴露于使用的环境诱因以及通过暴露于触发脑应激回路中活动增强的情绪应激源(emotional stressor)来触发。

与成瘾相关的症状中的一些包括，例如，执行功能受损，感知、学习、冲动控制、强迫性和判断的问题，改变其功能失调行为的意愿较低，显示出对于累积问题和并发症的严重程度明显缺乏认识。另外的症状包括个人的行为、认知、情绪和与他人相互交流的方面，包括个人与其家庭成员、其社区成员、其自身心理状态以及超越其日常经历的事物的联系的能力。

与成瘾相关的主要由于受损的控制引起的行为表现和并发症可以包括：以比个人预期高的频率和/或量的过度使用和/或参与成瘾行为，通常与持续渴望和对于行为控制的不成功尝试相关；在物质使用或从物质使用和/或参与成瘾行为的影响中恢复方面损失过长的时间，这对于社会和职业功能具有重大不利影响(例如人际关系问题的发展或在家庭、学校或工作中的责任的忽视)；继续使用和/或参与成瘾行为，尽管存在可能由物质使用和/或相关成瘾行为引起或加剧的持续或反复出现的身体或心理问题；行为集合(behavioralrepertoire)变窄，集中于作为成瘾的一部分的奖赏；以及即使认识到问题，明显缺乏采取一致的改善行动的能力和/或意愿。

与成瘾相关的认知症状可以包括：对于物质使用的沉迷(preoccupation)；对于与药物或奖赏行为相关的相对利弊的改变的评价；以及错误地认为一个人生活中经历的问题是由其他原因造成的，而不是成瘾的可预测后果。

与成瘾相关的情绪症状包括：增加的焦虑、烦躁和情绪痛苦；对于与脑应激系统的募集相关的应激源的增加的敏感性，使得“事物似乎更有压力”成为结果；以及难以识别情感、难以区分情感和情绪激发的身体感知、和难以向他人描述情感(有时被称为述情障碍)。

由于成瘾是一种慢性疾病，可能中断缓解期的复发期是成瘾的常见特征。同样重要的是认识到重返药物使用或病态追求奖赏并非不可避免。

脑和行为对药物暴露和参与成瘾行为响应的定性方式在成瘾后期阶段不同于早期阶段，这表明可能并不公然明显的进展。

本发明还提供了治疗罹患成瘾紊乱，包括与所述成瘾紊乱相关的任何状况和症状的患者中的所述成瘾紊乱，包括与所述成瘾紊乱相关的任何状况和症状的方法，所述方法包括向所述患者施用氨基酸的脂肪酸酰胺，包括其立体异构体和盐。

在另外的方面中，本发明提供了治疗罹患物质滥用紊乱，包括与所述物质滥用紊乱相关的状况和症状的患者中的所述物质滥用紊乱，包括与所述物质滥用紊乱相关的状况和症状的方法，所述方法包括向所述患者施用氨基酸的脂肪酸酰胺，包括其立体异构体和盐。

在还另一个方面中，本发明提供了治疗罹患物质成瘾，包括与所述物质成瘾相关的任何紊乱、状况和症状的患者中的所述物质成瘾，包括与所述物质成瘾相关的任何紊乱、状况和症状的方法，所述方法包括向所述患者施用氨基酸的脂肪酸酰胺，包括其立体异构体和盐。

在一些实施方案中，所述物质是药物(包括刺激剂如可卡因和海洛因、巴比妥酸盐、尼古丁、镇痛药物、睡眠诱导药物)、香烟、酒精饮料、食物及其任何组合。

在一些实施方案中，所述成瘾是药物成瘾(包括镇痛药物、阿片样物质(opioid)、睡眠诱导药物等)、香烟成瘾(也为尼古丁成瘾)、酒精成瘾、食物成瘾、行为成瘾(包括任何类型的OCD行为、性成瘾、发作性睡病等)及其任何组合。

在一些实施方案中，所述成瘾是尼古丁成瘾。在其他实施方案中，所述成瘾是阿片样物质成瘾(作用于阿片样物质受体，产生吗啡样效应的物质)。

在一些实施方案中，所述物质是药物、香烟、酒精饮料、食物及其任何组合。在另外的实施方案中，所述物质是尼古丁。在其他实施方案中，所述物质是阿片样物质。

如本文的术语“成瘾治疗”是指施用治疗量的本文公开的有效改善成瘾紊乱，包括与其相关的其不希望的症状和状况的化合物和/或组合物，以便在成瘾紊乱、包括其症状和状况的出现前(例如在需要具有成瘾潜力的药物的治疗方案的受试者中，诸如在用阿片样物质治疗之前或治疗期间)防止所述成瘾紊乱、包括其症状和状况的表现，以便减缓成瘾的进展，减缓成瘾及其症状的恶化，以便促进缓解期的开始，减缓在成瘾的进行性慢性阶段中引起的不可逆损伤，以便延迟所述进行性阶段的开始，以便减轻成瘾和成瘾行为的严重程度或治愈成瘾和成瘾行为，以便促进恢复，或以便防止成瘾形式的发生，以便降低成瘾复发的频率和强度，以便维持成瘾和成瘾行为的缓解期，以便优化缓解期期间受试者的功能水平；以及以上的任何组合。

本发明还提供了氨基酸的脂肪酸酰胺，包括其立体异构体和盐，用于治疗在从滥用物质成瘾治疗中康复或解毒期间罹患戒断综合征的患者。

当提及“在从滥用物质成瘾治疗中康复或解毒期间的戒断综合征”时，应理解为涉及正在进行康复或解毒治疗的患者出现的任何症状，在该康复或解毒治疗期间，存在所述滥用物质的完全或部分停止使用或者所述滥用物质的剂量减少。

在另一个方面中，本发明提供了氨基酸的脂肪酸酰胺，包括其立体异构体和盐，用于治疗在从滥用物质成瘾治疗中康复或解毒期间或之后罹患成瘾复发的患者。

当提及“在从滥用物质成瘾治疗中康复或解毒期间或之后的成瘾复发”时，应理解为涉及在从滥用物质成瘾治疗中康复或解毒期间或之后的违反的结果。

在一些实施方案中，所述成瘾是尼古丁成瘾。在其他实施方案中，所述成瘾是阿片样物质成瘾。在其他实施方案中，所述成瘾是药物成瘾。在另外的实施方案中，所述成瘾是止痛药物(pain killer drug)成瘾(包括对于镇痛药物的成瘾(addiction to analgesicdrug)、对于用于减轻疼痛的药物的成瘾，也被称为镇痛药物成瘾(analgesic drugaddiction))。在另外的实施方案中，所述成瘾是镇痛药物成瘾。在其他实施方案中，所述成瘾是可卡因成瘾。在另外的实施方案中，所述成瘾是行为成瘾(包括但不限于：进食成瘾、饮酒成瘾、呕吐成瘾、性成瘾、购物成瘾、游戏成瘾、强迫性行为成瘾、赌博成瘾等)。

在一些实施方案中，所述物质选自药物、香烟、酒精饮料、食物及其任何组合。在一些实施方案中，所述物质是尼古丁。在其他实施方案中，所述物质是阿片样物质。在另外的实施方案中，所述物质是可卡因。在另外的实施方案中，所述物质是酒精。在另外的实施方案中，所述物质是食物。在另外的实施方案中，所述物质是止痛药物。

本发明还提供了治疗在从滥用物质成瘾治疗中康复或解毒期间罹患戒断综合征的患者的方法，所述方法包括向所述患者施用氨基酸的脂肪酸酰胺，包括其立体异构体和盐。

本发明还包括治疗在从滥用物质成瘾治疗中康复或解毒期间或之后罹患成瘾复发的患者的方法，所述方法包括向所述患者施用氨基酸的脂肪酸酰胺，包括其立体异构体和盐。

如本文中使用的术语“氨基酸的脂肪酸酰胺”意在包括通过在氨基酸部分的氮原子(-NHCR₂R₃C(＝O)OH)和脂肪酸部分的羰基原子(-C(＝O)R₁)之间形成酰胺键，使脂肪酸部分(具有通式-C(＝O)R₁，其中R₁如本文所定义)和氨基酸部分(具有通式-NHCR₂R₃C(＝O)OH，其中R₂和R₃如本文所定义)缀合而得到的化合物。应理解，虽然本发明的化合物通常被称为脂肪酸部分和氨基酸部分的缀合物，但本发明的缀合物可以使用单步或多步合成方法由多种前体形成。

当提及“脂肪酸部分”时，其应被理解为包括可衍生自脂肪酸的酰基部分，即通常为R₁C(＝O)-的形式，其中R₁表示相应的脂肪酸的脂肪族链(饱和或不饱和)，并且其中脂肪酸酰胺的脂肪酸部分与氨基酸部分的附接点是通过脂肪酸部分的羰基碳原子。

如本文中使用的术语“脂肪酸”意在包括具有脂肪族链(“尾”)的单羧酸，其中所述脂肪族链可以是饱和的、单不饱和的(脂肪族链上任何位置具有一个不饱和键)或多不饱和的(脂肪族链上任何位置具有至少两个不饱和键)。脂肪族链上的不饱和键可以是双键(处于顺式构型和/或反式构型)或三键。脂肪酸的脂肪族链(饱和的、单不饱和的或多不饱和的)的长度可以在10个至30个碳原子之间变化，或者在一些实施方案中在13个至22个碳原子之间变化。脂肪酸可以来源于天然来源(动物来源或植物来源)、合成来源或半合成来源。

饱和脂肪酸的非限制性实例是月桂酸、肉豆蔻酸、棕榈酸和硬脂酸。单不饱和脂肪酸的非限制性实例是肉豆蔻油酸、棕榈油酸和油酸。多不饱和脂肪酸的非限制性实例是亚油酸、α-亚麻酸、花生四烯酸、二十碳五烯酸、芥酸和二十二碳六烯酸。

在一些实施方案中，脂肪酸酰胺的所述脂肪酸部分选自饱和脂肪酸部分(即R₁是仅由单一饱和键组成的烃)、单不饱和脂肪酸部分(即R₁是包含一个不饱和键(双键或三键)的烃)和多不饱和脂肪酸部分(即R₁是包含至少两个不饱和键(各自独立地为双键或三键)的烃)。在本发明的其他实施方案中，脂肪酸部分是油酰基脂肪酸部分(CH₃(CH₂)₇CH＝CH(CH₂)₇C(＝O)-)，即衍生自对应的油酸。

在一些另外的实施方案中，所述脂肪酸部分被选自以下的至少一个基团取代：-C₁-C₆烷基、-OH、-OR’、-SH和-SR”，其中R’和R”各自独立地是直链或支链-C₁-C₆烷基。在其他实施方案中，所述脂肪酸部分被至少一个直链或支链-C₁-C₆烷基取代。在其他实施方案中，所述脂肪酸部分被至少两个直链或支链-C₁-C₆烷基取代。在还其他实施方案中，所述至少一个C₁-C₆烷基是甲基。

在另外的实施方案中，所述至少一个取代位于所述脂肪酸部分的α-位或β-位中的至少一个上。如本领域已知的，“所述脂肪酸部分的α-位”是脂肪酸部分的脂肪族链上直接邻近脂肪酸部分的羰基碳原子的碳原子；“所述脂肪酸部分的β-位”是脂肪酸部分的脂肪族链上邻近脂肪酸部分的羰基碳原子的第二个碳原子的碳原子。

在一些实施方案中，本发明的脂肪酸酰胺在脂肪酸部分的α-位处被取代。在其他实施方案中，本发明的脂肪酸酰胺在脂肪酸部分的β-位处被取代。在另外的实施方案中，本发明的脂肪酸酰胺在脂肪酸部分的α-位和β-位处均被取代。

当提及“氨基酸部分”时，其应被理解为包括可衍生自氨基酸的自由基，即通常具有式-NHCR₂R₃COOH，其中如本文定义的所述氨基酸部分与脂肪酸部分的附接点是通过如上文阐述的氨基酸部分的胺。

“氨基酸”是如本领域已知的氨基酸(即，α-氨基酸或β-氨基酸)。在一些实施方案中，氨基酸部分衍生自通式H₂NCR₂R₃COOH的氨基酸，其中R₂和R₃如上文定义。对应于本文定义的化合物的氨基酸部分的氨基酸的非限制性实例是丙氨酸、天冬酰胺、天冬氨酸、半胱氨酸、谷氨酸、谷氨酰胺、甘氨酸、二甲基甘氨酸、脯氨酸、丝氨酸、酪氨酸、精氨酸、组氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、赖氨酸、甲硫氨酸、苯丙氨酸、苏氨酸、色氨酸和缬氨酸。如本文使用的氨基酸可以来源于天然来源、合成来源或半合成来源。如本文使用的氨基酸也可以呈D-构型或L-构型。在一些实施方案中，氨基酸是L-氨基酸。

在一些实施方案中，所述氨基酸部分选自丝氨酸、甘氨酸、二甲基甘氨酸、丙氨酸、半胱氨酸、酪氨酸和苯丙氨酸。在其他实施方案中，所述氨基酸部分是丝氨酸。

在本发明的一些实施方案中，所述脂肪酸部分任选地被选自以下的一个基团取代：-C₁-C₆烷基、-OH、-O(C₁-C₁₀烷基)、-SH和-S(C₁-C₁₀烷基)；并且氨基酸部分任选地被选自以下的一个基团取代：-C₁-C₆烷基、-OH和-O(C₁-C₁₀烷基)、苯基和苯酚。

在另外的实施方案中，所述氨基酸部分是未被取代的。

在仍然另外的实施方案中，所述氨基酸部分被选自以下的至少一个基团取代：-C₁-C₆烷基、-OH和-O(C₁-C₁₀烷基)，其中R₃是-C₁-C₆烷基。在其他实施方案中，所述氨基酸被至少一个-C₁-C₆烷基取代。在其他实施方案中，所述氨基酸被至少两个-C₁-C₆烷基取代。在另外的实施方案中，所述-C₁-C₆烷基是甲基。在还另外的实施方案中，所述取代位于所述氨基酸部分的α-位上。

“所述氨基酸部分的α-位”是氨基酸部分上直接邻近氨基酸部分的羰基碳原子的碳原子。

在一些另外的实施方案中，所述氨基酸部分选自丝氨酸、半胱氨酸、甘氨酸、二甲基甘氨酸、丙氨酸、酪氨酸和苯丙氨酸的部分。在一些实施方案中，所述氨基酸部分被选自以下的至少一个基团取代：直链或支链-C₁-C₆烷基、直链或支链-C₂-C₆烯基、直链或支链-C₂-C₆炔基、-OH和-O(C₁-C₁₀烷基)。

在一些其他实施方案中，所述氨基酸被至少一个-C₁-C₆烷基取代。在其他实施方案中，所述氨基酸被至少两个-C₁-C₆烷基取代。在还另外的实施方案中，所述-C₁-C₆烷基是甲基。在一些实施方案中，所述取代位于所述氨基酸部分的α-位上。

在一些实施方案中，所述脂肪酸部分被选自以下的至少一个基团取代：-C₁-C₆烷基、-OH、-O(C₁-C₁₀烷基)、-SH和-S(C₁-C₁₀烷基)。在另外的实施方案中，所述脂肪酸部分被至少一个-C₁-C₆烷基取代。在一些实施方案中，至少一个C₁-C₆烷基是甲基。在另外的实施方案中，所述至少一个取代位于所述脂肪酸部分的α-位或β-位中的至少一个上。

在一些实施方案中，本发明的脂肪酸酰胺是通式(I)的化合物，包括其立体异构体和盐：

其中R₁选自直链或支链-C₁₃-C₂₂烷基、直链或支链-C₁₃-C₂₂烯基和直链或支链-C₁₃-C₂₂炔基；任选地被选自以下的至少一个基团取代：-C₁-C₆烷基、-OH、-O(C₁-C₁₀烷基)、-SH和-S(C₁-C₁₀烷基)；R₂和R₃独立地选自H、直链或支链-C₁-C₆烷基、直链或支链-C₂-C₆烯基、直链或支链-C₂-C₆炔基；各自任选地被至少一个-OH、-SH、-O(C₁-C₆烷基)、苯基和苯酚取代；条件是R₂和R₃中的至少一个不同于H。

在一些实施方案中，R₂是直链或支链-C₁-C₆烷基。在其他实施方案中，R₃是直链或支链-C₁-C₆烷基。在另外的实施方案中，R₂和R₃各自独立地是-C₁-C₆烷基。在还其他实施方案中，所述-C₁-C₆烷基是甲基。在一些实施方案中，R₁是直链或支链-C₁₃-C₂₂烯基。在一些实施方案中，所述直链或支链-C₁₃-C₂₂烯基包含1个至6个之间的双键。

如本文中使用的术语“立体异构体”意在包括具有与对应的立体异构体相同的组成，但其原子在空间上的排列不同于所述对应的立体异构体的异构体。例如，立体异构体可以是对映异构体、非对映异构体和/或顺反(E/Z)异构体。应理解，包含本发明的脂肪酸酰胺的组合物可以包含单一对映异构体、单一非对映异构体以及以任何比率的其混合物(例如外消旋混合物、非外消旋混合物、至少两种非对映异构体的混合物等)。此外，本发明包括通过体内或体外代谢或通过任何类型的合成途径获得的本发明的脂肪酸酰胺的任何立体异构体。

如本文中使用的术语“盐”意在包括通过酸加成或碱加成获得的任何盐。在一些实施方案中，盐是通过本发明的脂肪酸酰胺(例如在酰胺部分)的质子化获得的酸加成盐。在其他实施方案中，盐是通过使来自本发明的脂肪酸酰胺(例如来自酸性部分，即脂肪酸酰胺的-COOH)的质子去质子化获得的碱加成盐。形成本发明的脂肪酸酰胺的盐的抗衡离子可以以非限制性方式包括无机阳离子或有机阳离子，其在一些实施方案中是药学上可接受的，诸如碱金属阳离子，例如钾或钠阳离子，碱土金属阳离子，诸如镁或钙或铵阳离子，包括例如衍生自有机含氮碱的阳离子，诸如三烷基胺衍生的阳离子，例如三乙基铵离子。

术语“烷基”意在包括单价线性(无支链)、支链或环状饱和烃自由基。当提及“C₁-C₆烷基”时，其应被理解为包括具有1个、2个、3个、4个、5个或6个碳原子的任何线性或支链烷基。C₁-C₆烷基的非限制性实例包括甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、2-丁基、3-丁基、正异丁基、2-异丁基、正戊基、2-戊基、3-戊基、2-甲基丁基、2-二甲基丙基、正己基、2-己基、3-己基、2-甲基戊基、3-甲基戊基、2,3-二甲基丁基、2,2-二甲基丁基、2-甲基-2-乙基丙基、环丁基、1-甲基环丁基、2-甲基-环丁基、1,1-二甲基环丁基、1,2-二甲基环丁基、2,2-二甲基环丁基、甲基-1-环丁基、1-环丁基乙基、2-环丁基乙基、环戊基、1-甲基环戊基、2-甲基环戊基。类似地，当提及“-C₁₀-C₃₀烷基”时，其应被理解为包括具有10个、11个、12个、13个、14个、15个、16个、17个、18个、19个、20个、21个、22个、23个、24个、25个、26个、27个、28个、29个、30个碳原子的任何线性或支链烷基自由基。类似地，当提及“-C₁₁-C₂₀烷基”时，其应被理解为包括具有11个、12个、13个、14个、15个、16个、17个、18个、19个、20个碳原子的任何线性或支链烷基自由基。类似地，当提及“-C₁₃-C₂₂烷基”时，其应被理解为包括具有13个、14个、15个、16个、17个、18个、19个、20个、21个、22个碳原子的任何线性或支链烷基自由基。

术语“烯基”意在包括具有至少一个双键的线性(无支链)或支链烃链。双键可以在烯基链的任何两个碳原子之间，并且可以呈顺式或反式(或E或Z)构型。烯基的双键可以未缀合至或缀合至另一个不饱和基团。当提及“-C₁₃-C₂₂烯基”时，其应被理解为包括具有13个、14个、15个、16个、17个、18个、19个、20个、21个、22个碳原子的任何线性或支链烯基自由基。类似地，当提及“-C₁₁-C₂₀烯基”时，其应被理解为包括具有11个、12个、13个、14个、15个、16个、17个、18个、19个、20个碳原子的任何线性或支链烯基自由基。类似地，当提及“-C₁₀-C₃₀烯基”时，其应被理解为包括具有10个、11个、12个、13个、14个、15个、16个、17个、18个、19个、20个、21个、22个、23个、24个、25个、26个、27个、28个、29个、30个碳原子的任何线性或支链烯基自由基。

术语“炔基”意在包括具有至少一个三键的线性(无支链)或支链烃链。三键可以在炔基链的任何两个碳原子之间。炔基的三键可以未缀合至或缀合至另一个不饱和基团。当提及“-C₁₃-C₂₂炔基”时，其应被理解为包括具有13个、14个、15个、16个、17个、18个、19个、20个、21个、22个碳原子的任何线性或支链炔基自由基。类似地，当提及“-C₁₁-C₂₀炔基”时，其应被理解为包括具有11个、12个、13个、14个、15个、16个、17个、18个、19个、20个碳原子的任何线性或支链炔基自由基。类似地，当提及“-C₁₀-C₃₀炔基”时，其应被理解为包括具有10个、11个、12个、13个、14个、15个、16个、17个、18个、19个、20个、21个、22个、23个、24个、25个、26个、27个、28个、29个、30个碳原子的任何线性或支链炔基自由基。

术语“苯基”应理解为意指具有式C₆H₅的芳香族环状基团。术语“苯酚”应理解为意指具有式C₆H₄OH的芳香族基团，其中在环状环上的任何点处的所述-OH基团可以被取代。

以上定义的术语中的某些术语在结构式中可以出现多于一次，并且在这样的出现时，每个术语应独立于其他术语被定义。

如本文中使用的术语“任选地被取代”意味着所讨论的基团未被取代，或者被指定的取代基中的一个或更多个取代。当所讨论的基团被多于一个取代基取代时，取代基可以相同或不同。

在另一个方面中，本发明包括一种药物组合物，所述药物组合物包含如本文公开的脂肪酸酰胺，包括其任何立体异构体和盐。本发明还提供了一种药物组合物，所述药物组合物包含与至少一种其他治疗剂组合的至少一种如本文公开的脂肪酸酰胺，包括其任何立体异构体和盐。本发明还提供了本文公开的脂肪酸酰胺用于制备药物组合物的用途。

本发明还涉及一种药物组合物，所述药物组合物包含与药学上可接受的辅助剂和任选地至少一种另外的治疗剂组合(例如，混合)的本文公开的脂肪酸酰胺。辅助剂从与组合物的其他成分相容并且对于其接受者不是有害的意义上说必需是“可接受的”。

药物组合物包括适用于口服、直肠、鼻内、局部(包括经皮、含服和舌下)、阴道或肠胃外(包括皮下、肌内、静脉内和皮内)施用或经由植入物施用的那些药物组合物。

在一些实施方案中，本文公开的药物组合物是经皮组合物。在一些其他实施方案中，本文公开的所述脂肪酸酰胺使用经皮制剂施用至患者。在一些实施方案中，所述经皮制剂/组合物采用皮肤贴剂。

在一些实施方案中，本文公开的药物组合物是鼻内组合物。在一些其他实施方案中，本文公开的所述脂肪酸酰胺使用鼻内制剂施用至患者。在一些实施方案中，所述鼻内制剂/组合物采用递送装置(例如喷雾器)。

组合物可以通过药学领域中熟知的任何方法来制备。这样的方法包括使得本发明的脂肪酸酰胺或其组合与任何辅助剂缔合的步骤。辅助剂，作为辅助成分，通常选自本领域中常规的那些辅助剂，诸如载体、填充剂、粘合剂、稀释剂、崩解剂、润滑剂、着色剂、调味剂、抗氧化剂和润湿剂。

适用于口服施用的药物组合物可以作为离散剂量单位呈现，诸如丸剂、片剂、糖衣丸或胶囊、或作为粉末或颗粒呈现、或作为溶液或悬浮液呈现。活性成分还可以作为推注剂(bolus)或糊剂呈现。组合物还可以被加工成用于直肠施用的栓剂或灌肠剂(enema)。

本发明还包括与包装材料组合的如上文描述的药物组合物，所述包装材料包括用于如上文描述的用途的组合物的使用说明。

对于肠胃外施用，合适的组合物包括水性和非水性无菌注射剂。组合物可以呈现在单位剂量或多剂量容器中，例如密封的小瓶和安瓿，并且可以储存在冷冻干燥的(冻干的)条件下，仅需要在使用前添加无菌液体载体，例如水。对于经皮施用，可以预期例如凝胶、贴剂或喷雾剂。适用于肺部施用例如通过鼻吸入的组合物或制剂包括可以借助于计量的剂量加压气溶胶、喷雾器或吹药器产生的细粉尘或薄雾。

组合物的施用的精确剂量和方案将必然取决于待被实现的效果并且可以随特定配方、施用途径和组合物待被施用至其的个体受试者的年龄和状况而变化。

本发明还提供了试剂盒，该试剂盒包含如上文描述的至少一种本发明的化合物或包含本发明化合物的药物组合物及其使用说明。

本发明还提供了治疗罹患成瘾紊乱，包括与所述成瘾紊乱相关的任何状况和症状的患者的方法；所述方法包括向所述患者施用至少一种氨基酸的脂肪酸酰胺，包括其立体异构体和盐。

本发明提供了治疗物质滥用紊乱，包括与所述物质滥用紊乱相关的状况和症状的方法，所述方法包括向患者施用至少一种氨基酸的脂肪酸酰胺，包括其立体异构体和盐。

在另外的方面中，本发明提供了治疗罹患物质成瘾，包括与所述物质成瘾相关的任何紊乱、状况和症状的患者的方法；所述方法包括向患者施用至少一种氨基酸的脂肪酸酰胺，包括其立体异构体和盐。

附图简述

被视为本发明的主题被特别地指出并且在说明书的结束部分中被明确地要求保护。然而，当与附图一起阅读时，通过参考以下详细描述，本发明关于组织和操作方法两者与其目的、特征、和优点一起可以被最好地理解，在附图中：

图1示出了在实验2中的每个MWD试验期间，用VEH或5mg/kg OlGly处理的大鼠在无药物测试试验期间在盐水配对底板和MWD配对底板上花费的以秒计的平均值(±sem)时间。星号表示盐水配对底板和吗啡戒断配对底板之间的显著差异，***p<0.001。

图2示出了在实验4中的吗啡训练试验期间，接受VEH、5mg/kg油酰基甘氨酸或30mg/kg油酰基甘氨酸的大鼠在无药物测试试验期间在盐水配对底板和吗啡配对底板上花费的以秒计的平均值(±sem)时间。星号表示跨越组对于吗啡配对底板的显著的总体偏好*p＝0.025。

图3A-图3C示出了代表性的色谱图，描述了在TBI小鼠的岛叶中OlGly的存在，但在假手术小鼠或首次用于实验的小鼠(

mice)的岛叶中不存在OlGly。(3A(1))如经MS和MS/MS谱确认的，损伤的岛叶显示出OlGly的形成。在假手术小鼠(3B)以及首次用于实验的小鼠(3C)中，内源性OlGly在箭头示出的合成OlGly的保留时间处是检测不到的。图3A(2)色谱图迹线表示总离子流(TIC)，并且图3A(3)色谱图迹线表示提取的色谱图m/z约340amu。

图4示出了OlGly对吗啡-CPP没有影响。用盐水或吗啡(10mg/kg，皮下(s.c.))训练小鼠持续3天。在用媒介物预处理的吗啡训练的小鼠中观察到了稳健的CPP。OlGly未减弱吗啡CPP的表达(30mg/kg，腹膜内(i.p.))。*p<0.05，相对于媒介物/媒介物。值表示每组n＝7-8只小鼠的平均值±SEM。

图5A-图5E示出了在OlGly施用之后以大麻素四体(tetrad)对大麻模拟效果的评价。OlGly不产生抗伤害效应(antinociception)(5A)、体温过低(5B)或如以下测量所反映的运动行为：行进距离(5C)、速度(5D)和不动时间(immobility time)(5E)。此外，OlGly未引起僵住症反应，如在爬杆测试(bar test)中所评价的(数据未示出)。值表示每组n＝9只小鼠的平均值±SEM。

图6示出了在对于旷场(open field)运动室习惯两天后的可卡因精神运动敏化，小鼠(每组n＝10只)被重复注射20mg/kg可卡因或盐水持续10天。通过波束(beam)中断的数目来监测运动活动。

图7A-图7L示出了敏化后可卡因敏化小鼠的奖赏系统中增加的内源性大麻素。处死小鼠，并且解剖出伏隔核(图7A-图7F)和海马体(图7G-图7L)并分析不同的化合物。针对OlGl(油酰基甘氨酸)(图7A和图7G)、2-AG(2-花生四烯酰基甘油，一种内源性大麻素)(图7B和图7H)、OS(油酰基丝氨酸)(图7C和图7I)、AEA(花生四烯酰基乙醇酰胺(arachidonoylethanolamide)，anandamide，一种内源性大麻素)(图7D和图7J)、PEA(棕榈酰基乙醇酰胺(palmitoyl ethanolamide))(图7E和图7K)、OEA(油酰基乙醇酰胺(oleoylethanolamide))(图7F和图7L)呈现了结果。*p<0.001，盐水相对于可卡因。

将理解的是，为了简单且清楚说明，在附图中示出的要素不一定按比例绘制。例如，为了清楚，一些要素的尺寸可以相对于其他要素被放大。此外，在认为合适的情况下，附图标记(reference numeral)可以在附图中被重复以指示对应的或类似的要素。

本发明的详细描述

在以下详细描述中，大量具体细节被阐述以便提供对本发明的完全理解。然而，本领域技术人员将理解本发明可以在没有这些具体细节的情况下被实践。在其他实例中，熟知的方法、程序和组分未被详细地描述，以便不使本发明模糊。

部分I：油酰基甘氨酸干扰吗啡戒断，但不干扰吗啡奖赏

受试者

雄性Sprague-Dawley大鼠(200g至250g)被用作受试者。动物被成对圈养在不透明的鞋盒笼中，同时随意接受食物和水。它们被暴露于12/12h的反向光/暗循环中，其中晚上7点开灯。所有实验都在大鼠的暗循环期间进行。圈养所有大鼠的群居室(colony room)保持在21℃。所有动物程序都由圭尔夫大学动物护理委员会(the Animal Care Committee ofthe University of Guelph)批准，并且遵守加拿大动物护理协会(the Canadian Councilof Animal Care)的指导方针。

药物

将吗啡和纳洛酮分别以20mg/ml和1mg/ml的浓度用盐水制备，然后以1ml/kg的量(volume)皮下(sc)注射。将OlGly和AM251溶解在以1:1:18的比例的乙醇、Tween 80和生理盐水的媒介物混合物中。首先将油酰基甘氨酸和AM251都溶解在乙醇中，然后向溶液中添加Tween 80，并且用氮气流蒸发掉乙醇；之后，添加盐水。最终媒介物(VEH)由1:9(Tween/盐水)组成。油酰基甘氨酸以5mg/ml或30mg/ml的浓度制备，并且腹膜内注射。

设备

使用了具有可移动底板的位置训练设备。训练设备是长方形箱(60×25×25cm)，由黑色Plexiglas和金属丝网盖制成。在训练期间，在黑色Plexiglas表面的顶部上的黑色橡胶垫上放置可移动金属底板，该可移动金属底板特征在于有孔表面(直径1cm，彼此间隔1cm)或网格表面(1/2cm水平杆，间隔1cm)。不同的底板充当区分处理底板和VEH底板的情境化诱因。在测试和预测试试验期间，将分成两个相等的半份的黑色金属底板(一半有孔表面和一半网格表面)放置在训练箱中。两个底板半份的触觉刺激特性与在训练中使用的它们的匹配的底板对应物相同。使用Ethovision软件定义箱和底板类型周界，以及定义中性区域。

程序

所有大鼠都接受了10min无药物预测试试验，以测量基线底板偏好。Ethovision在整个试验中跟踪大鼠的运动，以确定在每种底板上花费了多少时间。然后，以平衡的方式将每只大鼠分配至特定的药物组和药物底板(孔底板或网格底板)。将对任一种底板具有超过200s的偏倚的大鼠取出。在每次试验之间，清洗底板和训练箱。

实验1：OlGly产生CPP或CPA的潜力

大鼠(n＝12)接受了两个使用油酰基甘氨酸的训练试验。对于每个试验，它们接受5mg/kg油酰基甘氨酸或VEH的腹膜内(ip)注射(间隔24小时；以平衡的顺序)，20分钟之后放置到衬有网格底板或孔底板(平衡的)的训练箱中，持续20分钟。在最后的训练日的三天后，大鼠接受了使用分开的网格底板/孔底板的10min无药物测试试验。

实验2：全身性OlGly对纳洛酮催促MWD-CPA的建立的影响

大鼠(n＝22)接受了两个为期3天的训练循环，以便获得纳洛酮催促MWD诱导的位置回避。在第1天，将与指定药物底板相对的底板与皮下盐水注射配对。在盐水注射的10分钟后，将大鼠放入具有指定的盐水配对底板的训练箱中持续20分钟，同时用Ethovision跟踪它们的运动。在第2天，大鼠在前一天的盐水训练试验的24h后皮下接受了高剂量的吗啡(20mg/kg)。在注射之后，将它们放置在空鞋盒笼中，并且监测呼吸窘迫的迹象，并且在必要时进行刺激，直到他们恢复并且被送回圈养笼。在第3天，吗啡注射后24h，将大鼠注射VEH(n＝12)或OlGly(n＝12)，10min之后接受纳洛酮的皮下注射。10min后，将它们放置在具有指定的纳洛酮配对底板的训练箱中持续20分钟，同时使用Ethovision跟踪它们的运动。四天后，使所有大鼠经历第二个为期3天的训练周期。在最后的纳洛酮试验的五天后，进行了10min无药物测试试验。测试试验由与预测试试验相同程序组成，但在测试前10min给予大鼠皮下盐水注射。在测试试验期间，Ethovision跟踪了大鼠在每一种底板表面上花费的时间量。

实验3：全身性OlGly对吗啡诱导的CPP的建立的影响

大鼠接受了四个为期2天的训练试验，以便产生吗啡诱导的条件性位置偏好。在每个训练试验期间，所有大鼠都在一天接受吗啡(10mg/kg)的皮下注射，并且在另一天接受盐水的皮下注射(以平衡顺序)，10min后被分别放置在具有吗啡配对底板或盐水配对底板的训练室中，持续30min的持续时间。对于吗啡训练试验，将大鼠施用VEH(n＝11)、5mg/kgOlGly(n＝11)或30mg/kg OlGly(n＝10)的腹膜内注射，10min后进行吗啡注射。对于盐水训练试验，所有大鼠都注射VEH，10min后进行盐水注射。在最后的训练日的三天后，大鼠接受了使用分开的网格底板/孔底板的10min无药物测试试验。所有大鼠接受盐水的皮下施用，10分钟后进行每个测试试验。

结果

实验1：油酰基甘氨酸产生CPP或CPA的潜力

OlGly并未产生对药物配对底板的显著偏好或厌恶，t(11)＝0.09,ns。大鼠在VEH配对底板上花费的时间(M＝232.16sec，+36.44)与它们在油酰基甘氨酸配对底板上花费的时间(M＝299.00sec，+36.44)等量。此外，活动测量显示出，与VEH相比，训练期间油酰基甘氨酸无运动效应(motoric effect)。

实验2：全身性油酰基甘氨酸对MWD-CPA的建立的影响

OlGly明显干扰纳洛酮催促MWD诱导的CPA的建立。图1示出了在实验2的每个MWD试验期间，接受VEH或油酰基甘氨酸的大鼠在无药物测试试验中在盐水配对底板和MWD配对底板上花费的平均值(+sem)秒数。具有预处理药物的组间因素(VEH、5mg/kg OlGly)和底板的组内因素(MWD、盐水)的2×2混合因素方差分析(ANOVA)显示出显著的药物底板相互作用，F(1,20)＝6.80，p＝0.017。随后的配对t检验显示，仅VEH组存在底板厌恶，t(11)＝4.59，p<0.001。训练试验期间的活动性评价显示出训练药物的显著效果，F(1,20)＝118.75；p<0.001，其中与盐水训练试验相比，大鼠在纳洛酮训练试验期间明显缺乏活动，但用OlGly预处理并不改变活动性。

实验3：全身性OlGly对吗啡诱导的CPP的建立的影响

5mg/kg或30mg/kg的OlGly并未改变吗啡诱导的位置偏好的建立。图2呈现了在每个MWD训练试验期间，接受VEH、5mg/kg或30mg/kg OlGly的大鼠在无药物测试试验期间在盐水配对底板和MWD配对底板上花费的平均值(+sem)秒数。具有预处理药物的组间因素(VEH、5mg/kg OlGly、30mg/kg OlGly)和底板的组内因素(吗啡、盐水)的3×2混合因素方差分析显示出仅底板的显著影响，F(1,31)＝5.62，p＝0.025，没有显著的药物底板相互作用。总的来说，所有大鼠都显示出吗啡诱导的CPP，但全身性OlGly施用并未改变这种偏好。此外，训练试验期间的活动性评价显示出显著的试验效果，F(1,31)＝26.40；p<0.001，其中与盐水训练试验相比，大鼠在吗啡训练试验期间明显缺乏活动，但用OlGly预处理并不改变活动性。

部分II：小鼠中脑创伤产生的油酰基甘氨酸减少了尼古丁奖赏和戒断

动物

将称重为18g–20g的雄性C57BL/6小鼠(Charles River，Italy)用于轻度TBI重物坠落(WD)模型。将小鼠在受控照明(12h光/暗循环；早上6:00光照)和标准环境条件(环境温度20℃–22℃，湿度55％–60％)下以每笼三只圈养至少1周，然后开始实验。动物食物和自来水可随意获得。将具有27g–32g体重的雄性ICR小鼠(6-8周龄；Harlan,Indianapolis,IN)用作所有体内药理学实验的受试者。将小鼠以12/12光/暗循环(0600h光照)分组圈养(每笼四只)，并且随意给予食物和水。所有动物协议均由弗吉尼亚联邦大学动物护理和使用机构委员会(the Virginia Commonwealth University Institutional Animal Care and UseCommittee)批准，遵照美国国立卫生研究院实验动物护理和使用指南(the NationalInstitutes of Health Guide for the Care and Use of Laboratory Animals)(实验动物资源协会(Institute of Laboratory Animal Resources)，2011)，并且由那不勒斯第二大学动物伦理委员会批准(the Animal Ethics Committee of The Second Universityof Naples)，遵照意大利(D.L.116/92)和欧洲委员会(O.J.of E.C.L358/118/12/86)对于实验动物保护的规章。尽一切努力以减少动物数量和在实验期间的痛苦。

手术准备和损伤(小鼠WD模型)

使用那不勒斯实验室开发的重物坠落装置进行实验性轻度TBI(mTBI)。将小鼠通过250mg/kg阿佛丁(Avertin)的腹膜内注射进行麻醉，然后进行mTBI。在中线纵向切开之后，将头骨暴露以定位撞击区域，并且放置在金属管装置下，其中开口直接位于动物头部上方。损伤是通过从20cm高度的垂直金属导管，通过使圆柱形金属重物(50g)坠落来诱导的。撞击点在前冠状缝(前囟点(bregma))和后冠状缝(人字点(lambda))之间。损伤后立即用手术创缘夹(surgical wound clip)封闭皮肤，并且将小鼠放回其笼中，以便允许从麻醉和mTBI中恢复。假手术小鼠接受与针对mTBI描述的相同的程序，但不释放重物。

药物

[²H]₈AEA、[²H]₅2-AG、[²H]₄PEA、[²H]₄OEA、[²H]₈N-花生四烯酰基多巴胺(NADA)、[²H]₈AraSer和[²H]₈AraGly购自Cayman Chemicals(MI,USA)。OlGly是在Mechoulam实验室合成的，并且CP55,940((-)-顺式-3-[2-羟基-4-(1,1-二甲基庚基)苯基]-反式-4-(3-羟丙基)环己醇)和硫酸吗啡由NIDA(Rockville,MD)慷慨提供。将OlGly和CP55,940溶解在媒介物溶液中，该媒介物溶液由乙醇(总体积的5％)、alkamuls-620(Sanofi-Aventis,Bridgewater,NJ)(总体积的5％)和盐水(0.9％NaCl)(总体积的90％)组成。油酰基甘氨酸和CP55,940经由腹膜内(i.p.)施用途径给予。(-)-酒石酸氢尼古丁[(-)-1-甲基-2-(3-吡啶基)吡咯烷(+)-酒石酸氢盐]和盐酸美加明(mecamylamine HCl)购自Sigma-AldrichInc.(St.Louis,MO,USA)。将硫酸吗啡[吗啡半[硫酸盐五水合物]]尼古丁和美加明(2mg/kg)溶解在生理盐水中，并且经由皮下(s.c.)施用途径以10ml/kg的量给予。对于尼古丁CPP研究，使用0.5mg/kg尼古丁剂量，因为该剂量在ICR小鼠中可靠地产生显著的CPP(18)。如最近描述的，吗啡CPP以10mg/kg(皮下)进行(19)。对于尼古丁戒断研究，使用在异氟烷麻醉下植入的皮下渗透微型泵(2000型；Alzet Corporation,Cupertino,CA)连续灌注24mg/kg/天的尼古丁或盐水持续14天。在这里使用的三种行为范式中，这种长期尼古丁施用方案可靠地产生了显著的戒断综合征。

油酰基甘氨酸的合成

在氮气气氛下，向干燥二氯甲烷(10mL)中的油酸(1gm，3.54mmol)和N,N-二甲基甲酰胺(266μL,3.64mmol)的溶液中逐滴添加草酰氯(2.0M二氯甲烷中的溶液，3.5mL，7mmol)。将反应混合物搅拌1h，并且然后在氮气流动下蒸发溶剂。将在二氯甲烷(01mL)中的粗制材料添加至冰浴中的甘氨酸(800mg,01.01mmol)和2N氢氧化钾的溶液中。然后，将反应混合物搅拌1h，添加水(10mL)，并且用1N HCl将混合物酸化至pH 3。产物用乙醚(3×01mL)提取并且干燥(MgSO₄)，并且在减压下蒸发溶剂。将粗制材料在硅胶上色谱分离(用氯仿:甲醇洗脱)以得到结晶固体。熔点93℃-94℃(降解)；LC-MS：(M-H)⁺＝339m/z；NMR(CD₃OH,ppm)：5.35-5.32(m,2H),4.45(s,2H),2.13-2.18(m,6H),1.58(m,2H),1.32-1.29(m,20H),0.88(t,3H)。

内源性大麻素、N-酰基乙醇胺、N-酰基多巴胺、N-酰基丝氨酸和N-酰基甘氨酸的提取和定量

解剖后立即将脑组织在液氮中冷冻，这发生在处死后5min内。然后将冷冻的组织进行均质器匀化(dounce-homogenized)并用氯仿/甲醇/Tris-HCl 50mM pH 7.5(2:1:1,v/v)进行提取，所述氯仿/甲醇/Tris-HCl包含通过同位素稀释用于AEA、2-AG、PEA、OEA、NADA、AraSer和AraGly定量的内部氘化标准品(10pmol用于[²H]₈AEA；50pmol用于[²H]₅2-AG、

[²H]₄PEA和[²H]₄OEA；5pmol用于[²H]₈NADA、[²H]₈AraSer和[²H]₈AraGly)。然后脂质提取物通过在二氧化硅上的开床色谱法来纯化。如先前描述的(22，23)，级分被洗脱在CHCl₃中递增量的CH₃OH中，并且通过液相色谱-大气压化学电离-单四极杆质谱分析9:1(v/v)级分的一部分的AEA、2-AG、PEA和OEA水平。AEA、2-AG、PEA和OEA水平是基于它们与内部氘化标准品信号面积的面积比来计算的。9:1级分的一部分用于N-酰基多巴胺鉴定，而7:3级分用于N-酰基甘氨酸和N-酰基丝氨酸鉴定和定量，其通过配备有ESI接口的LC-MS-IT-TOF(Shimadzu Corporation,Kyoto,Japan)，使用多重反应监测(MRM)来进行。用于NADA的方法如先前描述。通过使用对应于氘化和未氘化的AraGly的分子离子[M+H]⁺的370.3192和362.2692的m/z值；或者对应于氘化和未氘化的AraGly的分子离子[M+H]⁺的400.3297和392.2795的m/z值，通过同位素稀释进行定量。使用本文报导的提取和分析程序(参见方法)从大鼠脑组织中的AraGly和AraSer的回收率分别是49.1±15.7％和42.1±15.9％(n＝7)。LC-ESI-IT-ToF方法是特异性的，并且对于所有分析的化合物，在MS模式下显示出50fmol的检出限(LOD，定义为信噪比大于3:1的浓度)，而在MS/MS模式下显示出1pmol的检出限。此外，未氘化的(0.025pmol-10pmol)相对于氘化(1pmol)的AraGly和AraSer的[M+H]⁺峰面积之间的比率随着各自的氘化标准品的量而线性变化。化合物的定量限为100fmol，并且方法的再现性为95％-99％。高分辨率[M+H]⁺值的色谱图被提取，并且用于校准和定量。LC分析以等度模式，使用Kinetex C18柱(10cm×2.1mm，5μm)和CH₃OH/水/乙酸(按体积计85:15:0.1)作为流动相，以0.15ml/min的流速进行。使用1.5ml/min的雾化气流和250℃的曲线去溶剂化线温度，使用在正模式下的ESI电离进行了N-酰基多巴胺、N-酰基甘氨酸和N-酰基丝氨酸的鉴定。

条件性位置偏好(CPP)研究

如先前描述的，进行了无偏倚的CPP范式。简而言之，CPP设备由线性排列的三个室组成(MedAssociates,St.Albans,VT,ENV3013)，具有白室和黑室(各自20×20×20cm)，所述白室和黑室也在底板纹理上不同(白色网或黑色杆)。这些室被具有光滑PVC底板的小灰色室隔开。隔板(partitions)可以被去除，以便允许从灰色室进入黑室和白室。在第1天，动物被限制在中间室持续5min的习惯时间，并且然后被允许在所有三个室中自由移动持续15min。记录在每个室中花费的时间，并且在基线室偏好方面没有观察到系统性偏倚。每天进行两次为期20min的训练(第2-4天)。在训练时期期间，小鼠被限制在较大室中的一个。对照组在上午在一个大室中接受盐水，并且在下午在另一个大室中接受盐水。尼古丁组在一个大室中接受尼古丁，并且在另一个大室中接受盐水。处理被相等地平衡，以便确保一些小鼠在上午接受尼古丁，而另一些小鼠在下午接受尼古丁。尼古丁配对室在受试者中是随机化的。时期间隔4h，并且由同一名研究者进行。在训练日的每一天，将小鼠用OlGly(腹膜内)或媒介物预处理，15min后进行尼古丁或吗啡(皮下)注射。尼古丁施用的5min后，受试者被给予20min的训练时期。在吗啡CPP比较研究中，小鼠在吗啡预处理(10mg/kg，皮下)15min后，被给予30min训练时期(19)。在测试日(第5天)，小鼠被允许在无药物状态下进入所有室持续15min。通过确定测试日期间在药物配对侧花费的时间相对于基线日期间在药物配对侧花费的时间之间的差异来计算偏好得分。

尼古丁催促戒断研究

将小鼠在异氟烷麻醉下植入皮下渗透微型泵(2000型；Alzet Corporation,Cupertino,CA)。泵递送24mg/kg/天的尼古丁或盐水持续14天。尼古丁的浓度根据动物重量和微型泵流速来进行调节。在第15天上午，小鼠被给予非选择性烟碱型乙酰胆碱受体(nAChR)拮抗剂美加明(2mg/kg，皮下)的皮下注射，并且15min后施用媒介物或OlGly(10mg/kg、30mg/kg和60mg/kg，腹膜内)。如先前描述的(24)，评价了在美加明施用后开始的10min的情感(焦虑样行为)和身体(躯体体征、痛觉过敏)尼古丁戒断迹象。首先在十字迷宫(theplus maze)测试中对小鼠的焦虑相关行为进行评价持续5min。在十字迷宫的张开臂(openarm)花费的持续时间被评价为焦虑相关反应的量度。在张开臂和闭合臂(closed arm)之间的臂交叉的数目也被计数作为运动活动的量度。十字迷宫评价后，立即对测量的躯体体征进行20min的观察，所述躯体体征包括爪和身体震颤、摇头、后退、跳跃、卷曲(curl)和上睑下垂(ptosis)。在观察时间内，将小鼠放置在没有寝具的透明活动笼中。针对每只小鼠记录躯体体征的总数，并且针对每个测试组绘制观察时间期间的躯体体征的平均数。在躯体体征观察时间后，立即使用热板测试评价痛觉过敏。将小鼠放置在10-cm宽的玻璃圆筒中，该玻璃圆筒在维持在52℃的热板(Thermojust Apparatus,Richmond,VA)上。记录反应时间(跳跃或舔爪)的延迟(latency)。特定的测试顺序是基于我们之前的研究选择的，这些研究表明，这种测试顺序降低了组内变异性，并且产生了最一致的结果(24)。所有的研究都由对实验性处理不知情的观察者来进行。

四体(Tetrad)行为评价

使小鼠适应测试环境持续至少1h，然后测试四体部分：自发活动、僵住(catalepsy)、抗伤害效应和体温过低(7–9)。在运动研究中，将受试者施用媒介物或药物，并且5min后放置在透明的丙烯酸箱中(约44.5cm×22.25cm×20.0cm)，该丙烯酸箱位于消音柜内，该消音柜配备有LED光源和用于一般空气循环和产生白噪声的风扇。使用购自Unibrain(San Ramon,CA,USA)的Fire-i^TM数码相机和购自Stoelting Company(Wood Dale,IL,USA)的ANY-maze^TM视频跟踪软件，持续10min收集并记录每只小鼠的行进距离(cm)和花费的不动时间(s)。评价小鼠的基线缩尾延迟和体温，给予媒介物或药物(OlGly)的腹膜内(i.p.)注射，并且30min后按以下顺序进行评价：僵住、缩尾测试和体温。僵住是使用水平杆测试来测量的，在水平杆测试中，将小鼠的两个前肢放置在水平杆(直径约1.25cm，并且平行于工作台顶部4.5cm)上，通过秒表在60s的间隔内记录固定且不动的姿势(正常呼吸除外)的持续时间。抗伤害效应在温水(52℃)尾浸入测试中测定，其中将尾的远端(约1cm)浸入水浴中，并且记录小鼠缩回其尾的延迟(精确到0.1s)。使用10s截止值以最小化尾部损伤。抗伤害效应数据通过以下式转化为表示最大效应百分比(％MPE)：％MPE＝[(测试延迟-预处理延迟)/(10-预处理延迟)]×100。通过插入直肠探针至2cm深度来收集体温测量值(记录精确到0.1℃)，该直肠探针用矿物油润滑，并且附接至远程温度计(Yellow SpringIndustries Inc.,Yellow Springs,OH,USA)。

累积CP55,940剂量反应研究

将小鼠用OlGly(60mg/kg腹膜内)或媒介物预处理，10min后它们接受第一剂CP55,940，随后每40min接受各自后续剂量。在每个CP55,940施用后30min以及在任何注射前，采集僵住、甩尾和直肠温度的测量值，以确定基线反应。CP55,940的累积剂量是0.3mg/kg、1mg/kg和3mg/kg i.p.。由于反复测试后出现的习惯效应，未评价运动活动。

统计分析

除非另外说明，否则脂质水平表示为pmols/g湿组织重量的平均值±标准误差(M±SEM)。单因素方差分析和随后的图基检验(Tukey’s test)被用于比较不同组之间的AEA、2-AG、PEA、OEA和OlGly水平。低于0.05的P值被认为是显著的。对于条件性位置研究，通过减去以下来计算偏好得分：训练后在尼古丁配对室中花费的时间减去训练前花费的时间。正值表示对于尼古丁(或吗啡)配对隔室的偏好，而负值表示尼古丁(或吗啡)配对隔室的回避。零或接近零的数值表示无偏好。数据通过单因素方差分析进行分析，并且通过学生Neuman-Keuls事后检验进一步分析。在四体研究和萤光素酶测定中，数据通过单因素方差分析和随后的Dunnett事后检验进行分析。在CP55,940的累积剂量反应中，数据通过双因素方差分析和随后的Sidak事后检验进行分析。在萤光素酶测定中，应用了具有Welch校正的学生t检验。<0.05的P值被认为是统计学显著的。在结合研究中，K_i值通过将Cheng-Prusoff方程应用至通过增加测试化合物的浓度来置换结合的放射性配体的IC50值来计算。计算机程序GraphPad Prism 6.0版(GraphPad Software Inc.,San Diego,CA)被用于所有统计分析。所有数据表示为平均值+/-SEM。

结果

图3A-图3C示出了代表性的色谱图，描述了在TBI小鼠的岛叶中OlGly的存在，但在假手术小鼠或首次用于实验的小鼠的岛叶中不存在OlGly。在图3A(1)中，如经MS和MS/MS谱确认，损伤的岛叶显示出OlGly的形成。在假手术小鼠(图3B)以及首次用于实验的小鼠(图3C)中，内源性OlGly在箭头示出的合成OlGly的保留时间处是检测不到的。图3A(2)中的色谱图迹线表示总离子流(TIC)，并且图3A(3)中的色谱图迹线表示提取的色谱图m/z约340amu。

图4示出了OlGly对吗啡-CPP没有影响。用盐水或吗啡(10mg/kg，皮下)训练小鼠持续3天。在用媒介物预处理的吗啡训练的小鼠中观察到了稳健的CPP。OlGly未减弱吗啡CPP的表达(30mg/kg，腹膜内)。*p<0.05，相对于媒介物/媒介物。值表示每组n＝7-8只小鼠的平均值±SEM。

图5A-图5E示出了在OlGly施用之后以大麻素四体对大麻模拟效果的评价。OlGly不产生抗伤害效应(5A)、体温过低(5B)或如以下测量所反映的运动行为：行进距离(5C)、速度(5D)和不动时间(5E)。此外，OlGly未引起僵住症反应，如在爬杆测试中所评价的。值表示每组n＝9只小鼠的平均值±SEM。

部分III：OLGL样分子对于可卡因诱导行为的获得的影响。

进行了初步的敏化方案(Schumann等人，2009)，以便检查内源性防御系统是否对于药物损害(insult)有反应。因此，小鼠每天接受可卡因的重复注射(20mg/kg)持续10天，并且测量其运动活动。如图6中所示，动物对于慢性可卡因处理产生敏化反应(运动活动逐渐增加)。在第11天，处死动物，并且NAc和海马体被解剖并且进行针对各种化合物的水平的分析。如图7A-图7L中清楚可见的，在可卡因处理的小鼠的NAC中，OlGl的水平显著提高。同样地，在海马体中，已知具有神经保护作用(Panikashvily等人，2001)的内源性大麻素2AG的水平提高。综上所述，这些结果表明这种提高与针对可卡因损害的自卫机制有关。

我们还表明，通过外源性施用本发明的化合物诸如油酰基甘氨酸或具有类似特性的化合物来加强内源性系统，有利于预防成瘾状态。因此，在成瘾的两种不同的行为范式：精神运动敏化(PS)和条件性位置偏好(CPP)中，测试了外源性施用OIGI和OIGI样分子的效果。PS表示反复药物接触后精神运动反应的增加，这被称为敏化反应，并且类似于人类成瘾者对于滥用药物的行为反应。CPP表示药物相关环境的偏好，并且类似于人类成瘾者中药物的强化/奖赏特性。首先测试OLGL样分子影响PS和CPP的获得的能力。将Sprague-Dawley大鼠(每组n＝12只)在最初两天注射盐水，以便习惯旷场室，在适应后，将它们腹膜内注射15mg/kg的可卡因，持续10个连续日(敏化的发展阶段)。在所有行为时期期间，运动活动被持续监测。实验动物的组由以下组成：可卡因注射组，可卡因前的OLGL(0.5mg/kg；5.0mg/kg和10.0mg/kg)或OLGL样分子，盐水注射组和盐水注射前的OLGL样分子。PS的详细程序如Schumann和Yaka，2009中描述进行。行为时期后，将动物处死并且测定内源性大麻素的水平。

为了测试OLGL样分子对于奖赏的影响，使用了CPP范式。如Beiser等人，2017中描述的，在CPP设备中使上文描述的相同的组针对可卡因进行训练。简而言之，将相同组的大鼠(上文描述)在习惯CPP室后，在不同的室中每隔一天，腹膜内注射可卡因15mg/kg或OLGL样分子，然后可卡因或盐水注射。在8天的训练后，通过允许大鼠探索两个室来测试大鼠的CPP的表达，并且计算它们的偏好。

可卡因戒断后OLGL样分子的效果。

考虑到长期戒断后药物成瘾者中的高复发率，测试了OLGL样化合物的外源性施用以显示在戒断期间防止药物再次使用(drug relapse)的有益效果。因此，测试了OLGL样分子的施用，以显示出对于减弱戒断后成瘾行为的表达是有益的。将上文描述的相同组的大鼠分配至这些实验。PS和CPP均如上文描述进行，但在戒断期间施用OLGL样分子。使用先前实施例中发现的有效剂量以及处理的时间过程来确定防止PS或CPP的表达的最佳剂量和时间。

精神运动敏化(PS)

将所有动物在一周的对其居住笼环境的适应后分配至盐水处理组和可卡因处理组。在第一次可卡因或盐水注射前两天，通过在盐水注射后放置在光电池笼(MedAssociates,St.Albans,VT)中持续30min，使动物习惯于行为测试程序。在处理的第一天(第1天)，使动物习惯于光电池笼持续20min，然后注射可卡因(15mg/kg，腹膜内)或盐水(1ml/kg，膜内)。测量运动活动(总波束中断)持续另外的30min。在接下来的4天(第2-5天)，应用相同的程序。对于艾芬地尔(ifenprodil)实验，应用相同的程序，除了艾芬地尔或媒介物在20min习惯后腹膜内注射，然后可卡因或盐水在30min后注射。测量运动活动持续另外的30min。将所有的大鼠送回它们的圈养笼持续21天。在第21天，将所有的大鼠从它们的圈养笼中取出，并且处死用于生化分析。如先前描述的(Boudreau和Wolf，2005)，敏化标准基于盐水组的第5天/第1天波束中断比率的变异系数(CV)(CV＝SD/平均值)。CV提供了盐水组内变异性的量度。如果注射可卡因的大鼠在可卡因处理过程中的活动增加(第5天/第1天波束中断比率)超过盐水的CV，则该注射可卡因的大鼠被认为是敏化的。对于该分析，第5天/第1天波束中断比率是基于注射后的前30min的活动计算的。

条件性位置偏好(CPP)

CPP设备(Med Associates)由两个视觉上不同的训练隔室组成。一个含有白色壁和金属丝网底板(28cm×21cm)，而另一个含有黑色壁和钢杆底板(28cm×21cm)。隔室由较小的中央隔室(12cm×21cm)连接。位于壁底部的红外线波束允许评价动物对于每种隔室的偏好。CPP实验以每天预定的次数进行。在3天的适应后，按照以下进行了有偏倚的CPP设计：将动物放置在中央灰色隔室中持续5min，并且然后使它们自由探索所有三个隔室持续15min。在每个隔室中花费的时间通过自动化软件进行分析，并且结果用于确定初始偏好。然后将每个受试者最不偏好的隔室指定为药物配对隔室。训练时间从习惯时期后的一天开始。每天给予可卡因注射或盐水注射。动物在交替的天内接受四次盐水注射(1ml/kg，腹膜内)和四次可卡因注射(15mg/kg，腹膜内)，并且被限制在分配的隔室持续15min的时间。因此，进行了总计8天的训练。为了评价可卡因诱导的CPP的建立，在最后的训练日后的一天对动物进行测试。将每只动物放置在中央隔室中持续5min，随后自由进入所有隔室持续15min的时间。CPP得分定义为由以下确定的百分比：100*(在药物配对室中花费的时间-在盐水配对室中花费的时间)/(在药物配对室中花费的时间+在盐水配对室中花费的时间)。

当在戒断期间施用药物时，进行标准可卡因CPP方案。在可卡因训练完成后的一天，来自每个处理组的动物的一半接受每日药物注射持续七天，而另一半接受每日盐水注射。在第7天，如上文描述进行CPP测试。

尽管本发明的某些特征已经在本文中被阐述且描述，然而许多修改、替换、变化和等同物现将由本领域普通技术人员想起。因此，将被理解的是，所附权利要求意图覆盖所有这样的修改和变化，因为这样的修改和变化落在本发明的真实精神范围内。

Claims (19)

1.氨基酸的不饱和脂肪酸酰胺、其立体异构体或其盐在制备药物中的用途，所述药物用于治疗罹患成瘾紊乱或者与所述成瘾紊乱相关的任何状况或症状的患者，其中所述氨基酸的不饱和脂肪酸酰胺是油酰基甘氨酸。

2.根据权利要求1所述的用途，其中所述成瘾是药物成瘾、香烟成瘾、酒精成瘾、食物成瘾、行为成瘾及其任何组合。

3.根据权利要求1所述的用途，其中所述成瘾是尼古丁成瘾。

4.根据权利要求1所述的用途，其中所述成瘾是阿片样物质成瘾。

5.根据权利要求1所述的用途，其中所述成瘾是药物成瘾。

6.根据权利要求1所述的用途，其中所述成瘾是止痛药物成瘾。

7.根据权利要求1所述的用途，其中所述成瘾是可卡因成瘾。

8.根据权利要求1所述的用途，其中所述成瘾是行为成瘾。

9.氨基酸的不饱和脂肪酸酰胺、其立体异构体或其盐在制备药物中的用途，所述药物用于治疗物质滥用紊乱或者与所述物质滥用紊乱相关的状况或症状，其中所述氨基酸的不饱和脂肪酸酰胺是油酰基甘氨酸。

10.氨基酸的不饱和脂肪酸酰胺、其立体异构体或其盐在制备药物中的用途，所述药物用于治疗罹患物质成瘾或者与所述物质成瘾相关的任何紊乱、状况或症状的患者，其中所述氨基酸的不饱和脂肪酸酰胺是油酰基甘氨酸。

11.氨基酸的不饱和脂肪酸酰胺、其立体异构体或其盐在制备药物中的用途，所述药物用于治疗在从滥用物质成瘾治疗中康复或解毒期间罹患戒断综合征的患者，其中所述氨基酸的不饱和脂肪酸酰胺是油酰基甘氨酸。

12.氨基酸的不饱和脂肪酸酰胺、其立体异构体或其盐在制备药物中的用途，所述药物用于治疗在从滥用物质成瘾治疗中康复或解毒期间或之后罹患成瘾复发的患者，其中所述氨基酸的不饱和脂肪酸酰胺是油酰基甘氨酸。

13.根据权利要求9至12中任一项所述的用途，其中所述物质是药物、香烟、酒精饮料、食物及其任何组合。

14.根据权利要求9至12中任一项所述的用途，其中所述物质是尼古丁。

15.根据权利要求9至12中任一项所述的用途，其中所述物质是阿片样物质。

16.根据权利要求9至12中任一项所述的用途，其中所述物质是可卡因。

17.根据权利要求9至12中任一项所述的用途，其中所述物质是酒精。

18.根据权利要求9至12中任一项所述的用途，其中所述物质是食物。

19.根据权利要求9至12中任一项所述的用途，其中所述物质是止痛药物。

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