CN110859853A - 基于干细胞上清收集提取鉴定分析的药物制备方法 - Google Patents

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Abstract

一种基于干细胞上清收集提取鉴定分析的药物制备方法，其特征在于，包括如下步骤：取脐带间充质干细胞，采用完全培养基进行第一培养，然后采用无血清的DMEM/F12培养基进行培养，收集细胞培养基的上清液，得到脐带间充质干细胞上清液；脐带间充质干细胞的接种密度为每平方厘米(1～10)×103个。培养的培养时间为35‑48小时，培养条件为37℃、5％CO2。然后进行第二培养，第二培养的培养时间为40～60小时，培养条件为37℃、5％CO2。所述收集脐带间充质干细胞培养基的上清液之后还包括离心、取上清、提取、鉴定、分析、滤膜过滤的步骤。本发明的药物不会引起任何不良反应，患者容易接受。

Description

基于干细胞上清收集提取鉴定分析的药物制备方法
技术领域
本发明涉及生物医药技术领域，具体是一种基于干细胞上清收集提取鉴定分析的药物制备方法。
背景技术
脐带间充质干细胞是以人脐带血血清为主体的培养体系的脐带间充质干细胞培养扩增的方法：流式细胞仪检测结果显示，贴壁细胞均表达CD44、CD29，低表达CD106，不表达造血细胞表型CD14、CD34、CD45和内皮细胞表型CD31，也不表达HLA-DR：细胞倍增时间为30h，细胞周期分析表明，G0～G1期和+G2+M期所占比例分别为78.84％和11.16％。结论：应用灭活脐带血清培养体系可成功扩增人脐带间充质干细胞，培养的细胞具有间充质干细胞的基本特性，为建立间充质干细胞库和临床应用提供了理论依据。
脐带间充质干细胞的主要用途包括：
一、能具有较强的免疫调节作用，可用于治疗红斑狼疮和硬皮病等自身免疫性疾病，降低细胞或器官移植后的免疫排斥反应，提高细胞或器官移植的成功率；
二、能促进造血恢复功能，与单一造血干细胞移植比较，间充质干细胞和造血干细胞共移植能显著提高白血病和难治性贫血等疾病的治疗效果；
三、能修复损伤或病变的组织器官，用于治疗骨和肌肉衰退性疾病、心脑血管疾病、肝病、脑及脊髓神经损伤和老年痴呆等。
四、能在体内或体外通过生物因子定向诱导分化为神经细胞、胰岛素分泌细胞等，从而为帕金森、糖尿病等治疗提供新的治疗方式，是目前干细胞研究的热点之一。
发明内容
本发明提供基于干细胞上清收集提取鉴定分析的药物制备方法。
本发明的技术方案如下：
一种基于干细胞上清收集提取鉴定分析的药物制备方法，其特征在于，包括如下步骤：取脐带间充质干细胞，采用完全培养基进行第一培养，然后采用无血清的DMEM/F12培养基进行培养，收集细胞培养基的上清液，得到脐带间充质干细胞上清液；
脐带间充质干细胞的接种密度为每平方厘米(1～10)×103个。
培养的培养时间为35-48小时，培养条件为37℃、5％CO2。
然后进行第二培养，第二培养的培养时间为40～60小时，培养条件为37℃、5％CO2。
所述收集脐带间充质干细胞培养基的上清液之后还包括离心、取上清、提取、鉴定、分析、滤膜过滤的步骤。
有益效果：
本发明的药物不会引起任何不良反应，患者容易接受。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明做进一步说明。
实施例一。
脐带间充质干细胞的获取主要有组织块贴壁法与酶消化法，由于酶对细胞的损伤较大，且细胞得率较低，费用昂贵，因此大多数实验室采取了组织块贴壁法进行培养。
取新鲜健康脐带，用PBS冲洗干净后，用剪刀镊子剔去血管，剥出里面的华氏胶组织，将所得组织充分剪碎至1mm3大小，加入α-MEM培养液置于37℃，5％的CO2培养箱培养，培养液中含10％FBS，100U/ml青霉素，100U/ml链霉素。脐带组织培养5-7天后，可见有部分细胞从组织块周围爬出，形态呈细小的梭形，一周后，细胞开始迅速增殖，形成大小不等的细胞集落，待细胞长满后，用0.25％胰蛋白酶消化传代。
一种基于干细胞上清收集提取鉴定分析的药物制备方法，其特征在于，包括如下步骤：取脐带间充质干细胞，采用完全培养基进行第一培养，然后采用无血清的DMEM/F12培养基进行培养，收集细胞培养基的上清液，得到脐带间充质干细胞上清液；
脐带间充质干细胞的接种密度为每平方厘米(1～10)×103个。
培养的培养时间为35-48小时，培养条件为37℃、5％CO2。
然后进行第二培养，第二培养的培养时间为40～60小时，培养条件为37℃、5％CO2。
所述收集脐带间充质干细胞培养基的上清液之后还包括离心、取上清、提取、鉴定、分析、滤膜过滤的步骤。
以上显示和描述了本发明的基本原理、主要特征和本发明的优点。本行业的技术人员应该了解，本发明不受上述实施例的限制，上述实施例和说明书中描述的仅为本发明的优选例，并不用来限制本发明，在不脱离本发明精神和范围的前提下，本发明还会有各种变化和改进，这些变化和改进都落入要求保护的本发明范围内。本发明要求保护范围由所附的权利要求书及其等效物界定。

Claims (2)

1.一种基于干细胞上清收集提取鉴定分析的药物制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
取脐带间充质干细胞，采用完全培养基进行第一培养，然后采用无血清的DMEM/F12培养基进行培养，收集细胞培养基的上清液，得到脐带间充质干细胞上清液；
脐带间充质干细胞的接种密度为每平方厘米(1～10)×103个；
培养的培养时间为35-48小时，培养条件为37℃、5％CO2；
然后进行第二培养，第二培养的培养时间为40～60小时，培养条件为37℃、5％CO2。
2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述收集脐带间充质干细胞培养基的上清液之后还包括离心、取上清、提取、鉴定、分析、滤膜过滤的步骤。本发明的药物不会引起任何不良反应，患者容易接受。
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Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN106377544A (zh) * 2016-09-30 2017-02-08 广州赛莱拉干细胞科技股份有限公司 脐带间充质干细胞上清液在制备治疗口腔溃疡药物中的应用及漱口液和其制备方法
CN108478600A (zh) * 2018-05-04 2018-09-04 中南大学湘雅医院 间充质干细胞外泌体在制备防治骨质疏松症药物中的应用

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