CN110753688A - 用于治疗呼吸系统疾病的化合物 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及用于预防或治疗诸如哮喘之类的呼吸系统疾病的新化合物，涉及所述化合物的制备，并涉及包含所述化合物的组合物。本发明还涉及所述化合物以及包含所述化合物的组合物在治疗或预防呼吸系统疾病中的用途。

Description

用于治疗呼吸系统疾病的化合物
本申请要求澳大利亚临时申请2017901611和2017901647的优先权，这两项申请的全部内容通过参引并入本文。
技术领域
本发明提供了在哮喘和相关病症的治疗中显示出潜力的咪唑基化合物。
背景技术
哮喘是一种涵盖各种不同类型疾病的综合征，其在其严重性以及其原因和触发因素方面不同。哮喘综合征的共同特征是可逆的气道阻塞、气道高反应性和气道炎症，其中最突出的特征是除激活肥大细胞之外气道壁被嗜酸性粒细胞和T淋巴细胞浸润。
目前的哮喘药物包括短效和长效的β2-肾上腺素受体选择性激动剂(SABA和LABA)和吸入皮质类固醇激素(ICS)。现在也可以获得Ultra-LABA。短效和长效的毒蕈碱受体拮抗剂(SAMA和LAMA)通常与其他支气管扩张剂和抗炎药、尤其是ICS联合使用于一些患者。白三烯受体拮抗剂(LTRA)也可以加入到不同的治疗方案中。最近，对嗜酸性粒细胞的化学引诱物比如白细胞介素-5进行中和的单克隆抗体美泊利单抗已被证明在选定的患者中具有除ICS和LABA组合之外的益处。然而，特别是对于严重的哮喘，患者仍然是有症状的并且具有周期性的疾病加重，该周期性的疾病加重称为恶化。在严重哮喘的药物治疗中存在相当大的未满足的需求。这些哮喘恶化在大多数情况下被认为是由下呼吸道的呼吸系统病毒感染引起的。引起这些恶化的病毒包括呼吸系统合胞病毒、流感病毒和鼻病毒，它们会感染呼吸系统上皮。哮喘个体的上皮被认为对这种感染特别敏感，并且牵涉炎性反应的恶化。
研究表明TGF-β能够损害ICS的有效性。此外，本发明人已经证明气道上皮的病毒感染通过诱导TGF-β活性而损害ICS活性。靶向TGF-β的药物具有自身免疫和二尖瓣缺损的风险。本发明人使用化合物PF670462(WO2016/149756)惊奇地鉴定了酪蛋白激酶1δ/ε作为TGF-β诱导的ICS不敏感的介质，并证明了该制剂在逆转类固醇不敏感性中的用途。
与目前的药物相比，能够治疗呼吸系统疾病、能够施用于肺并且能够显示出降低的全身性作用的新型化合物将是期望的。
发明内容
本发明人已发现一系列CK1δ/ε抑制剂，这一系列CK1δ/ε抑制剂设计为在与PF670462相比时实现LogP的增大。增大的LogP是吸入药物的特征，其与增加的肺停留时间强烈相关，因此与更大的剂量间隔相关，通常提供每天两次或一次给药，同时使系统性暴露最小化。一般而言且令人惊讶地，该系列在哮喘相关的测定中显示了与PF670462相似的活性。
这些结果是令人惊讶的，因为如本领域技术人员所知，无法预测活性化合物与其类似物之间的物理性质的显著差异对活性的影响。
此外，已表明N-甲基类似物比PF670462更有效，并保持广谱活性，包括防止TGFβ诱导的ICS不敏感的能力和对TGF-β和TNF-α诱导的纤维和炎症生长因子和细胞因子的抑制。
因此，一方面，本发明提供了式(I)的化合物或其盐、溶剂合物、对映异构体、前药或多晶型物：
Figure BDA0002314826310000021
其中：
R1和R2是：
(i)各自独立地选自由H、C1-6烷基、C2-6炔基、C1烷基C6芳基、C6芳基、C3-6环烷基和C3-5杂环基组成的组；或
(ii)R1和R2与R1和R2所附接的氮原子一起形成杂环基或杂芳基；
R3选自由F、Cl、Br、I、CH3、OCH3、OCF2H、OCF3、CO2H和CO2C1-10烷基组成的组；
R4选自由C0-3烷基C3-12环烷基、C1-12烷基、C1-10烷基C6芳基、C1-6烷基OC1-6烷基C6芳基、C0-6烷基杂芳基和C0-6烷基杂环基组成的组；
其中，R1、R2、R3和R4中的每一者任选被取代。
本发明还提供了式(Ia)的化合物或其盐、溶剂合物、前药或多晶型物：
Figure BDA0002314826310000031
其中：
R1和R2是：
(i)各自独立地选自由H、C1-6烷基、C2-6炔基、C6芳基和C3-5杂环基组成的组；或
(ii)R1和R2与R1和R2所附接的氮原子一起形成杂环基团；
R3选自由F、Cl、Br、I和CH3组成的组；
R4选自由C0-3烷基C3-12环烷基、C1-12烷基和C0-6烷基杂环基组成的组；
其中，R1、R2、R3和R4中的每一者任选被取代。
在另一方面，提供了一种治疗或预防有需要的受试者的呼吸系统疾病的方法，所述方法包括：向受试者施用治疗有效量的式(I)的化合物或其盐、溶剂合物、对映异构体、前药或多晶型物，从而治疗或预防受试者的呼吸系统疾病。
在另一方面，提供了一种治疗或预防有需要的受试者的呼吸系统疾病的方法，所述方法包括：向受试者施用治疗有效量的式(Ia)的化合物或其盐、溶剂合物、对映异构体、前药或多晶型物，从而治疗或预防受试者的呼吸系统疾病。
还提供了用于治疗或预防受试者的呼吸系统疾病的式(I)的化合物或其盐、溶剂合物、前药或多晶型物。
还提供了用于治疗或预防受试者的呼吸系统疾病的式(Ia)化合物或其盐、溶剂合物、前药或多晶型物。
呼吸系统疾病可以选自哮喘、慢性阻塞性肺病、间质性肺病(例如特发性肺纤维化)以及与组织重塑、原发性或继发性肺肿瘤、枯草热、慢性和急性鼻窦炎、以及慢性和急性呼吸道病毒、真菌和细菌感染相关的其它病症。
在另一方面，提供了一种改善有需要的受试者的呼吸系统功能的方法，所述方法包括：向受试者施用治疗有效量的式(I)的化合物或其盐、溶剂合物、对映异构体、前药或多晶型物，从而改善受试者的呼吸系统功能。
在另一方面，提供了一种改善有需要的受试者的呼吸系统功能的方法，所述方法包括：向受试者施用治疗有效量的式(Ia)的化合物或其盐、溶剂合物、对映异构体、前药或多晶型物，从而改善受试者的呼吸系统功能。
本发明还提供了一种用于改善受试者的呼吸系统功能的式(I)的化合物或其盐、溶剂合物、前药或多晶型物。
还提供了一种用于改善受试者的呼吸系统功能的式(Ia)的化合物或其盐、溶剂合物、前药或多晶型物。
呼吸系统功能的改善可以选自肺收缩水平的降低、呼吸系统弹性刚度的降低和/或呼吸系统可以伸展的容易程度的提高。优选地，所述改善选自肺收缩水平的降低和呼吸系统弹性刚度的降低。在另一方面，提供了一种组合物，其包含根据式(I)的化合物或其盐、溶剂合物、前药或多晶型物以及药学上可接受的赋形剂。
在另一方面，提供了一种组合物，其包含根据式(Ia)的化合物或其盐、溶剂合物、前药或多晶型物以及药学上可接受的赋形剂。
该组合物可以配制成用于口服给药或通过吸入或注射给药。
还描述了本发明的化合物或组合物在制备用于治疗或预防受试者的呼吸系统疾病的药物中的用途。
如本文所使用的，除非上下文另有要求，否则术语“包括”和该术语的变体，比如“包括有”、“包含”和“包含有”并不意在排除另外的添加物、组分、整体或步骤。
在说明书中对任何现有技术的参考不是承认或暗示该现有技术形成任何司法管辖区中的公知常识的一部分或者该现有技术可以合理地预期到被本领域技术人员理解、认为是相关的和/或与其他现有技术组合。
根据以示例方式且参照附图给出的以下描述，本发明的其他方面和前述段落中所描述方面的其他实施方式将变得明显。
附图说明
图1：在BEAS-B细胞试验中将SS9-010的作用与PF670462的作用进行了对比，该试验测定糖皮质激素调节基因的诱导作用，该基因比如为编码蛋白质上皮钠通道α亚基的SCNN1A。
图2：在与图1所描述的实验相同的实验中，测量了纤维原纤溶酶原激活物抑制剂-1(PAI-1)的表达。
图3：将BEAS-2B细胞暴露于TNF-α，用SS9-010或PF670462(1-10μM)进行预处理30分钟(不达30分钟)。
图4：在A549细胞中，用(0.1-10μM)的PF670462或SS9-010浓度依赖性预处理可抑制PAI-1和CTGF mRAN水平，并且恢复TGFβ(100pM)诱导的E钙黏着蛋白mRNA水平的抑制。
图5：示出了通过与PF670462作用的程度和效力进行对比的方式的抗纤维化剂尼达尼布的作用。
图6：示出了CK1抑制剂PF670462和SS9-010(1-10μM)对培养上清液中的TNF-α(10ng/ml)诱导的IL-8mRNA表达增加和对免疫反应性IL-8水平的影响。
图7：来自图6中所描绘的相同实验的上清液中CSF-2(GM-CSF)的表达及其免疫反应水平。
图8：定义了与本发明的方法相关的许多已知化合物。
图9：吸入SS9-010对博来霉素诱导的BAL蛋白渗漏、BAL细胞募集以及小鼠肺中肺纤维形成基因表达的影响。在第0天，对雌性C57BI/6小鼠经鼻腔施用博来霉素或盐水。在第-1天至第3天通过每天吸入浓度为1mg/mL的气雾剂持续15分钟且每天一次的方式施用SS9-010。评估支气管肺泡灌洗(BAL)蛋白和BAL细胞数。在第3天还评估了肺纤维发生基因表达。数据表示为平均值±SEM(n＝6)。
图10：腹膜内注射SS9-010对博来霉素诱导的BAL蛋白渗漏、BAL细胞募集以及小鼠肺中肺纤维发生基因表达的影响。在第0天，给雌性C57BI/6小鼠腹膜内施用博来霉素或盐水。从第-1天至第3天施用SS9-010(3mg/kg/天或10mg/kg/天，ip)。评估支气管肺泡灌洗(BAL)蛋白和BAL细胞数。在第3天还评估了肺纤维发生基因表达。数据表示为平均值±SEM(n＝4盐水组，n＝5其他组)。
图11：研究了雌性C57BL6小鼠口服(管饲)PF670462或SS87-058的作用，重点是肝基因表达。在第0天经鼻腔施用一定剂量的博来霉素之后的3天内，在整个4天的时间内施用30mg/kg/po的PF670462或SS8-058导致编码纤维发生基因产物PAI-1和TMP1的mRNA的基线水平显著降低。数据表示为平均值±SEM(n＝4)。
图12：响应于在接受SS9-010(估计沉积剂量为1μg)或盐水的吸入的假致敏或卵清蛋白(OVA)致敏的BALB/c小鼠中测量的吸入乙酰甲胆碱(MCh)的气道高反应性(AHR)。对阻力(Rn)、弹回率(E)和顺应性(C)进行记录以评估肺的机械变化。数据表示为平均值±SEM(n＝6)。
具体实施方式
应当理解的是，在本说明书中公开和限定的本发明扩展到文本或附图中提到的或者从文本或附图中变得明显的两个或更多个单独特征的所有替代组合。所有这些不同的组合构成了本发明的各种替代方面。
现在将详细参考本发明的某些实施方式。虽然将结合实施方式来描述本发明，但是将理解的是，其意图不是将本发明限制于那些实施方式。相反，本发明旨在涵盖所有的替代方案、修改和等同物，这些替代方案、修改和等同物可以包括在由权利要求限定的本发明的范围内。
本领域技术人员将认识到许多与本文所描述的方法和材料类似或等同的方法和材料，其可用于实施本发明。本发明决不限于所描述的方法和材料。应当理解的是，在本说明书中公开和限定的本发明扩展到文本或附图中提到的或者从文本或附图中变得明显的两个或更多个单独特征的所有替代组合。所有这些不同的组合构成了本发明的各种替代方面。
本文引用的所有专利和出版物的全部内容都通过参引并入本文。
为了解释本说明书的目的，以单数形式使用的术语也将包括复数形式，反之亦然。
本发明提供了式(I)化合物或其盐、溶剂化物、前药或多晶型物：
Figure BDA0002314826310000061
其中：
R1和R2是
(i)各自独立地选自由H、C1-6烷基、C2-6炔基、C1烷基C6芳基、C6芳基、C3-6环烷基和C3-5杂环基组成的组；或者
(ii)R1和R2与R1和R2所附接至的氮原子一起形成杂环基团或杂芳基团；
R3选自由F、Cl、Br、I、CH3、OCH3、OCF2H、OCF3、CO2H和CO2C1-10烷基组成的组；
R4选自由C0-3烷基C3-12环烷基、C1-12烷基、C1-10烷基C6芳基、C1-6烷基OC1-6烷基C6芳基、C0-6烷基杂芳基和C0-6烷基杂环基组成的组；
其中，R1、R2、R3和R4中的每一者任选地被取代。
在一个实施方式中，本发明提供了式(I)化合物，假设该化合物不选自图8中的化合物列表。
在一个实施方式中，本发明提供了式(I)化合物，其中，R1不是H。
在一个实施方式中，本发明提供了式(I)化合物，其中，R1为C1-3烷基。在一个实施方式中，当R1为C1-3烷基时，R2为H。
优选地，R1为被羟基取代的C1-3烷基。
在一个实施方式中，本发明提供了式(I)化合物，其中，R1为C1-3烷基，R2为H。
在一个实施方式中，本发明提供了式(I)化合物，其中，R1为C2-6炔基。R1可以选自C2炔基、C3炔基和C4炔基。在一个实施方式中，当R1为C2-6炔基时，R2为H。
在一个实施方式中，本发明提供了式(I)化合物，其中，R1为C6芳基。在一个实施方式中，当R1为C6芳基时，R2为H。
在一个实施方式中，本发明提供了式(I)化合物，其中，R1为C3-6环烷基。R1可以选自环丁基、环戊基和环己基。在一个实施方式中，当R1为C3-6环烷基时，R2为H。
在一个实施方式中，本发明提供了式(I)化合物，其中，R1为C3-5杂环基。R1可以选自含氧杂环基、含氮杂环基、或含硫杂环基、或含有两个或更多个氧原子、氮原子和硫原子的组合的杂环基。示例包括环氧乙烷基、噻喃基1，3-二氮杂环丁烷基、氧杂环丁烷基、硫杂环丁烷基、吡咯烷基、吡唑烷基、咪唑烷基、四氢呋喃基、1，3-二氧戊环基、四氢吡喃基、四氢噻吩基以及1，2-和1，3-氧硫杂环戊烷基。在一个实施方式中，当R1为C3-5杂环基时，R2为H。
在一个实施方式中，本发明提供了式(I)化合物，其中，R1和R2都相同。例如，R1和R2可以都是H，或者R1和R2可以都是C1-6烷基(例如，甲基、乙基、丙基或丁基)。
在一个实施方式中，本发明提供了式(I)化合物，其中，R1和R2与R1和R2所附接至的氮一起形成杂环基团。
优选地，R1和R2与R1和R2所附接至的氮一起形成吗啉代基团。
在另一优选形式中，R1和R2与R1和R2所附接至的氮一起形成包含4个至8个碳原子的N-杂环基团。
在一个实施方式中，R3选自卤素和CH3。
在一个实施方式中，R3为CH3。
在一个实施方式中，R3为F、Cl、Br或I。
优选地，R3为F。
在一个实施方式中，R4为C0-3烷基C3-12环烷基。
在一个实施方式中，R4为C0-3烷基C3-12环烷基，其中，C3-12环烷基选自环丙基、环丁基、环戊基、环己基和环庚基。
在优选形式中，R4为C3-12环烷基。更优选地，R4选自环丙基、环丁基、环戊基、环己基和环庚基。
在一个实施方式中，R4为C1-2烷基C3-12环烷基。R4可以是C1烷基C3-12环烷基。C3-12环烷基可以选自环丙基、环丁基、环戊基、环己基和环庚基。
在优选形式中，当R4为C0-3烷基C3-12环烷基时，C3-12环烷基为桥接部分。更优选地，R4选自由金刚烷基、降冰片基和螺环烷基部分组成的组。
在一个实施方式中，R4是C1-12烷基。R4可以是甲基、乙基、丙基或丁基。
在一个实施方式中，R4为C0-10烷基C6芳基。
在一个实施方式中，R4为C1-6烷基OC1-6烷基C6芳基。
在一个实施方式中，R4为C0-6烷基杂芳基。
在一个实施方式中，R4为C0-6烷基杂环基。R4可以是螺杂烷基部分。
优选地，R4为3-氮杂环丁烷基、3-吡咯烷基或4-哌啶基。
优选地，当R4为C0-6烷基杂环基并且包含氮原子时，杂环基的氮被基团R5取代，其中，R5选自由C0-3烷基C3-12环烷基、C1-12烷基、C0-10烷基C6芳基、C1-6烷基OC1-6烷基C6芳基、C0-6烷基杂芳基和C0-6烷基杂环基组成的组。
在一个实施方式中，R5选自C1-12烷基和C0-10烷基C6芳基。在一个实施方式中，C0-10烷基C6芳基为C1-6烷基C6芳基。
优选地，R5为C0-3烷基C3-12环烷基。
更优选地，R5为C3-12环烷基或C0-6烷基杂环基。
在另一优选形式中，R5是桥接部分。更优选地，R5选自由金刚烷基、降冰片基和螺环烷基或螺杂烷基部分组成的组。
在一个实施方式中，R1、R2、R3和R4任选地被一个或多个选自OH、C1-6烷氧基、卤素、氨基、巯基和C1-6烷基的基团取代。
本发明还涉及式(Ia)化合物或其盐、溶剂化物、前药或多晶型物：
Figure BDA0002314826310000081
其中：
R1和R2是
(i)各自独立地选自由H、C1-6烷基、C2-6炔基、C6芳基和C3-5杂环基组成的组；或者
(ii)R1和R2与R1和R2所附接至的氮原子一起形成杂环基团；
R3选自由F、Cl、Br、I和CH3组成的组；
R4选自由C0-3烷基C3-12环烷基、C1-12烷基和C0-6烷基杂环基组成的组；
其中，R1、R2、R3和R4中的每一者任选地被取代。
在一个实施方式中，本发明提供了式(Ia)化合物，假设该化合物不选自图8中的化合物列表。
在一个实施方式中，本发明提供了式(Ia)化合物，其中，R1不是H。
在一个实施方式中，本发明提供了式(Ia)化合物，其中，R1为C1-3烷基。R1可以是被羟基取代的C1-3烷基。
在一个实施方式中，本发明提供了式(Ia)化合物，其中，R1为C1-3烷基，R2为H。
在一个实施方式中，本发明提供了式(Ia)化合物，其中，R1为C2-6炔基。R1可以选自C2炔基、C3炔基和C4炔基。在一个实施方式中，当R1为C2-6炔基时，R2为H。
在一个实施方式中，本发明提供了式(Ia)化合物，其中，R1为C6芳基。在一个实施方式中，当R1为C6芳基时，R2为H。
在一个实施方式中，本发明提供了式(Ia)化合物，其中，R1为C3-6环烷基。R1可以选自环丁基、环戊基和环己基。在一个实施方式中，当R1为C3-6环烷基时，R2为H。
在一个实施方式中，本发明提供了式(Ia)化合物，其中，R1为C3-5杂环基。R1可以选自含氧杂环基、含氮杂环基、或含硫杂环基、或含有两个或更多个氧原子、氮原子和硫原子的组合的杂环基。示例包括环氧乙烷基、噻喃基1，3-二氮杂环丁烷基、氧杂环丁烷基、硫杂环丁烷基、吡咯烷基、吡唑烷基、咪唑烷基、四氢呋喃基、1，3-二氧戊环基、四氢吡喃基、四氢噻吩基以及1，2-和1，3-氧硫杂环戊烷基。在一个实施方式中，当R1为C3-5杂环基时，R2为H。
在一个实施方式中，本发明提供了式(Ia)化合物，其中，R1和R2都相同。例如，R1和R2可以都是H，或者R1和R2可以都是C1-6烷基(例如甲基、乙基、丙基或丁基)。
优选地，R1和R2与R1和R2所附接至的氮一起形成吗啉代基团。
在另一优选形式中，R1和R2与R1和R2所附接至的氮一起形成包含4个至8个碳原子的N-杂环基团。
在一个实施方式中，本发明提供了式(Ia)化合物，其中，R3为CH3。在另一实施方式中，R3为F、Cl、Br或I。优选地，R3为F或Cl。
在一个实施方式中，本发明提供了式(Ia)化合物，其中，R4为C0-3烷基C3-12环烷基。
在一个实施方式中，R4为C0-3烷基C3-12环烷基，其中，C3-12环烷基选自环丙基、环丁基、环戊基、环己基和环庚基。
在优选形式中，R4为C3-12环烷基。更优选地，R4选自环丙基、环丁基、环戊基、环己基和环庚基。
在一个实施方式中，R4为C1-2烷基C3-12环烷基。R4可以是C1烷基C3-12环烷基。C3-12环烷基可以选自环丙基、环丁基、环戊基、环己基和环庚基。
在优选形式中，当R4为C0-3烷基C3-12环烷基时，C3-12环烷基为桥接部分。更优选地，R4选自由金刚烷基、降冰片基和螺环烷基部分组成的组。
在一个实施方式中，本发明提供了式(Ia)化合物，其中，R4为C1-12烷基。R4可以是甲基、乙基、丙基或丁基。
在一个实施方式中，本发明提供了式(Ia)化合物，其中，R4为C0-6烷基杂环基。优选地，R4为3-氮杂环丁烷基、3-吡咯烷基或4-哌啶基。R4可以是螺杂烷基部分。
在一个实施方式中，R4为C0-6烷基杂环基并且包含氮原子。氮可以被基团R5取代，其中，R5选自由C0-3烷基C3-12环烷基、C1-12烷基、C0-10烷基C6芳基、C1-6烷基OC1-6烷基C6芳基、C0-6烷基杂芳基和C0-6烷基杂环基组成的组。
在一个实施方式中，R5选自C1-12烷基和C0-10烷基C6芳基。在一个实施方式中，C0-10烷基C6芳基为C1-6烷基C6芳基。
在一个实施方式中，R1、R2、R3和R4任选地被一个或多个选自OH、C1-6烷氧基、卤素、氨基、巯基和C1-6烷基的基团取代。
如本文中所使用的，术语“烷基”是指具有一个至十二个碳原子或者具有在一个与十二个之间的任何范围内的碳原子，即，其包含1个、2个、3个、4个、5个、6个、7个、8个、9个、10个、11个或12个碳原子的直链或支链烃基。烷基任选地被取代基取代，多取代度是允许的。本文所使用的“烷基”的示例包括但不限于甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基、正戊基、异戊基等。
如本文中所使用的，术语“C1-3烷基”、“C1-4烷基”和“C1-6烷基”等是指如上定义的分别含有至少1个和至多3个、4个或6个碳原子或者含有在至少1个与至多3个、4个或6个之间的任何范围内的碳原子的烷基(例如含有2个至5个碳原子，即2个、3个、4个或5个碳原子的烷基也在C1-6的范围内)。当使用术语“C0-2烷基”等时，可以没有烷基或者含有1个或2个碳原子的烷基。
术语“炔基”是指含有2个至6个碳原子，即，2个、3个、4个、5个或6个碳原子的至少部分不饱和的直链或支链烃基。炔基的具体示例是乙炔基、丙炔基、丁炔基、乙炔基和炔丙基。优选地，炔基具有一个或两个三键。三键可以是末端。三键可以是内部的。
如本文中所使用的，术语“卤素”是指氟(F)、氯(Cl)、溴(Br)或碘(I)，术语“卤代”是指卤素基团氟(-F)、氯(-Cl)、溴(-Br)和碘(-I)。优选地，“卤素”是氟或氯。
术语“环烷基”是指非芳族的环状烃环。以类似的方式，术语“C3-7环烷基”是指具有三个至七个碳原子或者具有在三个至七个之间的任何范围内的碳原子的非芳族环状烃环。例如，C3-7环烷基也包括含有4个至6个(即4个、5个或6个)碳原子的环烷基。烷基如上所定义并且可以被取代。可用于本发明的示例性“C3-7环烷基”包括但不限于环丙基、环丁基、环戊基、环己基和环庚基。
环烷基可以任选地稠合至一个或多个杂环或环烷基环。环烷基环可以在环上的任何碳原子处被另一环烷基或杂环部分取代，以形成螺环烷基或螺杂烷基化合物。
环烷基上的两个不相邻的原子可以通过烷基或杂烷基桥接以形成桥接体系。优选地，桥连基的长度为1个至3个原子的长度。
如本文中所使用的，术语“杂环”或“杂环基”是指非芳族杂环，其为饱和的或具有一个或多个不饱和度并且含有一个或多个选自S、S(O)、S(O)2、O或N的杂原子取代。术语“C3-7杂环基”是指具有三个至七个碳原子(即3个、4个、5个、6个或7个碳原子)并且含有一个或多个如本文中所指的杂原子取代的非芳族环状烃环。杂环部分可以被取代，多个取代度是允许的。术语“C3-7杂环基”还包括含有C4-5、C5-7、C6-7、C4-7、C4-6和C5-6碳原子的杂环基。优选地，杂环含有四个至六个碳原子和一个或两个杂原子。更优选地，杂环含有五个碳原子和一个杂原子、或四个碳原子和两个杂原子取代、或五个碳原子和一个杂原子。这种环可以任选地稠合至一个或多个其他“杂环”环或环烷基环。“杂环”部分的示例包括但不限于四氢呋喃、吡喃、氧杂环丁烷、1，4-二恶烷、1，3-二恶烷、哌啶、哌嗪、N-甲基哌嗪基、2，4-哌嗪二酮、吡咯烷、咪唑烷、吡唑烷、吗啉、硫代吗啉、四氢硫代吡喃、四氢噻吩等。
杂环基团可以在环上的任何碳原子处被另一杂环或环烷基部分取代，以形成螺环烷基或螺杂烷基化合物。
杂环基团上的两个不相邻的原子可以进一步通过烷基或杂烷基基团桥接，以形成桥接体系。优选地，桥连基的长度为1个至3个原子的长度。
作为取代的杂环基的示例，术语“C0-2烷基C3-7杂环基”包括杂环基，其或者不含作为化合物与杂环之间的连接基的烷基或者含有包含1个或2个碳原子且作为化合物与杂环之间的连接基的烷基(即，杂环、-CH2-杂环或-CH2 CH2-杂环)。这些杂环可以进一步被取代。
取代的环烷基和杂环基可以被如下所述的任何合适的取代基取代。
如本文中所使用的，术语“芳基”是指任选取代的苯环，或者指稠合至一个或多个任选取代的苯环以形成例如蒽、菲或萘环体系的任选取代的苯环体系。“芳基”的示例包括但不限于苯基、2-萘基、1-萘基、联苯基以及它们的取代衍生物。优选地，芳基包括芳基氨基、芳烷基、芳烷氧基、杂芳基。
如本文中所使用的，术语“杂芳基”是指单环的五、六或七元芳环，或者指包含至少一个单环的五、六或七元芳环的稠合二环或三环芳环体系。这些杂芳基环含有一个或多个氮杂原子、硫杂原子和/或氧杂原子，其中N-氧化物、硫氧化物和二氧化物是允许的杂原子取代，并且可以任选地被至多三个成分取代。本文中所使用的“杂芳基”基团的示例包括呋喃基、噻吩基、吡咯基、咪唑基、吡唑基、三唑基、四唑基、噻唑基、噁唑基、异噁唑基、噁二唑基、氧代-吡啶基、噻二唑基、异噻唑基、吡啶基、哒嗪基、吡嗪基、嘧啶基、喹啉基、异喹啉基、苯并呋喃基、苯并噻吩基、吲哚基、吲唑基、苯并咪唑基及其取代形式。
本文中所使用的“取代基”是指共价键合到目标分子内的原子上的分子部分。例如，“环取代基”可以是共价键合至作为环成分的原子、优选地碳或氮原子的部分比如卤素、烷基或其他本文所述的取代基。本文中所使用的术语“取代的”是指指定原子上的任何一个或多个氢被选自指定取代基的取代基所取代，假设不超过指定原子的正常化合价，并且假设取代产生稳定的化合物，即，可以分离、表征和测试生物活性的化合物。
如在整个说明书中所使用的，术语“任选取代的”或“可以被取代”等表示该基团可以被或可以不被一个或多个非氢取代基进一步取代或者可以与或可以不与一个或多个非氢取代基稠合(以形成多环体系)。对于特定官能团的合适的化学上可行的取代基对于本领域技术人员是明显的。
取代基的示例包括但不限于：
C1-6烷基、C1-6卤代烷基、C1-6卤代烷氧基、C1-6羟基烷基、C3-7杂环基、C3-7环烷基、C1-6烷氧基、C1-6烷基硫烷基、C1-6烷基亚磺酰基、C1-6烷基磺酰基、C1-6烷基磺酰基氨基、芳基磺酰基氨基、烷基羧基、烷基羧基酰胺、氧代、羟基、巯基、氨基、酰基、羧基、氨基甲酰基、芳基、芳氧基、杂芳基、氨基磺酰基、芳酰基、芳酰基氨基、杂芳酰基、酰氧基、芳酰氧基、杂芳酰氧基、烷氧基羰基、硝基、氰基、卤素、脲基或C1-6全氟烷基。在一个实施方式中，环状或杂环取代基可以与取代环状或杂环基团的部分中的碳形成螺环烷基或螺杂烷基取代基。在另一实施方式中，环状或杂环取代基可以是桥接的。
在合适的情况下，这些基团中的任何基团可以进一步被上述基团中的任何基团例如烷基氨基或二烷基氨基、C1-6烷氧基等所取代。
式(I)和(Ia)化合物的盐优选地是药学上可接受的，但将理解的是，非药学上可接受的盐也落入本公开的范围内，这是因为非药学上可接受的盐可以用作制备药学上可接受的盐的中间体。
术语“药学上可接受的”可以用于描述任何药学上可接受的盐、水合物或前药、或任何其他在施用于受试者后能够(直接或间接)提供式(I)化合物或式(Ia)化合物的化合物、或其活性代谢物或残基。
合适的药学上可接受的盐包括但不限于药学上可接受的无机酸的盐或药学上可接受的有机酸的盐，其中，无机酸比如为盐酸、硫酸、磷酸、硝酸、碳酸、硼酸、氨基磺酸和氢溴酸，有机酸比如为乙酸、丙酸、丁酸、酒石酸、马来酸、羟基马来酸、富马酸、苹果酸、柠檬酸、乳酸、粘酸、葡糖酸、苯甲酸、琥珀酸、草酸、苯乙酸、甲磺酸、甲苯磺酸、苯磺酸、水杨酸、对氨基苯磺酸、天冬氨酸、谷氨酸、依地酸、硬脂酸、棕榈酸、油酸、月桂酸、泛酸、鞣酸、抗坏血酸和戊酸。
碱盐包括但不限于与药学上可接受的阳离子——比如钠、钾、锂、钙、镁、锌、铵——形成的盐、烷基铵比如由三乙胺形成的盐、烷氧基铵比如与乙醇胺形成的盐、以及由乙二胺、胆碱或氨基酸——比如精氨酸、赖氨酸或组氨酸——形成的盐。关于药学上可接受的盐的类型及其形成的一般信息是本领域技术人员已知的，并且如一般教科书比如“2002年在Wiley-VCH出版社第1版中P.H.Stahl，C.G.Wermuth发表的“Handbook ofPharmaceutical Salts(药用盐手册)””中所述。
碱性含氮基团可以用下述制剂进行季铵化：比如为诸如甲基、乙基、丙基和丁基氯化物、溴化物和碘化物之类的低级烷基卤化物；二烷基硫酸酯，如二甲基和二乙基硫酸酯；以及其他。
前药包括其中氨基酸残基或两个或更多个(例如两个、三个或四个)氨基酸残基的多肽链共价连接到式(I)或(Ia)化合物的游离氨基和/或酰胺基的化合物。氨基酸残基包括通常用三字母符号表示的20种天然存在的氨基酸，并且还包括4-羟脯氨酸、羟赖氨酸、锁链赖氨酸(demosine)、锁链赖氨酸(isodemosine)、3-甲基组氨酸、norvlin、β-丙氨酸、γ-氨基丁酸、瓜氨酸、高半胱氨酸、高丝氨酸、鸟氨酸和甲硫氨酸砜。前药还包括其中碳酸酯、氨基甲酸酯、酰胺和烷基酯通过前药侧链的羰基碳共价结合到上述式(I)或式(Ia)取代基上的化合物。前药可以包括共价不可逆和可逆抑制剂。
在化合物为固体的情况下，本领域技术人员将理解的是，本发明的化合物、制剂和盐可以以不同的结晶或多晶型形式存在，所有这些形式都在本发明和特定的式的范围内。
术语“多晶型物”包括式(I)或式(Ia)化合物的任何结晶形式，比如无水形式、水合形式、溶剂化物形式和混合溶剂化物形式。
在另一方面，提供了一种组合物，其包含式(I)化合物或该化合物的盐、溶剂化物、前药或多晶型物、以及药学上可接受的赋形剂。
在另一方面，提供了一种组合物，其包含式(Ia)化合物或该化合物的盐、溶剂化物、前药或多晶型物、以及药学上可接受的赋形剂。
合适的剂量水平通常为每天约0.01mg/kg至500mg/kg患者体重，其可以单剂量或多剂量施用。优选地，剂量水平将为每天约0.1mg/kg至约250mg/kg；更优选地每天约0.5mg/kg至约100mg/kg。合适的剂量水平可以是每天约0.01mg/kg至250mg/kg，每天约0.05mg/kg至100mg/kg，或每天约0.1mg/kg至50mg/kg。在该范围内，剂量可以是每天0.05mg/kg至0.5mg/kg、0.5mg/kg至5mg/kg、或5mg/kg至50mg/kg。对于口服给药，组合物优选地以片剂形式提供以用于针对待治疗患者进行给药剂量的对症调整，所述片剂包含1.0毫克至1000毫克活性成分，特别是1.0毫克、5.0毫克、10.0毫克、15.0毫克、20.0毫克、25.0毫克、50.0毫克、75.0毫克、100.0毫克、150.0毫克、200.0毫克、250.0毫克、300.0毫克、400.0毫克、500.0毫克、600.0毫克、750.0毫克、800.0毫克、900.0毫克和1000.0毫克活性成分。化合物可以每天1次至4次、优选地每天一次或两次的方案给药。然而，应当理解的是，对于任何特定患者的具体剂量水平和给药频率可以变化，并且将取决于多种因素，所述多种因素包括所用具体化合物的活性、该化合物的代谢稳定性和作用时间长度、年龄、体重、一般健康状况、性别、饮食、给药模式和时间、排泄速率、药物组合、特定病症的严重性和接受治疗的宿主。本发明的化合物在组合物中的量还取决于组合物中的特定化合物。
在吸入产品的情况下，典型的吸入剂量比其他形式的剂量小，即，对于单次抽吸而言从1微克开始上升到1000微克。在优选形式中，剂量为每口抽吸25微克至250微克。在另一优选形式中，剂量为每口抽吸500微克至1000微克。在另一形式中，剂量选自每口抽吸1微克、2.5微克、10.0微克、25.0微克、50.0微克、75.0微克、100.0微克、150.0微克、200.0微克、250.0微克、300.0微克、400.0微克、500.0微克、600.0微克、750.0微克、800.0微克、900.0微克和1000.0微克或者在这些值之间并包括这些值中的两个值的任何范围。药物可以是每天一口或者一天四次且增加到两口。
药物组合物还可以包含通常用于治疗所公开的病症或病况的其他治疗活性化合物。本领域普通技术人员可以根据常规的药物学原理选择用于联合治疗的合适的药物。治疗剂的组合可以协同作用，以实现本文公开的各种病症或病况的治疗或预防。使用这种方法，人们能够用较低剂量的每种制剂来实现治疗功效，从而降低潜在的不良副作用。
本发明的化合物和组合物可以配制成任何合适的给药途径，所述任何合适的给药途径包括例如局部(例如，经皮或眼部)给药、肺给药、口服给药、口腔给药、鼻部给药、阴道给药、直肠给药或肠胃外给药。本文中所使用的术语肠胃外包括皮下、皮内、血管内(例如，静脉内)、肌内、脊柱、颅内、鞘内、眼内、眼周、眶内、滑膜内和腹膜内注射、以及任何类似的注射或输注技术。在某些实施方式中，适于口服或肠胃外使用的形式的组合物是优选的。合适的口服形式包括例如片剂、锭剂、糖锭、水性或油性悬浮液、可分散粉末或颗粒、乳剂、硬或软胶囊、或糖浆或酏剂。在其他实施方式中，本文提供的组合物可以配制为冻干物。
在优选形式中，组合物适于呼吸道给药。在另一形式中，该组合物适于口服给药。
各种剂量单元各自优选地作为分开剂量的片剂、胶囊、锭剂、糖锭、树胶或其他类型的固体制剂而提供。胶囊可以封装粉末、液体或凝胶。固体制剂可以被吞咽，或者可以是可吮吸或可咀嚼的类型(易碎的或胶状的)。本发明考虑了除泡罩包装之外的剂量单元保持装置，例如为诸如瓶子、管子、罐、包之类的封装件。剂量单元还可以包括药物制剂实践中公知的常规赋形剂、以及可吮吸或可咀嚼的制剂，所述常规赋形剂比如为粘合剂、胶凝剂、填充剂、压片润滑剂、崩解剂、表面活性剂和着色剂。
用于口服使用的组合物还可以包含一个或多个组分比如甜味剂、调味剂、着色剂和/或防腐剂，用以提供吸引人且可口的制剂。片剂含有与适于制备片剂的生理学上可接受的赋形剂混合的活性成分。这些赋形剂包括例如诸如碳酸钙、碳酸钠、乳糖、磷酸钙或磷酸钠之类的惰性稀释剂、诸如玉米淀粉或藻酸之类的成粒剂和崩解剂、诸如淀粉、明胶或阿拉伯胶之类的粘合剂、以及诸如硬脂酸镁、硬脂酸或滑石之类的润滑剂。片剂可以是未包衣的，或者片剂可以通过已知技术包衣以延缓在胃肠道中的崩解和吸收，从而提供较长时间的持续作用。例如，可以使用延时材料比如单硬脂酸甘油酯或二硬脂酸甘油酯。
口服使用的制剂还可以以硬明胶胶囊的形式存在，其中活性成分与惰性固体稀释剂比如碳酸钙、磷酸钙或高岭土混合，或者口服使用的制剂以软明胶胶囊的形式存在，其中活性成分与水或油介质比如花生油、液体石蜡或橄榄油混合。
水性悬浮液含有与适于制备水性悬浮液的赋形剂混合的活性成分。这些赋形剂包括悬浮剂、以及分散剂或润湿剂，其中，悬浮剂比如为羧甲基纤维素钠、甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素、藻酸钠、聚乙烯吡咯烷酮、黄蓍胶和阿拉伯胶，分散剂或润湿剂比如为天然存在的磷脂(例如卵磷脂)、环氧烷烃与脂肪酸的缩合产物比如聚氧乙烯硬脂酸酯、环氧乙烷与长链脂肪醇的缩合产物比如十七亚乙基氧基鲸蜡醇、环氧乙烷与衍生自脂肪酸和己糖醇的偏酯的缩合产物比如聚氧乙烯山梨糖醇单油酸酯、或者环氧乙烷与衍生自脂肪酸和己糖醇酐的偏酯的缩合产物比如聚乙烯脱水山梨醇单油酸酯。水性混悬剂还可以包含一种或多种防腐剂例如对羟基苯甲酸乙酯或对羟基苯甲酸正丙酯、一种或多种着色剂、一种或多种调味剂、以及一种或多种甜味剂比如蔗糖或糖精。
油性混悬剂可以通过将活性成分混悬在植物油比如花生油、橄榄油、芝麻油或椰子油中，或混悬在矿物油如液体石蜡中来配制。油性混悬剂可以含有增稠剂比如蜂蜡、硬石蜡或鲸蜡醇。可以加入甜味剂比如以上所阐述的甜味剂和/或加入调味剂，以提供可口的口服制剂。这种悬浮液可以通过加入抗氧化剂如抗坏血酸来保存。
适于通过加入水来制备水性悬浮液的可分散粉末和颗粒提供了与分散剂或润湿剂、悬浮剂和一种或多种防腐剂混合的活性成分。合适的分散剂或润湿剂和悬浮剂的示例是上面已经提到的那些分散剂或润湿剂和悬浮剂。也可以存在其他赋形剂，比如甜味剂、调味剂和着色剂。
药物组合物还可以是水包油乳剂的形式。油相可以是诸如橄榄油或花生油之类的植物油、诸如液体石蜡的矿物油、或植物油和矿物油的混合物。合适的乳化剂包含天然存在的树胶比如阿拉伯胶或黄蓍胶、天然存在的磷脂比如大豆卵磷脂、和衍生自脂肪酸和己糖醇的酯或偏酯、酸酐比如脱水山梨糖醇单油酸酯、以及衍生自脂肪酸和己糖醇的偏酯与环氧乙烷的缩合产物比如聚氧乙烯脱水山梨糖醇单油酸酯。乳剂还可以包含一种或多种甜味剂和/或调味剂。
糖浆剂和酏剂可以用甜味剂比如甘油、丙二醇、山梨醇或蔗糖来配制。这样的制剂还可以包含一种或多种缓和剂、防腐剂、调味剂和/或着色剂。
本发明的组合物可以配制成用于局部给药，比如用于给皮肤局部给药。用于局部给药的制剂通常包含与活性剂组合的局部载体，其具有或不具有附加的任选组分。
合适的局部载体和附加组分是本领域公知的，并且显然载体的选择将取决于特定的物理形式和递送方式。局部载体包括有机溶剂，所述有机溶剂比如为醇(例如乙醇、异丙醇或甘油)、诸如丁二醇、异戊二醇或丙二醇之类的二醇、诸如羊毛脂的脂族醇，并且包括水和有机溶剂的混合物、以及有机溶剂(比如醇和甘油)的混合物、脂质基材料比如脂肪酸、含有油比如矿物油的酰基甘油、以及天然或合成来源的脂肪、磷酸甘油酯、鞘脂和蜡、蛋白质基材料比如胶原和明胶、硅氧烷基材料(非挥发性和挥发性)、以及烃基材料比如微海绵和聚合物基质。
组合物还可以包括一个或多个适于提高所施用制剂的稳定性或有效性的组分，所述组分比如为稳定剂、悬浮剂、乳化剂、粘度调节剂、胶凝剂、防腐剂、抗氧化剂、皮肤渗透增强剂、保湿剂和持续释放材料。在Martindale的《The Extra Pharmacopoeia》(医药出版社，伦敦1993)和Martin(编辑)的《Remington's Pharmaceutical Sciences》中描述了这些组分的示例。制剂可以包含微胶囊，比如羟甲基纤维素或明胶微胶囊、脂质体、白蛋白微球、微乳液、纳米颗粒或纳米胶囊。
局部制剂可以以各种物理形式进行制备，所述各种物理形式包括例如固体、糊剂、乳膏、泡沫、洗剂、凝胶、粉剂、含水液体、乳液、喷雾剂和皮肤贴剂。这些形式的物理外观和粘度可以由制剂中存在的乳化剂和粘度调节剂的存在和量来控制。固体通常是坚硬的和不可倾倒的，并且通常被配制为棒或条，或者以颗粒形式进行配制。固体可以是不透明的或透明的，并且任选地可以含有溶剂、乳化剂、保湿剂、润肤剂、香料、染料/着色剂、防腐剂、以及其他提高或增强最终产品功效的活性成分。乳液和洗剂通常彼此类似，主要不同在于它们的粘度。洗剂和乳膏剂都可以是不透明的、半透明的或透明的，并且通常含有乳化剂、溶剂、粘度调节剂、保湿剂、润肤剂、香料、染料/着色剂、防腐剂、以及其他增加或增强最终产品功效的活性成分。凝胶可以制备成具有从粘稠或高粘度到稀薄或低粘度的一系列粘度。这些制剂如洗剂和乳膏的制剂也可以含有溶剂、乳化剂、保湿剂、润肤剂、香料、染料/着色剂、防腐剂、以及其他增加或增强最终产品功效的活性成分。液体比乳膏、洗液或凝胶更稀，并且液体通常不含乳化剂。液体局部产品通常包含溶剂、乳化剂、保湿剂、润肤剂、香料、染料/着色剂、防腐剂、以及其他增加或增强最终产品功效的活性成分。
用于局部制剂的乳化剂包括但不限于离子型乳化剂、鲸蜡硬脂醇、非离子型乳化剂如聚氧乙烯油基醚、PEG-40硬脂酸酯、鲸蜡硬脂醇聚醚-12、鲸蜡硬脂醇聚醚-20、鲸蜡硬脂醇聚醚-30、鲸蜡硬脂醇聚醚醇、PEG-100硬脂酸酯和甘油硬脂酸酯。合适的粘度调节剂包括但不限于保护胶体或非离子胶，比如羟乙基纤维素、黄原胶、硅酸镁铝、二氧化硅、微晶蜡、蜂蜡、石蜡和棕榈酸十六烷基酯。凝胶组合物可以通过加入胶凝剂如脱乙酰壳多糖、甲基纤维素、乙基纤维素、聚乙烯醇、聚季铵盐、羟乙基纤维素、羟丙基纤维素、羟丙基甲基纤维素、卡波姆或氨化甘草酸盐来形成。合适的表面活性剂包括但不限于非离子、两性、离子和阴离子表面活性剂。例如，在局部制剂中可以使用聚二甲基硅氧烷共聚醇、聚山梨醇酯20、聚山梨醇酯40、聚山梨醇酯60、聚山梨醇酯80、月桂酰胺DEA、椰油酰胺DEA和椰油酰胺MEA、油基甜菜碱、椰油酰胺丙基磷脂酰PG-二甲基氯化铵和月桂基聚氧乙烯醚硫酸铵中的一者或多者。
防腐剂包括但不限于抗微生物剂以及物理稳定剂和抗氧化剂，其中，抗微生物剂比如为对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸丙酯、山梨酸、苯甲酸和甲醛，物理稳定剂和抗氧化剂比如为维生素E、抗坏血酸钠/抗坏血酸和没食子酸丙酯。合适的保湿剂包括但不限于乳酸和其他羟基酸及其盐、甘油、丙二醇和丁二醇。合适的润肤剂包括羊毛脂醇、羊毛脂、羊毛脂衍生物、胆固醇、凡士林、新戊酸异硬脂基酯和矿物油。合适的香料和颜料包括但不限于FD&C红色40号和FD&C黄色5号。可以包含在局部制剂中的其他合适的附加成分包括但不限于研磨剂、吸收剂、防结块剂、消泡剂、抗静电剂、收敛剂(比如金缕梅)、醇和草本提取物比如甘菊提取物、粘合剂/赋形剂、缓冲剂、螯合剂、成膜剂、调节剂、推进剂、遮光剂、pH调节剂和保护剂。
局部组合物的典型递送模式包括使用手指施用、使用物理施用器比如布、组织、拭子、棒或刷施用、喷雾包括雾、气溶胶或泡沫喷雾、滴管施用、喷洒、浸泡和冲洗。也可以使用控释载体，并且组合物可以被配制成用于透皮给药(例如，作为透皮贴剂)。
药物组合物可以配制成持续释放制剂，比如在给药后产生调节剂的缓慢释放的胶囊。这样的制剂通常可以使用公知的技术制备，并且通过例如口服、直肠或皮下植入或通过在所需的靶部位植入来施用。用于这种制剂中的载体是生物相容的，并且也可以是生物可降解的。优选地，该制剂提供相对恒定水平的调节剂释放。持续释放制剂中所含调节剂的量取决于例如植入部位、释放的速率和预期持续时间、以及待治疗或预防的病症的性质。
药物组合物可以配制为包括喷雾剂、雾剂或气雾剂的吸入制剂，例如以用于呼吸道给药。这对于呼吸系统疾病的治疗、涉及如本文所述的纤维化的气道或肺的病症的治疗可能是特别优选的。吸入制剂可以用于上呼吸道(包括鼻腔、咽和喉)和下呼吸道(包括气管、支气管和肺)。对于吸入制剂，本文提供的组合物或组合可以通过本领域技术人员已知的任何吸入方法递送。这种吸入方法和装置包括但不限于具有比如HFA的推进剂或者生理和环境可接受的推进剂的计量剂量吸入器。其他合适的装置是呼吸操作吸入器、多剂量干粉吸入器和气溶胶喷雾器。用于本主题方法的气雾剂制剂通常包括推进剂、表面活性剂和共溶剂，并且可以被填充到由合适的计量阀封闭的常规气雾剂容器中。根据应用是上呼吸道(包括鼻腔、咽和喉)还是下呼吸道(包括气管、支气管和肺)，可以使用不同的装置和赋形剂，并且可以由本领域技术人员确定。此外，本领域技术人员还已知用于制备本文中所描述的、在吸入器比如干粉吸入器中使用的化合物的微粉化和纳米颗粒形成的方法。
吸入剂组合物可以包括含有活性成分的液体或粉末组合物，其适于雾化和支气管内使用，或适于通过分配计量剂量的气雾剂单元给药的气雾剂组合物。合适的液体组合物包含在水性的、药学上可接受的吸入剂溶剂比如等渗盐水或抑菌水中的活性成分。溶液借助于泵或挤压致动的雾化喷雾分配器或通过任何其他常规方式施用，以引起或使得必需剂量的液体组合物被吸入患者的肺中。用于给药的合适制剂——其中，载体是液体——例如鼻喷雾剂或滴鼻剂包括活性成分的水溶液或油性溶液。Ibraim等人的医疗器械：证据和研究2015:8 131-139中描述了吸入药物递送装置的示例，并被预期用于本发明。
在另一方面，提供了一种治疗或预防有需要的受试者的呼吸系统疾病的方法，该方法包括给受试者施用治疗有效量的式(I)化合物或其盐、溶剂化物、对映异构体、前药或多晶型物，从而治疗或预防受试者的呼吸系统疾病。
还提供了式(I)化合物或其盐、溶剂化物、前药或多晶型物，以用于治疗或预防有需要的受试者的呼吸系统疾病。
还描述了一种式(I)化合物或其盐、溶剂化物、前药或多晶型物在制备用于治疗或预防有需要的受试者的呼吸系统疾病的药物中的用途。
在另一方面，提供了一种治疗或预防有需要的受试者的呼吸系统疾病的方法，该方法包括给受试者施用治疗有效量的式(Ia)化合物或其盐、溶剂化物、对映异构体、前药或多晶型物，从而治疗或预防受试者的呼吸系统疾病。
还提供了式(Ia)化合物或其盐、溶剂化物、前药或多晶型物，以用于治疗或预防有需要的受试者的呼吸系统疾病。
还描述了一种式(Ia)化合物或其盐、溶剂化物、前药或多晶型物在制备用于治疗或预防有需要的受试者的呼吸系统疾病的药物中的用途。
如本文中所使用的，“预防(preventing)”或“预防(prevention)”旨在至少指获得疾病或病症的风险(或易感性)的可能性的降低(即，在可能暴露出疾病症状或者易患疾病但尚未经历或显示疾病症状的患者中，使得疾病的临床症状中的至少一种临床症状不发展)。本文提供了用于识别这些患者的生物学和生理学参数，并且这些参数也是医生所熟知的。
术语“治疗(treatment)”或“治疗(treating)”受试者包括给受试者应用或施用本发明的化合物(或向来自受试者的细胞或组织应用或施用本发明的化合物)，目的是延迟、减缓、稳定、治愈、愈合、减轻、缓解、改变、补救、减轻、恶化、改善、改进或影响疾病或病症、疾病或病症的症状、或疾病或病症的风险(或易感性)。术语“治疗”是指在损伤、病理或病症的治疗或改善中成功的任何指示，包括任何客观或主观参数比如减轻；缓解；降低恶化率；减轻疾病的严重性；稳定、减轻症状或使损伤、病理或病症对受试者更耐受；减缓退化或衰退的速率；使退化的终点较少衰弱；或改善受试者的身体或精神健康。
本文中所使用的术语“拮抗”是指“降低”或“减少”。足够的时间段可以是一周、或1周至1个月、或1个月至2个月、或2个月或更长。对于慢性病症，本发明的化合物可以有利地给药终身时间。
术语“呼吸”是指氧气被吸入体内并且二氧化碳通过包括鼻、咽喉(throat)、喉(larynx)、气管、支气管和肺的身体系统排出的过程。
术语“呼吸疾病”或“呼吸病症”是指可能涉及影响呼吸系统的组成部分的炎症和/或组织重塑的几种疾病中的任一种疾病，所述呼吸系统的组成部分包括上呼吸道(包括鼻腔、咽和喉)和下呼吸道(包括气管、支气管和肺)。这些疾病包括肺纤维化(间质性肺病)、鼻窦炎、流感、结节病、支气管癌(包括但不限于肺的非小细胞癌和小细胞癌，以及来自其他器官的肿瘤的肺转移)、矽肺、尘肺、急性肺损伤、通气诱导的肺损伤、先天性肺气肿、支气管肺发育不良、支气管扩张、肺不张、鼻息肉、石棉沉滞症、间皮瘤、肺嗜酸细胞增多、弥漫性肺出血综合征、闭塞性细支气管炎、肺泡蛋白沉积症、影响肺的胶原和血管病症、以及咳嗽。优选地，呼吸疾病是阻塞性气道疾病，此类疾病包括哮喘病症，包括花粉热、变应原诱导的哮喘、运动诱导的哮喘、污染诱导的哮喘、冷诱导的哮喘、应激诱导的哮喘和病毒诱导的哮喘、肥胖相关的哮喘、职业性哮喘、暴风雨诱导的哮喘、哮喘COPD重叠综合征(ACOS)慢性阻塞性肺病，其包括具有正常气流的慢性支气管炎、具有气道阻塞的慢性支气管炎(慢性阻塞性支气管炎)、肺气肿、哮喘性支气管炎和大疱性疾病、以及其他涉及炎症的肺病，其包括囊性纤维化、鸽子氏病、农夫肺、急性呼吸窘迫综合征、真菌性、病毒性、细菌性肺炎、混合型或未知病因、吸入或吸入损伤、肺中脂肪栓塞、肺的酸中毒性炎症、急性肺水肿、急性高山病、心脏手术后、急性肺高血压、新生儿的持续性肺高血压、围产期吸入综合征、透明膜病、急性肺血栓栓塞、肝素-鱼精蛋白反应、脓毒症、哮喘持续状态和缺氧。上呼吸道和下呼吸道中的炎症可以与病毒感染或过敏原有关或由病毒感染或过敏原引起。预期的是，单独或与糖皮质激素共同给药时化合物的抗炎活性将使它们特别适合于治疗这些疾病或病症。
呼吸系统疾病或病症可以与过敏原(比如房尘螨)相关或由过敏原引起。呼吸系统疾病或病症可以是过敏原诱导的炎症的结果。本发明特别适用于气道或肺的过敏性疾病和该疾病的恶化，比如由病毒感染(例如RSV感染)引起的恶化。
呼吸系统疾病的症状可以包括咳嗽、产生过量痰液、气促感或具有听得见的喘息的胸闷感。锻炼能力可能相当有限。在哮喘中，作为基于体重、身高和年龄的列线图预测的百分比的FEV1.0(一秒内的用力呼气体积)可以减小，用力呼气中的峰值呼气流速也可以减小。在COPD中，FEV1.0作为强制肺活量(FVC)的比率通常降低至小于0.7。在IPF中，FVC有渐进性下降。这些病症中的每一种病症的影响还可以通过失去工作/上学的天数、睡眠紊乱、需要支气管扩张药、需要糖皮质激素包括口服糖皮质激素来测量。这些病症的影响的进一步测量包括经验证的健康相关生活质量测量。包括但不限于X射线、高分辨率计算机断层摄影、磁共振成像、正电子发射断层摄影、超声、光学相干断层摄影和荧光透视的医学成像程序也可以用于评估疾病和治疗反应。
呼吸系统疾病的存在、改善、治疗或预防可以通过受试者或其活组织检查的任何临床或生化相关方法进行。例如，测量的参数可以是肺功能的存在或程度、阻塞的体征和症状；运动耐受性；夜间唤醒；上学或工作所损失的天数；支气管扩张药的使用；ICS剂量；口服GC使用；需要其他药物；需要医学治疗；住院。
如本文中所使用的，术语“哮喘”是指特征在于由以下三个主要因素中的任一个因素或组合引起的阵发性呼吸困难的呼吸病症：1)支气管痉挛(即，由于气道肌肉收缩引起的可变和可逆的气道阻塞)，2)气道内层的炎症，和3)导致气道中粘液过多的支气管高反应性，其可由暴露于过敏原或过敏原组合(即，尘螨和霉菌)、病毒或细菌感染(即，普通感冒病毒)、环境污染物(即，化学烟气或烟雾)、体力消耗(即，在锻炼期间)、压力或吸入冷空气触发。如本文中所使用的，术语“哮喘病症”是指个体在暴露于该个体的任何一个或多个哮喘触发物后遭受哮喘发作的特征。个体的特征可以是患有例如过敏原诱导的哮喘、运动诱导的哮喘、污染诱导的哮喘、病毒诱导的哮喘或冷诱导的哮喘。
哮喘治疗的功效可以通过本领域公知的方法来测量，例如肺功能的增加(肺活量测定)、哮喘恶化的减少、晨峰呼气流速的增加、救援药物使用的减少、白天和夜间哮喘症状的减少、无哮喘天数的增加、哮喘恶化时间的增加和一秒钟用力呼气体积的增加(FEV1.0)。
本文可互换使用的术语“慢性阻塞性肺病”和“COPD”是指特征在于最大呼气流量减小和肺的强制排空缓慢的慢性病症或病症的组合，其在几个月内没有显著变化并且不能或仅最低限度地用传统支气管扩张剂逆转。最常见的是，COPD是慢性支气管炎和肺气肿的组合，慢性支气管炎即连续两年存在超过三个月的咳嗽和痰液，肺气肿即肺泡损伤。然而，COPD可以涉及具有正常气流的慢性支气管炎、具有气道阻塞的慢性支气管炎(慢性阻塞性支气管炎)、肺气肿、哮喘性支气管炎和大疱性疾病、以及其组合。慢性阻塞性肺病是一种通常但不排他地由暴露于烟草烟雾诱导的慢性肺损伤而引起的病症。其他有害的气载污染物比如室内烹饪废气和汽车废气可能长期导致COPD或增加COPD的风险，老化也是如此。
短语“涉及纤维化的气道或肺的病症”或“具有纤维化组成部分的气道或肺的病症”包括其中在气道或肺中形成或发展过量纤维结缔组织(纤维化)从而导致形成瘢痕(纤维化)组织的任何疾病或病症。这包括间质性肺病，例如肺纤维化、肺部纤维化或特发性肺纤维化(IPF)。更准确地说，肺纤维化是引起肺泡和肺间质组织的肿胀和瘢痕形成的慢性疾病。疤痕组织取代健康组织并引起炎症。这种对肺组织的损伤导致肺的僵硬，这随后使得呼吸越来越困难。肺部纤维化可能是由辐射损伤或暴露于治疗剂如博来霉素引起的。
“特发性肺纤维化(IPF)”是特发性间质性肺炎(IIP)的具体表现，是一种类型的间质性肺病。间质性肺病，也称为弥漫性实质肺病(DPLD)，是指影响间质的一组肺病。在显微镜下，来自IPF患者的肺组织显示了一组特征性的组织学特征，称为常见间质性肺炎(UIP)。因此UIP是IPF的病理表现。
气道或肺涉及纤维化的病症、特别是肺纤维化/肺部纤维化或特发性肺纤维化的存在、改善、治疗或预防可以通过受试者或其活组织检查的任何临床或生化相关方法进行。例如，FVC的下降率或肺的高分辨率计算机断层摄影图像的出现在诊断IPF中可能是有用的。此外，测量的参数可以是纤维化的存在或程度、胶原蛋白、纤连蛋白或另一细胞外基质蛋白的含量、细胞或细胞中任何细胞外基质组分的增殖速率或细胞转分化成肌成纤维细胞。
在一个实施方式中，呼吸系统疾病选自哮喘、慢性阻塞性肺病、间质性肺病(例如特发性肺纤维化)和其他与组织重塑、原发性或继发性肺肿瘤、枯草热、慢性和急性鼻窦炎和慢性和急性呼吸系统病毒、真菌和细菌感染相关的病症。
在一个实施方式中，呼吸功能的改善可以选自肺收缩水平的降低、呼吸系统弹性刚度的降低、和/或呼吸系统可以被伸展的容易度的增加。优选地，改善选自肺收缩水平的降低和呼吸系统弹性刚度的降低。在另一方面，提供了一种组合物，其包含式(I)化合物或该化合物的盐、溶剂化物、前药或多晶型物、以及药学上可接受的赋形剂。
制剂的治疗有效量取决于特定呼吸系统疾病适应症(例如严重慢性哮喘)的严重性、患者的临床病史和反应、以及主治医师的判断。制剂可以一次或经过一系列治疗施用于患者。可以将初始候选剂量施用于患者，并且通过使用本领域普通技术人员公知的常规技术对该患者的进展进行监测来建立适当的剂量和治疗方案。优选地，活性化合物的治疗有效浓度将在0.1nM至100μM的范围内。更优选地，范围是0.1μM-10μM。然而，应当理解的是，通过吸入递送可能导致气道内的细胞短时间暴露于超过上述浓度的浓度一段时间，同时药物在气道表面流体中被稀释并且也被从气道和肺表面吸收。
在一个方面，本发明的治疗方法还包括施用用于目标疾病适应症的伴随药物。例如，可以与本发明的方法一起使用的伴随哮喘药物(用于慢性和急性两者)包括但不限于：吸入和口服类固醇(例如，倍氯米松、布地奈德、氟尼缩松、氟替卡松、曲安西龙、莫米松)；全身性皮质类固醇(例如，甲基强的松龙、泼尼松龙、泼尼松、地塞米松和地夫可特)；吸入或口服β2-肾上腺素受体激动剂(例如，沙美特罗、福莫特罗、比托特罗、吡布特罗、维兰特罗、特布他林、班布特罗和沙丁胺醇)；色甘酸和奈多罗米；抗过敏眼科药物(例如，地塞米松)；调节转化生长因子-β的产生和作用的药剂，包括吡非尼酮和尼达尼布；甲基黄嘌呤和其他磷酸二酯酶抑制剂(例如，茶碱和美吡拉明-乙酸茶碱，罗氟司特)；白三烯调节剂(例如，扎鲁司特、齐留通、孟加拉司特和普仑司特)；抗胆碱能药(例如，奥托溴铵)；任何形式的其他治疗性抗体(例如，针对白介素5的抗体比如美吡珠单抗、或针对IgE的抗体比如Omalizumab、那些单克隆形式的抗体、Fab、scFV、多价组合物、异种抗体等)，天然或工程化抗体模拟物(例如，抗促成素)或天然、工程化或合成肽；血栓烷A2合成酶抑制剂；血栓烷前列腺素类受体拮抗剂；其他类花生酸调节剂(例如，前列地尔相对于PGE1、地诺前列酮相对于PGE2、依前列醇相对于前列环素和PGI2类似物(例如，PG12贝前列素)、塞曲司特、磷酸二酯酶4同工酶抑制剂、血栓烷A2合成酶抑制剂(例如，奥扎格雷、达米格雷或奥扎格雷)；ditec(低剂量色甘酸二钠和非诺特罗)；血小板活化因子受体拮抗剂；抗组胺剂或组胺拮抗剂：异丙嗪、氯苯那敏、氯雷他定、西替拉嗪、氮卓斯汀；血栓烷A2受体拮抗剂；缓激肽受体拮抗剂(例如，艾替班特)；抑制活化的嗜酸性粒细胞和T细胞募集的药剂(例如，酮替芬)、IL-13阻断剂(例如，可溶性IL-13受体片段)、IL-4阻断剂(例如，可溶性IL-4受体片段)；和结合并阻断IL-13或IL-4的活性的配体以及黄嘌呤衍生物(例如，己酮可可碱)；和趋化因子受体拮抗剂和CRTH2受体拮抗剂。
在某些实施方式中，本发明的治疗方法包括向受试者同时提供抑制性RNA分子(RNA干扰分子)，以便减少、抑制或预防编码靶蛋白的基因的表达。例如，抑制性RNA分子可以用于减少或抑制下述各者中的一者或多者的表达：与病原体(病毒、细菌、真菌)或哺乳动物细胞相关联的蛋白质——包括但不限于酪蛋白激酶1同种型和CLOCK调节网络的其他组分(例如ARNT1，周期1-3)、以及其他有助于呼吸系统中炎性反应的蛋白质比如白介素-5和NALP炎性体。
技术人员熟悉利用抑制性RNA分子以干扰受试者中基因表达的各种方法。例如，抑制性RNA分子可以是下述各者中的任何一者：短干扰RNA(siRNA)、微小RNA模拟物(miRNA)、短发夹RNA(shRNA)或长双链RNA(长dsRNA)分子。抑制性RNA分子可以直接施用于需要治疗的受试者(例如，通过吸入、气管内、口服或经鼻施用或通过胃肠外施用)，或者替代性地，在施用编码双链RNA(dsRNA)分子(能够形成抑制性RNA分子)的多核苷酸(载体)构建体后，在接受治疗的受试者中形成抑制性RNA分子。本领域技术人员还熟悉本领域已知的配制用于施用的抑制性RNA分子的各种方法(例如，在脂质体、纳米颗粒等中)。本发明还包括施用酪蛋白激酶1抑制剂和用于上述目标疾病适应症的药物，其中，任一种或两种都通过吸入施用或配制用于口服施用。
尽管本发明发现了在人类中的应用，但是本发明也可用于治疗性兽医目的。本发明可用于家养动物或农场动物比如牛、羊、马和家禽；用于伴侣动物比如猫和狗；以及用于动物园动物。
如本文中所使用的，“受试者”是指动物，比如哺乳动物或禽类，哺乳动物或禽类包括人、猿、马、牛、绵羊、山羊、狗、猫、豚鼠、大鼠、小鼠、鸡等。
在另一方面，本发明提供了一种试剂盒或制品，其包括如本文所述的式(I)化合物或包含式(I)化合物的药物组合物。
在其他实施方式中，提供了一种用于本文提及的治疗或预防应用的试剂盒，该试剂盒包括：容纳式(I)化合物或容纳包含式(I)化合物的药物组合物的容器；以及带有使用说明的标签或包装插页。
在另一方面，本发明提供了一种试剂盒或制品，其包括本文所述的式(Ia)化合物或含有式(Ia)化合物的药物组合物。
在其他实施方式中，提供了一种用于本文提及的治疗或预防应用的试剂盒，该试剂盒包括：容纳式(Ia)化合物或容纳包含式(Ia)化合物的药物组合物的容器；以及带有使用说明的标签或包装插页。
试剂盒或“制品”可以包括容器和在容器上或与容器相关联的标签或包装插页。合适的容器包括例如瓶、小瓶、注射器、泡罩包装等。容器可以由各种材料比如玻璃或塑料形成。该容器容纳式(I)或式(Ia)化合物或容纳有效治疗该病症的组合物，并且可以具有无菌入口(例如，该容器可以是静脉内溶液袋或具有可被皮下注射针刺穿的塞子的小瓶)。标签或包装插页指示该组合物用于治疗病症。在一个实施方式中，标签或包装插页包括用于使用的说明书，并且标签或包装插页指示出治疗性或预防性组合物可以用于治疗本文中所描述的病症。
试剂盒可以包括(a)治疗性或预防性组合物；以及(b)其中含有第二活性原理或成分的第二容器。本发明的该实施方式中的试剂盒还可以包括包装插页，该包装插页指示组合物和其他活性原理可以用于治疗疾病或预防由本文所述疾病引起的并发症。替代性地或附加地，试剂盒还可以包括第二(或第三)容器，第二(或第三)容器包含药学上可接受的缓冲液，比如抑菌注射用水(BWFI)、磷酸盐缓冲盐水、林格氏溶液和葡萄糖溶液。试剂盒还可以包括从商业和用户观点来看所期望的其他材料，包括其他缓冲剂、稀释剂、过滤器、针头和注射器。
在某些实施方式中，治疗组合物可以以一次性或可重复使用的装置形式提供，该装置包括用于容纳式(I)化合物或式(Ia)化合物的容器，或包含式(I)化合物或式(Ia)化合物的治疗或预防药物组合物。在一个实施方式中，装置是注射器。治疗或预防组合物可以以备用状态或需要混合或添加其他组分的状态提供在装置中。
示例
体外测定
新型CK1δ/ε抑制剂的活性的主要试验是调节气道上皮细胞系BEAS-2B细胞中的基因表达。该试验在几种条件下进行。通常，TGF-β或TNF-α分别用于引发纤维发生基因或炎性基因。在收获细胞RNA以通过RT-qPCR来测量炎症和纤维化标记基因的mRNA水平之前，在添加TGF-β或TNF-α之前30分钟的时间内以10μM的浓度或指定的浓度加入制剂，该TGF-β或TNF-α被孵育另外的20小时，然后在糖皮质激素的一些实验中在实验的最后4小时内添加地塞米松(Dex，30nM)。吸入皮质类固醇(ICS)、布地奈德也用于一些实验中。此外，在所选实验中孵育期结束时收获上清液，以通过ELISA测量CSF-2或IL-8水平，如在(Tran等人(2005)《British Journal of Pharmacology》145,123-131)中所描述的那样。
还在A549肺泡上皮细胞中测定所选的潜在候选物，所述肺泡上皮细胞是用于上皮-间充质转化(EMT)研究的常用细胞模型。在加入TGF-β之前30分钟以指定的浓度加入制剂，TGF-β被再孵育另外的24小时。然后，收获细胞RNA以测量EMT相关基因和纤维发生基因的调节。
图1至图7和表1至表4中的数据表明，新型化合物SS9-010令人惊讶地显示了比PF670462更高的效力，其中，在上皮细胞中对TGF-β-介导的作用具有类似的广谱活性。该化合物的cLogP也高于PF670462。
方法
细胞培养
如前所述，在含有5％(v/v)FCS、15mM HEPES、0.2％(v/v)碳酸氢钠、2mM L-谷氨酰胺、1％(v/v)非必需氨基酸、1％(v/v)丙酮酸钠、5IU/mL青霉素和50μg/mL链霉素的DMEM中培养A549肺泡上皮细胞(ATCC，Manasas，VA，USA)(S.Salem，T.Harris，J.Mok Shiueh Lian，M.Yuen Sin Li，C.R.Keenan，M.J.Schuliga和A.G.Stewart(2012)“转化生长因子-β损害A549肺腺癌细胞系中的糖皮质激素活性”Br Pharmacol.166:2036-2048)。
在实验之前，BEAS-2B细胞和A549细胞在含有0.25％牛血清白蛋白(BSA)和含胰岛素-转铁蛋白-硒的补充物(单体A；CSL，Parkville，墨尔本，澳大利亚)的无血清DMEM中孵育。如所指出的，在暴露于100pM TGF-β1(R&D体系，Minneapolis，MN)或300pM bFGF(Promega，Madison，WI)之前，用一系列合成化合物(0.3μM-10μM)之一处理细胞。
基因表达分析
使用illustra RNaspin Mini RNA分离试剂盒(GE Healthcare)从培养的细胞中提取总RNA。使用高容量RNA-cDNA试剂盒(Applied Biosystems)将RNA提取物逆转录为cDNA。然后，使用QuantStudio 6Flex实时PCR体系、使用iTaq Universal SYBR GreenSupermix和以下热方案：50℃(2分钟)，95℃(10分钟)，然后95℃下40个循环(15秒)，60℃(1分钟)进行实时PCR。针对靶基因测定的循环阈值(CT)值针对18S核糖体RNA(18S rRNA)获得的那些进行标准化，其作为内部对照包括在内。通过解离曲线分析证实特异性PCR产物的产生。
免疫荧光
用于免疫荧光染色的A549细胞被接种于ibiTreat 8室载玻片(ibidi)中并被留下粘附过夜。细胞随后被血清饥饿16小时，然后与PF670462(0.3μM-10μM)预孵育30分钟，然后与TGF-β(100pM)预孵育48小时。细胞在10％中性缓冲福尔马林(Grale Scientific)中被固定15分钟，通过与5％正常山羊血清/0.3％Triton X-100的PBS溶液孵育1小时来封闭非特异性结合位点。使用兔单克隆抗体(克隆24E10；Cat#3195，细胞信号传导)且随后使用AlexaFluor-488缀合的抗-Rabbit F(ab')2次级片段(Cat#4412，细胞信号传导)来检测E-钙黏着蛋白表达。使用同种型对照抗体(克隆DA1E兔IgG；Cat#3900，细胞信号传导)确认特异性结合。然后用DAPI对细胞核进行染色。使用Leica SP5共聚焦显微镜(生物光学显微镜平台，墨尔本大学)对细胞成像。使用Operetta高含量成像系统(生物光学显微镜平台，墨尔本大学)定量细胞形态和免疫荧光染色。
统计分析
所有数据表示为平均值±SEM。通过1-途径ANOVA与Dunnett事后检验或2-途径ANOVA与Bonferroni事后检验进行多组之间的统计学比较。P值小于0.05被认为是统计学显著的。
结果讨论
在图1中，在BEAS-B细胞试验中将SS9-010的作用与PF670462的作用进行了对比，该试验测定糖皮质激素调节基因的诱导作用，该基因比如为编码蛋白质上皮钠通道α亚基的SCNN1A。用CK1δ/ε抑制剂PF670462(1μM、3μM、10μM)或SS9-010(1μM、3μM、10μM)处理血清饥饿的BEAS-2B细胞30分钟，然后用TGF-β1(40pM)处理血清饥饿的BEAS-2B细胞24小时，然后用地塞米松(30nM)刺激4小时。然后提取RNA并通过RT-qPCR进行分析。对于n＝4独立实验，数据表示为平均值±SEM。PF670462和SS9-010的效力是相似的。
在与图1所述相同的实验中，对纤维原纤溶酶原激活物抑制剂-1的表达进行测量(参见图2)。TGF-β和Dex两者都提高了该基因的水平，当TGF-β和Dex加在一起时协同作用。CK1抑制剂浓度依赖性地降低每种刺激的作用，并且进一步降低基线表达。它们在这种作用中的效力是相似的，而与所考虑的病症无关。
在单独的实验中，将BEAS-2B细胞暴露于TNF-α，用SS9-010或PF670462(1μM-10μM)预处理30分钟(不达30分钟)。然后提取RNA并通过RT-qPCR进行分析。每种制剂以相似的效力和最大值抑制TNFα刺激的PAI-1表达(见图3)。对于n＝1，数据表示为平均值±SD(三次技术重复)。
在血清饥饿的A549细胞中，在用(0.1μM-10μM)的PF670462或SS9-010进行预处理之后，在用TGF-β(100pM)进一步处理24小时，浓度依赖性地抑制PAI-1和CTGF表达并且恢复TGF-β(100pM)诱导的E-钙黏着蛋白抑制。SS9-010在其对PAI-1和ECad的作用方面比PF670462明显更有效，但对CTGF的作用没有比PF670462明显更有效，如下表1所示。
图5示出了通过与PF670462作用的程度和效力进行对比的方式的抗纤维化剂尼达尼布的作用。血清饥饿的A549细胞用PF670462(0.1μM-10μM)或尼达尼布(0.01μM-1μM)预处理，然后用TGF-β(100pM)处理另外的24小时。然后提取RNA，并且通过RT-qPCR来测量PAI-1、波形蛋白和E-钙黏着蛋白。对于n＝4独立实验，数据表示为平均值±SEM。
图6示出了CK1抑制剂、PF670462和SS9-010(1μM-10μM)对培养上清液中的TNF-α(10ng/ml)诱导的IL-8表达增加和对免疫反应性IL-8水平的影响。血清饥饿BEAS-2B细胞在暴露于TNF-α(10ng/mL)另外的24h之前经SS9-010或PF670462(1μM-10μM)预处理30分钟。提取RNA并且通过RT-qPCR测量。通过ELISA测量上清液中的促炎细胞因子。对于n＝3独立实验，数据表示为平均值±SEM。在该试验中使用的最低浓度下，CK1抑制剂中的每种抑制剂的作用最大，因此没有关于相对效力的结论，但清楚的是两种制剂都是TNF刺激的BEAS-2B细胞的活性抑制剂。
图7示出了来自图6中所描绘的相同实验的上清液中CSF-2(GM-CSF)的表达及其水平。在CSF-2的情况下，该集落刺激因子的表达和蛋白水平的明显浓度相关降低是明显的，但两种制剂似乎在效力上没有差异。
表1示出了PF670462和SS9-010在调节与上皮间质转化(EMT)相关联的TGFβ-诱导的基因表达变化中的相对效力。EMT是纤维化发病机理的特征，其与器官比如心脏、肾、肝和肺中的上皮肿瘤转移和纤维发生相关，并且已知其造成特发性肺纤维化(IPF)以及被认为造成已知在哮喘和COPD中发生的纤维化。SS9-010在减弱纤维原纤溶酶原激活物抑制剂-1(PAI-1)的诱导和防止E-钙黏着蛋白基因的抑制方面显示了比PF670462显著更高的效力，所述E-钙黏着蛋白基因编码涉及维持分化的上皮细胞的屏障功能和极性的蛋白质。PF670462和SS9-010调节CTGF诱导的效力在统计学上是不可区分的。SS9-010在调节诱导对主要胶原组织重建基因之一Col1A进行编码的基因方面明显更有效。这两种制剂调节TGF-β诱导波形蛋白的效力不能评估，因为PF670462的浓度-反应关系不能拟合。然而，SS9-010的效果在3μM下是显著的，而PF670462(3μM)没有效果。所有这些数据表示在图4中给出的浓度-反应关系的分析。
表1
Figure BDA0002314826310000261
*P值指示PF670462和化合物SS9-010的IC50值为相等的概率。
表2.PF670462和类似物对BEAS-2B细胞中TNF-α和TGF-β诱导的PAI-1基因表达的影响。PAI-1的mRNA水平表示为n＝4独立实验的倍数对照(或如所示)。
Figure BDA0002314826310000262
Figure BDA0002314826310000271
表3.PF670462和类似物对BEAS-2B细胞中TNFα和TGFβ诱导的Col 1A基因表达的影响。Col1A的mRNA水平表示为n＝4个独立实验的倍数对照(或如所示)。
Figure BDA0002314826310000272
Figure BDA0002314826310000281
表4.PF670462和类似物对BEAS-2B细胞中地塞米松诱导的SCNN1A基因表达的TGF-β-诱导抑制的影响。SCNN1A的mRNA水平表示为PF670462、SS9-010和SS8-186的n＝4独立实验或其他化合物的n＝1(一式三份)的倍数对照。
Figure BDA0002314826310000282
体内实验
在肺纤维化的博来霉素模型中进一步测试体外测定中显示的制剂的相对活性。
肺纤维化的博来霉素模型
所有动物实验都是根据来自Melbourne动物伦理大学委员会(AEEC#1513736.1)的伦理指导进行的。六至8周龄的20-25g C57BI/6小鼠(ARC，Perth，澳大利亚)在第0天通过鼻内给药接受35μL盐水或博来霉素(每只小鼠105mU)的治疗，如前所述(Langenbach等人，(2007)Can J Physiol Pharmacol，85,727-738)。使用急性和慢性博来霉素小鼠模型来评估SS9-010体内对肺纤维化的影响。SS9-010通过腹膜内注射全身给药或通过吸入气雾剂局部给药至肺，所述气雾剂使用连接到hudson喷雾器(以5L/min操作15分钟)的氧气浓缩器产生。未接受SS9-010治疗的小鼠施用载体(10％DMSO，90％花生油)。在所有研究期间允许小鼠随意进食和饮水。在每项研究结束时，进行支气管肺泡灌洗(BAL)，从中计数白细胞类型并如前所述测定acelluar蛋白质含量(Langenbach等人，2007)，解剖肺并速冻。从粉碎的冷冻肺组织测定基因表达。
BAL蛋白含量测量
使用BioRad蛋白测定方法对非细胞BAL液中的总蛋白含量进行评估。
BAL细胞数测量
用Erythrosin B(EB)对BAL液中的BAL细胞进行染色，并且借助于血细胞计数器手工计数。通过计算BAL液的返回体积计算总BAL细胞数。
结果讨论
图9示出了吸入SS9-010对博来霉素诱导的BAL蛋白渗漏、BAL细胞募集、肺重量以及小鼠肺中肺纤维形成基因表达的影响。在第0天，对雌性C57BI/6小鼠经鼻腔施用博来霉素或盐水。在第-1天至第3天通过每天吸入由1mg/mL浓度喷雾产生的气雾剂持续15分钟且每天一次的方式施用SS9-010。评估支气管肺泡灌洗(BAL)蛋白和BAL细胞数。在第3天还评估了肺纤维发生基因表达。数据表示为平均值±SEM(n＝6)。SS9-010显示出对BAL蛋白和肺纤维原基因表达的影响以及对BAL细胞数的适度抑制。
图10中示出腹膜内注射SS9-010对博来霉素诱导的BAL蛋白渗漏、BAL细胞募集以及小鼠肺中肺纤维发生基因表达的影响。在第0天，给雌性C57BI/6小鼠腹膜内施用博来霉素或盐水。从第-1天至第3天施用SS9-010(3mg/kg/天或10mg/kg/天，ip)。评估支气管肺泡灌洗(BAL)蛋白和BAL细胞数。在第3天还评估了肺纤维发生基因表达。数据表示为平均值±SEM(n＝4盐水组，n＝5其他组)。全身的SS9-010(3mg/kg/天或10mg/kg/天，ip)对BAL蛋白或BAL细胞数没有影响。SS9-010治疗减少IL-6的诱导，而精氨酸酶-1则没有。
在确定口服PF670462或SS8-058的效果的研究中，在第3天从在第0天用博来霉素经鼻处理的小鼠中收集肝脏，以测量涉及纤维发生的产物的基因表达。从第-1天到第3天，通过管饲法用PF670462或SS8-058(30mg/kg，po)治疗小鼠，每天一次。每种治疗都显著降低了每种纤维发生基因的水平。
体内气道高反应性的测量
急性卵清蛋白诱导的哮喘模型：通过腹膜内注射，用卵清蛋白(50μg)、氢氧化铝(20mg/mL佐剂)和盐水的组合致敏BALB/c小鼠。在第0天，将200μL卵清蛋白混合物施用于每只小鼠，接着在第14天使用22号针头通过腹膜内注射重复给药。在第21天至28天，通过喷雾器(deVilbiss)以2ml/分钟的速率将小鼠每日暴露于盐水中的1％气雾化卵清蛋白30分钟。从第21天至28天，通过吸入使用连接到hudson喷雾器(以5L/min操作15分钟)的氧气浓缩器产生的气雾剂，将SS9-010局部施用于肺。估计沉积剂量为1μg。
肺功能测量：如前所述，使用低频强迫振荡技术的改进和小动物呼吸机(FlexiVent；Scireq，蒙特利尔，QC，加拿大)测量肺功能(Bozanich等人，(2008)RespirPhysiol Neurobiol，162,190-196)。在尸检当天，用氯胺酮和甲苯噻嗪麻醉小鼠，并将小鼠放置在肺功能测试仪器(FlexiVent)上。为了测量气道高反应性，通过气管套管以0.1mg/ml至30mg/ml的剂量经由气雾剂向小鼠施用乙酰甲胆碱5分钟。肺功能作为最终程序进行；用27号针头腹膜内给予氯胺酮(150mg/kg)和甲苯噻嗪(15mg/kg)在盐水中的组合深度麻醉每只小鼠。一旦麻醉完成，就使用解剖刀刀片矢状地在气管肌肉层之前通过皮下组织进行远端切割运动，形成2cm长的手术切口。通过使用钝器解剖纵向切开气管周围的肌肉层以露出气管。将1cm长的1.27mm气管内管插入气管中并用丝线缝合打结，在FlexiVent上给小鼠通气。将小鼠置于SCIREQ FlexiVent系统上，并且被通气以在气管套管附着于系统的情况下以恒定呼吸速率(每分钟150次呼吸)测量肺功能。对一只小鼠评估呼吸力学约60分钟。通过气管内套管或气雾剂给小鼠施用增加剂量的乙酰甲胆碱以建立气道高反应性。测量呼吸阻抗(Zrs)，并且呼吸阻抗被分为气道部分和实质部分以允许计算牛顿阻力(Rn，相当于气道阻力(Raw)，原因在于胸壁的高顺应性、组织阻尼(G)和弹回率(H)，如前所述(Larcombe等人，(2011)Influenza Other Respir Viruses,5,334-342)。
结果讨论
图12示出了响应于在接受SS9-010(估计沉积剂量为1μg)或盐水的吸入的假致敏或卵清蛋白(OVA)致敏的BALB/c小鼠中测量的吸入乙酰甲胆碱(MCh)的气道高反应性(AHR)。评估了抗性(Rn)，其代表肺中收缩的水平。弹回率(E)捕获呼吸系统在通气频率下的弹性刚度。顺应性(C)描述了呼吸系统可以延伸的容易性。数据表示为平均值±SEM(n＝6)。数据证明OVA攻击的小鼠中的中枢气道阻力(Rn)和弹回率显著增加。在接受SS9-010治疗的小鼠中该诱导被减弱。在顺应性变化方面，与单独OVA相比，在OVA/SS9-010组中没有观察到显著差异。
合成
通用
在氘化溶剂中获得质子核磁共振光谱(1H NMR,400,600MHz)和质子去耦碳-13核磁共振光谱(13C NMR，100,150MHz)，其中，残留的氕化(protiated)溶剂作为内标。化学位移之后是多重性、耦合常数(J，Hz)、积分和可能的分配。根据Still等人的方法使用自动化系统进行快速层析。 1 分析薄层色谱(t.l.c.)在铝背衬的2mm厚硅胶60GF254上进行，并且色谱图在紫外灯下显现。通过使用电喷雾电离(ESI)和飞行时间质量分析仪电离样品获得高分辨率质谱(HRMS)。通过Pangborn等人的方法获得干燥THF和CH2Cl2。 2 石油溶剂(pet.spirit)是指石油醚，沸程为40℃-60℃。所有其他市售试剂均按原样使用。
Figure BDA0002314826310000311
4-(二甲氧基甲基)嘧啶-2-基氨基甲酸苄基酯(1)
在-18℃下，向含于CH2Cl2(7.5ml)中的4-二甲氧基甲基嘧啶-2-基胺(0.330g，1.95mmol)和吡啶(0.2ml)的混合物中加入含于CH2Cl2(2.5ml)中的氯甲酸苄酯(2.57ml，18.1mmol)的溶液。将溶液逐渐升温至室温，并且继续搅拌过夜。反应混合物的TLC表明起始原料没有完全消耗。因此，将反应混合物再冷却至-18℃，并且加入另外的氯甲酸苄酯(0.250mL，1.81mmol)。将反应混合物用CH2Cl2稀释，用水洗涤，干燥(MgSO4)，过滤并浓缩。剩余物经急骤层析(EtOAc/石油溶剂2:1)，得到呈白色固体形式的1(0.496g，84％)。1H NMR(CDCl3,400MHz)δ3.39(2×3H,s)、5.21(1H,s)、5.24(2H,s)、7.17(1H,d,J＝5.2Hz)、7.32-7.41(5H,m)、8.33(1H,br s)、8.63(1H,d,J＝5.2Hz)；13C NMR(CDCl3,100MHz)δ54.0，67.5，102.5，113.4，128.5，128.6，128.7，135.8，151.5，157.4，159.3，167.0；对C15H18N3O4(M+H)计算的HRMS(ESI+)为304.1297。实测值为304.1292。
4-甲酰基嘧啶-2-基氨基甲酸苄基酯盐酸盐(2)
向含于THF(1ml)中的1(0.350g，1.15mmol)的溶液中加入4M HCl水溶液(2ml)。将所得混合物加热至40℃过夜，并且然后冷却至室温。将含有醛的盐酸盐的反应混合物不经分离直接用于下一步骤。
(4-(((1-苄基哌啶-4-基)亚氨基)-甲基)哌啶-2-基)氨基甲酸苄基酯(3)
向含于aq.HCl(2ml,7.90mmol)中的粗醛2(0.290g,1.12mmol)的冰冷溶液中加入45％aq.KOH(0.448g,7.98mmol)，同时保持温度低于15℃。向中和溶液加入CH2Cl2(5ml)和K2CO3(0.158g,1.14mmol)，接着加入4-氨基-1-苄基哌啶(0.141g，0.838mmol)。将反应混合物逐渐升温至室温并继续搅拌2小时。1H NMR分析表明约有10％的醛残留，因此加入额外量的4-氨基-1-苄基哌啶(0.035g，0.025mmol)并继续搅拌1小时。将反应混合物用CH2Cl2稀释，用水洗涤，干燥(MgSO4)，过滤并浓缩。粗产物不经纯化直接用于下一步(0.450g，94％)。1HNMR(CDCl3,400MHz)δ1.71-1.74(2H,m)，1.83-1.93(2H,m)，2.13-2.18(2H,m)，2.92-2.95(2H,m)，3.33-3.38(1H,m)，5.25(2H,s)，7.30-7.43(10H,m)，7.59(1H,d,J＝5.2Hz)，8.26(1H,br s)，8.61(1H,d,J＝4.8Hz)；13C NMR(CDCl3,100MHz)δ33.2，51.9，63.2，67.6，112.6，127.2，128.4，128.6，128.7，128.8，129.3，135.7，151.5，157.7，158.7，159.1，163.0；对C25H28N5O2(M+H)计算的HRMS(ESI+)为430.2243。实测值为430.2239。
(4-(1-(1-苄基哌啶-4-基)-4-(4-氟苯基)-1H-咪唑-5-基)嘧啶-2-基)氨基甲酸苄基酯(4)
在20℃下，向含于CH2Cl2中的亚胺3(0.350g，0.815mmol)的溶液中加入α-(对甲苯磺酰基)-4-氟苄基异腈(0.262g，0.905mmol)和20％aq.K2CO3(0.250g,1.808mmol)，继续搅拌过夜。此时，加入另外的亚胺(0.038g，0.091mmol)和K2CO3(0.090g，0.651mmol)，并将反应混合物在30℃搅拌过夜。反应混合物用CH2Cl2稀释，用水洗涤，干燥(MgSO4)，过滤并浓缩。剩余物经急骤层析(MeOH/EtOAc1:4)，得到呈浅黄色固体形式的4(0.345g，59％)。1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ1.91-1.94(4H,m)，2.01-2.08(2H,m)，2.82(2H，br d,J＝10.8Hz)，3.45(2H,s)，4.84-4.88(1H,m)，5.20(2H,s)，6.86(1H,d,J＝5.2Hz)，7.13-7.17(2H,m)，7.22-7.45(2H,m)，8.14(1H,s)，8.51(1H,d,J＝5.2Hz)，10.73(1H,s)；13C NMR(DMSO-d6，100MHz)δ32.8，52.0，53.1，61.9，65.8，115.2，116.4，124.0，126.9，127.9，129.0，128.1，128.4，128.8，129.9，13.09，136.6，137.3，138.5，141.2，151.8，157.9，158.2，158.6，161.5；对C32H32FN6O2(M+H)计算的HRMS(ESI+)为563.2571。实测值为563.2565。
4-(4-(4-氟苯基)-1-(哌啶-4-基)-1H-咪唑-5-基)嘧啶-2-胺(5)
向含于甲醇(5ml)中的4(0.350g，0.622mmol)的溶液中加入10％Pd/C(0.1g)和甲酸铵(0.390g，6.22mmol)，将所得反应混合物加热至50℃并搅拌过夜。将反应混合物通过硅藻土过滤并减压浓缩，得到残余物(0.206g，98％)，其不经纯化即使用。1H NMR(MeOH-d4，400MHz)δ2.08-2.17(2H,m)，2.37-2.40(2H,m)，3.02-3.09(2H,m)，3.41-3.47(2H,m)，4.85-4.94(1H,m)，6.40(1H,d,J＝5.2Hz)，7.06-7.11(2H,m)，7.39-7.43(2H,m)，8.03(1H,s)，8.12(1H,d,J＝5.2Hz)，8.53(1H,s，NH)；13C NMR(MeOH-d4，100MHz)δ27.6，28.3，36.3，36.5，40.6，42.9，59.7，113.3，115.3，115.5，129.9，130.0，135.5，142.2，151.6，158.6，159.7，161.2，163.2，163.7；对C18H20FN6(M+H)计算的HRMS(ESI+)为339.1733。实测值为339.1731。
辛醛(6)
向含于CH2Cl2(5ml)中的正在搅拌的重铬酸吡啶鎓(2.16g，5.75mmol)和硅藻土(0.5g)的悬浮液中滴加入含于CH2Cl2(5ml)中的1-辛醇(0.50g，3.83mmol)的溶液。将所得混合物在室温下搅拌3小时。真空除去溶剂，将所得粗产物经急骤层析(EtOAc/石油溶剂1:9)纯化，得到呈无色油状形式的6(0.350g，71％)。1H NMR(CDCl3,400MHz)δ0.88(3H,t,J＝8Hz)，1.20-1.30(8H,m)，1.59-1.64(2H,m)，2.41(2H,t,J＝8Hz)，9.76(1H,s)。
4-苯基1-丁醛(8)
在0℃下，向含于CH2Cl2(10ml)中的4-苯基-1-丁醇(0.50g，3.32mmol)的溶液中加入戴斯-马丁过碘烷(1.69g，3.98mmol)。将所得反应混合物在0℃下搅拌30分钟，然后在室温下搅拌1.5小时，用10％硫代硫酸钠(50ml)淬灭反应混合物，并将产物萃取到CH2Cl2中。将有机层分离，用1M aq NaOH(50ml)洗涤，然后用水(50ml)洗涤，干燥(Na2SO4)，过滤并浓缩。将粗产物直接用于下一反应(0.485g，98％)。1H NMR(CDCl3,400MHz)δ1.93-2.01(2H,五重峰(pent),J＝7.6Hz)，2.46(2H,td,J＝1.2，7.2Hz)，2.66(2H,t,J＝8Hz)，7.17-7.22(2H,m)，7.26-7.31(3H,m)，9.76(1H,t,J＝1.2Hz)；13C NMR(CDCl3,100MHz)δ23.8，35.2，43.3，126.2，128.4，128.6，141.3，202.5。
Figure BDA0002314826310000331
4-(4-(4-氟苯基)-1-[1-辛基哌啶-4-基]-1H-咪唑-5-基)嘧啶-2-胺(7；SS8-058)
向含于无水THF(5ml)中的5(0.250g，0.739mmol)的溶液中加入辛醛6(0.133g，1.04mmol)。将所得反应混合物在室温下搅拌15分钟。加入三乙酰氧基硼氢化钠(0.454g，2.14mmol)，冷却混合物以保持温度低于37℃，继续搅拌2小时，此时TLC表明存在约40％的胺。因此，加入另外的醛6(0.095g，0.721mmol)和三乙酰氧基硼氢化钠(0.313g，1.42mmol)，并继续搅拌过夜。用sat.aq.NaHCO3溶液缓慢淬灭反应混合物，然后用EtOAc稀释。将有机层分离，用水洗涤，干燥(MgSO4)，过滤并浓缩。残余物经急骤层析(MeOH/EtOAc/Et3N6:93:1)，得到呈浅黄色固体形式的7(0.145g，44％)。1H NMR(CDCl3,400MHz)δ0.88(3H,t,J＝6.8Hz)，1.21-1.36(10H,m)，1.49-1.68(2H,m)，2.01-2.11(4H,m)，2.33-2.37(2H,m)，3.05-3.06(2H,m)，4.50-4.57(1H,m)，5.08(2H,br s)，6.50(1H,d,J＝4.8Hz)，6.97-7.02(2H,m)，7.43-7.46(2H,m)，7.77(1H,s)，8.18(1H,d,J＝5.2Hz)；13C NMR(CDCl3,150MHz)δ14.3，22.8，27.4，27.8，29.4，29.7，32.0，33.7，53.2，54.3，58.7，113.1，115.4，115.6，124.9，130.06，130.12，130.7，136.0，138.9，142.1，158.7，159.4，161.5，163.1，163.5；对C26H36FN6(M+H)计算的HRMS(ESI+)为451.2985。实测值为451.2978。
4-(4-(4-氟苯基)-1-[1-(4-苯基丁基)哌啶-4-基)-1H-咪唑-5-基)嘧啶-2-胺(9；SS8-070)
将含于无水THF(5ml)中的4-苯基-1-丁醛8(0.061g，0.404mmol)和5(0.10g，0.296mmol)的混合物在室温下搅拌15分钟。加入三乙酰氧基硼氢化钠(0.182g，0.859mmol)，冷却混合物以保持温度低于37℃，继续搅拌2小时，此时TLC表明存在约50％的胺。因此，加入另外的醛8(0.043g，0.289mmol)和三乙酰氧基硼氢化钠(0.090g，0.429mmol)，并继续搅拌过夜。用sat.aq.NaHCO3溶液缓慢淬灭反应混合物，然后用EtOAc稀释。将有机层分离，用水洗涤，干燥(MgSO4)，过滤并浓缩。残余物经急骤层析(MeOH/EtOAc/Et3N5:94:1)，得到呈白色固体形式的9(0.028g，40％)。1H NMR(CDCl3,400MHz)δ1H NMR(CDCl3,400MHz)δ1.24-1.27(4H,m)，1.50-1.68(4H,m)，1.99-2.11(2H,m)，2.36-2.40(2H,t,J＝8Hz)，2.62-2.65(2H,t,J＝8Hz)，3.02-3.04(2H,m)，4.49-4.58(1H,m)，5.06(2H,brs)，6.50(1H,d,J＝4.8Hz)，6.97-7.02(2H,m)，7.17-7.19(3H,m)，7.26-7.29(2H,m)，7.43-7.46(2H,m)，7.76(1H,s)，8.18(1H,d,J＝4.8Hz)；13C NMR(CDCl3,100MHz)δ27.0，29.5，29.9，33.6，35.9，53.2，54.2，58.4，113.1，115.4，115.6，124.8，125.9，128.45，128.53，130.07，130.13，130.6，136.0，142.2，142.5，158.7，159.3，161.5，163.1，163.5；对C28H32FN6(M+H)计算的HRMS(ESI+)为471.2672。实测值为472.2681。
4-(1-(1-丁基哌啶-4-基)-4-(4-氟苯基)-1H-咪唑-5-基)嘧啶-2-胺(10；SS8-074)
将含于THF(3ml)中的1-溴丁烷(0.020g，0.147mmol)、5(0.050g，0.147mmol)和碳酸铯(0.192g，0.589mmol)的混合物加热至70℃并搅拌过夜。TLC表明存在约50％的胺，因此加入另外的1-溴丁烷(0.020g，0.147mmol)和碳酸铯(0.96g，0.295mmol)，并继续搅拌过夜。将反应混合物用EtOAc稀释，用水和盐水洗涤，干燥(MgSO4)，过滤并浓缩。残余物经急骤层析(MeOH/EtOAc/Et3N 5:94:1)，得到呈白色固体形式的10(0.028g，56％)。1H NMR(CDCl3,400MHz)δ0.92(3H,t,J＝7.2Hz)，1.25-1.37(4H,m)，1.42-1.53(2H,m)，2.03-2.11(4H,m)，2.36-2.40(2H,m)，3.06-3.08(2H,m)，4.50-4.61(1H,m)，5.12(2H,br s)，6.50(1H,d,J＝5.2Hz)，6.97-7.01(2H,m)，7.42-7.46(2H,m)，7.77(1H,s)，8.18(1H,d,J＝4.8Hz)；13C NMR(CDCl3,150MHz)δ14.2，21.0，29.9，33.5，53.2，54.1，58.3，113.1，115.4，115.6，124.8，130.06，130.13，130.6，136.0，142.2，158.7，159.3，161.5，163.1，163.5；对C22H28FN6(M+H)计算的HRMS(ESI+)为395.2359。实测值为395.2348。
4-(1-(1-十二烷基哌啶-4-基)-4-(4-氟苯基)-1H-咪唑-5-基)嘧啶-2-胺(11；SS8-070)
将含于THF(3ml)和水(1ml)中的1-溴十二烷(0.043g，0.147mmol)、5(0.050g，0.147mmol)和碳酸铯(0.192g，0.589mmol)的混合物加热至70℃并搅拌过夜。TLC显示存在约10％的胺，因此加入另外的1-溴十二烷(0.008g，0.029mmol)和碳酸铯(0.025g，0.074mmol)，继续搅拌3小时，用EtOAc稀释反应混合物，用水和盐水洗涤，干燥(MgSO4)，过滤并浓缩。残余物经急骤层析(MeOH/EtOAc/Et3N 5:94:1)，得到呈白色固体形式的11(0.031g，40％)。1H NMR(CDCl3,400MHz)δ0.88(3H,t,J＝7.2Hz)，1.09-1.28(18H,m)，1.42-1.49(2H,m)，1.96-2.15(4H,m)，2.35-2.38(2H,m)，3.04-3.11(2H,m)，4.51-4.59(1H,m)，5.07(2H,s)，6.50(1H,d,J＝5.2Hz)，6.97-7.01(2H,m)，7.43-7.46(2H,m)，7.77(1H,s)，8.18(1H,d,J＝5.2Hz)；13C NMR(CDCl3,150MHz)δ14.3，22.9，27.4，27.8，29.5，29.7，29.78，29.80，29.83，32.1，33.7，52.2，52.3，58.7，113.1，115.4，115.6，124.9，130.06，130.13，130.6，136.0，142.1，158.7，159.4，161.5，163.1，163.5；对C30H44FN6(M+H)计算的HRMS(ESI+)为507.3611。实测值为507.3613。
Figure BDA0002314826310000361
(4-((环己基亚氨基)-甲基)嘧啶-2-基)氨基甲酸苄基酯(12)
向含于aq.HCl(4ml,15.8mmol)中的粗醛2(1.4g，5.44mmol)的冰冷溶液加入45％aq.KOH(0.88g，15.8mmol)，同时保持温度低于15℃。向中和溶液加入CH2Cl2(5ml)and K2CO3(0.76g,5.44mmol)，接着加入环己胺(0.63g,6.36mmol)。将反应混合物逐渐升温至室温并继续搅拌2小时。1H NMR分析表明残留了约20％的醛，因此加入另外的环己胺(0.06g，0.63mmol)，并继续搅拌过夜。将反应混合物用CH2Cl2稀释，用水洗涤，干燥(MgSO4)，过滤并浓缩。获得的粗产物不经纯化用于下一步骤(1.59g，85％)。1H NMR(CDCl3,400MHz)δ1.24-1.42(4H,m)，1.51-1.60(2H,m)，1.67-1.85(4H,m)，3.28-3.34(1H,m)，5.25(2H,s，CH2Ph)，7.34-7.42(5H,m)，7.54(1H,d,J＝4.8Hz)，8.25(1H,s，NH)，8.56(1H,d,J＝5.2Hz)；13C NMR(CDCl3,100MHz)δ24.6，25.6，34.0，67.6，69.8，112.4，128.6，128.7，128.8，135.7，151.6，157.8，158.2，158.9，163.2；对C19H23N4O2(M+H)计算的HRMS(ESI+)为339.1821。实测值为339.1817。
(-4-(1-环己基-4-(4-氟苯基)-1H-咪唑-5-基)嘧啶-2-基)氨基甲酸苄基酯(13)
在20℃下将含于CH2Cl2中的α-(对甲苯磺酰基)-4-氟苄基异腈(1.42g，4.90mmol)、亚胺12(1.5g，4.43mmol)和20％aq.K2CO3的混合物搅拌过夜。此时，加入另外的亚胺(0.14g，0.49mmol)和K2CO3(0.34g，1.04mmol)，并将反应混合物在30℃下搅拌第二次过夜。将反应混合物用CH2Cl2稀释，用水洗涤，干燥(MgSO4)，过滤并浓缩。剩余物经急骤层析(EtOAc/石油溶剂6:4)，获得呈白色固体形式的13(1.62g，77％)。1H NMR(CDCl3,400MHz)δ1.20-1.28(2H,m)，1.38-1.47(2H,m)，1.55-1.65(2H,m)，1.71-1.85(2H,m)，2.10-2.13(2H,m)，5.04-5.11(1H,m)，5.26(2H,s)，6.76(1H,d,J＝5.2Hz)，6.99-7.04(2H,m)，7.34-7.45(7H,m)，7.78(1H,s)，8.06(1H,br s，NH)，8.33(1H,d,J＝5.2Hz)；13C NMR(CDCl3,100MHz)δ25.6，34.7，55.5，67.6，115.6，115.8，116.7，124.1，128.7，128.8，130.4，130.56，130.8，133.0，135.8，136.8，143.8，151.2，157.5，158.2，159.5，161.4，163.9；对C27H27FN5O2计算的HRMS(ESI+)为472.2149。实测值为472.2150。
4-(1-环己基-4-(4-氟苯基)-1H-咪唑-5-基)嘧啶-2-胺盐酸盐(14；PF670462)
将含于THF(5ml)和甲醇(0.5ml)中的13(0.30g,0.64mmol)和20wt％Pd(OH)2/C(0.13g)的混合物在200psi下氢化1小时。将混合物通过硅藻土过滤并减压浓缩，得到粗产物，将该粗产物在4M aq HCl(2ml)和甲醇(2ml)中搅拌1小时，得到HCl盐。将溶剂蒸发并从甲醇、丙酮和石油溶剂的组合中重结晶，得到呈白色固体形式的14(0.19g，83％)。1H NMR(MeOH-d4，400MHz)δ1.28-1.40(2H,m)，1.48-1.58(2H,m)，1.78-1.88(2H,m)，1.94-1.98(2H,m)，2.27-2.30(2H,m)，4.95-5.02(1H,m)，6.67(1H,d,J＝6.4Hz)，7.29-7.33(2H,m)，7.59-7.62(2H,m)，8.26(1H,d,J＝6Hz)，9.48(1H,s)；13C NMR(MeOH-d4，100MHz)δ24.6，25.1，33.4，59.1，110.4，116.3，116.6，121.8，121.9，124.6，136.1，136.2，148.1，156.3，162.7，163.1，165.6；对C19H21FN5(M+H)338.1781计算的HRMS(ESI+)为338.1781。实测值为339.1778。
(4-((金刚烷-1-基亚氨基)-甲基)嘧啶-2-基)氨基甲酸苄基酯(15)
向含于aq.HCl(2ml,7.94mmol)中的粗醛2(0.250g,0.972mmol)的冰冷溶液加入45％aq.KOH(0.448g,7.98mmol)，同时保持温度低于15℃。向中和混合物加入CH2Cl2(5ml)和K2CO3(0.158g,1.14mmol)，接着加入1-金刚烷基胺(0.175g,1.17mmol)。将反应混合物逐渐升温至室温并继续搅拌2小时。1H NMR分析表明约有20％的醛残留，因此加入另外的1-金刚烷基胺(0.030g,0.19mmol)并继续搅拌过夜。将反应混合物用CH2Cl2稀释，用水洗涤，干燥(MgSO4)，过滤并浓缩。粗产物不经纯化即用于下一步骤(0.36g,94％)。1H NMR(CDCl3,400MHz)δ1.57-1.79(12H,m)，2.01-2.08(3H,m)，5.26(2H,s)，7.34-7.43(5H,m)，7.61(1H,d,J＝4.8Hz)，8.18(1H,br s,NH)，8.57(1H,d,J＝4.8Hz)；13C NMR(CDCl3,100MHz)δ29.4，36.4，42.7，59.2，67.4，112.1，128.4，128.5，128.6，135.6，151.4，157.5，158.6，163.7；对C23H27N4O2(M+H)计算的HRMS(ESI+)为391.4867。实测值为391.4872。
(4-(金刚烷-1-基-4-(4-氟苯基)-1H-咪唑-5-基)嘧啶-2-基)氨基甲酸苄基酯(16)
在20℃下，向含于CH2Cl2中的亚胺15(0.363g,0.936mmol)的溶液中加入α-(对甲苯磺酰基)-4-氟苄基异腈(0.300g,1.04mmol)和20％aq.K2CO3(0.286g,2.07mmol)，并将混合物搅拌过夜。此时，加入另外的亚胺(0.036g,0.094mmol)和K2CO3(0.143g,1.03mmol)，并将反应混合物在30℃下搅拌第二次过夜。将反应混合物用CH2Cl2稀释，用水洗涤，干燥(MgSO4)，过滤并浓缩。剩余物经急骤层析(MeOH/CHCl3/Et3N 39:60:1)，接着用CH3CN/H2O重结晶，得到呈白色固体形式的16(0.070g,15％)。1H NMR(CDCl3,400MHz)δ1.57-1.70(7H,m)，2.10-2.17(3H,m)，2.18-2.23(5H,m)，5.26(2H,s)，6.79(1H,d,J＝4.8Hz)，6.88-6.92(2H,m)，7.20-7.26(2H,m)，7.35-7.46(5H,m)，7.73(1H,br s,NH)，7.80(1H,s)，8.50(1H,d,J＝5.2Hz)；13C NMR(CDCl3,100MHz)δ29.7，35.8，43.1，59.4，67.6，115.1，115.3，119.5，128.6，128.7，128.8，129.6，129.7，135.5，138.8，151.1，157.3，159.0，163.0；对C31H31FN5O2(M+H)计算的HRMS(ESI+)为524.2462。实测值为524.2457。
4-(金刚烷-1-基-4-(4-氟苯基)-1H-咪唑-5-基)嘧啶-2-胺(17；SS8-122)
将含于THF(5ml)和甲醇(0.5ml)中的16(0.06g,0.15mmol)和20wt％Pd(OH)2/C(0.20g)的混合物在200psi下氢化1小时。将混合物通过硅藻土过滤并减压浓缩，得到粗产物。剩余物经急骤层析(MeOH/CHCl3/Et3N 5:94:1)，得到呈白色固体形式的17(0.038g,86％)。1H NMR(CDCl3,400MHz)δ1.60-1.72(7H,m)，2.12-2.24(8H,m)，5.16(2H,br s)，6.52(1H,d,J＝5.2Hz)，6.89-6.94(2H,m)，7.26-7.33(2H,m)，7.77(1H,s)，8.24(1H,d,J＝4.8Hz)；13C NMR(CDCl3，150MHz)δ29.9，36.0，43.4，59.5，115.1，115.28，115.3，125.7，129.4，129.5，130.6，135.2，141.5，159.1，161.1，162.9，163.0，163.1；对C23H25FN5(M+H)计算的HRMS(ESI+)为390.2094。实测值为391.2102。
(4-((环庚基亚氨基)-甲基)嘧啶-2-基)氨基甲酸苄基酯(18)
向含于aq.HCl(2ml,7.94mmol)中的粗醛2(0.250g,0.972mmol)的冰冷溶液加入45％aq.KOH(0.448g,7.98mmol)，同时保持温度低于15℃。向所得中和溶液加入CH2Cl2(5ml)和K2CO3(0.158g,1.14mmol)，接着加入环庚胺(0.132g,1.16mmol)。将反应混合物逐渐升温至室温并继续搅拌2小时。1H NMR分析表明约有20％的醛残留，因此加入另外的环庚胺(0.015g,0.19mmol)并继续搅拌过夜。将反应混合物用CH2Cl2稀释，用水洗涤，干燥(MgSO4)，过滤并浓缩。如此获得的粗产物不经纯化即用于下一步骤(0.31g,91％)。1H NMR(CDCl3,400MHz)δ1.50-1.80(12H,m)，3.45-3.48(1H,m)，5.25(2H,s,CH2Ph)，7.33-7.41(5H,m)，7.54(1H,d,J＝5.2Hz)，8.20(1H,s,NH)，8.54(1H,d,J＝5.2Hz)；13C NMR(CDCl3,100MHz)δ24.7，28.6，36.0，67.5，72.3，112.4，128.6，128.7，128.8，135.7，151.7，157.4，157.9，158.8，163.3；对C20H25N4O2(M+H)计算的HRMS(ESI+)为353.1978。实测值为353.1981。
(4-(1-环庚基-4-(4-氟苯基)-1H-咪唑-5-基)嘧啶-2-基)氨基甲酸苄基酯(19)
在20℃下，向含于CH2Cl2中的亚胺18(0.274g,0.778mmol)的溶液加入α-(对甲苯磺酰基)-4-氟苄基异腈(0.250g,0.861mmol)和20％aq.K2CO3(0.238g,1.73mmol)，同时继续搅拌过夜。此时，加入另外的亚胺(0.027g,0.078mmol)和K2CO3(0.119g,0.865mmol)，并将反应混合物在30℃下搅拌过夜。将反应混合物用CH2Cl2稀释，用水洗涤，干燥(MgSO4)，过滤并浓缩。剩余物经急骤层析(MeOH/CHCl3/Et3N 6:93:1)，得到呈白色固体形式的19(0.24g,70％)。1H NMR(CDCl3,400MHz)δ1.52-1.87(10H,m)，2.14-2.18(2H,m)，5.24-5.30(1H,m)，5.26(2H,s)，6.74(1H,d,J＝5.2Hz)，6.99-7.03(2H,m)，7.33-7.44(7H,m)，7.77(1H,s)，8.31(1H,d,J＝5.2Hz)，8.38(1H,s,NH)；13C NMR(CDCl3,100MHz)δ24.7，27.5，36.7，57.5，67.7，115.5，115.7，116.7，124.0，128.7，128.77，128.80，130.4，130.5，130.8，135.8，137.1，143.6，151.3，157.6，158.1，159.6，161.4，163.9；对C28H28FN5O2(M+H)计算的HRMS(ESI+)为485.2227。实测值为486.2235。
4-(1-环庚基-4-(4-氟苯基)-1H-咪唑-5-基)嘧啶-2-胺(20；SS8-138)
将含于THF(5ml)和甲醇(0.5ml)中的19(0.235g,0.485mmol)和20wt％Pd(OH)2/C(0.25g)的混合物在200psi下氢化1小时。将混合物通过硅藻土过滤并减压浓缩，得到粗产物。剩余物经急骤层析(MeOH/CHCl3/Et3N 5:94:1)，得到呈白色固体形式的20(0.155g,92％)。1H NMR(CDCl3,400MHz)δ1.44-1.90(10H,m)，2.16-2.21(2H,m)，4.64-4.71(1H,m)，5.06(2H,br s)，6.50(1H,d,J＝5.2Hz)，6.97-7.01(2H,m)，7.43-7.46(2H,m)，7.73(1H,s)，8.19(1H,d,J＝5.2Hz)；13C NMR(CDCl3，150MHz)δ24.8，27.4，36.5，57.5，113.0，115.1，115.3，124.5，128.8，129.9，130.6，136.0，141.4，158.4，159.3，161.0，163.0，163.5；对C20H23FN5(M+H)计算的HRMS(ESI+)为352.1937。实测值为352.1934。
(4-((外-2-氨基降冰片烷)-甲基)嘧啶-2-基)氨基甲酸苄基酯(21)
向含于aq.HCl(2ml,7.94mmol)中的粗醛2(0.250g,0.972mmol)的冰冷溶液加入45％aq.KOH(0.448g,7.98mmol)，同时保持温度低于15℃。向中和溶液加入CH2Cl2(5ml)和K2CO3(0.158g,1.14mmol)，接着加入外-2-氨基降冰片烷(0.129g,1.16mmol)。将反应混合物逐渐升温至室温并继续搅拌2小时。1H NMR分析表明醛完全消耗。将反应混合物用CH2Cl2稀释，用水洗涤，干燥(MgSO4)，过滤并浓缩。如此获得的粗产物不经纯化即用于下一步骤(0.24g,71％)。1H NMR(CDCl3,400MHz)δ1.20-1.27(3H,m)，1.45-1.64(4H,m)，1.85-1.88(1H,m)，2.12-2.19(1H,m)，2.29-2.38(1H,m)，3.38-3.43(1H,m)，5.25(2H,m)，7.35-7.41(5H,m)，7.54(1H,d,J＝5.2Hz)，8.16(1H,s,NH)，8.55(1H,d,J＝5.2Hz)；13C NMR(CDCl3,100MHz)δ26.8，29.2，35.7，36.4，39.6，44.4，67.5，74.0，112.2，128.6，128.66，128.73，135.7，151.7，157.2，157.8，158.7，163.4；对C20H23N4O2(M+H)计算的HRMS(ESI+)为351.1821。实测值为351.1815。
(4-(1-(外-2-氨基降冰片烷)-4-(4-氟苯基)-1H-咪唑-5-基)嘧啶-2-基)氨基甲酸苄基酯(22)
在20℃下，向含于CH2Cl2(5ml)中的亚胺21(0.218g,0.622mmol)的溶液加入α-(对甲苯磺酰基)-4-氟苄基异腈(0.200g,0.691mmol)和20％aq.K2CO3(0.191g,1.38mmol)，同时继续搅拌过夜。此时，加入另外的亚胺(0.024g,0.062mmol)和K2CO3(0.047g,0.345mmol)，并将反应混合物在30℃搅拌过夜。将反应混合物用CH2Cl2稀释，用水洗涤，干燥(MgSO4)，过滤并浓缩。剩余物经急骤层析(MeOH/CHCl3/Et3N 6:93:1)，接着用CH3OH/CH2Cl2重结晶，得到呈白色固体形式的22(0.071g,23％)。1H NMR(CDCl3,400MHz)δ1.18-1.23(1H,m)，1.35-1.43(2H,m)，1.51-1.68(4H,m)，1.76-1.81(1H,m)，2.35-2.40(1H,m)，2.61-2.63(1H,m)，5.12-5.15(1H,m)，5.20(2H,m)，6.75(1H,d,J＝5.2Hz)，6.99-7.03(2H,m)，7.34-7.45(7H,m)，7.81(1H,s)，8.04(1H,s,NH)，8.33(1H,d,J＝5.2Hz)；13C NMR(CDCl3,100MHz)δ27.5，28.4，36.7，36.8，41.0，42.3，59.8，67.6，115.6，115.8，116.7，124.4，128.7，128.8，130.31，130.4，130.7，135.8，136.5，144.2，151.3，157.4，158.2，159.7，161.4；对C28H27FN5O2(M+H)计算的HRMS(ESI+)为484.2149。
实测值为484.2138。
4-(1-(1-(外-2-氨基降冰片烷)-4-(4-氟苯基)-1H-咪唑-5-基)嘧啶-2-胺(23；SS8-154)
将含于THF(5ml)和甲醇(0.5ml)中的22(0.070g,0.147mmol)和20wt％Pd(OH)2/C(0.020g)的混合物在200psi下氢化1小时。将混合物通过硅藻土过滤并减压浓缩，得到粗产物。剩余物经急骤层析(MeOH/CHCl3/Et3N 5:94:1)，得到呈白色固体形式的23(0.030g,60％)。1H NMR(CDCl3,400MHz)δ1.18-1.37(3H,m)，1.53-1.82(5H,m)，2.39-2.44(1H,m)，2.56-2.61(1H,m)，4.55-4.58(1H,m)，5.10(2H,br s)，6.51(1H,d,J＝5.2Hz)，6.96-7.01(2H,m)，7.43-7.46(2H,m)，7.76(1H,s)，8.19(1H,d,J＝5.2Hz)；13C NMR(CDCl3,100MHz)δ27.6，28.3，36.3，36.5，40.6，42.9，59.7，113.3，115.3，115.5，129.9，130.0，135.5，136.5，142.2，158.6，159.7，161.2，163.2，163.7；对C20H21FN5(M+H)计算的HRMS(ESI+)为350.1781。实测值为350.1785。
(4-((甲基亚氨基)甲基)嘧啶-2-基)氨基甲酸苄基酯(24)
向含于aq.HCl(2ml,8.00mmol)中的粗醛2(0.137g,0.531mmol)的冰冷溶液加入45％aq.KOH(0.449g,8.00mmol)，同时保持温度低于15℃。向中和溶液加入CH2Cl2(5ml)和K2CO3(0.069g,0.502mmol)，接着加入含于THF中的甲胺溶液(530μL,1.06mmol,2.0M)。将反应混合物逐渐升温至室温并继续搅拌18小时。反应混合物的1H NMR分析表明醛的不完全消耗，因此加入另外的甲胺(265μL,0.531mmol)，将反应物搅拌另外的2小时。在醛完全消耗之后，粗产物不经分离即用于下一步骤。
(4-(4-(4-氟苯基)-1-甲基-1H-咪唑-5-基)嘧啶-2-基)氨基甲酸苄基酯(25)
将含于CH2Cl2(10ml)中的α-(对甲苯磺酰基)-4-氟苄基异腈(0.184g,0.637mmol)、亚胺(0.144g,0.531mmol)和aq.20％K2CO3(0.440ml,0.637mmol)的混合物在室温下搅拌72小时，将反应混合物用CH2Cl2稀释，用水洗涤，干燥(MgSO4)，过滤并浓缩。剩余物经急骤层析(EtOAc/石油溶剂3:2)，得到呈无色固体形式的甲基氨基甲酸酯(79.2mg,37％)，熔点为190℃至198℃。1H-NMR(500MHz；CDCl3)：δ4.03(3H,s)，5.24(2H,s)，6.67(1H,dt,J＝5.3,0.7Hz)，7.07-7.03(2H,m)，7.46-7.31(7H,m)，7.59(1H,s)，8.16-8.14(1H,m)，9.54(1H,s)；13C-NMR(126MHz；CDCl3)：δ35.1，67.6，115.2，115.6，115.8，125.1，128.7，128.8，130.5(d,JC-F＝8.1Hz)，130.8(d,c＝3.3Hz)，135.6，141.1，144.5，151.6，151.6，157.4，157.7，158.8，162.8(d,JC-F＝248Hz)。对C22H19FN5O2(M+H)计算的HRMS(ESI+)为404.1523。实测值为404.1518。
4-(4-(4-氟苯基)-1-甲基-1H-咪唑-5-基)嘧啶-2-胺(26；ZH-142)
向含于THF/MeOH 5:3(8ml)中的甲基氨基甲酸酯(47.0mg,0.117mmol)的溶液加入20％wt Pd(OH)2/C(6.50mg)。将所得混合物在氢气氛中于200psi下搅拌2小时。将混合物滤过短硅藻土垫，浓缩并通过急骤层析(CHCl3/MeOH/NEt3 97:2:1)纯化，得到无色固体(31.4mg,72％)。1H-NMR(500MHz；CD3OD)：δ3.9(3H,s)，6.41(1H,d,J＝5.2Hz)，7.10-7.06(2H,m)，7.45-7.43(2H,m)，7.79(1H,s)，8.10(1H,d,J＝5.2Hz)；13C-NMR(126MHz；CD3OD)：δ34.4，112.1，116.2，116.4，127.3，128.6，128.8，129.0，131.4(d,JC-F＝8.2Hz)，131.6(d,JC-F＝3.4Hz)，141.4，142.6，159.2，159.9，163.9(d,JC-F＝247Hz)，164.8。对C14H13FN5(M+H)计算的HRMS(ESI+)为270.1155。实测值为270.1149。
(4-((乙基亚氨基)甲基)嘧啶-2-基)氨基甲酸苄基酯(27)
向含于aq.HCl(2ml,8.00mmol)中的粗醛2(0.148g,0.574mmol)的冰冷溶液加入45％aq.KOH(0.449g,8.00mmol)，同时保持温度低于15℃。向中和溶液加入CH2Cl2(5ml)和K2CO3(0.095g,0.688mmol)，接着加入含于THF中的乙胺溶液(575μL,1.15mmol,2.0M)。将反应混合物逐渐升温至室温并继续搅拌18小时。反应混合物的1H NMR分析表明醛完全消耗。粗产物不经分离即用于下一步骤。
(4-(1-(乙基)-4-(4-氟苯基)-1H-咪唑-5-基)嘧啶-2-基)氨基甲酸苄基酯(28)
将含于CH2Cl2(10ml)中的α-(对甲苯磺酰基)-4-氟苄基异腈(0.199g,0.689mmol)、亚胺(0.163g,0.574mmol)和aq.20％K2CO3(0.475ml,0.689mmol)的混合物在室温下搅拌20小时。将反应混合物用CH2Cl2稀释，用水洗涤，干燥(MgSO4)，过滤并浓缩。剩余物经急骤层析(EtOAc/石油溶剂3:2)，得到呈灰白色固体形式的乙基氨基甲酸酯(79.4mg,33％)，熔点为164℃至171℃。1H-NMR(500MHz，CDCl3)：δ1.28(3H,t,J＝7.2Hz，4.62(2H,q,J＝7.2Hz)，5.23(2H,s)，6.62(1H,d,J＝5.4Hz)，7.04(2H,t,J＝8.8Hz)，7.45-7.29(7H,m)，7.64(1H,s)，8.12(1H,d,J＝5.4Hz)，9.87(1H,s)；13C-NMR(101MHz；CDCl3)：δ16.9，42.3，67.6，115.2，115.5，115.8，124.1，128.7，128.4，128.8，130.6(d,JC-F＝8.0Hz)，130.8(d,JC-F＝3.2Hz)，135.6，139.9，144.7，151.6，157.6，157.7，159.0，162.7(d,JC-F＝248Hz)。对C23H21FN5O2(M+H)计算的HRMS(ESI+)为418.1679。实测值为418.1678。
4-(1-(乙基)-4-(4-氟苯基)-1H-咪唑-5-基)嘧啶-2-胺(29；ZH-6)
向含于THF/MeOH 10:1(5ml)中的乙基氨基甲酸酯(79.0mg,0.189mmol)的溶液加入20％wt Pd(OH)2/C(37.0mg)。将所得混合物在氢气氛中于200psi下搅拌2小时。将混合物通过硅藻土过滤，浓缩并通过急骤层析(CHCl3/MeOH/NEt3 97:2:1)纯化，得到无色固体(54.0mg,84％)，熔点为204℃至212℃。1H-NMR(500MHz；CD3OD)：δ1.32(3H,t,J＝7.2Hz)，4.38(2H,q,J＝7.2Hz)，4.86(3H,s)，6.40(1H,d,J＝5.2Hz)，7.10-7.06(2H,m)，7.45-7.42(2H,m)，7.87(1H,s)，8.11(1H,d,J＝5.2Hz)；13C-NMR(126MHz；CD3OD)：δ16.9，42.8，112.2，116.2，116.4，126.5，131.4(d,JC-F＝8.3Hz)，131.7(d,JC-F＝3.2Hz)，140.2，142.7(s,1C)，159.3，160.1，163.9(d,JC-F＝247Hz)，164.9。对C15H15FN5(M+H)计算的HRMS(ESI+)为284.1311。实测值为284.1307。
(4-((叔丁基亚氨基)甲基)嘧啶-2-基)氨基甲酸苄基酯(30)
向含于aq.HCl(2ml,8.00mmol)中的粗醛2(0.120g,0.465mmol)的冰冷溶液加入45％aq.KOH(0.449g,8.00mmol)，同时保持温度低于15℃。向中和溶液加入CH2Cl2(5ml)和K2CO3(0.071g,0.511mmol)，接着加入含于THF中的乙胺溶液(73.0μL,0.968mmol)。将反应混合物逐渐升温至室温并继续搅拌18小时。反应混合物的1H NMR分析表明醛完全消耗。粗产物不经分离即用于下一步骤。
(4-(1-(叔丁基)-4-(4-氟苯基)-1H-咪唑-5-基)嘧啶-2-基)氨基甲酸苄基酯(31)
将含于CH2Cl2(10ml)中的α-(对甲苯磺酰基)-4-氟苄基异腈(0.161g,0.558mmol)、亚胺(0.145g,0.465mmol)和aq.20％K2CO3(0.385ml,0.558mmol)的混合物在室温下搅拌60小时。将反应混合物用CH2Cl2稀释，用水洗涤，干燥(MgSO4)，过滤并浓缩。剩余物经急骤层析(EtOAc/石油溶剂3:2)得到呈无色固体形式的叔丁基氨基甲酸酯(64.1mg,31％)。1H-NMR(400MHz；CDCl3)：δ1.61(9H,s)，5.27(2H,s)，6.76(1H,d,J＝5.0Hz)，6.92(2H,t,J＝8.7Hz)，7.44-7.22(7H,m)，7.78(1H,s)，8.45(1H,d,J＝5.0Hz)，8.52(1H,s)；13C-NMR(101MHz；CDCl3)：δ31.2，58.4，67.7，115.2，115.4，119.5，125.3，128.7，128.8，129.8(d,JC-F＝8.2Hz)，130.2(d,JC-F＝3.4Hz)，135.6，136.3，142.3，151.4，157.7(s,1C)，159.0，162.2(d,JC-F＝248Hz)，162.8。
4-(1-(叔丁基)-4-(4-氟苯基)-1H-咪唑-5-基)嘧啶-2-胺(32；ZH9-190)
向含于THF/MeOH 10:1(5ml)中的叔丁基氨基甲酸酯(64.0mg,0.143mmol)的溶液加入20％wt Pd(OH)2/C(33.0mg)。将所得混合物在氢气氛中于200psi下搅拌2小时，将混合物通过硅藻土过滤，浓缩并经急骤层析(CHCl3/MeOH/NEt3 97:2:1)纯化，得到无色固体(30.8mg,69％)，熔点为189℃至197℃。1H-NMR(500MHz；CDCl3)：δ1.61(9H,s)，6.52(1H,d,J＝5.0Hz)，7.00-6.97(2H,m)，7.32-7.29(2H,m)，7.93(1H,s)，8.21(1H,d,J＝5.0Hz)；13C-NMR(126MHz；CD3OD)：δ31.3，59.8，115.3，115.9，116.1，127.8，130.6(d,JC-F＝8.1Hz)，131.5(d,JC-F＝3.4Hz)，137.1，141.5，160.1，163.3，163.5(d,JC-F＝246Hz)，164.9。对C17H19FN5(M+H)计算的HRMS(ESI+)为312.1624。实测值为312.1619。
(4-((环丙基亚氨基)甲基)嘧啶-2-基)氨基甲酸苄基酯(33)
向含于aq.HCl(2ml,8.00mmol)中的粗醛2(0.140g,0.544mmol)的冰冷溶液加入45％aq.KOH(0.449g,8.00mmol)，同时保持温度低于15℃。向中和溶液加入CH2Cl2(5ml)和K2CO3(0.090g,0.653mmol)，接着加入环丙胺(75.0μL,1.09mmol)。将反应混合物逐渐升温至室温并继续搅拌18小时。反应混合物的1H NMR分析表明醛完全消耗。粗产物不经分离即用于下一步骤。
(4-(1-环丙基-4-(4-氟苯基)-1H-咪唑-5-基)嘧啶-2-基)氨基甲酸苄基酯(34)
将含于CH2Cl2(10ml)中的α-(对甲苯磺酰基)-4-氟苄基异腈(0.189g,0.653mmol)、亚胺(0.161g,0.544mmol)和aq.20％K2CO3(0.450ml,0.653mmol)的混合物在30℃搅拌48小时。将反应混合物用CH2Cl2稀释，用水洗涤，干燥(MgSO4)，过滤并浓缩。剩余物经急骤层析(EtOAc/石油溶剂3:2)得到呈无色固体形式的环丙基氨基甲酸酯(50.7mg,22％)，熔点为178℃至188℃。1H-NMR(500MHz；CDCl3)：δ0.95-0.76(4H,m)，4.05(1H,dt,J＝7.4，3.6Hz)，5.23(2H,s)，6.73(1H,d,J＝5.3Hz)，7.02(2H,t,J＝8.8Hz)，7.46-7.31(7H,m)，7.66(1H,s)，8.27(1H,d,J＝5.3Hz)，9.12(1H,s)；13C-NMR(126MHz；CDCl3)：δ7.4，29.4，67.6，115.6，115.7，126.6，128.7，128.8，130.3(d,JC-F＝8.1Hz)，130.4(d,JC-F＝3.2Hz)，135.7，139.7，143.4，151.5，157.5，158.0，159.0，162.6(d,J＝247Hz)。对C24H21FN5O2(M+H)计算的HRMS(ESI+)为430.1679。实测值为430.1676。
4-(1-环丙基-4-(4-氟苯基)-1H-咪唑-5-基)嘧啶-2-胺(35；ZH-58)
向含于THF/MeOH 5:2(7ml)中的环丙基氨基甲酸酯(50.7mg,0.118mmol)的溶液加入20％wt Pd(OH)2/C(25.0mg)。将所得混合物在氢气氛中于200psi下搅拌2.5小时。将混合物通过硅藻土过滤，浓缩并通过急骤层析(CHCl3/MeOH/NEt3 97:2:1)纯化，得到无色固体(31.9mg,99％)。1H-NMR(500MHz；CDCl3)：δ0.95-0.82(4H,m)，3.63(1H,tt,J＝7.3,3.8Hz)，5.21(2H,s)，6.56(1H,d,J＝5.1Hz)，7.01-6.97(2H,m)，7.49-7.46(2H,m)，7.63(1H,s)，8.21(1H,d,J＝5.1Hz)；13C-NMR(126MHz；CDCl3)：δ7.2，28.5，112.4，115.3，115.5，127.1，129.8(d,JC-F＝8.1Hz)，130.4(d,JC-F＝3.2Hz)，138.9，141.7，158.5，159.1，162.5(d,JC-F＝247Hz)，163.19。对C16H15FN5(M+H)计算的HRMS(ESI+)为296.1311。实测值为296.1306。
(4-((环丁基亚氨基)甲基)嘧啶-2-基)氨基甲酸苄基酯(36)
向含于aq.HCl(2ml,8.00mmol)中的粗醛2(0.146g,0.570mmol)的冰冷溶液加入45％aq.KOH(0.449g,8.00mmol)，同时保持温度低于15℃。向中和溶液加入CH2Cl2(5ml)和K2CO3(0.095g,0.684mmol)，接着加入环丁胺(97.0μL,1.14mmol)。将反应混合物逐渐升温至室温并继续搅拌18小时。反应混合物的1H NMR分析表明醛完全消耗。粗产物不经分离即用于下一步骤。
(4-(1-环丁基-4-(4-氟苯基)-1H-咪唑-5-基)嘧啶-2-基)氨基甲酸苄基酯(37)
将含于CH2Cl2(10ml)中的α-(对甲苯磺酰基)-4-氟苄基异腈(0.197g,0.684mmol)、亚胺(0.177g,0.570mmol)和aq.20％K2CO3(0.450ml,0.684mmol)的混合物在30℃搅拌18小时，将反应混合物用CH2Cl2稀释，用水洗涤，干燥(MgSO4)，过滤并浓缩。剩余物经急骤层析(EtOAc/石油溶剂2:3)得到呈无色固体形式的环丁基氨基甲酸酯(98.5mg,39％)，熔点为191℃至204℃。1H-NMR(500MHz；CDCl3)：δ1.87-1.82(2H,m)，2.28-2.23(2H,m)，2.45-2.40(2H,m)，5.27(2H,s)，5.56-5.52(1H,m)，6.68(1H,d,J＝5.3Hz)，7.04-7.01(2H,m)，7.44-7.32(7H,m)，7.81(1H,s)，8.23(1H,d,J＝5.3Hz)，9.01(1H,s)；13C-NMR(126MHz；CDCl3)：δ15.2，31.1，50.9，67.6，115.6，115.7，116.0，124.3，128.7，128.8，130.4(d,JC-F＝8.1Hz)，130.7(d,JC-F＝3.2Hz)，135.7，137.4，144.1，151.5，157.5，157.9，159.1，162.7(d,JC-F＝247.3Hz)。对C25H23FN5O2(M+H)计算的HRMS(ESI+)为444.1836。实测值为444.1834。
4-(1-环丁基-4-(4-氟苯基)-1H-咪唑-5-基)嘧啶-2-胺(38；ZH-62)
向含于THF/MeOH 5:2(7ml)中的环丁基氨基甲酸酯(96.0mg,0.216mmol)的溶液加入20％wt Pd(OH)2/C(56.0mg)。将所得混合物在氢气氛中于100psi下搅拌3小时，将混合物通过硅藻土过滤，浓缩，并通过急骤层析(CHCl3/MeOH/NEt3 97:2:1)，得到无色固体(34.2mg,51％)，熔点为229℃至231℃。1H-NMR(500MHz；CD3OD)：δ1.91-1.83(2H,m)，2.45-2.35(4H,m)，5.09(1H,五重峰,J＝8.4Hz)，6.41(1H,d,J＝5.2Hz)，7.09-7.05(2H,m)，7.44-7.41(2H,m)，8.04(1H,s)，8.13(1H,d,J＝5.1Hz)；13C-NMR(126MHz；CD3OD)：δ15.8，31.8，52.1，112.6，116.2，116.4，126.7，131.2(d,JC-F＝8.2Hz)，131.5(d,JC-F＝3.2Hz)，137.9，142.1，159.4，160.1，163.9(d,JC-F＝247Hz)，164.9。对C17H17FN5(M+H)计算的HRMS(ESI+)为310.1468。实测值为310.1464。
(4-((氧杂环丁烷-3-基亚氨基)甲基)嘧啶-2-基)氨基甲酸苄基酯(39)
向含于aq.HCl(2ml,8.00mmol)中的粗醛2(0.140g,0.544mmol)的冰冷溶液加入45％aq.KOH(0.449g,8.00mmol)，同时保持温度低于15℃。向中和溶液加入CH2Cl2(5ml)和K2CO3(0.090g,0.653mmol)，接着加入3-氧杂环丁烷胺(77.0μL,1.09mmol)。将反应混合物逐渐升温至室温并继续搅拌18小时。反应混合物的1H NMR分析表明醛完全消耗。粗产物不经分离即用于下一步骤。
(4-(4-(4-氟苯基)-1-(氧杂环丁烷-3-基)-1H-咪唑-5-基)嘧啶-2-基)氨基甲酸苄基酯(40)
将含于CH2Cl2(10ml)中的α-(对甲苯磺酰基)-4-氟苄基异腈(0.188g,0.653mmol)、亚胺(0.170g,0.544mmol)和aq.20％K2CO3(0.450ml,0.653mmol)的混合物在室温下搅拌72小时。将反应混合物用CH2Cl2稀释，用水洗涤，干燥(MgSO4)，过滤并浓缩。剩余物经急骤层析(EtOAc/石油溶剂3:2)得到呈无色固体形式的氧杂环丁烷-3-基氨基甲酸酯(113mg,47％)，熔点为186℃至196℃。1H-NMR(500MHz；CDCl3)：δ4.85(2H,t,J＝6.5Hz)，5.13(2H,t,J＝7.2Hz)，5.28(2H,s)，6.31(1H,t,J＝6.7Hz)，6.72(1H,d,J＝5.3Hz)，7.07(2H,t,J＝8.6Hz)，7.46-7.34(7H,m)，8.09(1H,s)，8.21(1H,d,J＝5.3Hz)，8.70(1H,s)；13C-NMR(126MHz；CDCl3)：δ51.4，67.8，77.9，115.5，115.8，116.0，124.5，128.8，128.9，130.4(d,JC-F＝3.3Hz)，130.7(d,JC-F＝8.2Hz)，135.6，137.4，144.8，151.4，157.4，158.2，158.2，163.0(d,JC-F＝248Hz)。对C24H21FN5O3(M+H)计算的HRMS(ESI+)为446.1628。实测值为446.1626。
4-(4-(4-氟苯基)-1-(氧杂环丁烷-3-基)-1H-咪唑-5-基)嘧啶-2-胺(41；ZH-78)
向含于THF/MeOH 1:1(10ml)中的氧杂环丁烷-3-基氨基甲酸酯(102mg,0.229mmol)的溶液加入20％wt Pd(OH)2/C(65.0mg)。将所得混合物在氢气氛中于200psi下搅拌4小时。将混合物通过硅藻土过滤，浓缩并通过急骤层析(CHCl3/MeOH/NEt3 97:2:1)纯化，得到浅黄色固体(62.7mg,88％)。1H-NMR(500MHz；CD3OD)：δ4.93(2H,t,J＝6.7Hz)，5.05(2H,t,J＝7.3Hz)，5.73(1H,m,J＝6.8Hz)，6.37-6.36(1H,m)，7.12-7.08(2H,m)，7.46-7.43(2H,m)，8.06(1H,d,J＝5.2Hz)，8.27(1H,s)；13C-NMR(126MHz；CD3OD)：δ53.0，54.8，78.2，111.7，116.3，116.5，126.9，131.4(d,JC-F＝3.3Hz)，131.6(d,JC-F＝8.3Hz)，138.2，143.2，159.2，159.3，164.1(d,JC-F＝247Hz)，164.7。对C16H15FN5O3(M+H)计算的HRMS(ESI+)为312.1261。实测值为312.1256。
(4-((环己基甲基亚氨基)甲基)嘧啶-2-基)氨基甲酸苄基酯(42)
向含于aq.HCl(2ml,8.00mmol)中的粗醛2(0.108g,0.419mmol)的冰冷溶液加入45％aq.KOH(0.449g,8.00mmol)，同时保持温度低于15℃。向中和溶液加入CH2Cl2(5ml)和K2CO3(0.069g,0.502mmol)，接着加入环己基甲胺(110μL,0.838mmol)。将反应混合物逐渐升温至室温并继续搅拌18小时。反应混合物的1H NMR分析表明醛完全消耗。粗产物不经分离即用于下一步骤。
(4-(1-(环己基甲基)-4-(4-氟苯基)-1H-咪唑-5-基)嘧啶-2-基)氨基甲酸苄基酯(43)
将含于CH2Cl2(10ml)中的α-(对甲苯磺酰基)-4-氟苄基异腈(0.145g,0.503mmol)、亚胺(0.153g,0.419mmol)和aq.20％K2CO3(0.350ml,0.503mmol)的混合物在室温下搅拌72小时，将反应混合物用CH2Cl2稀释，用水洗涤，干燥(MgSO4)，过滤并浓缩。剩余物经急骤层析(EtOAc/石油溶剂3:7)，得到呈无色固体形式的环己基甲基氨基甲酸酯(102mg,50％)，熔点为174℃至181℃。1H-NMR(500MHz；CDCl3)：δ1.64-0.83(11H,m)，4.46(2H,d,J＝7.2Hz)，5.25(2H,s)，6.65(1H,d,J＝5.3Hz)，7.04(2H,t,J＝8.7Hz)，7.45-7.30(7H,m)，7.56(1H,s)，8.17(1H,d,J＝5.4Hz)，9.57(1H,s)；13C-NMR(126MHz；CDCl3)：δ25.7，26.3，30.4，38.9，52.9，67.6，115.6，115.7，124.3，128.7，128.8，128.8，130.6(d,JC-F＝8.1Hz)，130.7(d,JC-F＝3.3Hz)，135.6，141.2，144.5，151.5，157.6，157.8，159.4，162.6(d,J＝247Hz)。对C28H29FN5O2(M+H)计算的HRMS(ESI+)为486.2305。实测值为486.2303。
4-(1-(环己基甲基)-4-(4-氟苯基)-1H-咪唑-5-基)嘧啶-2-胺(44；ZH-138)
向含于THF/MeOH 5:2(7ml)中的环己基甲基氨基甲酸酯(102mg,0.229mmol)的溶液加入20％wt Pd(OH)2/C(21.0mg)。将所得混合物在氢气氛中于200psi下搅拌2小时。将混合物通过硅藻土过滤，浓缩，并通过急骤层析(EtOAc/石油溶剂9:1)纯化，得到无色固体(25.1mg,34％)，熔点为180℃至199℃。1H-NMR(500MHz；CDCl3)：δ0.88-0.85(2H,m)，1.14-1.11(2H,m)，1.68-1.53(7H,m)，4.09(2H,d,J＝6.7Hz)，5.18(2H,s)，6.50(1H,d,J＝5.2Hz)，7.00(2H,t,J＝8.8Hz)，7.48-7.45(2H,m)，7.54(1H,s)，8.15(1H,d,J＝5.2Hz)；13C-NMR(126MHz；CDCl3)：δ25.7，26.3，30.7，39.0，52.9，112.5，115.4，115.5，125.0，130.1(d,JC-F＝8.1Hz)，130.7(d,JC-F＝3.2Hz)，140.0，142.5，158.4，159.3，162.5(d,JC-F＝247Hz)，163.1。对C20H23FN5(M+H)计算的HRMS(ESI+)为352.1937。实测值为352.1932。
Figure BDA0002314826310000461
对甲苯亚磺酸
向对甲苯亚磺酸钠盐(2.00g,10.3mmol)加入H2O(10ml)，将所得混合物搅拌30分钟直到得到清澈溶液。加入乙醚(10ml)，接着加入浓缩的HCl(0.7ml)，并且继续搅拌另外的30分钟。将有机层分离，用甲苯(10ml)稀释，在旋转蒸发器上浓缩，直到除去约90％的溶剂。加入庚烷(5ml)，并将所获得的白色固体过滤，用庚烷洗涤并在真空下干燥，以产生呈白色固体形式的对甲苯亚磺酸(1.1g,69％)。1H NMR(DMSO-d6,400MHz)δ2.37(3H,s)，7.36(1H,d,J＝8Hz)，7.54(1H,d,J＝8Hz)；13C NMR(DMSO-d6,100MHz)δ20.9，124.5，129.4，141.3，146.0。
N-(对甲苯基(甲苯磺酰基)甲基)甲酰胺(45)
向含于甲苯(2ml)和乙腈(2ml)中的对甲苯甲醛(1.00g,8.32mmol)的溶液加入甲酰胺(0.937g,20.8mmol)，接着加入TMSCl(0.995g,9.15mmol)和TolSO2H(1.95g,12.5mmol)。将所得悬浮液在50℃下加热5小时。将反应混合物冷却至0℃，加入乙醚(5ml)和H2O(10ml)，将混合物在冰箱中保存过夜。通过过滤来收集由此获得的白色固体产物，并在真空下干燥，得到45(0.810g,33％)。化合物45在室温下在DMSO-d6中以酰胺旋转异构体的5:1混合物存在。主要异构体的光谱数据：1H NMR(DMSO-d6,400MHz)δ2.31(3H,s)，2.39(3H,s)，6.31(1H,d,J＝10.4Hz)，7.21(2H,d,J＝7.6Hz)，7.40-7.42(4H,m)，7.69(2H,d,J＝8.0Hz)，7.93(1H,s)，9.70(1H,d,J＝10.4Hz)；13C NMR(DMSO-d6,100MHz)δ21.3，21.6，70.4，127.7，129.3，129.7，129.8，130.0，134.0，139.5，145.2，160.6。
1-(异氰基(对甲苯基)甲基)磺酰基)-4-甲苯(46)
向含于无水THF(5ml)中的25(0.80g,0.263mmol)的溶液加入磷酰氯(0.493ml,0.527mmol)，将所得溶液在25℃下搅拌5分钟。在将溶液冷却至0℃之后，缓慢加入三乙胺(2.21ml,1.58mmol)。将反应混合物升温至5-10℃并在此保持45分钟。依次加入乙酸乙酯(5ml)和水(5ml)，将混合物搅拌5分钟。将有机层分离，用水、饱和NaHCO3、盐水洗涤，并蒸发至干。将剩余物用1-丙醇(5ml)稀释，并将该溶液在旋转蒸发器上浓缩至其原始体积的约一半(2.5ml)。将剩余物冷却至5℃至10℃保持30分钟，过滤结晶的米色固体，用1-丙醇冲洗两次，在真空下干燥，得到46(0.420g,56％)。1H NMR(CDCl3,400MHz)δ2.39(3H,s)，2.47(3H,s)，5.57(1H,s)，7.18-7.24(4H,m)，7.33(2H,d,J＝8.4Hz)，7.63(2H,d,J＝8Hz)；13C NMR(CDCl3,100MHz)δ21.3，21.8，76.4，123.5，128.3，129.5，129.7，130.2，130.5，141.1，146.5，165.8。
(4-(1-(环己基)-4-(4-甲基苯基)-1H-咪唑-5-基)嘧啶-2-基)氨基甲酸苄基酯(47)
在20℃下，向含于CH2Cl2(5ml)中的亚胺12(0.267g,0.788mmol)的溶液加入1-(异氰基(对甲苯基)甲基)磺酰基)-4-甲苯46(0.250g,0.876mmol)和20％aq.K2CO3(1.2ml,含有0.242g,1.75mmol)，同时继续搅拌过夜。此时，加入另外的亚胺(0.029g,0.088mmol)和K2CO3(0.061g,0.086mmol)，并将反应混合物在30℃搅拌过夜。将反应混合物用CH2Cl2稀释，用水洗涤，干燥(MgSO4)，过滤并浓缩。剩余物经急骤层析(MeOH/CHCl3/Et3N 6:93:1)，接着用甲醇重结晶，得到呈白色固体形式的47(0.062g,15％)。1H NMR(CDCl3,400MHz)δ1.21-1.28(2H,m)，1.37-1.47(2H,m)，1.58-1.74(2H,m)，1.82-1.85(2H,m)，2.10-2.13(2H,m)，2.35(3H,s)，4.99-5.02(1H,m)，5.27(2H,s)，6.85(1H,d,J＝5.2Hz)，7.12(1H,d,J＝8.4Hz)，7.32-7.46(7H,m)，7.60(1H,s)，7.77(1H,s)，8.35(1H,d,J＝5.2Hz)；13C NMR(CDCl3,100MHz)δ21.4，25.7，34.7，55.4，67.6，116.9，123.9，128.6，128.7，128.8，129.3，131.7，135.6，136.8，137.7，144.9，151.3，157.4，158.0，159.8；对C28H30N5O2(M+H)计算的HRMS(ESI+)为468.2400。实测值为468.2402。
4-(1-(1-(环己基)-4-(4-甲基苯基)-1H-咪唑-5-基)嘧啶-2-胺(48；SS8-186)
将含于THF(3ml)和甲醇(0.3ml)中的47(0.050g,0.012mmol)和20wt％Pd(OH)2/C(0.010g)的混合物在200psi下氢化1小时。将混合物通过硅藻土过滤并减压浓缩，得到粗产物。剩余物经急骤层析(MeOH/CHCl3/Et3N 7:92:1)，得到呈白色固体形式的48(0.020g,50％)。1H NMR(CDCl3,400MHz)δ1.26-1.40(4H,m)，1.56-1.75(2H,m)，1.86-1.90(2H,m)，2.15-2.17(2H,m)，2.35(3H,s)，4.49-4.57(1H,m)，5.09(2H,s)，6.54(1H,d,J＝5.2Hz)，7.10(2H,d,J＝8.0Hz)，7.37(2H,d,J＝8.0Hz)，7.73(1H,s)，8.15(1H,d,J＝5.2Hz)；13C NMR(CDCl3,100MHz)δ21.4，25.5，26.0，55.7，113.2，124.6，128.3，129.2，131.7，135.9，137.2，143.0，158.4，159.8，163.1；对C20H24N5(M+H)计算的HRMS(ESI+)为334.2032。实测值为334.2028。
N-((4-氯苯基)(甲苯磺酰基)甲基)甲酰胺(49)
向含于甲苯(2ml)和乙腈(2ml)中的对甲苯甲醛(1.00g,7.11mmol)的溶液加入甲酰胺(0.801g,17.8mmol)，接着加入TMSCl(0.850g,7.83mmol)和TolSO2H(1.66g,10.7mmol)。将所得悬浮液在50℃下加热5小时。将反应混合物冷却至0℃，加入乙醚(5ml)和H2O(10ml)，并将混合物在冰箱中保存过夜。通过过滤收集由此获得的白色固体产物，并在高真空下干燥，得到49(0.90g,39％)。化合物49在室温下在DMSO-d6中以酰胺旋转异构体的3:1混合物存在。主要异构体的光谱如下：1H NMR(DMSO-d6,400MHz)δ2.39(3H,s)，6.43(1H,d,J＝10.4Hz)，7.41-7.51(4H,m)，7.57(2H,d,J＝8.4Hz)，7.70(2H,d,J＝8.0Hz)，7.94(1H,s)，9.77(1H,d,J＝10.8Hz)；13C NMR(DMSO-d6,100MHz)δ21.6，69.9，124.9，128.7，129.6，130.1，131.7，133.6，134.9，145.5，160.7。
1-(氯-4-异氰基(甲苯基)甲基)苯(50)
向含于无水THF(5ml)中的49(0.800g,0.247mmol)的溶液加入磷酰氯(0.462ml,0.494mmol)，将所得溶液在25℃下搅拌5分钟。在将溶液冷却至0℃之后，缓慢加入三乙胺(2.06ml,1.48mmol)。将反应混合物升温至5℃至10℃并在此保持45分钟。依次加入乙酸乙酯(5ml)和水(5ml)，将混合物搅拌5分钟。将有机层分离，用水、饱和NaHCO3、盐水洗涤，并蒸发至干。将剩余物用1-丙醇(5ml)稀释，并将所得溶液在旋转蒸发器上浓缩至其原始体积的一半(2.5ml)。将剩余物冷却至5℃至10℃保持30分钟，过滤结晶的米色固体，用1-丙醇冲洗两次，在高真空下干燥，得到50(0.115g,14％)。1H NMR(CDCl3,400MHz)δ2.48(3H,s)，5.58(1H,s)，7.28(2H,d,J＝8.4Hz)，7.34-7.49(4H,m)，7.63(2H,d,J＝8.0Hz)；13C NMR(CDCl3,100MHz)δ21.8，75.8，125.1，129.1，129.7，129.8，129.9，130.5，137.2，146.9，166.6。
(4-(1-(环己基)-4-(4-氯苯基)-1H-咪唑-5-基)嘧啶-2-基)氨基甲酸苄基酯(51)
在20℃下，向含于CH2Cl2(5ml)中的亚胺12(0.119g,0.353mmol)的溶液加入1-(氯-4-异氰基(甲苯基)甲基)苯50(0.120g,0.392mmol)和20％aq.K2CO3(0.108g,0.785mmol)，同时继续搅拌过夜。此时，加入另外的亚胺(0.013g,0.062mmol)和K2CO3(0.047g,0.345mmol)，并将反应混合物在30℃搅拌过夜。将反应混合物用CH2Cl2稀释，用水洗涤，干燥(MgSO4)，过滤并浓缩。剩余物经急骤层析(MeOH/CHCl3/Et3N 6:93:1)，接着用CH3OH/CH2Cl2重结晶，得到呈白色固体形式的51(0.051g,20％)。1H NMR(CDCl3,400MHz)δ1.21-1.28(2H,m)，1.36-1.46(2H,m)，1.56-1.74(2H,m)，1.82-1.86(2H,m)，2.10-2.13(2H,m)，4.96-5.02(1H,m)，5.27(2H,s)，6.81(1H,d,J＝5.6Hz)，7.29(1H,d,J＝8.8Hz)，7.32-7.46(7H,m)，7.69(1H,s)，7.78(1H,s)，8.38(1H,d,J＝5.2Hz)；13C NMR(CDCl3,100MHz)δ25.7，34.7，55.5，67.6，116.8，124.3，128.7，128.8，129.9，130.0，133.1，133.8，135.8，137.0，143.3，151.2，157.6，158.3，159.4；对C27H27 35ClN5O2(M+H)计算的HRMS(ESI+)为488.1853。实测值为488.1861。
4-(1-(1-(环己基)-4-(4-氯苯基)-1H-咪唑-5-基)嘧啶-2-胺(52；SS8-190)
将含于THF(5ml)和甲醇(0.5ml)中的50(0.050g,0.102mmol)和20wt％Pd(OH)2/C(0.020g)的混合物在200psi下氢化1小时。将混合物通过硅藻土过滤并减压浓缩，得到粗产物。剩余物经急骤层析(MeOH/CHCl3/Et3N 20:79:1)，得到被脱氯化合物污染的52。1H NMR(CDCl3,400MHz)δ1.23-1.42(4H,m)，1.56-1.76(2H,m)，1.87-1.91(2H,m)，2.15-2.17(2H,m)，4.49-4.55(1H,m)，5.06(2H,s)，6.54(1H,d,J＝5.2Hz)，7.26-7.30(2H,m)，7.49(2H,d,J＝8.0Hz)，7.75(1H,s)，8.16(1H,d,J＝5.2Hz)；对C19H20 35ClN5(M+H)计算的HRMS(ESI+)为354.1485。实测值为354.1479。
Figure BDA0002314826310000501
2-(甲氨基)嘧啶-4-甲醛盐酸盐(53)
向含于THF(1ml)中的4-(二甲氧基甲基)-N-甲基嘧啶-2-胺(0.060g,0.33mmol)的溶液加入含水的4M HCl(2ml)。将所得混合物加热至40℃过夜，然后冷却至室温。包含醛的盐酸盐的反应混合物不经分离直接用于下一步骤。
4-((环己基亚氨基)-甲基)-N-甲基嘧啶-2-胺(54)
向含于aq.HCl(2ml,7.94mmol)中的粗醛53(0.045g,0.33mmol)的冰冷溶液加入45％aq.KOH(0.448g,7.98mmol)，同时保持温度低于15℃。向中和混合物加入CH2Cl2(5ml)和K2CO3(0.55g,0.39mmol)，接着加入环己胺(0.38g,0.39mmol)。将反应混合物逐渐升温至室温并继续搅拌2小时。1H NMR分析表明醛完全消耗。将反应混合物用CH2Cl2稀释，用水洗涤，干燥(MgSO4)，过滤并浓缩。粗产物不经纯化即用于下一步骤(0.068g,48％)。1H NMR(CDCl3,400MHz)δ1.25-1.43(2H,m)，1.53-1.67(8H,m)，5.10-5.14(1H,m)，7.12(1H,d,J＝4.8Hz)，8.12(1H,s,NH)，8.34(1H,d,J＝5.2Hz)；13C NMR(CDCl3,100MHz)δ24.6，25.6，34.0，69.8，112.4，151.6，157.8，158.9，163.2；对C12H19N4(M+H)计算的HRMS(ESI+)为219.1610。实测值为219.1622。
4-(1-环己基-4-(4-氟苯基)-1H-咪唑-5-基)-N-甲基嘧啶-2-胺(55；SS9-010)
将含于CH2Cl2(5ml)中的α-(对甲苯磺酰基)-4-氟苄基异腈(0.060g,0.275mmol)亚胺54(0.088g,0.306mmol)和20％aq.K2CO3(0.085g,0.612mmol)的混合物在20℃下搅拌过夜。此时，加入另外的亚胺(5.0mg,0.027mmol)和K2CO3(7.0mg,0.056mmol)，并将反应混合物在30℃下搅拌第二夜。将反应混合物用CH2Cl2稀释，用水洗涤，干燥(MgSO4)，过滤并浓缩。剩余物经急骤层析(EtOAc/石油溶剂6:4)，得到呈白色固体形式的55(0.045g,48％)。1H NMR(CDCl3,400MHz)δ1.20-1.40(4H,m)，1.61-1.76(2H,m)，1.88-1.91(2H,m)，2.18-2.21(2H,m)，2.10-2.13(2H,m)，3.06(3H,d,J＝11.6Hz)，4.57-4.65(1H,br s)，5.13-5.15(1H,m)，6.41(1H,d,J＝5.2Hz)，6.96-7.01(2H,m)，7.44-7.49(2H,m)，7.73(1H,s)，8.16(1H,d,J＝5.2Hz)；13C NMR(CDCl3,100MHz)δ25.5，26.1，28.6，34.7，55.7，111.9，115.2，115.5，130.1，130.2，135.9，158.3，159.0，159.5，163.2，163.6；对C20H23FN5(M+H)计算的HRMS(ESI+)为352.1937。实测值为352.1935。
Figure BDA0002314826310000511
吡咯烷-1-羧酰亚胺硫酸盐(56)
将含于水(10ml)中的等摩尔量的吡咯烷(1.77ml,21.5mmol)和2-甲基-2-硫代假脲硫酸盐(3.00g,21.5mmol)加热回流2小时。使反应混合物冷却至室温并加入浓缩的H2SO4(2.25ml,21.5mmol)。蒸发溶剂，过滤所获得的固体，用丙酮洗涤并干燥，得到呈白色固体形式的56(3.10g,86％)。1H NMR(D2O,400MHz)δ1.98-2.01(4H,m)，3.38-3.40(4H,m)；13C NMR(D2O,100MHz)δ24.8，46.8，154.1；对C5H12N3(M+H)计算的HRMS(ESI+)为114.1031。实测值为114.2028。
1,1-二甲基胍硫酸盐(57)
将含于水(10ml)中的二甲胺(40％w/v H2O)(3.08ml,28.7mmol)和2-甲基-2-硫代假脲硫酸盐(2.00g,14.3mmol)在室温下搅拌3天。使反应混合物冷却至室温并加入浓缩的H2SO4(0.76ml,14.3mmol)。蒸发溶剂，过滤所获得的固体，用丙酮洗涤并干燥，得到呈白色固体形式的57(2.01g,98％)，熔点为280℃。1H NMR(D2O,400MHz)δ3.03(6H,s)；13C NMR(D2O,100MHz)δ37.3，156.7；对C3H10N3(M+H)计算的HRMS(ESI+)为88.0875。实测值为88.0878。
1-苄基胍硫酸盐(58)
向含于水(10ml)和乙醇(10ml)中的2-甲基-2-硫代假脲硫酸盐(2.00g,14.3mmol)的溶液加入苄胺(1.57ml,17.2mmol)。将所得反应混合物加热回流12小时。使反应混合物冷却至室温并加入浓缩的H2SO4(0.76ml,14.3mmol)。蒸发溶剂，过滤所获得的固体，用乙醚洗涤并干燥，得到呈白色固体形式的58(2.36g,72％)。1H NMR(D2O,400MHz)δ3.82(2H,s)，7.23-7.27(5H,m)；13C NMR(D2O,100MHz)δ44.4，126.8，127.9，128.9，136.1，156.8；为C8H12N3(M+H)计算的HRMS(ESI+)为150.1031。实测值为150.1037。
1-丙基胍硫酸盐(59)
将含于水(10ml)中的丙胺(1.77ml,22.1mmol)和2-甲基-2-硫代假脲硫酸盐(2.00g,14.3mmol)在室温下搅拌3天。使反应混合物冷却至室温并加入浓缩的H2SO4(0.76ml,14.3mmol)。蒸发溶剂，过滤所获得的固体，用乙醚洗涤并干燥，得到呈白色固体形式的59(2.22g,99％)。1H NMR(D2O,400MHz)δ0.92(3H,t,J＝8Hz)，1.56-1.61(2H,六重峰,J＝8Hz)，3.12(3H,t,J＝8Hz)；13C NMR(D2O,100MHz)δ10.3，21.3，42.7，156.7；对C4H12N3(M+H)计算的HRMS(ESI+)为102.1031。实测值为102.1037。
4-(二甲氧基甲基)-2-(吡咯烷-1-基)嘧啶(60)
向含于水(10ml)中的E-1,1-二甲氧基-4-二甲基氨基丁-2-烯-2-酮(2.29g,13.2mmol)的溶液加入氢氧化钠(0.706g,17.6mmol)和56(1.00g,8.83mmol)。将所得混合物加热回流2小时，然后将反应混合物冷却至室温，过滤以除去沉淀的硫酸钠。用CH2Cl2萃取含水滤液几次。干燥(MgSO4)合并的有机层，过滤并浓缩。剩余物经急骤层析(EtOAc/石油溶剂1:1)，得到呈淡黄色油状物形式的60(0.110g,10％)。1H NMR(CDCl3,400MHz)δ1.96-2.00(4H,m)，3.42(6H,m)，3.57-3.60(4H,m)，5.08(1H,s)，6.68(1H,d,J＝5.2Hz)，8.34(1H,d,J＝5.2Hz)；13C NMR(CDCl3,100MHz)δ25.7，46.8，54.0，103.8，105.7，158.4，160.3，165.9；对C11H18N3O2(M+H)计算的HRMS(ESI+)为224.1399。实测值为224.1398。
4-(二甲氧基甲基)-N,N-二甲基嘧啶-2-胺(61)
向含于水(10ml)中的E-1,1-二甲氧基-4-二甲基氨基丁-2-烯-2-酮(1.91g,11.0mmol)的溶液加入氢氧化钠(0.867g,7.35mmol)和57(1.00g,7.35mmol)。将所得混合物加热回流16小时，将反应物用CH2Cl2稀释，并用水洗涤。在几次萃取之后，干燥(MgSO4)合并的有机层，过滤并浓缩。剩余物经急骤层析(EtOAc/石油溶剂1:1)，得到呈淡黄色油状物形式的61(0.09g,7％)。1H NMR(CDCl3,400MHz)δ3.18(6H,s)，3.41(6H,s)，5.08(1H,s)，6.66(1H,d,J＝5.2Hz)，8.33(1H,d,J＝5.2Hz)；13C NMR(CDCl3,100MHz)δ37.1，54.0，103.9，105.7，158.4，162.3，165.6；对C9H16N3O2(M+H)计算的HRMS(ESI+)为198.1243。实测值为198.1238。
N-苄基-4-(二甲氧基甲基)嘧啶-2-胺(62)
向含于水(10ml)中的E-1,1-二甲氧基-4-二甲基氨基丁-2-烯-2-酮(1.97g,11.3mmol)的溶液加入氢氧化钠(0.606g,15.2mmol)和58(1.50g,7.57mmol)。将所得混合物加热回流16小时。将反应物用CH2Cl2稀释，并用水洗涤。在几次萃取之后，干燥(MgSO4)合并的有机层，过滤并浓缩。剩余物经急骤层析(EtOAc/石油溶剂1:1)，得到呈淡黄色油状物形式的62(0.6g,31％)。1H NMR(CDCl3,400MHz)δ3.39(6H,s)，5.65(2H,d,J＝6Hz)，5.10(1H,s)，5.57(1H,br s)，6.77(1H,d,J＝5.2Hz)，7.24-7.36(5H,m)，8.33(1H,d,J＝4.8Hz)；13CNMR(CDCl3,100MHz)δ45.7，53.8，103.0，108.0，127.4，127.7，128.7，139.2，159.0，162.4，166.2；对C14H17N3O2(M+H)计算的HRMS(ESI+)为260.1399。实测值为260.1401。
4-(二甲氧基甲基)-N-丙基嘧啶-2-胺(63)
向含于水(10ml)中的E-1,1-二甲氧基-4-二甲基氨基丁-2-烯-2-酮(2.07g,12.1mmol)的溶液加入氢氧化钠(0.80g,20.1mmol)和59(1.50g,10.1mmol)。将所得混合物加热回流16小时。将反应物用CH2Cl2稀释，并用水洗涤。在几次萃取之后，干燥(MgSO4)合并的有机层，过滤并浓缩。剩余物经急骤层析(EtOAc/石油溶剂1:1)，得到呈淡黄色油状物形式的63(0.25g,12％)。1H NMR(CDCl3,400MHz)δ0.97(3H,t,J＝8Hz)，1.59-1.65(2H,m)，3.36-3.41(2H,m)，3.39(6H,s)，5.09(1H,s)，6.72(1H,d,J＝4.8Hz)，8.33(1H,d,J＝5.2Hz)；13C NMR(CDCl3,100MHz)δ11.6，22.9，43.5，53.7，103.0，107.5，158.9，162.6，166.1；对C10H18N3O2(M+H)计算的HRMS(ESI+)为212.1399。实测值为212.1401。
1-(4-甲酰基嘧啶-2-基)吡咯烷盐酸盐(64)
向含于THF(1ml)中的60(0.080g,0.358mmol)的溶液加入含水的4M HCl(2ml)。将所得混合物加热至40℃过夜，然后冷却至室温。包含醛的盐酸盐的反应混合物不经分离直接用于下一步骤。
2-(二甲基氨基)嘧啶-4-甲醛盐酸盐(65)
向含于THF(1ml)中的61(0.080g,0.406mmol)的溶液加入含水的4M HCl(2ml)。将所得混合物加热至40℃过夜，然后冷却至室温。包含醛的盐酸盐的反应混合物不经分离直接用于下一步骤。
2-(苄氨基)嘧啶-4-甲醛盐酸盐(66)
向含于THF(1ml)中的62(0.200g,0.772mmol)的溶液加入含水的4M HCl(2ml)。将所得混合物加热至40℃过夜，然后冷却至室温。包含醛的盐酸盐的反应混合物不经分离直接用于下一步骤。
2-(丙基氨基)嘧啶-4-甲醛盐酸盐(67)
向含于THF(1ml)中的63(0.200g,0.948mmol)的溶液加入含水的4M HCl(2ml)。将所得混合物加热至40℃过夜，然后冷却至室温。包含醛的盐酸盐的反应混合物不经分离直接用于下一步骤。
N-((2-(吡咯烷-1-基)嘧啶-4-基)亚甲基)环己胺(68)
向含于aq.HCl(2ml,7.94mmol)中的粗醛64(0.060g,0.338mmol)的冰冷溶液加入45％aq.KOH(0.448g,7.98mmol)，同时保持温度低于15℃。向中和混合物加入CH2Cl2(5ml)和K2CO3(0.047g,0.338mmol)，接着加入环己胺(0.040g,0.406mmol)。将反应混合物逐渐升温至室温并继续搅拌过夜。1H NMR分析表明醛完全消耗。将反应混合物用CH2Cl2稀释，用水洗涤，干燥(MgSO4)，过滤并浓缩。粗产物无需纯化即用于下一步骤(0.080g,91％)。1H NMR(CDCl3,400MHz)δ1.25-1.42(4H,m)，1.66-1.84(6H,m)，1.98-2.01(4H,m)，3.26-3.31(1H,m)，3.58-3.61(4H,m)，7.08(1H,d,J＝4.8Hz)，8.15(1H,s,NH)，8.34(1H,d,J＝5.2Hz)；13CNMR(CDCl3,100MHz)δ24.6，25.5，25.6，34.0，46.6，69.7，104.8，158.1，158.3，159.7，162.2；对C15H23N4(M+H)计算的HRMS(ESI+)为259.1923。实测值为259.1915。
4-((环己基亚氨基)-甲基)-N,N-二甲基嘧啶-2-胺(69)
向含于aq.HCl(2ml,7.94mmol)中的粗醛65(0.063g,0.417mmol)的冰冷溶液加入45％aq.KOH(0.448g,7.98mmol)，同时保持温度低于15℃。向中和混合物加入CH2Cl2(5ml)和K2CO3(0.057g,0.417mmol)，接着加入环己胺(0.049g,0.534mmol)。将反应混合物逐渐升温至室温并继续搅拌过夜。1H NMR分析表明醛完全消耗。将反应混合物用CH2Cl2稀释，用水洗涤，干燥(MgSO4)，过滤并浓缩。粗产物不经纯化即用于下一步骤(0.091g,93％)。1H NMR(CDCl3,400MHz)δ1.02-1.43(4H,m)，1.61-1.85(6H,m)，3.19(3H,s)，3.21(3H,s)，3.24-3.31(1H,m)，7.08(1H,d,J＝5.2Hz)，8.14(1H,s,NH)，8.34(1H,d,J＝5.2Hz)；13C NMR(CDCl3,100MHz)δ24.8，25.7，34.2，37.2，69.9，105.0，158.2，158.4，159.9，162.3；对C13H24N4(M+H)计算的HRMS(ESI+)为233.1766。实测值为233.1758。
N-苄基-4-((环己基亚氨基)-甲基)嘧啶-2-胺(70)
向含于aq.HCl(2ml,7.94mmol)的粗醛66(0.2g,0.939mmol)的冰冷溶液加入45％aq.KOH(0.448g,7.98mmol)，同时保持温度低于15℃。向中和混合物加入CH2Cl2(5ml)和K2CO3(0.129g,0.939mmol)，接着加入环己胺(0.112g,11.3mmol)。将反应混合物逐渐升温至室温并继续搅拌过夜。1H NMR分析表明醛完全消耗。将反应混合物用CH2Cl2稀释，用水洗涤，干燥(MgSO4)，过滤并浓缩。粗产物不经纯化即用于下一步骤(0.250g,92％)。1H NMR(CDCl3,400MHz)δ1.24-1.38(4H,m)，1.56-1.68(4H,m)，1.81-1.84(2H,m)，3.24-3.31(1H,m)，3.39(2H,s)，6.73(1H,d,J＝4.8Hz)，7.24-7.27(5H,m)，8.11(1H,s)，8.32(1H,d,J＝5.2Hz)；13CNMR(CDCl3,100MHz)δ24.7，25.6，33.9，45.5，69.8，107.8，127.2，127.4，128.5，139.08，158.8，158.9，162.4，166.0；对C12H19N4(M+H)计算的HRMS(ESI+)为295.1923。实测值为295.1915。
4-((环己基亚氨基)-甲基)-N-丙基嘧啶-2-胺(71)
向含于aq.HCl(2ml,7.94mmol)中的粗醛67(0.15g,0.908mmol)的冰冷溶液加入45％aq.KOH(0.448g,7.98mmol)，同时保持温度低于15℃。向中和混合物加入CH2Cl2(5ml)和K2CO3(0.125g,0.908mmol)，接着加入环己胺(0.108g,11.1mmol)。将反应混合物逐渐升温至室温并继续搅拌过夜。1H NMR分析表明醛完全消耗。将反应混合物用CH2Cl2稀释，用水洗涤，干燥(MgSO4)，过滤并浓缩。粗产物不经纯化即用于下一步骤(0.250g,91％)。1H NMR(CDCl3,400MHz)δ0.96-1.00(3H,t,J＝8Hz)，1.24-1.38(4H,m)，1.56-1.84(8H,m)，3.25-3.30(1H,m)，3.39(2H,t,J＝8.4Hz)，5.09(1H,br s)，6.72(1H,d,J＝5.2Hz)，8.11(1H,s,NH)，8.32(1H,d,J＝4.8Hz)；13C NMR(CDCl3,100MHz)δ11.4，22.8，24.6，25.1，43.3，69.9，105.0，158.2，158.4，159.9，162.3；对C12H19N4(M+H)计算的HRMS(ESI+)为247.1923。实测值为247.1915。
4-(1-环己基-4-(4-氟苯基)-1H-咪唑-5-基)-2-(吡咯烷-1-基)嘧啶(72；SS9-098)
将含于CH2Cl2(5ml)中的α-(对甲苯磺酰基)-4-氟苄基异腈(0.099g,0.344mmol)、粗亚胺68(0.070g,0.309mmol)和20％aq.K2CO3(0.095g,0.688mmol)的混合物在20℃下搅拌过夜。此时，加入另外的K2CO3(0.024g,0.172mmol)，并将反应混合物在30℃搅拌第二夜。将反应混合物用CH2Cl2稀释，用水洗涤，干燥(MgSO4)，过滤并浓缩。剩余物经急骤层析(EtOAc/石油溶剂4:6)，得到不纯的产物，将其通过HPLC再纯化，得到72(0.028g,26％)。1H NMR(MeOH,400MHz,HCl盐)δ1.11-1.31(4H,m)，1.39-1.69(4H,m)，1.75-1.81(2H,m)，1.75-1.81(2H,m)，1.95-2.01(2H,m)，2.09-2.16(2H,m)，3.48-3.71(4H,m)，4.75-4.81(1H,m)，6.49(1H,d,J＝6.4Hz)，7.13-7.18(2H,m)，7.36-7.40(2H,m)，7.94(1H,d,J＝6.8Hz)，9.03(1H,s)；13C NMR(CDCl3,100MHz)δ24.7，25.7，34.0，47.3，58.2，109.7，116.6，116.8，122.9，130.7，130.8，155.9，157.6，162.5，165.0；对C20H23FN5(M+H)计算的HRMS(ESI+)为392.2250。实测值为392.2247。
4-(1-环己基-4-(4-氟苯基)-1H-咪唑-5-基)–N,N-二甲基嘧啶-2-胺(73；SS9-078)
将含于CH2Cl2(5ml)中的α-(对甲苯磺酰基)-4-氟苄基异腈(0.124g,0.430mmol)、粗亚胺69(0.090g,0.387mmol)和20％aq.K2CO3(0.119g,0.861mmol)的混合物在20℃搅拌过夜。此时，加入另外的K2CO3(0.030g,0.215mmol)，并将反应混合物在30℃下搅拌第二夜。将反应混合物用CH2Cl2稀释，用水洗涤，干燥(MgSO4)，过滤并浓缩。剩余物经急骤层析(EtOAc/石油溶剂6:4)，得到不纯的产物，将其通过HPLC再纯化，得到73(0.022g,14％)。1H NMR(CDCl3,400MHz)δ1.25-1.39(4H,m)，1.73-1.79(2H,m)，1.95-1.98(2H,m)，2.24-2.26(2H,m)，3.26(6H,s)，4.70-4.75(1H,m)，6.31(1H,d,J＝5.2Hz)，7.09-7.12(2H,m)，7.46-7.48(2H,m)，8.32(1H,d,J＝5.2Hz)，8.85(1H,s)；13C NMR(CDCl3,100MHz)δ25.0，25.8，34.3，37.3，58.0，110.1，116.5，116.7，123.3，126.7，130.66，130.73，133.8，134.4，155.1，159.0，162.2，162.7，164.7；对C20H23FN5(M+H)计算的HRMS(ESI+)为366.2094。实测值为365.2089。
N-苄基-4-(1-环己基-4-(4-氟苯基)-1H-咪唑-5-基)嘧啶-2-胺(74；SS9-102)
将含于CH2Cl2(5ml)中的α-(对甲苯磺酰基)-4-氟苄基异腈(0.273g,0.945mmol)、粗亚胺69(0.230g,0.850mmol)和20％aq.K2CO3(0.261g,1.891mmol)的混合物在20℃搅拌过夜。此时，加入另外的K2CO3(0.065g,0.472mmol)和亚胺(0.023g,0.085mmol)，并将反应混合物在30℃下搅拌第二夜。将反应混合物用CH2Cl2稀释，用水洗涤，干燥(MgSO4)，过滤并浓缩。剩余物经急骤层析(EtOAc/石油溶剂6:4)，得到呈白色固体形式的74(0.110g,35％)。1HNMR(CDCl3,400MHz)δ1.19-1.25(4H,m)，1.56-1.62(2H,m)，1.81-1.86(2H,m)，2.11-2.14(2H,m)，4.54-4.57(1H,m)，4.71(2H,d,J＝6.0Hz)，5.55(1H,br s)，6.44(1H,d,J＝5.2Hz)，6.96-7.01(2H,m)，7.28-7.31(1H,m)，7.34-7.37(4H,m)，7.44-7.47(2H,m)，7.72(1H,s)，8.16(1H,d,J＝5.2Hz)；13C NMR(CDCl3,100MHz)δ25.3，25.7，34.5，45.3，55.4，112.3，115.2，115.3，125.0，127.2，127.3，128.7，129.9，130.0，130.7，135.7，140.0，141.6，158.3，160.0，161.0，62.4，163.5；对C20H23FN5(M+H)计算的HRMS(ESI+)为428.2250。实测值为428.2247。
4-(1-环己基-4-(4-氟苯基)-1H-咪唑-5-基)-丙基嘧啶-2-胺(75；SS9-106)
将含于CH2Cl2(5ml)中的α-(对甲苯磺酰基)-4-氟苄基异腈(0.260g,0.902mmol)、粗亚胺71(0.200g,0.812mmol)和20％aq.K2CO3(0.250g,1.812mmol)的混合物在20℃下搅拌过夜。此时，加入另外的K2CO3(0.064g,0.448mmol)和亚胺(0.021g,0.081mmol)，并将反应混合物在30℃下搅拌第二夜。将反应混合物用CH2Cl2稀释，用水洗涤，干燥(MgSO4)，过滤并浓缩。剩余物经急骤层析(EtOAc/石油溶剂6:4)，得到呈白色固体形式的75(0.085g,23％)。1HNMR(CDCl3,400MHz)δ1.01(3H,t,J＝7.2Hz)，1.23-1.39(4H,m)，1.59-1.76(4H,m)，1.88-1.91(2H,m)，2.16-2.19(2H,m)，3.43(2H,q,J＝7.2Hz)，4.55-4.58(1H,br s)，5.19-5.35(1H,m)，6.38(1H,d,J＝5.2Hz)，6.98-7.01(2H,m)，7.43-7.47(2H,m)，7.72(1H,s)，8.14(1H,d,J＝5.2Hz)；13C NMR(CDCl3,100MHz)δ11.6，23.1，25.5，26.0，34.7，43.5，55.6，111.9，115.2，115.4，130.1，130.2，135.8，141.5，158.3，161.2，163.2，163.6；对C20H23FN5(M+H)计算的HRMS(ESI+)为380.2250。
实测值为380.2246。
Figure BDA0002314826310000571
4-二甲氧基甲基-2-甲硫基-嘧啶(76)
将含于MeOH(80ml)中的1,1-二甲氧基-4-二甲基氨基丁-2-烯-2-酮(5.00g,28.9mmol)、硫脲(3.30g,43.4mmol)和2.5M NaOMe(2.34g,43.4mmol)的混合物加热回流过夜。将混合物冷却至室温，然后滴加MeI(2.16ml,34.7mmol)。将混合物在室温下搅拌过夜。将混合物在真空下浓缩。将剩余物萃取到EtOAc中，用水、盐水洗涤，用Na2SO4干燥，在真空下浓缩。剩余物经急骤层析(EtOAc/石油溶剂1:5)，得到呈无色油状物形式的硫醚(4.14g,72％)。1H NMR(CDCl3,400MHz)δ2.91(3H,s)，5.67(6H,s)，5.18(1H,s)，7.18(1H,d,J＝4.0Hz)，8.56(1H,d,J＝4.0Hz)；13C NMR(CDCl3,100MHz)δ14.3，54.2，103.2，113.4，158.0，165.7，172.8。
2-(甲硫基)嘧啶-4-甲醛(77)
向4-二甲氧基甲基-2-甲硫基-嘧啶(4.10g,20.5mmol)的溶液加入含水的4M HCl(13ml)。将所得混合物加热至50℃过夜。1H NMR分析表明转化为甲醛，因此将混合物冷却至室温。将反应混合物用EtOAc稀释，并用K2CO3溶液中和。将含水相用EtOAc萃取，用MgSO4干燥并浓缩。粗产物不经纯化即用于下一步骤(2.74g,87％)。1H NMR(CDCl3,400MHz)δ2.64(3H,s)，7.44(1H,d,J＝4.8Hz)，8.77(1H,d,J＝4.8Hz)，9.96(1H,s)。
4-((环己基亚氨基)-甲基)-N-甲硫基嘧啶-2-胺(78)
向含于CH2Cl2(15ml)中的粗醛(2.74g,17.8mmol)的溶液加入20％含水K2CO3(0.55g,0.39mmol)和环己胺(2.45ml,21.4mmol)。将反应混合物在室温下搅拌过夜。1H NMR分析表明醛完全消耗。包含亚胺的反应混合物不经分离直接用于下一步骤。
4-(1-环己基-4-(4-氟苯基)-1H-咪唑-5-基)-2-(甲硫基)嘧啶(79)
将含于CH2Cl2(15ml)中的α-(对甲苯磺酰基)-4-氟苄基异腈(5.67g,19.6mmol)、亚胺(2.74g,17.8mmol)和K2CO3(2.71g,19.6mmol)的混合物在室温下搅拌过夜。将反应混合物用CH2Cl2稀释，用水洗涤，干燥(MgSO4)，过滤并浓缩。剩余物经急骤层析(EtOAc/石油溶剂1:1)得到固体，将其从EtOAc/石油溶剂中重结晶，得到呈浅黄色晶体形式的硫化物(2.32g,35％)，熔点为192℃至195℃。1H-NMR(400MHz；CDCl3)：δ1.41-1.19(3H,m)，1.75-1.59(3H,m)，1.88(2H,d,J＝13.3Hz)，2.16(2H,d,J＝11.3Hz)，2.58(3H,s)，4.62(1H,tt,J＝11.9，3.4Hz)，6.76(1H,d,J＝5.2Hz)，6.99(2H,t,J＝8.6Hz)，7.40(2H,dd,J＝8.5，5.5Hz)，7.76(1H,s)，8.31(1H,d,J＝5.2Hz)；13C-NMR(101MHz；CDCl3)：δ14.2，25.4，26.0，34.7，55.9，115.5，115.71(s,1C)，117.2，124.2，130.3(d,JC-F＝8.0Hz)，130.6(d,JC-F＝3.2Hz)，136.6，143.1，157.1，158.2，162.6(d,JC-F＝247Hz)，173.0。对C20H22FN4S(M+H)计算的HRMS(ESI+)为369.1549。实测值为369.1545。
4-(1-环己基-4-(4-氟苯基)-1H-咪唑-5-基)-2-甲基磺酰基嘧啶-2-胺(80)
向mCPBA(0.569g,3.30mmol)分批加入含于CH2Cl2(20ml)中的硫化物(0.404g,1.10mmol)的混合物，将混合物在室温下搅拌过夜。TLC表明转化为极性更大的化合物。混合物用aq.Na2CO3淬灭、水、盐水洗涤(water,brine)，用Na2SO4干燥，并在真空下浓缩，得到呈无色固体形式的砜(0.440g,87％)，熔点为196℃至202℃。1H-NMR(400MHz；CDCl3)：δ1.93-1.21(8H,m)，2.23(2H,d,J＝11.3Hz)，3.39(3H,s)，4.85(1H,tt,J＝11.8，3.4Hz)，7.08(2H,t,J＝8.6Hz)，7.27(1H,m)，7.43(2H,dd,J＝8.5，5.5Hz)，7.86(1H,s)，8.59(1H,d,J＝5.4Hz)；13C-NMR(101MHz；CDCl3)：δ25.5，25.8，34.9，39.2，56.9，116.0，116.3，123.1，130.3(d,JC-F＝3.6Hz，1C)，130.7(d,JC-F＝8.2Hz)，138.2，146.0，157.5，159.8，163.1(d,JC-F＝249Hz)，166.3。对C20H22FN4O2S(M+H)计算的HRMS(ESI+)为401.1447。实测值为401.1444。
N-环丁基-4-(1-环己基-4-(4-氟苯基)-1H-咪唑-5-基)嘧啶-2-胺(81)
向含于THF(2ml)中的80(38.0mg,0.095mmol)的混合物加入环丁胺(35.0μL,0.569mmol)，将混合物在室温下搅拌40小时。将混合物在真空下浓缩，并将化合物通过急骤层析(EtOAc/石油溶剂1:1)纯化，得到浅黄色固体(37.0mg,99％)，熔点为185℃至189℃。1H-NMR(500MHz；CDCl3)：δ1.99-1.29(13H,m)，2.17(2H,d,J＝11.2Hz)，2.43(2H,qd,J＝7.7,3.3Hz)，4.50(1H,dq,J＝16.1,8.0Hz)，4.60(1H,br s)，5.46(1H,br s)，6.38(1H,d,J＝5.1Hz)，7.00-6.96(2H,m)，7.46-7.44(2H,m)，7.73(1H,s)，8.13(1H,d,J＝4.3Hz)；13C-NMR(126MHz；CDCl3)：δ15.2，25.5，26.0，31.9，34.7，46.6，55.5，112.1，115.2，115.4，125.2，130.1(d,JC-F＝8.0Hz)，130.8(d,JC-F＝3.1Hz)，135.8，141.6，158.3，159.1，161.7，162.4(d,JC-F＝247Hz)。对C23H27FN5(M+H)计算的HRMS(ESI+)为392.2250。实测值为392.2247。
4-(1-环己基-4-(4-氟苯基)-1H-咪唑-5-基)-N-(氧杂环丁烷-3-基)嘧啶-2-胺(82)
向含于THF(2ml)中的80(48.0mg,0.120mmol)的混合物加入3-氧杂环丁烷胺(48.0μL,0.053mmol)，并将混合物在室温下搅拌24小时。TLC表明反应不完全，因此加入另外的3-氧杂环丁烷胺(48μL,0.053mmol)并继续搅拌另外的48小时。将混合物在真空下浓缩，并将化合物通过急骤层析(EtOAc/石油溶剂1:1)纯化，得到浅黄色固体(44.9mg,95％)。1H-NMR(500MHz；CDCl3)：δ1.92-1.27(8H,m)，2.15-2.12(2H,m)，4.48(1H,dd,J＝9.6,6.0Hz)，4.62(2H,t,J＝6.5Hz)，4.98(2H,t,J＝7.0Hz)，5.15(1H,q,J＝6.8Hz)，6.46(1H,d,J＝5.1Hz)，6.99-6.95(2H,m)，7.41(2H,td,J＝6.1,2.6Hz)，7.74(1H,s)，8.17(1H,d,J＝5.1Hz)；13CNMR(126MHz；CDCl3)δ21.2，25.4，26.0，34.64，46.6，55.6，76.9，77.4，79.2，113.0，115.3，115.5，124.9，130.1(d,JC-F＝8.1Hz)，130.6(d,JC-F＝3.0Hz)，136.0，141.9，158.4，159.2，161.5(s，1C)，162.4(d,JC-F＝247.2Hz)。对C22H25FN5O(M+H)计算的HRMS(ESI+)为394.2043。实测值为394.2042。
4-(1-环己基-4-(4-氟苯基)-1H-咪唑-5-基)-N-(丙-2-炔-1-基)嘧啶-2-胺(83)
向含于THF(5ml)中的混合物80(58.0mg,0.145mmol)加入炔丙胺(56.0μL,0.869mmol)，并将混合物在室温下搅拌24小时。TLC表明反应不完全，因此加入另外的炔丙胺(112μL,1.74mmol)并继续搅拌另外的6天。加入另外的3-氧杂环丁烷胺(48μL,0.053mmol)，并继续搅拌48小时。将混合物在真空下浓缩，并将化合物通过急骤层析(EtOAc/石油溶剂1:1)纯化，得到浅橙色固体(51.3mg,94％)，熔点为147℃至155℃。1H-NMR(500MHz；CDCl3)：δ2.19-1.20(10H,m)，2.24(1H,t,J＝2.5Hz)，4.28(2H,dd,J＝5.8，2.5Hz)，4.61-4.59(1H,m)，5.63-5.59(1H,m)，6.48(1H,d,J＝5.1Hz)，7.01-6.96(2H,m)，7.46-7.42(2H,m)，7.75(1H,s)，8.19(1H,d,J＝5.1Hz)；13C NMR(126MHz；CDCl3)δ25.5，25.9，31.3，34.8，55.6，71.2，81.0，112.9，115.3，115.5，125.0，130.2(d,JC-F＝8.0Hz)，130.8(d,JC-F＝3.3Hz)，136.0，142.0，158.4，159.1，161.8，162.4(d,JC-F＝247Hz)。对C22H23FN5(M+H)计算的HRMS(ESI+)为376.1937。实测值为376.1934。
2-((4-(1-环己基-4-(4-氟苯基)-1H-咪唑-5-基)嘧啶-2-基)氨基)乙-1-醇(84)
向含于THF(5ml)中的80(0.104g,0.261mmol)的混合物加入乙醇胺(93μL,1.56mmol)，并将混合物在室温下搅拌18小时。TLC表明砜完全消耗转变为极性更大的化合物。将混合物在真空下浓缩，并将化合物通过急骤层析(EtOAc/石油溶剂8:2)纯化，得到浅黄色固体(79.6mg,80％)，熔点为180℃至184℃。1H NMR(CD3OD,400MHz)δ1.29-2.15(10H,m)，3.56(2H,m)，3.74(2H,m)，4.58(1H,m)，6.37(1H,d,J＝4Hz)，7.06，(2H,m)，7.39(2H,m)，8.00(1H,s)，8.14(1H,d,J＝4Hz)；13C NMR(CD3OD,101MHz)δ26.3，26.9，44.7，49.5，57.1，61.9，112.7，116.1，116.35，123.8，126.8，131.3(d,JC-F＝8.1Hz)，131.7(d,JC-F＝3.1Hz)，137.4，141.6，159.5，160.0，163.8(d,JC-F＝246Hz)，164.0。对C21H25FN5O(M+H)计算的HRMS(ESI+)为382.2043。实测值为382.2040。
Figure BDA0002314826310000601
(4-((环戊基亚氨基)甲基)嘧啶-2-基)氨基甲酸苄基酯
向含于aq.HCl(2ml,8.00mmol)的粗醛2(0.070g,0.274mmol)的冰冷溶液加入45％aq.KOH(0.449g,8.00mmol)，同时保持温度低于15℃。向中和溶液加入CH2Cl2(5ml)和K2CO3(0.045g,0.328mmol)，接着加入环戊胺(54.0μL,0.547mmol)。将反应混合物逐渐升温至室温并继续搅拌18小时。反应混合物的1H NMR分析表明醛完全消耗。粗产物不经分离即用于下一步骤。
(4-(1-(环戊基)-4-(4-氟苯基)-1H-咪唑-5-基)嘧啶-2-基)氨基甲酸苄基酯
将含于CH2Cl2(10ml)中的α-(对甲苯磺酰基)-4-氟苄基异腈(0.095g,0.329mmol)、亚胺(0.088g,0.274mmol)和aq.20％K2CO3(0.255ml,0.329mmol)的混合物在室温下搅拌60小时，将反应混合物用CH2Cl2稀释，用水洗涤，干燥(MgSO4)，过滤并浓缩。剩余物经急骤层析(EtOAc/石油溶剂3:2)得到环戊基氨基甲酸酯(0.103mg,82％)。
4-(1-(环戊基)-4-(4-氟苯基)-1H-咪唑-5-基)嘧啶-2-胺
向含于THF/MeOH 10:1中的环戊基氨基甲酸酯的溶液加入20％wt Pd(OH)2/C。将所得混合物在氢气氛中于200psi下搅拌2小时。将混合物通过硅藻土过滤，浓缩，通过急骤层析(CHCl3/MeOH/NEt3 97:2:1)纯化，得到无色固体。
(4-((环戊基甲基亚氨基)甲基)嘧啶-2-基)氨基甲酸苄基酯
向含于aq.HCl(2ml,8.00mmol)中的粗醛2(0.147g,0.571mmol)的冰冷溶液加入45％aq.KOH(0.449g,8.00mmol)，同时保持温度低于15℃。向中和溶液加入CH2Cl2(5ml)和K2CO3(0.095g,0.685mmol)，接着加入环戊基甲胺(107μL,0.113mmol)。将反应混合物逐渐升温至室温并继续搅拌18小时。反应混合物的1H NMR分析表明醛完全消耗。粗产物不经分离即用于下一步骤。
(4-(1-(环戊基甲基)-4-(4-氟苯基)-1H-咪唑-5-基)嘧啶-2-基)氨基甲酸苄基酯
将含于CH2Cl2(10ml)中的α-(对甲苯磺酰基)-4-氟苄基异腈(0.198g,0.5685mmol)、亚胺(0.193g,0.571mmol)和aq.20％K2CO3(0.475ml,0.685mmol)的混合物在室温下搅拌72小时。将反应混合物用CH2Cl2稀释，用水洗涤，干燥(MgSO4)，过滤并浓缩。剩余物经急骤层析(EtOAc/石油溶剂3:2)得到呈无色固体形式的环戊基甲基氨基甲酸酯。
4-(1-(环戊基甲基)-4-(4-氟苯基)-1H-咪唑-5-基)嘧啶-2-胺
向含于THF/MeOH 10:1中的环戊基甲基氨基甲酸酯的溶液加入20％wt Pd(OH)2/C。将所得混合物在氢气氛中于200psi下搅拌2小时。将混合物通过硅藻土过滤，浓缩，通过急骤层析(CHCl3/MeOH/NEt3 97:2:1)纯化，得到无色固体。
1W.C.Still，M.Kahn和A.M.Mitra，J.Org.Chem.，1978，43，2923。
2A.B.Pangborn，M.A.Giardello，R.H.Grubbs，R.K.Rosen和F.J.Timmers，Organometallics，1996，15，1518。

Claims (81)

1.式(I)的化合物，或其盐、溶剂合物、前药或多晶型物：
Figure FDA0002314826300000011
其中：
R1和R2是：
(i)各自独立地选自由H、C1-6烷基、C2-6炔基、C1烷基C6芳基、C6芳基、C3-6环烷基和C3-5杂环基组成的组；或
(ii)R1和R2与R1和R2所附接的氮原子一起形成杂环基团或杂芳基团；
R3选自F、Cl、Br、I、CH3、OCH3、OCF2H、OCF3、CO2H、CO2C1-10烷基；
R4选自由C0-3烷基C3-12环烷基、C1-12烷基、C1-10烷基C6芳基、C1-6烷基OC1-6烷基C6芳基、C0-6烷基杂芳基和C0-6烷基杂环基组成的组；
其中，R1、R2、R3和R4中的每一者任选被取代。
2.根据权利要求1所述的化合物，其中，所述化合物不选自图8中的化合物列表。
3.根据权利要求1或权利要求2所述的化合物，其中，R1不是H。
4.根据前述权利要求中的任一项所述的化合物，其中，R1是C1-12烷基。
5.根据权利要求4的化合物，其中，R1被羟基取代。
6.根据前述权利要求中的任一项所述的化合物，其中，R1是C1-3烷基。
7.根据权利要求1的化合物，其中，R1是C2-6炔基。
8.根据权利要求1的化合物，其中，R1是C6芳基。
9.根据权利要求1的化合物，其中，R1是C3-6环烷基。
10.根据权利要求1的化合物，其中，R1是C3-5杂环基。
11.根据前述权利要求中的任一项所述的化合物，其中，R2是H。
12.根据权利要求1所述的化合物，其中，R1和R2两者是相同的。
13.根据权利要求1的化合物，其中，R1和R2与R1和R2所附接的氮一起形成杂环基团。
14.根据权利要求13所述的化合物，其中，R1和R2与R1和R2所附接的氮一起形成吗啉代基团。
15.根据权利要求13的化合物，其中，R1和R2与R1和R2所附接的氮一起形成包含4至8个碳原子的N-杂环基。
16.根据前述权利要求中的任一项所述的化合物，其中，R3选自CH3和卤素。
17.根据权利要求16所述的化合物，其中，R3是F或Cl。
18.根据前述权利要求任一项所述的化合物，其中，R4是C0-3烷基C3-12环烷基。
19.根据权利要求18所述的化合物，其中，所述C3-12环烷基选自环丙基、环丁基、环戊基、环己基和环庚基。
20.根据前述权利要求中的任一项所述的化合物，其中，R4是C3-12环烷基。
21.根据权利要求18-20中的任一项所述的化合物，其中，R4是桥连部分。
22.根据权利要求21所述的化合物，其中，R4选自金刚烷基、降冰片基和螺环烷基部分。
23.根据权利要求1至17中的任一项所述的化合物，其中，R4是C1-12烷基。
24.根据权利要求23所述的化合物，其中，R4是甲基、乙基、丙基或丁基。
25.根据权利要求1至17中的任一项所述的化合物，其中，R4是C0-10烷基C6芳基。
26.根据权利要求1-17中的任一项所述的化合物，其中，R4是C1-6烷基OC1-6烷基C6芳基。
27.根据权利要求1至17中的任一项所述的化合物，其中，R4是C0-6烷基杂芳基。
28.根据权利要求1-17中的任一项所述的化合物，其中，R4是C0-6烷基杂环基。
29.根据权利要求28所述的化合物，其中，R4是桥连部分。
30.根据权利要求29所述的化合物，其中，R4是螺杂烷基部分。
31.根据权利要求28至30中的任一项所述的化合物，其中，所述杂环基包含氮原子。
32.根据权利要求31所述的化合物，其中，R4是3-氮杂环丁烷基、3-吡咯烷基、或4-哌啶基。
33.根据权利要求31或权利要求32所述的化合物，其中，氮原子被基团R5取代，其中，R5选自由C0-3烷基C3-12环烷基、C1-12烷基、C0-10烷基C6芳基、C1-6烷基OC1-6烷基C6芳基、C0-6烷基杂芳基和C0-6烷基杂环基组成的组。
34.根据权利要求33所述的化合物，其中，R5是C0-3烷基C3-12环烷基。
35.根据权利要求33或权利要求34所述的化合物，其中，R5是C3-C12环烷基。
36.根据权利要求33至35中的任一项所述的化合物，其中，R5包含桥连部分。
37.根据权利要求35或36所述的化合物，其中，R5包含金刚烷基、降冰片基或螺环烷基部分。
38.根据权利要求33所述的化合物，其中，R5是C0-6烷基杂环基。
39.根据权利要求38所述的化合物，其中，R5包含桥连部分。
40.根据权利要求38或权利要求39所述的化合物，其中，R5包含螺杂烷基部分。
41.式(Ia)的化合物，或其盐、溶剂合物、前药或多晶型物：
Figure FDA0002314826300000031
其中：
R1和R2是：
(i)各自独立地选自由H、C1-6烷基、C2-6炔基、C6芳基和C3-5杂环基组成的组；或
(ii)R1和R2与R1和R2所附接的氮原子一起形成杂环基团；
R3选自由F、Cl、Br、I和CH3组成的组；
R4选自由C0-3烷基C3-12环烷基、C1-12烷基和C0-6烷基杂环基组成的组；
其中，R1、R2、R3和R4中的每一者任选被取代。
42.根据权利要求41所述的化合物，其中，所述化合物不选自图8中的化合物列表。
43.根据权利要求41或权利要求42所述的化合物，其中，R1不是H。
44.根据权利要求41所述的化合物，其中，R1是C1-12烷基。
45.根据权利要求43所述的化合物，其中，R1被羟基取代。
46.根据权利要求41至45中的任一项所述的化合物，其中，R1是C1-3烷基。
47.根据权利要求41所述的化合物，其中，R1是C2-6炔基。
48.根据权利要求41所述的化合物，其中，R1是C6芳基。
49.根据权利要求41所述的化合物，其中，R1是C3-6环烷基。
50.根据权利要求41所述的化合物，其中，R1是C3-5杂环基。
51.根据权利要求41至50中的任一项所述的化合物，其中，R2是H。
52.根据权利要求41至51中的任一项所述的化合物，其中，R1和R2两者是相同的。
53.根据权利要求41所述的化合物，其中，R1和R2与R1和R2所附接的氮一起形成吗啉代基团。
54.根据权利要求41所述的化合物，其中，R1和R2与R1和R2所附接的氮一起形成包含4至8个碳原子的N-杂环基。
55.根据权利要求41-54中的任一项所述的化合物，其中，R3是CH3。
56.根据权利要求41至54中的任一项所述的化合物，其中，R3是F或Cl。
57.根据权利要求41至56中的任一项所述的化合物，其中，R4是C0-3烷基C3-12环烷基。
58.根据权利要求57所述的化合物，其中，R4是C3-12环烷基。
59.根据权利要求57所述的化合物，其中，R4是C1烷基C3-12环烷基。
60.根据权利要求57-59中的任一项所述的化合物，其中，所述C3-12环烷基选自环丙基、环丁基、环戊基、环己基和环庚基。
61.根据权利要求57-60中的任一项所述的化合物，其中，所述C3-12环烷基是桥连部分。
62.根据权利要求61所述的化合物，其中，R4选自金刚烷基、降冰片基和螺环烷基部分。
63.根据权利要求41至56中的任一项所述的化合物，其中，R4是C1-12烷基。
64.根据权利要求63所述的化合物，其中，R4是甲基、乙基、丙基或丁基。
65.根据权利要求41至56中的任一项所述的化合物，其中，R4是C0-6烷基杂环基。
66.根据权利要求65所述的化合物，其中，R4是桥接部分。
67.根据权利要求65或权利要求66所述的化合物，其中，R4是螺杂烷基部分。
68.根据权利要求65所述的化合物，其中，R4是3-氮杂环丁烷基、3-吡咯烷基或4-哌啶基。
69.根据权利要求65至68中的任一项所述的化合物，其中，所述杂环基包含氮原子。
70.根据权利要求69所述的化合物，其中，氮被基团R5取代，其中，R5选自由C0-3烷基C3-12环烷基、C1-12烷基、C0-10烷基C6芳基、C1-6烷基OC1-6烷基C6芳基、C0-6烷基杂芳基和C0-6烷基杂环基组成的组。
71.根据权利要求70所述的化合物，其中，R5选自C1-12烷基和C0-10烷基C6芳基。
72.根据权利要求71所述的化合物，其中，所述C0-10烷基C6芳基是C1-6烷基C6芳基。
73.根据前述权利要求中的任一项所述的化合物，其中，R1、R2、R3和R4任选被选自OH、C1-6烷氧基、卤素、氨基、巯基和C1-6烷基的一个或多个基团取代。
74.一种治疗或预防有需要的受试者的呼吸系统疾病的方法，所述方法包括：向所述受试者施用治疗有效量的根据权利要求1至40中的任一项所述的式(I)的化合物，从而治疗或预防受试者的呼吸系统疾病。
75.根据权利要求1至40中的任一项所述的式(I)的化合物，其用于治疗或预防受试者的呼吸系统疾病。
76.一种组合物，其包含根据权利要求1至40中的任一项所述的式(I)的化合物和药学上可接受的赋形剂。
77.根据权利要求1至40中的任一项所述的化合物或根据权利要求76所述的组合物在制备用于治疗或预防受试者的呼吸系统疾病的药物中的用途。
78.一种治疗或预防有需要的受试者的呼吸系统疾病的方法，所述方法包括：向所述受试者施用治疗有效量的根据权利要求41至73中的任一项所述的式(Ia)化合物，从而治疗或预防受试者的呼吸系统疾病。
79.根据权利要求41至73中的任一项所述的式(Ia)化合物，其用于治疗或预防受试者的呼吸系统疾病。
80.一种组合物，其包含根据权利要求41至73中的任一项所述的式(Ia)的化合物和药学上可接受的赋形剂。
81.根据权利要求41至73中的任一项所述的化合物或根据权利要求80所述的组合物在制备用于治疗或预防受试者的呼吸系统疾病的药物中的用途。
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