CN110777108A - 一种二种细胞混合培养工艺流程 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种二种细胞混合培养工艺流程,包括以下步骤:步骤一,基础基质的制备:将2份氯化钠、25份葡萄糖、5份甘油依次加入到搅拌罐中进行搅拌,随后再加入4份发酵鲜柚皮,然后继续加入10份果糖,随后以20r/min的转速搅拌20min,搅拌结束,得到基础基质。本发明通过在基础基质上增加加强基质,基础基质里添加的发酵鲜柚皮可满足大豆胚乳细胞和大米胚乳细胞共同的营养需要,可提高细胞的增长效果,而加强基质通过咖啡渣先送入到松针粉的去离子水中处理,咖啡渣本身具有很强的吸附效果,能够增加对松针粉的吸附,而加入的加强液经过多种物质调配。

Description

一种二种细胞混合培养工艺流程
技术领域
本发明涉及细胞培养技术领域,具体涉及一种二种细胞混合培养工艺流程。
背景技术
大米是稻谷经清理、砻谷、碾米、成品整理等工序后制成的成品。稻谷的胚与糊粉层中含有近64%的稻米营养和90%以上的人体所须的营养元素,是南方人民的主要食品;而大豆是中国重要粮食作物之一,已有五千年栽培历史,古称菽,中国东北为主产区,是一种其种子含有丰富植物蛋白质的作物。大豆最常用来做各种豆制品、榨取豆油、酿造酱油和提取蛋白质。豆渣或磨成粗粉的大豆也常用于禽畜饲料。
现有技术中很少将大豆胚乳细胞和大米胚乳细胞混合培养,二者混合培养时容易造成营养不均衡,影响培养效率,因而仍需进一步改善处理。
发明内容
本发明的目的在于提供一种二种细胞混合培养工艺流程,以解决上述背景技术中提出的问题。
为实现上述目的,本发明提供如下技术方案:
一种二种细胞混合培养工艺流程,包括以下步骤:
步骤一,基础基质的制备:将2-5份氯化钠、25-35份葡萄糖、5-10份甘油依次加入到搅拌罐中进行搅拌,随后再加入4-10份发酵鲜柚皮,然后继续加入10-20份果糖,随后以20-100r/min的转速搅拌20-30min,搅拌结束,得到基础基质;
步骤二,加强基质的制备:将咖啡渣先送入到松针粉与去离子水的分散液中,超声分散20-30min,超声结束,过滤,然后将咖啡渣与加强液混合,反复冷冻解冻处理2-3次,随后再超声振荡处理,得到加强基质;
步骤三,复合基质的制备:将步骤一中的基础基质、步骤二中的加强基质先进行混合处理,混合转速为200-500r/min,混合时间为20-30min,混合中采用高压脉冲电场处理;
步骤四,二种细胞的混合培养:将大豆胚乳细胞和大米胚乳细胞接种到步骤三的复合基质上,然后在30-40℃下培养30-50h,培养结束,即可。
优选地,所述发酵鲜柚皮的具体发酵步骤为:首先在鲜柚皮与纤维素酶、果胶酶按照重量比7:2:1混合,然后将鲜柚皮先酶解处理,然后再进行发酵,发酵前接种蜡状芽孢杆菌菌液,发酵温度为35-45℃,发酵1-2h,得到发酵鲜柚皮。
优选地,所述加强液包括以下重量份原料:壳聚糖10-20份、富马酸单甲酯2-8份、土豆汁3-6份、葡糖胺3-6份、栗子淀粉1-2份。
优选地,所述加强液包括以下重量份原料:壳聚糖15份、富马酸单甲酯5份、土豆汁4.5份、葡糖胺4.5份、栗子淀粉1.5份。
优选地,所述冷冻解冻处理的具体步骤为:先在-5℃下冷冻10-20min,然后再于20-30℃解冻,解冻1-3h。
优选地,所述冷冻解冻处理的具体步骤为:先在-5℃下冷冻15min,然后再于25℃解冻,解冻2h。
优选地,所述高压脉冲电场处理的电场频率为20-30Hz,脉宽15-25us,电池强度25-35v/m。
优选地,所述高压脉冲电场处理的电场频率为25Hz,脉宽20us,电池强度30v/m。
与现有技术相比,本发明具有如下的有益效果:
本发明通过在基础基质上增加加强基质,基础基质里添加的发酵鲜柚皮可满足大豆胚乳细胞和大米胚乳细胞共同的营养需要,可提高细胞的增长效果,而加强基质通过咖啡渣先送入到松针粉的去离子水中处理,咖啡渣本身具有很强的吸附效果,能够增加对松针粉的吸附,而加入的加强液经过多种物质调配,被咖啡渣吸附后可不断的释放,从而使大豆胚乳细胞和大米胚乳细胞能够不断的吸收到营养物质,满足生长需求,本发明中的高压脉冲电场处理可有效提高基质释放营养物质的能力,冷冻解冻处理可提高咖啡渣对加强液能力,并转化为释放能力,从而不断的加工营养物质释放。
具体实施方式
下面结合具体实施例,对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述,显然,所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例,而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例,本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例,都属于本发明保护的范围。
实施例1:
本实施例的一种二种细胞混合培养工艺流程,包括以下步骤:
步骤一,基础基质的制备:将2份氯化钠、25份葡萄糖、5份甘油依次加入到搅拌罐中进行搅拌,随后再加入4份发酵鲜柚皮,然后继续加入10份果糖,随后以20r/min的转速搅拌20min,搅拌结束,得到基础基质;
步骤二,加强基质的制备:将咖啡渣先送入到松针粉与去离子水的分散液中,超声分散20min,超声结束,过滤,然后将咖啡渣与加强液混合,反复冷冻解冻处理2次,随后再超声振荡处理,得到加强基质;
步骤三,复合基质的制备:将步骤一中的基础基质、步骤二中的加强基质先进行混合处理,混合转速为200r/min,混合时间为20min,混合中采用高压脉冲电场处理;
步骤四,二种细胞的混合培养:将大豆胚乳细胞和大米胚乳细胞接种到步骤三的复合基质上,然后在30℃下培养30h,培养结束,即可。
本实施例的发酵鲜柚皮的具体发酵步骤为:首先在鲜柚皮与纤维素酶、果胶酶按照重量比7:2:1混合,然后将鲜柚皮先酶解处理,然后再进行发酵,发酵前接种蜡状芽孢杆菌菌液,发酵温度为35℃,发酵1h,得到发酵鲜柚皮。
本实施例的加强液包括以下重量份原料:壳聚糖10份、富马酸单甲酯2份、土豆汁3份、葡糖胺3份、栗子淀粉1份。
本实施例的冷冻解冻处理的具体步骤为:先在-5℃下冷冻10min,然后再于20℃解冻,解冻1h。
本实施例的高压脉冲电场处理的电场频率为20Hz,脉宽15us,电池强度25v/m。
实施例2:
本实施例的一种二种细胞混合培养工艺流程,包括以下步骤:
步骤一,基础基质的制备:将5份氯化钠、35份葡萄糖、10份甘油依次加入到搅拌罐中进行搅拌,随后再加入10份发酵鲜柚皮,然后继续加入20份果糖,随后以100r/min的转速搅拌30min,搅拌结束,得到基础基质;
步骤二,加强基质的制备:将咖啡渣先送入到松针粉与去离子水的分散液中,超声分散30min,超声结束,过滤,然后将咖啡渣与加强液混合,反复冷冻解冻处理3次,随后再超声振荡处理,得到加强基质;
步骤三,复合基质的制备:将步骤一中的基础基质、步骤二中的加强基质先进行混合处理,混合转速为500r/min,混合时间为30min,混合中采用高压脉冲电场处理;
步骤四,二种细胞的混合培养:将大豆胚乳细胞和大米胚乳细胞接种到步骤三的复合基质上,然后在40℃下培养50h,培养结束,即可。
本实施例的发酵鲜柚皮的具体发酵步骤为:首先在鲜柚皮与纤维素酶、果胶酶按照重量比7:2:1混合,然后将鲜柚皮先酶解处理,然后再进行发酵,发酵前接种蜡状芽孢杆菌菌液,发酵温度为45℃,发酵2h,得到发酵鲜柚皮。
本实施例的加强液包括以下重量份原料:壳聚糖20份、富马酸单甲酯8份、土豆汁6份、葡糖胺6份、栗子淀粉2份。
本实施例的冷冻解冻处理的具体步骤为:先在-5℃下冷冻20min,然后再于30℃解冻,解冻3h。
本实施例的高压脉冲电场处理的电场频率为30Hz,脉宽25us,电池强度35v/m。
实施例3:
本实施例的一种二种细胞混合培养工艺流程,包括以下步骤:
步骤一,基础基质的制备:将3.5份氯化钠、30份葡萄糖、7.5份甘油依次加入到搅拌罐中进行搅拌,随后再加入7份发酵鲜柚皮,然后继续加入15份果糖,随后以60r/min的转速搅拌25min,搅拌结束,得到基础基质;
步骤二,加强基质的制备:将咖啡渣先送入到松针粉与去离子水的分散液中,超声分散25min,超声结束,过滤,然后将咖啡渣与加强液混合,反复冷冻解冻处理3次,随后再超声振荡处理,得到加强基质;
步骤三,复合基质的制备:将步骤一中的基础基质、步骤二中的加强基质先进行混合处理,混合转速为350r/min,混合时间为25min,混合中采用高压脉冲电场处理;
步骤四,二种细胞的混合培养:将大豆胚乳细胞和大米胚乳细胞接种到步骤三的复合基质上,然后在35℃下培养40h,培养结束,即可。
本实施例的发酵鲜柚皮的具体发酵步骤为:首先在鲜柚皮与纤维素酶、果胶酶按照重量比7:2:1混合,然后将鲜柚皮先酶解处理,然后再进行发酵,发酵前接种蜡状芽孢杆菌菌液,发酵温度为40℃,发酵1.5h,得到发酵鲜柚皮。
本实施例的加强液包括以下重量份原料:壳聚糖15份、富马酸单甲酯5份、土豆汁4.5份、葡糖胺4.5份、栗子淀粉1.5份。
本实施例的冷冻解冻处理的具体步骤为:先在-5℃下冷冻15min,然后再于25℃解冻,解冻2h。
本实施例的高压脉冲电场处理的电场频率为25Hz,脉宽20us,电池强度30v/m。
对于本领域技术人员而言,显然本发明不限于上述示范性实施例的细节,而且在不背离本发明的精神或基本特征的情况下,能够以其他的具体形式实现本发明。因此,无论从哪一点来看,均应将实施例看作是示范性的,而且是非限制性的,本发明的范围由所附权利要求而不是上述说明限定,因此旨在将落在权利要求的等同要件的含义和范围内的所有变化囊括在本发明内。
此外,应当理解,虽然本说明书按照实施方式加以描述,但并非每个实施方式仅包含一个独立的技术方案,说明书的这种叙述方式仅仅是为清楚起见,本领域技术人员应当将说明书作为一个整体,各实施例中的技术方案也可以经适当组合,形成本领域技术人员可以理解的其他实施方式。

Claims (8)

1.一种二种细胞混合培养工艺流程,其特征在于,包括以下步骤:
步骤一,基础基质的制备:将2-5份氯化钠、25-35份葡萄糖、5-10份甘油依次加入到搅拌罐中进行搅拌,随后再加入4-10份发酵鲜柚皮,然后继续加入10-20份果糖,随后以20-100r/min的转速搅拌20-30min,搅拌结束,得到基础基质;
步骤二,加强基质的制备:将咖啡渣先送入到松针粉与去离子水的分散液中,超声分散20-30min,超声结束,过滤,然后将咖啡渣与加强液混合,反复冷冻解冻处理2-3次,随后再超声振荡处理,得到加强基质;
步骤三,复合基质的制备:将步骤一中的基础基质、步骤二中的加强基质先进行混合处理,混合转速为200-500r/min,混合时间为20-30min,混合中采用高压脉冲电场处理;
步骤四,二种细胞的混合培养:将大豆胚乳细胞和大米胚乳细胞接种到步骤三的复合基质上,然后在30-40℃下培养30-50h,培养结束,即可。
2.根据权利要求1所述的一种二种细胞混合培养工艺流程,其特征在于,所述发酵鲜柚皮的具体发酵步骤为:首先在鲜柚皮与纤维素酶、果胶酶按照重量比7:2:1混合,然后将鲜柚皮先酶解处理,然后再进行发酵,发酵前接种蜡状芽孢杆菌菌液,发酵温度为35-45℃,发酵1-2h,得到发酵鲜柚皮。
3.根据权利要求1所述的一种二种细胞混合培养工艺流程,其特征在于,所述加强液包括以下重量份原料:壳聚糖10-20份、富马酸单甲酯2-8份、土豆汁3-6份、葡糖胺3-6份、栗子淀粉1-2份。
4.根据权利要求3所述的一种二种细胞混合培养工艺流程,其特征在于,所述加强液包括以下重量份原料:壳聚糖15份、富马酸单甲酯5份、土豆汁4.5份、葡糖胺4.5份、栗子淀粉1.5份。
5.根据权利要求1所述的一种二种细胞混合培养工艺流程,其特征在于,所述冷冻解冻处理的具体步骤为:先在-5℃下冷冻10-20min,然后再于20-30℃解冻,解冻1-3h。
6.根据权利要求5所述的一种二种细胞混合培养工艺流程,其特征在于,所述冷冻解冻处理的具体步骤为:先在-5℃下冷冻15min,然后再于25℃解冻,解冻2h。
7.根据权利要求1所述的一种二种细胞混合培养工艺流程,其特征在于,所述高压脉冲电场处理的电场频率为20-30Hz,脉宽15-25us,电池强度25-35v/m。
8.根据权利要求7所述的一种二种细胞混合培养工艺流程,其特征在于,所述高压脉冲电场处理的电场频率为25Hz,脉宽20us,电池强度30v/m。
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Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20060123518A1 (en) * 2004-12-01 2006-06-08 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Methods for culturing cereal endosperm
CN106613956A (zh) * 2016-11-03 2017-05-10 明光市大全甜叶菊专业合作社 一种抑菌的甜叶菊培养基
CN107646678A (zh) * 2017-09-28 2018-02-02 石阡县龙腾农牧农民专业合作社 一种石斛育苗方法
CN110169357A (zh) * 2019-06-18 2019-08-27 天津市农作物研究所(天津市水稻研究所) 一种水稻种子的生产方法

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20060123518A1 (en) * 2004-12-01 2006-06-08 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Methods for culturing cereal endosperm
CN106613956A (zh) * 2016-11-03 2017-05-10 明光市大全甜叶菊专业合作社 一种抑菌的甜叶菊培养基
CN107646678A (zh) * 2017-09-28 2018-02-02 石阡县龙腾农牧农民专业合作社 一种石斛育苗方法
CN110169357A (zh) * 2019-06-18 2019-08-27 天津市农作物研究所(天津市水稻研究所) 一种水稻种子的生产方法

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
PATRICIA N. MYERS等: "Endosperm Cell Division in Maize Kernels Cultured at Three Levels of Water Potential", 《PLANT PHYSIOLOGY》 *
朱登云,李浚明: "被子植物胚乳培养研究历史与现状", 《农业生物技术学报》 *

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