CN110804642A - Gpr174免疫学功能及其用途 - Google Patents

Abstract

本发明提出了GPR174免疫学功能及其用途。包括GPR174和/或CCL21和/或CCL19抑制型抗体或者拮抗剂或者表达抑制剂或者低表达细胞的药物，可有效用于提高机体，特别是雄性机体体液免疫应答或治疗或预防免疫缺陷症，从而提高接种者针对外来抗原产生特异性抗体的水平或提高肿瘤患者针对肿瘤相关抗原产生特异性抗体的水平，以提高肿瘤免疫治疗的效果。

Description

GPR174免疫学功能及其用途

技术领域

本发明涉及生物医药领域，具体地，本发明涉及GPR174免疫学功能及其用途，更具体地，本发明涉及GPR174作为雄性B细胞标志物中的用途、抑制活化B细胞向滤泡中心区域聚集的方法、促进活化B细胞向滤泡中心区域聚集的方法、试剂在制备试剂盒或药物中的用途以及筛选药物的方法。

背景技术

当机体受到外来病原体入侵时，需要依赖外周淋巴组织中生发中心的反应来建立长效且高亲和力的体液免疫应答。因此，研究生发中心反应的免疫学机制对于实现临床疫苗高效性有着重要的指导意义。生发中心是在T细胞依赖性抗体应答过程中于外周淋巴组织内形成的一个特殊的结构。在生发中心内，受抗原刺激而活化的B细胞进行克隆扩增、体细胞高度突变、亲和力成熟以及同类型转换，最终形成记忆性B细胞或是产生高亲和力抗体的浆细胞。

一般而言，男性相对于女性来说往往具有较弱的免疫反应。男性的细菌、病毒、真菌和寄生虫的感染严重程度和发病率高于女性。自身免疫性疾病在女性中的发病率较高：多发性硬化病、类风湿性关节炎，男女比例是1：2-3，系统性红斑狼疮男女比例是1:9。体液免疫反应的性别差异严重地影响了这些疾病的预防和治疗。男性对疫苗(麻疹、腮腺炎和风疹、甲型肝炎和乙型肝炎、狂犬病和天花等)产生的抗体滴度通常只有女性的一半。

然而，目前有关性别因素对体液免疫反应的影响尚缺乏深入的分子机制。临床上如何安全且有效地提高男性体液免疫应答也是一个棘手的问题。

发明内容

本申请是基于发明人对以下事实和问题的发现和认识作出的：

一直以来，人们认为女性的体液免疫反应比男性强，一方面受益于个体中性激素水平的差异，另一方面受益于女性免疫细胞中X染色体相关基因的染色体失活逃逸机制。

基于人们的上述认识，潜在的能够被利用以提高男性的体液免疫应答的方法就有如下几点：

性激素治疗：目前普遍认为，雌激素促进免疫反应而雄激素抑制免疫反应。但是临床上直接采用性激素疗法调控免疫反应强弱存在较大风险的，例如它会在影响机体自身性激素水平的平衡的同时会产生一系列由性激素紊乱导致的副作用。

提高免疫相关基因的表达：但由于每个基因只能具体问题具体分析，而且它们的表达也受到性激素的调控，因此，最后仍然要落脚到性激素治疗的手段上面。

增加男性接种疫苗的剂量：如果想提高男性对于疫苗的体液免疫应答至女性的水平，那么理论上需要将疫苗的剂量提高一倍，而这样会大大提高成本。

本发明旨在至少在一定程度上解决相关技术中的技术问题之一。为此，本发明提出了一套区别于性激素调控免疫反应的分子机制来阐释女性免疫细胞和男性免疫细胞参与体液免疫反应时的区别。基于该机制，可继续开发出相关药物分子以提高临床上男性体液免疫的应答水平。

在本发明的第一方面，本发明提出了GPR174作为雄性B细胞标志物中的用途。发明人在实验中发现，GPR174在雄性小鼠中的表达会抑制生发中心的形成，这一现象在雌性小鼠中并未观察到。同时GPR174特异性地在雄性小鼠的B细胞上表达仍然会抑制生发中心的形成，这一现象在雌性小鼠中也未观察到。这些现象说明GPR174在参与抑制雄性小鼠体液免疫反应时依赖于在B细胞上的表达，与其它相关的免疫细胞没有直接关系。

在本发明的第二方面，本发明提出了一种抑制活化B细胞向滤泡中心区域聚集的方法，所述向滤泡中心区域聚集发生在生发中心形成之前。根据本发明的实施例，所述方法包括：使所述B细胞与选自下列的至少之一接触：a)GPR174表达促进剂或激动剂；b)CCL21和/或CCL19表达促进剂或激动剂。发明人在实验中进一步发现，GPR174可以通过识别趋化因子CCL21和CCL19介导雄性B细胞的趋化运动，这一现象在雌性B细胞中并未明显观察到，这说明GPR174可以作为一个新的G蛋白偶联趋化因子受体响应CCL21和CCL19调控雄性B细胞体内的动态定位。根据本发明实施例的上述方法，可有效促进GPR174在B细胞的表达或激活或促进趋化因子CCL21和CCL19的表达或活化，使得受抗原刺激而活化的B细胞在生发中心形成之前并不能非常有效地向滤泡中心区域聚集，抑制B细胞之后形成较大的生发中心。

根据本发明的实施例，上述方法还可以进一步包括如下附加技术特征至少之一：

根据本发明的实施例，所述GPR174表达促进剂为用于表达GPR174的质粒或病毒。

根据本发明的实施例，所述质粒具有SEQ ID NO:1所示的核苷酸序列。

TTAGCATAATTCAGGTGTCATGGTGGAAGCTGTATGGTTACTCACAAAGGATTTTGCATGGAGTTGGATGCTGTCATGCAAATCTTGTCTTGAAAGCCGTCTTCGGAACTCATTAGTGGAAAAGTAGTATATGACTGGGTCAAGACATGAATTCAGACTAGCAAGACACAATGCCACAGAATGAAATATTAGAATCACCCTTCTGGCTAGGCAGCTTTTAATTTCATTGGACTTCACCAGGAAATCTAAAGGAAAACTGAAATGATAAGGTGCAAAGCAAATTAGGAATACCCCTGCACAGGTTAGAATCATCTTCAAGGCTTTCTGTTTCTCTCCAAGATCTTGGGCCATGGGATATTTATCTTGCAGTGATAAAACCGTCTTCCAGGTACAATATAGGACAATCAGAAGCGGAGTTACAAACCCAATCAACTCGCCAATGGTCATCATAACAACGGACTGGGCCAGGTTGACATTCCTGGTAGGAAGATCCACAAAGCATTTGGTCCTATTGCCAGAGGTATCATCACTGGTTCTGAGGAGTGGAAAGAGTACACAGGCAAGGCAGATGATCAGCCAGCCAGCAATGCTGATGTACAGGTCATATTTCTGTTTGCAGTCATGGAAGCGAAAGGGGTACATGAGAAACCAAAATCGTCGCACACTGATGCAGACCAAGAAGTAGATGCTTGCATACATGTTGACATACTTCAGGTAGAAACAGAACATGCAGAGACCAGGCCCAAATGGCCAGTCATGATTCAAGTAGTAGAAGATCCTCAGTGGCAAGGAAAGAACTTGTAGTAAGTCAGCAATGGCTAAGTTTATCATAAATATCACAGCTCGTTTTGTTTCTTTCATATAACCATAGAATACCCACAGGGCTAATATATTCCCTATGAGACCTGGCACAAGAATGACAGTGTATGTCACTGCATAAATAAAGTATCGAAAATCTGTATTGTCTCCATCTGGCCTGGTACACGTGTAATTAGCAGGCAT(SEQ ID NO:1)。

根据本发明的实施例，所述CCL21和/或CCL19表达促进剂为用于表达CCL21和/或CCL19的质粒或病毒。

根据本发明的实施例，所述用于表达CCL21和/或CCL19的质粒具有SEQ ID NO:2～3所示的核苷酸序列。

CTATGGCCCTTTAGGGGTCTGTGACCGCTCAGTCCTCTTGCAGCCTTTGGAGCCCTTTCCTTTCTTGCCAGTCTTGGAGGCCCCCCTGTCCTTCCTGCAGCCCTGGGCTGGTTTCTGTGGGGATGGTGTCTTGTCCAGATGCTGCATCAGCTGCTGCACCCAGAGCTCCTTTGGGTCTGCACATAGCTCTGCCTGAGAGCGCTTGCGGGGCAAGAACAGGATAGCTGGGATGGAGCAGCCTAAGCTTGGTTCCTGCTTCCGGTAGCTGCGGACAACCTTGGCGGGAATCTTCCTTTGGCTGTACTTGAGGCAACAGTCCTGAGCCCCTCCATCACTGCCTTGGGTCCTGGGGATGCCAAAGGCCAGAACCAGGATAAGGAGGCTCAGAGCCAGTGACTGAGCCAT(SEQ ID NO:2)。

ATGGCCCTGCTACTGGCCCTCAGCCTGCTGGTTCTCTGGACTTCCCCAGCCCCAACTCTGAGTGGCACCAATGATGCTGAAGACTGCTGCCTGTCTGTGACCCAGAAACCCATCCCTGGGTACATCGTGAGGAACTTCCACTACCTTCTCATCAAGGATGGCTGCAGGGTGCCTGCTGTAGTGTTCACCACACTGAGGGGCCGCCAGCTCTGTGCACCCCCAGACCAGCCCTGGGTAGAACGCATCATCCAGAGACTGCAGAGGACCTCAGCCAAGATGAAGCGCCGCAGCAGTTAA(SEQ ID NO:3)。

在本发明的第三方面，本发明提出了一种促进活化B细胞向滤泡中心区域聚集的方法，所述向滤泡中心区域聚集发生在生发中心形成之前。根据本发明的实施例，所述方法包括：使所述B细胞与选自下列的至少之一接触：a)GPR174抑制型抗体或者拮抗剂或者表达抑制剂；b)CCL21和/或CCL19抑制型抗体或者拮抗剂或者表达抑制剂。发明人发现，GPR174可以通过识别趋化因子CCL21和CCL19介导B细胞的趋化运动，而根据本发明实施例的上述方法，可有效实现GPR174和/或CCL21和/或CCL19功能受到抑制或表达抑制，进而GPR174介导的B细胞的趋化运动受到抑制，受抗原刺激而活化的B细胞在生发中心形成之前并能够非常有效地向滤泡中心区域聚集，促进B细胞之后形成较大的生发中心。

根据本发明的实施例，上述方法还可以进一步包括如下附加技术特征至少之一：

根据本发明的实施例，所述表达抑制剂为用于特异沉默GPR174、CCL21和/或CCL19的shRNA、反义核酸、核酶、显性负突变、CRISPR和锌指核酸酶。

根据本发明的实施例，所述表达抑制剂为用于特异沉默GPR174、CCL21和/或CCL19的shRNA。

根据本发明的实施例，所述表达抑制剂为用于特异沉默GPR174的shRNA，所述表达抑制剂具有SEQ ID NO:4～13所示的核苷酸序列。

TGCTGTTGACAGTGAGCGCCCTGGTGAAGTCCAATGAAATTAGTGAAGCCACAGATGTAATTTCATTGGACTTCACCAGGATGCCTACTGCCTCGGA(SEQ ID NO:4)。

TGCTGTTGACAGTGAGCGCTCTGATTGTCCTATATTGTACTAGTGAAGCCACAGATGTAGTACAATATAGGACAATCAGAATGCCTACTGCCTCGGA(SEQ ID NO:5)。

TGCTGTTGACAGTGAGCGACGAGTTGATTGGGTTTGTAACTAGTGAAGCCACAGATGTAGTTACAAACCCAATCAACTCGCTGCCTACTGCCTCGGA(SEQ ID NO:6)。

TGCTGTTGACAGTGAGCGCCTTGACCCAGTCATATACTACTAGTGAAGCCACAGATGTAGTAGTATATGACTGGGTCAAGATGCCTACTGCCTCGGA(SEQ ID NO:7)。

TGCTGTTGACAGTGAGCGAACATACACTGTCATTCTTGTGTAGTGAAGCCACAGATGTACACAAGAATGACAGTGTATGTCTGCCTACTGCCTCGGA(SEQ ID NO:8)。

TGCTGTTGACAGTGAGCGACCACTGAGGATCTTCTACTACTAGTGAAGCCACAGATGTAGTAGTAGAAGATCCTCAGTGGCTGCCTACTGCCTCGGA(SEQ ID NO:9)。

TGCTGTTGACAGTGAGCGACTGAAGTATGTCAACATGTATTAGTGAAGCCACAGATGTAATACATGTTGACATACTTCAGGTGCCTACTGCCTCGGA(SEQ ID NO:10)。

TGCTGTTGACAGTGAGCGAACTGAGGATCTTCTACTACTTTAGTGAAGCCACAGATGTAAAGTAGTAGAAGATCCTCAGTGTGCCTACTGCCTCGGA(SEQ ID NO:11)。

TGCTGTTGACAGTGAGCGCACTTAGCCATTGCTGACTTACTAGTGAAGCCACAGATGTAGTAAGTCAGCAATGGCTAAGTTTGCCTACTGCCTCGGA(SEQ ID NO:12)。

TGCTGTTGACAGTGAGCGATGGCATTGTGTCTTGCTAGTCTAGTGAAGCCACAGATGTAGACTAGCAAGACACAATGCCACTGCCTACTGCCTCGGA(SEQ ID NO:13)。

在本发明的第四方面，本发明提出了试剂在制备试剂盒中的用途，所述试剂盒用于抑制活化B细胞向滤泡中心区域聚集，所述试剂为下列的至少之一：a)GPR174表达促进剂或激动剂；b)CCL21和/或CCL19表达促进剂或激动剂。根据本发明实施例的试剂盒可有效用于促进GPR174或/和CCL21和/或CCL19的表达或激活，抑制受抗原刺激而活化的B细胞在生发中心形成之前并向滤泡中心区域聚集，抑制B细胞之后形成较大的生发中心。

在本发明的第五方面，本发明提出了试剂在制备试剂盒中的用途，所述试剂盒用于促进活化B细胞向滤泡中心区域聚集，所述试剂为下列的至少之一：a)GPR174抑制型抗体或者拮抗剂或者表达抑制剂；b)CCL21和/或CCL19抑制型抗体或者拮抗剂或者表达抑制剂。根据本发明实施例的试剂盒可有效用于抑制GPR174或/和CCL21和/或CCL19的表达或活性，促进受抗原刺激而活化的B细胞在生发中心形成之前向滤泡中心区域聚集，促进B细胞之后形成较大的生发中心。

在本发明的第六方面，本发明提出了试剂在制备药物中的用途，所述药物用于提高机体体液免疫应答或治疗或预防免疫缺陷症，所述试剂包括：GPR174和/或CCL21和/或CCL19抑制型抗体或者拮抗剂或者表达抑制剂或低表达细胞，任选地，所述低表达细胞为GPR174低表达B细胞。根据本发明实施例的GPR174和/或CCL21和/或CCL19抑制型抗体或者拮抗剂可用于GPR174和/或CCL21和/或CCL19功能抑制，GPR174和/或CCL21和/或CCL19表达抑制剂可用于抑制GPR174和/或CCL21和/或CCL19的表达，根据本发明实施例的药物包括GPR174和/或CCL21和/或CCL19抑制型抗体或者拮抗剂或者表达抑制剂，可有效用于提高机体体液免疫应答或治疗或预防免疫缺陷症，从而提高接种者针对外来抗原产生特异性抗体的水平或提高肿瘤患者针对肿瘤相关抗原产生特异性抗体的水平，以提高肿瘤免疫治疗的效果。

在本发明的第七方面，本发明提出了试剂在制备药物中的用途，所述药物用于降低机体体液免疫应答或治疗或预防自身免疫疾病，所述试剂包括：GPR174和/或CCL21和/或CCL19激动剂或表达促进剂或过表达细胞，任选地，所述过表达细胞为GPR174过表达B细胞。根据本发明实施例的GPR174和/或CCL21和/或CCL19激动剂或表达促进剂有效促进B细胞中GPR174和/或CCL21和/或CCL19表达或激活，包括GPR174和/或CCL21和/或CCL19激动剂或表达促进剂或过表达细胞的药物可有效用于降低机体体液免疫应答、减少患者自身抗体的产生或治疗或预防自身免疫疾病，或与临床已知疗法联用治疗或预防自身免疫疾病。

根据本发明的实施例，所述机体为雄性。根据本发明实施例的药物可有效于改变雄性机体的体液免疫水平。

根据本发明的实施例，所述表达抑制剂为用于特异沉默GPR174、CCL21和/或CCL19的shRNA、反义核酸、核酶、显性负突变、CRISPR和锌指核酸酶。

根据本发明的实施例，所述表达抑制剂为用于特异沉默GPR174、CCL21和/或CCL19的shRNA，所述表达抑制剂具有SEQ ID NO:4～13所示的核苷酸序列。

根据本发明的实施例，所述GPR174表达促进剂为用于表达GPR174的质粒或病毒，所述质粒具有SEQ ID NO:1所示的核苷酸序列。

根据本发明的实施例，所述CCL21和/或CCL19表达促进剂为用于表达CCL21和/或CCL19的质粒或病毒，所述治疗具有SEQ ID NO:2或3所示的核苷酸序列。

在本发明的第八方面，本发明提出了一种筛选药物的方法，所述药物用于提高机体体液免疫应答或治疗或预防免疫缺陷症。根据本发明的实施例，所述方法包括：将B细胞与待筛选药物进行接触，以及比较接触前后，所述B细胞中GPR174的表达或功能，以便确认所述待筛选药物是否为目标药物；其中，接触后比接触前，所述B细胞中GPR174的表达水平降低或GPR174功能受到抑制是待筛选药物为目标药物的指示。根据本发明实施例的上述方法可准确筛选具有提高机体体液免疫应答或治疗或预防免疫缺陷症功能的药物。

在本发明的第九方面，本发明提出了一种筛选药物的方法，所述药物用于降低机体的体液免疫应答或治疗或预防自身免疫疾病。根据本发明的实施例，所述方法包括：将B细胞与待筛选药物进行接触，以及比较接触前后，所述B细胞中GPR174的表达或功能，以便确认所述待筛选药物是否为目标药物；其中，接触后比接触前，所述B细胞中GPR174的表达水平升高或GPR174功能增强是待筛选药物为目标药物的指示。根据本发明实施例的上述方法可准确筛选具有降低机体的体液免疫应答或治疗或预防自身免疫疾病的药物。

附图说明

图1是根据本发明实施例的雄性B细胞与雌性B细胞形成生发中心的固有差异的结果图；

图2是根据本发明实施例的GPR174调控受抗原刺激而活化的B细胞的动态定位并且抑制雄性非雌性小鼠的生发中心反应的结果图；

图3(包括图3a～3j)是根据本发明实施例的GPR174是趋化因子CCL21和CCL19的受体且调控雄性和雌性B细胞体外与体内的差异性趋化迁移结果图；以及

图4是根据本发明实施例的GPR174抑制雄性而非雌性小鼠的自身免疫反应的结果图。

具体实施方式

下面详细描述本发明的实施例，所述实施例的示例在附图中示出。下面通过参考附图描述的实施例是示例性的，旨在用于解释本发明，而不能理解为对本发明的限制。

在生发中心形成之前，受抗原刺激而活化的B细胞要通过上调G蛋白偶联趋化因子受体CCR7响应T细胞区基质细胞分泌的趋化因子CCL21和CCL19并迁移至T细胞区与滤泡区的边界处以寻找相应的辅助性T细胞，之后通过上调G蛋白偶联趋化因子受体GPR183促进向滤泡区外周的运动。最后B细胞表面下调GPR183的同时上调G蛋白偶联趋化因子受体S1PR2促进B细胞向滤泡中心区域聚集,起始生发中心的形成。发明人经过研究发现：

1)在同一个雄性小鼠个体内受抗原刺激而活化的雄性B细胞和雌性B细胞相比，在生发中心形成之前并不能非常有效地向滤泡中心区域聚集，因此也从很大程度上使得雄性B细胞不能像雌性B细胞一样形成较大的生发中心。

2)一个新的G蛋白偶联受体GPR174在小鼠体内可以调控受抗原刺激而活化的B细胞的动态定位，使其向T细胞区与滤泡区的边界处聚集，从而远离生发中心形成所在之处的滤泡中心区域。

3)GPR174在雄性小鼠中的表达会抑制生发中心和抗体的生成，这一现象在雌性小鼠中并未观察到。同时GPR174特异性地在雄性小鼠的B细胞上表达仍然会抑制生发中心的和抗体的生成，这一现象在雌性小鼠中也未观察到。这些现象说明GPR174在参与抑制雄性小鼠体液免疫反应时依赖于在B细胞上的表达，与其它相关的免疫细胞没有直接关系。

4)GPR174可以通过识别趋化因子CCL21和CCL19介导雄性B细胞的趋化运动，这一现象在雌性B细胞中并未明显观察到。这说明GPR174可以作为一个新的G蛋白偶联趋化因子受体响应CCL21和CCL19调控雄性B细胞体内的动态定位。

5)在同一个雄性小鼠个体内，GPR174使得受抗原刺激而活化的雄性B细胞在生发中心形成之前并不能非常有效地向滤泡中心区域聚集，因此抑制雄性B细胞之后形成较大的生发中心。这一现象在雌性B细胞中并未观察到，说明雄性B细胞和雌性B细胞在生发中心形成之前向滤泡中心区域聚集能力以及之后形成生发中心大小的差异一部分是由GPR174介导的。

6)GPR174特异性地在雄性小鼠B细胞上的表达会通过抑制自身抗体的形成来减弱自身免疫反应(实验性变态反应性脑脊髓炎动物模型)。

本发明研究出来GPR174作为一个新的趋化因子受体可以抑制雄性小鼠的体液免疫应答，潜在提出开发GPR174/CCL21/CCL19的抑制型抗体或者拮抗剂或者表达抑制剂以提高临床上男性体液免疫应答的可能性。常规手段提高临床上男性(特别是老年男性)对于保护性疫苗的体液免疫应答需要增加疫苗剂量，这从疫苗制备、运输及储存上来说成本都是较高的。开发出GPR174/CCL21/CCL19的抑制型抗体或者拮抗剂或者表达抑制剂，可以大大缩减成本，实现经济和疗效的双丰收。

定义和一般术语

本发明意图涵盖所有的替代、修改和等同技术方案，它们均包括在如权利要求定义的本发明范围内。本领域技术人员应认识到，许多与本文所述类似或等同的方法和材料能够用于实践本发明。本发明绝不限于本文所述的方法和材料。在所结合的文献、专利和类似材料的一篇或多篇与本申请不同或相矛盾的情况下(包括但不限于所定义的术语、术语应用、所描述的技术，等等)，以本申请为准。

应进一步认识到，本发明的某些特征，为清楚可见，在多个独立的实施方案中进行了描述，但也可以在单个实施例中以组合形式提供。反之，本发明的各种特征，为简洁起见，在单个实施方案中进行了描述，但也可以单独或以任意适合的子组合提供。

除非另外说明，本发明所使用的所有科技术语具有与本发明所属领域技术人员的通常理解相同的含义。本发明涉及的所有专利和公开出版物通过引用方式整体并入本发明。

除非另有说明或者上下文中有明显的冲突，本文所使用的冠词“一”、“一个(种)”和“所述”旨在包括“至少一个”或“一个或多个”。因此，本文所使用的这些冠词是指一个或多于一个(即至少一个)宾语的冠词。例如，“一组分”指一个或多个组分，即可能有多于一个的组分被考虑在所述实施方案的实施方式中采用或使用。

本发明所使用的术语“受试对象”是指动物。典型地所述动物是哺乳动物。受试对象，例如也指灵长类动物(例如人类，男性或女性)、牛、绵羊、山羊、马、犬、猫、兔、大鼠、小鼠、鱼、鸟等。在某些实施方案中，所述受试对象是灵长类动物。在其他实施方案中，所述受试对象是人。

本发明所使用的术语“患者”是指人(包括成人和儿童)或者其他动物。在一些实施方案中，“患者”是指人。

术语“包含”为开放式表达，即包括本发明所指明的内容，但并不排除其他方面的内容。

术语“激动剂”是指与某生物活性物质的受体结合，呈现该活性物质的作用的物质或药品。

术语“拮抗剂”是指能与受体结合，但不具备内在活性的一类物质。拮抗剂分为竞争性拮抗剂和非竞争性拮抗剂。

术语“受体激动剂”亦称完全激动剂(full agonist)，如GPR174激动剂，是指对受体有较强亲和力和内在活性,能通过受体兴奋发挥最大效应的药物。而与受体有足够亲和力,但内在活性不强,只产生较弱的效应,却能对抗激动药部分效应的药物称为部分激动剂(partial agonist)。

术语“抑制型抗体”是指与某物质特异性结合的抗体，并抑制某物质生理功能的发挥。例如GPR174抑制型抗体是指与GPR174特异性结合的抗体，并抑制GPR174通过响应CCL21和CCL19调控B细胞体内的动态定位的功能。

术语“表达抑制剂”或“表达促进剂”是指抑制某物质表达或促进某物质表达的试剂。例如，GPR174表达抑制剂，是指抑制GPR174表达的试剂，GPR174表达促进剂，是指促进GPR174表达的试剂。

本发明所使用的“自身免疫疾病”是指由于患者体内产生了过高的自身抗体所产生的疾病。

本发明所使用的术语“治疗”任何疾病或病症，在其中一些实施方案中指改善疾病或病症(即减缓或阻止或减轻疾病或其至少一种临床症状的发展)。在另一些实施方案中，“治疗”指缓和或改善至少一种身体参数，包括可能不为患者所察觉的身体参数。在另一些实施方案中，“治疗”指从身体上(例如稳定可察觉的症状)或生理学上(例如稳定身体的参数)或上述两方面调节疾病或病症。在另一些实施方案中，“治疗”指预防或延迟疾病或病症的发作、发生或恶化。

本发明提供了试剂在制备药物中的用途，所述药物包含本发明公开的GPR174和/或CCL21和/或CCL19抑制型抗体或者拮抗剂或者表达抑制剂或所述药物包含本发明公开的GPR174和/或CCL21和/或CCL19激动剂或表达促进剂或过表达细胞，和药学上可接受的辅料、赋形剂、载体、溶媒或它们的组合。本发明公开的上述抑制型抗体或者拮抗剂或者表达抑制剂的量或者激动剂或表达促进剂或过表达细胞是指能有效改变活化B细胞向滤泡中心区域聚集的量。

也应认识到，本发明公开的上述抑制型抗体或者拮抗剂或者表达抑制剂的或者激动剂或表达促进剂可以以游离形式存在用于治疗，或者如果适当可以以其药学上可接受的衍生物的形式存在。药学上可接受衍生物的一些非限制性的实施方案包括药学上可接受的前药，盐，酯，这些酯的盐，或者对有需要的患者给药时能直接或间接提供本发明所述抑制型抗体或者拮抗剂或者表达抑制剂的或者激动剂或表达促进剂的任何另外的加合物或衍生物。

本发明公开的上述抑制型抗体或者拮抗剂或者表达抑制剂的或者激动剂或表达促进剂可制备并包装为散装(bulk)形式，其中可提取安全有效量，然后以粉末或糖浆形式给予患者。或者，本发明公开的上述激动剂、促进剂、拮抗剂或抑制剂可制备并包装为单位剂型，其中每个物理上离散的单位含有安全有效量。当以单位剂型制备时，本发明公开的上述激动剂、促进剂、拮抗剂或抑制剂通常可含，例如，0.5mg至1g、或1mg至700mg、或5mg至100mg。

本发明所用“药学上可接受的辅料”意指与给药剂型或药物组合物一致性相关的药学上可接受的材料，混合物或溶媒。每种辅料在混合时必须与药物组合物的其它成分相容，以避免对患者给药时会大大降低本发明公开的上述激动剂、促进剂、拮抗剂或抑制剂的功效的相互作用和会导致不是药学上可接受的药物组合物的相互作用。此外，每种辅料必须是药学上可接受的，例如，具有足够高的纯度。

合适的药学上可接受的辅料会依所选具体剂型而不同。此外，可根据它们在组合物中的特定功能来选择药学上可接受的辅料。例如，可选择能有助于生产均一剂型的某些药学上可接受的辅料。可选择能有助于生产稳定剂型的某些药学上可接受的辅料。可选择对患者给药时有助于携带或运输本发明公开化合物从身体的一个器官或部分到身体的另一个器官或部分的某些药学上可接受的辅料。可选择增强患者依从性的某些药学上可接受的辅料。

合适的药学上可接受的辅料包括以下类型的辅料：稀释剂、填充剂、粘合剂、崩解剂、润滑剂、助流剂、造粒剂、包衣剂、润湿剂、溶剂、共溶剂、助悬剂、乳化剂、甜味剂、矫味剂、掩味剂、着色剂、防结块剂、保湿剂、螯合剂、塑化剂、增粘剂、抗氧化剂、防腐剂、稳定剂、表面活性剂和缓冲剂。技术人员可认识到，某些药学上可接受的辅料可提供不止一种功能，并提供可供选择的功能，这取决于制剂中存在多少该辅料和制剂中存在哪些其他辅料。

技术人员掌握本领域的知识和技能，以使他们能选择用于本发明的适当量的合适的药学上可接受的赋形剂。此外，存在大量技术人员可获得的资源，他们描述药学上可接受的赋形剂，并用于选择合适的药学上可接受的赋形剂。实例包括Remington'sPharmaceutical Sciences(Mack Publishing Company),The Handbook ofPharmaceutical Additives(Gower Publishing Limited),and The Handbook ofPharmaceutical Excipients(the American Pharmaceutical Association and thePharmaceutical Press)。

在Remington:The Science and Practice of Pharmacy,21st edition,2005,ed.D.B.Troy,Lippincott Williams&Wilkins,Philadelphia,and Encyclopedia ofPharmaceutical Technology,eds.J.Swarbrick and J.C.Boylan,1988-1999,MarcelDekker,New York中披露了用于配置药学上可接受的组合物的各种载体，和用于其制备的公知技术，这些文献各自的内容通过引用并入本发明。除任何诸如因产生任何不期望的生物作用，或以有害方式与药学上可接受组合物中的任何其它成分发生相互作用而与本发明公开化合物不相容的任何常用载体外，关注其应用属于本发明的范围。

本发明公开的药物使用本领域技术人员已知的技术和方法来制备。本领域一些常用方法的描述可参见Remington's Pharmaceutical Sciences(Mack PublishingCompany)。

因此，另一方面，本发明涉及制备药物的工艺，所述药物包含本发明公开的上述激动剂、促进剂、拮抗剂或抑制剂和药学上可接受的辅料，赋形剂，载体，溶媒或它们的组合，该工艺包括混合各种成分。包含本发明公开上述激动剂、促进剂、拮抗剂或抑制剂的药物，可以在例如环境温度和大气压下混合来制备。

本发明公开的上述激动剂、促进剂、拮抗剂或抑制剂或功能类似物通常被配制成适合于通过所需途径对患者给药的剂型。例如，剂型包括那些适合于以下给药途径的剂型：(1)口服给药，例如片剂、胶囊剂、囊片剂、丸剂、含片剂、粉剂、糖浆剂、酏剂、混悬剂、溶液剂、乳剂、颗粒剂和扁囊剂；(2)胃肠外给药，例如无菌溶液剂、混悬剂和冻干粉末剂；(3)透皮给药，例如透皮贴片剂；(4)直肠给药，例如栓剂；(5)吸入，例如气雾剂、溶液剂和干粉剂；和(6)局部给药，例如乳膏剂、油膏剂、洗剂、溶液剂、糊剂、喷雾剂、泡沫剂和凝胶剂。

在一些实施方案中，本发明公开的上述激动剂、促进剂、拮抗剂或抑制剂可以配制成口服剂型。在另一些实施方案中，本发明公开的上述激动剂、促进剂、拮抗剂或抑制剂可以配制成吸入剂型。在另一些实施方案中，本发明公开的上述激动剂、促进剂、拮抗剂或抑制剂可以配制成经鼻给药剂型。在又一些实施方案中，本发明公开的上述激动剂、促进剂、拮抗剂或抑制剂可以配制成透皮给药剂型。还在一些实施方案中，本发明公开的上述激动剂、促进剂、拮抗剂或抑制剂可以配制成局部给药剂型。

本发明提供的药物可以以压制片、研制片、可咀嚼锭剂、速溶片、复压片、或肠溶片、糖衣或薄膜衣片来提供。肠溶片是用能抗胃酸作用但在肠中溶解或崩解的物质包衣的压制片，从而防止了活性成分接触胃的酸性环境。肠包衣包括，但不限于，脂肪酸、脂肪、水杨酸苯酯、蜡、虫胶、氨化虫胶和邻苯二甲酸乙酸纤维素酯。糖衣片为糖衣包围的压制片，其可利于掩盖令人不愉快的味道或气味并且能防止片剂氧化。薄膜包衣片为用水溶性物质的薄层或薄膜覆盖的压制片。薄膜包衣包括，但不限于，羟乙基纤维素、羧甲基纤维素钠、聚乙二醇4000和邻苯二甲酸乙酸纤维素酯。薄膜包衣赋有和糖包衣相同的一般特性。复压片为经过超过一个压缩周期制备的压制片，包括多层片、和压制包衣或干包衣片。

片剂剂型可以由呈粉末、结晶或颗粒状的活性成分单独的或与本发明描述的一种或多种载体或赋形剂组合来制备，所述载体和赋形剂包括粘合剂、崩解剂、控释聚合物、润滑剂、稀释剂和/或着色剂。增香剂和甜味剂在形成咀嚼片和锭剂时特别有用。

本发明提供的药物可以以软胶囊或硬胶囊来提供，其可以由明胶、甲基纤维素、淀粉或海藻酸钙来制备。所述硬明胶胶囊也称为干填充胶囊(DFC)，由两段组成，一段塞入另一段中，因此完全包封了活性成分。软弹性胶囊(SEC)是软的、球形壳，比如明胶壳，其通过加入甘油、山梨醇或类似的多元醇塑化。软明胶壳可以包含防腐剂来预防微生物生长。合适的防腐剂为如本发明所述的那些，包括尼泊金甲酯和尼泊金丙酯，以及山梨酸。本发明提供的液体、半固体和固体剂型可以包囊在胶囊中。合适的液体和半固体剂型包括在碳酸丙烯酯、植物油或甘油三酯中的溶液和混悬剂。包含这样的溶液的胶囊可以如在美国专利U.S.Pat.Nos.4,328,245；4,409,239和4,410,545中描述的来制备。所述胶囊也可以采用如本领域技术人员已知的涂层，从而改善或维持活性成分的溶出。

本发明提供的药物可以以液体和半固体剂型来提供，包括乳剂、溶液、混悬剂、酏剂和糖浆剂。乳剂为二相系统，其中一种液体以小球形式完全分散在另一种液体中，其可以是水包油型或油包水型。乳剂可以包括药学上可接受的非水液体和溶剂、乳化剂和防腐剂。混悬剂可以包括药学上可接受的助悬剂和防腐剂。含水醇溶液可以包括药学上可接受的缩醛，比如低级烷基醛的二(低级烷基)缩醛，例如乙醛二乙基缩醛；和具有一个或多个羟基的水溶性溶剂，比如丙二醇和乙醇。酏剂是透明的、甜味的水醇溶液。糖浆剂是浓的糖例如蔗糖的水溶液，并且还可以包含防腐剂。对于液体剂型，例如，在聚乙二醇中的溶液可以用足量的药学上可接受的液体载体例如水稀释，以精确方便地给药。

其它有用的液体和半固体剂型包括，但不限于包含本发明提供的上述激动剂、促进剂、拮抗剂或抑制剂和二级化单-或聚-烷撑二醇的那些剂型，所述单-或聚-烷撑二醇包括：1,2-二甲氧基甲烷、二甘醇二甲醚、三甘醇二甲醚、四甘醇二甲醚、聚乙二醇-350-二甲醚、聚乙二醇-550-二甲醚、聚乙二醇-750-二甲醚、其中350、550、750指聚乙二醇的近似平均分子量。这些制剂可以进一步包括一种或多种抗氧剂，比如丁羟甲苯(BHT)、丁羟茴醚(BHA)，没食子酸丙酯、维生素E、氢醌、羟基香豆素、乙醇胺、卵磷脂、脑磷脂、抗坏血酸、苹果酸、山梨醇、磷酸、亚硫酸氢盐、焦亚硫酸钠、硫代二丙酸及其酯和二硫代氨基甲酸酯。

适当时，可以将口服给药的剂量单位制剂微囊包封。也可以将其制备成延长或维持释放的组合物，例如通过将微粒材料包衣或包埋在聚合物、蜡或类似物中。

本发明提供的口服药物还可以以脂质体、胶束、微球或纳米体系的形式提供。胶束剂型可以用U.S.Pat.No.6,350,458描述的方法来制备。

本发明提供的药物可以以非泡腾或泡腾的颗粒剂和粉剂来提供，以重构成液体剂型。在非泡腾颗粒剂或粉剂中使用的药学上可接受的载体和赋形剂可以包括稀释剂、甜味剂和润湿剂。在泡腾颗粒剂或粉剂中使用的药学上可接受的载体和赋形剂可以包括有机酸和二氧化碳源。

在所有上述剂型中可以使用着色剂和调味剂。

本发明所公开的上述激动剂、促进剂、拮抗剂或抑制剂或功能类似物也可以与作为靶向药物载体的可溶性聚合物结合。这样的聚合物包括聚乙烯吡咯烷酮、吡喃共聚物、聚羟丙基甲基丙烯酰胺-苯酚、聚羟乙基天冬酰胺苯酚或棕榈酰残基取代的聚氧乙烯聚赖氨酸。此外，本发明所公开的上述激动剂、促进剂、拮抗剂或抑制剂可以与在实现药物的控制释放中使用的一类生物可降解的聚合物结合，例如，聚乳酸、聚ε-己内酯、聚羟基丁酸、聚原酸酯、聚缩醛、聚二氢吡喃、聚氰基丙烯酸酯和水凝胶的交联或两亲嵌段共聚物。

本发明提供的药物可以配制成立即或改性释放剂型，包括延迟-、缓释-、脉冲-、控制-、靶向-和程序化释放形式。

本发明提供的药物可以与不会损害预期的治疗作用的其它活性成分共同配制，或者与补充预期的作用的物质共同配制。

本发明提供的药物可以通过注射、输注或植入肠胃外给药，用于局部或全身给药。如本发明使用的肠胃外给药包括静脉内、动脉内、腹膜内、鞘内、心室内、尿道内、胸骨内、颅内、肌内、滑膜内和皮下给药。

本发明提供的药物可以配制成适于肠胃外给药的任何剂型，包括溶液、混悬剂、乳剂、胶束、脂质体、微球、纳米体系和适于在注射前在液体中制成溶液或混悬液的固体形式。这样的剂型可以根据药物科学领域的技术人员已知的常规方法来制备(参见Remington:The Science和Practice of Pharmacy,同上)。

预期用于肠胃外给药的药物组合物可以包括一种或多种药学上可接受的载体和赋形剂，包括，但不限于，含水运载体、水混溶性运载体、非水运载体、抗微生物剂或抗微生物生长的防腐剂、稳定剂、溶解增强剂、等渗剂、缓冲剂、抗氧剂、局部麻醉剂、助悬剂和分散剂、湿润剂或乳化剂、络合剂、多价螯合剂或螯合剂、防冻剂、冷冻保护剂、增稠剂、pH调节剂和惰性气体。

合适的含水运载体包括，但不限于：水、盐水、生理盐水或磷酸盐缓冲盐水(PBS)、氯化钠注射液、Ringers注射液、等渗葡萄糖注射液、无菌水注射液、葡萄糖和乳酸化的Ringers注射液。非水运载体包括，但不限于，植物来源的非挥发油、蓖麻油、玉米油、棉籽油、橄榄油、花生油、薄荷油、红花油、芝麻油、豆油、氢化植物油、氢化豆油和椰子油的中链甘油三酯、及棕榈种子油。水混溶性运载体包括，但不限于，乙醇、1,3-丁二醇、液体聚乙二醇(例如聚乙二醇300和聚乙二醇400)、丙二醇、甘油、N-甲基-2-吡咯烷酮、N,N-二甲基乙酰胺和二甲亚砜。

合适的抗微生物剂或防腐剂包括，但不限于，苯酚、甲酚、汞剂、苯甲醇、氯代丁醇、对羟基苯甲酸甲酯和对羟基苯甲酸丙酯、硫柳汞、苯扎氯铵(例如苄索氯铵)、尼泊金甲酯和尼泊金丙酯及山梨酸。合适的等渗剂包括，但不限于，氯化钠、甘油和葡萄糖。合适的缓冲剂包括，但不限于，磷酸盐和柠檬酸盐。合适的抗氧化剂为如本发明描述的那些，包括亚硫酸氢盐和偏亚硫酸氢钠。合适的局部麻醉剂包括，但不限于盐酸普鲁卡因。合适的助悬剂和分散剂为如本发明描述的那些，包括羧甲基纤维素钠、羟丙基甲基纤维素和聚乙烯吡咯烷酮。合适的乳化剂包括本发明描述的那些，包括聚氧乙烯脱水山梨醇单月桂酸酯。聚氧乙烯脱水山梨醇单油酸酯80和油酸三乙醇胺酯。合适的多价螯合剂或螯合剂包括，但不限于EDTA。合适的pH调节剂包括，但不限于氢氧化钠、盐酸、柠檬酸和乳酸。合适的络合剂包括，但不限于环糊精，包括α-环糊精、β-环糊精、羟丙基-β-环糊精、磺基丁基醚-β-环糊精和磺基丁基醚7-β-环糊精(CyDex,Lenexa,KS)。

本发明提供的药物可以配制成单剂量或多剂量给药。所述单剂量制剂被包装在安瓿剂、小瓶或注射器中。所述多剂量肠胃外制剂必须包含抑菌或抑真菌浓度的抗微生物剂。所有的肠胃外制剂都必须是无菌的，如本领域已知和实践的。

在一些实施方案中，药物以即用型无菌溶液来提供。在另一些实施方案中，药物以无菌干燥可溶性产品提供，包括冻干粉末剂和皮下注射片剂，其在使用前用运载体重构。在又一些实施方案中，药物被配制成即用型无菌悬浮液。在又一些实施方案中，药物被配制成使用之前用运载体重构的无菌干燥不可溶性产品。还在一些实施方案中，药物被配制成即用型无菌乳剂。

本发明所公开的药物可以配置成立即或改性释放剂型，包括延迟-、缓释-、脉冲-、控制-、靶向-和程序化释放形式。

药物可以配置成混悬剂、固体、半固体或触变液体，用作植入的贮库给药。在一些实施方案中，本发明所公开的药物分散在固体内部基质中，其被不溶于体液但允许药物中的活性成分扩散通过的外部聚合膜所包围。

适合的内部基质包括聚甲基丙烯酸甲酯、聚丁基丙烯酸甲酯、增塑的或未增塑的聚氯乙烯、增塑的尼龙、增塑的聚对苯二甲酸乙二酯、增塑的聚对苯二甲酸乙酯、天然橡胶、聚异戊二烯、聚异丁烯、聚丁二烯、聚乙烯、乙烯-醋酸乙烯酯共聚物、硅酮橡胶、聚二甲硅氧烷、硅酮碳酸酯共聚物、亲水性聚合物比如丙烯酸和甲基丙烯酸的酯的水凝胶、胶原、交联聚乙烯醇及教练的部分水解的聚乙酸乙烯酯。

适合的外部聚合膜包括聚乙烯、聚丙烯、乙烯/丙烯共聚物、乙烯/丙烯酸乙酯共聚物、乙烯/乙烯基乙酸酯共聚物、硅酮橡胶、聚二甲基硅氧烷、氯丁橡胶、氯化聚乙烯、聚氯乙烯、氯化乙烯与乙酸乙烯酯的共聚物、偏二氯乙烯、乙烯和丙烯、离子交联聚合物聚对苯二甲酸乙二酯、丁基橡胶氯醇橡胶、乙烯/乙烯醇共聚物、乙烯/乙酸乙烯酯/乙烯醇三聚物和乙烯/乙烯氧基乙醇共聚物。

另一方面，本发明所公开的药物可以配制成适于对患者吸入给药的任何剂型，例如干粉剂、气雾剂、混悬剂或溶液组合物。在一些实施方案中，本发明所公开的药物可以配制成适于用干粉剂对患者吸入给药的剂型。在又一些实施方案中，本发明所公开的药物可以配制成适于通过喷雾器对患者吸入给药的剂型。通过吸入递送至肺的干粉组合物通常包含精细粉末状的本发明所公开的上述激动剂、促进剂、拮抗剂或抑制剂和一种或多种精细粉末状的药学上可接受的赋形剂。特别适合用作干粉剂的药学上可接受的赋形剂为本领域技术人员所知晓，其包括乳糖、淀粉、甘露醇、和单-、二-和多糖。精细粉末可通过例如微粉化和研磨制备得到。一般来说，尺寸减小的(如微粉化的)化合物可以通过约1至10微米的D₅₀值(例如，用激光衍射法测量的)来定义。

气雾剂可以通过将本发明所公开的上述激动剂、促进剂、拮抗剂或抑制剂悬浮或溶解在液化推进剂中配制。适合的推进剂包括氯代烃、烃类和其它液化气体。代表性的推进剂包括：三氯氟甲烷(推进剂11)、二氯氟甲烷(推进剂12)、二氯四氟乙烷(推进剂114)、四氟乙烷(HFA-134a)、1,1-二氟乙烷(HFA-152a)、二氟甲烷(HFA-32)、五氟乙烷(HFA-12)、七氟丙烷(HFA-227a)、全氟丙烷、全氟丁烷、全氟戊烷、丁烷、异丁烷和戊烷。包含本发明所公开的化合物的气雾剂通常通过计量剂量吸入器(MDI)对患者给药。这样的装置为本领域技术人员所知晓

气雾剂可包含额外的、可通过MDIs使用的药学上可接受的赋形剂，例如表面活性剂、润滑剂、共溶剂和其它赋形剂，以改善制剂的物理稳定性、改善阀门特性、改善溶解性、或者改善口味。

适合于透皮给药的药物组合物可制备成不连续的贴片剂，意在与患者的表皮保持紧密接触一段延长的时间。例如，可通过离子渗透从贴片剂中递送活性成分，如Pharmaceutical Research,3(6),318(1986)中的一般描述。

适合于局部给药的药物可以被配制成油膏剂、乳膏剂、混悬剂、洗剂、粉剂、溶液剂、糊剂、凝胶剂、喷雾剂、气雾剂或油剂。例如，油膏剂、乳膏剂和凝胶剂可以用水或油基质，和适合的增稠剂和/或凝胶剂和/或溶剂来配置。这样的基质可以包括，水，和/或油例如液体液体石蜡和植物油(例如花生油或蓖麻油)，或溶剂例如聚乙二醇。根据基质性质使用的增稠剂和凝胶剂包括软石蜡、硬脂酸铝、鲸蜡硬脂醇、聚乙二醇、羊毛脂、蜂蜡、聚羧乙烯和纤维素衍生物，和/或单硬脂酸甘油脂和/或非离子型乳化剂。

洗剂可以用水或油基质配制，并且通常也含有一种或多种乳化剂、稳定剂、分散剂、助悬剂或增稠剂。

外用粉剂可以在任意适合的粉基质例如滑石粉、乳糖或淀粉的存在下成型。滴剂可以用包含一种或多种分散剂、增溶剂、助悬剂或防腐剂的水或非水基质配制而成。

局部制剂可以通过在患处每天应用一次或多次来给药；覆盖皮肤的封闭敷料优先被使用。粘附性储库系统可实现连续或延长的给药。

治疗眼睛，或其它器官如嘴巴和皮肤时，可施用作为局部油膏剂或乳膏剂的组合物。当配制为油膏剂时，本发明所公开的化合物可与石蜡或水溶的油膏剂基质一起使用。或者，本发明所公开的化合物可以与水包油乳膏剂基质或水包油基质一起配制成乳膏剂。

本发明提供使用本发明所公开的上述激动剂、促进剂、拮抗剂或抑制剂用于制备促进或抑制活化B细胞向滤泡中心区域聚集的药物。

在一些实施方案中，本发明提供一类本发明所公开的上述激动剂、促进剂或包含本发明所公开上述激动剂、促进剂的药物，用于降低机体体液免疫应答，或治疗、预防或改善自身免疫疾病。

在一些实施方案中，本发明提供一类本发明所公开的上述拮抗剂或抑制剂或包含本发明所公开上述拮抗剂或抑制剂的药物，用于提高机体体液免疫应答或治疗、预防或改善免疫缺陷症。

在另一方面，本发明提供一种治疗罹患或有风险罹患本文所公开疾病的哺乳动物的方法，所述方法包括给予有效治疗病症量或有效预防病症量的一种或多种本文公开的药物或上述激动剂、促进剂、拮抗剂或抑制剂或其功能类似物。在另一方面，本文提供一种治疗罹患或有风险罹患自体免疫疾病、过敏性疾病、炎性疾病或移植排斥的哺乳动物的方法。在另一方面，本文提供清除病原体的方法，所述病原体包括但不限于革兰氏阳性菌，革兰氏阴性菌，真菌，寄生虫和病毒。

在另一方面，本文提供治疗和/或预防易患或患有自体免疫疾病的哺乳动物的方法，所述方法包括给予有效治疗量或有效预防量的一种或多种本文公开的药物或上述激动剂、促进剂、拮抗剂或抑制剂或其功能类似物。在特定实例中，自体免疫疾病选自COPD、哮喘、系统性红斑狼疮、皮肤型红斑狼疮、狼疮性肾炎、皮肌炎、干燥综合征、银屑病、I型糖尿病和炎性肠病。

另一方面，本文提供一类本文公开的上述激动剂、促进剂、拮抗剂或抑制剂或其功能类似物，用于治疗和/或预防自体免疫疾病。在特定的实施方案中，自体免疫疾病选自COPD、哮喘、系统性红斑狼疮、皮肤型红斑狼疮、狼疮性肾炎、皮肌炎、干燥综合征、银屑病、I型糖尿病和炎性肠病。

另一方面，本文提供一类本文公开的上述激动剂、促进剂、拮抗剂或抑制剂或其功能类似物，或包含本文公开上述激动剂、促进剂、拮抗剂或抑制剂或其功能类似物的药物，用于制备治疗或预防自体免疫疾病的药品。在特定的实施方案中，自体免疫疾病选自COPD、哮喘、系统性红斑狼疮、皮肤型红斑狼疮、狼疮性肾炎、皮肌炎、干燥综合征、银屑病、I型糖尿病和炎性肠病。

在另一方面，本文提供治疗和/或预防易患或患有过敏性疾病的哺乳动物的方法，所述方法包括给予有效治疗量或有效预防量的一种或多种本文公开的药物。在特定的实施方案中，过敏性疾病选自呼吸道过敏性疾病、鼻窦炎、湿疹和麻疹、食物过敏和昆虫毒液过敏。

另一方面，本文提供一类本文公开的上述激动剂、促进剂、拮抗剂或抑制剂或其功能类似物，用于治疗和/或预防过敏性疾病。在特定的实施方案中，过敏性疾病选自呼吸道过敏性疾病、鼻窦炎、湿疹和麻疹、食物过敏和昆虫毒液过敏。

另一方面，本文提供一类本文公开的上述激动剂、促进剂、拮抗剂或抑制剂或其功能类似物，或包含本文公开上述激动剂、促进剂、拮抗剂或抑制剂或其功能类似物的药物，用于制备治疗或预防过敏性疾病的药品。在特定的实施方案中，过敏性疾病选自呼吸道过敏性疾病、鼻窦炎、湿疹和麻疹，食物过敏和昆虫毒液过敏。

在另一方面，本文提供治疗和/或预防易患或患有炎性疾病的哺乳动物的方法，所述方法包括给予有效治疗量或有效预防量的一种或多种本文公开的药物或上述激动剂、促进剂、拮抗剂或抑制剂或其功能类似物。在特定的实施方案中，炎性疾病选自炎性肠病、克罗恩病、类风湿性关节炎、幼年型关节炎和银屑病性关节炎。

另一方面，本文提供一类本文公开的上述激动剂、促进剂、拮抗剂或抑制剂或其功能类似物，用于治疗和/或预防炎性疾病。在特定的实施方案中，炎性疾病选自炎性肠病、克罗恩病、类风湿性关节炎、幼年型关节炎和银屑病性关节炎。

另一方面，本文提供一类本文公开的上述激动剂、促进剂、拮抗剂或抑制剂或其功能类似物，或包含本文公开化合物的药物组合物，用于制备治疗或预防炎性疾病的药品。在特定的实施方案中，炎性疾病选自炎性肠病、克罗恩病、类风湿性关节炎、幼年型关节炎和银屑病性关节炎。

在另一方面，本文提供治疗和/或预防易患或患有移植排斥的哺乳动物的方法，所述方法包括给予有效治疗量或有效预防量的一种或多种本文公开的药物或上述激动剂、促进剂、拮抗剂或抑制剂或其功能类似物。在特定实例中，移植排斥是器官移植排斥、组织移植排斥和细胞移植排斥。

另一方面，本文提供一类本文公开的上述激动剂、促进剂、拮抗剂或抑制剂或其功能类似物，用于治疗和/或预防移植排斥。在特定的实施方案中，移植排斥是器官移植排斥、组织移植排斥和细胞移植排斥。

另一方面，本文提供一类本文公开的上述激动剂、促进剂、拮抗剂或抑制剂或其功能类似物，或包含本文公开上述激动剂、促进剂、拮抗剂或抑制剂或其功能类似物的药物，用于制备治疗或预防移植排斥的药品。在特定实例中，移植排斥是器官移植排斥、组织移植排斥和细胞移植排斥。

在另一方面，本文提供一类用作药物尤其用作治疗和/或预防前面所述疾病药物的本文公开的上述激动剂、促进剂、拮抗剂或抑制剂或其功能类似物。也提供使用本文公开上述激动剂、促进剂、拮抗剂或抑制剂或其功能类似物制造治疗和/或预防前面所述疾病的药物。

本方法的一个特别方案包括给予患有炎症的受试对象有效量的本发明公开药物一段时间，所述时间足以降低受试对象的炎症水平，并且优选终止所述炎症的进程。该方法的特别实施方案包括给予患有或易患骨类风湿性关节炎的受试患者有效量的本发明公开化合物一段时间，所述时间足以分别降低或预防所述患者的关节炎症，并且优选终止所述炎症的进程。

本发明所公开的上述激动剂、促进剂、拮抗剂或抑制剂或其功能类似物可以作为单独的活性试剂给药，或者可以与其它治疗剂联合给药，包括具有相同或相似治疗活性并且对于此类联合给药确定为安全且有效的其它化合物。

一方面，本发明提供治疗、预防或改善疾病或病症的方法，包括给予安全有效量的包含本发明公开上述激动剂、促进剂、拮抗剂或抑制剂与一种或多种治疗活性剂的联合药物。在一些实施方案中，联合药物包含一种或两种其他治疗剂。

其它治疗剂的实例包括但不限于：抗炎剂；和免疫调剂或免疫抑制剂。

另一方面，本发明提供包括本发明化合物和至少一种其它治疗剂的产品，可制备成在治疗中同时、分别或顺序施用的组合。联合制备提供的产品包括存在于同一药物组合物中包含本文公开上述激动剂、促进剂、拮抗剂或抑制剂的组合物，或者以不同形式存在的本文公开上述激动剂、促进剂、拮抗剂或抑制剂和其他治疗剂，例如，药盒。

另一方面，本发明提供一种包含本文公开上述激动剂、促进剂、拮抗剂或抑制剂和另外一种或多种治疗剂的药物。在一些实施方案中，药物可以包含如上所述的药学上可接受的赋形剂、载体、佐剂或溶媒。

另一方面，本发明提供包含两种或以上的单独药物的药盒，其中至少一种药物包含本发明公开的上述激动剂、促进剂、拮抗剂或抑制剂。在一些实施方案中，药盒包括单独保持所述组合物的工具，例如容器、分开的瓶或分开的箔盒。这类药盒的实例是泡罩包装，其通常用于包装片剂、胶囊剂等。

本发明还提供了本发明上述激动剂、促进剂、拮抗剂或抑制剂在治疗疾病或病征中的用途，其中患者先前(例如在24小时内)已经用其他治疗剂进行了治疗。

本文公开上述激动剂、促进剂、拮抗剂或抑制剂可以作为单一活性组分施用或作为例如佐剂，与其它治疗剂共同施用。

在一些实施方案中，本文公开上述激动剂、促进剂、拮抗剂还可以与其它药物共同施用。所述其它药物包括，免疫抑制剂、免疫调节剂、其它抗炎剂，例如用于治疗或预防同种异体或异种移植物急性或慢性排斥、炎性、自身免疫性疾病的药物。。

另一方面，本发明提供一种包含本发明公开上述激动剂、促进剂、拮抗剂或抑制剂或其功能类似物和皮质类固醇的联合。合适的皮质类固醇是指那些口服和吸入的皮质类固醇，及其有抗炎活性的前药。

另一方面，本发明提供一种包含本发明公开上述激动剂、促进剂、拮抗剂或抑制剂或其功能类似物和非甾体类GR激动剂的联合。

另一方面，本发明提供一种包含本发明公开上述激动剂、促进剂、拮抗剂或抑制剂或其功能类似物和非甾体抗炎药物(NSAID's)的联合。

在一些实施方案中，本发明涉及本发明公开上述激动剂、促进剂、拮抗剂或抑制剂在与磷酸二酯酶4(PDE4)抑制剂的联合中的应用，尤其是在吸入剂型中的应用。

另一方面，本发明提供一种包含本发明公开上述激动剂、促进剂、拮抗剂或抑制剂或其功能类似物和H1拮抗剂的联合。

以上所述的联合可以方便地制备成药物组合物来使用，因此，包括以上定义的组合与药学上可接受的赋形剂或载体的药物组合物代表本发明的另一个方面。

这些联合的各化合物可以以单独的或组合的药物制剂形式顺序给药或同时给药。在一个实施例中，各组分是以组合的药物制剂形式同时给药的。已知治疗剂的适合剂量易于为本领域的技术人员所理解。

因此，另一方面，本发明提供一种药物，包含本发明公开的上述激动剂、促进剂、拮抗剂或抑制剂与其他治疗活性剂的联合。

在另一些实施方案中，本发明提供的药物组合物包含本发明公开上述激动剂、促进剂、拮抗剂或抑制剂或其功能类似物与皮质类固醇的联合。

在另一些实施方案中，本发明提供的药物组合物包含本发明公开上述激动剂、促进剂、拮抗剂或抑制剂或其功能类似物与非甾体类GR激动剂的联合。

在另一些实施方案中，本发明提供的药物组合物包含本发明公开上述激动剂、促进剂、拮抗剂或抑制剂或其功能类似物与抗胆碱能药的联合。

在又一些实施方案中，本发明提供的药物组合物包含本发明公开上述激动剂、促进剂、拮抗剂或抑制剂或其功能类似物与抗组胺药的联合。

在又一些实施方案中，本发明提供的药物组合物包含本发明公开上述激动剂、促进剂、拮抗剂或抑制剂或其功能类似物与抗炎试剂的联合。

在又一些实施方案中，本发明提供的药物组合物包含本发明公开上述激动剂、促进剂、拮抗剂或抑制剂或其功能类似物与免疫调节剂的联合。

本发明公开的上述激动剂、促进剂、拮抗剂或抑制剂或其功能类似物也可以有利地用于与其他化合物的组合、或其他治疗剂的组合中，例如治疗利什曼病、锥虫病、弓形体病和脑囊虫病的其他治疗剂。

由代号、通用名或商品名所确定的活性成分的结构及其制备可以从标准著作“TheMerck Index(默克索引)”的现行版本(例如M.J.O’Neil等人编.‘The MerckIndex’，第13版，Merck Research Laboratories，2001)或者从数据库(例如Patents International(例如IMSWorld Publications))中获知。

以上所述的、可以与本发明公开上述激动剂、促进剂、拮抗剂或抑制剂组合使用的化合物，可以由本领域技术人员，按照上述文献所记载的方法制备和给药。

本发明公开的化合物还可以与治疗过程联合，提高疗效。例如，给予激素治疗。“联合”表示在单个剂量单位形式中的固定联合或用于联合给药的部分的药盒，其中本发明公开的上述激动剂、促进剂、拮抗剂或抑制剂或其功能类似物和联合伴侣可以在同一时间独立施用或者可以在一定的时间间隔内分别施用，特别是使联合伴侣表现出合作、例如协同作用。如本文所用的术语“共同给药”或“联合给药”等意欲囊括将所选的联合伴侣施用于需要其的单个个体(例如患者)，并且意欲包括其中物质不必通过相同给药途径或同时给药的治疗方案。如本文所用的术语“药物联合”表示将一种以上活性成分混合或联合所得到的产品，并且既包括活性成分的固定联合也包括非固定联合。术语“固定联合”表示活性成分如本发明公开的化合物，和联合伴侣以单一实体或剂量的形式同时施用于患者。术语“非固定联合”表示活性成分如本发明公开的上述激动剂、促进剂、拮抗剂或抑制剂或其功能类似物，和联合伴侣均作为单独实体同时、共同或无特定时间限制地先后对患者给药，其中该给药方式在患者体内提供了两种化合物的治疗有效水平。后者还适用于鸡尾酒疗法，例如施用三种或更多种活性成分。

下面详细描述本发明的实施例。下面描述的实施例是示例性的，仅用于解释本发明，而不能理解为对本发明的限制。实施例中未注明具体技术或条件的，按照本领域内的文献所描述的技术或条件或者按照产品说明书进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市购获得的常规产品。在以下实施例中的定量试验中，均设置三次重复实验，结果取平均值。

实施例1雄性B细胞与雌性B细胞形成生发中心的固有差异

在本实施例中，发明人详细介绍了雄性B细胞与雌性B细胞在形成生发中心大小的固有差异以及形成生发中心反应前动态定位的固有差异。

为了研究雄性B细胞与雌性B细胞在形成生发中心的能力上是否有固有差异，发明人构建了一个抗原特异性雄性B细胞与雌性B细胞共回输的系统：将相同数量的雄性或雌性抗原特异性MD4 B细胞(dsRed-红色荧光蛋白标记)分别与相同数量的雄性抗原特异性MD4B细胞(GFP-绿色荧光蛋白标记)混匀后回输至雄性受体鼠中(图1a纵向第一栏)，并同时回输一定数量的雄性抗原特异性OT2 T细胞作为辅助性T细胞促进抗原特异性生发中心的形成。在给予HEL-OVA免疫后的第五天分析受体鼠生发中心B细胞中dsRed标记的雄性或雌性抗原特异性MD4 B细胞与GFP标记的雄性抗原特异性MD4 B细胞的占比(图a纵向第二和第三栏)。将免疫后第五天生发中心B细胞中dsRed阳性细胞与GFP阳性细胞的比例用回输时dsRed阳性细胞与GFP阳性细胞的比例进行归一化处理后分析可以发现：在同一个雄性小鼠个体内受抗原刺激而活化的雄性B细胞和雌性B细胞相比，雄性B细胞不能像雌性B细胞一样形成较大的生发中心(图1b)。

为了进一步研究雄性B细胞与雌性B细胞在形成生发中心的能力上为何有固有差异，发明人分析了在免疫后第四天生发中心形成前dsRed标记的雄性或雌性抗原特异性MD4B细胞与GFP标记的雄性抗原特异性MD4 B细胞的动态定位，其中用IgD分子的荧光染色标记出整个滤泡区，用CD35分子的荧光染色标记出滤泡区的中心区域(图1c)，并且定义了一个图像统计指标：中心聚集指数(CCI)＝位于CD35阳性区域的dsRed标记雄性或雌性抗原特异性MD4 B细胞或GFP标记雄性抗原特异性MD4 B细胞的数量/位于IgD阳性滤泡区的dsRed标记雄性或雌性抗原特异性MD4 B细胞或GFP标记雄性抗原特异性MD4B细胞的数量(图1d)。统计分析可得在同一个雄性小鼠个体内受抗原刺激而活化的雄性B细胞，其中心聚集指数要低于雌性B细胞(图1d)。这说明在生发中心形成之前雄性B细胞并不能非常有效地向滤泡中心区域聚集，因此也从很大程度上使得雄性B细胞不能像雌性B细胞一样形成较大的生发中心(图1b)

实施例2 GPR174调控受抗原刺激而活化的B细胞的动态定位并且抑制雄性非雌性小鼠的生发中心反应

在本实施例中，发明人详细介绍了新发现的G蛋白偶联受体GPR174可以调控B细胞在体内的动态定位以及其对生发中心反应的影响。

为了探究为何雄性B细胞与雌性B细胞在形成生发中心反应前向滤泡中心区域聚集的能力有固有差异，发明人首先发现一个新的G蛋白偶联受体GPR174可以作为趋化受体调控B细胞在体内的动态定位。发明人利用GFP荧光标记的逆转录病毒载体在体外给活化的B细胞过表达GPR174，然后将其回输至小鼠体内可发现过表达GPR174的B细胞明显地大量聚集在T细胞区(CD3标记的区域)与滤泡区(B220标记的区域)的边界处，而对照组B细胞均匀地散布在整个滤泡区，无明显的定向分布趋势(图2a)。这一现象说明GPR174是一个新的趋化因子受体直接调控B细胞远离滤泡中心区域，潜在影响生发中心的反应。

因此，为了探究GPR174是否直接参与调控生发中心的反应，并且介导雄性个体与雌性个体之间生发中心形成的差异，发明人制备了Gpr174基因缺失的小鼠，并对这些小鼠直接用绵羊血红细胞(图2b)或者淋巴细胞脉络丛脑膜炎病毒(图2c)进行免疫或者感染，分别在第7天或者第8天对这些小鼠形成的生发中心B细胞的比例进行分析。统计分析可得，不管是绵羊血红细胞免疫还是淋巴细胞脉络丛脑膜炎病毒感染，都会使得野生型的雌鼠比雄鼠形成的生发中心B细胞多(图2b和图2c的第一栏与第三栏)，GPR174缺失的雄鼠可以生成更大的生发中心，而GPR174缺失的雌鼠没有显著性差异。同时分析绵羊血红细胞免疫后的浆细胞比例和14天的小鼠血清中抗体水平可以发现,GPR174缺失的雄鼠可以生成更多的浆细胞和更高的抗体水平，而GPR174缺失的雌鼠没有明显变化。(图2d)

考虑到GPR174可能不仅只在B细胞上有表达，在参与体液免疫应答的其他类型免疫细胞上可能也有表达，因此为了研究是否Gpr174在B细胞上的特异性缺失是Gpr174基因缺失雄鼠生发中心反应增强的直接因素，发明人制备了B细胞固有缺失Gpr174的骨髓嵌合小鼠(图2e)，并发现在绵羊血红细胞免疫后：B细胞的GPR174固有缺失可以促进雄鼠生成更大的生发中心、浆细胞和更高的抗体水平，而在雌鼠上没有明显作用。这暗示GPR174通过调控雄性非雌性B细胞在体内的动态定位影响生发中心的形成。

实施例3 GPR174是趋化因子CCL21和CCL19的受体且调控雄性和雌性B细胞体外与体内的差异性趋化迁移

在本实施例中，发明人详细介绍了新发现的G蛋白偶联受体GPR174实际上是一个趋化因子受体识别趋化因子CCL21和CCL19，并且阐述了GPR174-CCL21/CCL19在介导雄性B细胞和雌性B细胞在体外趋化实验和体内动态定位的差异。

为了进一步解释GPR174为何影响雄性非雌性小鼠的生发中心反应，发明人首先立足于鉴定出与GPR174相互作用的配体。由于现有研究中大多数的趋化因子均有脾脏基质细胞所分泌，因此发明人制备了小鼠脾脏基质细胞体外培养的上清液，并检测到其中含有很强的使得体外活化的B细胞依赖GPR174趋化运动的配体性质(图3a)。物理学性质分析发现该配体活性对100℃热处理与蛋白酶K处理都极其敏感(图3a)，由此推断GPR174的趋化因子配体是一个蛋白。因此发明人设计了一套6步蛋白分离纯化的体系从家猪脾脏基质细胞体外培养的上清液中分离提取出了GPR174的天然配体(图3b)，质谱分析检测出该配体为CCL21(图3c)。CCL19是和CCL21有相似作用的一个趋化因子，同样也是GPR174的配体。

在体外测试GPR174如何通过介导CCL21引起B细胞迁移的时候发现，雄性B细胞上面表达的GPR174可以引起很强的趋化迁移，而雌性B细胞上面表达的GPR174没有太大的作用(图3d)。在体内测试GPR174如何影响雄性非雌性B细胞动态定位的时候发现，GPR174使得受抗原刺激而活化的雄性B细胞在生发中心形成之前并不能非常有效地向滤泡中心区域聚集(图3e-f)，因此抑制雄性B细胞之后形成较大的生发中心(图3g-h)。然而这一现象在雌性B细胞中并未观察到(图3i-j)。这些数据说明GPR174通过作用在雄性B细胞表面响应CCL21/CCL19的吸引来抑制其向滤泡中心区域聚集，从而抑制生发中心的形成，并且雄性B细胞和雌性B细胞在生发中心形成之前向滤泡中心区域聚集能力以及之后形成生发中心大小的差异一部分是由GPR174介导的。

实施例4 GPR174抑制雄性而非雌性小鼠的自身免疫反应

发明人在雄的和雌的骨髓重建小鼠中制造了GPR174特异性在B细胞上缺失，然后对这样的小鼠诱导了实验性变态反应性脑脊髓炎动物模型(Experimental autoimmuneencephalomyelitis，EAE)，并且检测了这样的小鼠针对抗原(人源MOG蛋白)的特异性IgG滴度，发明人发现：GPR174在B细胞上特异性缺失可以加重雄鼠的病情，但在雌鼠上面作用不明显；这是因为GPR174的缺失使得B细胞产生更多的针对人源MOG蛋白的IgG抗体，潜在地加重了对大脑神经组织的破坏。结果如图4所示。

在本说明书的描述中，参考术语“一个实施例”、“一些实施例”、“示例”、“具体示例”、或“一些示例”等的描述意指结合该实施例或示例描述的具体特征、结构、材料或者特点包含于本发明的至少一个实施例或示例中。在本说明书中，对上述术语的示意性表述不必须针对的是相同的实施例或示例。而且，描述的具体特征、结构、材料或者特点可以在任一个或多个实施例或示例中以合适的方式结合。此外，在不相互矛盾的情况下，本领域的技术人员可以将本说明书中描述的不同实施例或示例以及不同实施例或示例的特征进行结合和组合。

尽管上面已经示出和描述了本发明的实施例，可以理解的是，上述实施例是示例性的，不能理解为对本发明的限制，本领域的普通技术人员在本发明的范围内可以对上述实施例进行变化、修改、替换和变型。

SEQUENCE LISTING

<110> 清华大学

<120> GPR174免疫学功能及其用途

<130> PIDC3184420

<160> 13

<170> PatentIn version 3.3

<210> 1

<211> 1002

<212> DNA

<213> Artificial

<220>

<223> 用于表达GPR174的质粒的核苷酸序列

<400> 1

ttagcataat tcaggtgtca tggtggaagc tgtatggtta ctcacaaagg attttgcatg 60

gagttggatg ctgtcatgca aatcttgtct tgaaagccgt cttcggaact cattagtgga 120

aaagtagtat atgactgggt caagacatga attcagacta gcaagacaca atgccacaga 180

atgaaatatt agaatcaccc ttctggctag gcagctttta atttcattgg acttcaccag 240

gaaatctaaa ggaaaactga aatgataagg tgcaaagcaa attaggaata cccctgcaca 300

ggttagaatc atcttcaagg ctttctgttt ctctccaaga tcttgggcca tgggatattt 360

atcttgcagt gataaaaccg tcttccaggt acaatatagg acaatcagaa gcggagttac 420

aaacccaatc aactcgccaa tggtcatcat aacaacggac tgggccaggt tgacattcct 480

ggtaggaaga tccacaaagc atttggtcct attgccagag gtatcatcac tggttctgag 540

gagtggaaag agtacacagg caaggcagat gatcagccag ccagcaatgc tgatgtacag 600

gtcatatttc tgtttgcagt catggaagcg aaaggggtac atgagaaacc aaaatcgtcg 660

cacactgatg cagaccaaga agtagatgct tgcatacatg ttgacatact tcaggtagaa 720

acagaacatg cagagaccag gcccaaatgg ccagtcatga ttcaagtagt agaagatcct 780

cagtggcaag gaaagaactt gtagtaagtc agcaatggct aagtttatca taaatatcac 840

agctcgtttt gtttctttca tataaccata gaatacccac agggctaata tattccctat 900

gagacctggc acaagaatga cagtgtatgt cactgcataa ataaagtatc gaaaatctgt 960

attgtctcca tctggcctgg tacacgtgta attagcaggc at 1002

<210> 2

<211> 405

<212> DNA

<213> Artificial

<220>

<223> 用于过表达CCL21质粒的核苷酸序列

<400> 2

ctatggccct ttaggggtct gtgaccgctc agtcctcttg cagcctttgg agccctttcc 60

tttcttgcca gtcttggagg cccccctgtc cttcctgcag ccctgggctg gtttctgtgg 120

ggatggtgtc ttgtccagat gctgcatcag ctgctgcacc cagagctcct ttgggtctgc 180

acatagctct gcctgagagc gcttgcgggg caagaacagg atagctggga tggagcagcc 240

taagcttggt tcctgcttcc ggtagctgcg gacaaccttg gcgggaatct tcctttggct 300

gtacttgagg caacagtcct gagcccctcc atcactgcct tgggtcctgg ggatgccaaa 360

ggccagaacc aggataagga ggctcagagc cagtgactga gccat 405

<210> 3

<211> 297

<212> DNA

<213> Artificial

<220>

<223> 用于表达CCL19的质粒的核苷酸序列

<400> 3

atggccctgc tactggccct cagcctgctg gttctctgga cttccccagc cccaactctg 60

agtggcacca atgatgctga agactgctgc ctgtctgtga cccagaaacc catccctggg 120

tacatcgtga ggaacttcca ctaccttctc atcaaggatg gctgcagggt gcctgctgta 180

gtgttcacca cactgagggg ccgccagctc tgtgcacccc cagaccagcc ctgggtagaa 240

cgcatcatcc agagactgca gaggacctca gccaagatga agcgccgcag cagttaa 297

<210> 4

<211> 97

<212> DNA

<213> Artificial

<220>

<223> 用于特异沉默GPR174的shRNA的核苷酸序列

<400> 4

tgctgttgac agtgagcgcc ctggtgaagt ccaatgaaat tagtgaagcc acagatgtaa 60

tttcattgga cttcaccagg atgcctactg cctcgga 97

<210> 5

<211> 97

<212> DNA

<213> Artificial

<220>

<223> 用于特异沉默GPR174的shRNA的核苷酸序列

<400> 5

tgctgttgac agtgagcgct ctgattgtcc tatattgtac tagtgaagcc acagatgtag 60

tacaatatag gacaatcaga atgcctactg cctcgga 97

<210> 6

<211> 97

<212> DNA

<213> Artificial

<220>

<223> 用于特异沉默GPR174的shRNA的核苷酸序列

<400> 6

tgctgttgac agtgagcgac gagttgattg ggtttgtaac tagtgaagcc acagatgtag 60

ttacaaaccc aatcaactcg ctgcctactg cctcgga 97

<210> 7

<211> 97

<212> DNA

<213> Artificial

<220>

<223> 用于特异沉默GPR174的shRNA的核苷酸序列

<400> 7

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tagtatatga ctgggtcaag atgcctactg cctcgga 97

<210> 8

<211> 97

<212> DNA

<213> Artificial

<220>

<223> 用于特异沉默GPR174的shRNA的核苷酸序列

<400> 8

tgctgttgac agtgagcgaa catacactgt cattcttgtg tagtgaagcc acagatgtac 60

acaagaatga cagtgtatgt ctgcctactg cctcgga 97

<210> 9

<211> 97

<212> DNA

<213> Artificial

<220>

<223> 用于特异沉默GPR174的shRNA的核苷酸序列

<400> 9

tgctgttgac agtgagcgac cactgaggat cttctactac tagtgaagcc acagatgtag 60

tagtagaaga tcctcagtgg ctgcctactg cctcgga 97

<210> 10

<211> 97

<212> DNA

<213> Artificial

<220>

<223> 用于特异沉默GPR174的shRNA的核苷酸序列

<400> 10

tgctgttgac agtgagcgac tgaagtatgt caacatgtat tagtgaagcc acagatgtaa 60

tacatgttga catacttcag gtgcctactg cctcgga 97

<210> 11

<211> 97

<212> DNA

<213> Artificial

<220>

<223> 用于特异沉默GPR174的shRNA的核苷酸序列

<400> 11

tgctgttgac agtgagcgaa ctgaggatct tctactactt tagtgaagcc acagatgtaa 60

agtagtagaa gatcctcagt gtgcctactg cctcgga 97

<210> 12

<211> 97

<212> DNA

<213> Artificial

<220>

<223> 用于特异沉默GPR174的shRNA的核苷酸序列

<400> 12

tgctgttgac agtgagcgca cttagccatt gctgacttac tagtgaagcc acagatgtag 60

taagtcagca atggctaagt ttgcctactg cctcgga 97

<210> 13

<211> 97

<212> DNA

<213> Artificial

<220>

<223> 用于特异沉默GPR174的shRNA的核苷酸序列

<400> 13

tgctgttgac agtgagcgat ggcattgtgt cttgctagtc tagtgaagcc acagatgtag 60

actagcaaga cacaatgcca ctgcctactg cctcgga 97

Claims (12)

1.GPR174作为雄性B细胞标志物中的用途。

2.一种抑制活化B细胞向滤泡中心区域聚集的方法，所述向滤泡中心区域聚集发生在生发中心形成之前，其特征在于，包括：

使所述B细胞与选自下列的至少之一接触：

a)GPR174表达促进剂或激动剂；

b)CCL21和/或CCL19表达促进剂或激动剂；

任选地，所述GPR174表达促进剂为用于表达GPR174的质粒或病毒，任选地，所述质粒具有SEQ ID NO:1所示的核苷酸序列；

任选地，所述CCL21和/或CCL19表达促进剂为用于表达CCL21和/或CCL19的质粒或病毒；

任选地，所述用于表达CCL21和/或CCL19的质粒具有SEQ ID NO:2～3所示的核苷酸序列。

3.一种促进活化B细胞向滤泡中心区域聚集的方法，所述向滤泡中心区域聚集发生在生发中心形成之前，其特征在于，包括：

使所述B细胞与选自下列的至少之一接触：

a)GPR174抑制型抗体或者拮抗剂或者表达抑制剂；

b)CCL21和/或CCL19抑制型抗体或者拮抗剂或者表达抑制剂；

任选地，所述表达抑制剂为用于特异沉默GPR174、CCL21和/或CCL19的shRNA、反义核酸、核酶、显性负突变、CRISPR和锌指核酸酶；

任选地，所述表达抑制剂为用于特异沉默GPR174的shRNA，所述表达抑制剂具有SEQ IDNO:4～13所示的核苷酸序列。

4.试剂在制备试剂盒中的用途，所述试剂盒用于抑制活化B细胞向滤泡中心区域聚集，所述试剂为下列的至少之一：

a)GPR174表达促进剂或激动剂；

b)CCL21和/或CCL19表达促进剂或激动剂。

5.试剂在制备试剂盒中的用途，所述试剂盒用于促进活化B细胞向滤泡中心区域聚集，所述试剂为下列的至少之一：

a)GPR174抑制型抗体或者拮抗剂或者表达抑制剂；

b)CCL21和/或CCL19抑制型抗体或者拮抗剂或者表达抑制剂。

6.试剂在制备药物中的用途，所述药物用于提高机体体液免疫应答或治疗或预防免疫缺陷症，所述试剂包括：GPR174和/或CCL21和/或CCL19抑制型抗体或者拮抗剂或者表达抑制剂或者低表达细胞，任选地，所述低表达细胞为GPR174低表达B细胞。

7.试剂在制备药物中的用途，所述药物用于降低机体体液免疫应答或治疗或预防自身免疫疾病，所述试剂包括：GPR174和/或CCL21和/或CCL19激动剂或表达促进剂或过表达细胞，任选地，所述过表达细胞为GPR174过表达B细胞。

8.根据权利要求6或7所述的用途，其特征在于，所述机体为雄性。

9.根据权利要求5或6所述的用途，其特征在于，所述表达抑制剂为用于特异沉默GPR174、CCL21和/或CCL19的shRNA、反义核酸、核酶、显性负突变、CRISPR和锌指核酸酶；

任选地，所述表达抑制剂为用于特异沉默GPR174的shRNA，所述表达抑制剂具有SEQ IDNO:4～13所示的核苷酸序列。

10.根据权利要求4或7所述的用途，其特征在于，所述GPR174表达促进剂为用于表达GPR174的质粒或病毒，任选地，所述质粒具有SEQ ID NO:1所示的核苷酸序列；

任选地，所述CCL21和/或CCL19表达促进剂为用于表达CCL21和/或CCL19的质粒或病毒，任选地，所述质粒具有SEQ ID NO:2或3所示的核苷酸序列。

11.一种筛选药物的方法，所述药物用于提高机体体液免疫应答或治疗或预防免疫缺陷症，其特征在于，包括：

将B细胞与待筛选药物进行接触，以及

比较接触前后，所述B细胞中GPR174的表达或功能，以便确认所述待筛选药物是否为目标药物；

其中，接触后比接触前，所述B细胞中GPR174的表达水平降低或GPR174功能受到抑制是待筛选药物为目标药物的指示。

12.一种筛选药物的方法，所述药物用于降低机体的体液免疫应答或治疗或预防自身免疫疾病，其特征在于，包括：

将B细胞与待筛选药物进行接触，以及

比较接触前后，所述B细胞中GPR174的表达或功能，以便确认所述待筛选药物是否为目标药物；

其中，接触后比接触前，所述B细胞中GPR174的表达水平升高或GPR174功能增强是待筛选药物为目标药物的指示。

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