CN110772477A - 一种重组腺病毒缓释水凝胶、制备方法及其应用 - Google Patents

一种重组腺病毒缓释水凝胶、制备方法及其应用 Download PDF

Info

Publication number
CN110772477A
CN110772477A CN201911069405.XA CN201911069405A CN110772477A CN 110772477 A CN110772477 A CN 110772477A CN 201911069405 A CN201911069405 A CN 201911069405A CN 110772477 A CN110772477 A CN 110772477A
Authority
CN
China
Prior art keywords
adenovirus
sustained
release
preparation
hydrogel
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN201911069405.XA
Other languages
English (en)
Inventor
马丁
卢运萍
王世宣
周剑锋
李震中
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
TIANDAKANG GENE ENGINEERING Co Ltd SHENZHEN CITY
Original Assignee
TIANDAKANG GENE ENGINEERING Co Ltd SHENZHEN CITY
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by TIANDAKANG GENE ENGINEERING Co Ltd SHENZHEN CITY filed Critical TIANDAKANG GENE ENGINEERING Co Ltd SHENZHEN CITY
Priority to CN201911069405.XA priority Critical patent/CN110772477A/zh
Publication of CN110772477A publication Critical patent/CN110772477A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Images

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/06—Ointments; Bases therefor; Other semi-solid forms, e.g. creams, sticks, gels
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
    • A61K35/66—Microorganisms or materials therefrom
    • A61K35/76—Viruses; Subviral particles; Bacteriophages
    • A61K35/761—Adenovirus
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
    • A61K47/08—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite containing oxygen, e.g. ethers, acetals, ketones, quinones, aldehydes, peroxides
    • A61K47/12—Carboxylic acids; Salts or anhydrides thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/30—Macromolecular organic or inorganic compounds, e.g. inorganic polyphosphates
    • A61K47/42—Proteins; Polypeptides; Degradation products thereof; Derivatives thereof, e.g. albumin, gelatin or zein
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K48/00—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy
    • A61K48/0008—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy characterised by an aspect of the 'non-active' part of the composition delivered, e.g. wherein such 'non-active' part is not delivered simultaneously with the 'active' part of the composition
    • A61K48/0025—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy characterised by an aspect of the 'non-active' part of the composition delivered, e.g. wherein such 'non-active' part is not delivered simultaneously with the 'active' part of the composition wherein the non-active part clearly interacts with the delivered nucleic acid
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Inorganic Chemistry (AREA)
  • Oil, Petroleum & Natural Gas (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)

Abstract

本发明涉及一种重组腺病毒缓释水凝胶、制备方法及其应用。所述的腺病毒缓释水凝胶包含腺病毒抗肿瘤基因药物，以及缓释保护剂；所述的抗肿瘤基因药物为条件复制性腺病毒上转导了单纯疱疹病毒胸苷激酶的基因药物；所述缓释保护剂包含明胶、羟基苯基丙酸，还可选择性地含有辣根过氧化物酶和过氧化氢中的至少一种。所提供的腺病毒缓释水凝胶制剂更加稳定，解决了传统腺病毒液体制剂保存易失活的难题，延长了腺病毒制剂的保存时间，且在原位恶性黑色素瘤小鼠模型中，该腺病毒缓释制剂能有效延长腺病毒在肿瘤微环境中的作用时间，明显抑制肿瘤生长，且延长小鼠存活时间。

Description

一种重组腺病毒缓释水凝胶、制备方法及其应用
技术领域
本发明涉及腺病毒制剂领域，具体而言，涉及一种重组腺病毒缓释水凝胶、制备方法及其应用。
背景技术
癌症已经成为全世界人类最大致死原因，发病率与死亡率均呈持续上升趋势。全球癌症发病率四年中升高11％，到2012年约有1410万病例，因癌症死亡人数高达820万。并预测在未来20年内，世界癌症病例将增长75％，达到近2500。《2012中国肿瘤登记年报》显示，中国每年新发癌症病例约达312万，死亡病例超过200万，已成为我国居民首要死因。因此，肿瘤疾病严重影响了我国劳动力人口的健康，并在很大程度上制约了我国经济的可持续发展。
基因治疗(gene therapy)是指将外源基因导入靶细胞，以纠正或补偿因基因缺陷或基因表达异常引起的疾病。基因治疗技术创新和临床试验在近几年如雨后春笋般涌现，且世界各国对基因治疗领域的资助也持续增加。多项基因治疗项目相继在美国、欧盟、中国等国家获得批准上市。截止到2017年4月，全球在clinical trial网站上登记了2463项基因治疗临床试验方案，其中进入Ⅱ/Ⅲ期的基因治疗临床试验方案近500项，共有7个基因治疗产品在美国、欧盟、中国等国家上市。
作为基因治疗载体，溶瘤病毒治疗恶性肿瘤发展前景良好。近年来，跨国药企－安进、辉瑞、阿斯利康等纷纷布局溶瘤病毒项目。我国基因治疗研究及临床试验与世界发达国家几乎同期起步，以肿瘤为主攻方向。我国有近20个针对恶性肿瘤的基因治疗产品进入了临床试验。在众多溶瘤病毒疗法的载体中，重组腺病毒载体是应用最为广泛的，其临床可行性和安全性已获公认，腺病毒基因治疗载体具有以下突出的生物学优势和临床应用优势：1、感染谱广，对多种组织源性的细胞，无论是处于分裂期还是静止期的细胞，均能有效攻击，因此，抗癌谱广；2、腺病毒进入细胞后，不整合到宿主染色体，无突变、致癌的危险性，临床应用安全，使用后仅产生类似感冒样症状，无造血功能和免疫功能抑制；3、临床应用方便，可通过腔隙(腹腔、胸腔、颅腔)给药、局部或瘤体内直接注射(一点或多点)以及介入治疗等途径应用；4、经静脉或局部应用仅产生轻微的炎症反应，副作用轻微；5、临床级数量的腺病毒易于生产、纯化。基于以上的优势，越来越多的腺病毒载体被构建产生，并显示出良好的临床应用前景。
虽然腺病毒相较于其他各种基因治疗载体表现出明显的优势，国内外现有的腺病毒治疗载体也逐步取得了一些突破性的进展，但仍然有一些不可规避的缺点限制了腺病毒的广泛应用。现有的腺病毒载体药物在配制过程中主要采用传统配方的液体注射剂的形式，腺病毒在液体制剂中长期保存的稳定性较差容易失活，在2-8℃条件下，保存期只有6-12个月，因此大多数腺病毒制剂需要在-20℃甚至-80℃长期保存，在腺病毒制剂生产、运输以及使用过程中，如果操作不当，腺病毒制剂保存环境温度升高，常常导致腺病毒制剂效力下降；另外，病毒进入生物体内仅能持续表达两周，如果想要维持肿瘤部位一定的腺病毒浓度，两周之后，需要注射下一个疗程，这种冲击疗法引起的毒副作用及费用昂贵等问题也限制着其广泛的临床应用，给病人造成了沉重的负担。
国内外现有的腺病毒基因治疗制剂虽有明显的改进，并取得突破性进展，但均无法解决上述技术问题，鉴于此，特提出本发明。
发明内容
基于以上技术背景和重大的医疗需求，本发明涉及一种新的基因治疗缓释水凝胶制剂、制备方法及其在制备抗肿瘤基因药物中的应用，通过本发明获得的腺病毒缓释水凝胶制剂具有稳定性强、有效期长、肿瘤局部长期特异性大量表达外源性治疗蛋白、强大的肿瘤特异性旁观者效应等明显的优势，并具有高度的治疗指数，可以解决目前肿瘤治疗技术和实践中关键的不足之处。
因此，本发明克服现有技术中存在的不足，提供一种腺病毒缓释缓释水凝胶制剂，其制备方法及在制备抗肿瘤基因药物中的应用。
具体而言，本发明提供了如下技术方案：
在本发明的第一方面，本发明提供了一种腺病毒缓释水凝胶制剂，所述的水凝胶制剂包含：(1)腺病毒抗肿瘤基因药物；以及(2)缓释保护剂；所述缓释保护剂包含明胶、羟基苯基丙酸(GHPA)，还可选择性地含有辣根过氧化物酶(HRP)和过氧化氢(H2O2)。
明胶来自胶原蛋白，可以生物降解且有优异的生物相容性，使得明胶作为一种有前景的生物材料已被广泛用于化妆品和食品以及制药和医疗各个领域。但是由于明胶在体温下溶解迅速，且肿瘤组织中大量过表达明胶酶A(MMP-2)明胶酶B(MMP-9)使得明胶在机体内快速降解而限制了其应用。加入羟基苯基丙酸(GHPA)后，GHPA与明胶形成共轭连接，形成更稳定的水凝胶。在此基础上，在该种水凝胶中加入过氧化氢(H2O2)和辣根过氧化物酶(HRP),迅速的酶促反应在水凝胶中形成多孔结构。而混合后生成的高度多孔和可水合的稳定水凝胶使得高浓度的治疗剂可包裹并稳定腺病毒及其它保护剂成分并使其在靶组织中长期储存。
优选地，所述腺病毒抗肿瘤基因药物为条件复制性腺病毒上转导了单纯疱疹病毒胸苷激酶(HSV-TK)的基因药物。优选地，所述的腺病毒抗肿瘤基因药物为重组腺病毒-胸苷激酶构建体，全构建体长43Kb,包含：5型腺病毒除E1a、E1b、E3区域之外的全部基因组DNA；胸苷激酶基因表达片段，长约2.8kb，其中包括RSV-LTR启动子，长18bp且序列为ATGGCTTCGTACCCCTGC的启始片断和长2.3Kb且具有ZL98124960.4中图3序列的胸苷激酶cDNA。所述腺病毒抗肿瘤基因药物参照专利《重组腺病毒-胸苷激酶构建体及其获得方法和用途》(专利号:ZL98124960.4)所述的方法制备。
优选地，所述腺病毒抗肿瘤基因药物在所述腺病毒缓释水凝胶中的浓度为1～5×1011pfu/mL；最优选2.5×1011pfu/mL。
优选地，所述的缓释保护剂包含明胶、羟基苯基丙酸(GHPA)、辣根过氧化物酶(HRP)、和过氧化氢(H2O2)。
优选地，所述缓释保护剂包括：4～6重量份的明胶，优选为5重量份的明胶；和2-4重量份的羟基苯基丙酸，优选为3重量份的羟基苯基丙酸；还可选择地含有：0.02-0.08重量份的辣根过氧化物酶，优选为0.025重量份的辣根过氧化物酶；和/或0.02-0.05重量份的过氧化氢，优选为0.035重量份的过氧化氢。
优选地，以最终的制剂计算，所述明胶的浓度为4-6％(w/v)，最优选5％(w/v)。
优选地，以最终的制剂计算，所述明胶羟基苯基丙酸(GHPA)的浓度为2-4％(w/v)，最优选3％(w/v)。
优选地，以最终的制剂计算，所述辣根过氧化物酶(HRP)的浓度为0.02-0.08％(w/v)，最优选0.05％(w/v)。
优选地，以最终的制剂计算，所述过氧化氢(H2O2)的浓度为0.02-0.05％(w/v)，最优选0.035％(w/v)。
在本发明的另一方面，本发明涉及腺病毒缓释水凝胶制剂的制备方法，所述方法包括：提供作为缓释保护剂的第一溶液；提供含腺病毒抗肿瘤基因药物的第二溶液；将第一溶液和第二溶液冷却；混合均匀，形成的凝胶物质过滤收集，得到腺病毒缓释水凝胶。
所述的第一溶液中含有明胶、羟基苯基丙酸(GHPA)，还可选择地含有辣根过氧化物酶(HRP)和/或过氧化氢(H2O2)。
所述的第二溶液中含有ADV-TK病毒和Tris缓冲液。
所述的Tris缓冲液包含Tris-HCl、MgCl2、CaCl2以及甘油。
优选地，所述Tris缓冲液为1X Tris缓冲液。
优选地，所述的1X Tris缓冲液中各成分的浓度如下：10mM Tris-HCl,1mM MgCl2,150mM CaCl2,10％甘油。
所述的第二溶液的制备可参见《重组腺病毒-胸苷激酶构建体及其获得方法和用途》专利号:ZL98124960.4。
第二溶液其规格为每支1ml，含ADV-TK 1～5×1011pfu,用Tris缓冲液稀释制成。优选地所述第二溶液含有ADV-TK 2.5×1011pfu/mL。所述的Tris缓冲液包含Tris-HCl、MgCl2、CaCl2以及甘油。
优选地，所述Tris缓冲液为1X Tris缓冲液。
优选地，所述的1X Tris缓冲液中各成分的浓度如下：10mM Tris-HCl,1mM MgCl2,150mM CaCl2,10％甘油。
另一方面，本发明还涉及所述腺病毒水凝胶制剂在制备抗肿瘤药物中的应用，优选的，所述肿瘤为恶性黑色素瘤。
作为本发明所述腺病毒缓释剂在制备抗肿瘤药物中的应用的优选方案，其中，所述的基因药物，其作用方式是将胸苷激酶基因(TK)通过重组腺病毒载体(ADV)转入肿瘤细胞中使之表达,继之在更昔洛韦(GCV)参与下,胸苷激酶将单磷酸核苷转化为三磷酸核苷,并与肿瘤细胞新生DNA链结合,干扰DNA合成,产生“自杀效应”,从而杀伤肿瘤细胞；另外,由于ADV-TK的“旁观者效应”,治疗时即使只有少数肿瘤细胞被TK转染,通过缝隙连接、细胞间通道激发吞噬已死亡细胞释放出的TK以及免疫介导的杀伤效应等机制,周围未感染的肿瘤细胞也可被杀伤,因而极大地增强了杀伤效能。
本发明研究发现，该腺病毒水凝胶制剂(以下称为G1/Adv-TK)更加稳定，解决了传统腺病毒液体制剂保存易失活的难题，延长了腺病毒制剂的保存时间，且在恶性黑色素瘤皮下瘤小鼠模型中，新型的腺病毒缓释制剂均能有效延长腺病毒在肿瘤微环境中的存活时间，明显抑制肿瘤生长，且延长小鼠存活时间，其疗效明显优于液体制剂的Adv-TK。
附图说明
图1为Adv-TK液体溶液和G1/Adv-TK缓释制剂在小鼠体内缓释结果图。
图2为Adv-TK液体溶液和G1/Adv-TK缓释制剂恶性黑色素瘤原位模型中肿瘤生长图。
具体实施方式
为使本发明实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整性描述。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用的试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。
以下结合实施例对本发明的特征和性能作进一步的详细描述。
对比例：Adv-TK液体溶液的制备
含ADV-TK的溶液,用1X Tris缓冲液(10mM Tris-HCl,1mM MgCl2,150mM CaCl2,10％甘油)稀释至2.5×1011pfu/ml。
实施例1 G1/Adv-TK缓释水凝胶的制备：
本实施例1提供的腺病毒缓释水凝胶的制备，包括：作为缓释保护剂的第一溶液和含腺病毒抗肿瘤基因药物的第二溶液。
第一溶液中含有明胶、羟基苯基丙酸(GHPA)、辣根过氧化物酶(HRP)、过氧化氢(H2O2)四种成分；
第二溶液其规格为每支1ml，含ADV-TK 2.5×1011pfu,用1X Tris缓冲液(10mMTris-HCl,1mM MgCl2，150mM CaCl2,10％甘油)稀释制成。其具体制备方法参见《重组腺病毒-胸苷激酶构建体及其获得方法和用途》专利号:ZL98124960.4；
第一溶液的制备过程如下：
1)将适量明胶、GHPA溶于4ml生理盐水中，37℃温育至完全溶解，形成明胶终浓度12.5％、GHPA终浓度为7.5％的溶液；
2)将0.5ml含1.0％HRP溶液与步骤1)所得溶液混合均匀；
3)将0.5ml含0.7％H2O2溶液与步骤2)所得溶液混合均匀；
取第一溶液，将其冷却至4℃，与4℃的第二溶液等体积混合均匀，得到病毒混合水凝胶制剂。混合液中明胶浓度为5％(w/v)，GHPA浓度为3％(w/v)，HRP浓度为0.05％(w/v)，H2O2浓度为0.035％(w/v)，ADV-TK浓度为2.5×1011pfu/mL。将第一溶液与第二溶液反复混合以凝胶化，静置20min后形成的凝胶物质经滤过方式收集。
需要说明的是，形成的凝胶物质中仅含有较低浓度的海藻酸钠和氯化钙，因此形成的凝胶质地较为稀薄，在实施过程中可顺利通过标准1ml注射器针头，对病毒局部注射的使用方式无影响。
实施例2不同保存期耐老化检测
将实施例1的腺病毒缓释保护剂样品与传统液体制剂的Adv－TK分别在4℃、-20℃、-80℃条件下保存，分别在一个月、三个月、六个月、一年后，取一次样品，用试剂盒(购自clontech公司，adeno－x rapid titer kit,cat#632250)检测腺病毒感染复数moi(multiplicity of infection)。
结果显示，由实施例1制备的样品，-80℃条件下保存在一年周期中病毒滴度保持在1.25×1011pfu/ml，几乎没有任何损失。在4℃条件下保存一年后病毒滴度降低为1.0×1011pfu/ml，病毒活性仅损失了20％。而传统液体制剂的Adv－tk病毒液在在4℃条件下保存一个月后滴度下降至1.0×109pfu/ml，三个月后降至1.0×105pfu/ml，六个月后降至1.5×103pfu/ml以下，无法保证药效。
上述实验表明，由实施例1制备的腺病毒缓释保护剂在不同温度下均较传统配方病毒液的病毒滴度更不易降低，由此证明了由实施例1制备的腺病毒缓释保护剂提高了样品在不同温度条件下的稳定性。
实施例3小鼠体内缓释检测；
B16-F10黑色素瘤细胞株常规培养与DMEM+10％FBS+100u/ml penicillin，100mg/ml streptomycin(invitrogen)置于37℃，50％二氧化碳培养箱中培养，稳定传代3，4代后，取对数生长期细胞，经胰蛋白酶消化后用无血清培养液重悬收集细胞。
动物模型的建立与分组：
5周大小雌性C57BL小鼠40只，购自北京华阜康生物科技有限公司，背侧皮下接种小鼠恶性黑色素瘤B16-F10细胞1×106，自由饮水进食，每天观察实验动物体重和一般状况。两周后，在肿瘤达到70mm3左右，随机分为2组(以下称为a，b组)，每组包含20只小鼠。分组当天，全部老鼠瘤内注射1*107pfu腺病毒，其中，a组为对照组，注射传统配方Adv－TK病毒液；b组为实验组，注射由实施例1制备的腺病毒缓释保护剂。
注射后，分别于6h、3d、7d、14d、30d后，处死小鼠，取出其肿瘤组织。用试剂盒(购于qiagen公司，mini DNA kit)提取肿瘤组织DNA，以腺病毒衣壳蛋白fiber区引物做实时定量PCR,比较不同时间后，肿瘤微环境中腺病毒的含量。
F：ACTATATGGACAACGTCAACCCATT
R：ACCTTCTGAGGCACCTGGATGT
结果显示，G1/Adv-TK从注射后6小时到7天，病毒滴度逐渐升高，在30天后，肿瘤局部微环境中，病毒滴度仍为2.2×105pfu/ml；而液体制剂的Adv－TK，注射后3天，病毒滴度即到达峰值，后逐渐下降，14天后病毒滴度为4.2×102pfu/ml，而30天后，在肿瘤局部几乎检测不到Adv－TK，见附图1。
上述实验表明，G1/Adv-TK可在肿瘤局部缓慢释放，延长Adv－TK与肿瘤细胞作用时间，增强Adv－TK的治疗效应。
实施例4体内实验验证G1/Adv-TK对肿瘤杀伤效应。
具体实验步骤：
皮下瘤动物模型：4-6周大小BALB/c小鼠，单侧背部皮下接种小鼠恶性黑色素瘤1×106B16-F10细胞，三周后，待肿瘤黄豆大小，将小鼠分为三组(n＝6)，三组分别为：a－空白组；b－注射Adv－TK；c－注射G1/Adv－TK。其中，b、c组，肿瘤内注射1×107pfu。从肿瘤种植后开始，每三天测量肿瘤体积，肿瘤体积变化如图2所示。
空白组a组中，肿瘤体积不断增大，实验组b组中，注射Adv－TK并不能很好的控制肿瘤生长，但是实验组c中，注射G1/Adv－TK，肿瘤体积逐渐减小，基本能控制疾病进展。
以上结果表明，腺病毒缓释剂G1/Adv－TK更加稳定，解决了传统腺病毒液体制剂保存易失活的难题，延长了腺病毒制剂的保存时间，且在恶性黑色素瘤皮下瘤小鼠模型中，新型的腺病毒缓释剂能有效延长腺病毒在肿瘤微环境中的存活时间，明显抑制肿瘤生长，其疗效明显优于液体制剂的Adv-TK。
本发明虽然以较佳实施例公开如上，但并不是用来限定权利要求，任何本领域技术人员在不脱离本发明构思的前提下，都可以做出若干可能的变动和修改，因此本发明的保护范围应当以本发明权利要求所界定的范围。

Claims (10)

1.一种重组腺病毒缓释水凝胶，其特征在于，所述腺病毒缓释水凝胶包含：
(1)腺病毒抗肿瘤基因药物；以及
(2)缓释保护剂；所述缓释保护剂包含明胶、羟基苯基丙酸，还可选择性地含有辣根过氧化物酶和过氧化氢中的至少一种。
2.根据权利要求1所述的腺病毒缓释水凝胶，其特征在于，所述腺病毒抗肿瘤基因药物为条件复制性腺病毒上转导了单纯疱疹病毒胸苷激酶(HSV-TK)的基因药物。
3.根据权利要求1所述的腺病毒缓释水凝胶，其特征在于，所述腺病毒抗肿瘤基因药物在所述腺病毒缓释水凝胶中的浓度为1～5×1011pfu/mL，优选2.5×1011pfu/mL。
4.根据权利要求1所述的腺病毒缓释水凝胶，其特征在于，所述缓释保护剂包含明胶、羟基苯基丙酸、辣根过氧化物酶和过氧化氢。
5.根据权利要求1所述的腺病毒缓释水凝胶，其特征在于，所述缓释保护剂包括：
4～6重量份的明胶，优选为5重量份的明胶；和
2-4重量份的羟基苯基丙酸，优选为3重量份的羟基苯基丙酸；
还可选择地含有：
0.02-0.08重量份的辣根过氧化物酶，优选为0.025重量份的辣根过氧化物酶；和/或
0.02-0.05重量份的过氧化氢，优选为0.035重量份的过氧化氢。
6.根据权利要求1所述的腺病毒缓释水凝胶，其特征在于，以所述腺病毒缓释水凝胶计，
所述明胶的质量体积浓度为4～6％，优选为5％；
所述羟基苯基丙酸的质量体积浓度为2-4％，优选为3％；
还可选择性地含有：
质量体积浓度为0.02-0.08％的辣根过氧化物酶，优选为0.025％；和/或
质量体积浓度为0.02-0.05％的过氧化氢，优选为0.035％。
7.权利要求1-6任一项所述腺病毒缓释水凝胶的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括以下步骤：
(1)提供作为缓释保护剂的第一溶液；
(2)提供含腺病毒抗肿瘤基因药物的第二溶液；
(3)将第一溶液与第二溶液混合均匀，形成的凝胶物质过滤收集，得到所述腺病毒缓释水凝胶制剂。
8.根据权利要求7所述的制备方法，其特征在于，所述第二溶液含有ADV-TK病毒和Tris缓冲液。
9.权利要求1-6中任一项所述的腺病毒缓释水凝胶或根据权利要求7或8所述的制备方法所制备的腺病毒缓释水凝胶在制备抗肿瘤药物中的应用。
10.根据权利要求9所述的应用，其特征在于，所述肿瘤为黑色素瘤，优选为恶性黑色素瘤。
CN201911069405.XA 2019-11-05 2019-11-05 一种重组腺病毒缓释水凝胶、制备方法及其应用 Pending CN110772477A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201911069405.XA CN110772477A (zh) 2019-11-05 2019-11-05 一种重组腺病毒缓释水凝胶、制备方法及其应用

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201911069405.XA CN110772477A (zh) 2019-11-05 2019-11-05 一种重组腺病毒缓释水凝胶、制备方法及其应用

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN110772477A true CN110772477A (zh) 2020-02-11

Family

ID=69388942

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201911069405.XA Pending CN110772477A (zh) 2019-11-05 2019-11-05 一种重组腺病毒缓释水凝胶、制备方法及其应用

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN110772477A (zh)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN114621393A (zh) * 2022-03-17 2022-06-14 华侨大学 一种n-（2-羟基）丙基甲基丙烯酰胺和n-甲基丙烯酰甘氨酰甘氨酸的共聚物及其应用

Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2000009675A1 (en) * 1998-08-14 2000-02-24 Aventis Pharmaceuticals Products Inc. Adenovirus formulations for gene therapy
CN102206613A (zh) * 2010-12-26 2011-10-05 周剑峰 肿瘤选择性复制型腺病毒-胸苷激酶基因构建体的获得及用途
CN102573944A (zh) * 2009-07-02 2012-07-11 亚洲大学校产学协力团 原位成型水凝胶及其生物医学用途
CN104004231A (zh) * 2014-06-12 2014-08-27 东南大学 一种生物大分子互穿网络水凝胶及其制备方法
CN108175774A (zh) * 2018-01-26 2018-06-19 成都远睿生物技术有限公司 一种用于制备腺病毒制剂的冻干缓释保护剂以及腺病毒制剂和制备方法

Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2000009675A1 (en) * 1998-08-14 2000-02-24 Aventis Pharmaceuticals Products Inc. Adenovirus formulations for gene therapy
CN102573944A (zh) * 2009-07-02 2012-07-11 亚洲大学校产学协力团 原位成型水凝胶及其生物医学用途
CN102206613A (zh) * 2010-12-26 2011-10-05 周剑峰 肿瘤选择性复制型腺病毒-胸苷激酶基因构建体的获得及用途
CN104004231A (zh) * 2014-06-12 2014-08-27 东南大学 一种生物大分子互穿网络水凝胶及其制备方法
CN108175774A (zh) * 2018-01-26 2018-06-19 成都远睿生物技术有限公司 一种用于制备腺病毒制剂的冻干缓释保护剂以及腺病毒制剂和制备方法

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
杨树源等: "《神经外科学》", 31 January 2008, 人民卫生出版社 *

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN114621393A (zh) * 2022-03-17 2022-06-14 华侨大学 一种n-（2-羟基）丙基甲基丙烯酰胺和n-甲基丙烯酰甘氨酰甘氨酸的共聚物及其应用

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Yahya et al. Recent trends in cancer therapy: A review on the current state of gene delivery
CN110087662A (zh) 用溶瘤病毒表达pten-long
CN112251421B (zh) 一种ezh2可变剪切体及其应用
ES2393748T3 (es) Composiciones y métodos de uso de condroitinasa ABCI mutantes
CN110772477A (zh) 一种重组腺病毒缓释水凝胶、制备方法及其应用
CN105755043B (zh) 一种双拷贝人p53基因重组腺病毒及其制备方法
Nelwan Treat oculocutaneous albinism with gene therapy
CN111939262B (zh) 一种治疗肿瘤或癌症的药物组合物和其应用
CN110960484A (zh) 一种重组腺病毒缓释制剂、制备方法及其应用
CN115227834A (zh) 通过基因编辑技术联合dna损伤修复抑制剂特异杀伤癌细胞的方法
CN111705061B (zh) 和心脏疾病相关的piRNA-P1与piRNA-P1反义核苷酸、应用和药物
AU2004240968B2 (en) Recombinant gene medicine of adenovirus vector and gene p53 for treating proliferative diseases
CN114432332A (zh) circUTRN在制备治疗心力衰竭药物中的应用、重组载体和治疗心力衰竭的药物
JP6564952B2 (ja) 腫瘍を予防・治療する医薬およびその用途
CN113388563A (zh) 一种具有降糖作用的大肠杆菌Nissle 1917基因工程菌及其制备方法和应用
CN104922698B (zh) 人干细胞生长因子注射液及其制备方法
JP2004099459A (ja) 抗腫瘍剤
US20050281785A1 (en) Method of reducing side effects of cancer therapy using p53 recombinant adenovirus
CN110354257B (zh) 鸟苷三磷酸环化水解酶1的应用及药物
CN104099370A (zh) 肿瘤靶向治疗的非整合慢病毒载体系统及制备方法和应用
CN110151748A (zh) 一种用于治疗前列腺癌的药物组合物
CN116769724B (zh) 一种携带杀伤开关的间充质干细胞及其在肿瘤治疗中的应用
WO2023074122A1 (ja) ｙＣＤ遺伝子の変異体、およびその利用
CN102226186B (zh) 以腺病毒为载体的用于治疗恶性肿瘤的激活型Bax基因
CN114632088B (zh) 阿糖胞苷化合物在制备治疗脊髓胶质瘤的药物中的用途

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
WD01 Invention patent application deemed withdrawn after publication
WD01 Invention patent application deemed withdrawn after publication

Application publication date: 20200211