CN110746514B - 一种黑果枸杞多糖的提取方法及其应用 - Google Patents
一种黑果枸杞多糖的提取方法及其应用 Download PDFInfo
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Abstract
本发明以黑果枸杞为原料提取多糖，采用蒽酮‑乙酸乙酯‑浓硫酸溶液测定多糖的含量。对黑果枸杞的果实进行粉碎、浸泡、加热、过滤、抽滤等处理，得到含有黑果枸杞多糖的溶液。提取的黑果枸杞多糖经水提醇沉、抽滤，滤饼置于烘箱中烘干，分别取多糖粉末，加入的DMSO后溶解，磁力搅拌器下搅拌12小时，加入蒸馏水，抽滤。沉淀依次用无水乙醇、丙酮和乙醚洗涤、干燥后得到黑果枸杞多糖精制品；将得到的黑果枸杞多糖精制品经过大孔树脂脱色、Sevage法脱蛋白后，即得到所述的黑果枸杞多糖。用DMSO法精制使得多糖的得率大大提高，该黑果枸杞多糖应用到K562细胞上，可以通过改变线粒体通路中相关凋亡蛋白的表达量促进细胞凋亡，具有抗白血病肿瘤的作用。
Description
技术领域
本发明属于多糖提取技术领域，具体涉及一种黑果枸杞多糖的提取方法及其应用。
背景技术
黑果枸杞(Lycium ruthenicum Murr.)是茄科、枸杞属多年生灌木。分为野生和人工栽培品，其中野生品花青素含量高于人工栽培品。我国的主要产区是青海、新疆和甘肃地区，以青海柴达木盆地为最好，该地区的光照时间长，昼夜温差大，荒漠盐土上可形成大面积的黑枸杞灌丛。本实验取自青海柴达木盆地野生黑果枸杞。黑果枸杞最突出的特点花青素含量高，研究较多，而多糖是其提高免疫力的主要物质基础，相关报道较少。多糖(polysaccharide)是一类具有天然生物活性的聚合物，由10个及以上单糖连接而成具有多羟基的醛或酮类的化合物，易溶于水。多糖在生物体内不仅是提供能量和组成结构的物质，更具有清除自由基，提高免疫力和抗肿瘤和抑制肿瘤转移等功能，其作用机制是多靶点，多环节的，显示出了很好的临床前景。
现有黑枸杞多糖的提取工艺多为传统的热水浸提法或有机溶剂(乙醚、乙醇、石油醚等)脱脂后热水浸提法，这些常规方法中溶剂用量大、耗时长且提取率低，为提高黑枸杞子的经济效益，提高黑枸杞子中有效成份的提取率，寻找快速而有效的黑枸杞多糖提取方法是枸杞产业化发展的一个重要研究课题。
白血病是血液系统里异常的原始造血干细胞失去了分化成熟的能力而停留在细胞发育的不同阶段的克隆性恶性肿瘤。临床症状为发热、严重贫血、淋巴结肿大及出血，严重时会导致急性死亡，是一类危害人类健康的重要的恶性肿瘤，被人们所恐惧。儿童白血病是所有儿童恶性肿瘤中发病率最高的，儿童的慢性白血病，尤其是慢性粒细胞白血病(chronicmyeloidleukemia,CML)，是一种起源于造血干细胞的恶性克隆性的增生疾病，在骨髓和造血组织中粒细胞会大量增生积聚并浸润其他组织和器官，其发病率为1-2/10万。多糖因其毒副作用小，资源丰富，是抗肿瘤佐剂的发展方向，使肿瘤患者看到希望。
目前多糖的提取方法主要有水提取法，酸碱浸提，微波法，酶法。酸碱提取法后期需要中和，且提取条件比较剧烈，对糖链破坏性较大，目前已少用；微波法的提取时间不宜长，功率不宜过高，否则会导致水分蒸发过度，多糖溶出受阻，同时，该法降低了了某些反应的活化能，使得多糖分子间，多糖与其他分子间形成新的作用力，阻止多糖分子的溶出；酶法提取反应温和，弊端是纤维素酶和果胶酶的运用，难以控制，往往容易得到大量的寡糖，具有抗肿瘤生物活性的寡糖通常含量很少。以上提取方法虽各有利弊，但总体提取效率较低，多糖的获得在精制环节损失较大，并且黑果枸杞多糖在抗肿瘤上的应用较少的，因此本发明提供一种黑果多糖的提取方法及在抗肿瘤中的应用。
发明内容
为了解决上述的技术问题，本发明提供了一种黑果枸杞多糖的提取方法及其应用。
一方面，本发明提供了一种黑果枸杞多糖的提取方法，包括以下步骤：
(1)将黑果枸杞洗净后，在40℃下烘干，经过脱水、粉碎、过300目筛、干燥后得到黑果枸杞粉末；
(2)将黑果枸杞粉末加入蒸馏水中，搅拌均匀后，在70-90℃下提取2-3h 后，经过过滤后即得到所述的黑果枸杞多糖的提取溶液；所述黑果枸杞粉末和蒸馏水的料液比为1:20-1:30g/mL；
(3)将步骤(2)黑果枸杞多糖的提取溶液加入乙醇，酒精计检测酒精度为 90％后，进行抽滤，将得到的滤饼置于烘箱中在60℃下烘干30min后，得到多糖粉末；
(4)将步骤(3)得到的5g多糖粉末加入10-50mL的DMSO后溶解后，磁力搅拌12h后，加入50mL蒸馏水，继续搅拌20min后放置2h，然后进行抽滤，将得到的沉淀依次用无水乙醇、丙酮和乙醚洗涤后，在70℃下干燥30min，得到黑果枸杞多糖精制品；
(5)将步骤(4)得到的黑果枸杞多糖精制品经过大孔树脂脱色、Sevage 法脱蛋白后，即得到所述的黑果枸杞多糖(LBP)。
优选地，所述步骤(2)为将黑果枸杞粉末加入蒸馏水中，搅拌均匀后，在 70℃下提取3h后，经过过滤后即得到所述的黑果枸杞多糖的提取溶液；所述黑果枸杞粉末和蒸馏水的料液比为1:25g/mL。
优选地，所述(4)为将步骤(3)得到的5g多糖粉末加入50mL的DMSO 后溶解后，磁力搅拌12h后，加入50mL蒸馏水，继续搅拌20min后放置2h，然后进行抽滤，将得到的沉淀依次用无水乙醇、丙酮和乙醚洗涤后，在70℃下干燥30min，得到黑果枸杞多糖精制品。
另一方面，本发明提供了上述制备得到的黑果枸杞多糖在抗白血病肿瘤上的应用，采用CCK8实验发现黑果枸杞多糖(LBP)有抑制人慢性粒细胞白血病细胞株K562体外增殖的现象，并采用Western Blotting法检测线粒体通路相关凋亡蛋白的表达情况，发现LBP可以使通路中抗凋亡蛋白Bcl-2表达下降，促凋亡蛋白Bax表达上升，凋亡抑制因子xIAP表达下降，并能使线粒体膜破裂，释放细胞色素C(Cyt-C)，使得细胞质中的C(Cyt-C)含量增加。以上结果表明LBP 可以通过线粒体通路来诱导肿瘤细胞凋亡，具有抗白血病肿瘤的作用。
本发明的有益效果为：
本发明提供的黑果枸杞多糖的提取方法采用蒸馏水为提取介质，方法简单、高效。以黑果枸杞为原料提取多糖，采用蒽酮-乙酸乙酯-浓硫酸溶液测定多糖的含量。对黑果枸杞粉末进行浸泡、加热、过滤、抽滤等处理，得到含有黑果枸杞多糖的溶液。通过改变料液比、提取温度、提取时间等影响因子，正交试验提取结果表明，黑果枸杞多糖的最优提取工艺条件是料液比为1：25g/mL，提取温度为70℃，提取时间为3h，提取的多糖含量最高。用DMSO法精制使得多糖的得率大大提高，当DMSO加入体积为50mL时，得率高达66.34％，并且使得后续的脱蛋白的时间大大缩短。采用CCK8实验发现黑果枸杞多糖(LBP)有抑制人慢性粒细胞白血病细胞株K562体外增殖的现象，该黑果枸杞多糖(LBP) 应用到K562细胞上，可以通过改变线粒体通路中相关凋亡蛋白的表达量促进细胞凋亡，具有抗白血病肿瘤的作用。
附图说明
图1为不同浓度葡萄糖溶液最大吸收波长图；
图2为不同浓度葡萄糖溶液标准曲线图；
图3为实施例1制备得到的黑果枸杞多糖对K562细胞生长的抑制率图；
图4为实施例1制备得到的黑果枸杞多糖对线粒体通路中Bcl-2和Bax蛋白表达量灰度图；
图5为实施例1制备得到的黑果枸杞多糖对线粒体通路中xIAP和cyt-C蛋白表达量灰度图。
具体实施方式
实施例1一种黑果枸杞多糖的提取方法
包括以下步骤：
(1)将黑果枸杞洗净后，在40℃下烘干，经过脱水、粉碎、过300目筛、干燥后得到黑果枸杞粉末；
(2)将黑果枸杞粉末加入蒸馏水中，搅拌均匀后，在70℃下提取3h后，经过过滤后即得到所述的黑果枸杞多糖的提取溶液；所述黑果枸杞粉末和蒸馏水的料液比为1：25g/mL；
(3)将步骤(2)黑果枸杞多糖的提取溶液加入乙醇，酒精计检测酒精度为 90％后，进行抽滤，将得到的滤饼置于烘箱中在60℃下烘干30min后，得到多糖粉末；
(4)将步骤(3)得到的5g多糖粉末加入50mL的DMSO后溶解后，磁力搅拌12h后，加入50mL蒸馏水，继续搅拌20min后放置2h，然后进行抽滤，将得到的沉淀依次用无水乙醇、丙酮和乙醚洗涤后，在70℃下干燥30min，得到黑果枸杞多糖精制品；
(5)将步骤(4)得到的黑果枸杞多糖精制品经过大孔树脂脱色、Sevage 法脱蛋白后，即得到所述的黑果枸杞多糖(LBP)。
实验例1葡萄糖标准曲线的绘制：
(1)蒽酮-乙酸乙酯溶液配制
称取1g蒽酮放入50mL容量瓶中，缓慢加入乙酸乙酯定容，充分摇匀溶解，避光处保存备用。
(2)确定最大吸收波长：
分析天平称取0.1g葡萄糖粉末置于100mL容量瓶定容，配制浓度为1mg/mL 的葡萄糖标准溶液，分别移取0、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5mL的葡萄糖标准溶液再次定容到10mL，得葡萄糖终浓度分别为0μg/mL、10μg/mL、20μg/mL、30 μg/mL、40μg/mL、50μg/mL，取上述浓度的葡萄糖溶液2mL加入蒽酮-乙酸乙酯0.5mL，5mL浓硫酸溶液，摇匀，500-800nm波长扫描，发现620nm处吸收值最大，因此以该波长作为多糖溶液的检测波长；图1为不同浓度葡萄糖溶液最大吸收波长图。
(3)绘制标准曲线：
取上述浓度分别为0μg/mL、10μg/mL、20μg/mL、30μg/mL、40μg/mL、 50μg/mL的葡萄糖溶液，在620nm处测定吸光度，记录数据，绘制标准曲线如图2所示，得线性回归方程：A＝0.01365C-0.01071(R＝0.99733)。
实施例2不同料液比对多糖提取产率影响
称取质量为10g黑果枸杞粉末5份，加入不同体积水溶液，使其料液比(g/mL) 为1：10、1：15、1：20、1：25、1：30。玻璃棒搅拌充分浸泡，90℃提取2h，纱布过滤后布氏漏斗抽滤，取滤液，分别加入蒽酮(C14H10O)-乙酸乙酯 (CH3COOC2H5)溶液(0.5mL)，浓硫酸(H2SO4)溶液(5mL)，放入沸水中水浴1 min，立即取出室温冷却，蒸馏水作空白对照，紫外-可见分光光谱仪620nm处测得吸光度并调整浓度使得吸光值在0.2-0.7之间，对照标准曲线，求得黑果枸杞多糖的浓度，其结果如表1所示。
表1料液比对黑果枸杞多糖提取效果的影响
实验例3不同提取时间对多糖提取产率影响
称取质量为10g黑果枸杞粉末5份，加200mL水(料液比1:20g/mL)，玻璃棒搅拌充分浸泡，90℃分别提取提取1h、1.5h、2h、2.5h、3h，纱布过滤后布氏抽滤，取滤液。加入蒽酮(C14H10O)-乙酸乙酯(CH3COOC2H5)溶液0.5mL，浓硫酸溶液5mL，放入沸水中水浴1min，立即取出放冷，蒸馏水作空白对照，紫外-可见分光光谱仪620nm处测得吸光度并使吸光值在0.2-0.7之间，对照标准曲线，求得黑果枸杞多糖的浓度，其结果如表2所示。
表2提取时间对黑果枸杞多糖提取效果的影响
实验例4不同提取温度对多糖提取产率影响
称取质量为10g黑果枸杞粉末5份，加200mL水(料液比1:20g/mL)，玻璃棒搅拌充分浸泡，调节温度为60℃、70℃、80℃、90℃、100℃提取2h，纱布过滤布后氏漏斗过滤。蒽酮(C14H10O)-乙酸乙酯(CH3COOC2H5)溶液0.5mL，浓硫酸溶液5mL，沸水中水浴1min，立即取出放冷，蒸馏水作空白对照，紫外 -可见分光光谱仪620nm处测得吸光度并调整浓度使得吸光值在0.2-0.7之间，对照标准曲线，求得黑果枸杞多糖的浓度，其结果如表3所示。
表3提取温度对黑果枸杞多糖提取效果的影响
实验例5.正交试验
根据单因素水平测试结果选取各单因素测试中多糖得率最高的三组作为正交试验的三水平，料液比(A)(g/mL)的选择为1：20、1：25、1：30，提取时间(B) 的选择为2h、2.5h、3h，提取温度(C)的选择为70℃、80℃、90℃，设计正交实验，如表4-6所示：
表4正交试验的三因素三水平表
根据所选的三因素三水平做正交试验方案，如表5所示：
表5正交试验设计方案
称取质量为10g黑果枸杞，置于500mL圆底烧瓶中，按照正交实验设计方案中的组合，开展实验，实验结束后，纱布过滤，布氏漏斗抽滤，取滤液，蒽酮 (C14H10O)-乙酸乙酯(CH3COOC2H5)溶液0.5mL，浓硫酸溶液5mL，放入装有沸水的水浴锅水浴1min，立即取出放冷，蒸馏水作空白对照，紫外-可见分光光谱仪620nm处测得吸光度，对照标准曲线，求得黑果枸杞多糖的质量m。
表6正交试验的结果
从表6正交试验的结果中可以看出，通过控制料液比、改变温度和改变时间，用正交实验得到了提取黑果枸杞的多糖最有效的方法，料液比A、提取时间B、提取温度C对实验结果的影响比较明显，其中料液比A对实验结果的因素最为显著，由表中的R的值可以看出来各个因素对实验结果的影响大小顺序为 A>B>C，黑果枸杞多糖的最佳提取工艺为料液比1:25g/mL，提取时间3h，提取温度70℃。
实验例6黑果枸杞多糖精制影响因素
将实施例1中步骤(2)黑果枸杞多糖的提取溶液加入乙醇进行醇沉、抽滤后，将得到的滤饼置于烘箱中在60℃下烘干30min后，得到多糖粉末；分别加入10ml、20、30、40、50mL的DMSO后溶解，磁力搅拌器下搅拌12小时，加入500mL蒸馏水，继续搅拌20min后放置2h，抽滤。沉淀无水乙醇、丙酮、乙醚洗涤，置于干燥器内70℃干燥30min，得到黑果枸杞多糖精制品，称取质量，计算黑果枸杞多糖精制品的得率。上述黑果枸杞多糖粉末加水溶解过大孔树脂脱色除杂、Sevage法脱蛋白，得黑果枸杞多糖。从表7中可以看出，当DMSO的体积为50mL时，得到的黑果枸杞多糖精制品的得率最高。
表7黑果枸杞多糖精制品的得率
| DMSO体积 | 10mL | 20mL | 30mL | 40mL | 50mL |
| 得率 | 30.57％ | 32.69％ | 43.27％ | 58.76％ | 66.34％ |
实验例7抑制人慢性粒细胞白血病细胞株K562增殖
收集对数期的K562细胞，调整细胞悬液浓度，接种于96孔板内，每孔加入100μL细胞悬液(约10000个细胞)，置于CO2培养箱中培养12h后待细胞稳定，加入不同浓度(0.2、0.4、0.8、1mg/mL)的实施例1制备得到的黑果枸杞多糖(LBP)处理细胞。实验设置空白对照组(只加完全培养基)、正常对照组(接种肿瘤细胞、添加等量完全培养基)、不同药物浓度处理组(接种肿瘤细胞、0-1mg/mL的药物处理，每孔加药物100μL)，每组设6个平行复孔。置于二氧化碳培养箱内培养48，于处理时间后加入10uL CCK8溶液，在CO2培养箱内继续孵育4h，酶标仪450nm处测定各孔的吸光值。实验重复至少三次。按照以下公式计算药物对肿瘤细胞体外生长增殖的抑制率。
生长抑制率的计算公示为：
生长抑制率＝(OD对照组-OD处理组)/OD对照组×100％
从图3中可以看出，黑果枸杞多糖有抑制人慢性粒细胞白血病细胞株K562 体外增殖作用。
实验例8.黑果枸杞多糖对K562细胞线粒体通路凋亡蛋白表达的影响
接种K562细胞于6孔培养板内培养，加入不同浓度实施例1制备得到的黑果枸杞多糖(LBP)(0.2、0.4、0.8、1mg/mL)处理细胞分别提取细胞总蛋白和细胞细胞浆蛋白，经SDS-PAGE凝胶电泳、转膜、封闭、孵育抗体、显影即Western Blotting(免疫印迹)法检测K562细胞线粒体通路相关凋亡蛋白的表达。
具体步骤为：
一、细胞总蛋白的提取
(1)准备工作：室温下融解Western及IP细胞裂解液并混匀。加入适量的 PMSF于一定量的细胞裂解液中，调整PMSF的终浓度为1mM。5×SDS蛋白上样缓冲液融解混匀备用。
(2)蛋白提取：接种K562细胞于6孔培养板内，CO2培养箱中培养24h。实验设置对照组和用药组。用药组终浓度分别为0.2，0.4，0.8mg/mL的实施例1制备得到的黑果枸杞多糖(LBP)。连续培养48h后收集细胞至1.5mL离心管中，离心去培养基，预冷的PBS洗涤1次，1000g离心，小心吸尽PBS。每管加200μL裂解液冰浴上裂解30min，并置于水平摇床上，保证细胞裂解充分。充分裂解后 10000g，4℃离心20min去除细胞碎片，上清即为总蛋白裂解液，采用BCA蛋白定量试剂盒进行浓度定量。提取出的总蛋置白-80℃保存。上样前需要用5×SDS 蛋白上样缓冲液稀释蛋白并100℃干浴6min以充分变性蛋白。
二、细胞浆蛋白的提取
(1)准备溶液：室温融解试剂盒中的细胞浆蛋白抽提试剂A、细胞浆蛋白抽提试剂B、细胞核蛋白抽提试剂，溶解后放置于冰上，混匀。在使用前加入PMSF 于细胞浆蛋白抽提试剂A备用，使PMSF的最终浓度为1mM。
(2)细胞浆蛋白的提取：调整处于对数生长期的K562细胞悬液浓度，接种于6孔培养板内，置于37℃恒温培养箱中培养24h，用浓度分别为0.2，0.4，0.8 mg/mL的实施例制备得到的黑果枸杞多糖(LBP)48h。培养结束后将细胞收集至EP管中，离心去培养基，用4℃预冷的PBS洗涤细胞2次，1000g离心收集细胞沉淀备用。每20μL细胞沉淀加入200μL添加了PMSF的细胞浆蛋白抽提试剂A。剧烈涡旋5s，使细胞沉淀完全悬浮并分散开。冰浴15min。加入10μL细胞浆蛋白抽提试剂B。剧烈涡旋5s，冰浴1min。再次烈涡旋5s，4℃ 12000g离心5min。立即吸取上清至新预冷的EP管中，即为抽提得到的细胞浆蛋白，-80℃冰箱保存备用。
三：SDS-PAGE凝胶电泳
(1)配制分离胶：洗净玻璃板晾干后对齐放入夹中夹紧，底部应和胶条贴紧以防漏胶。根据不同蛋白分子量决定配制不同浓度(10％，12％)的分离胶。
表8 10％分离胶的配制
表9 12％分离胶的配制
配制分离胶时TEMED和过硫酸铵应最后加入并混匀，迅速注入玻板间隙中，防止板外凝固，在注入时应充分混匀，避免凝固后的胶分布不均匀影响蛋白电泳。上胶时注意不要上满，要留出约3厘米灌注浓缩胶，轻轻在顶层加1mL乙醇隔绝空气，室温放置30-40min。
(3)制备浓缩胶：
表10浓缩胶的配制
分离胶聚合完成后，会出现一条明显的分界线。倒掉乙醇液，用滤纸吸干残留液体，不要触到胶面。将配制好的浓缩胶迅速灌入分离胶液面上，并立即插入干净的梳子，室温放置20-30min待其凝聚。
(4)上样：浓缩胶完全聚合后放入电泳槽，小心拔出梳子，加满电泳缓冲液。将已变性的蛋白样品按照实验设计的顺序上样，依次是：彩色预染maker(上样量为3μL)、正常对照组蛋白、三组药物处理组蛋白(正常对照组和药物处理组蛋白按照不同浓度上不同样体积，保证每组蛋白总量一致，总上样量在20-40 μg)。
(5)SDS-PAGE凝胶电泳：
打开电源。样品在浓缩胶中移动时电压设定为80V，待进入分离胶后将电压调整为120V，持续电泳至溴酚兰指示剂接近分离胶底部，停止电泳。
四、Western Blotting免疫印迹
(1)转膜：将电泳完毕的凝胶从玻璃板上剥离，按照胶的大小裁剪好滤纸和PVDF膜，滤纸要比膜稍微小，将PVDF膜放入甲醇中活化5min，从负极到正极依次放入滤纸(3张)→凝胶→PVDF膜→滤纸(3张)，排出气泡。要避免上下两层滤纸接触，防止发生短路现象。盖上电转仪的盖子，将电流设定为100V，转移时间60min。
(2)封闭：转膜结束后，将PVDF膜取出用丽春红染色，按照所需要蛋白的分子量裁下目的蛋白置于含5％脱脂奶粉的TBST溶液中，室温封闭2h，以封闭 PVDF膜上的非特异性的蛋白结合位点。
(3)一抗孵育：封闭结束后，取出PVDF膜TBST水平摇床洗涤3次，每次5 min。在一抗孵育盒中加入稀释后的一抗：β-actin抗体(1:300)，Bax抗体(1:1000)， Bcl-2抗体(1:1000)，cyt-C抗体(1:200)，xIAP抗体(1:1000)，将膜完全浸入一抗稀释液中，4℃摇动过夜。
(4)二抗孵育：一抗孵育过夜后，取出后TBST水平摇床洗膜3次，每次5min。根据一抗的种类在孵育盒中加入辣根过氧化物酶标记的二抗：HRP-偶联抗鼠二抗(1:1000)，HRP-偶联抗兔二抗(1:1000)水平摇床上室温孵育2h。
(5)ECL显影：二抗孵育结束后取出PVDF膜，TBST洗膜3次，每次10min。准备好BeyoECL Puls化学发光试剂(A、B发光液按1:1混匀)，平头镊将PVDF膜小心取出，置于白色板上，用吸水纸略去过多的液体，在膜上均匀滴加ECL工作液，置于化学发光仪器中曝光。
其结果如图4和5所示，结果表明黑果枸杞多糖LBP可以通过线粒体通路诱导细胞凋亡，发现LBP可以使通路中抗凋亡蛋白Bcl-2表达下降，促凋亡蛋白 Bax表达上升，凋亡抑制因子xIAP表达下降，并能使线粒体膜破裂，释放细胞色素C(Cyt-C)，使得细胞质中的C(Cyt-C)含量增加。以上结果表明LBP可以通过线粒体通路来诱导肿瘤细胞凋亡。
惟以上所述者，仅为本发明之较佳实施例而已，当不能以此限定本发明实施之范围，即大凡依本发明权利要求及发明说明书所记载的内容所作出简单的等效变化与修饰，皆仍属本发明权利要求所涵盖范围之内。此外，摘要部分和标题仅是用来辅助专利文件搜寻之用，并非用来限制本发明之权利范围。
Claims (2)
1.一种黑果枸杞多糖的提取方法，其特征在于：包括以下步骤：
(1)将黑果枸杞洗净后，在40℃下烘干，经过脱水、粉碎、过300目筛、干燥后得到黑果枸杞粉末；
(2)将黑果枸杞粉末加入蒸馏水中，搅拌均匀后，在70℃下提取3h后，经过滤后即得到黑果枸杞多糖的提取溶液；所述黑果枸杞粉末和蒸馏水的料液比为1:25g/mL；
(3)将步骤(2)黑果枸杞多糖的提取溶液加入乙醇，酒精计检测酒精度为90％后，进行抽滤，将得到的滤饼置于烘箱中在60℃下烘干30min后，得到多糖粉末；
(4)将步骤(3)得到的5g多糖粉末加入50mL的DMSO后溶解后，磁力搅拌12h后，加入50mL蒸馏水，继续搅拌20min后放置2h，然后进行抽滤，将得到的沉淀依次用无水乙醇、丙酮和乙醚洗涤后，在70℃下干燥30min，得到黑果枸杞多糖精制品；
(5)将步骤(4)得到的黑果枸杞多糖精制品经过大孔树脂脱色、Sevage法脱蛋白后，即得到所述的黑果枸杞多糖。
2.如权利要求1所述的黑果枸杞多糖的提取方法提取得到的黑果枸杞多糖在制备抗白血病肿瘤药物上的应用。
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Citations (5)
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|---|---|---|---|---|
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|---|---|---|---|---|
| CN1686421A (zh) * | 2005-04-26 | 2005-10-26 | 陶燕铎 | 黑果枸杞植物果实提取物及其制备方法和应用 |
| CN103159864A (zh) * | 2011-12-19 | 2013-06-19 | 中国科学院大连化学物理研究所 | 一种黑果枸杞多糖的分离纯化方法及分离得到的五种多糖 |
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Non-Patent Citations (3)
| Title |
|---|
| Lycium ruthenicum polysaccharide attenuates inflammation through inhibiting TLR4/NF-B-kappa signaling pathway;Peng, Qiang等;《INTERNATIONAL JOURNAL OF BIOLOGICAL MACROMOLECULES》;20140325;第330-335页 * |
| 响应面法优化黑果枸杞多糖的提取工艺研究;鲁小静等;《中国酿造》;20130615;第79-83页 * |
| 茯苓多糖提取方法研究;高杰等;《吉林中医药》;20070920;第60页 * |
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