CN110846393A

CN110846393A - 一种影响人肥厚型心肌病诊治的mybpc3 g1831t突变及其应用

Info

Publication number: CN110846393A
Application number: CN201910824993.7A
Authority: CN
Inventors: 赵晓燕; 王楚楚; 董建增
Original assignee: First Affiliated Hospital of Zhengzhou University
Current assignee: First Affiliated Hospital of Zhengzhou University
Priority date: 2019-10-13
Filing date: 2019-10-13
Publication date: 2020-02-28

Abstract

本发明属于分子生物技术和分子遗传领域，特别涉及一种影响人类肥厚型心肌病辅助诊断及临床干预的错义突变及其应用。所述影响人类肥厚型心肌病辅助诊断及预后的错义突变的突变位点对应于人类MYBPC3基因编码区第1831位核苷酸位点G>T，命名为c.G1831T。本发明还提供了一种用于鉴定上述错义突变的引物，公开了鉴定前述错义突变在人类肥厚型心肌病辅助诊断及临床干预中的用途，以及鉴定该错义突变用于人类肥厚型心肌病产前诊断的方法。本发明的优点在于为防治肥厚型心肌病提供了新的治疗靶点，为肥厚型心肌病的早期诊断及预后判断提供了强有力的分子生物学工具，具有深远的临床意义和重要的推广前景。

Description

一种影响人肥厚型心肌病诊治的MYBPC3 G1831T突变及其应用

技术领域

本发明属于分子生物技术和分子标记技术领域，特别涉及一种影响人类肥厚型心肌病辅助诊断及临床干预的错义突变及其应用。

背景技术

肥厚型心肌病(hypertrophic cardiomyopathy，HCM)以心肌肥厚为特征，典型者左心室肥厚，尤以室间隔肥厚为甚，偶尔可呈向心性肥厚，左心室腔容积正常或缩小。病变发生于右心室较少见。HCM最常见的两个致病基因是β-肌球蛋白重链编码基因(MYH7)和心脏肌球结合蛋白C编码基因(MYBPC3)，突变率分别为15%-20%和20%-45%，每个基因占HCM患者的1/4-1/3。心肌病基因检测的目的之一是识别携带致病基因突变的高危亲属，并结合临床检测结果综合判断。目前，心肌病基因检测已在国外应用于临床。

根据2011年《心脏节律协会/欧洲心脏病学对离子通道病及心肌病基因检测专家共识》，临床已确诊HCM的患者进行MYBPC3，MYH7，TNNI3，TNNT2 和TPM1基因检测 (I类推荐)；如果先证者中发现致病基因突变，推荐所有一级亲属(如后代，兄妹，父母) 进行特定基因突变检测。

发明内容

为了解决上述问题，本发明的首要目的在于提供一种导致人类肥厚型心肌病的错义突变。

本发明的另一目的在于提供上述导致人类肥厚型心肌病的错义突变在人类肥厚型心肌病辅助诊断及临床干预中的应用。

本发明的再一目的在于提供一种用于鉴定上述导致人类肥厚型心肌病的错义突变的引物。

本发明的第四个目的在于提供一种评估人类肥厚型心肌病发病风险的方法。

本发明的第五个目的在于提供一种人类肥厚型心肌病产前诊断的方法。

本发明的目的通过下述技术方案实现：

一种导致人类肥厚型心肌病的错义突变，其突变位点对应于人类MYBPC3基因编码区第1831位编码碱基由G突变为T，即MYBPC3 mutation：c.1831T (p.Glu611Ter)( NM_000256)；所属的人类错义突变的突变位点为SEQ ID NO.1所示，其中序列中的M是突变碱基，导致肥厚型心肌病的发生；

所述的导致人类肥厚型心肌病的错义突变在人类肥厚型心肌病辅助诊断及临床干预中的应用；

所述的人类肥厚型心肌病辅助诊断为利用上述错义突变鉴定人类肥厚型心肌病；

所述的人类肥厚型心肌病辅助诊断还包括利用上述错义突变评估、干预人类肥厚型心肌病发病风险；

所述的临床干预为利用上述错义突变实行临床干预；

所述的人类为亚洲人群；

一种用于鉴定上述影响人类肥厚型心肌病发病风险的错义突变的引物，包含上游引物PCR-F和下游引物PCR-R；

上游引物PCR-F为：5′-ACCAACAAGCCAGGACAAGG-3′(SEQ ID NO.2)；

下游引物PCR-R为：5′-CAGGCTCACCCATGAAGTGG-3′(SEQ ID NO.3)。

所述的用于鉴定上述导致人类肥厚型心肌病的错义突变的引物在肥厚型心肌病辅助诊断及临床干预中的应用；

所述的人类为亚洲人群；

一种评估人类肥厚型心肌病发病风险的方法，包含如下步骤：

检测人类MYBPC3基因上述错义突变的单核苷酸是G还是T；

所述的人类为亚洲人群；

一种人类肥厚型心肌病的产前诊断的方法，包含如下步骤：

确定受检者夫妻双方的上述错义突变，并根据错义突变做出相应的措施：

如受检者夫妻中一方上述错义突变为杂合突变，提示受检者子女出现肥厚型心肌病风险高，应积极采取预防措施；如受检者夫妻双方上述错义突变为无突变，提示受检者子女出现肥厚型心肌病风险降低，可仅进行常规检查；

所述的人类为亚洲人群；

本发明的测定方法测定来源于人的基因组DNA，样品没有限制，如体液(如血液)、组织细胞(如皮肤组织)等，通过提取和纯化这些样品均可制备基因组DNA。本发明公开了MYBPC3基因编码区第1831位碱基由G到T的变异，且MYBPC3基因的序列已知，用现有检测核苷酸变异的方法均可以检测上述位点的多态性。

本发明通过检测MYBPC3基因编码区第1831位G→T变异来辅助肥厚型心肌病的筛查，具有可靠的特异性。本发明在正常人中未能检测到所述突变，而在所检测的肥厚型心肌病家系的确诊患病成员中，都检测出所述突变，检测结果具有可重复性。应用前景良好。

本发明通过检测夫妻双方上述错义突变，能够预测子代获得肥厚型心肌病的风险，有助于产前诊断，及早作出确诊，防止肥厚型心肌病蔓延。

本说明书中未作详细描述的内容属于本领域专业技术人员公知的现有技术。以下通过实施例形式的具体实施方式，对本发明的上述内容再作进一步的详细说明，并不用于限制本申请。对于本领域技术人员来说，本申请可以有各种更改和变化。凡在本申请的精神和原理之内所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本申请的权利要求范围之内。

附图说明

图1 是本发明所述突变位点家系图，箭头所示为先证者。

图2 是本发明所述突变位点测序图，箭头所示为突变位点。

具体实施方式

下面结合实施例及附图对本发明作进一步详细的描述，但本发明的实施方式不限于此。

实施例1 突变位点的疾病相关性

1.DNA提取及全外显子测序

取全血样本200微升，采用萃取方法提取全基因组DNA，使用Nanodrop2000对DNA行质量检测和浓度测定。A260/280比值在1.8～2.0，A260/230壁纸在1.7～1.9判定为合格。最后将合格的DNA样品统一稀释至100纳克/微升。对合格的DNA样品进行高通量测序获取相关基因突变信息。

2. ACMG遗传变异分类分析：

受检人样品中检测到MYBPC3基因杂合移码变异c.G1831T（编码区第1831位核苷酸T删除），该变异导致611位编码氨基酸残基谷氨酸Glu变成终止密码子Ter，产生过早的翻译终止信号，导致编码蛋白的截短突变。该变异是MYBPC3基因的无功能变异，且该基因的无功能变异是肥厚型心肌病的已知致病机制（PVS1）；该变异未见报道但该变异上下游的其他多个无义突变已被ClinVar数据库收录（Variation ID:180943，Variation ID: 164095，Variation ID: 42591等）并有多篇文献报道（PMID: 21425739；PMID: 19574547；PMID：22267749；PMID: 12707239；PMID: 12818575等）；该变异频率在已知参考数据库中未被收录，该变异不属于多态性变化（PM2）。

3.结果判定：

根据ACMG指南判定该变异为可能致病性变异。

实施例2 突变位点的检测方法

1.含有与人肥厚型心肌病发病显著相关基因错义突变位点的目的片段的扩增。

目的片段为MYBPC3基因第18外显子上一段226bp的核苷酸序列，序列扩增的上下游引物为：

上游引物PCR-F为：5′-ACCAACAAGCCAGGACAAGG-3′(SEQ ID NO.2)

下游引物PCR-R为：5′-CAGGCTCACCCATGAAGTGG-3′(SEQ ID NO.3)

浓度：100μmol/L

2)体系配制：

3)反应程序：

3.DNA序列测序鉴定：序列测序在3730xlDNAAnalyzer（ABI公司）上进行。将所测得的序列与NCBI基因组序列对比，得出对应单核苷酸位点的基因型。测序结果如下所示：

ACCAACAAGCCAGGACAAGGtgagggcctcctgggaccctggctggggtatctggcaaggccaggggtgtgtggcccagtggggtcccctgagccactgctcccctgcagggtccacaaactgaccattgacgacgtcacacctgccgacM(g\t)aggctgactacagctttgtgcccgagggcttcgcctgcaacctgtcagccaagctCCACTTCATGGGTGAGCCTG（SEQ ID NO.1）

注：序列表中标注的M为突变位点，用标有下划线显示（括号中为突变碱基、为等位基因突变），在该序列的首尾加粗显示为引物序列。

综上，本发明将MYBPC3基因c.G1831T位点的变异，应用于肥厚型心肌病辅助诊断及临床干预中，具有良好的应用前景。

序列表

<110> 郑州大学第一附属医院

<120> 一种影响人肥厚型心肌病诊治的MYBPC3 G1831T突变及其应用

<160> 1

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 226

<212> DNA

<213> 人(2 Ambystoma laterale x Ambystoma jeffersonianum)

<400> 1

accaacaagc caggacaagg tgagggcctc ctgggaccct ggctggggta tctggcaagg 60

ccaggggtgt gtggcccagt ggggtcccct gagccactgc tcccctgcag ggtccacaaa 120

ctgaccattg acgacgtcac acctgccgac gaggctgact acagctttgt gcccgagggc 180

ttcgcctgca acctgtcagc caagctccac ttcatgggtg agcctg 226

Claims

1.一种导致人类肥厚型心肌病的错义突变，其特征在于其突变位点对应于人类MYBPC3基因区第1831位编码碱基由G突变为T，即MYBPC3 mutation：c.G1831T (p.Glu611Ter)(NM_000256)。

2.权利要求1所述的导致人类肥厚型心肌病的错义突变在人类肥厚型心肌病辅助诊断及临床干预中的应用。

3.根据权利要求2所述的导致人类肥厚型心肌病的错义突变在人类肥厚型心肌病辅助诊断及临床干预中的应用，其特征在于：所述的人类肥厚型心肌病研究为利用权利要求1所述的错义突变鉴定人类肥厚型心肌病。

4.根据权利要求3所示的导致人类肥厚型心肌病的错义突变在人类肥厚型心肌病辅助诊断及临床干预中的应用，其特征在于：所述的人类肥厚型心肌病辅助诊断及临床干预还包括利用上述错义突变评估、干预人类肥厚型心肌病。

5.根据权利要求2所述的导致人类肥厚型心肌病的错义突变在人类肥厚型心肌病辅助诊断及临床干预中的应用，其特征在于：所述的人类为亚洲人群。

6.一种用于鉴定权利要求1所述的导致人类肥厚型心肌病的错义突变的引物，其特征在于包含上游引物PCR-F和下游引物PCR-R；

上游引物PCR-F为：5′-ACCAACAAGCCAGGACAAGG-3′(SEQ ID NO.2)；

下游引物PCR-R为：5′-CAGGCTCACCCATGAAGTGG-3′(SEQ ID NO.3)。

7.权利要求6所述的用于鉴定导致人类肥厚型心肌病的错义突变的引物在肥厚型心肌病辅助诊断及临床干预中的应用。

8.一种检测人类肥厚型心肌病的方法，其特征在于包含如下步骤：检测权利要求1所述的人类MYBPC3基因错义突变的单核苷酸是G还是T。

9.一种人类肥厚型心肌病的产前诊断的方法，其特征在于包含如下步骤：确定受检者夫妻双方的权利要求1所述的错义突变，并根据错义突变做出相应的措施：如受检者夫妻中一方上述错义突变为杂合突变，提示受检者子女出现肥厚型心肌病风险高，应积极采取预防措施；如受检者夫妻双方上错义突变为无突变，即夫妻双方上述错义突变均为正常，提示受检者子女出现肥厚型心肌病风险降低，可仅进行常规检查。

10.根据权利要求9中所述的人类肥厚型心肌病的产前诊断的方法，其特征在于：所述的人类为亚洲人群。