CN110760463A - 一种含益生菌的组合物及其制备方法和应用 - Google Patents

一种含益生菌的组合物及其制备方法和应用 Download PDF

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Abstract

本发明提供了一种含益生菌的组合物及其制备方法和应用，属于微生物技术领域，所述组合物包括以下体积份数的组分：10份益生菌、0.05～10份枸杞汁、0.1～10份罗汉果水提液和70～89.85份营养基质。采用本发明提供的组合物能够调节动物肠道菌群，进而能够治疗腹泻，可将组合物应用到发酵领域中发酵得到饲料，可将组合物应用到制备生物产品中，从益生菌的胞内和胞外分离得到生物产品。

Description

一种含益生菌的组合物及其制备方法和应用
技术领域
本发明属于微生物技术领域，尤其涉及一种含益生菌的组合物及其制备方法和应用。
背景技术
随着畜牧养殖行业的持续发展，有关部门已明令禁止在畜牧养殖过程中滥用抗生素药物。因此，畜牧、养殖企业不断面临着新的挑战和更高的产品要求，生态、环保、无抗养殖的经营模式得到了广泛的认可。要达到生态、环保和无抗养殖的目标，就要做到“粪污处理前置化、养殖过程无害化、后期利用资源化”的良性产业循环，同时提高动物的免疫系统功能和应对疾病感染的抵抗能力，减少疫情疫病的发生，使得养殖效益最大化。
为了实现养殖效益最大化的目标，在畜牧养殖过程中使用益生菌和保健食品是有效的方法之一。益生菌是一类活的能够对人体或动物产生有益作用的微生物，主要来源于动物肠道的正常生理菌群或非肠道菌。益生菌可通过调节肠道正常菌群来达到促进健康的作用，此外还具有抗肿瘤活性、调节免疫系统等功能，具有广泛的应用价值。使用益生菌加某些保健食品，不仅能够调节动物肠道中的益生菌群平衡，防治动物因肠道功能失常引起的肠功能紊乱(急、慢性胃肠炎等)，还可以促进动物的肠道消化和营养吸收，使得动物排出的粪便废弃物中含有更少氨氮化合物和有害气体(包括氨气、硫化氢、甲烷等)，使养殖场及周围环境的臭气明显下降，生态环保水平显著提高，从而达到生态、环保和无抗养殖的目标。
由于不同的微生物具有不同的生物功能和代谢特征，因此如何选择益生菌的种类、比例和营养基质对于其功效的充分发挥具有重要的意义。
发明内容
有鉴于此，本发明的目的在于提供一种含益生菌的组合物及其制备方法和应用，采用本发明提供的组合物能够调节动物肠道菌群，进而能够治疗腹泻。
为了实现上述发明目的，本发明提供了以下技术方案：
本发明提供了一种含益生菌的组合物，包括以下体积份数的组分：
益生菌10份、0.05～10份枸杞汁、0.1～10份罗汉果水提液和营养基质70～89.85份；
所述益生菌包括肠球菌、干酪乳酸菌、副干酪乳酸菌、酿酒酵母、枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、双歧杆菌、保加利亚乳杆菌和嗜热链球菌，所述肠球菌与干酪乳酸菌、副干酪乳酸菌、酿酒酵母、枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、双歧杆菌、保加利亚乳杆菌、嗜热链球菌的体积比为2:2:2:0.8:0.8:0.8:0.6:0.5:0.5；
所述组合物中益生菌的数量在1×1011cfu/L以上。
优选的，所述肠球菌以肠球菌菌液形式存在，所述肠球菌菌液中肠球菌的活菌数为≥2×1011cfu/L；
所述干酪乳酸菌以干酪乳酸菌菌液形式存在，所述干酪乳酸菌菌液中干酪乳酸菌的活菌数为≥2×1011cfu/L；
所述副干酪乳酸菌以副干酪乳酸菌菌液形式存在，所述副干酪乳酸菌菌液中副干酪乳酸菌的活菌数为≥2×1011cfu/L；
所述酿酒酵母以酿酒酵母菌液形式存在，所述酿酒酵母菌液中酿酒酵母的活菌数为≥8×1010cfu/L。
优选的，所述枯草芽孢杆菌以枯草芽孢杆菌菌液形式存在，所述枯草芽孢杆菌菌液中枯草芽孢杆菌的活菌数为≥8×1010cfu/L；
所述地衣芽孢杆菌以地衣芽孢杆菌菌液形式存在，所述地衣芽孢杆菌菌液中地衣芽孢杆菌的活菌数为≥8×1010cfu/L；
所述双歧杆菌以双歧杆菌菌液形式存在，所述双歧杆菌菌液中双歧杆菌的活菌数为≥6×1010cfu/L；
所述保加利亚乳杆菌以保加利亚乳杆菌菌液形式存在，所述保加利亚乳杆菌菌液中保加利亚乳杆菌的活菌数为≥5×1010cfu/L；
所述嗜热链球菌以嗜热链球菌菌液形式存在，所述嗜热链球菌菌液中嗜热链球菌的活菌数为≥5×1010cfu/L。
优选的，所述营养基质以水为溶剂，每100ml包括蛋白胨1g、酵母粉0.5g、磷酸二氢钾0.02g、磷酸氢二钾0.01g、氯化钠1g和葡萄糖2g。
优选的，所述枸杞汁的制备方法包括：将枸杞榨汁，得到榨汁物，将所述榨汁物离心，得到清液，将所述清液过滤，得到的滤液为枸杞汁；
所述离心的条件包括：所述离心的转速为4000～6000rpm，所述离心的时间为8～12min。
优选的，所述罗汉果水提液的制备方法包括：将罗汉果与水混合后煎煮8～12min，得到煎煮液，将所述煎煮液离心，得到清液，将所述清液过滤，得到的滤液为罗汉果水提液；
所述罗汉果的质量与水的体积比为1g:90～110ml。
本发明还提供了上述技术方案所述的组合物的制备方法，包括：将所述益生菌、枸杞汁、罗汉果水提液和营养基质混合后，在30～40℃下密闭发酵24～48h，得到组合物。
本发明还提供了上述技术方案所述的组合物在发酵中的应用；
所述应用包括：将所述组合物与发酵原料混合后密闭发酵13～18d，所述组合物与发酵原料的质量比为0.5～1.5:8.5～9.5。
本发明还提供了上述技术方案所述的组合物在制备腹泻药物中的应用。
本发明还提供了上述技术方案所述的组合物在制备生物产品中的应用，所述生物产品包括1,3-丁二醇、糠醛、5-甲基-2-呋喃甲醛、2-乙基-己醇、1-甲基-5-氟尿嘧啶和2-甲基环沙林中的一种或几种。
本发明提供了一种含益生菌的组合物及其，包括以下体积份数的组分：益生菌10份、0.05～10份枸杞汁、0.1～10份罗汉果水提液和营养基质70～89.85份。采用本发明提供的组合物含有大量益生菌，可以调节动物肠道菌群平衡，抑制病原菌的生长，进而能够治疗腹泻，可将组合物应用到发酵领域中发酵得到饲料，可将组合物应用到制备生物产品中，从益生菌的胞内和胞外分离得到生物产品。
具体实施方式
本发明提供了一种含益生菌的组合物，包括以下体积份数的组分：益生菌10份、0.05～10份枸杞汁、0.1～10份罗汉果水提液和营养基质70～89.85份；所述益生菌包括肠球菌、干酪乳酸菌、副干酪乳酸菌、酿酒酵母、枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、双歧杆菌、保加利亚乳杆菌和嗜热链球菌，所述肠球菌与干酪乳酸菌、副干酪乳酸菌、酿酒酵母、枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、双歧杆菌、保加利亚乳杆菌、嗜热链球菌的体积比为2:2:2:0.8:0.8:0.8:0.6:0.5:0.5；所述组合物中益生菌的数量在1×1011cfu/L以上。
本发明对所述肠球菌、干酪乳酸菌、副干酪乳酸菌、酿酒酵母、枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、双歧杆菌、保加利亚乳杆菌和嗜热链球菌的来源没有特殊限定，采用常规市售菌种即可。
在本发明中，所述肠球菌优选以肠球菌菌液形式存在，所述肠球菌菌液中肠球菌的活菌数优选≥2×1011cfu/L，本发明对所述肠球菌菌液的制备方法没有特殊限定，采用常规制备即可，所述肠球菌的作用是发酵产酸；所述干酪乳酸菌优选以干酪乳酸菌菌液形式存在，所述干酪乳酸菌菌液中干酪乳酸菌的活菌数优选≥2×1011cfu/L，本发明对所述干酪乳酸菌菌液的制备方法没有特殊限定，采用常规制备方法即可，所述干酪乳酸菌的作用是发酵产酸；所述副干酪乳酸菌优选以副干酪乳酸菌菌液形式存在，所述副干酪乳酸菌菌液中副干酪乳酸菌的活菌数优选≥2×1011cfu/L，本发明对所述副干酪乳酸菌菌液的制备方法没有特殊限定，采用常规制备方法即可，所述副干酪乳酸菌的作用是发酵产酸；所述酿酒酵母优选以酿酒酵母菌液形式存在，所述酿酒酵母菌液中酿酒酵母的活菌数优选≥8×1010cfu/L，本发明对所述酿酒酵母菌液的制备方法没有特殊限定，采用常规即可，所述酿酒酵母的作用是发酵产酒精，增加特殊芳香味；所述枯草芽孢杆菌优选以枯草芽孢杆菌菌液形式存在，所述枯草芽孢杆菌菌液中枯草芽孢杆菌的活菌数优选8×1010cfu/L，本发明对所述枯草芽孢杆菌菌液的制备方法没有特殊限定，采用常规即可，所述枯草芽孢杆菌的作用是发酵产酸，抑制病原菌生长；所述地衣芽孢杆菌优选以地衣芽孢杆菌菌液形式存在，所述地衣芽孢杆菌菌液中地衣芽孢杆菌的活菌数优选8×1010cfu/L，本发明对所述地衣芽孢杆菌菌液的制备方法没有特殊限定，采用常规即可，所述地衣芽孢杆菌的作用是发酵产酸，抑制病原菌生长；所述双歧杆菌优选以双歧杆菌菌液形式存在，所述双歧杆菌菌液中双歧杆菌的活菌数优选6×1010cfu/L，本发明对所述双歧杆菌菌液的制备方法没有特殊限定，采用常规制备方法即可，所述双歧杆菌的作用是发酵产酸，抑制病原菌生长；所述保加利亚乳杆菌优选以保加利亚乳杆菌菌液形式存在，所述保加利亚乳杆菌菌液中保加利亚乳杆菌的活菌数优选5×1010cfu/L，本发明对所述保加利亚乳杆菌菌液的制备方法没有特殊限定，采用常规即可；所述嗜热链球菌优选以嗜热链球菌菌液形式存在，所述嗜热链球菌菌液中嗜热链球菌的活菌数优选为5×1010cfu/L，本发明对所述嗜热链球菌菌液的制备方法没有特殊限定，采用常规准备即可，所述嗜热链球菌的作用是发酵产酸。
本发明提供的组合物包括体积份数为0.05～10份的枸杞汁，优选为2～8份，更优选为5～6。在本发明中，所述枸杞汁提高机体免疫功能。在本发明中，所述枸杞汁的制备方法优选包括：将枸杞榨汁，得到榨汁物，将所述榨汁物离心，得到清液，将所述清液过滤，得到的滤液为枸杞汁；所述离心的条件包括：所述离心的转速为4000～6000rpm，所述离心的时间为8～12min。本发明对所述枸杞榨汁的方法没有特殊限定，采用常规即可。在本发明中，所述离心的转速更优选为5000rpm，所述离心的时间更优选为10min。在本发明中，所述过滤优选使用微孔滤膜，所述微孔滤膜的孔径优选为0.8微米。
本发明提供的组合物包括体积份数为0.1～10份的罗汉果水提液，优选为2～7份，更优选为5～6份。在本发明中，所述罗汉果水提液滑肠通便，治疗便秘的功效。在本发明中，所述罗汉果水提液的制备方法优选包括：将罗汉果与水混合后煎煮8～12min，得到煎煮液，将所述煎煮液离心，得到清液，将所述清液过滤，得到的滤液为罗汉果水提液；所述罗汉果的质量与水的体积比优选为1g:90～110ml，更优选为1g:100ml，所述水优选为纯净水。在本发明中，所述罗汉果煎煮的时间更优选为10min。在本发明中，所述离心的转速优选为5000rpm，所述离心的时间优选为10min。在本发明中，所述过滤优选使用微孔滤膜，所述微孔滤膜的孔径优选为0.8微米。
本发明提供的组合物包括体积份数为70～89.85份的营养基质，所述营养基质为所述益生菌提供营养。在本发明中，所述营养基质优选以水为溶剂，每100ml包括蛋白胨1g、酵母粉0.5g、磷酸二氢钾0.02g、磷酸氢二钾0.01g、氯化钠1g和葡萄糖2g。
本发明还提供了上述技术方案所述的组合物的制备方法，包括：将所述益生菌、枸杞汁、罗汉果水提液和营养基质混合后，在30～40℃下密闭发酵24～48h，得到组合物。
本发明还提供了上述技术方案所述的组合物在发酵中的应用。在本发明中，所述应用包括：将所述组合物与发酵原料混合后密闭发酵13～18d，所述组合物与发酵原料的质量比为0.5～1.5:8.5～9.5。在本发明中，所述密闭发酵的时间更优选为15d，所述密闭发酵的温度优选为33～38℃。在本发明中，所述组合物与发酵原料的质量比更优选为1:9。在本发明中，所述发酵原料优选包括主料和辅料，所述主料优选包括棕榈粕、花生壳、米糠纤维、大豆皮和玉米粉，所述棕榈粕、花生壳、米糠纤维、大豆皮和玉米粉的质量比优选为1:1:1:1:1，所述辅料优选包括甘蔗糖蜜，所述主料与辅料的质量比优选为5:4。
本发明还提供了上述技术方案所述的组合物在制备腹泻药物中的应用，本发明对所述药物的剂型和制备方法没有特殊限定，采用常规即可，本发明对所述药物中组合物的含量没有特殊限定，采用常规药物中活性物质的含量即可。
本发明还提供了上述技术方案所述的组合物在制备生物产品中的应用，所述生物产品包括1,3-丁二醇、糠醛、5-甲基-2-呋喃甲醛、2-乙基-己醇、1-甲基-5-氟尿嘧啶和2-甲基环沙林中的一种或几种。在本发明中，所述应用优选包括：将所述组合物采用常规培养方法进行培养，收集培养物，将所述培养物离心，收集菌体和上清液，采用常规收集方法收集上清液中的代谢物质，采用常规收集方法收集菌体胞内的代谢物质。
下面结合实施例对本发明提供的技术方案进行详细的说明，但是不能把它们理解为对本发明保护范围的限定。
实施例1
含益生菌的组合物，包括以下体积份数的组分：
益生菌10份、0.05～10份枸杞汁、0.1～10份罗汉果水提液和营养基质70～89.85份。
组合物的制备方法为：将所述益生菌、枸杞汁、罗汉果水提液和营养基质混合后，在35℃下密闭发酵48h，得到组合物。
其中益生菌包括肠球菌、干酪乳酸菌、副干酪乳酸菌、酿酒酵母、枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、双歧杆菌、保加利亚乳杆菌和嗜热链球菌，肠球菌与干酪乳酸菌、副干酪乳酸菌、酿酒酵母、枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、双歧杆菌、保加利亚乳杆菌、嗜热链球菌的体积比为2:2:2:0.8:0.8:0.8:0.6:0.5:0.5；组合物中益生菌的数量在1×1011cfu/L以上；肠球菌以肠球菌菌液形式存在，肠球菌菌液中肠球菌的活菌数为2×1011cfu/L；干酪乳酸菌以干酪乳酸菌菌液形式存在，干酪乳酸菌菌液中干酪乳酸菌的活菌数为2×1011cfu/L；副干酪乳酸菌以副干酪乳酸菌菌液形式存在，副干酪乳酸菌菌液中副干酪乳酸菌的活菌数为2×1011cfu/L；酿酒酵母以酿酒酵母菌液形式存在，酿酒酵母菌液中酿酒酵母的活菌数为8×1010cfu/L。枯草芽孢杆菌以枯草芽孢杆菌菌液形式存在，枯草芽孢杆菌菌液中枯草芽孢杆菌的活菌数为8×1010cfu/L，地衣芽孢杆菌以地衣芽孢杆菌菌液形式存在，地衣芽孢杆菌菌液中地衣芽孢杆菌的活菌数为8×1010cfu/L；双歧杆菌以双歧杆菌菌液形式存在，双歧杆菌菌液中双歧杆菌的活菌数为6×1010cfu/L；保加利亚乳杆菌以保加利亚乳杆菌菌液形式存在，保加利亚乳杆菌菌液中保加利亚乳杆菌的活菌数为5×1010cfu/L；嗜热链球菌以嗜热链球菌菌液形式存在，嗜热链球菌菌液中嗜热链球菌的活菌数为5×1010cfu/L。
营养基质以水为溶剂，每100ml包括蛋白胨1g、酵母粉0.5g、磷酸二氢钾0.02g、磷酸氢二钾0.01g、氯化钠1g和葡萄糖2g。
枸杞汁的制备方法：将枸杞榨汁，得到榨汁物，将榨汁物离心，得到清液，将清液过滤，得到的滤液为枸杞汁；离心的转速为5000rpm，离心的时间为10min，过滤使用微孔滤膜，孔径为0.8微米。
罗汉果水提液的制备方法：将罗汉果与水混合后煎煮10min，得到煎煮液，将煎煮液离心，得到清液，将清液过滤，得到的滤液为罗汉果水提液；罗汉果的质量与水的体积比为1g:100ml，水为纯净水。离心的转速为5000rpm，离心的时间为10min，过滤使用微孔滤膜，孔径为0.8微米。
实施例2
以棕榈粕、花生壳、米糠纤维、大豆皮、玉米粉作为主要原料，按质量比(比例为1:1:1:1:1)添加原料50％，甘蔗糖蜜添加量40％，实施例1的含益生菌的组合物的添加量为10％，经过充分搅拌均匀后密封发酵15天，即可制得发酵饲料，结果见表1。
对比例1
以不添加组合物(以10％的纯净水进行替代)的混合饲料作为对照，检测常规饲料指标进行对比分析，其它条件同实施例2，结果如表1所示。
表1使用该产品制作发酵饲料的效果对比
检测指标 对比例1 实施例1
样品采集量 5份，500g/份 5份，500g/份
干物质 78.19％ 79.08％
粗蛋白 11.93％ 13.88％
粗纤维 23.31％ 18.56％
粗脂肪 2.53％ 2.12％
总糖 29.76％ 25.89％
产品pH 6.35 5.13
益生菌含量 ≤10<sup>4</sup>cfu/g ≥10<sup>7</sup>cfu/g
钾 0.23％ 0.19％
粗灰分 5.18％ 4.98％
钙 0.38％ 0.36％
磷 0.27％ 0.30％
由表1的数据结果可知，对照组和实验组之间具有显著差异的指标主要有粗蛋白、粗纤维、总糖、pH值和益生菌含量。利用含益生菌的组合物制作发酵饲料，所得饲料产品具有更高的蛋白质含量，且粗纤维含量明显下降，这表明原料中的粗纤维降解率得到了进一步提高，原料中的糖和脂肪在益生菌的作用下，也被部分转化为菌体蛋白。此外，使用含益生菌的组合物制得的发酵饲料，具有更高的益生菌(本发明组合物中的9种益生菌)总数含量(≥107cfu/g)，其中主要为该组合物中的9种益生菌，且发酵得到的产品的pH值仅为5.13，而对照组的非发酵饲料pH值为6.35，这表明组合物中的益生菌能够通过发酵主要降低原料的pH，抑制杂菌的生长，使发酵饲料的pH值与非发酵饲料相比具有显著差异。因此，通过组合物制得的发酵饲料，能够丰富饲料的营养组成，使其具有更高的应用价值。
实施例3
实施例1的组合物对腹泻奶牛肠道主要菌群结构的影响。使用组合物前，分别选择正常奶牛、腹泻奶牛各三头作为研究对象，各取每头奶牛的新鲜粪便1份，利用宏基因组学、基因测序技术对牛粪中的菌群结构进行测定分析，鉴定样品中的菌群结构作为对照。使用组合物时，对于腹泻奶牛，每日灌服组合物2次，每次25mL，持续灌服一周；对于正常奶牛，则在相同时间内灌服等量的纯净水，作为对照。一周后再次取原腹泻奶牛的新鲜牛粪做菌群结构测定分析，结果如表2所示。
表2该产品对腹泻奶牛肠道主要菌群结构的影响
Figure BDA0002273185440000091
Figure BDA0002273185440000101
由表2的结果可知，正常奶牛粪便中的主要优势菌群为拟杆菌门、变形菌门、厚壁菌门、肠杆菌属、肠球菌属、乳杆菌属、链球菌属、粪便杆菌属、葡萄球菌属等，而发生腹泻的奶牛粪便中检出了弯曲杆菌、大肠杆菌和沙门氏菌等常见病原菌，检出率均大于1％。此外，腹泻奶牛牛粪中的菌群结构也发生了显著的变化，其中检出率大于5％的主要有拟杆菌门、厚壁菌门、弯曲杆菌属、变形菌门、大肠杆菌、梭菌属，与正常的奶牛相比，其种类和占比结构均发生了变化，这表明腹泻奶牛的肠道菌群结构与正常的牛奶相比具有显著差异(p＜0.05)。
通过使用组合物对腹泻奶牛进行治疗一周后，腹泻奶牛的情况得到了明显改善，对其牛粪菌群结构进行测定分析后可知，使用组合物后的腹泻奶牛，其肠道菌群结构发生了明显的变化，主要优势菌种为变形菌门、拟杆菌门、厚壁菌门、肠球菌属、肠杆菌属、乳杆菌属等。尽管与正常的奶牛相比，使用组合物后的腹泻奶牛肠道菌群结构具有一定的差异，但优势菌种均为肠道中的正常菌群，且致病性的菌种如弯曲杆菌属、大肠杆菌、沙门氏菌属的丰度占比均显著下降。因此，组合物具有调节奶牛肠道菌群平衡，改善动物营养组成和发挥动物保健的作用，可用于治疗奶牛肠道功能失常引起的肠功能紊乱、腹泻等，具有良好的应用价值。
实施例4
取实施例1的组合物50mL，接种于1000mL微生物培养基中(如YPD、LB培养基)，于30～40℃恒温条件下培养1～5天，随后通过离心(10000转/分钟)分离，沉淀物为菌体细胞，上清液为胞外代谢物；菌体再经过超声波细胞破碎(300W，10～30分钟)，离心后取上清液即得胞内代谢物，将胞内、外代谢物采用气相色谱-质谱联用(GC-MS)和液相色谱-质谱联用(LC-MS)进行成分鉴定后，再次对各种代谢物进行分离纯化等操作，即可制得多种生物制剂产品，部分生物制剂产品如表3所示。
表3采用组合物可制得的部分生物制剂产品
Figure BDA0002273185440000111
Figure BDA0002273185440000121
由以上实施例可以得出，本发明提供的组合物能够调节动物肠道菌群，进而能够治疗腹泻，可将组合物应用到发酵领域中发酵得到饲料，可将组合物应用到制备生物产品中，从益生菌的胞内和胞外分离得到生物产品。
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

Claims (10)

1.一种含益生菌的组合物，其特征在于，包括以下体积份数的组分：
益生菌10份、0.05～10份枸杞汁、0.1～10份罗汉果水提液和营养基质70～89.85份；
所述益生菌包括肠球菌、干酪乳酸菌、副干酪乳酸菌、酿酒酵母、枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、双歧杆菌、保加利亚乳杆菌和嗜热链球菌，所述肠球菌与干酪乳酸菌、副干酪乳酸菌、酿酒酵母、枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、双歧杆菌、保加利亚乳杆菌、嗜热链球菌的体积比为2:2:2:0.8:0.8:0.8:0.6:0.5:0.5；
所述组合物中益生菌的数量在1×1011cfu/L以上。
2.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于，所述肠球菌以肠球菌菌液形式存在，所述肠球菌菌液中肠球菌的活菌数为≥2×1011cfu/L；
所述干酪乳酸菌以干酪乳酸菌菌液形式存在，所述干酪乳酸菌菌液中干酪乳酸菌的活菌数为≥2×1011cfu/L；
所述副干酪乳酸菌以副干酪乳酸菌菌液形式存在，所述副干酪乳酸菌菌液中副干酪乳酸菌的活菌数为≥2×1011cfu/L；
所述酿酒酵母以酿酒酵母菌液形式存在，所述酿酒酵母菌液中酿酒酵母的活菌数为≥8×1010cfu/L。
3.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于，所述枯草芽孢杆菌以枯草芽孢杆菌菌液形式存在，所述枯草芽孢杆菌菌液中枯草芽孢杆菌的活菌数为≥8×1010cfu/L；
所述地衣芽孢杆菌以地衣芽孢杆菌菌液形式存在，所述地衣芽孢杆菌菌液中地衣芽孢杆菌的活菌数为≥8×1010cfu/L；
所述双歧杆菌以双歧杆菌菌液形式存在，所述双歧杆菌菌液中双歧杆菌的活菌数为≥6×1010cfu/L；
所述保加利亚乳杆菌以保加利亚乳杆菌菌液形式存在，所述保加利亚乳杆菌菌液中保加利亚乳杆菌的活菌数为≥5×1010cfu/L；
所述嗜热链球菌以嗜热链球菌菌液形式存在，所述嗜热链球菌菌液中嗜热链球菌的活菌数为≥5×1010cfu/L。
4.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于，所述营养基质以水为溶剂，每100ml包括蛋白胨1g、酵母粉0.5g、磷酸二氢钾0.02g、磷酸氢二钾0.01g、氯化钠1g和葡萄糖2g。
5.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于，所述枸杞汁的制备方法包括：将枸杞榨汁，得到榨汁物，将所述榨汁物离心，得到清液，将所述清液过滤，得到的滤液为枸杞汁；
所述离心的条件包括：所述离心的转速为4000～6000rpm，所述离心的时间为8～12min。
6.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于，所述罗汉果水提液的制备方法包括：将罗汉果与水混合后煎煮8～12min，得到煎煮液，将所述煎煮液离心，得到清液，将所述清液过滤，得到的滤液为罗汉果水提液；
所述罗汉果的质量与水的体积比为1g:90～110ml。
7.权利要求1～6任一项所述的组合物的制备方法，其特征在于，包括：将所述益生菌、枸杞汁、罗汉果水提液和营养基质混合后，在30～40℃下密闭发酵24～48h，得到组合物。
8.权利要求1～6任一项所述的组合物在发酵中的应用；
所述应用包括：将所述组合物与发酵原料混合后密闭发酵13～18d，所述组合物与发酵原料的质量比为0.5～1.5:8.5～9.5。
9.权利要求1～6任一项所述的组合物在制备腹泻药物中的应用。
10.权利要求1～6任一项所述的组合物在制备生物产品中的应用，所述生物产品包括1,3-丁二醇、糠醛、5-甲基-2-呋喃甲醛、2-乙基-己醇、1-甲基-5-氟尿嘧啶和2-甲基环沙林中的一种或几种。
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