CN110846337A - 一种多功能融合酶xabt基因及构建方法和应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种多功能融合酶XABT基因及构建方法和应用，该多功能融合酶XABT基因，可以同时表达表达木聚糖酶、植酸酶、葡聚糖酶和纤维素酶，并具有高效的酶活，该多功能融合酶强化了葡聚糖酶活性，对含葡聚糖较高的大麦、燕麦、黑麦、小麦及其麸皮类日粮具有更强的消化能力。亦可以用于制备节粮环保转基因经济动物，消除饲料中主要抗营养因子，达到提高饲料消化率，减少污染排放的目的。

Description

一种多功能融合酶XABT基因及构建方法和应用

技术领域

本发明涉及生物技术领域，特别涉及一种多功能融合酶XABT基因及构建方法和应用。

背景技术

饲料中含有大量的纤维素、半纤维素(阿拉伯木聚糖、β-葡聚糖、甘露聚糖等)、果胶等非淀粉多糖(NSP)抗营养因子，是影响饲料氮和能量利用的主要抗营养因子。植酸是植物磷的主要存在形式，猪自身缺乏植酸酶，无法消化利用其中磷，造成植物源磷的浪费和环境污染。

尽管饲料工业中非淀粉多酶和植酸酶的应用已经初见成效，但是其在实际生产应用中依然存在一系列问题。酶制剂行业主要依靠微生物发酵生产工业用酶，产酶微生物种类繁多，单条生产线往往只用于一种高产菌株的生产，生产多种NSP酶就需要动用多条生产线，造成酶制剂生产成本增加；另外，由于动物胃肠道复杂的生理环境和饲料加工过程的特殊工艺需求，目前绝大多数开发饲料用酶性质不稳定，饲料酶制剂的活力及稳定性在制粒、加工、膨化和储存等过程中易受各种因素影响，而造成酶活性丧失，从而影响酶制剂的实际使用效果。此外，饲料酶制剂的添加成本高。

利用转基因育种技术培育在猪体内表达自身缺乏的消化酶的动物新品种是解决饲料抗营养问题的新途径。2001年加拿大科学家Golovan等(2001)首次利用将大肠杆菌耐酸性植酸酶appA基因整合到猪体内，提高饲料磷的消化率，粪磷排放量显著降低75％。2013年本课题同样利用猪腮腺分泌蛋白上游调控区域成功制备得到转纤维素酶基因小鼠(Huang et al.,2013)和转甘露聚糖酶基因小鼠(李紫聪等，2013)，2018年zhang等用2A多肽将木聚糖酶-葡聚糖酶-植酸酶融合后导入猪基因猪，提高猪生产性能，减少磷氮排放。在公开号为CN106086068A专利中亦公开了利用2A连接肽，实现了果胶酶-木聚糖酶-植酸酶-纤维素酶融合表达，但表达效率不高。然而这些现有技术，存在如下问题，转单基因，表达量高，但表达酶种类少，消除个别饲料营养因子对动物性能改善水平有限，经济价值不大。2A介导的转多基因依然存在共表达效率不高，多基因融合酶的首尾基因表达不一致，且基因排列顺序困难的问题。

多基因重组融合蛋白的构建需要两个因素：组成蛋白和连接肽。组成蛋白是根据所需融合蛋白产物的功能来进行选择的，在大多数情况下是相对简单的。而选择合适的连接肽却较困难，且在融合蛋白的设计过程中容易被忽略。若功能域不用连接肽直接进行融合会导致一些不良结果，如融合蛋白的错误折叠，产量低或者活性受损等。因此，连接肽的理性设计和选择对于融合蛋白的构建十分重要。

发明内容

本发明的目的是提供一种多功能融合酶XABT基因及构建方法和应用，该多功能融合酶XABT基因，可以同时表达表达木聚糖酶、植酸酶、葡聚糖酶和纤维素酶，并具有高效的酶活，该多功能融合酶强化了葡聚糖酶活性，对含葡聚糖较高的大麦、燕麦、黑麦、小麦及其麸皮类日粮具有更强的消化能力。亦可以用于制备节粮环保转基因经济动物，消除饲料中主要抗营养因子，达到提高饲料消化率，减少污染排放的目的。

根据本公开的一个方面，提供了一种多功能融合酶XABT基因，该XABT基因可以高效表达木聚糖酶、植酸酶、葡聚糖酶、纤维素酶，若将其用于转基因动物和酶发酵工业生产，能显著提高基因转移和酶的生产效率，具有重要的经济价值。

在某些实施方式中，XABT基因由木聚糖酶基因-A3-植酸酶基因-furin-P2A-葡聚糖酶基因-A3'-纤维素酶基因组成。由于在2个以上蛋白共表达时，单纯使用柔性肽、刚性肽或2A都很难实现所有基因共表达，本发明通过组合应用A3和2A，解决刚性肽介导两个以上融合蛋白共表达时相互干扰问题；解决2A连接肽多基因共表达效率低的问题，及多基因共表达中2A多肽残基对上游酶蛋白干扰的问题，达到多基因高效共表达的效果。同时，与单纯2A连接肽相比，本发明利用A3和furin P2A构建XABT显著提高四种酶不同PH条件下的活性，消除2A多肽对上游基因的影响，也避免部分蛋白空间结构抑制2A反应活性的问题，同时还避开对不同蛋白顺序优化繁琐试验过程，酶表达量比2A更高。刚性肽只能用于两种融合酶的构建，本发明将2A和A3巧妙结合，即保留A3优势，又增强融合酶的多基因共表达能力。在融合酶第二和第三号基因连接处采用自剪切效率最高的P2A，同时在其N端添加furin酶识别基序RVKR，RVKR可在细胞器高尔基体高效剪切，仅残留4个氨基酸残基，该设计与一般2A序列，具有更高的剪切效率，对表达产物影响最小。由此，通过本公开设计获得的XABT基因序列，可以高效表达木聚糖酶、植酸酶、葡聚糖酶、纤维素酶活性，解决了四种基因共表达的难题，更为以后将其用于转基因动物和酶发酵工业生产来提高基因转移和酶的生产效率提供了基础。同时，在公开号为CN106086068A专利中公开的，采用2A连接两个基因序列时，两个基因的连接顺序都会影响基因的表达及功能的发挥，而且两个基因的酶活都不及单基因的酶活高；在多基因连接时，若只采用2A连接肽，这种位置效应会更加明显，对于每个基因酶活的影响会更加突出。但是本公开采用A3和2A连接态组合使用构建的上述多功能酶基因，可以克服位置效应，每个基因表达的酶活与单基因相当。

在某些实施方式中，A3的基因序列如SEQ ID No:5所示。

在某些实施方式中，A3'基因序列如SEQ ID No:6所示。

在某些实施方式中，XABT基因序列如SEQ ID No:11所示。连接肽最重要的指标是氨基酸链的长度，不同长度的GGGGS连接肽对融合蛋白的表达量和活性有着不同的影响，并不是连接肽越长表达量就越高。融合酶对柔性肽要求比较苛刻，过长或过短的柔性肽都不利于融合酶活性。分子质量大、结构复杂的蛋白需要的折叠空间也就越大，连接肽也应加长，但过长的肽链可能会增加抗原性，同时也易被酶水解断裂。连接肽过短形成空间位阻效应会影响蛋白的正确折叠，也提高了聚体形成的几率。刚性连接肽由于二级结构的稳固，不可伸展弯曲的特性，常用来固定两端功能蛋白间距，保证功能域的完整。由此，设计的刚性连接态A3/A3'与柔性连接态P2A共同作用连接4个基因，实现4个基因的共表达，A3/A3'与P2A连接态序列经过优化设计，使得木聚糖酶、植酸酶、葡聚糖酶、纤维素酶均可高效表达。另外，由于2A多肽高效的自剪切功能，可较好实现前后两个蛋白的共表达，被誉为蛋白融合表达最可靠的linker。但是，部分酶蛋白融合2A的C端多肽后功能显著受损，后一个蛋白的表达量降低。多基因共表达时，对蛋白组合顺序要求苛刻，需要繁琐验证排列组合，才能实现低水平的共表达(公开号为CN106086068A专利中已表明此现象)，不利于多功能融合酶的构建。2A序列剪切效率与上游多肽基序有关，部分蛋白氨基酸基序会严重影响2A切割活性，导致2A介导前后两个酶因无法完全切割，导致二级结构折叠异常，还有可能被上游基因信号肽迁移到靶向错误的细胞器，无法正确的加工和分泌，导致功能尚失，表达失败。本公开中，采用A3与2A连接态组合使用的方式来构建4种基因融合表达的多功能融合酶，可以克服2A及A3连接态各自的缺点，使该多功能融合酶可以高效的表达四种酶活，可为获得表达该四种酶的转基因动物做好基础。

根据本公开的另一个方面，提供了一种多功能融合酶XABT基因构建方法，该方法包括如下步骤：目的基因的筛选；A3序列的设计和合成；将木聚糖酶、植酸酶、葡聚糖酶、纤维素酶基因通过连接肽进行连接；构建木聚糖酶、植酸酶、葡聚糖酶、纤维素酶多功能融合酶XABT基因。

在某些实施方式中，木聚糖酶、植酸酶、葡聚糖酶、纤维素酶基因连接结构为木聚糖酶基因-A3-植酸酶基因-furin-P2A-葡聚糖酶基因-A3'-纤维素酶基因。

在某些实施方式中，A3序列为SEQ ID No:5所示，A3'序列为SEQ ID No:6所示。

在某些实施方式中，木聚糖酶基因-A3-植酸酶基因-furin-P2A-葡聚糖酶基因-A3'-纤维素酶基因序列如SEQ ID No:11所示。

根据本公开的再一个方面，提供了一种多功能融合酶XABT基因的应用，该多功能融合酶XABT基因用于制备节粮环保转基因动物。该动物可以为转基因猪、转基因牛、转基因羊等。

本公开的有益效果：

1)本公开设计构建pxynB-A3-APPA-furin-P2A-pBg17A-A3'-TeEGI(XABT)融合酶，具有共表达酸性木聚糖酶，植酸酶，葡聚糖酶和纤维素酶四种酶活性，囊括饲料中消除主要抗营养因子所需要水解酶，对提高饲料转化率具有重要价值。该设计提高了基因表达效率，若将其用于转基因动物和酶发酵工业生产，能显著提高基因转移和酶的生产效率，具有重要的经济价值。

2)与单纯2A连接肽相比，本发明利用A3和furin P2A构建XABT显著提高四种酶不同PH条件下的活性，消除2A多肽对上游基因的影响，也避免部分蛋白空间结构抑制2A反应活性的问题，同时还避开对不同蛋白顺序优化繁琐试验过程。酶表达量比2A更高。

3)刚性肽只能用于两种融合酶的构建，本发明将2A和A3巧妙结合，即保留A3优势，又增强融合酶的多基因共表达能力。

4)本公开在融合酶第二和第三号基因连接处采用自剪切效率最高的P2A，同时在其N端添加furin酶识别基序RVKR，RVKR可在细胞器高尔基体高效剪切，仅残留2个氨基酸残基，该设计与一般2A序列，具有更高的剪切效率，对表达产物影响最小。

5)本公开携带XABT由猪CEP112位点高效定点整合载体运载，可高效制备转基因猪，快速获得整合位置一致的转基因家系，培育转基因猪新品种。

6)经融合构建多功能酶表达多功能酶强化了葡聚糖酶的活性，表达效率高，且对哺乳动物胃肠道极端pH环境适应性更强。

附图说明

图1为XABT多功能融合酶多顺反子设计图谱；

图2为木聚糖酶(xynB)-植酸酶(appA)双顺反子优化组合与表达结果：其中A为木聚糖酶-植酸酶双顺反子优化组合设计示意图，B为xynB的pH范围；C为appA的pH范围；D为xynB的pH稳定性(39.℃，2h)；E为appA的pH稳定性(39.℃，2h)；

图3葡聚糖酶(bg17A)-纤维素酶(TeEGⅠ)双顺反子优化组合与表达结果：A为bg17A-TeEGⅠ双顺反子优化组合设计示意图，B为葡聚糖酶的pH范围，C为纤维素酶的pH范围，D为葡聚糖酶的pH稳定性，E为appA纤维素酶的pH稳定性，F和G为Q-PCR定量结果，H为与单基因比较，拓宽pH范围结果；

图4多顺反子XABT在pK15细胞中表达检测结果；

图5Cep112-npsp-XABT质粒图谱和质粒构建电泳图。

具体实施方式

一、目的基因的筛选

分别将来源于黑曲霉的木聚糖酶基因xynB(Guo et al.,2013)，来源于大肠杆菌的植酸酶基因appA，来源于Bisporasp.MEY-1葡聚糖酶基因bg17A(Luo et al.,2010)，来源于蟋蟀的纤维素酶基因TeEGⅠ(Kim et al.,2008)，经SignalP 4.1Server预测信号肽后，分别去掉其自身的信号肽，然后根据猪密码子偏好进行优化，并将猪或牛来源的腮腺分泌蛋白(parotid secretory protein,PSP)信号肽(signal peptide，sp)序列分别添加到密码子优化后的候选基因的氨基酸序列的N端，如pigPSP-SP-xynB,pigPSP-SP-appA,pigPSP-SP-teEGⅠ,pigPSP-SP-bg17A分别简写为pSPxyn,pSPappA,pSPTeEG,pSPbg17A，密码子优化后的成熟肽基因分别命名为pxyn(基因序列如SEQ ID No:1所示),pappA(基因序列如SEQID No:2所示),pbgA(基因序列如SEQ ID No:3所示),pTEGI(基因序列如SEQ ID No:4所示)。

二、构建木聚糖酶-植酸酶-葡聚糖酶-纤维素酶多顺反子基因序列

利用A3刚性肽，分别将木聚糖酶(xynB)-植酸酶(appA)，葡聚糖酶(bg17A)-纤维素酶(TeEGⅠ)连接构建双功能融合酶，去掉A3上游基因终止密码子，同时去掉C端下游基因信号肽。

经优化突变后的A3序列如下：

A3(SEQ ID No:5)：GAGGCTGCCGCCAAAGAAGCTGCCGCCAAGGAGGCTGCCGCCAAG

A3'(SEQ ID No:6)：GAGGCCGCCGCCAAGGAGGCCGCCGCCAAGGAGGCCGCCGCCAAG

经优化后A3连接的双功能酶基因序列为xynB-A3-APPA与bg17A-A3'-TeEGI。将上述融合设计多功能酶顺反子经猪密码子优化，去除稀有密码子，选择猪细胞使用频率较高的密码子。

并分别将多顺反子内A3重复序列和猪腮腺蛋白信号肽再次优化，以减少重复序列对多顺反子结构稳定性的影响，优化后的序列进行人工合成。优化后的pxynB-A3-APPA基因序列如SEQ ID No:7所示，氨基酸序列如SEQ ID No:8所示；优化后的pbg17A-A3'-TeEGI基因序列如SEQ ID No:9所示，氨基酸序列如SEQ ID No:10所示。

利用Furin酶识别基因序列和高效自剪切P2A序列，将pxynB-A3-APPA与pbg17A-A3'-TeEGI，连接构建多功能顺反子pxynB-A3-APPA-furin-P2A-pbg17A-A3'-TeEGI(XABT)(序列如SEQ ID No:11所示，基因结构图谱如图1所示)克隆到pcDNA3.1(+)真核表达载体多克隆位点BamHI/EcoRI上。

利用P2A分别将木聚糖酶(xynB)-植酸酶(appA)，葡聚糖酶(bg17A)-纤维素酶(TeEGⅠ)，连接构建双功能酶pxynB-p2A-pappA、pbg17A-p2A-pTeEGⅠ，克隆到pcDNA3.1(+)真核表达载体上多克隆位点,作为对照组。

三、木聚糖酶-植酸酶-葡聚糖酶-纤维素酶真核表达载体构建

将优化后的多功能酶顺反子XABT插入真核表达载体pcDNA3.1多克隆位点BamHI/EcoRI上，经酶切和测序鉴定，多功能酶顺反子XABT真核表达载体pCD-XABT构建成功。

四、木聚糖酶-植酸酶-葡聚糖酶-纤维素酶多功能酶的体外表达与功能验证

将pCD-XABT真核表达载体按照转染试剂盒LipofectamineTM LTX+PLUSTMReagent(invitrogen)说明书瞬时转染猪肾pK15细胞系，48-72h，收集细胞上清液作为粗酶液测定酶活，检测其酶活力及其pH耐受力。酶活测定方法和定义参考纤维素酶《NYT/912-2004》、葡聚糖酶《NYT/911-2004》、木聚糖酶《GBT/23874-2009》、植酸酶《GBT/18634-2009》。

1、木聚糖酶(xynB)和植酸酶(appA)融合酶表达分析

将木聚糖酶(xynB)和植酸酶(appA)分别用furin-P2A和A3融合，并在猪pK15细胞表达，结果显示，融合后A3连接的融合酶成功表达木聚糖酶和植酸酶双功能酶，且其表达木聚糖酶和植酸酶在pH2.0-pH6.5均具有较高的生物学活性，其中pxynB-A3-appA的木聚糖酶活性，在pH2.0-5.0高于pxynB-p2A-pappA，在pH5.0后略低于后者，但pxynB-A3-appA表达的木聚糖酶对pH2.0-pH7.0耐受能力明显高于pxynB-p2A-pappA。pxynB-A3-appA表达的植酸酶在不同pH缓冲液中活性和耐受性均显著优于pxynB-p2A-pappA，结果如图2所示。

2、葡聚糖酶(bg17A)-纤维素酶(TeEGⅠ)融合酶表达分析

本研究还尝试将高效β-1,3-1,4-葡聚糖酶bg17A与纤维素酶TeEGⅠ融合表达，结果显示，pbg17A-A3'-TeEGⅠ双顺反子表达的葡聚糖酶和纤维素酶在不同pH缓冲液中活性和耐受性均优于pbg17A-p2A-pTeEGⅠ，pbg17A-A3'-TeEGⅠ表现出较高的葡聚糖酶活性，同时pH范围增宽，其纤维素酶在不同pH缓冲液中活性和走势与TeEGⅠ基本一致。Q-PCR数据显示pbg17A-p2A-pTeEGⅠ和pbg17A-A3'-TeEGⅠmRNA水平差异不大，推测pbg17A-p2A-pTeEGⅠ之间空间结构影响了2A的剪切，最终影响了双功能酶活。在不同pH范围，与单基因比较，融合酶pbg17A-A3'-TeEGⅠ双顺反子明显拓宽了葡聚糖酶pH范围，该融合酶不但适合胃中酸性环境，对小肠中弱酸和中性环境也有较强适应性，结果如图3所示。

3、多顺反子XABT在pK15细胞中表达检测

分别用电转和脂质体化学转染方法，将多顺反子XABT真核表达载体pCD-XABT导入PK15细胞，于48h后收集细胞上清培养液，测定其表达情况，结果显示，多顺反子XABT均成功表达出葡聚糖酶，木聚糖酶，植酸酶和纤维素酶，结果如图4所示。

五、定点整合到CEP112位点转木聚糖酶-植酸酶-葡聚糖酶-纤维素酶(XABT)基因表达载体构建

首先将XABT多顺反子替换前期研究载体CEP112-LA340RA3219(来源于第“201711477805.5”号“一种定点整合外源DNA转基因猪的构建方法”，公开号“108285906A”专利)中的BEXA顺反子，构建了新载体Cep112-mPSP-XABT，在其基础上，用PacI和sexAI线性化Cep112-mPSP-XABT，然后用表1中inf-npsp引物扩增npsp上游调控区，并替换现有序列，npsp(-11.5kb～-5.7kb)在原mpsp(-11.1kb～-5.7kb)基础上延长了调控区序列395bp，构建Cep112-npsp-XABT载体(序列如SEQ ID No:12所示)，经酶切验证，切割条带大小与预期相符，经过测序验证，确定成功获得一个能在猪唾液腺中特异表达XABT四种功能酶的转基因载体，质粒图谱及电泳结果如图5所示。

获得的Cep112-npsp-XABT载体为猪CEP112位点高效定点整合载体运载，可高效制备转基因猪，快速获得整合位置一致的转基因家系，为后续快速培育遗传背景一致的转基因猪新品种做好基础。

六、转木聚糖酶-植酸酶-葡聚糖酶-纤维素酶(XABT)基因猪的获得

将构建成功的Cep112-npsp-XABT载体转染猪成纤维细胞系，获得表达XABT多顺反子的阳性细胞系，将阳性细胞系作为供核细胞进行核移植，通过体细胞克隆的方法获得转XABT基因猪。

对获得的转XABT基因猪进行基因及测序水平的鉴定，采集阳性猪的唾液，进行检测，发现转XABT基因猪均可高效的表达葡聚糖酶，木聚糖酶，植酸酶和纤维素酶，且酶的活性与转单基因猪酶的活性相当。且获得的多功能融合酶XABT基因表达的葡聚糖酶对哺乳动物胃肠道环境适应性更强。

以上所述的仅是本发明的一些实施方式。对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明创造构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于发明的保护范围。

序列表

<110> 温氏食品集团股份有限公司；华南农业大学

<120> 一种多功能融合酶XABT基因及构建方法和应用

<130> 2019.11.21

<160> 12

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 627

<212> DNA

<213> 人工合成()

<400> 1

atgtttcaac tttggaaact tgttttcttg tgcggtctgc tcattgggac ctcagcatct 60

agcacacctt caagcacagg cgaaaacaat gggttctatt actccttctg gaccgacggg 120

ggcggcgatg tcacctacac aaacggagac gccggagcct acaccgtgga gtggagcaac 180

gtggggaact tcgtgggagg aaagggatgg aacccaggat ccgcccagga tatcacctac 240

tccggcacct ttacaccaag cggcaacgga tacctgtccg tgtacggatg gaccacagac 300

cctctgatcg agtactacat cgtggaaagc tacggcgatt acaaccccgg atccgggggc 360

acctacaaag ggaccgtgac atccgacggc agcgtgtacg atatctacac cgctacaagg 420

accaacgctg ccagcatcca gggcacagcc accttcacac agtactggtc cgtgcgccag 480

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ggctcatcct ccattacagt ccagtga 627

<210> 2

<211> 1293

<212> DNA

<213> 人工合成()

<400> 2

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tctgctgata acgtcagcct gaccggagcc gtgtccctcg cttctatgct gacagagatc 720

ttcctgctcc agcaggctca gggaatgcca gaaccaggat ggggccgcat taccgactcc 780

caccagtgga acacactgct ctctctgcat aatgcccagt tttacctgct ccagaggacc 840

ccagaggtgg ctaggtctag agctacaccc ctgctcgacc tcatcaagac cgccctgaca 900

cctcaccccc ctcagaaaca ggcttatggg gtgaccctgc caacaagcgt cctgttcatt 960

gccggacatg ataccaacct ggccaatctc gggggagctc tggaactcaa ctggaccctg 1020

cccggccagc ctgacaatac accacccggc ggggagctgg tgttcgaaag gtggcgccgg 1080

ctgagcgata actcccagtg gatccaggtg agcctggtct ttcagaccct gcagcagatg 1140

agagacaaga cccccctgtc cctcaacaca cctccaggag aggtcaaact gaccctcgcc 1200

ggctgcgagg aacgcaatgc tcaggggatg tgctctctcg ccggattcac ccagattgtc 1260

aacgaagccc gcattccagc ctgctccctg tga 1293

<210> 3

<211> 1284

<212> DNA

<213> 人工合成()

<400> 3

atgtttcagc tctggaaact cgtgttcctg tgtgggctcc tcattggcac ctccgcttct 60

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tcaggatccg gcggatggaa ctga 1284

<210> 4

<211> 1365

<212> DNA

<213> 人工合成()

<400> 4

atggttcagc tttggaaact tgttctcttg tgcggcctgc tcgccgggac ctcagcgtct 60

ggcagctacg actacgccga cgtgatcaag aagtccctgc tgttctacca ggctcagcgc 120

agcggccggc tgagcggcat ggaccccctg gtgagctgga ggaaggactc cgccctgaac 180

gacagaggaa acaacggaga ggacctgacc ggaggatact acgacgctgg cgacttcgtg 240

aagttcggct tccccatggc ctacaccatc accctgctga gctggggcgt gatcgactac 300

gagaacacct acagctccat cggcgccctg tccgccgccc gcgccgccat caagtggggc 360

accgactact tcatcaaggc ccacgtgagc gccaacgagc tgtacggaca ggtcggaaac 420

ggaggagctg accactcctg gtggggcagg cccgaggaca tgaacatgga ccggcccgcc 480

tacaagatcg acacctcccg gccaggcagc gacctggccg ccgagaccgc cgccgccatg 540

gccgccgcca gcatcgtgtt caagaacgcc gactccaact acgccaacac cctgctgagg 600

cacgccaagg agctgtacaa cttcgccgac aactacaggg gcaagtacag cgactccatc 660

agcgacgccg ccgccttcta caactcctac agctacgagg acgagctggt gtggggagct 720

atctggctgt ggagggctac caacgaccag aactacctga acaaggccac ccagtactac 780

aaccagtaca gcatccagta caagaactcc cccctgagct gggacgacaa gtccaccgga 840

gctagcgccc tgctggctaa gctgaccgga ggcgaccagt acaagtccgc cgtgcagagc 900

ttctgcgacg gcttctacta caaccagcag aagaccccca agggcctgat ctggtactcc 960

gactggggca gcctgaggca gtccatgaac gccgtgtggg tgtgcctcca ggccgccgac 1020

gctggagtga agaccggaga gtaccgcagc ctggccaaga agcagctgga ctacgctctg 1080

ggcgacgccg gccggtcctt cgtggtgggc ttcggcaaca acccccccag ccacgagcag 1140

cacagggctg cttcctgccc agacgctcct gccgcctgcg actggaacac ctacaacggc 1200

ggccagtcca actaccacgt gctgtacggc gccctggtgg gaggaccaga cgccaacgac 1260

tactacaacg acgtgagaag cgactacgtg cacaacgagg tggcctgcga ctacaacgcc 1320

ggcttccaga acgtgctggt gtccctgaag gccaacggct actga 1365

<210> 5

<211> 45

<212> DNA

<213> 人工合成()

<400> 5

gaggctgccg ccaaagaagc tgccgccaag gaggctgccg ccaag 45

<210> 6

<211> 45

<212> DNA

<213> 人工合成()

<400> 6

gaggccgccg ccaaggaggc cgccgccaag gaggccgccg ccaag 45

<210> 7

<211> 1980

<212> DNA

<213> 人工合成()

<400> 7

atgttccagc tgtggaagct ggtgttcctg tgcggactgc tgatcggcac cagcgcctcc 60

agcaccccct ccagcaccgg agagaacaac ggcttctact actccttctg gaccgacgga 120

ggaggcgacg tgacctacac caacggcgac gccggagctt acaccgtgga gtggagcaac 180

gtgggcaact tcgtgggagg caagggatgg aacccaggct ccgcccagga catcacctac 240

tccggcacct tcaccccaag cggcaacggc tacctgtccg tgtacggctg gaccaccgac 300

cccctgatcg agtactacat cgtggagagc tacggcgact acaacccagg ctccggaggc 360

acctacaagg gcaccgtgac cagcgacggc tccgtgtacg acatctacac cgctaccagg 420

accaacgctg ccagcatcca gggcaccgcc accttcaccc agtactggtc cgtgaggcag 480

aacaagagag tgggcggcac cgtgaccacc agcaaccact tcaacgcctg ggccaagctg 540

ggcatgaacc tgggcaccca caactaccag atcgtggcta ccgagggcta ccagtccagc 600

ggctccagct ccatcaccgt gcaggaggct gccgccaaag aagctgccgc caaggaggct 660

gccgccaagc agtccgagcc agagctgaag ctggagagcg tggtcatcgt gtcccgccac 720

ggcgtgcgcg ctccaaccaa ggccacccag ctgatgcagg acgtgacccc agacgcttgg 780

ccaacctggc cagtgaagct gggatggctg acccccaggg gcggagagct gatcgcctac 840

ctgggccact accagaggca gagactggtg gctgacggac tgctggccaa gaagggatgc 900

ccacagagcg gacaggtggc tatcatcgct gacgtggacg agcgcacccg gaagaccgga 960

gaggccttcg ccgccggcct ggccccagac tgcgctatca ccgtgcacac ccaggctgac 1020

accagctccc ccgacccact gttcaaccca ctgaagaccg gcgtgtgcca gctggacaac 1080

gccaacgtga ccgacgctat cctgagccgc gccggaggct ccatcgctga cttcaccgga 1140

cacaggcaga ccgccttcag ggagctggag agagtgctga acttccccca gtccaacctg 1200

tgcctgaagc gggagaagca ggacgagagc tgctccctga cccaggccct gccaagcgag 1260

ctgaaggtgt ccgccgacaa cgtgagcctg accggagccg tgagcctggc ctccatgctg 1320

accgagatct tcctgctcca gcaggctcag ggaatgccag agccaggatg gggaaggatc 1380

accgacagcc accagtggaa caccctgctg tccctgcaca acgcccagtt ctacctgctc 1440

cagcggaccc cagaggtggc taggagcaga gccaccccac tgctggacct gatcaagacc 1500

gccctgaccc cacacccacc acagaagcag gcctacggcg tgaccctgcc aacctccgtg 1560

ctgttcatcg ccggccacga caccaacctg gctaacctgg gaggcgccct ggagctgaac 1620

tggaccctgc caggacagcc agacaacacc ccaccaggag gagagctggt gttcgagagg 1680

tggcgccggc tgagcgacaa ctcccagtgg attcaggtgt ccctggtgtt ccagaccctc 1740

cagcagatga gagacaagac cccactgtcc ctgaacaccc caccaggaga ggtgaagctg 1800

accctggccg gatgcgagga gaggaacgct cagggaatgt gcagcctggc cggcttcacc 1860

cagatcgtga acgaggctag aatccccgcc tgctccctga gggtgaagag gggcagcgga 1920

gctaccaact tctccctgct gaagcaggct ggcgacgtgg aggagaaccc aggaccatga 1980

<210> 8

<211> 659

<212> PRT

<213> 人工合成()

<400> 8

Met Phe Gln Leu Trp Lys Leu Val Phe Leu Cys Gly Leu Leu Ile Gly

1 5 10 15

Thr Ser Ala Ser Ser Thr Pro Ser Ser Thr Gly Glu Asn Asn Gly Phe

20 25 30

Tyr Tyr Ser Phe Trp Thr Asp Gly Gly Gly Asp Val Thr Tyr Thr Asn

35 40 45

Gly Asp Ala Gly Ala Tyr Thr Val Glu Trp Ser Asn Val Gly Asn Phe

50 55 60

Val Gly Gly Lys Gly Trp Asn Pro Gly Ser Ala Gln Asp Ile Thr Tyr

65 70 75 80

Ser Gly Thr Phe Thr Pro Ser Gly Asn Gly Tyr Leu Ser Val Tyr Gly

85 90 95

Trp Thr Thr Asp Pro Leu Ile Glu Tyr Tyr Ile Val Glu Ser Tyr Gly

100 105 110

Asp Tyr Asn Pro Gly Ser Gly Gly Thr Tyr Lys Gly Thr Val Thr Ser

115 120 125

Asp Gly Ser Val Tyr Asp Ile Tyr Thr Ala Thr Arg Thr Asn Ala Ala

130 135 140

Ser Ile Gln Gly Thr Ala Thr Phe Thr Gln Tyr Trp Ser Val Arg Gln

145 150 155 160

Asn Lys Arg Val Gly Gly Thr Val Thr Thr Ser Asn His Phe Asn Ala

165 170 175

Trp Ala Lys Leu Gly Met Asn Leu Gly Thr His Asn Tyr Gln Ile Val

180 185 190

Ala Thr Glu Gly Tyr Gln Ser Ser Gly Ser Ser Ser Ile Thr Val Gln

195 200 205

Glu Ala Ala Ala Lys Glu Ala Ala Ala Lys Glu Ala Ala Ala Lys Gln

210 215 220

Ser Glu Pro Glu Leu Lys Leu Glu Ser Val Val Ile Val Ser Arg His

225 230 235 240

Gly Val Arg Ala Pro Thr Lys Ala Thr Gln Leu Met Gln Asp Val Thr

245 250 255

Pro Asp Ala Trp Pro Thr Trp Pro Val Lys Leu Gly Trp Leu Thr Pro

260 265 270

Arg Gly Gly Glu Leu Ile Ala Tyr Leu Gly His Tyr Gln Arg Gln Arg

275 280 285

Leu Val Ala Asp Gly Leu Leu Ala Lys Lys Gly Cys Pro Gln Ser Gly

290 295 300

Gln Val Ala Ile Ile Ala Asp Val Asp Glu Arg Thr Arg Lys Thr Gly

305 310 315 320

Glu Ala Phe Ala Ala Gly Leu Ala Pro Asp Cys Ala Ile Thr Val His

325 330 335

Thr Gln Ala Asp Thr Ser Ser Pro Asp Pro Leu Phe Asn Pro Leu Lys

340 345 350

Thr Gly Val Cys Gln Leu Asp Asn Ala Asn Val Thr Asp Ala Ile Leu

355 360 365

Ser Arg Ala Gly Gly Ser Ile Ala Asp Phe Thr Gly His Arg Gln Thr

370 375 380

Ala Phe Arg Glu Leu Glu Arg Val Leu Asn Phe Pro Gln Ser Asn Leu

385 390 395 400

Cys Leu Lys Arg Glu Lys Gln Asp Glu Ser Cys Ser Leu Thr Gln Ala

405 410 415

Leu Pro Ser Glu Leu Lys Val Ser Ala Asp Asn Val Ser Leu Thr Gly

420 425 430

Ala Val Ser Leu Ala Ser Met Leu Thr Glu Ile Phe Leu Leu Gln Gln

435 440 445

Ala Gln Gly Met Pro Glu Pro Gly Trp Gly Arg Ile Thr Asp Ser His

450 455 460

Gln Trp Asn Thr Leu Leu Ser Leu His Asn Ala Gln Phe Tyr Leu Leu

465 470 475 480

Gln Arg Thr Pro Glu Val Ala Arg Ser Arg Ala Thr Pro Leu Leu Asp

485 490 495

Leu Ile Lys Thr Ala Leu Thr Pro His Pro Pro Gln Lys Gln Ala Tyr

500 505 510

Gly Val Thr Leu Pro Thr Ser Val Leu Phe Ile Ala Gly His Asp Thr

515 520 525

Asn Leu Ala Asn Leu Gly Gly Ala Leu Glu Leu Asn Trp Thr Leu Pro

530 535 540

Gly Gln Pro Asp Asn Thr Pro Pro Gly Gly Glu Leu Val Phe Glu Arg

545 550 555 560

Trp Arg Arg Leu Ser Asp Asn Ser Gln Trp Ile Gln Val Ser Leu Val

565 570 575

Phe Gln Thr Leu Gln Gln Met Arg Asp Lys Thr Pro Leu Ser Leu Asn

580 585 590

Thr Pro Pro Gly Glu Val Lys Leu Thr Leu Ala Gly Cys Glu Glu Arg

595 600 605

Asn Ala Gln Gly Met Cys Ser Leu Ala Gly Phe Thr Gln Ile Val Asn

610 615 620

Glu Ala Arg Ile Pro Ala Cys Ser Leu Arg Val Lys Arg Gly Ser Gly

625 630 635 640

Ala Thr Asn Phe Ser Leu Leu Lys Gln Ala Gly Asp Val Glu Glu Asn

645 650 655

Pro Gly Pro

<210> 9

<211> 2631

<212> DNA

<213> 人工合成()

<400> 9

atgtttcagc tctggaagct cgtgttcctg tgcggcctcc tcattgggac ctcagccagc 60

cagcagattg gacggattcc cgaagtccac ccaagactga ccacccagac ctgcaccaag 120

cacggctgca ccacccagca gaccagcctg gtgctggacg ccctgtccca cccaatcgac 180

gacatccaca ccaacgagtc ctgcgagacc tccagcggcg gcgtgaacac caccatctgc 240

ccaaccgtgg aggtgtgcgc cgagaactgc gccctggagg gcgtgaacta cgcctcccac 300

ggcgtgtaca ccaacggcga cagcgtgacc ctgagacagt acctgaacat cgacggcacc 360

gaggaggagg tgtccccaag agtgtacctg ctggacccca gcggcagaga ctacgagatc 420

ctgaagctgc tgaaccagga gatcagcttc accgtggacg tgagcaacct gccatgcggc 480

atgaacggcg ccctgtacct gaccagcatg gacgcctccg gcggcaggag ccagctgaac 540

cccgccggcg ccacctacgg caccggctac tgcgacgccc agtgcaacgc ccccgcctgg 600

atcaacggcg tggccaacct gaagggcctg ggcgcctgct gctccgagat ggacctgtgg 660

gaggccaact ccgaggccac ccagctgacc ccacacgcct gcaacgtgac cggcttctac 720

gagtgcagcg gcgccgcctg cggcagcaac ggcgtgtgcg acaaggacgg ctgcggcttc 780

aacccctacg gcctgggcga ccactccttc tacggcccaa gcgtgaccga caccatcgac 840

accaagaagc ccttcaccgt ggtgacccag ttcctgacct ccgacggcac cagcaccggc 900

accctgtccc agatcaggag actgtacctg caaaacggca aggtaatcca gaacgccaag 960

gtggacttcg acaacagcac cctggacagc atcaccccag cctactgcga ggccaccgcc 1020

gccaccttcg aggccgaggg cggcttcccc cagatgggca aggccctgga gatgggcatg 1080

gtgctgatct tctccatctg gaacgaccca agcgccttca tgaactggct ggacagcggc 1140

accgccggcc catgcaactc cacccagggc aacccagccc tgatcgaggc cgagaacccc 1200

ggcaccagcg tgaccttcag caacatcaag tggggcgaca tcggcaccac ctacagcggc 1260

tccggcagcg gcggctggaa cgaggccgcc gccaaggagg ccgccgccaa ggaggccgcc 1320

gccaagggct cctacgacta cgccgacgtg atcaagaaga gcctgctgtt ctaccaggcc 1380

cagagaagcg gcaggctgtc cggcatggac ccactggtgt cctggaggaa ggactccgcc 1440

ctgaacgaca gaggcaacaa cggcgaggac ctgaccggcg gctactacga cgccggcgac 1500

ttcgtgaagt tcggcttccc aatggcctac accatcaccc tgctgtcctg gggcgtgatc 1560

gactacgaga acacctacag ctccatcggc gccctgagcg ccgccagggc cgccatcaag 1620

tggggcaccg actacttcat caaggcccac gtgagcgcca acgagctgta cggccaggtg 1680

ggcaacggcg gcgccgacca cagctggtgg ggcagacccg aggacatgaa catggacaga 1740

ccagcctaca agatcgacac cagcaggcca ggctccgacc tggccgccga gaccgccgcc 1800

gccatggccg ccgccagcat cgtgttcaag aacgccgact ccaactacgc caacaccctg 1860

ctgagacacg ccaaggagct gtacaacttc gccgacaact acaggggcaa gtacagcgac 1920

tccatcagcg acgccgccgc cttctacaac agctactcct acgaggacga gctggtgtgg 1980

ggcgccatct ggctgtggag ggccaccaac gaccagaact acctgaacaa ggccacccag 2040

tactacaacc agtactccat ccagtacaag aactccccac tgagctggga cgacaagtcc 2100

accggcgcca gcgccctgct ggccaagctg accggcggcg accagtacaa gtccgccgtg 2160

cagagcttct gcgacggctt ctactacaac cagcagaaga ccccaaaggg cctgatctgg 2220

tactccgact ggggctccct gagacagtcc atgaacgccg tgtgggtgtg cctgcaagcc 2280

gccgacgccg gcgtgaagac cggcgagtac agaagcctgg ccaagaagca gctggactac 2340

gccctgggcg acgccggcag atccttcgtg gtgggcttcg gcaacaaccc accctcccac 2400

gagcagcaca gggccgccag ctgccccgac gccccagccg cctgcgactg gaacacctac 2460

aacggcggcc agtccaacta ccacgtgctg tacggcgccc tggtgggcgg cccagacgcc 2520

aacgactact acaacgacgt gagaagcgac tacgtgcaca acgaggtggc ctgcgattac 2580

aacgctgggt ttcagaatgt cctggtgtcc ctcaaggcta acggatactg a 2631

<210> 10

<211> 876

<212> PRT

<213> 合成()

<400> 10

Met Phe Gln Leu Trp Lys Leu Val Phe Leu Cys Gly Leu Leu Ile Gly

1 5 10 15

Thr Ser Ala Ser Gln Gln Ile Gly Arg Ile Pro Glu Val His Pro Arg

20 25 30

Leu Thr Thr Gln Thr Cys Thr Lys His Gly Cys Thr Thr Gln Gln Thr

35 40 45

Ser Leu Val Leu Asp Ala Leu Ser His Pro Ile Asp Asp Ile His Thr

50 55 60

Asn Glu Ser Cys Glu Thr Ser Ser Gly Gly Val Asn Thr Thr Ile Cys

65 70 75 80

Pro Thr Val Glu Val Cys Ala Glu Asn Cys Ala Leu Glu Gly Val Asn

85 90 95

Tyr Ala Ser His Gly Val Tyr Thr Asn Gly Asp Ser Val Thr Leu Arg

100 105 110

Gln Tyr Leu Asn Ile Asp Gly Thr Glu Glu Glu Val Ser Pro Arg Val

115 120 125

Tyr Leu Leu Asp Pro Ser Gly Arg Asp Tyr Glu Ile Leu Lys Leu Leu

130 135 140

Asn Gln Glu Ile Ser Phe Thr Val Asp Val Ser Asn Leu Pro Cys Gly

145 150 155 160

Met Asn Gly Ala Leu Tyr Leu Thr Ser Met Asp Ala Ser Gly Gly Arg

165 170 175

Ser Gln Leu Asn Pro Ala Gly Ala Thr Tyr Gly Thr Gly Tyr Cys Asp

180 185 190

Ala Gln Cys Asn Ala Pro Ala Trp Ile Asn Gly Val Ala Asn Leu Lys

195 200 205

Gly Leu Gly Ala Cys Cys Ser Glu Met Asp Leu Trp Glu Ala Asn Ser

210 215 220

Glu Ala Thr Gln Leu Thr Pro His Ala Cys Asn Val Thr Gly Phe Tyr

225 230 235 240

Glu Cys Ser Gly Ala Ala Cys Gly Ser Asn Gly Val Cys Asp Lys Asp

245 250 255

Gly Cys Gly Phe Asn Pro Tyr Gly Leu Gly Asp His Ser Phe Tyr Gly

260 265 270

Pro Ser Val Thr Asp Thr Ile Asp Thr Lys Lys Pro Phe Thr Val Val

275 280 285

Thr Gln Phe Leu Thr Ser Asp Gly Thr Ser Thr Gly Thr Leu Ser Gln

290 295 300

Ile Arg Arg Leu Tyr Leu Gln Asn Gly Lys Val Ile Gln Asn Ala Lys

305 310 315 320

Val Asp Phe Asp Asn Ser Thr Leu Asp Ser Ile Thr Pro Ala Tyr Cys

325 330 335

Glu Ala Thr Ala Ala Thr Phe Glu Ala Glu Gly Gly Phe Pro Gln Met

340 345 350

Gly Lys Ala Leu Glu Met Gly Met Val Leu Ile Phe Ser Ile Trp Asn

355 360 365

Asp Pro Ser Ala Phe Met Asn Trp Leu Asp Ser Gly Thr Ala Gly Pro

370 375 380

Cys Asn Ser Thr Gln Gly Asn Pro Ala Leu Ile Glu Ala Glu Asn Pro

385 390 395 400

Gly Thr Ser Val Thr Phe Ser Asn Ile Lys Trp Gly Asp Ile Gly Thr

405 410 415

Thr Tyr Ser Gly Ser Gly Ser Gly Gly Trp Asn Glu Ala Ala Ala Lys

420 425 430

Glu Ala Ala Ala Lys Glu Ala Ala Ala Lys Gly Ser Tyr Asp Tyr Ala

435 440 445

Asp Val Ile Lys Lys Ser Leu Leu Phe Tyr Gln Ala Gln Arg Ser Gly

450 455 460

Arg Leu Ser Gly Met Asp Pro Leu Val Ser Trp Arg Lys Asp Ser Ala

465 470 475 480

Leu Asn Asp Arg Gly Asn Asn Gly Glu Asp Leu Thr Gly Gly Tyr Tyr

485 490 495

Asp Ala Gly Asp Phe Val Lys Phe Gly Phe Pro Met Ala Tyr Thr Ile

500 505 510

Thr Leu Leu Ser Trp Gly Val Ile Asp Tyr Glu Asn Thr Tyr Ser Ser

515 520 525

Ile Gly Ala Leu Ser Ala Ala Arg Ala Ala Ile Lys Trp Gly Thr Asp

530 535 540

Tyr Phe Ile Lys Ala His Val Ser Ala Asn Glu Leu Tyr Gly Gln Val

545 550 555 560

Gly Asn Gly Gly Ala Asp His Ser Trp Trp Gly Arg Pro Glu Asp Met

565 570 575

Asn Met Asp Arg Pro Ala Tyr Lys Ile Asp Thr Ser Arg Pro Gly Ser

580 585 590

Asp Leu Ala Ala Glu Thr Ala Ala Ala Met Ala Ala Ala Ser Ile Val

595 600 605

Phe Lys Asn Ala Asp Ser Asn Tyr Ala Asn Thr Leu Leu Arg His Ala

610 615 620

Lys Glu Leu Tyr Asn Phe Ala Asp Asn Tyr Arg Gly Lys Tyr Ser Asp

625 630 635 640

Ser Ile Ser Asp Ala Ala Ala Phe Tyr Asn Ser Tyr Ser Tyr Glu Asp

645 650 655

Glu Leu Val Trp Gly Ala Ile Trp Leu Trp Arg Ala Thr Asn Asp Gln

660 665 670

Asn Tyr Leu Asn Lys Ala Thr Gln Tyr Tyr Asn Gln Tyr Ser Ile Gln

675 680 685

Tyr Lys Asn Ser Pro Leu Ser Trp Asp Asp Lys Ser Thr Gly Ala Ser

690 695 700

Ala Leu Leu Ala Lys Leu Thr Gly Gly Asp Gln Tyr Lys Ser Ala Val

705 710 715 720

Gln Ser Phe Cys Asp Gly Phe Tyr Tyr Asn Gln Gln Lys Thr Pro Lys

725 730 735

Gly Leu Ile Trp Tyr Ser Asp Trp Gly Ser Leu Arg Gln Ser Met Asn

740 745 750

Ala Val Trp Val Cys Leu Gln Ala Ala Asp Ala Gly Val Lys Thr Gly

755 760 765

Glu Tyr Arg Ser Leu Ala Lys Lys Gln Leu Asp Tyr Ala Leu Gly Asp

770 775 780

Ala Gly Arg Ser Phe Val Val Gly Phe Gly Asn Asn Pro Pro Ser His

785 790 795 800

Glu Gln His Arg Ala Ala Ser Cys Pro Asp Ala Pro Ala Ala Cys Asp

805 810 815

Trp Asn Thr Tyr Asn Gly Gly Gln Ser Asn Tyr His Val Leu Tyr Gly

820 825 830

Ala Leu Val Gly Gly Pro Asp Ala Asn Asp Tyr Tyr Asn Asp Val Arg

835 840 845

Ser Asp Tyr Val His Asn Glu Val Ala Cys Asp Tyr Asn Ala Gly Phe

850 855 860

Gln Asn Val Leu Val Ser Leu Lys Ala Asn Gly Tyr

865 870 875

<210> 11

<211> 4649

<212> DNA

<213> 人工合成()

<400> 11

atttgtcagg gcgcgccgcc accatgttcc agctgtggaa gctggtgttc ctgtgcggac 60

tgctgatcgg caccagcgcc tccagcaccc cctccagcac cggagagaac aacggcttct 120

actactcctt ctggaccgac ggaggaggcg acgtgaccta caccaacggc gacgccggag 180

cttacaccgt ggagtggagc aacgtgggca acttcgtggg aggcaaggga tggaacccag 240

gctccgccca ggacatcacc tactccggca ccttcacccc aagcggcaac ggctacctgt 300

ccgtgtacgg ctggaccacc gaccccctga tcgagtacta catcgtggag agctacggcg 360

actacaaccc aggctccgga ggcacctaca agggcaccgt gaccagcgac ggctccgtgt 420

acgacatcta caccgctacc aggaccaacg ctgccagcat ccagggcacc gccaccttca 480

cccagtactg gtccgtgagg cagaacaaga gagtgggcgg caccgtgacc accagcaacc 540

acttcaacgc ctgggccaag ctgggcatga acctgggcac ccacaactac cagatcgtgg 600

ctaccgaggg ctaccagtcc agcggctcca gctccatcac cgtgcaggag gctgccgcca 660

aagaagctgc cgccaaggag gctgccgcca agcagtccga gccagagctg aagctggaga 720

gcgtggtcat cgtgtcccgc cacggcgtgc gcgctccaac caaggccacc cagctgatgc 780

aggacgtgac cccagacgct tggccaacct ggccagtgaa gctgggatgg ctgaccccca 840

ggggcggaga gctgatcgcc tacctgggcc actaccagag gcagagactg gtggctgacg 900

gactgctggc caagaaggga tgcccacaga gcggacaggt ggctatcatc gctgacgtgg 960

acgagcgcac ccggaagacc ggagaggcct tcgccgccgg cctggcccca gactgcgcta 1020

tcaccgtgca cacccaggct gacaccagct cccccgaccc actgttcaac ccactgaaga 1080

ccggcgtgtg ccagctggac aacgccaacg tgaccgacgc tatcctgagc cgcgccggag 1140

gctccatcgc tgacttcacc ggacacaggc agaccgcctt cagggagctg gagagagtgc 1200

tgaacttccc ccagtccaac ctgtgcctga agcgggagaa gcaggacgag agctgctccc 1260

tgacccaggc cctgccaagc gagctgaagg tgtccgccga caacgtgagc ctgaccggag 1320

ccgtgagcct ggcctccatg ctgaccgaga tcttcctgct ccagcaggct cagggaatgc 1380

cagagccagg atggggaagg atcaccgaca gccaccagtg gaacaccctg ctgtccctgc 1440

acaacgccca gttctacctg ctccagcgga ccccagaggt ggctaggagc agagccaccc 1500

cactgctgga cctgatcaag accgccctga ccccacaccc accacagaag caggcctacg 1560

gcgtgaccct gccaacctcc gtgctgttca tcgccggcca cgacaccaac ctggctaacc 1620

tgggaggcgc cctggagctg aactggaccc tgccaggaca gccagacaac accccaccag 1680

gaggagagct ggtgttcgag aggtggcgcc ggctgagcga caactcccag tggattcagg 1740

tgtccctggt gttccagacc ctccagcaga tgagagacaa gaccccactg tccctgaaca 1800

ccccaccagg agaggtgaag ctgaccctgg ccggatgcga ggagaggaac gctcagggaa 1860

tgtgcagcct ggccggcttc acccagatcg tgaacgaggc tagaatcccc gcctgctccc 1920

tgagggtgaa gaggggcagc ggagctacca acttctccct gctgaagcag gctggcgacg 1980

tggaggagaa cccaggacca atgtttcagc tctggaagct cgtgttcctg tgcggcctcc 2040

tcattgggac ctcagccagc cagcagattg gacggattcc cgaagtccac ccaagactga 2100

ccacccagac ctgcaccaag cacggctgca ccacccagca gaccagcctg gtgctggacg 2160

ccctgtccca cccaatcgac gacatccaca ccaacgagtc ctgcgagacc tccagcggcg 2220

gcgtgaacac caccatctgc ccaaccgtgg aggtgtgcgc cgagaactgc gccctggagg 2280

gcgtgaacta cgcctcccac ggcgtgtaca ccaacggcga cagcgtgacc ctgagacagt 2340

acctgaacat cgacggcacc gaggaggagg tgtccccaag agtgtacctg ctggacccca 2400

gcggcagaga ctacgagatc ctgaagctgc tgaaccagga gatcagcttc accgtggacg 2460

tgagcaacct gccatgcggc atgaacggcg ccctgtacct gaccagcatg gacgcctccg 2520

gcggcaggag ccagctgaac cccgccggcg ccacctacgg caccggctac tgcgacgccc 2580

agtgcaacgc ccccgcctgg atcaacggcg tggccaacct gaagggcctg ggcgcctgct 2640

gctccgagat ggacctgtgg gaggccaact ccgaggccac ccagctgacc ccacacgcct 2700

gcaacgtgac cggcttctac gagtgcagcg gcgccgcctg cggcagcaac ggcgtgtgcg 2760

acaaggacgg ctgcggcttc aacccctacg gcctgggcga ccactccttc tacggcccaa 2820

gcgtgaccga caccatcgac accaagaagc ccttcaccgt ggtgacccag ttcctgacct 2880

ccgacggcac cagcaccggc accctgtccc agatcaggag actgtacctg caaaacggca 2940

aggtaatcca gaacgccaag gtggacttcg acaacagcac cctggacagc atcaccccag 3000

cctactgcga ggccaccgcc gccaccttcg aggccgaggg cggcttcccc cagatgggca 3060

aggccctgga gatgggcatg gtgctgatct tctccatctg gaacgaccca agcgccttca 3120

tgaactggct ggacagcggc accgccggcc catgcaactc cacccagggc aacccagccc 3180

tgatcgaggc cgagaacccc ggcaccagcg tgaccttcag caacatcaag tggggcgaca 3240

tcggcaccac ctacagcggc tccggcagcg gcggctggaa cgaggccgcc gccaaggagg 3300

ccgccgccaa ggaggccgcc gccaagggct cctacgacta cgccgacgtg atcaagaaga 3360

gcctgctgtt ctaccaggcc cagagaagcg gcaggctgtc cggcatggac ccactggtgt 3420

cctggaggaa ggactccgcc ctgaacgaca gaggcaacaa cggcgaggac ctgaccggcg 3480

gctactacga cgccggcgac ttcgtgaagt tcggcttccc aatggcctac accatcaccc 3540

tgctgtcctg gggcgtgatc gactacgaga acacctacag ctccatcggc gccctgagcg 3600

ccgccagggc cgccatcaag tggggcaccg actacttcat caaggcccac gtgagcgcca 3660

acgagctgta cggccaggtg ggcaacggcg gcgccgacca cagctggtgg ggcagacccg 3720

aggacatgaa catggacaga ccagcctaca agatcgacac cagcaggcca ggctccgacc 3780

tggccgccga gaccgccgcc gccatggccg ccgccagcat cgtgttcaag aacgccgact 3840

ccaactacgc caacaccctg ctgagacacg ccaaggagct gtacaacttc gccgacaact 3900

acaggggcaa gtacagcgac tccatcagcg acgccgccgc cttctacaac agctactcct 3960

acgaggacga gctggtgtgg ggcgccatct ggctgtggag ggccaccaac gaccagaact 4020

acctgaacaa ggccacccag tactacaacc agtactccat ccagtacaag aactccccac 4080

tgagctggga cgacaagtcc accggcgcca gcgccctgct ggccaagctg accggcggcg 4140

accagtacaa gtccgccgtg cagagcttct gcgacggctt ctactacaac cagcagaaga 4200

ccccaaaggg cctgatctgg tactccgact ggggctccct gagacagtcc atgaacgccg 4260

tgtgggtgtg cctgcaagcc gccgacgccg gcgtgaagac cggcgagtac agaagcctgg 4320

ccaagaagca gctggactac gccctgggcg acgccggcag atccttcgtg gtgggcttcg 4380

gcaacaaccc accctcccac gagcagcaca gggccgccag ctgccccgac gccccagccg 4440

cctgcgactg gaacacctac aacggcggcc agtccaacta ccacgtgctg tacggcgccc 4500

tggtgggcgg cccagacgcc aacgactact acaacgacgt gagaagcgac tacgtgcaca 4560

acgaggtggc ctgcgattac aacgctgggt ttcagaatgt cctggtgtcc ctcaaggcta 4620

acggatactg agggcgcgcc gatcaattc 4649

<210> 12

<211> 26880

<212> DNA

<213> 人工合成()

<400> 12

gcggccgccc atccatagtg tgtccttcac cctctgaagt tcatgtgcga agttggctgc 60

gtctcttctc ataaaaatga cacaaaggaa aaagtacatc agttgtaatg aagtagcatt 120

gttttatgct ccagagggcc tttgacttcc tagacctatt ttttgttttt accataatca 180

taaactttct catctgaggt gaagagtgtg gaattaacac attttgttcc tttgttaggc 240

aaagactctg aggctgaaca atcgggaggt tctatcgctt aaataagaaa agttaagata 300

attaactggc attgagcact tgtccacatt cttgtgctgt ggtcagaggt aggacacagt 360

ctcccatccc cgggttaatt aagtgcctcc aacaaagggg tactgttgcc cacatagaaa 420

gatctaaact aattaattaa tccctcaccc gcaaatcttt cagtcactaa gttagcacga 480

ttgttgaaca agttctccaa aggagagata cagatgagtg cgtatagggt ggacctggct 540

gctgaggaga cacctgcatc tgactaagaa gagccacggt gttagttgaa tggtgtggag 600

tagggtggtt ctgtgggaca gtagaaaatc gagaggcatg tgccgtttag tgaactgatg 660

gaagctaccc caaacgacag agattgtcag tcaggccaat ccgtttcgag tttgatgggc 720

agccggacag tgagacagac acacctactc agttggagga aggatgagaa caatggccag 780

cagggattga gagaccctga caggcgcaag gccctaacac acacacctac cacctcactt 840

gacaaagctg ccaaagacca aagacttgtt ctccattaga aatgacagct ggcttgaccc 900

gacagcataa taagcagagt gtactctgat tggagaactt taatgtgttt cattcagtat 960

tataaaagga cagtattaca gattttgttg tacactgctg ttacatgtgg ggcagtgtgt 1020

ctttaagtag ggtaaagtac tctttaaaaa tgggtcctag atattttttc ctttaactca 1080

agtctcttac tgtttaaatg atttttattt tgtttaatat ggaggaaaaa gaagcgtaaa 1140

tggacaatat atatttagag aaagatggtt agctgtcaga aaaatatgca aatcaaaatc 1200

acaccaagac tgcagcacac ccctgtcaga tggctgtgat caagaaaata aatgacaatg 1260

agtggtggtg aagatgtact aaagggaaac acacacacac acacacacac acacacacac 1320

acacactgga gcaaccactg tggaaatcag tatgaatggt cctcaaaaac ctgaagatag 1380

agcggggcgt ggtggcatac acttttattc ccagcactgg ggaggcagag gcaggtggat 1440

ctctgagttc caggccagcc tggtctatag cacaggttct aggacagcca gggctacaca 1500

gaaaaaccct gccttgatta aaccaaacca aaccaaacca aaccaaacca aaccaaacca 1560

aaccaaacca aaccaaacca gaccaaacca aaacactgaa gatagaactt cagtattcca 1620

ttcctagata tatacccaat ggagactaag tcagcaagac acctgcacag ccatgttcac 1680

tactacactg ttcaccacag ccaggctgtg gaaccagcct gagtgtccat gataaatgaa 1740

tggataggta actttcaagg taaatggact ctgctgtgta catgcctcac attctgttta 1800

ttcatttttc tttatgaggt gtccattcag gagtcacatg gtagttctat tttcagtctt 1860

ctgaagatac tacactggtc cccacagttt acacttttat cagcagtgaa taagggttcc 1920

tctatcctta ccatcatttg ttgtaatttt tcttgatgac cctctttctg acagggatag 1980

gatgtaatat cagtgtgagg aagtacaact tgttttctaa gtatttattg gccccttgca 2040

tttcttcttt tgaaaactgt cggttcctga catctgctca ggtattcatt ggatgttgtt 2100

tctttggtgt ttgagttctt atgaattcta gatgttaaat ccctgcctgt ggttctctcc 2160

cattctgtag gctgcctcct caccctggca attgttgtcc ttgttttgca gaaacttttg 2220

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ggtttttaca gagccctggt ctatgccttt atcctcctct ggcagcttcg gagtttcatt 2340

tcttacattt agatctttga tccactttga acaagttttg gagcagggtg agagatacga 2400

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tatggctctg tcatacagtc tgaggtcagg tattgtgata taccttcagt attgctccct 2640

cagactcagg tttgctttgg ccaggagtca tcttactcag tgctcttaga gctcccccag 2700

catgtagctg ctactattct tagttgataa atcaggaaac tggggctcag agagattaac 2760

tgtcttgaac tacttctggg gaggtgaaac gtggagacac taaactgtgt ttaccctgta 2820

ctgctccagt agctgtcggg tgctgggcta cagcaaagca cctatactat atattactca 2880

ggaggtggaa aaactcagcc tcccttgggg ttcccaagct cccaggtgtc cagtcactgc 2940

tggaaacctc atggagtctg aaaggaaggg ttgagggtac atggggcagc gatgaggagc 3000

ctggggctgg gatctcccaa acacctggat atccagatgc cactgggtca gggggagttg 3060

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ccatggtggt tcttgatgaa agagacagtc cttggctcca aactggttta ttgattgttc 3300

attgtggaaa atgggtgcac accaccttct cagggtggac cagagatcaa ataccttttg 3360

cagggaggaa tatctgggaa gggacgctta ctggctaaac cctcagggcc tctagataca 3420

tcattagcat ggagaactct gttctgggct acatgaccac aggccacatt tccacaagcc 3480

acatgtggga agtgtggcac atgttctagg ccaggaatct ggtagggagc gtggagccac 3540

ctaccatccc aggtgggtgc ctgggtgcca gggaccctga acccgctcaa ccttaccaag 3600

tttcctggca gggtccactg tcctacacag aagctggagg aggtgtgagg gttgtgtctt 3660

tgtggaatgt cccatgctgc ttggggctca gtttctccac ctgtacctca ttggtttggg 3720

tataaaaagt ggggatactt tattattctc tgactcggtc ctgaggaaaa agcatcgtgg 3780

cagtccagga accacaccct gaggttcctg cactgaaggg actccctaag tctctggagt 3840

ctctcccctt cacagagctg ccaaagtcta ggttcttttg aggataacag agccatgctt 3900

ggtaagcaga caacagcatt tgtttactca accttctttt gtcagctccc tcttcataaa 3960

caagttgaga caccatgctg gcttgaggaa gacttctaaa gccagacaac tgtgcaagga 4020

agaagaagaa ggggcaagtg gagttagcct ggatgtagcc ctcaaagtct ccagagacca 4080

gccatgaagg ctcaagtgga gggcaagacc tgcagcagcc aagcatctgg caggagagga 4140

tcctgggaac ccctctacca tgacacacat tcttcctgca ggtcacactt aataggccat 4200

ttcttatttg gatctatcat ggtgttctgt gcgagattaa tgaggtgtta tgctgcgaac 4260

agaaagttat ataaaaacaa gtcccccccc cttgtcactg ctgctaagaa tgtagcagaa 4320

attgtctcaa gtgtctctct aatcagaaac aataaaggtc tccttggatt caagccctcc 4380

agtttcctcc ttccttgctg agccttggac acccatacaa acctcctgga tgctacagct 4440

ctgggcagag actccaaggt ggggagagac tgatggtaca aaagcaaaat acttgtttgg 4500

gggtacaccc actcctctgc ctgtgtggtt cctgcagtca gtcctgcaga caggccctca 4560

gtgggtcttc catgggcaac acgcagaggg aggcaatgga tgggaatacc cacaccctgg 4620

ttagtttacc ccggccatgc tctctgctct tcatccctcc tctgccctct gccacggctt 4680

tctctgcagg aatcatatct tcatattggc ccacaggtgt tctcctcacc ctagctatga 4740

tgtttacttt agagtgacct tagcagggct ggtgggaatg agttctagaa ggctcacgga 4800

gatgctaggg aagaaacgtc ttctaactac tgaggttact aagttcctgg tggttgtctc 4860

tgcctttccc ttgttaaagt caccttgaag ttagtgcaga agaaatcaga gcccagtcac 4920

agagtaaata tggtcctgaa gatttccttt gagtgcccag aatccatgac atttcaagag 4980

ccctctttgt accttaagtc atttggggtt gtatcttctg cttgatgtat gtgtgtgtgt 5040

ttatcaaaga gtgagatggt tacataagag gtgctctaaa ggacagagag gatttgcaat 5100

tgtggcatgt gacatcctca ggccttgctc tggtgccagg aggaactgat gcagaaaaga 5160

gtaagaggtc atttcctgga ggctgtcact atagaggaga tcttacagtg cattccctcc 5220

tccaggccct gcctgaggat agacatgtgc tgactgcaac tgaaacagag gcttgggatg 5280

gagagttagg ttcacagaag ggagggtggg agatggatgc ttgctgggtt ctgggtctca 5340

tcaccagctc ctgaccaccc ggtcagccca tgtgcttatt ccatagcttt cttttgctat 5400

gtttactcag tgtggtgttt gttgggaccc agcagaagcc agtcccaggc tgacagctgt 5460

ggatacacag ggcagcatga gggtcctcag cctgaagcag tcaggctggc agaagagaaa 5520

gaccagcaca cattccttca accaactatg tcttgaaaaa caaacatatt atatcacata 5580

tattgcattt atgagacagc taaaatgtac tcgggtagca tgactccagg tggggatatc 5640

tgcaagtgcc atgagtggca gagggacagc caatgtgagg caagaaggaa ttctggctca 5700

acacagctta gctccctggt gttggttcaa actttgagag tttgaccaca agcactttat 5760

ttttgacata tttaaacaga gcacaacttt gggaaaaagt tttcttatga aaattatcac 5820

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acaagaatgg ttctattgac tgagaaataa tgttcaggat aaagatccag gaagaaaaga 5940

tcagggataa gtaaaatact aaactctttt gcaaagtaca tagaccctct ttcataacaa 6000

tgggttctat tgactgacaa gcactgctca ggagttggga aagagtctag cataagcacg 6060

atagcctgga gactctagtg aggtctagtc ttacagacag caaaaatcac caggttacaa 6120

actacattca tttccagttt tctgatcagg cacaggtatg aatcccttct gttgaagaga 6180

aaagtccatg tgtttaaaat atctggtttc tccagtgcta ttagcgagaa gacttgagcc 6240

ctatacaact cccacctgga gtgacatcct gtcttcatgg tatattacat acctagacac 6300

gctcatctca cagacttagg actttgtctt ctgatctcca tttctgatcc cacttccacc 6360

tttgccttga tagtgtcatt ttcttcactg ccttggtgac aaccatgtta tcctctgtgt 6420

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ctgtctggat gcatgctaat ctctacacaa caacccttcc ccgtcactca gatcttcctc 6540

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ggctattggg cctttttgac tgtccaggaa ggcccccaat tgctgagaca agaacttaga 6660

ttcttcatta ttgactctaa ctcatgtatc aagcagaagc taatgaatag ttatcaacag 6720

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cactggagat tttcaatgag aaatttatcc cacggcccat atggccccat ccttttgtct 8580

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caaggtgact tggggcagtc agtacagact tgggatgacc tctgacagcc taacctctcc 8700

ccaacaaggg ccctctatgt ttgctatgta atgtaatgtc agacattgtc aggagtgtcc 8760

gcagcacagc ctgcccagtg tgagggctct cataggtttc ccactgtctt atctacacag 8820

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agctctgtcc tgttcctcag cccaaggctc agctcccacc tgtttctgtg tttttctggc 10080

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acccaatcac tggatttcta cccttgcgca accttgacag ctgagggcct ctcagaaacc 10260

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gtatctttag aacatccagg aaatagggct tgattctcat cctgggacca caatataagt 12120

caccctagaa tcccaggaga tcgtgcagag aaacaaggat ctctctcgtg tgcatccttc 12180

ttcaaagcag tgagtagtga ctccactaaa ctgagttccc atctgagagt ccacaggagg 12240

ctttggggca agaagcagag ggaaggcact gtttgtgttg gtaaagtttt gactctaaca 12300

aatttgaaga catagatgac attgtgtcag actaacaaca acctagactc atgtgggttc 12360

tgtttaggga tcagatttta ttcatcaatg acttgtctta gtgtatagag aaaggcttcc 12420

tactggagtg taggctcaat aatgacagaa gagatagcta tttcccctag ggactgtgct 12480

gctccaagtt tggtggagaa aggcagtggg gaacctagat gtgctctctg gggagggggt 12540

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ttaggaaagt gagcaggcaa ggcagggaat gtgttgcata tgtatatgta catgaatata 12660

ttatgttata gatacacaca catttgaacc tcatttgcag atgacagaaa ataggttatt 12720

ttgcctctct taactgctaa gcacaatgac ttccagttcc atccatttcc tgaaatgcca 12780

caatttcatt tttcattgtg gctgaataaa attccattgc agactgggcc ctacttcatc 12840

cactcctgag ggcaggcata tcccctggct ccatttctta cctattgtga agagaagtgc 12900

aactgtcttg ttgaaaggca agcgtgagag aggcaggcac taattgtggg tttttgtttc 12960

ttcttcctgc tatgactctc catttgtcag ggcgcgccgc caccatgttc cagctgtgga 13020

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ccggagagaa caacggcttc tactactcct tctggaccga cggaggaggc gacgtgacct 13140

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agccagagct gaagctggag agcgtggtca tcgtgtcccg ccacggcgtg cgcgctccaa 13740

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gcctggcccc agactgcgct atcaccgtgc acacccaggc tgacaccagc tcccccgacc 14040

cactgttcaa cccactgaag accggcgtgt gccagctgga caacgccaac gtgaccgacg 14100

ctatcctgag ccgcgccgga ggctccatcg ctgacttcac cggacacagg cagaccgcct 14160

tcagggagct ggagagagtg ctgaacttcc cccagtccaa cctgtgcctg aagcgggaga 14220

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tccagcaggc tcagggaatg ccagagccag gatggggaag gatcaccgac agccaccagt 14400

ggaacaccct gctgtccctg cacaacgccc agttctacct gctccagcgg accccagagg 14460

tggctaggag cagagccacc ccactgctgg acctgatcaa gaccgccctg accccacacc 14520

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acaactccca gtggattcag gtgtccctgg tgttccagac cctccagcag atgagagaca 14760

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tgctgaagca ggctggcgac gtggaggaga acccaggacc aatgtttcag ctctggaagc 15000

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cctgcgagac ctccagcggc ggcgtgaaca ccaccatctg cccaaccgtg gaggtgtgcg 15240

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acagcgtgac cctgagacag tacctgaaca tcgacggcac cgaggaggag gtgtccccaa 15360

gagtgtacct gctggacccc agcggcagag actacgagat cctgaagctg ctgaaccagg 15420

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tgaccagcat ggacgcctcc ggcggcagga gccagctgaa ccccgccggc gccacctacg 15540

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accactcctt ctacggccca agcgtgaccg acaccatcga caccaagaag cccttcaccg 15840

tggtgaccca gttcctgacc tccgacggca ccagcaccgg caccctgtcc cagatcagga 15900

gactgtacct gcaaaacggc aaggtaatcc agaacgccaa ggtggacttc gacaacagca 15960

ccctggacag catcacccca gcctactgcg aggccaccgc cgccaccttc gaggccgagg 16020

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ccggcgagta cagaagcctg gccaagaagc agctggacta cgccctgggc gacgccggca 17340

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atacgaagtt atgatcgata tgaagaatct gcttagggtt aggcgttttg cgctgcttcg 18000

cgatgtacgg gccagatata cgcgttgaca ttgattattg actagttatt aatagtaatc 18060

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tgttcccata gtaacgccaa tagggacttt ccattgacgt caatgggtgg agtatttacg 18240

gtaaactgcc cacttggcag tacatcaagt gtatcatatg ccaagtacgc cccctattga 18300

cgtcaatgac ggtaaatggc ccgcctggca ttatgcccag tacatgacct tatgggactt 18360

tcctacttgg cagtacatct acgtattagt catcgctatt accatggtga tgcggttttg 18420

gcagtacatc aatgggcgtg gatagcggtt tgactcacgg ggatttccaa gtctccaccc 18480

cattgacgtc aatgggagtt tgttttggca ccaaaatcaa cgggactttc caaaatgtcg 18540

taacaactcc gccccattga cgcaaatggg cggtaggcgt gtacggtggg aggtctatat 18600

aagcagagct ctctggctaa ctagagaacc cactgcttac tggcttatcg aaattaatac 18660

gactcactat agggagaccc aagctggcta gcgtttaaac ttaagcttgg taccgagctc 18720

ggatccacta gtccagtgtg gtggaattcg ccaccatggg atcggccatt gaacaagatg 18780

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aacagacaat cggctgctct gatgccgccg tgttccggct gtcagcgcag gggcgcccgg 18900

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tgacccatgg cgatgcctgc ttgccgaata tcatggtgga aaatggccgc ttttctggat 19380

tcatcgactg tggccggctg ggtgtggcgg accgctatca ggacatagcg ttggctaccc 19440

gtgatattgc tgaagagctt ggcggcgaat gggctgaccg cttcctcgtg ctttacggta 19500

tcgccgctcc cgattcgcag cgcatcgcct tctatcgcct tcttgacgag ttcttcgagg 19560

gcagaggaag tctgctaaca tgcggtgacg tcgaggagaa tcctggccca atggtgagca 19620

agggcgagga gctgttcacc ggggtggtgc ccatcctggt cgagctggac ggcgacgtaa 19680

acggccacaa gttcagcgtg tccggcgagg gcgagggcga tgccacctac ggcaagctga 19740

ccctgaagtt catctgcacc accggcaagc tgcccgtgcc ctggcccacc ctcgtgacca 19800

ccctgaccta cggcgtgcag tgcttcagcc gctaccccga ccacatgaag cagcacgact 19860

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acggcaacta caagacccgc gccgaggtga agttcgaggg cgacaccctg gtgaaccgca 19980

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gtttatgaat tagaattttt tagtgccatt ccccaggtta tctcatttct tcaggttttt 21060

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taacaaatca caacaaattt tgtggcttaa aacaacagaa atttattatc tcagagttgt 21240

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tgggaatgac acacggcctg gaggcgatat tagaatccag gccccttaaa tatgacagtg 21840

aggagggctt tattctgggt ttgtagaatc cacacttgaa gtcttggttt cccctggatt 21900

gttcattcac atttattttt aggggtgagc cttctgtttt tcatctcgtt tgcccacagt 21960

ctgcaggttg ggatggggct cgcctcctct atacacagac ctttaaggag cttgttttta 22020

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cctacacttc ccgccttctt ttgtacttct tgctgctcct gcacttcctt cctgactctg 23160

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ctttctctac acagtagtct tccctccata actgcattaa aacagcgttc aaagatttga 23640

atcatgttta tataaaacat acccaaagaa gccccccaaa attagactac atgagtttac 23700

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acgtgagttt tcgttccact gagcatcaga ccccgtagaa aagatcaaag gatcttcttg 25800

agatcctttt tttctgcgcg taatctgctg cttgcaaaca aaaaaaccac cgctaccagc 25860

ggtggtttgt ttgccggatc aagagctacc aactcttttt ccgaaggtaa ctggcttcag 25920

cagagcgcag ataccaaata ctgttcttct agtgtagccg tagttaggcc accacttcaa 25980

gaactctgta gcaccgccta catacctcgc tctgctaatc ctgttaccag tggctgctgc 26040

cagtggcgat aagtcgtgtc ttaccgggtt ggactcaaga cgatagttac cggataaggc 26100

gcagcggtcg ggctgaacgg ggggttcgtg cacacagccc agcttggagc gaacgaccta 26160

caccgaactg agatacctac agcgtgagct atgagaaagc gccacgcttc ccgaagggag 26220

aaaggcggac aggtatccgg taagcggcag ggtcggaaca ggagagcgca cgagggagct 26280

tccaggggga aacgcctggt atctttatag tcctgtcggg tttcgccacc tctgacttga 26340

gcgtcgattt ttgtgatgct cgtcaggggg gcggagccta tggaaaaacg ccagcaacgc 26400

ggccttttta cggttcctgg ccttttgctg gccttttgct cacatgttct ttcctgcgtt 26460

atcccctgat tctgtggata accgtattac cgcctttgag tgagctgata ccgctcgccg 26520

cagccgaacg accgagcgca gcgagtcagt gagcgaggaa gcggaagagc gcccaatacg 26580

caaaccgcct ctccccgcgc gttggccgat tcattaatgc agctggcacg acaggtttcc 26640

cgactggaaa gcgggcagtg agcgcaacgc aattaatgtg agttagctca ctcattaggc 26700

accccaggct ttacacttta tgcttccggc tcgtatgttg tgtggaattg tgagcggata 26760

acaatttcac acaggaaaca gctatgacca tgattacgcc aagctattta ggtgacacta 26820

tagaatactc aagctatgca tccaacgcgt tgggagctct cccatatggt cgacctgcag 26880

Claims (10)

1.一种多功能融合酶XABT基因，其特征在于，所述的XABT基因包括木聚糖酶、植酸酶、葡聚糖酶、纤维素酶基因。

2.根据权利要求1所述的多功能融合酶XABT基因，其特征在于，所述的XABT基因由木聚糖酶基因-A3-植酸酶基因-furin-P2A-葡聚糖酶基因-A3'-纤维素酶基因组成。

3.根据权利要求2所述的多功能融合酶XABT基因，其特征在于，所述的A3的基因序列如SEQ ID No:5所示。

4.根据权利要求2所述的多功能融合酶XABT基因，其特征在于，所述的A3'基因序列如SEQ ID No:6所示。

5.根据权利要求2-4任一项所述的多功能融合酶XABT基因，其特征在于，所述的XABT基因序列如SEQ ID No:11所示。

6.一种多功能融合酶XABT基因构建方法，其特征在于，所述的构建方法包括如下步骤：

目的基因的筛选；

A3序列的设计和合成；

将木聚糖酶、植酸酶、葡聚糖酶、纤维素酶基因通过连接肽进行连接；

构建木聚糖酶、植酸酶、葡聚糖酶、纤维素酶多功能融合酶XABT基因。

7.根据权利要求6所述的多功能融合酶XABT基因构建方法，其特征在于，所述的木聚糖酶、植酸酶、葡聚糖酶、纤维素酶基因连接结构为木聚糖酶基因-A3-植酸酶基因-furin-P2A-葡聚糖酶基因-A3'-纤维素酶基因。

8.根据权利要求7所述的多功能融合酶XABT基因构建方法，其特征在于，所述的A3序列为SEQ ID No:5所示，所述的A3'序列为SEQ ID No:6所示。

9.根据权利要求7所述的多功能融合酶XABT基因构建方法，其特征在于，所述的木聚糖酶基因-A3-植酸酶基因-furin-P2A-葡聚糖酶基因-A3'-纤维素酶基因序列如SEQ ID No:11所示。

10.一种多功能融合酶XABT基因的应用，其特征在于，所述的多功能融合酶XABT基因用于制备节粮环保转基因动物。

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