CN110840930A - 超声辅助提取紫苏叶中黄嘌呤氧化酶抑制剂的方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种超声辅助提取紫苏叶中黄嘌呤氧化酶抑制剂的方法，包括如下步骤：将收获的紫苏叶自然晾干、去杂、粉碎，溶于乙醇水溶液中，在温度为30℃‑70℃的条件下超声提取10min‑50min后，离心过滤去除残渣，收集上清液，减压浓缩、冷冻干燥，将黄嘌呤氧化酶抑制剂粗品溶于去离子水中，配制成5‑20mg/mL的上样液，以2‑5BV/h流速上样，用5个柱体积的去离子水洗除杂质，用40％‑70％乙醇以1‑4BV/h流速进行洗脱，收集洗脱液，减压浓缩、冷冻干燥，即得。本发明操作简单、效率高、成本低，且获得的黄嘌呤氧化酶抑制剂具有纯度高，抑制活性好等优点，为治疗痛风或高尿酸血症提供一定的理论和技术支撑。

Description

超声辅助提取紫苏叶中黄嘌呤氧化酶抑制剂的方法
技术领域
本发明涉及天然植物提取领域，具体涉及一种超声辅助提取紫苏叶中黄嘌呤氧化酶抑制剂的方法。
背景技术
高尿酸血症及痛风是当今社会的常见病、多发病，至今无法根治。近年来痛风的发病率持续增长，且逐渐向低龄化发展。高尿酸血症是由遗传或后天因素引起的嘌呤代谢性疾病，是由人体内尿酸生成增加或排泄减少所导致，现已被定为心血管疾病的危险因子。高浓度血清尿酸对肾有直接伤害，可导致肾纤维化、肾衰竭，也可诱发高血压。当高尿酸血症患者体内的尿酸以钠盐的形式沉积在关节、软组织处，就会引起组织炎症进而导致痛风。因此，高尿酸血症是引发痛风的重要生化基础。
黄嘌呤氧化酶是一种复合性黄素蛋白酶，在核酸代谢中极其重要。它能催化次黄嘌呤生成黄嘌呤，再继续生成尿酸和自由基。因此，作为尿酸生成的关键酶，黄嘌呤氧化酶是减少尿酸生成的重要靶点，其中黄嘌呤氧化酶催化黄嘌呤生成尿酸的关键位点是钼蝶呤中心。
在临床上，抑制黄嘌呤氧化酶的药物包括别嘌呤醇、奥昔嘌呤、非布司他、托匹司他、丙磺舒、苯溴马隆等。虽然别嘌呤醇一直是治疗痛风的典型药物，但其副作用大，对人体有严重伤害。因此，从天然产物中筛选出低副作用、高效的黄嘌呤氧化酶抑制成分成为研究治疗高尿酸血症及痛风的重要方向。
紫苏(Perilla frutescens(L.)Britt.)，属一年生草本植物，是中国卫生部首批颁布药食两用的中药之一。紫苏叶既可鲜食，也可用于治疗多种疾病，如镇咳、健胃、降血脂血压、增强记忆力、解表散寒、抑菌等。Kaufmann等研究表明，紫苏提取物在体外可抑制黄嘌呤氧化酶的活性，Wang等鉴定出紫苏提取物为有效的黄嘌呤氧化酶抑制剂。现阶段，国内外对从紫苏中提取黄嘌呤氧化酶抑制剂已有报道，但针对从紫苏叶中提取黄嘌呤氧化酶抑制剂的工艺尚未有深入详细的研究和报道。
发明内容
为解决上述问题，本发明提供了一种超声辅助提取紫苏叶中黄嘌呤氧化酶抑制剂的方法，提取所得的黄嘌呤氧化酶抑制剂具有纯度高、抑制活性好等优点。
为实现上述目的，本发明采取的技术方案为：
一种超声辅助提取紫苏叶中黄嘌呤氧化酶抑制剂的方法，包括如下步骤：
S1、原料预处理：将收获的紫苏叶自然晾干、去杂、粉碎、密封袋保存以备用；
S2、将紫苏叶粉末溶于浓度为30％-70％的乙醇水溶液中，在温度为30℃-70℃的条件下超声提取10min-50min，得提取液；
S3、将所得的提取液离心过滤去除残渣，收集上清液，减压浓缩、冷冻干燥，得紫苏叶中黄嘌呤氧化酶抑制剂粗品；
S4、将黄嘌呤氧化酶抑制剂粗品溶于去离子水中，配制成5-20mg/mL的上样液，取大孔树脂，以2-5BV/h流速上样，用5个柱体积的去离子水洗除杂质，用40％-70％乙醇以1-4BV/h流速进行洗脱，收集洗脱液，减压浓缩、冷冻干燥，得紫苏叶中黄嘌呤氧化酶抑制剂纯品。
进一步地，所述步骤S1中，紫苏叶粉碎后需过20-100目筛。
进一步地，所述步骤S2中，所述紫苏叶与乙醇水溶液的料液比为1∶10-1∶50，超声提取的时间为10min。
进一步地，所述步骤S2中，乙醇浓度为46.62％。
进一步地，所述步骤S2中，提取温度为40.11℃。
进一步地，所述步骤S2中，超声功率为120W-300W。
进一步地，所述步骤S2中，紫苏叶与乙醇水溶液的料液比为1：28.20。
进一步地，所述步骤S4中，大孔树脂为NKA-9树脂。
本发明具有以下有益效果：
操作简单、效率高、成本低，且获得的黄嘌呤氧化酶抑制剂具有纯度高，抑制活性好等优点，为治疗痛风或高尿酸血症提供一定的理论和技术支撑。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明进行详细说明。以下实施例将有助于本领域的技术人员进一步理解本发明，但不以任何形式限制本发明。应当指出的是，对本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进。这些都属于本发明的保护范围。
实施例1
将收获的紫苏叶自然晾干，去杂，粉碎后，过60目筛，密封袋保存以备用；准确称取1.00g紫苏叶粉末，放入50mL锥形瓶中，按1：30的料液比加入50％的乙醇溶液，充分混匀，在提取温度为40℃，超声功率为165W的条件下超声辅助提取20min，将提取液5000r/min离心15min，收集上清液，减压浓缩、冷冻干燥，得紫苏叶中黄嘌呤氧化酶抑制剂粗品，经紫外分光光度法检测，其对黄嘌呤氧化酶的抑制率为68.99％。将黄嘌呤氧化酶抑制剂粗品溶于去离子水中，配制成15mg/mL的上样液，称取NKA-9型大孔树脂7g进行湿法装柱，将上样液以3BV/h流速进行上样，用5个柱体积的去离子水洗除杂质，用70％乙醇以2BV/h流速进行洗脱，收集洗脱液，减压浓缩、冷冻干燥，得黄嘌呤氧化酶抑制剂纯品，经检测，其对黄嘌呤氧化酶的抑制率为82.59％。
实施例2
将收获的紫苏叶自然晾干，去杂，粉碎后，过60目筛，密封袋保存以备用。准确称取1.00g紫苏叶粉末，放入50mL锥形瓶中，按1：30的料液比加入40％的乙醇溶液，充分混匀，在提取温度40℃，超声功率为165W下超声辅助提取10min，将提取液5000r/min离心15min，收集上清液，减压浓缩、冷冻干燥，得紫苏叶中黄嘌呤氧化酶抑制剂粗品，经紫外分光光度法检测，其对黄嘌呤氧化酶的抑制率为66.76％。将黄嘌呤氧化酶抑制剂粗品溶于去离子水中，配制成15mg/mL的上样液，称取NKA-9型大孔树脂7g进行湿法装柱，以3BV/h流速进行上样，用5个柱体积的去离子水洗除杂质，用70％乙醇以2BV/h流速进行洗脱，收集洗脱液，减压浓缩、冷冻干燥，得黄嘌呤氧化酶抑制剂纯品，经检测，其抑制率为79.80％。
实施例3
将紫苏叶收获，自然晾干，去杂，粉碎过60目筛，密封袋保存以备用。准确称取1.00g紫苏叶粉末，放入50mL锥形瓶中，按1∶30料液比加入50％的乙醇溶液，充分混匀，在提取温度30℃，超声功率为165W下超声辅助提取30min，将提取液5000r/min离心15min，收集上清液，减压浓缩、冷冻干燥，得紫苏叶中黄嘌呤氧化酶抑制剂粗品，经紫外分光光度法检测，其对黄嘌呤氧化酶的抑制率为50.84％。将黄嘌呤氧化酶抑制剂粗品溶于去离子水中，配制成15mg/mL的上样液，称取NKA-9型大孔树脂7g进行湿法装柱，以3BV/h流速进行上样，用5个柱体积的去离子水洗除杂质，用70％乙醇以2BV/h流速进行洗脱，收集洗脱液，减压浓缩、冷冻干燥，得黄嘌呤氧化酶抑制剂纯品，经检测，其抑制率为76.92％。
以上对本发明的具体实施例进行了描述。需要理解的是，本发明并不局限于上述特定实施方式，本领域技术人员可以在权利要求的范围内做出各种变化或修改，这并不影响本发明的实质内容。在不冲突的情况下，本申请的实施例和实施例中的特征可以任意相互组合。

Claims (8)

1.一种超声辅助提取紫苏叶中黄嘌呤氧化酶抑制剂的方法，其特征在于，包括如下步骤：
S1、原料预处理：将收获的紫苏叶自然晾干、去杂、粉碎、密封袋保存以备用；
S2、将紫苏叶粉末溶于浓度为30％-70％的乙醇水溶液中，在温度为30℃-70℃的条件下超声提取10min-50min，得提取液；
S3、将所得的提取液离心过滤去除残渣，收集上清液，减压浓缩、冷冻干燥，得紫苏叶中黄嘌呤氧化酶抑制剂粗品；
S4、将黄嘌呤氧化酶抑制剂粗品溶于去离子水中，配制成5-20mg/mL的上样液，取大孔树脂，以2-5BV/h流速上样，用5个柱体积的去离子水洗除杂质，用40％-70％乙醇以1-4BV/h流速进行洗脱，收集洗脱液，减压浓缩、冷冻干燥，得紫苏叶中黄嘌呤氧化酶抑制剂纯品。
2.根据权利要求1所述的声辅助提取紫苏叶中黄嘌呤氧化酶抑制剂的方法，其特征在于：所述步骤S1中，紫苏叶粉碎后需过20-100目筛。
3.根据权利要求1所述的声辅助提取紫苏叶中黄嘌呤氧化酶抑制剂的方法，其特征在于：所述步骤S2中，所述紫苏叶与乙醇水溶液的料液比为1∶10-1∶50，超声提取的时间为10min。
4.根据权利要求1所述的声辅助提取紫苏叶中黄嘌呤氧化酶抑制剂的方法，其特征在于：所述步骤S2中，乙醇浓度为46.62％。
5.根据权利要求1所述的声辅助提取紫苏叶中黄嘌呤氧化酶抑制剂的方法，其特征在于：所述步骤S2中，提取温度为40.11℃。
6.根据权利要求1所述的声辅助提取紫苏叶中黄嘌呤氧化酶抑制剂的方法，其特征在于：所述步骤S2中，超声功率为120W-300W。
7.根据权利要求3所述的声辅助提取紫苏叶中黄嘌呤氧化酶抑制剂的方法，其特征在于：所述步骤S2中，紫苏叶与乙醇水溶液的料液比为1∶28.20。
8.根据权利要求1所述的声辅助提取紫苏叶中黄嘌呤氧化酶抑制剂的方法，其特征在于：所述步骤S4中，大孔树脂为NKA-9树脂。
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