CN110777206A - Loc90024 rna的应用及诊断、预后评估和治疗肿瘤的产品 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了一种LOC90024RNA的应用及诊断、预后评估和治疗肿瘤的产品,涉及生物技术领域。临床研究证实,LOC90024RNA在肿瘤组织中高表达,与肿瘤患者预后差呈正相关。癌组织中LOC90024RNA高水平的患者具有更短的生存期和更高的死亡率。抑制LOC90024的表达,抑制了肿瘤细胞的增殖、克隆形成和迁移侵袭。据此,LOC90024RNA作为生物标志物有效的提高了临床中使用试剂盒进行肿瘤预后判断的阳性率。例如研发新的检测LOC90024RNA的试剂盒以诊断肿瘤,或以LOC90024RNA为靶点的药物以治疗肿瘤等等,对于肿瘤的诊断和治疗具有重要的影响。
Description
技术领域
本发明涉及生物技术领域,尤其是涉及一种LOC90024 RNA的应用及诊断、预后评估和治疗肿瘤的产品。
背景技术
癌症是威胁人类健康与生命的主要疾病,其在发病率和死亡率方面已经成为我国第二大疾病。在我国癌症的发病率逐年提升并且有年轻化的趋势。我国每年新发癌症病例达429万,占全球新发病例的20%,死亡281 万例。实体恶性肿瘤发病隐匿、且多无明显特异性症状,一旦出现特异性症状常已属于晚期,约80%以上实体恶性肿瘤患者在首次诊疗中即为中晚期,失去最佳治疗机会。
实体恶性肿瘤的发生是一个多因子、多步骤的复杂过程,目前其病因尚未完全了解。尽管对恶性肿瘤发病机制的不断认识和医疗技术手段不断提升,晚期的恶性肿瘤患者预后依然很差,缺乏具体的预后标志物是很重要的原因。因此,迫切需要更有效,更敏感的预后标志物以促进诊断,预测恶性肿瘤患者的预后并有利于合理的制定治疗方案,从而提高患者的生存率。
长链非编码RNA(lnc RNA)是一类转录本长度超过200核苷酸的RNA。 lnc RNA在蛋白活性调控,转录翻译,RNA可变剪切,染色体修饰等过程中都发挥重要的调节作用。异常表达的lnc RNA可直接或间接调控靶标基因,参与肿瘤侵袭转移,发生发展。随着人们不断对lnc RNA研究,lnc RNA 有望成为新型肿瘤标志物和抗癌药物干预靶标,在肿瘤诊断,治疗以及预后方面具有良好的临床应用前景。
有鉴于此,特提出本发明。
发明内容
本发明的第一个目的在于提供LOC90024 RNA在制备用于肿瘤诊断和 /或预后评估的产品中的应用,以至少缓解了现有技术中存在的技术问题之一。
本发明的第二个目的在于提供一种诊断肿瘤的试剂,本发明的第三个目的在于提供一种诊断肿瘤的试剂盒,以实现肿瘤的有效诊断。
本发明的第四个目的在于提供一种治疗肿瘤的药物,以实现肿瘤的靶向治疗。
本发明提供了LOC90024 RNA在制备用于肿瘤诊断和/或预后评估的产品中的应用。
进一步地,所述肿瘤为实体瘤;
优选地,所述实体瘤包括胰腺癌、膀胱癌、结肠直肠癌、乳腺癌、前列腺癌、肾癌、肝细胞癌、肺癌、卵巢癌、宫颈癌、胃癌、食管癌、头颈部癌、黑素瘤、神经内分泌癌、CNS癌、脑肿瘤、骨癌或软组织肉瘤中的一种或多种。
进一步地,所述产品包括试剂、试剂盒或药物。
本发明还提供了一种用于肿瘤诊断和/或预后评估的试剂,所述试剂包括用于检测LOC90024 RNA的标记物。
进一步地,所述标记物包括结合LOC90024 RNA的引物;
优选地,所述引物包括LOC90024 RNA的Q-PCR引物或LOC90024 RNA的RT-PCR引物。
进一步地,所述LOC90024 RNA的Q-PCR引物的上游引物如SEQ ID NO.1所示,LOC90024 RNA的Q-PCR引物的下游引物如SEQ ID NO.2所示;
优选地,所述LOC90024 RNA的RT-PCR引物的上游引物如SEQ ID NO.3所示,LOC90024 RNA的RT-PCR引物的下游引物如SEQ ID NO.4所示。
本发明还提供了一种用于肿瘤诊断和/或预后评估的试剂盒,所述试剂盒包括上述的试剂。
进一步地,所述试剂盒还包括反转录试剂、内参引物、用于指示DNA 合成量的荧光物质、反应缓冲液、dNTPs、DNA聚合酶或水中的一种或多种;
优选地,所述反应缓冲液为Q-PCR反应缓冲液或RT-PCR反应缓冲液;
优选地,所述内参引物包括GAPDH的引物;
优选地,当所述反应缓冲液为Q-PCR反应缓冲液时,所述GAPDH的上游引物如SEQID NO.5所示,GAPDH的下游引物如SEQ ID NO.6所示;
优选地,当所述反应缓冲液为RT-PCR反应缓冲液时,所述GAPDH的上游引物如SEQID NO.7所示,GAPDH的下游引物如SEQ ID NO.8所示。
另外,本发明还提供了一种用于治疗肿瘤的药物,所述药物包括 LOC90024 RNA的抑制剂。
进一步地,所述抑制剂包括LOC90024 RNA的siRNA;
优选地,所述siRNA具有如SEQ ID NO.9和SEQ ID NO.10、或SEQ ID NO.11和SEQID NO.12所示的核苷酸序列。
与现有技术相比,本发明至少具有如下有益效果:
本发明提供的与肿瘤相关的RNA LOC90024,其可以用于制备用于肿瘤诊断和/或预后评估的产品。在本发明之前,还没有出现涉及本发明 LOC90024 RNA用于肿瘤预后评估及诊断的公开报道。临床研究证实,LOC90024 RNA在肿瘤组织中高表达,与肿瘤患者预后差呈正相关。癌组织中LOC90024 RNA高水平的患者具有更短的生存期和更高的死亡率。据此,LOC90024 RNA作为生物标志物有效的提高了临床中使用试剂盒进行肿瘤预后判断的阳性率。抑制LOC90024的表达,抑制了肿瘤细胞的增殖、克隆形成和迁移侵袭。针对该LOC90024RNA可以开发出不同的产品,例如研发新的检测LOC90024 RNA的试剂盒以诊断肿瘤,或以LOC90024 RNA为靶点的药物以治疗肿瘤等等,对于肿瘤的诊断和治疗具有重要的影响。
附图说明
为了更清楚地说明本发明具体实施方式或现有技术中的技术方案,下面将对具体实施方式或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍,显而易见地,下面描述中的附图是本发明的一些实施方式,对于本领域普通技术人员来讲,在不付出创造性劳动的前提下,还可以根据这些附图获得其他的附图。
图1所示为本发明实施例1中RT-PCR检测胃癌及肝癌组织中 LOC90024表达RT-PCR结果对比图;
图2为本发明实施例2中Q-PCR检测胃癌及肝癌组织中LOC90024表达Q-PCR结果对比图;
图3为本发明实施例3中沉默LOC90024的结肠癌细胞株SW-620表达 LOC90024的RT-PCR结果对比图;
图4为本发明实施例3中沉默LOC90024的结肠癌细胞株SW-620表达 LOC90024的Q-PCR结果对比图;
图5为本发明实施例4中沉默结肠癌细胞株HCT-116中LOC90024表达的细胞增殖结果对比图;
图6为本发明实施例4中沉默结肠癌细胞株HCT-116中LOC90024表达的细胞克隆形成结果对比图;
图7为本发明实施例4中沉默结肠癌细胞株HCT-116中LOC90024表达的细胞迁移能力和侵袭能力结果对比图。
具体实施方式
下面将结合实施例对本发明的技术方案进行清楚、完整地描述,显然,所描述的实施例是本发明一部分实施例,而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例,本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例,都属于本发明保护的范围。
除非本文另有定义,连同本发明使用的科学和技术术语应具有本领域普通技术人员通常理解的含义。术语的含义和范围应当清晰,然而,在任何潜在不明确性的情况下,本文提供的定义优先于任何字典或外来定义。在本申请中,除非另有说明,术语“包括”及其他形式的使用是非限制性的。
一般地,连同本文描述的细胞和组织培养、分子生物学、免疫学、微生物学、遗传学以及蛋白和核酸化学和杂交使用的命名法和其技术是本领域众所周知和通常使用的那些。除非另有说明,本发明的方法和技术一般根据本领域众所周知,且如各种一般和更具体的参考文献中所述的常规方法来进行,所述参考文献在本说明书自始至终引用和讨论。酶促反应和纯化技术根据制造商的说明书、如本领域通常实现的或如本文所述来进行。连同本文描述的分析化学、合成有机化学以及医学和药物化学使用的命名法、以及其实验室程序和技术是本领域众所周知和通常使用的那些。
根据本发明的一个方面,提供了LOC90024 RNA在制备用于肿瘤诊断和/或预后评估的产品中的应用。
长链非编码RNA(Long Non-Protein Coding RNA,lncRNA)起初被认为是基因组转录的“噪音”,不具有生物学功能。然而,实际上lncRNA以 RNA的形式在多种层面上(表观遗传调控、转录调控以及转录后调控等) 调控了基因的表达水平,即便如此,现有技术仍普遍认为绝大多数lncRNA 不会编码任何蛋白质。
长链基因间非编码RNA(Long Intergenic Non-Protein Coding RNA, lincRNA)是lncRNA中的一种,LOC90024(Gene ID:90024)是最近新发现的一种lincRNA,其功能还未探究清楚。本发明发现LOC90024 RNA与肿瘤特别是实体瘤相关,且LOC90024 RNA能够表达蛋白多肽。
基于此,本发明提供一种用于肿瘤预后评估判断的新标记物: LOC90024 RNA。经过临床研究证实,其在肿瘤组织中高表达与肿瘤患者预后差呈明显正相关。癌组织中LOC90024 RNA高水平的患者具有更短的生存期和更高的死亡率。抑制LOC90024的表达,抑制了肿瘤细胞的增殖、克隆形成和迁移侵袭。据此,LOC90024 RNA作为生物标志物有效的提高了临床中使用试剂盒进行肿瘤预后判断的阳性率。
需要进行说明的是,增加的LOC90024 RNA的表达量是肿瘤的指征和 /或肿瘤预后不良的指征。
在一些优选的实施方式中,所述肿瘤为实体瘤;
优选地,所述实体瘤包括胰腺癌、膀胱癌、结肠直肠癌、乳腺癌、前列腺癌、肾癌、肝细胞癌、肺癌、卵巢癌、宫颈癌、胃癌、食管癌、头颈部癌、黑素瘤、神经内分泌癌、CNS癌、脑肿瘤、骨癌或软组织肉瘤中的一种或多种。
在一些实施方式中,所述实体瘤选自晚期或转移性恶性实体瘤。
术语“晚期或转移性恶性实体瘤”是指组织学或细胞学上所证实诊断的晚期、不可切除和/或转移性复发或难治性恶性实体瘤,其对标准疗法无效或不存在经证明对其有效的疗法。根据本发明,恶性实体瘤包括但不限于癌、肉瘤、黑素瘤或淋巴瘤等。
本发明中所述的产品,优选包括试剂、试剂盒或药物。
根据本发明的第二个方面,提供了一种用于肿瘤诊断和/或预后评估的试剂,所述试剂包括用于检测LOC90024 RNA的标记物。
RNA的检测剂可选用本领域技术人员所公知的试剂,例如能够与该 RNA杂交,且标记有荧光标记的核酸等。
在一些优选的实施方式中,所述标记物包括结合LOC90024 RNA的引物。
优选地,所述引物包括LOC90024 RNA的Q-PCR引物或LOC90024 RNA的RT-PCR引物。
Q-PCR引物和RT-PCR引物均可方便地对LOC90024RNA进行检测,以衡量LOC90024RNA的转录水平。
在一些优选的实施方式中,所述LOC90024 RNA的Q-PCR引物的上游引物如SEQ IDNO.1所示,LOC90024 RNA的Q-PCR引物的下游引物如 SEQ ID NO.2所示;
优选地,所述LOC90024 RNA的RT-PCR引物的上游引物如SEQ ID NO.3所示,LOC90024 RNA的RT-PCR引物的下游引物如SEQ ID NO.4所示。
当选用上述特定序列的Q-PCR引物和RT-PCR引物对LOC90024 RNA 进行检测时,可以对肿瘤细胞中的LOC90024 RNA的表达水平进行定量检测,且特异性更强、灵敏度更高,得到的检测结果更加准确。
根据本发明的第三个方面,提供了一种用于肿瘤诊断和/或预后评估的试剂盒,所述试剂盒包括上述的试剂。
所述试剂盒可以对LOC90024 RNA反转录的cDNA进行扩增。
在一些优选的实施方式中,所述试剂盒还包括反转录试剂、内参引物、用于指示DNA合成量的荧光物质、反应缓冲液、dNTPs、DNA聚合酶或水中的一种或多种;
需要进行说明的是,其中,可根据检测技术的不同选择相应的反应缓冲液,例如,当使用Q-PCR手段进行检测时,该试剂盒中可包含Q-PCR 反应缓冲液;当使用RT-PCR手段进行检测时,该试剂盒中可包含RT-PCR 反应缓冲液。
优选地,所述内参引物包括GAPDH的引物。通过设置内参对照,能够更准确地判断检测结果的有效性。
优选地,当所述反应缓冲液为Q-PCR反应缓冲液时,所述GAPDH的上游引物如SEQID NO.5所示,GAPDH的下游引物如SEQ ID NO.6所示;
优选地,当所述反应缓冲液为RT-PCR反应缓冲液时,所述GAPDH的上游引物如SEQID NO.7所示,GAPDH的下游引物如SEQ ID NO.8所示。
可选地,所述DNA聚合酶选自Taq、Bst、Vent、Phi29、Pfu、Tru、Tth、 Tl1、Tac、Tne、Tma、Tih、Tf1、Pwo、Kod、Sac、Sso、Poc、Pab、Mth、 Pho、ES4 DNA聚合酶、Klenow片段。
可选地,本发明提供的试剂或试剂盒用于检测受试者肿瘤组织或癌旁组织的细胞裂解物。
本文使用的“组织裂解物”、“细胞裂解物”、“裂解物”、“裂解的样品”、“组织提取物”或“细胞提取物”表示包含裂解的组织或细胞的样品和/或生物样品材料,即其中组织或细胞的结构完整性已经被破坏。为了释放细胞或组织样品的内容物,通常用酶和/或化学试剂处理所述材料,以溶解、降解或破坏这样的组织或细胞的细胞壁和细胞膜。熟练的技术员非常熟悉用于得到裂解物的适当方法。该过程被术语“裂解”包括。
在一些具体的实施方式中,本发明还涉及一种评估肿瘤、例如评估实体瘤的方法,所述方法包括:
(i)使用上述的特异性地检测LOC90024 RNA的试剂或试剂盒测量样品中LOC90024RNA的表达量;
(ii)任选地,测量样品中的一种或更多种其它的肿瘤标志物的浓度;
(iii)使用步骤(i)的测量结果和任选的步骤(ii)的测量结果来评估肿瘤,其中增加的LOC90024 RNA的表达量是肿瘤的指征。
根据本发明的第四个方面,提供了一种用于治疗肿瘤的药物,所述药物包括LOC90024 RNA的抑制剂。通过抑制LOC90024 RNA的表达,能够对肿瘤细胞产生有效的抑制作用。
在一些优选的实施方式中,所述抑制剂包括LOC90024 RNA的siRNA;
优选地,所述siRNA具有如SEQ ID NO.9和SEQ ID NO.10或SEQ ID NO.11和SEQ IDNO.12所示的核苷酸序列。
下面通过具体的实施例进一步说明本发明,但是,应当理解为,这些实施例仅仅是用于更详细地说明之用,而不应理解为用于以任何形式限制本发明。
实施例1 RT-PCR反应检测LOC90024基因在胃癌及肝癌组织中的表达
具体实验方案如下:
1.RNA提取
1)组织处理:取10mg左右组织加入1ml Trizol,用匀浆机匀浆;离心15min,12000g,取上清。
2)向上清中加入200μl氯仿,上下用力颠倒混匀3sec,静置3min。
3)4℃,12000g离心15min,此时可见裂解液分三层:上层为水相含有RNA;中层为DNA、脂类等;下层为细胞残渣、蛋白、多糖等。
4)取上清到新的EP管内;加入等体积的异丙醇,混匀,静置10min 后,4℃,12000g离心10min。
5)小心去掉上清,注意不要丢失RNA沉淀,加入1ml 75%乙醇,上下颠倒,使沉淀块重悬起。
6)4℃,12000g离心10min,小心去掉上清,尽量吸干管壁的液体,注意不要丢失RNA沉淀,若沉淀松动可再次离心。晾干约15min,至管壁无液体。
7)加入适量体积(20-30μl)的DEPC水溶解RNA,58℃水浴10分钟。
8)取出2μl定量,测量buffer:10mM TrisCl(pH7.8),根据定量结果进行逆转录。(1A260=40μg/ml,A260/A280=1.8-2.1)。
2.cDNA逆转录
第一步:冰上制备基因组DNA消除反应溶液。反应体系为:每个反应管中加入2μl5X gDNA Eraser Buffer,1μl gDNA Eraser,1μg total RNA,加水至10μl。反应条件:42℃2min,store at 4℃。得到基因组DNA消除反应溶液。
第二步:逆转录反应溶液。反应体系为:4μl 5X PrimeScript Buffer 2,1 μlPrimeScript RT Enzyme Mix I,1μl RT Primer Mix,4μl RNase Free dH2O, 得到共计10μl Master mix。
第三步:将第一步和第二步所得液体混合,共计20μl。反应条件为: 37℃15min,85℃5sec。得到cDNA溶液(4度保存)。
3.引物(扩增cDNA):使用的引物如下所列:
4.RT-PCR:以GAPDH作为内参。RT-PCR的反应体系:每个反应管中分别加入2μl 10×Buffer,分别加入2μl dNTP,1μl正向引物,1μl反向引物,1μl cDNA模板,0.2μl Taq酶,加水至20μl。PCR反应条件如下: 95℃,5分钟预变性;95℃,30秒变性;59℃,30秒退火72℃,20秒延伸; 28个循环,琼脂糖凝胶电泳检测PCR扩增产物,结果见图1。
实施例2 Q-PCR反应检测LOC90024基因在胃癌及肝癌组织中的表达
Q-PCR:以GAPDH作为内参。Q-PCR的反应体系:每个反应管中分别加入10μlPremix Ex TaqTMII Buffer(2×),0.8μl正向引物,0.8 μl反向引物,2μl实施例1中制得的cDNA模板,0.4μL ROX Reference Dye (50×),0.2μl Taq酶,加水至20μl。Q-PCR反应条件如下:
⑤go to②③④for 40个循环
使用的引物如下所列:
实时荧光定量PCR结果在Bio-Rad CFX Manager系统软件分析,根据仪器给出的荧光信号增长曲线及其反应临界循环数(cycle threshold,Ct) 来观察扩增结果。采用2-ΔΔCt值公式法比较样品间荧光定量结果,首先计算出处理组的目的基因ΔCt值与对照组的相应基因ΔCt值之差,然后用 2-ΔΔCt来表示干扰组的目的基因相对于对照组的基因的表达水平。平行实验重复3次。结果见图2。
实施例3 RT-PCR和Q-PCR反应检测siRNA沉默LOC90024基因的效果
(1)将细胞消化成单细胞悬液,计数,以5×105个/孔的浓度接种至6 孔板中,37℃、5%CO2培养箱中培养过夜。
(2)用RNase-free的去离子水溶解siLOC90024终浓度为20μM,取 5μl溶于500μlopti-MEM中,混匀、静置。
其中,相关siRNA序列如下:
(3)将3μl iMAX转染试剂溶于500μl opti-MEM中,轻轻混匀,室温静置5min。
(4)将(2)跟(3)的两管混匀,室温静置20min,滴加至6孔板孔中,混匀,37℃、5%CO2培养箱中培养。
(5)6小时后,吸去转染培养基,加入2ml完全培养基,继续培养。
(6)48小时后,提取细胞RNA,并逆转录成cDNA,采用RT-PCR 检测LOC90024的表达情况。
结果见图3,转染使细胞沉默LOC90024有效。
Q-PCR反应检测siRNA沉默LOC90024基因的效果,反应条件同实施例2,结果如图4所示。
实施例4结肠癌细胞株HCT-116细胞功能试验检测siRNA沉默 LOC90024基因表达抑制肿瘤细胞增殖、克隆形成和迁移侵袭的效果
(1)将细胞消化成单细胞悬液,计数,以5×105个/孔的浓度接种至6 孔板中,37℃、5%CO2培养箱中培养过夜。
(2)用RNase-free的去离子水溶解siLOC90024终浓度为20μM,取 5μl溶于500μlopti-MEM中,混匀、静置。其中,相关siRNA序列同实施例3。
(3)将3μl iMAX转染试剂溶于500μl opti-MEM中,轻轻混匀,室温静置5min。
(4)将(2)跟(3)的两管混匀,室温静置20min,滴加至6孔板孔中,混匀,37℃、5%CO2培养箱中培养。
(5)6小时后,吸去转染培养基,加入2ml完全培养基,继续培养。
(6)48小时后,将细胞消化成单细胞悬液,计数。
(7)将上述细胞用于进行细胞增殖、克隆形成、侵袭迁移试验。
细胞增殖试验:将细胞以1×104个/孔的浓度接种至96孔板,每个处理组共15个孔。37℃、5%CO2培养箱中培养。分别培养24、48、72、96、 120小时后将每组3个孔的细胞消化成单细胞悬液并细胞计数。
结果见图5,沉默LOC90024能够抑制HCT-116细胞的增殖。
克隆形成试验:将细胞以300个/孔的浓度接种至6孔板,每个处理组共3个孔。37℃、5%CO2培养箱中培养14天后吸走上清,用无水甲醇固定15分钟,再用1%结晶紫染色15分钟,清水洗去染料。扫描6孔板后计数每孔克隆个数,同时将各组克隆个数作为分子,以对应NC组克隆个数作为分母,得到以NC组克隆个数为基数“1”的各处理组结果。
结果见图6,沉默LOC90024能够抑制HCT-116细胞的克隆形成。
侵袭迁移试验:将细胞用无血清培养基重悬,并以2×105个/孔的浓度接种至小室(侵袭实验组需在小室底部提前2小时预铺40μl基质胶,该基质胶为基质胶原液和无血清培养基以1:4比列配置),小室与24孔板之间加入600μl有血清培养基。37℃、5%CO2培养箱中培养。分别在培养30小时后取出迁移组小室,培养48小时后取出侵袭组小室,用无水甲醇固定15 分钟,再用1%结晶紫染色15分钟,清水洗去小室上室染料,显微镜下每个小室分别选取左上、右上、中间、左下、右下视野拍照,计数视野内穿过小室的细胞个数。
结果见图7,沉默LOC90024能够抑制HCT-116细胞的侵袭迁移。
最后应说明的是:以上各实施例仅用以说明本发明的技术方案,而非对其限制;尽管参照前述各实施例对本发明进行了详细的说明,本领域的普通技术人员应当理解:其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改,或者对其中部分或者全部技术特征进行等同替换;而这些修改或者替换,并不使相应技术方案的本质脱离本发明各实施例技术方案的范围。
SEQUENCE LISTING
<110> 广州医科大学附属第三医院(广州重症孕产妇救治中心、广州柔济医院)
<120> LOC90024 RNA的应用及诊断、预后评估和治疗肿瘤的产品
<160> 14
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 1
gcggactagc ggaggaggat 20
<210> 2
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 2
gggtgtagaa tgactggaag gagc 24
<210> 3
<211> 28
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 3
cggaattcgt gccttgtcgg ctgggtta 28
<210> 4
<211> 32
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 4
cggggtaccg tccttctggt agacggagac cc 32
<210> 5
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 5
cgaccacttt gtcaagctca 20
<210> 6
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 6
aggggtctac atccgaactg 20
<210> 7
<211> 19
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 7
gaaggtgaag gtcggagtc 19
<210> 8
<211> 19
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 8
aagatggtga tgggatttc 19
<210> 9
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 9
gaggagacgg gagaaacaut t 21
<210> 10
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 10
auguuucucc cgucuccuct t 21
<210> 11
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 11
ggucggaagg aaaguagagt t 21
<210> 12
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 12
cucuacuuuc cuuccgacct t 21
<210> 13
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 13
gcacaagcug gaguacaacu acatt 25
<210> 14
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 14
uguaguugua cuccagcuug ugctt 25
Claims (10)
1.LOC90024 RNA在制备用于肿瘤诊断和/或预后评估的产品中的应用。
2.根据权利要求1所述的应用,其特征在于,所述肿瘤为实体瘤;
优选地,所述实体瘤包括胰腺癌、膀胱癌、结肠直肠癌、乳腺癌、前列腺癌、肾癌、肝细胞癌、肺癌、卵巢癌、宫颈癌、胃癌、食管癌、头颈部癌、黑素瘤、神经内分泌癌、CNS癌、脑肿瘤、骨癌或软组织肉瘤中的一种或多种。
3.根据权利要求1或2所述的应用,其特征在于,所述产品包括试剂、试剂盒或药物。
4.一种用于肿瘤诊断和/或预后评估的试剂,其特征在于,所述试剂包括用于检测LOC90024 RNA的标记物。
5.根据权利要求4所述的试剂,其特征在于,所述标记物包括结合LOC90024 RNA的引物;
优选地,所述引物包括LOC90024 RNA的Q-PCR引物或LOC90024RNA的RT-PCR引物。
6.根据权利要求5所述的试剂,其特征在于,所述LOC90024 RNA的Q-PCR引物的上游引物如SEQ ID NO.1所示,LOC90024 RNA的Q-PCR引物的下游引物如SEQ ID NO.2所示;
优选地,所述LOC90024 RNA的RT-PCR引物的上游引物如SEQ ID NO.3所示,LOC90024RNA的RT-PCR引物的下游引物如SEQ ID NO.4所示。
7.一种用于肿瘤诊断和/或预后评估的试剂盒,其特征在于,所述试剂盒包括权利要求4-6任一项所述的试剂。
8.根据权利要求7所述的试剂盒,其特征在于,所述试剂盒还包括反转录试剂、内参引物、用于指示DNA合成量的荧光物质、反应缓冲液、dNTPs、DNA聚合酶或水中的一种或多种;
优选地,所述反应缓冲液为Q-PCR反应缓冲液或RT-PCR反应缓冲液;
优选地,所述内参引物包括GAPDH的引物;
优选地,当所述反应缓冲液为Q-PCR反应缓冲液时,所述GAPDH的上游引物如SEQ IDNO.5所示,GAPDH的下游引物如SEQ ID NO.6所示;
优选地,当所述反应缓冲液为RT-PCR反应缓冲液时,所述GAPDH的上游引物如SEQ IDNO.7所示,GAPDH的下游引物如SEQ ID NO.8所示。
9.一种用于治疗肿瘤的药物,其特征在于,所述药物包括LOC90024RNA的抑制剂。
10.根据权利要求9所述的药物,其特征在于,所述抑制剂包括LOC90024 RNA的siRNA;
优选地,所述siRNA具有如SEQ ID NO.9和SEQ ID NO.10、或SEQ ID NO.11和SEQ IDNO.12所示的核苷酸序列。
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