CN110755365A - 基于间充质干细胞外泌体的水凝胶及其喷雾剂的制备方法 - Google Patents
基于间充质干细胞外泌体的水凝胶及其喷雾剂的制备方法 Download PDFInfo
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Abstract
本发明涉及一种基于间充质干细胞外泌体的快速凝胶化水凝胶的制备方法，其特征在于，水凝胶由凝胶原液和快速凝胶化反应溶液发生交联反应后得到；其中，以重量为基准，所述凝胶原液包括以下比例的各组分：间充质干细胞外泌体提取液20‑30份、泊洛沙姆407 10‑15份、泊洛沙姆188 5‑10份、高分子调节剂0.3‑1份、天然高分子巯基化衍生物0.4‑1份、保湿剂0.4‑0.8份和水44‑63份；所述凝胶原液的pH为5‑6；所述快速凝胶化反应溶液为二硫代联吡啶类巯基反应活性交联剂的水溶液。
Description
技术领域
本发明涉及药物制剂领域，尤其涉及一种基于间充质干细胞外泌体的水凝胶及其喷雾剂 的制备方法。
背景技术
间充质干细胞(MSC)是一种成体干细胞。MSC可以从骨髓、脂肪组织、肺、肝、脾、 胎盘羊水、脐血脐带等多种组织中分离培养获得。他们具有自我更新能力、组织修复和免疫调节能力，可以向中胚层谱系分化，例如分化为成骨细胞、成软骨细胞、成脂肪细胞等。还能向其他胚层谱系细胞分化，例如向表皮细胞和血管内皮细胞分化。由于MSC易于分离、扩增，有独特的免疫表型和免疫调节的能力，因此被广泛应用于组织修复、组织工程和器官移植免疫治疗等方面。
MSC来源的外泌体是活细胞分泌的膜性囊泡，直径约30～100nm，内含蛋白质、mRNA、 microRNA等，可在细胞间进行物质传递，其疗效类似于MSC的功能，对缺血性心脏病、肾 损伤、肺损伤和肿瘤血管生成均有修复作用。如MSC来源的外泌体在肾脏损伤动物模型中 可促进肾脏修复；在大肠杆菌诱导的肺损伤小鼠模型中，MSC来源的外泌体通过调控角质细 胞生长因子mRNA水平，促进肺上皮修复。在肝纤维化的疾病模型中，MSC来源的外泌体主要抑制EMT减轻肝纤维化程度。外泌体可获得与MSC输注类似的疗效，避免了干细胞治 疗带来的风险，为临床患者提供了治疗新策略。
公开号为CN101338036A的中国专利公开了一种生物相容快速凝胶化水凝胶及其喷雾剂 的制备方法，虽然其可以快速凝胶化，但是水凝胶的载药性以及对于伤口的愈合效果有待提 高。
发明内容
为解决上述技术问题，本发明的目的是提供一种基于间充质干细胞外泌体的水凝胶及其 喷雾剂的制备方法，用于伤口修复时，凝胶原液和快速凝胶化反应溶液喷洒在伤口表面后迅 速反应形成水凝胶，本发明的水凝胶可缓慢释放间充质干细胞外泌体，提高外泌体在创伤表 面的驻留时间，本发明为伤口的修复愈合提供安全、有效、应用方便的制剂。
本发明提供了一种基于间充质干细胞(MSC)外泌体的快速凝胶化水凝胶的制备方法， 水凝胶由凝胶原液和快速凝胶化反应溶液发生交联反应后得到，反应温度为15-25℃；其中，
以重量为基准，所述凝胶原液包括以下比例的各组分：间充质干细胞外泌体提取液20-30 份、泊洛沙姆407(P407)10-15份、泊洛沙姆188(P188)5-10份、高分子调节剂0.3-1份、 天然高分子巯基化衍生物0.4-1份、保湿剂0.4-0.8份和水44-63份；所述凝胶原液的pH为 5-6；
所述快速凝胶化反应溶液为二硫代联吡啶类巯基反应活性交联剂的水溶液；所述快速凝 胶化反应溶液的pH为4-5。
进一步地，间充质干细胞外泌体提取液的浓度为1000-3000μg/L；间充质干细胞外泌体来 源于脐带间充质干细胞、脂肪间充质干细胞、骨髓间充质干细胞、胎盘间充质干细胞、月经 血间充质干细胞或牙髓间充质干细胞中的一种。本发明利用MSC来源的外泌体具有抑制细胞 损伤、诱导组织细胞增殖、促进组织修复的特性，制备出一种用于伤口修复的MSC外泌体快 速凝胶化水凝胶，可以应用于修复各种原因引起的伤口。通过设置特定比例的泊洛沙姆407 和泊洛沙姆188的配伍，使本发明的凝胶原液常温下为低粘度的液态，便于应用。
进一步地，间充质干细胞外泌体提取液的制备方法包括以下步骤：
采用无饲养层培养法，在无血清培养体系中培养间充质干细胞，收集纯化培养液中的外 泌体，即为间充质干细胞外泌体提取液。
进一步地，外泌体是采用旋转超滤结合低温超速离方法收纯化集获得。
进一步地，凝胶原液还包括具有生物相容性的可降解高分子聚合物，所述具有生物相容 性的可降解高分子聚合物包括聚磷酸酯、聚丙烯、(PLA)、聚己内酯(PLC)、聚乙二醇(PEG) 的一种或者几种。本发明的具有生物相容性的可降解高分子聚合物以及P407、P188作为间充 质干细胞外泌体的载药基质。
进一步地，高分子调节剂为海藻酸钠(SA)、透明质酸钠、壳聚糖和羟丙基甲基纤维素 (HPMC)中的一种或者几种。优选地，高分子调节剂为SA或HPMC。高分子调节剂用来 调节水凝胶溶蚀特性和药物释放特性，具体为MSC外泌体的释放特性。
优选地，凝胶原液包括间充质干细胞外泌体提取液20-30份、P407 10-15份、P1885-10 份、PEG 0.1-2份，羟丙基甲基纤维素0.3-1份、天然高分子巯基化衍生物0.4-1份、保湿剂 0.4-0.8份和水44-63份。
PEG除了本身一定的生物粘附性外，生成聚乙二醇-羟丙基甲基纤维素-泊洛沙姆，可聚 集形成小空隙的三维空间网络结构，能够包封外泌体，缓慢释放外泌体，从而提高外泌体在 创伤表面的驻留时间，促进其包含的大量细胞因子深入到创面皮肤基底层，促进皮肤组织分 化、血管新生以及肉芽组织的生成，促进损伤皮肤组织的结构重建与再生。
进一步地，天然高分子巯基化衍生物为巯基乙酰化聚丙烯酰胺衍生物、巯基化壳聚糖、 巯基化透明质酸和巯基化明胶中的一种或者几种。天然高分子巯基化衍生物是能提供二硫键 交联反应的高分子巯基化改性衍生物，高分子巯基化改性衍生物可以与水溶性的巯基反应交 联剂反应，使凝胶原液在特定条件下快速凝胶化形成水凝胶。
进一步地，保湿剂为丙二醇、甘油山梨醇、透明质酸和生育酚中的一种或者几种。
进一步地，二硫代联吡啶类巯基反应活性交联剂为LC-SPDP交联剂、硫化LC-SPDP交 联剂或PDPH交联剂。快速凝胶化反应溶液具有生物相容性和水溶性。
进一步地，快速凝胶化反应溶液的浓度为10-25mmol/L。
在另一方面，本发明还提供了一种采用上述制备方法所制备的基于间充质干细胞外泌体 的快速凝胶化水凝胶，该水凝胶的凝胶时间为1-3s。
本发明的水凝胶具有优良的载药特性，因为空间网状结构的水凝胶空隙小，能够包封外 泌体缓慢释放，提高外泌体在创伤表面的驻留时间。外泌体包含的大量细胞因子能够深入到 创面皮肤基底层促进皮肤组织分化、血管新生以及肉芽组织的生成，促进损伤皮肤组织的结 构重建与再生修复，可以应用于各种原因引起的伤口。本发明的凝胶具有很好的生物相容性， 具有细胞生长基质、创伤修复再生基质、药物缓释载体、伤口敷料等功效。
在又一方面，本发明还提供了一种基于间充质干细胞外泌体的快速凝胶化水凝胶喷雾剂 的制备方法，包括以下步骤：
将上述凝胶原液和快速凝胶化反应溶液分别装入第一储液罐和第二储液罐，然后通过一 个四通装置挤出，在1.5-2.5个标准大气压下雾化混合。
将以上喷雾剂喷涂在皮肤表面后形成水凝胶，喷雾剂的凝胶时间为1-3s。
进一步地，凝胶温度为15-25℃。
伤口处理和修复时，分装在两个储液罐的凝胶原液和快速凝胶化反应液经四通装置挤出 喷洒在伤口表面后迅速反应形成水凝胶，并充分覆盖创面，并有良好的吸水性使得其能充分 吸收伤口的渗出液，维持创面生理性润湿。
四通装置包括三个进口和一个出口，其中两个进口分别连接第一储液罐和第二储液罐， 另一个进口连接压力气体进气管；出口连接有喷雾头；凝胶原液和快速凝胶化反应液通过四 通装置的两个进口，在气体压力下从喷雾头挤出实现雾化，其结构简单，使用方便，不会堵 塞喷雾头，可反复使用(见附图1-2)。
借由上述方案，本发明至少具有以下优点：
本发明提供的基于MSC外泌体的快速凝胶化水凝胶是利用泊洛沙姆等生物相容性可降 解材料作为MSC外泌体的载药基质，加入高分子调节剂调节药物释放特性，及利用天然高分 子巯基化衍生物在特定条件下可迅速反应形成生物相容性凝胶制成。
本发明的水凝胶具有优良的载药特性，因为空间网状结构的水凝胶空隙小，能够包封外 泌体缓慢释放，提高外泌体在创伤表面的驻留时间。外泌体包含的大量细胞因子能够深入到 创面皮肤基底层促进皮肤组织分化、血管新生以及肉芽组织的生成，促进损伤皮肤组织的结 构重建与再生修复，可以应用于各种原因引起的伤口。本发明的凝胶具有很好的生物相容性， 具有细胞生长基质、创伤修复再生基质、药物缓释载体、伤口敷料等功效。
本发明的快速凝胶化水凝胶喷雾剂的两个组分，分装在两个储液罐，用于伤口处理和修 复时，凝胶原液和快速凝胶化反应液经四通装置挤出喷洒在伤口表面后迅速反应形成水凝胶， 并充分覆盖创面，并有良好的吸水性使得其能充分吸收伤口的渗出液，维持创面生理性润湿。
上述说明仅是本发明技术方案的概述，为了能够更清楚了解本发明的技术手段，并可依 照说明书的内容予以实施，以下以本发明的较佳实施例并配合附图详细说明如后。
附图说明
图1是本发明快速凝胶化水凝胶喷雾剂的结构示意图；
图2是四通装置内部气液流向示意图；
图3是本发明实施例2制备的MSC外泌体快速凝胶化水凝胶喷雾剂的MSC外泌体累积 释放曲线；
图4是不同实验组小鼠的伤口在不同时间的变化图；
图5是不同实验组小鼠的皮肤组织HE染色结果；
附图标记说明：
1-第一储液罐；2-第二储液罐；3-含四通装置的喷雾头。
具体实施方式
下面结合附图和实施例，对本发明的具体实施方式作进一步详细描述。以下实施例用于 说明本发明，但不用来限制本发明的范围。
实施例1MSC外泌体提取液的制备
1)间充质干细胞培养传代：
人胎盘间充质干细胞细胞以1×106/cm2的密度接种于培养瓶中。将细胞培养瓶置于37℃、 5％CO2饱和湿度孵育箱中培养，每隔三到四天换液。换液用无血清间充质干细胞培养液。倒 置显微镜下观察细胞生长情况及形态变化，待细胞长至培养瓶底60％面积时，加入无血清培 养液，48h后，收集培养上清液，合并。取30mL上清液，1000×g离心15min除去细胞碎片， 再经0.45μm无菌滤膜过滤到20mL规格的超滤离心管中，4℃条件下1000×g离心70min，得 到含外泌体的浓缩液，将浓缩液移至加有200μL质量浓度为300g/L蔗糖的超速离心管中，4℃ 条件下，100 000×g离心70min，收集底部沉淀，用PBS稀释后，再次100 000×g离心70min， 洗涤1次，最后将收集的外泌体浓缩液采用BCA法进行蛋白浓度测定，0.22μm滤膜过滤除 菌，分装，于-80℃冷藏备用。
2)将上述外泌体浓缩液与外泌体提取试剂混合过夜，离心，去上清，将沉淀重悬于磷酸 盐缓冲液中，调节外泌体浓度为1000μg/L，得到MSC外泌体提取液，在1～8℃保存备用。其 中外泌体提取试剂可以是具有适合分离外泌体的密度梯度的离心分散介质，如特定分子量的 聚乙二醇溶液。
实施例2冷溶法制备快速凝胶化水凝胶喷雾剂
(1)按照以下质量比例称取各原料：上述方法制备的MSC外泌体提取液20份、泊洛沙 姆407(P407)10份、泊洛沙姆188(P188)5份、巯基化壳聚糖1份、高分子调节剂海藻 酸钠0.3份、聚乙二醇0.1份、壳聚糖0.5份、磷酸盐缓冲液和纯水48份。
在搅拌条件下，将处方量泊洛沙姆407、泊洛沙姆188、海藻酸钠按比例缓慢加入无菌注 射用水中，置于4℃冰箱中冷藏24h，使其充分溶胀，得澄清均匀溶液。
然后将得到的溶液与MSC外泌体提取液混合均匀，加入磷酸盐缓冲液，混合均匀后调节 pH值为5.0-6.0，置于4℃冰箱中冷藏24h，使其充分溶胀，得到均匀的凝胶原液。
(2)快速凝胶化反应溶液的制备：用去离子水配制25mmol/L的LC-SPDP溶液。
(3)将制备好的凝胶原液和快速凝胶化反应溶液分装入喷雾器的储液罐中，得到用于伤 口修复的快速凝胶化水凝胶喷雾剂。
具体地，凝胶原液和快速凝胶化反应溶液分装入喷雾器的第一储液罐1和第二储液罐2 中，第一储液罐1和第二储液罐2连接一含四通装置的喷雾头，四通装置包括三个进口和一 个出口，其中两个进口分别连接第一储液罐1和第二储液罐2，另一个进口连接压力气体进 气管；出口连接有喷雾头；凝胶原液和快速凝胶化反应液通过四通装置的两个进口，在高压 气体的作用下从喷雾头挤出实现雾化(见附图1-2)。凝胶化温度为室温。该水凝胶的凝胶时 间为1-3s。
实施例3冷溶法制备快速凝胶化水凝胶喷雾剂
(1)按照以下质量比例称取各原料：MSC外泌体提取液20份、泊洛沙姆407(P407)15份、泊洛沙姆188(P188)7份、巯基乙酰化聚丙烯酰胺1份、高分子调节剂羟丙基甲基 纤维素0.3份、聚乙二醇0.1份、壳聚糖0.5份、磷酸盐缓冲液和纯水48份。
在搅拌条件下，将处方量泊洛沙姆407、泊洛沙姆188、羟丙基甲基纤维素按比例缓慢加 入无菌注射用水中，置于4℃冰箱中冷藏24h，使其充分溶胀，得澄清均匀溶液。
然后将得到的溶液与实施例1制备的MSC外泌体提取液混合均匀，加入磷酸盐缓冲液， 混合均匀后调节pH值为5.0-6.0，置于4℃冰箱中冷藏24h，使其充分溶胀，得到均匀的凝胶 原液。
(2)快速凝胶化反应溶液的制备：用去离子水配制25mmol/L的LC-SPDP溶液。
(3)将制备好的凝胶原液和快速凝胶化反应溶液分装入喷雾器的储液罐中，得到用于伤 口修复的快速凝胶化水凝胶喷雾剂。喷雾器的结构与实施例2相同。凝胶化温度为室温。该 水凝胶的凝胶时间为1-3s。
实施例4实施例2制备的快速凝胶化水凝胶喷雾剂的喷雾释药特性实验
采用蛋白质浓度测定方法研究实施例2制备的基于MSC外泌体快速凝胶化水凝胶喷雾剂 的缓释性能，具体步骤如下：
(1)1mL无菌注射器分别抽吸300μL快速凝胶化水凝胶1、2，37℃孵育30分钟充 分凝胶。
(2)将上述体系置于恒温细胞培养箱中(37℃，5％CO2)模拟体内环境，分别于0h、1h、4h、12h、24h、48h、72h各收集其中1mL含缓释物的PBS溶液，再补充1mL PBS。
(3)微蛋白检测试剂盒(micro BCA kit)及酶标仪检测收集的PBS溶液中的外泌体蛋 白浓度，重复3次。
(4)外泌体蛋白累积释放曲线绘制
用各时间点的外泌体蛋白浓度算得此时缓释液中的蛋白总量，分别加上取PBS溶液时累 计损失的蛋白质量，得到各时间点缓释液中蛋白总量，重复实验3次，取平均值，用平均值 除以外泌体蛋白总负载量，得到各时间点外泌体的缓释比例，绘制MSC外泌体快速凝胶化水 凝胶喷雾剂的MSC外泌体累积释放曲线。结果表明，外泌体蛋白在1h内突释33.3％，其后 速率逐渐减小，总缓释时间超3天(图3)。释药特性实验证明本发明的水凝胶具有优良的载 药特性，高亲水性的空间网状结构能够包封、缓慢释放外泌体，提高外泌体在创伤表面的驻 留时间，其缓释时间可以达3天以上。
其中，外泌体蛋白浓度的测试方法如下：
1)用PBS溶液配置稀释的0.2mg/mL的外泌体蛋白标准液；
2)microBCA工作试剂的准备：
①用以下公式计算所需工作液总体积：
工作液总体积＝(标准曲线测定点数+样品数)×重复次数×每个样品所需的工作液体积
按25:24:1混合工作试剂MA、MB、MC，组成microBCA工作试剂。
3)用移液管将外泌体蛋白标准液及未知样品各150μL分别加入96孔板，每个标准样品 及未知样品设置1个重复。每孔再加入150μL microBCA工作试剂，在摇床上充分混合30秒 后，37℃避光孵育2小时。室温冷却后使用全波长酶标仪测定在562nm波长下的各孔吸光光 度值。
4)各外泌体蛋白标准液和未知样品在562nm波长下的吸光光度值减去空白标准样品各 复孔的平均读数值。用空白样品校正后的各浓度的外泌体蛋白标准液读数绘制标准曲线，用 标准曲线算得各未知样品的蛋白浓度。
实施例5动物实验
本实施例研究了按实施例3方法制备的快速凝胶化水凝胶喷雾剂用于皮肤伤口修复愈合 的性能，具体方法如下：
一、创伤性皮肤损伤模型的建立和皮肤损伤愈合情况测试
(1)实验动物选择健康成年Babl/c小鼠18-20g。根据Babl/c小鼠的性别和体重，按照 雄性0.5mL/100g剂量注射10％水合氯醛，雌性0.35mL/100g剂量注射10％水合氯醛的方法， 对小鼠进行腹腔注射麻醉。
(2)在小鼠应答不能，麻醉完毕之后，使用硫化钠溶液对小鼠背部进行脱毛，以暴露手 术区，脱毛完成后使用95％酒精清洗硫化钠试剂，用干棉球擦干小鼠身躯。
(3)在小鼠左右侧随机选择一边，距脊柱3cm处使用环形切割刀割去直径为0.6cm的 圆形皮肤全层切口，切除的皮肤弃去。
(4)使用随机盲法将小鼠分为两组，一组涂不含外泌体的空白凝胶基质(A组)，一组 喷涂本发明实施例3制备的水凝胶喷雾剂(B组)，每日喷涂一次。每日拍照记录，通过与1cm×1cm大小的黑色色块对比，测定皮肤伤口面积。B组小鼠在愈合过程中伤口收缩明显快于A组(图4)。
图4中，A1-A8依次为A组小鼠在第0d、1d、2d、3d、4d、5d、6d、7d的皮肤创伤性 损伤愈合情况照片，B1-B8依次为B组小鼠在第0d、1d、2d、3d、4d、5d、6d、7d的皮肤创 伤性损伤愈合情况照片。
经过统计分析，B组小鼠的伤口收缩面积明显快于A组，P<0.01,(见表1)。
表1本发明水凝胶喷雾剂促进环形伤口愈合的收缩面积的测试结果
*表示和空白凝胶组对比伤口收缩面积，P<0.05；**表示P<0.01
二、HE染色镜下观察创伤愈合情况：
造模后第7天分别切取两组的小鼠全层皮肤1cm×1cm组织，4％多聚甲醛固定标本，石 蜡包埋，石蜡切片机连续切片(3μm)，用常规方法进行HE染色，免疫组织化学染色，切片 用枸橼酸钠修复20min，加入H2O2，去除内源性过氧化氢酶，山羊血清37℃封闭30min，加小鼠抗兔广谱角蛋白单克隆抗体(1:50稀释，Abcam，英国)，4℃孵育过夜，PBS洗涤后加 生物素标记羊抗小鼠IgG，37℃孵育30min，辣根过氧化物酶室温孵育15min，DAB显色1min， 封片后显微镜观察角蛋白阳性细胞的表达并拍照，如图5所示。图5中，A、B、C分别为正 常皮肤组织、A组、B组小鼠皮肤组织新增上皮情况，结果表明，术后第7天，镜下可见相 对于正常皮肤组织，和A组相比，B组小鼠可见新增上皮生长活跃，有增生的血管腔，大小 不一，真皮层厚度均有增加，皮肤真皮层中存在较明显的类似于正常皮肤的毛囊结构，且比 A组更密集，可见多个椭圆形尚未成熟的毛囊结构(图5中箭头所示)。
动物实验结果显示本发明凝胶喷雾后小鼠环伤口愈合时间加快，免疫组化显示皮肤组织 细胞增值活跃，可见有新增生的血管腔，真皮层厚度增加，创伤组织细胞修复效果良好。MSC 外泌体包含的大量细胞因子能够深入到创面皮肤基底层，促进皮肤组织分化、血管新生以及 肉芽组织的生成，促进损伤皮肤组织的结构重建与再生修复，可以应用于各种原因引起的皮 肤损伤的修复。
以上所述仅是本发明的优选实施方式，并不用于限制本发明，应当指出，对于本技术领 域的普通技术人员来说，在不脱离本发明技术原理的前提下，还可以做出若干改进和变型， 这些改进和变型也应视为本发明的保护范围。
Claims (10)
1.一种基于间充质干细胞外泌体的快速凝胶化水凝胶的制备方法，其特征在于，水凝胶由凝胶原液和快速凝胶化反应溶液发生交联反应后得到，反应温度为15-25℃；其中，
以重量为基准，所述凝胶原液包括以下比例的各组分：间充质干细胞外泌体提取液20-30份、泊洛沙姆407 10-15份、泊洛沙姆188 5-10份、高分子调节剂0.3-1份、天然高分子巯基化衍生物0.4-1份、保湿剂0.4-0.8份和水44-63份；所述凝胶原液的pH为5-6；
所述快速凝胶化反应溶液为二硫代联吡啶类巯基反应活性交联剂的水溶液；所述快速凝胶化反应溶液的pH为4-5。
2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：所述间充质干细胞外泌体提取液的浓度为1000-3000μg/L；间充质干细胞外泌体来源于脐带间充质干细胞、脂肪间充质干细胞、骨髓间充质干细胞、胎盘间充质干细胞、月经血间充质干细胞或牙髓间充质干细胞。
3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：所述凝胶原液还包括具有生物相容性的可降解高分子聚合物，所述具有生物相容性的可降解高分子聚合物包括聚磷酸酯、聚丙烯、聚乳酸、聚己内酯和聚乙二醇中的一种或者几种。
4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：所述高分子调节剂为海藻酸钠、透明质酸钠、壳聚糖和羟丙基甲基纤维素中的一种或者几种。
5.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：所述天然高分子巯基化衍生物为巯基乙酰化聚丙烯酰胺衍生物、巯基化壳聚糖、巯基化透明质酸和巯基化明胶中的一种或者几种。
6.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：所述保湿剂为丙二醇、甘油山梨醇、透明质酸和生育酚中的一种或者几种。
7.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：二硫代联吡啶类巯基反应活性交联剂为LC-SPDP交联剂、硫化LC-SPDP交联剂或PDPH交联剂。
8.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：所述快速凝胶化反应溶液的浓度为10-25mmol/L。
9.一种权利要求1-9中任一项所述的制备方法所制备的基于间充质干细胞外泌体的快速凝胶化水凝胶，其特征在于：水凝胶的凝胶时间为1-3s。
10.一种基于间充质干细胞外泌体的快速凝胶化水凝胶喷雾剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
将权利要求1-9中任一项所述的制备方法中的凝胶原液和快速凝胶化反应溶液分别装入第一储液罐和第二储液罐，然后通过一个四通装置挤出，在1-2.5个标准大气压下雾化混合。
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