CN110709705A - 诊断和治疗慢性肾脏病的方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开的主题涉及诊断和治疗动物中慢性肾脏疾病(CKD)的方法，所述方法包括测定动物样品中镁的量并向所述动物提供治疗方案。在某些实施方案中，所述治疗方案包括施用有效量的镁。

Description

诊断和治疗慢性肾脏病的方法

优先权声明

本专利申请要求2017年5月31日提交的美国临时专利申请序号62/513,396和2017年10月3日提交的美国临时专利申请序列号62/567,623的优先权，通过引用将其每一件的全部内容整体并入本文，并要求其优先权。

技术领域

本发明公开的主题涉及在动物诸如家畜或宠物(例如，猫或狗)中诊断和治疗慢性肾脏病(CKD)的方法。

背景技术

慢性肾脏病(chronic kidney disease，CKD)，也称为慢性肾病(chronic renaldisease)或慢性肾衰竭(chronic renal failure)，是指在数月或数年期间内肾功能的逐渐丧失。CKD可能由多种状况和机制引起，并困扰人类和其他哺乳动物，特别是猫。随着时间的流逝，老年猫的肾功能逐渐下降，导致晚期疾病。

在患有肾脏疾病的动物中，使用几种血液指标来确定疾病的严重程度。这些指标包括血尿素氮(blood urea nitrogen，BUN)、磷、成纤维细胞生长因子23(fibroblastgrowth factor 23，FGF23)、甲状旁腺激素(parathyroid hormone，PTH)和肌酐(creatinine)。肾衰竭期间，血液中的BUN、磷和肌酐水平增加，因为对动物肾脏的损害使肾脏不足以过滤废物。磷的滞留在慢性肾脏疾病的早期发生，导致升高的FGF23和PTH的血清浓度。升高的血清FGF23和PTH浓度也促成肾脏疾病的进展，并可能进一步导致慢性肾脏疾病中的骨和矿物质失常。

已经尝试了不同的方法来治疗或延缓CKD的发展，包括饮食疗法(dietarytherapies)，控制高血压和血液透析。目前的饮食疗法包括减少饮食中蛋白质和磷的量。但是，由于未满足动物的蛋白质需求，这种饮食可能导致其他问题。因此，在本领域中仍然存在对能够治疗或延缓CKD发展的宠物食品组合物的需求。

国际肾脏兴趣协会(International Renal Interest Society，IRIS)已开发了一种在猫和狗中进行CKD分期的方案(www.iris-kidney.com；也可以参见《猫慢性肾脏疾病的饮食疗法(Dietary therapy for feline chronic kidney disease)》，《猫临床营养百科全书(Encyclopedia of feline clinical nutrition)》，艾略特(Elliott)等人，第二版，2015年。)分期系统(staging system)的基础是血浆肌酐浓度。所述分期系统得到广泛采用，但是，在本领域中仍然存在对监测CKD进展的其他方面并优化治疗选择的方法的需求。

高磷酸盐血症(hyperphosphatemia)是猫中CKD的有据可查的后遗症，^1-5并且与增加的死亡和氮血症(azotemia)进展的风险相关。^6-8磷酸盐滞留是由于肾脏无法排泄足够的磷酸盐来平衡饮食摄入而造成的。^9,10人体为了维持正常磷血症的作用导致肾病继发性甲状旁腺功能亢进(secondary renal hyperparathyroidism)和FGF-23过量。¹⁰这些激素紊乱防止CKD早期出现明显的高磷酸盐血症，¹¹但据认为这些激素紊乱会导致骨病理和软组织钙化，其与磷酸钙稳态失调一起构成CKD矿物质和骨疾病(CKD-mineral and bone disorder，CKD-MBD)。^10、12、13FGF-23本身是患有CKD的猫的生存和进展的有力预测因子。⁵饮食中的磷酸盐限制是猫中CKD管理的主要手段，并且已显示出减少血浆磷酸盐、FGF-23和PTH的浓度并提高生存率。^14-18

最近，对镁在人CKD-MBD中的作用已有增长的兴趣。除了是许多细胞内过程的必需矿物质外，¹⁹镁被认为是血管钙化^20-22和促纤维化细胞因子(profibrotic cytokine)释放²³的抑制剂。低镁血症(Hypomagnesemia)被确定为人CKD患者死亡的危险因素，^24-28以及人CKD患者中肾脏功能可能衰退的危险因素。^23,24此外，血清总镁浓度(tMg)似乎可以改变人类CKD中高磷酸盐血症的相关风险，因为tMg较低的患者中高磷酸盐仅与较高的死亡风险²⁷和进展为晚期肾病的风险²³相关。有趣的是，镁可能参与了FGF-23的调节，因为在血液透析的人CKD患者中观察到这两个变量之间呈负相关，²⁹并且饲喂缺乏镁饮食的啮齿动物的FGF-23浓度升高。^30,31

关于镁在猫科动物CKD-MBD中的作用知之甚少。一项对患有氮血症的CKD的猫的研究发现，在晚期疾病中血浆tMg显著增加，然而在患有早期CKD的猫中观察到高达25％的猫的血浆tMg较低。³在患有CKD的猫中，镁状态的预后意义以及镁与FGF-23之间的关系均未得到检查。因此，在这方面仍然需要进一步的研究。

发明内容

在某些非限制性实施方案中，本发明公开的主题提供了在有需要的动物中治疗或延缓慢性肾脏疾病(CKD)进展的方法。在某些实施方案中，所述方法包括：测定动物血液样品中镁的量；将所述镁的量与预定参考值进行比较；其中所述预定参考值基于对照群体的血液中的平均镁水平；以及如果所述镁的量低于所述预定参考值，则向动物提供包含镁或其盐的组合物以治疗该动物。

在某些非限制性实施方案中，本发明公开的主题提供了在有需要的动物中治疗或延缓CKD进展的方法，其中与预定参考值相比，该动物患有镁缺乏症(magnesiumdeficiency)。在某些实施方案中，所述方法包括：施用包含有效量的镁或其盐的组合物，并且其中所述预定参考值基于对照群体的血液中的平均镁水平。

在某些非限制性实施方案中，本发明公开的主题提供了在有需要的动物中治疗或延缓CKD进展的方法。在某些实施方案中，所述方法包括：测定动物血液样品中镁的量；将镁的量与预定参考值进行比较；其中所述预定参考值基于对照群体的血液中的平均镁水平；以及如果所述镁的量低于第一预定值或高于第二预定参考值，则为所述动物提供治疗方案。

在某些非限制性实施方案中，本发明公开的主题提供了诊断和治疗有CKD风险的动物的方法。在某些实施方案中，所述方法包括：从动物获得血液样品；测定动物血液样本中的镁的量；将所述镁的量与预定参考值进行比较；其中所述预定参考值基于对照群体的血液中的平均镁水平；如果所述镁的量低于第一预定值或高于第二预定参考值，则诊断所述动物有患CKD的风险；以及如果所述镁的量低于第一预定值或高于第二预定参考值，则为所述动物提供治疗方案。

在某些实施方案中，本发明公开的主题中提供的方法进一步包括以下步骤：测定动物血液样品中FGF23的量；将所述FGF23的量与第三预定参考值进行比较；且其中所述预定参考值基于对照群体的血液中的平均FGF23水平，并且其中与所述第二预定参考值相比更高的FGF23水平指示更高的有效治疗可能性。

在某些实施方案中，本发明公开的主题中提供的治疗方案包括选自以下所组成的组中的至少一种治疗方案：施用包含有效量的镁或其盐的组合物、减少磷酸盐的摄入、减少蛋白质的摄入、施用多不饱和脂肪酸、施用磷酸盐结合剂疗法，施用钾、减少饮食中的钠摄入量、以及它们的组合。

在某些实施方案中，本发明公开的主题中提供的治疗方案包括选自以下所组成的组中的至少一种治疗方案：饮食疗法、血液透析、肾脏替代疗法、戒断对肾脏有害的化合物(withdrawal of kidney damaging compounds)、肾脏移植、延缓或避免肾脏损害程序(kidney damaging procedures)、改变利尿的给药、以及它们的组合。

在某些实施方案中，本发明公开的主题中提供的方法进一步包括：测定血液样品中至少一种选自由磷酸盐、肌酐、血尿素氮(BUN)和甲状旁腺激素(PTH)所组成的组中的其他生物标志物的量，并将至少一种其他生物标志物的量与第四预定参考值进行比较，其中磷酸盐、肌酐、血尿素氮(BUN)和/或甲状旁腺激素(PTH)的量高于第四预定参考值，预示更高的有效治疗的可能性。

在某些实施方案中，本发明公开的主题中提供的方法进一步包括将动物在组合物中维持足够的时间以减少动物中FGF23的量。

在某些实施方案中，血液样品中镁的量小于对照群体中血液中镁的平均量的约50％。

在某些实施方案中，血液样品中FGF23或其他生物标志物的量为对照群体的血液中FGF23或其他生物标志物的平均量的至少约150％。

在某些实施方案中，本发明公开的主题中提供的方法进一步包括：测定所述动物的血压，将所述血压与第五预定参考值进行比较，以及如果所述血压高于所述第五预定参考值，则实施高血压的预防或治疗方案。

在某些实施方案中，所述镁处于镁配位络合物(magnesium coordinationcomplex)中。

在某些实施方案中，所述治疗方案是施用包含有效量的镁或其盐的组合物。

在某些实施方案中，所述镁的量为约50毫克(mg)/1000千卡(Kcal)至约500毫克(mg)/1000千卡(Kcal)。

在某些实施方案中，每天至少一次向所述动物提供包含镁的组合物。

在某些实施方案中，所述镁的量通过质谱(mass spectrometry)、荧光(fluorescence)或发光(luminescence)测定。

在某些实施方案中，所述FGF23的量通过酶联免疫吸附测定(ELISA)确定。

在某些实施方案中，所述动物是伴侣动物，例如狗或猫。

在某些非限制性实施方案中，本发明公开的主题提供了包含有效量的镁或其盐的宠物食品组合物，用于治疗或延缓有需要的动物中CKD的进展。

在某些实施方案中，所述镁的量为每日服用或单位剂量约50毫克(mg)至约100毫克(mg)。

在某些实施方案中，所述镁的量不超过所述宠物食品组合物重量的约0.25重量％。

在某些非限制性实施方案中，本申请公开的主题提供了镁在有需要的动物中用于治疗或延缓CKD进展的用途，其中所述动物与预定参考值相比具有镁缺乏症，并且其中所述预定参考值基于对照群体血液中的平均镁水平。

在某些非限制性实施方案中，本发明公开的主题提供了使用血液中的镁水平作为生物标志物来预测和/或定量动物中的慢性肾脏疾病，其中与预定参考值相比的镁水平为需要饮食干预以治疗有需要的动物中的慢性肾脏疾病提供了基础。

在某些非限制性实施例中，本发明公开的主题提供了诊断动物的慢性肾脏疾病(CKD)的方法，所述方法包括：测定动物血液样本中镁的量；将所述镁的量与预定参考值进行比较；其中所述预定参考值基于对照群体的血液中的平均镁水平；并且其中低于第一预定值或高于第二预定参考值的镁的量指示CKD的存在或可能性。

附图说明

图1显示了根据血浆总镁浓度分类为四分位数的氮血症CKD IRIS 2期-3期的猫血浆FGF-23浓度。

图2A-2C显示了镁补充对血液中总镁、FGF23和磷酸盐的影响。虚线表示老年猫血浆FGF23参考范围的上限(700pg/mL)。

图3A-3I显示了镁补充对患有氮血症CKD IRIS 2期-3期的猫的总镁(A)、FGF23(B)、肌酐(C)、对称性二甲基精氨酸(symmetric dimethylarginine，SDMA)(D)、磷酸盐(E)、收缩压(systolic blood pressure)(F)、钾(G)、钙(H)和甲状旁腺激素(PTH)(I)的影响。

图4显示了患有IRIS 2期至4期CKD的猫中血浆总镁浓度。与患有IRIS 2期CKD(平均值2.04mg/dL；标准差为0.261)和3期CKD(平均值，2.04mg/dL；标准差(SD)，0.361)的猫相比，在患有IRIS 4期CKD的猫中观察到明显更高的血浆镁浓度(平均值，3.01mg/dL；标准差(SD)，1.206；P<0.001)。IRIS 2期、3期和4期中低镁血症的患病率(95％CI)分别为9％(4-14)、18％(7-29)和10％(0-27)。与IRIS 2期(3％；95％CI，0-6)和3期(6％；95％CI，0-13)相比，在IRIS 4期中，高镁血症的患病率显著更高(50％；95％CI，19-81；P<0.001)。方框代表第25和第75百分位(percentile)的中位数，须状线(whisker)代表范围。虚线标记了血浆总镁的参考区间的上限和下限(1.73-2.57mg/dL)。

图5显示了以镁状态细分的患有IRIS 2期-4期CKD的猫的血浆FGF-23浓度。与正常镁(normomagnesemic)的猫相比，患有低镁血症(hypomagnesemia)的猫(tMg<1.73mg/dL)在每个阶段的血浆FGF-23明显更高。方框代表第25和第75百分位数的中位数，须状线代表范围。虚线表示血浆FGF-23参考区间的上限(700pg/mL)。

图6显示了以中位数血浆tMg浓度(2.04mg/dL)细分的IRIS 2期和3期CKD的正常磷酸盐的(normophosphatemic，NP)和高磷酸盐的(hyperphosphatemic，HP)猫的血浆FGF-23浓度。在正常磷酸盐的猫(P＝0.003)和高磷酸盐的猫(P＝0.004)两者中，tMg低于中位数的猫血浆FGF-23均显著较高。方框代表第25和第75百分位的中位数，须状线代表范围。虚线表示血浆FGF-23参考间隔的上限(700pg/mL)。

图7显示了卡普兰-迈耶曲线(Kaplan-Meier curve)，以镁的状态分组，该曲线显示了患有氮血症CKD的猫的存活率。患有低镁血症的猫(蓝色曲线；删失(censored)1/20；HR，2.92；95％CI，1.78-4.82；P<0.001)和患有高镁血症的猫(灰色曲线；删失0/11；HR，2.88；95％CI，1.54-5.38；P＝0.001)与正常镁的猫(黑色曲线；删失23/143)相比，诊断为氮血症CKD时的死亡风险增加。在单变量分析中，低镁血症的猫和高镁血症的猫的存活率没有显著差异(P＝0.951)。经删失的病例得到勾选。

具体实施方式

迄今为止，仍然需要用于治疗CKD的宠物食品组合物以及监测CKD的进展和优化治疗方案的方法。本申请涉及用于诊断动物中的CKD的生物标志物，包括但不限于镁和FGF23，以及使用它们治疗CKD的方法。本申请还提供了包含有效量的镁用于治疗CKD的宠物食品。为了清楚起见而不是作为限制，本发明公开的主题的详细描述分为以下小节：

1.定义

2.生物标志物；

3.治疗方法；和

4.最终产品。

1.定义

本说明书中使用的术语在本发明的背景中和在使用每个术语的特定背景中通常具有它们在本领域中的普通含义。某些术语在下面或说明书中的其它地方讨论，以向从业者提供对描述本发明的方法和组合物以及如何制备和使用它们的额外指导。

如本文所用，当与权利要求和/或说明书中的“包括”一起使用时，词语“一个(a)”或“一个(an)”的使用可以表示“一个”，但是它也与“一个或多个”、“至少一个”和“一个或多于一个”一致。此外，术语“具有”、“包括”、“含有”和“包含”是可互换的，并且本领域技术人员认识到这些术语是开放式术语。

术语“约”或“大约”意指在本领域普通技术人员确定的特定值的可接受误差范围内，其将部分取决于如何测量或测定该值，即，测量系统的限制。例如，根据本领域的实践，“约”可以表示在3个或多于3个标准偏差内。或者，“约”可以表示给定值的至多20％、优选至多10％、更优选至多5％、更优选至多1％的范围。或者，特别是对于生物系统或过程，该术语可以表示值的数量级内，优选地在5倍内，更优选地在2倍内。

术语物质的“有效治疗”或“有效量”是指足以治疗或产生有益或所需结果(包括临床结果)的物质的量，并且就此，“有效治疗”或“有效量”取决于应用它的上下文。在施用组合物以降低CKD的风险和/或施用组合物以治疗或延缓CKD的进展的上下文中，本文所述的组合物的有效量为足以治疗和/或改善CKD的量，以及减轻症状和/或降低CKD的可能性的量。本文所述的有效治疗是足以治疗和/或改善CKD以及减轻症状和/或降低CKD可能性的治疗。所述降低可以是CKD症状严重程度的降低或CDK可能性降低10％，20％，30％，40％，50％，60％，70％，80％，90％，95％，98％或99％。可以一次或多次给药来施用有效量。本文所述有效治疗的可能性是治疗有效的概率，即，足以治疗和/或改善CKD，以及减轻症状。

如本文所用以及在本领域中众所周知的，“治疗”是一种用于获得有益或期望的结果(包括临床结果)的方法。就本发明主题的目的而言，有益的或理想的临床结果包括但不限于减轻或改善一种或多种症状、疾病程度的减轻、疾病状态的稳定(即不恶化)、疾病的预防、疾病进展的延缓或减缓、和/或疾病状态的改善或缓和(palliation)。所述降低可以是并发症或症状的严重性降低10％，20％，30％，40％，50％，60％，70％，80％，90％，95％，98％或99％。与未接受治疗的预期生存期相比，“治疗”还可能意味着延长的生存期。

术语“宠物食物”或“宠物食品”或“最终宠物食品”是指供伴侣动物如猫、狗、豚鼠、兔、鸟和马食用的产品或组合物。例如但不限于，伴侣动物可以是“家养”的狗，例如，家犬(Canis lupus familiaris)。在某些实施方案中，伴侣动物可以是“家养”的猫，例如家猫(Felis domesticus)。“宠物食物”或“宠物食品”包括任何食物、饲料、点心、食品补充剂、液体、饮料、零食、玩具(可咀嚼和/或可食用的玩具)、膳食替代品或膳食替代物。

如本文中所使用的，术语“预定参考值”或“参考值”是指生物标志物的阈值水平，通过与之比较，可以进行CKD的诊断。参考值可以是阈值或参考范围。在某些实施例中，参考值可以从ROC曲线分析中导出，选择将灵敏度最大化的参考值，同时将特异性保持在用户定义的阈值之上。在某些实施例中，所述参考值可以选择为最大化特异性的参考值，同时保持灵敏度在用户定义的阈值之上，例如80％的灵敏度。在某些实施方案中，如果生物标志物在患有CKD的受试者中增加，即，预定算法是正逻辑，则参考值可以是由健康受试者群体产生的生物标志物水平范围的上限。相反，如果生物标志物在患有CKD的受试者中减少，即，所述算法是负逻辑，则参考值可以是由健康受试者群体产生的生物标志物水平范围的下限。

术语“对照群体”是指没有慢性肾脏疾病并且没有任何可操纵变量的动物对照组。可以根据遗传背景、平均健康状况、年龄、营养史、疫苗接种或预防性治疗来选择要包括在对照组中的动物。在某些实施方案中，对照群体可以是具有相似的遗传背景、年龄和平均健康状况的至少3只、优选至少10只、更优选至少50只动物的组。

2.生物标记

在某些非限制性实施方案中，本发明公开的主题提供了生物标志物以及使用所述生物标志物的方法来诊断动物处于慢性肾脏疾病(CKD)的风险和/或测定CKD的进展。

如本文所用，术语“生物标志物”是指与感兴趣的疾病的进行性发展有关的任何生物化合物。特别地，用于诊断CKD的生物标志物是与CKD的进展有关的任何生物化合物。可以根据由与CKD的进展有关的生物标志物指示的CKD的进展来定制肾脏疾病的治疗，并且可以通过监测生物标志物来确定恢复的预测。

在某些实施方案中，所述生物标志物是镁。在某些实施方案中，所述生物标志物是动物血液中的总镁。在某些实施方案中，所述生物标志物是动物血清中的镁。在某些实施方案中，所述生物标志物是动物血浆中的镁。在某些实施方案中，所述生物标志物是动物尿液样品中的镁。

在某些实施方案中，镁水平的变化与CKD有关。在某些实施方案中，增加的镁水平指示CKD的进展和/或增加的发展为CKD的风险。在某些实施方案中，降低的镁水平指示CKD的进展和/或增加的发展为CKD的风险。在某些实施方案中，与基于对照群体的血液中平均镁水平的预定参考值相比，较高的镁水平预示CKD的进展和/或发展为CKD的风险增加。在某些实施方案中，与基于对照群体中血液中平均镁水平的预定参考值相比，较低的镁水平预示CKD的进展和/或发展为CKD的风险增加。

在某些实施方案中，镁水平的变化与死亡率和/或存活率相关。在某些实施方案中，升高的镁水平预示死亡率增加和/或存活率降低。在某些实施方案中，降低的镁水平降低预示死亡率增加和/或存活率降低。在某些实施方案中，与基于对照群体中血液中平均镁水平的预定参考值相比，较高的镁水平预示较高的死亡率和/或较低的存活率。在某些实施方案中，与基于对照群体中血液中平均镁水平的预定参考值相比，较低的镁水平预示较高的死亡率和/或较低的存活率。

在某些实施方案中，镁水平的变化与高磷酸盐的动物的死亡率增加有关。在某些实施方案中，增加的镁水平预示高磷酸盐的动物的死亡率增加。在某些实施方案中，降低的镁水平预示高磷酸盐的动物的死亡率增加。在某些实施方案中，与基于对照群体血液中平均镁水平的预定参考值相比，较高的镁水平预示高磷酸盐的动物的较高死亡率。在某些实施方案中，与基于对照群体的血液中平均镁水平的预定参考值相比，较低的镁水平预示高磷酸盐的动物的较高死亡率。

在某些实施方案中，诊断和治疗有患慢性肾脏疾病(CKD)危险的动物的方法包括：从所述动物获得血液样品；测定所述动物血液样本中的镁的量；将所述镁的量与预定参考值进行比较；其中所述预定参考值基于对照群体中血液中的平均镁水平；如果所述镁的量低于第一预定值或高于第二预定参考值，则诊断所述动物有患CKD的风险；并且如果镁的量低于第一预定值或高于第二预定参考值，则为所述动物提供治疗方案。

在某些实施方案中，所述生物标志物还包含成纤维母细胞生长因子23(fibroblast growth factor 23，FGF23)。在某些实施方案中，所述生物标志物是动物血液中的总FGF23。在某些实施方案中，所述生物标志物是动物血清中的FGF23。在某些实施方案中，所述生物标志物是动物血浆中的FGF23。在某些实施方案中，所述生物标志物是动物尿液样品中的FGF23。

在某些实施方案中，镁水平与动物中的FGF23水平成负相关。在某些实施方案中，降低的镁水平指示动物中升高的FGF23水平。在某些实施方案中，升高的镁水平指示动物中降低的FGF23水平。

在某些实施方案中，所述诊断和治疗有患慢性肾脏疾病风险的动物的方法进一步包括以下步骤：测定动物血液样品中FGF23的量；将FGF23的量与第三预定参考值进行比较；且其中所述预定参考值基于对照群体中血液中的平均FGF23水平，并且其中与所述第二预定参考值相比更高的FGF23水平指示更高的有效治疗可能性。

在某些实施方案中，所述生物标志物包含至少一种其他生物标志物。在某些实施方案中，至少一种其他生物标志物选自美国申请公开号2012/0077690 A1、美国申请公开号2013/0323751 A1、EP 3,112,871 A1、EP 2,462,445 A1和EP 3,054,301 A1中公开的肾生物标志。在某些实施方案中，所述至少一种其他生物标志物选自由磷酸盐、肌酐、血尿素氮(BUN)和甲状旁腺激素(PTH)组成的组。在某些实施方案中，所述至少一种其他生物标志物选自由磷酸盐、肌酐、血尿素氮(BUN)、甲状旁腺激素(PTH)、对称性二甲基精氨酸(SDMA)、收缩压、钾、总钙、透明质酸、死亡受体5、转化生长因子β1、铁蛋白、β球蛋白(beta globin)、过氧化氢酶、α球蛋白、表皮生长因子受体途径底物8、粘蛋白同工型前体，埃兹蛋白(ezrin)、δ球蛋白(delta globin)、膜突蛋白(moesin)、磷蛋白同工型、膜联蛋白A2(annexin A2)、肌红蛋白、血液结合素(hemopexin)、丝氨酸蛋白酶抑制剂、丝氨酸肽酶抑制剂、CD14抗原前体、纤连蛋白同工型前蛋白、血管紧张素原前蛋白(angiotensinogen preprotein)、补体成分前体、碳酸酐酶、尿调节素前体(uromodulin precursor)、补体因子H、补体成分4BP、硫酸乙酰肝素蛋白聚糖2(heparan sulfate proteoglycan 2)、嗅觉素-4(olfactomedian-4)、富亮氨酸α-2糖蛋白、环指蛋白167(ring finger protein)、间α球蛋白抑制剂H4(inter-alpha globulin inhibitor H4)、硫酸乙酰肝素蛋白聚糖2、N-酰基鞘氨醇氨基水解酶(N-acylshingosine aminohydrolase)、丝氨酸蛋白酶抑制剂进化枝A成员1(serineproteinase inhibitor clade A member 1)、粘蛋白1、簇集蛋白同工型1(clusterinisoform 1)、脑富含膜附着信号蛋白1(brain abundant membrane attached signalprotein 1)、二肽酶1、纤连蛋白1同工型5前蛋白、血管紧张素原前体蛋白(angiotensinogen preproprotien)、碳酸酐酶、尿调节素前体、金属蛋白酶抑制剂2、胰岛素样生长因子结合蛋白7、免疫球蛋白A、免疫球蛋白G1、免疫球蛋白G2、α-1抗胰蛋白酶、血清淀粉样蛋白P成分(Serum amyloid P component)、肝细胞生长因子、细胞间粘附分子1、β-2-糖蛋白1、白细胞介素1β、中性粒细胞弹性蛋白酶、肿瘤坏死因子受体超家族成员11B、白细胞介素11、组织蛋白酶D、C-C模体趋化因子24、C-X-C模体趋化因子6、C-C模体趋化因子13、C-X-C模体趋化因子-1、C-X-C模体趋化因子-2和C-X-C模体趋化因子-3、基质溶解素(Matrilysin)、白介素2受体α链、胰岛素样生长因子结合蛋白3、巨噬细胞集落刺激因子1、载脂蛋白C-I、载脂蛋白C-II、纤维蛋白原α链、纤维蛋白原A-α链、激肽原、间α抑制剂H4(Inter-Alpha Inhibitor H4，ITIH4)、角蛋白I型细胞骨架10胱抑素A(cystatin A)、胱抑素B(cystatin B)及它们的组合所组成的组中。

在某些实施方案中，镁水平与动物中的血压呈负相关。在某些实施方案中，降低的镁水平指示动物中血压升高、高血压和/或发展为高血压的风险增加。在某些实施方案中，升高的镁水平指示动物中血压降低。在某些实施方案中，与一组动物中的平均水平相比，低镁水平指示该动物患有高血压或发展为高血压的风险增加。在某些实施方案中，所述血压选自收缩压、舒张压、全身动脉压、平均动脉压、脉压(pulse pressure)、全身静脉压、肺动脉压，及它们的组合。在某些实施方案中，所述血压以收缩压测量。在某些实施方案中，所述血压以舒张压测量。

在某些实施方案中，所述至少一种其他生物标记在动物的血液中。在某些实施方案中，所述至少一种其他生物标记在动物的血清中。在某些实施方案中，所述至少一种其他生物标志物在动物的血浆中。在某些实施方案中，所述至少一种其他生物标志物在动物的尿液样品中。

在某些实施方案中，所述诊断和治疗有患慢性肾脏疾病风险的动物的方法还包括测定血液样品中至少一种其他生物标记的量，并将所述至少一种其他生物标志物的量与第四预定参考值进行比较。在某些实施方案中，所述至少一种其他生物标志物的量高于第四预定参考值预示更高的有效治疗可能性。在某些实施方案中，所述至少一种其他生物标志物的量低于第四预定参考值预示更高的有效治疗可能性。

在某些实施方案中，所述生物标志物的预定参考值可以基于对照群体中被测血液中生物标志物的平均量。所述对照群体可以是一组具有相似遗传背景、年龄和平均健康状况的至少3只，优选至少10只，更优选至少50只动物。

在某些实施方案中，所述血液样品中镁的第一预定参考值小于对照群体中血液中镁平均量的约90％、80％、70％、60％、50％、40％、30％、20％、10％、5％、2％或1％。在某些实施方案中，所述血液样品中镁的第一预定参考值小于对照群体的血液中镁的平均量的约50％。在某些实施方案中，所述血液样品中镁的第二预定参考值大于对照群体中血液中镁的平均量的约110％、120％、130％、140％、150％、160％、170％、180％、190％、200％、250％、300％、400％、500％、600％、700％、800％、900％或1000％。在某些实施方案中，所述血液样品中镁的第二预定参考值大于对照群体的血液中镁的平均量的约120％。

在某些实施方案中，所述血液样品中FGF23的第三预定参考值大于对照群体血液中FGF23平均量的约110％、120％、130％、140％、150％、160％、170％、180％、190％、200％、250％、300％、400％、500％、600％、700％、800％、900％或1000％。在某些实施方案中，所述血液样品中FGF23的第二预定参考值大于对照群体中血液中FGF23的平均量的约150％。

在某些实施方案中，可以通过本领域已知的任何方法检测和定量动物中生物标志物的量。在某些实施方案中，所述镁的量通过质谱法(例如,UPLC-ESI-MS/MS或电感耦合等离子体质谱(ICP-MS))、荧光法(fluorescence method)或发光法(luminescence method)测定。在某些实施方案中，镁绿(Magnesium Green)、Mag-Fura-2和/或Mag-Indo-1用于测定镁的量。

在某些实施方案中，所述FGF23的量通过基于抗体的检测方法测定。在某些实施方案中，FGF23抗体用于测定FGF23的量。在某些实施方案中，所述FGF23的量通过酶联免疫吸附测定(ELISA)测定。在某些实施方案中，所述FGF23的量通过夹心ELISA(sandwich ELISA)测定。

在某些实施方案中，可以使用其他检测方法，例如其他光谱方法、色谱方法、标记技术或定量化学方法。在某些实施方案中，通过相同方法测定动物中生物标志物的量和参考值。

3.治疗方法

在某些非限制性实施方式中，本发明公开的主题提供了在有需要的动物中治疗或延缓慢性肾脏疾病(CKD)的进展的方法。在某些实施方案中，所述方法包括向动物提供包含镁或其盐的组合物以治疗动物。

本发明公开的主题的组合物和方法可用于多种哺乳动物，包括非人类哺乳动物，例如非人类灵长类动物(例如，猴、黑猩猩等等)、宠物/伴侣动物(例如，狗、猫、马等等。)、农场动物(例如，山羊、绵羊、猪、牛等等)、实验动物(例如，小鼠、大鼠等等)以及野生动物和动物园动物(例如，狼、熊、鹿等等)。

在本发明公开的主题的某些非限制性实施方式中，例如，所述动物是单胃哺乳动物(即，具有单个胃的哺乳动物)，诸如，例如非人类的灵长类动物、狗、猫、兔、马或猪。

在本发明公开的主题的某些非限制性实施方式中，所述动物是食肉性哺乳动物，即，吃肉的哺乳动物。

在本发明公开的主题的其他实施方式中，所述动物是杂食性哺乳动物，即，既吃植物又吃肉的哺乳动物。

在某些非限制性实施方案中，所述受试者是猫或狗。

在某些非限制性实施方案中，所述受试者处于慢性肾脏疾病的风险中。

在某些非限制性实施方案中，不清楚所述受试者有患慢性肾脏疾病的风险。

在某些非限制性实施方案中，所述受试者患有慢性肾脏疾病。

在某些非限制性实施方案中，不清楚所述受试者患有慢性肾脏疾病。

在某些非限制性实施方案中，所述受试者正在接受慢性肾脏疾病的治疗。在某些非限制性实施方案中，所述治疗是饮食疗法。

在某些非限制性实施方式中，本发明公开的主题提供了在动物中治疗或延缓慢性肾脏疾病(CKD)进展的方法，其中所述方法包括：测定动物血液样品中镁的量；将所述镁的量与预定参考值进行比较；其中所述预定参考值基于对照群体的血液中的平均镁水平；并且如果所述镁的量低于预定参考值，则向动物提供包含镁或其盐的组合物以治疗动物。

在某些非限制性实施方式中，本发明公开的主题提供了在有需要的动物中治疗或延缓慢性肾脏疾病(CKD)的进展的方法，其中与预定参考值相比，该动物患有镁缺乏症，所述方法包括：施用包含有效量的镁或其盐的组合物，并且其中所述预定参考值基于对照群体的血液中的平均镁水平。

在某些非限制性实施方案中，本发明公开的主题提供了在有需要的动物中治疗或延缓慢性肾脏疾病(CKD)进展的方法。在某些实施方案中，所述方法包括：测定动物血液样品中镁的量；将镁的量与预定参考值进行比较；其中所述预定参考值基于对照群体的血液中的平均镁水平；以及如果所述镁的量低于第一预定值或高于第二预定参考值，则为所述动物提供治疗方案。

在某些非限制性实施例中，本发明公开的主题提供了诊断和治疗有患慢性肾脏疾病(CKD)风险的动物的方法，其中所述方法包括：从动物获得血液样品；测定动物血液样本中的镁的量；将所述镁的量与预定参考值进行比较；其中所述预定参考值基于对照群体的血液中的平均镁水平；如果所述镁的量低于第一预定值或高于第二预定参考值，则诊断所述动物有患CKD的风险；以及如果所述镁的量低于第一预定值或高于第二预定参考值，则为所述动物提供治疗方案。

在某些实施例中，所述方法进一步包括以下步骤：测定动物血液样品中FGF23的量；将所述FGF23的量与第三预定参考值进行比较；且其中所述预定参考值基于对照群体的血液中的平均FGF23水平，并且其中与所述第二预定参考值相比更高的FGF23水平指示更高的有效治疗可能性。

在某些实施方案中，所述诊断和治疗有患慢性肾脏病风险(CKD)的动物的方法还包括测定血液样品中至少一种其他生物标记的量，并将所述至少一种其他生物标志物的量与第四预定参考值进行比较。在某些实施方案中，所述至少一种其他生物标志物的量高于第四预定参考值预示更高的有效治疗可能性。在某些实施方案中，所述至少一种其他生物标志物的量低于第四预定参考值预示更高的有效治疗可能性。

在某些实施方案中，前述权利要求中任一项的方法，所述方法进一步包括：测定血液样品中至少一种选自由磷酸盐、肌酐、血尿素氮(BUN)和甲状旁腺激素(PTH)所组成的组中的其他生物标志物的量，并将至少一种其他生物标志物的量与第四预定参考值进行比较，其中磷酸盐、肌酐、血尿素氮(BUN)和/或甲状旁腺激素(PTH)的量高于第四预定参考值，预示更高的有效治疗的可能性。

在某些实施方案中，所述一种其他生物标志物的第四预定参考值大于对照群体中所述一种生物标志物的平均值的约110％或更多(意味着超过平均值10％)。在其他实施方案中，所述一种其他生物标记的第四预定参考值大于对照群体中所述一种生物标志物平均值的约120％、130％、140％、150％160％、170％、180％、190％、200％、250％、300％、400％、500％、600％、700％、800％，900％、1000％或更高。

在某些实施方案中，所述方法进一步包括将所述动物保持在组合物上足够的时间段以减少所述动物中FGF23的量。

在某些实施方案中，本发明公开主题中提供的方法进一步包括：测定所述动物的血压，将所述血压与第五预定参考值进行比较，以及如果所述血压高于所述第五预定参考值，则实施高血压的预防或治疗方案。在某些实施方案中，所述血压选自收缩压、舒张压、全身动脉压、平均动脉压、脉压、全身静脉压、肺动脉压，及它们的组合。在某些实施方案中，所述血压是收缩压。在某些实施方案中，所述血压是舒张压。

在某些实施例中，所述血压的第五预定参考值大于对照群体的血压平均值的约110％、120％、130％、140％、150％、160％、170％、180％、190％、200％或更多。在某些实施方案中，所述第五预定参考值大于对照群体中平均血压的约120％。

在某些实施方案中，所述治疗方案包括选自以下的至少一种治疗方案：饮食疗法、血液透析、肾脏替代疗法、戒断对肾脏有害的化合物(withdrawal of kidney damagingcompounds)、肾脏移植、延缓或避免肾脏损害程序、改变利尿的给药、以及它们的组合。在某些实施方案中，所述治疗方案包括选自由以下所组成的组中的至少一种治疗方案：给予包含有效量的镁或其盐的组合物、减少磷酸盐的摄入、减少蛋白质的摄入、给予多不饱和脂肪酸、给予磷酸盐结合剂治疗、给予钾、减少饮食中钠的摄入量、给予碱补充剂、及它们的组合。在某些实施方案中，所述治疗方案包括在Jonathan D.Forster的《慢性肾脏疾病中的矿物质和骨疾病的进展(Update on Mineral and Bone Disorders in Chronic KidneyDisease)》，北美小型动物兽医临床实践(Vet Clin North Am Small Anim Pract.)，2016年11月，46(6):1131-49)中描述的任何治疗方法，其全部内容通过引用并入于此。

在某些实施方案中，所述治疗方案是饮食疗法。在某些实施方案中，所述饮食疗法包括选自由高镁饮食、低磷饮食、低蛋白质饮食、低钠饮食、高钾饮食、多不饱和脂肪酸(PUFA)饮食、及它们的组合所组成的组中的饮食。在某些实施方案中，饮食疗法是《猫慢性肾脏疾病的饮食疗法(Dietary therapy for feline chronic kidney disease)》，《猫临床营养百科全书(Encyclopedia of feline clinical nutrition)》(Elliott等人，第2版，2015年)中描述的任何一种饮食疗法，其内容通过引用整体并入。

在某些实施方案中，所述组合物是宠物食品。在某些实施方案中，所述镁的量在约200毫克(mg)/1000千卡(Kcal)至约500mg/1000Kcal之间。

在某些实施方案中，所述组合物是饮食补充剂。在某些实施例中，所述宠物食品中添加的镁的量在约50mg/1000Kcal和约200mg/1000Kcal之间。

在某些实施方案中，所述组合物中的镁的量为约10mg/kcal至约1000mg/kcal。例如但不限于，所述镁的量可以为约10mg/kcal至约100mg/kcal、约20mg/kcal至约100mg/kcal、约10mg/kcal至约200mg/kcal、约20mg/kcal至约200mg/kcal、约50mg/kcal至约100mg/kcal、约50mg/kcal至约200mg/kcal、约50mg/kcal至约300mg/kcal、约100mg/kcal至约200mg/kcal、约100mg/kcal至约300mg/kcal、约100mg/kcal至约400mg/kcal、约100mg/kcal至约500mg/kcal、约200mg/kcal至约500mg/kcal、约300mg/kcal至约500mg/kcal、约200mg/kcal至约600mg/kcal、约200mg/kcal至约700mg/kcal、约200mg/kcal至约800mg/kcal、约300mg/kcal至约600mg/kcal、约300mg/kcal至约700mg/kcal、约300mg/kcal至约800mg/kcal、约400mg/kcal至约600mg/kcal、约400mg/kcal至约700mg/kcal、约400mg/kcal至约800mg/kcal或约500mg/kcal至约800mg/kcal。在某些实施方案中，所述组合物中镁的量为约200mg/kcal至约500mg/kcal，例如，约300mg/kcal。在某些实施方案中，所述组合物中镁的量为约50mg/kcal至约200mg/kcal，例如，约100mg/kcal。

本发明公开的主题的组合物和方法中使用的镁可以是镁盐或镁配位络合物(magnesium coordination complex)的形式。

在某些实施方案中，所述镁是镁盐，例如但不限于乙酸盐、三氟乙酸盐(TFA salt)或甲酸盐。在某些实施方案中，所述镁盐包含阴离子(-)(例如但不限于氨基酸阴离子、Cl^-、F^-、Br^-、O^2-、CO₃ ^2-、HCO₃ ^-、OH^-、NO₃ ^-、PO₄ ^3-、SO₄ ^2-、CH₃COO^-、HCOO^-、C₂O₄ ^2-和CN^-)通过离子键与Mg²⁺结合。

在某些实施方案中，所述镁为无机镁盐的形式。在某些实施方案中，所述镁是氧化镁。在某些实施方案中，所述氧化镁以不超过所述组合物重量(例如，宠物食品或膳食补充剂)的0.25重量％的量提供给所述动物。在某些实施方案中，所述氧化镁的量不超过所述组合物重量的0.22重量％。在某些实施方案中，所述氧化镁的量不超过所述组合物重量的0.2重量％。在某些实施方案中，所述镁为有机镁盐的形式。

在某些实施方案中，所述镁化合物是镁配位络合物(magnesium coordinationcomplex)。在某些实施方案中，所述镁配位络合物是叶绿素。在某些实施方案中，所述镁化合物是叶绿素a、叶绿素b、叶绿素c1、叶绿素c2、叶绿素d、叶绿素f，或它们的组合。

在某些实施方案中，可以每天三次、每天两次、每天一次、每两天一次、每三天一次、每四天一次、每五天一次、每六天一次、每周一次、每两周一次、每三周一次或每月一次向动物饲喂镁。在某些实施方案中，可以每天一次或多次向动物饲喂镁。例如但不限于，镁可每天施用一次、两次、三次、四次、五次或更多次。在某些实施方案中，可以以恒定的方式向动物饲喂镁。例如，所述动物以恒定地可供的供给的包含镁的宠物食品组合物为食。

4.最终产品

在某些非限制性实施方案中，本发明公开的主题提供适合于治疗或延缓慢性肾脏疾病(CKD)进展的产品。在某些实施方案中，所述产品是宠物食品组合物。在某些实施方案中，所述宠物食品组合物包含有效量的镁。在某些实施方案中，所述宠物食品组合物中的镁可以是镁盐或镁配位络合物的形式。在某些实施方案中，所述镁为在具体实施方式的第3节中描述的任何形式。

在某些实施方案中，宠物食品组合物中的镁的量为约10mg/kcal至约1000mg/kcal。例如但不限于，镁的量可以为约10mg/kcal至约100mg/kcal、约20mg/kcal至约100mg/kcal、约10mg/kcal至约200mg/kcal、约20mg/kcal至约200mg/kcal、约50mg/kcal至约100mg/kcal、约50mg/kcal至约200mg/kcal、约50mg/kcal至约300mg/kcal、约100mg/kcal至约200mg/kcal、约100mg/kcal至约300mg/kcal、约100mg/kcal至约400mg/kcal、约100mg/kcal至约500mg/kcal、约200mg/kcal至约500mg/kcal、约300mg/kcal至约500mg/kcal、约200mg/kcal至约600mg/kcal、约200mg/kcal至约700mg/kcal、约200mg/kcal至约800mg/kcal、约300mg/kcal至约600mg/kcal、约300mg/kcal至约700mg/kcal、约300mg/kcal至约800mg/kcal、约400mg/kcal至约600mg/kcal、约400mg/kcal至约700mg/kcal、约400mg/kcal至约800mg/kcal或约500mg/kcal至约800mg/kcal。在某些实施方案中，所述宠物食品组合物中的镁的量为约200mg/kcal至约500mg/kcal，例如，约300mg/kcal。在某些实施方案中，所述宠物食品组合物中的镁的量为约50mg/kcal至约200mg/kcal，例如，约100mg/kcal。

在某些实施方案中，所述宠物食品组合物中的镁的量为每日份量或单位剂量约10mg至约1000mg。例如但不作为限制，镁的量可以是每日份量或单位剂量约10mg至约500mg、每日份量或单位剂量约10mg至约400mg、每日份量或单位剂量约10mg至约300mg、每日份量或单位剂量约10mg至约200mg、每日份量或单位剂量约20mg至约200mg、每日份量或单位剂量约30mg至约200mg、每日份量或单位剂量约40mg至约200mg、每日份量或单位剂量约50mg至约200mg、每日份量或单位剂量约50mg至约150mg、每日份量或单位剂约50至约140mg、每日份量或单位剂量约50mg至约130mg、每日份量或单位剂量约50mg至约120mg、每日份量或单位剂量约500mg至约110mg、每日份量或单位剂量约50mg至约100mg、每日份量或单位剂量约10mg至约50mg、每日份量或单位剂量约100mg至约150mg、每日份量或单位剂量约150mg至约200mg、每日份量或单位剂量约100mg至约200mg、每日每份或单位剂量约100mg至约300mg、每日每份或单位剂量约100mg至约400mg、每日份量或单位剂量约100mg至约500mg、每日份量或单位剂量约200mg至约500mg、每日份量或单位剂量约300mg至约500mg、每日份量或单位剂量约200mg至约800mg或每日份量或单位剂量约500mg至约1000mg。在某些实施方案中，所述宠物食品组合物中的镁的量为每日份量或单位剂量约20mg至约200mg，例如，每日份量或单位剂量约100mg。在某些实施方案中，所述宠物食品组合物中的镁的量为每日份量或单位剂量约50mg至约100mg，例如，每日份量或单位剂量约75mg。在某些实施方案中，所述宠物食品组合物中的镁的量为每日份量或单位剂量约60mg至约90mg。

在某些实施方案中，所述宠物食品组合物中的镁的量为所述宠物食品组合物重量的约0.001重量％至约10重量％。例如但不限于，镁的量可以为约0.001重量％至约0.01重量％、约0.01重量％至约0.1重量％、约0.1重量％至约1重量％、约1重量％至约10重量％、约0.01重量％至约0.5重量％、约0.01重量％至约0.25重量％、约0.01重量％至约0.2重量％、约0.01重量％至约0.15重量％、约0.01重量％至约0.1重量％、约0.01重量％至约0.05重量％、约0.1重量％至约0.15重量％、约0.1重量％至约0.2重量％、约0.1重量％至约0.25重量％，约0.1重量％至约0.5重量％、约0.5重量％至约1重量％、约0.1重量％至约2重量％、约0.1重量％至约5重量％、约0.1重量％至约10重量％、约2重量％至约10重量％、以及约5重量％至约10重量％。在某些实施方案中，所述宠物食品组合物中的镁的量不超过约0.25重量％。在某些实施方案中，所述宠物食品组合物中的镁的量不超过约0.2重量％。在某些实施方案中，所述宠物食品组合物中的镁的量不超过约0.15重量％。在某些实施方案中，所述宠物食品组合物中的镁的量不超过约0.1重量％。在某些实施方案中，所述宠物食品组合物中的镁的量不超过约0.05重量％。

在某些实施方案中，可以每天三次、每天两次、每天一次、每两天一次、每三天一次、每四天一次、每五天一次、每六天一次、每周一次、每两周一次、每三周一次或每月一次将本发明的宠物食品组合物喂给动物。在某些实施方案中，所述宠物食品组合物可以每天一次或多次喂给动物。例如但不限于，所述宠物食品组合物可以每天施用一次、两次、三次、四次、五次或更多次。在某些实施方案中，可以以恒定的方式将所述宠物食品组合物喂给动物，例如，所述所述动物以恒定地可供的供给的宠物食品组合物为食。

在某些实施方案中，本发明公开的主题的制剂可以进一步包含另外的活性剂。可以存在于本发明公开的主题的制剂中的其他活性剂的非限制性实例包括营养剂(例如，氨基酸、蛋白质、脂肪酸、碳水化合物、糖、核酸、核苷酸、维生素、矿物质等等)、抗血管生成剂、类固醇、mTOR抑制剂(例如，依维莫司(everolimus))、β-受体阻滞剂(例如，普萘洛尔(propranolol))和/或降低血压的药物。

在某些实施方案中，所述宠物食品组合物可以进一步包含本领域已知的添加剂。在某些实施方案中，这样的添加剂以不损害本发明公开的主题提供的目的和效果的量存在。预期的添加剂的实例包括但不限于在功能上有益于改善肾功能的物质、具有稳定作用的物质、感官物质、加工助剂、增强适口性的物质、着色物质和提供营养益处的物质。在某些实施方案中，所述稳定物质包括但不限于倾向于增加组合物的保质期的物质。在某些实施方案中，此类物质包括但不限于防腐剂、增效剂和螯合剂、包装气体、稳定剂、乳化剂、增稠剂、胶凝剂和湿润剂。在某些实施方案中，所述乳化剂和/或增稠剂包括例如明胶、纤维素醚、淀粉、淀粉酯、淀粉醚和改性淀粉。

在某些实施方案中，用于着色、适口性和营养目的的添加剂包括，例如，着色剂；氧化铁、氯化钠、柠檬酸钾、氯化钾和其他食用盐；维生素；矿物质；和调味品。这样的添加剂在组合物中的量通常高达约5％(组合物的干基)。

在某些实施方案中，所述宠物食品组合物是膳食补充剂。在某些实施方案中，所述膳食补充剂包括例如与另一种饲料一起使用以改善营养平衡或总体性能的饲料。在某些实施方案中，所述补充剂包括组合物，所述组合物未经稀释地作为其他饲料的补充物饲喂，提供了与动物日粮(ration)的其他部分自由选择，可单独提供，或得到稀释并与动物的常规饲料混合以制成完整的饲料。例如，美国饲料监督官司协会(AAFCO)在美国饲料管制官方协会，官方出版物(American Feed Control Officials Incorp.Official Publication)第220页(2003)中提供了有关补充剂的讨论。补充剂可以是多种形式，包括例如粉末、液体、糖浆、丸剂、胶囊组合物，等等。

在某些实施方案中，所述宠物食品组合物是零食(treat)。在某些实施方案中，所述零食包括例如给予动物以诱使动物在非用餐时间进食的组合物。在某些实施方案中，所述宠物食品组合物是犬科动物的零食，例如狗骨头。零食可以是营养的，其中所述组合物包含一种或多种营养物，并且可以例如具有如上所述的用于食品的组合物。非营养零食包括任何其他无毒零食。

在某些实施方案中，可以在制剂的加工期间，例如在组合物的其他组分混合期间和/或之后，将本发明公开的主题的镁掺入所述组合物中。这些组分向组合物中的分布可以通过常规方式完成。

在某些实施方案中，可以使用常规的宠物食品方法以罐装或湿的形式制备本发明公开主题的宠物食品组合物。在某些实施例中，地面动物(ground animal)(例如，哺乳动物、家禽和/或鱼类)的蛋白质组织与其他成分混合，包括鱼油、谷物、其他营养均衡成分、特殊用途的添加剂(例如，维生素和矿物质的混合物、无机盐、纤维素和甜菜浆、填充剂等)；并添加足以用于加工的水。在混合各成分的同时，将这些成分在适合加热的容器中混合。可以使用任何合适的方式来有效加热混合物，诸如，例如通过直接蒸汽注入或通过使用装有热交换器的容器。添加最后一种成分后，将所述混合物加热至约50°F至约212°F的温度范围。该范围之外的温度是可以接受的，但不使用其他加工助剂在商业上是不切实际的。当加热到合适的温度时，该材料通常将呈粘稠的液体形式。所述粘稠的液体填充到罐中。盖上盖子，并将容器密封(hermetically sealed)。然后将得到密封的罐子放入设计用于消毒内容物的常规设备中。这通常是通过加热到大于约230°F的温度并保持适当的时间来实现的，这取决于例如所用的温度和组合物。

在某些实施方案中，可以使用常规方法以干燥形式制备本发明公开的主题的宠物食品组合物。在某些实施方案中，干成分包括例如动物蛋白源、植物蛋白源、谷物等等，所述干成分被碾碎并混合在一起。在某些实施方式中，潮湿成分或液体成分，包括脂肪、油、动物蛋白来源、水等等，随后被添加到所述干混合物中并与之混合。在某些实施方案中，然后将所述混合物加工成粗粒物或类似的干块。在某些实施方案中，所述宠物食品组合物是粗粒物(kibble)。在某些实施方案中，粗粒物使用挤出工艺形成，其中将干成分和湿成分的混合物在高压和高温下进行机械加工，并迫使其通过小开口，并通过旋转刀切成粗磨物。在某些实施方案中，湿粗粒物随后得到干燥并任选地用一种或多种表面包衣涂覆，所述表面包衣可以包括例如调味剂、脂肪、油、粉末等。在某些实施方案中，也可以使用烘烤方法而不是挤出方法从生面团中制粗粒物，其中在干热加工之前将生面团放入模具中。

在某些实施方案中，可以通过例如与上文针对干食品所述的那些类似的挤出或烘烤方法来制备本发明公开的主题的零食。

实施例

通过参考以下实施例将更好地理解本发明公开的主题，这些实施例作为本发明的示例提供，而不作为限制。

下面列出了使用的缩写列表：

CKD慢性肾脏疾病(chronic kidney disease)

CKD-MBD慢性肾脏疾病-矿物质和骨疾病(chronic kidney disease-mineral andbone disorder)

FE排泄分数(fractional excretion)

FGF-23成纤维细胞生长因子23(fibroblast growth factor 23)

HCO₃ ^-静脉碳酸氢盐浓度(venous bicarbonate concentration)

HR危险比(hazard ratio)

IRIS国际肾脏兴趣学会(International Renal Interest Society)

OR优势比(odds ratio)

PTH甲状旁腺激素(parathyroid hormone)

SBP收缩压(systolic blood pressure)

USG尿比重(urine specific gravity)

实施例1：总镁可以预测慢性肾脏疾病猫的生存时间

低镁血症与人类慢性肾脏疾病(CKD)患者的生存时间减少有关。关于镁对猫科动物CKD的预后价值知之甚少。这项研究旨在评估在诊断CKD时血浆总镁浓度是否与猫的存活时间有关。成纤维细胞生长因子23(FGF23)浓度的影响也得到了探索，考虑到最近的证据指示它是猫科动物CKD的重要预后因素。

在诊断氮血症CKD时，对从猫中获取的存储的肝素化血浆样品进行了总镁浓度(total magnesium，tMg)的测量。临床数据以中位数[第25、第75百分位]表示。根据tMg将猫分为四分位数(MgQ1-4)，并使用单向方差分析(one-way ANOVA)比较各组之间的基线变量。两种多变量Cox回归模型用于评估血浆tMg在氮血症CKD诊断中作为生存时间(全因死亡率)的预测因子的有效性：模型1，包括年龄、血浆肌酐、磷酸盐、全段甲状旁腺激素、白蛋白、tMg、并以高血压的诊断作为分类变量，和以红细胞压积(packed cell volume，PCV)作为连续变量进行诊断；以及模型2除模型1中包含的变量外，还包括FGF23作为分类变量。

这项回顾性观察队列研究包括了IRIS 2期(n＝110)和3期(n＝50)CKD的一百六十(160)只猫。研究中的tMg中位数为2.04[1.85，2.24]毫克/分升(mg/dL)，范围：1.29-2.90mg/dL。与所有三个上四分位(upper quarter)相比，MgQ1中的猫的FGF23浓度明显更高(2008.7[762.1，8194.4]pg/mL)，彼此之间没有显著差异(MgQ2：895.3[455.0,1948.2]MgQ3:493.9[344.2,2035.5]MgQ4:477.8[316.9，975.7]pg/mL，P<0.001)。MgQ1和MgQ3中的猫在年龄(Q1：16.4[14.1，18.7]；Q3：13.4[12.0，15.9]年，P＝0.022)和磷酸盐浓度(Q1：5.15[3.89，6.54]；Q3：4.09[3.50，5.05]mg/dL，P＝0.013)方面不同。肌酐浓度仅在MgQ3和MgQ4之间有所不同(MgQ3：2.37[2.14，2.68]；mgQ4：2.68[2.38，3.30]mg/dL，P＝0.029)。在Cox回归模型1中，生存与PCV正相关(P<0.001)，并且与年龄(P<0.001)、肌酐(P＝0.003)、tMg(P＝0.007)和高血压的诊断负相关(P＝0.046)。与MgQ1(危险比(HR)：0.434，P＝0.003)和MgQ4(HR：0.433，P＝0.002)二者相比，MgQ2中的猫具有降低的死亡风险。在模型2中，生存与PCV正相关(P<0.001)，并且与年龄(P<0.001)、FGF23(P＝0.004)、高血压(P＝0.014)和tMg(P＝0.036)负相关。与MgQ4(HR：0.452，P＝0.005)相比，MgQ2中的猫的死亡风险显著降低，但不再与MgQ1相比(HR：0.622，P＝0.126)。

总之，在考虑到FGF23的影响后，在诊断CKD时较高的血浆镁浓度与全因死亡(all-cause mortality)的风险增加相关。中等浓度的镁可提高生存率。以低镁浓度为特征的猫具有增加的全因死亡的风险(模型1)，但与较高镁四分位数(higher magnesium quarters)(模型2)相比，这种增加的风险似乎与较高的FGF23浓度相关。有必要进行进一步的研究来调查镁是否是可改变的危险因素，以及镁与FGF23浓度之间的关系是否能导致猫科动物CKD的新管理策略的开发。

实施例2：口服补充镁在猫慢性肾脏疾病(CKD)-矿物质和骨疾病(MBD)管理中的益 处

一项对160只患有慢性肾脏疾病(CKD)的猫进行回顾性研究的数据预示，血浆镁浓度与存活率有关。在单变量Cox回归分析中，CKD诊断时的低镁浓度和高镁浓度的危险比均高于正常浓度。然而，尽管高镁水平仍然与减少的生存时间独立相关，但低镁组增加的死亡风险似乎与该组中显著升高的成纤维细胞生长因子23(FGF23)浓度有关(图1)，使得FGF23却不是低血清镁停留在多变量模型中。线性回归显示，总镁是FGF23浓度的独立预测因子。有必要进行前瞻性研究以调查镁补充是否可以降低CKD诊断时具有低镁浓度的猫的FGF23水平并改善其生存时间。因此，进行了一项研究以确定口服补充镁是否会降低血清FGF23，这可能是治疗猫科动物CKD患者的骨和矿物质疾病的新方法。

研究目的

首要目的是确定向诊断为氮血症CKD且同时血浆镁浓度低的猫口服补充镁，是否可以降低这些动物的血浆FGF23浓度。

次要目的是1)确定口服补充镁是否可以改善镁的状态，以及在多大程度上改善镁的状态；2)补充镁与其他临床病理变量(磷酸盐、离子钙、甲状旁腺激素(PTH)、骨化三醇、钾、收缩压)变化之间的关联的评定；以及3)补充镁可能产生的副作用(即，高镁血症、鸟粪石尿石症(struvite urolithiasis)、腹泻)的评估。

研究方案

登记(Enrolment)

患有氮血症CKD和低镁血症的猫被选入到临床试验中。筛选预处理涉及：1)血浆生物化学(包括总甲状腺素和总镁)、血细胞(hematocrit)和总蛋白；2)尿液分析；3)收缩压测量；和4)血浆FGF23和PTH的测量。

入选标准为：1)诊断为稳定的氮血症CKD IRIS 2期或3期；2)血浆总镁浓度<0.80毫摩/升(mmol/L)；和3)最近2个月的稳定饮食(研究期间不允许饮食变化)

排除标准为：1)甲状腺功能亢进症(甲状腺素总浓度<40纳摩/升(nmol/L))；2)诊断为高血压；3)尿液分析鉴定出鸟粪石晶体(如果尿液浓缩，则观察到的鸟粪石晶体(struvite crystal)很常见；仅当存在大量晶体时才会排除)；4)过去一年内出现下泌尿道疾病(FLUTD)；或5)使用肠磷酸盐粘合剂。

治疗

在主人同意的情况下，猫接受了口服镁补充，包括每天与食物一起补充63.6至90.1毫克元素镁，优选为甘氨酸镁。

特别是，猫饮食中每千克体重补充了100毫克甘氨酸镁，相当于14.1毫克镁/千克(mg Mg/kg)。例如，一只5千克的猫每天需要大约200千卡(kcal)，这应该每天消耗70mg/1000kcal的补充物。猫粮中现有的镁上添加了镁补充剂，猫饮食中的镁的量的范围为260-330mg Mg/1000kcal。

随访(Follow-up)

口服镁补充4周至6周后进行评定。在此访视期间，测量了收缩压，并采集了血液和尿液样本。如果1)猫拒绝补充镁；2)补充镁时，猫拒绝进食肾脏饮食(Renal diet)，因此每日热量摄入的小于50％是由肾脏饮食构成的；3)血浆总镁浓度超过1.0mmol/L；4)尿沉渣中发现磷酸铵镁晶体；5)猫出现了腹泻；6)猫出现了除氮血症CKD以外的其他重大医疗状况，需要进一步治疗或要求安乐死；7)观察到需要停止饲喂所述饮食的不良反应，例如并发临床症状的电离性高钙血症；或8)主人没有带猫履行随访约定；则终止参与。

分析

口服补充镁对镁和FGF23状态的影响通过1)血浆总镁浓度相对于基线的变化和2)血浆FGF23浓度相对于基线的变化，得到了测定。

口服补充镁对涉及猫CKD的其他参数的影响可通过以下方法测定：1)血浆完整PTH浓度相对于基线的变化；2)血浆骨化三醇浓度相对于基线的变化；3)血浆磷酸盐浓度相对于基线的变化；4)收缩压相对于基线的变化；和5)全血钾浓度相对于基线的变化。

结果

图1显示了根据血浆总镁浓度分类为四分位数的氮血症CKD IRIS 2期-3期的猫血浆FGF23浓度。中位数总镁浓度为0.84[0.75，0.92]mmol/L。与所有三个上四分位(upperquarter)相比，镁四分位数最低的猫具有明显更高的FGF23浓度(2008.7[762.1，8194.4]pg/mL)，所有三个上四分位彼此之间没有显著差异(MgQ2：895.3[455.0,1948.2]；MgQ3:493.9[344.2,2035.5]；MgQ4:477.8[316.9，975.7]pg/mL，P<0.005.)。虚线表示老年猫血浆FGF23参考范围的上限(700pg/mL)。图1的Y轴为对数刻度。

镁补充剂对患有氮血症CKD IRIS 2期-3期的猫的血液样本中总镁、FGF23和磷酸盐的影响如图2A-2C所示。图2A显示了在4只猫中补充之前和之后的总血清Mg。图2B显示了补充镁之前和之后的血清FGF23。在四只猫中的三只中，补充镁与FGF23的大幅降低有关。FGF23是血清磷积累的已知标志物，且FGF23的减少与肾脏疾病的进展相关。图2C显示补充之前和之后的血清磷酸盐。

图3A-3I进一步显示了镁补充剂对氮血症CKD IRIS 2期-3期的猫的总镁(A)、FGF23(B)、肌酐(C)、对称性二甲基精氨酸(SDMA)(D)、磷酸盐(E)、收缩压(F)、钾(G)、钙(H)和甲状旁腺激素(PTH)(I)的影响。

实施例3-在患有氮血症慢性肾脏疾病的猫队列(cohort)中血浆总镁的预后重要 性的观察

本实施例研究了患有氮血症CKD的猫中镁代谢紊乱的患病率和风险因素，血浆tMg与FGF-23和其他临床病理变量的关系，以及患有氮血症CKD的猫队列中镁代谢紊乱对全因死亡率和肾功能下降的预后意义。

方法

受试者

从在伦敦市中心的两家第一意见实践(first opinion practices)(卡姆登市(Camden)鲍和博蒙特塞恩斯伯里动物医院(Bow and Beaumont Sainsbury AnimalHospital)中人民病患动物诊疗室(People’s Dispensary for Sick Animals)保留的老年猫诊所的记录中鉴定出猫。客户拥有的≥9岁龄的猫去了这些诊所进行常规健康筛查，并且随后对那些被诊断为氮血症CKD的猫进行了疾病管理。参与这项研究的猫是更大的观察队列(observational cohort)的一部分，该观察队列已获得所有者的同意，并已获得皇家兽医学院伦理与福利委员会(Ethics and Welfare Committee of the Royal VeterinaryCollege)的批准。

选择一组120只在2001年9月至2013年9月之间显然健康的猫，以建立老年猫血浆tMg的参考区间。如果在临床病史、体格检查或血液和尿液检查中未发现明显异常，并且如果没有开药物，则认为猫显然健康。为了包括在内，储存的肝素化血浆样品必须可供来测量tMg。

选择在1999年8月至2013年7月之间被诊断患有氮血症CKD的猫的队列(cohort)，以探究基线血浆tMg在猫CKD中的临床意义。氮血症CKD的诊断标准是血浆肌酐浓度≥2mg/dL加上尿比重(urine specific gravity，USG)<1.035，或相隔2-4周连续2次血浆肌酐浓度≥2mg/dL。要入组，必须从CKD诊断之时起获得血浆FGF-23浓度数据和可供的用于测量tMg的储存的残留肝素血浆样品。所有分析均不包括具有甲状腺功能亢进症临床症状、血浆总甲状腺素浓度>40nmol/L、甲状腺功能亢进症的药物治疗、糖尿病或皮质类固醇治疗的猫。包括接受苯磺酸氨氯地平治疗系统性高血压的猫。

数据采集

临床就诊包括病史和体格检查、收缩压(SBP)测量以及血液和尿液收集。从电子临床记录中检索出氮血症CKD诊断之日时获得的基线数据，且包括年龄、品种、性别、体重、身体状况评分(BCS)、收缩压(SBP)、血浆总甲状腺素浓度、PCV、常规血浆生化变量(总蛋白、白蛋白、球蛋白、肌酐、钠、钾、氯、磷酸盐和总钙浓度)、离子钙浓度、静脉碳酸氢盐(HCO₃ ^-))和pH值、血浆骨化二醇、骨化三醇、FGF-23和PTH浓度、USG、尿培养结果、尿蛋白与肌酐之比(UPC)和镁值的排泄分数(fractional excretion，FE)。还记录了死亡日期和是否发生了氮血症(定义如下)。电子记录中的异常或丢失数据已通过查阅患者的实际病历进行了验证。CKD的严重程度和磷酸盐状态根据国际肾脏兴趣协会(IRIS)指南⁸⁸进行分类。使用多普勒方法(Doppler method)⁸⁹评估了收缩压，并在所有检出SBP>160mmHg的猫中进行间接检眼镜检查(ophthalmoscopy)。全身性高血压定义为相距至少1周-2周至少2次SBP>170mmHg，或单次SBP>160mmHg与眼靶器官损害相关。

通过颈静脉穿刺获得血液样本，通过膀胱穿刺术(cystocentesis)获得尿液样本。由还进行常规生化分析⁹⁰的实验室在残留的肝素化血浆中测量了总镁，该血浆已储存在-80℃中。FGF-23和PTH分别在EDTA血浆中使用经过验证的^4,32ELISA⁹¹和免疫放射测定⁹²分析进行了测量。对于FGF-23的测量，样品已用零标准品稀释以达到标准曲线上的读数。PTH分析的检出限为5.2pg/mL，³²浓度低于此值的样品被指定为2.6pg/mL的任意PTH浓度。离子钙、静脉血液气体和维生素D代谢物的结果仅对于某些猫可供。直接在静脉穿刺之后，使用快速现场分析仪(point-of-care analyzer)⁹³测量了非肝素化全血中的离子钙浓度和血液气体。维生素D代谢物已在外部实验室⁹⁴进行了测量。尿液分析包括通过折光法(refractometry)、试纸分析和尿沉渣显微镜检查对USG进行内部测量。尿液生化由商业实验室进行。排泄分数值使用部分采样法测定。³³

统计分析

使用统计软件包⁹⁵进行统计分析。对于所有报告的分析，均进行了具有α水平≤0.05定义的统计学显著性的显著性双侧检验(two-sided test)。连续的临床数据以平均值(SD)或中位数[第25，第75百分位数]表示。通过夏皮罗-威尔克检验(Shapiro-Wilk test)和Q-Q图的目视检查评估了数值变量的分布是否正常。对于具有正态分布的连续变量，或者使用独立样本t检验(2组)或单向ANOVA与博菲罗尼事后比较(Bonferroni post hoccomparison)(≥3组)，来比较各组之间的基线特征，或者对于具有偏态分布的连续变量，使用曼-惠特尼U检验(Mann-Whitney U test)(2组)或克鲁斯卡尔-沃利斯检验(Kruskal-Wallis text)，然后进行博菲罗尼校正(Bonferroni correction)的曼-惠特尼U检验(Mann-Whitney U test)(≥3组)，来比较各组之间的基线特征。使用费希尔精确检验(Fisher’s exact test)比较了比例。

镁代谢紊乱的患病率和相关因素

根据年龄较大的猫血浆tMg的参考区间的下限和上限，将猫分为3组，该区间使用参数方法(即平均值±2SD)计算得出。使用该参考区间，比较3个镁组之间的基线特征以及进行二元逻辑回归以探讨低镁血症或高镁血症的危险因素，计算出低镁血症和高镁血症在诊断氮血症CKD中的患病率。与这些条件显著相关的变量被输入到多元二元逻辑回归模型中。最终模型是通过手动向后消除得出的。通过哈斯莫-莱莫斯检验(Hosmer–Lemeshowtest)评估模型的拟合优度。结果报告为优势比(OR；95％置信区间[CI])。

血浆总镁与血浆FGF-23和其他临床病理变量的关联

比较了每个IRIS期内低镁血症猫、正常镁血猫和高镁血症猫之间的血浆FGF-23浓度，以及处于IRIS 2期和3期CKD的猫的正常磷酸盐和高磷酸盐亚组(基于每期的IRIS血浆磷酸盐指标)内血浆tMg低于中位数和高于中位数(<2.04mg/dL和≥2.04mg/dL)的猫之间的血浆FGF-23浓度。

皮尔逊相关系数(Pearson correlation coefficient)(r)得到计算以评估血浆tMg与经对数转化的FGF-23浓度(自然对数[ln])之间的关系。进行偏相关来测量这两个变量与去除ln[肌酐]和ln[磷酸盐]的混杂效应之间的关联强度，这两个因素都是已知的血浆FGF-23的预测因子。⁴

构建了针对IRIS分期进行调整的单变量通用线性模型，探索血浆tMg作为连续变量与哪些变量相关。年龄、体重、PCV、血浆白蛋白、钠、钾、氯、总钙、ln[FGF-23]、ln[PTH]、ln[肌酸酐]、ln[磷酸盐]浓度和ln[UPC]被评估为连续协变量。将IRIS分期和高血压状态作为固定因素。评估与具有α水平<0.10的血浆tMg相关的协变量与IRIS分期的统计学相互作用，并将其纳入包括任何重要相互作用项的多变量线性回归模型。最终回归模型是通过向后消除得出的。通过目测检查残差的直方图和残差相对于拟合值的散点图，检查了正态性和变量之间线性关系的假设。结果报告为回归系数(β；95％CI)。

血浆总镁与存活率的关系

为了评估血浆tMg是否与存活率有关，将所有入选的猫纳入生存分析，以氮血症CKD的诊断日期指定为基线，全因死亡率作为感兴趣的事件，并对在2016年7月1日失去随访或仍然活着的猫进行了删失。丧失随访的猫在已知还活着的最后一天得到删失。使用对数秩检验(log-rank test)比较正常镁血组与低镁血症和高镁血症猫的卡普兰·迈耶曲线(Kaplan Meier curve)，并通过单变量时变Cox比例危害分析(univariable time-invariant Cox proportional hazard analysis)计算危险比(HR)。为了调整可能的混杂因素(confounding factor)，使用单变量Cox回归分析评估了与以下基线变量的存活率的相关性：血浆tMg、肌酐、磷酸盐、总钙、钠、氯、钾、白蛋白、FGF-23和PTH浓度、年龄、PCV、体重、BCS、高血压状态、USG和UPC。血浆PTH由于严重偏态分布而被对数转换。如果不符合通过检查卡普兰·迈耶曲线(Kaplan Meier curve)和评估每个变量随时间的统计交互作用所评估的比例风险假设，则对连续变量进行分类。如果可能，分组基于临床相关的余量(血浆tMg、高血压状态、BCS)或三分位数(磷酸盐、FGF-23、钠、USG、体重)。没有执行缺失数据插补(imputation)。评估与α水平<0.10的存活率相关的变量与镁状态的相互作用，然后与任何具有统计学意义的相互作用项一起进入多变量分析(P<0.05)。最终的多变量模型是通过手动向后消除得出的。通过目测检查Cox-Snell残差图(Cox-Snell residual plot)来检查Cox模型的整体拟合。结果报告为HR(95％CI)。

给定与死亡率的非线性关系，在主要分析中，血浆tMg作为分类变量进行了分析，划分为导出参考区间的上下限。为了探究血浆tMg在连续范围内对存活率的影响，进行了子分析。将猫以tMg的中位数划分，然后将tMg作为连续变量输入到完全调整的Cox模型中，而不是作为类别变量输入到完全调整的Cox模型中。

此外，探索了血浆镁浓度和磷酸盐状态与全因死亡率之间的预定义相互作用。根据IRIS磷酸盐目标指南，将处于IRIS 2期和3期CKD的猫根据磷酸盐状态进行划分，⁹⁶并通过血浆tMg的中位数拆分。这获得以下4类：正常磷酸盐-低镁(NP-LM：IRIS正常磷酸盐；血浆镁<2.04mg/dL)，正常磷酸盐高镁(NP-HM：IRIS正常磷酸盐；血浆镁≥2.04mg/dL)，高磷酸盐低镁(HP-LM：IRIS高磷酸盐；血浆镁<2.04mg/dL)和高磷酸盐高镁(HP-HM：IRIS高磷酸盐；血浆镁≥2.04mg/dL)。通过使用单变量Cox回归比较4个磷酸盐-镁组的危害，探索了镁和磷酸盐之间与生存率相关的统计学相互作用。选择NP-HM组作为未暴露的联合参考类别，以计算HP-LM组由于相互作用(RERI，即预期风险与观察到的风险之间的差异)而导致的相对超额风险。^34，97

血浆总镁与CKD进展的关系

使用二元逻辑回归检查镁状态是否与CKD进展相关。将猫分为2组：一个进展型CKD组，在诊断的前12个月内血浆肌酐浓度增加>25％，和一个未显示增加的稳定型CKD组。该分析仅包括随访时间≥12个月的稳定的猫。镁状态、血浆肌酐、磷酸盐、总钙、钾、白蛋白、ln[FGF-23]和ln[PTH]、年龄、PCV、体重、BCS、高血压状态、USG和UPC进入单变量二元逻辑回归。在单变量分析中，α水平<0.10的与进展型疾病相关的变量进入多变量回归。最终模型是通过手动向后消除得出的。通过哈斯莫-莱莫斯检验(Hosmer–Lemeshow test)评估模型的拟合优度。结果报告为OR(95％CI)。通过使用单变量逻辑回归比较4个磷酸盐-镁组(如上定义)的OR，探索了血浆镁浓度和磷酸盐状态与CKD进展之间的预定义相互作用。

结果

为了探究血浆总镁浓度与血浆FGF-23、全因死亡率和氮血症CKD的猫的疾病进展之间的关系，分析了174个IRIS 2期-4期CKD的客户拥有的猫的记录。根据一般实践(1999-2013)，分别使用线性、Cox、和逻辑回归分析了一个队列(cohort)的氮血症CKD猫的基线血浆总镁浓度与FGF-23浓度以及死亡风险和进展之间的可能联系。结果预示当控制血浆肌酐浓度时(偏相关系数为-0.50；P<0.001)，血浆总镁浓度(参考区间为1.73-2.57mg/dL)与血浆FGF-23呈负相关。

低镁血症在12％(20/174)的猫中被观察到，并与增加的死亡风险独立相关(调整后的危险比为2.40；95％的置信区间[CI]，1.18-4.86；P＝0.016)。在多变量分析中，未经调整的高镁血症(患病率为6％；11/174的猫)与生存率(危险比为2.88；95％CI，1.54-5.38；P＝0.001)，和低镁血症与进展型CKD(优势比为17.68；95％CI，2.04-153.59；P＝0.009)之间的关系失去了显著性。

确定老年猫血浆总镁浓度的95％参考区间

参考群体由53只雄性猫和67只雌性猫组成，其中1只未去势雄猫(entire male)，1只未去势雌猫(entire female)。猫属于以下品种：家养短毛猫(n＝97)、家养长毛猫(n＝12)、缅甸猫(Burmese)(n＝4)、波斯猫(Persian)、英国短毛猫(British shorthair)和俄罗斯蓝猫(Russian blue)各2只、英国蓝猫(British blue)1只。其他特性见表1。测定血浆tMg的分布为高斯分布(Gaussian)，平均浓度为2.15(SD，0.209)mg/dL，得出95％的参考区间为1.73-2.57mg/dL(0.71-1.06mmol/L)。

表1

表1从120只≥9年龄的明显健康猫的特征中得出血浆总镁浓度的参考区间。USG，尿比重；PCV，红细胞压积；SBP，收缩压。

氮血症CKD猫的血浆总镁

在1999年8月至2013年7月之间，共诊断出517只猫患有氮血症CKD，其中96只猫被排除在外，原因如下：并发甲状腺功能亢进(n＝79)，不符合CKD诊断的研究标准(n＝16)或泼尼松龙给药(prednisolone administration)(n＝1)。在421只合格的猫中，有88只猫没有可用于tMg测量的残留血浆样品，157只猫缺乏血浆FGF-23浓度的基线信息，并且2个样品严重溶血。因此，本研究招募了174只猫，其中一些曾经包括在以前的研究中。^5，8174只纳入分析的猫和247只未纳入分析的合格猫的基线特征之间未观察到显著差异，这247只合格猫由于缺乏残留血浆样本或血浆FGF-23测量值(数据未显示)而未被纳入分析。

研究群体包括88只雌性，其中1只未去势，以及86只雄性，其中3只未去势。家养短毛猫(domestic shorthair)是最常见的品种(n＝127)，其次是家养长毛猫(domesticlonghair)(n＝20)、波斯猫(n＝10)、缅甸猫(n＝7)，英国短毛猫(n＝2)、暹罗猫(Siamese)(n＝2)，以及阿比西尼亚猫(Abyssinian)、美国短毛猫(American shorthair)、金吉拉猫(Chinchilla)，欧西猫(Ocicat)，俄罗斯蓝猫和蒂凡尼猫(Tiffany)各1只。根据国际肾脏兴趣协会(IRIS)分期系统，有114只猫患有2期CKD，50只猫患有3期CKD，和10只猫患有4期CKD。研究群体猫的年龄大于得出血浆tMg的参考区间的猫的组(分别是：平均14.4年；SD为3.2相比平均12.7年；SD为2.2)。

镁代谢紊乱的患病率和相关因素

研究群体的血浆中位数tMg为2.07[1.87，2.26]mg/dL(范围，1.29-5.79)。174只猫中有20只被诊断为低镁血症(患病率，12％；95％CI，7-17)，11只猫被诊断为高镁血症(患病率，6％；95％CI，3-10)。在IRIS 4期的猫中显著地观察到了高镁血症(图4)。表2列出了低镁血症猫、正常镁血猫和高镁血症猫的基线特征。

表3列出了与镁代谢异常有关的危险因素。

多变量回归显示，患有CKD猫中较高血浆ln[FGF-23](OR，2.07；95％CI，1.48-2.90；P<0.001)和诊断为系统性高血压(OR，4.24；95％CI，1.41-12.78；P＝0.010)与低镁血症独立相关(内戈尔科(Nagelkerke)R²，0.30)。患有系统性高血压的猫亚组的血浆中位数tMg为1.97[1.69，2.14]mg/dL，而正常血压组为2.09[1.90，2.29]mg/dL(P＝0.004)。由于高镁血症病例相对较少，因此未对高镁血症进行多变量分析。

表2

表2根据镁的状态分组的氮血症CKD猫的特征。数据以中位数[第25，第75百分位]或患病率(n[％])表示。带有不同上标字母的行彼此之间显著不同。BCS，身体状况评分；FGF-23，成纤维细胞生长因子23；HCO₃ ^-，静脉碳酸氢盐；PCV，红细胞压积；PTH，甲状旁腺激素；SRHPT，继发性肾脏甲状旁腺功能亢进；SBP，收缩压；UPC，尿蛋白与肌酐之比；USG，尿比重；FE，排泄分数。

表3

表3单变量二元逻辑回归结果确定了174只患有氮血症CKD的猫的低镁血症(n＝20)和高镁血症(n＝11)的风险因素。在多变量分析中，血浆FGF-23浓度和高血压状态仍然是低镁血症的独立危险因素。高镁血症没有进行多变量回归。OR，优势比；95％CI，95％置信区间；FGF-23，成纤维细胞生长因子23；PTH，甲状旁腺激素；PCV，红细胞压积；UPC中，尿蛋白与肌酐之比。

血浆总镁与血浆FGF-23和其他临床病理变量的关联

在每个IRIS分期，低镁血症的猫具有高于正常镁血的猫的血浆FGF-23浓度(图5)。镁组之间的血浆肌酐和磷酸盐浓度没有显著差异。血浆tMg和ln[FGF23]之间没有明显的相关性(r，-0.06；P＝0.425)。但是，控制血浆肌酐和磷酸盐会导致血浆tMg与FGF-23之间显著负相关(部分(partial)r，-0.50；P<0.001)。表4列出了来自一般线性模型的单变量和多变量结果。成纤维细胞生长因子23是所有3个IRIS分期中镁的重要独立预测因子，在4期作用最强。

在正常磷酸盐的猫和高磷酸盐的猫的亚组分析中(基于每个分期的IRIS血浆磷酸盐指标(target))，与血浆tMg较高的猫相比，血浆tMg较低的猫中血浆FGF-23浓度明显较高(图6)。在针对IRIS分期进行调整的一般线性模型中，在正常磷酸盐的猫(β，-0.11；95％CI，-0.17至-0.05；P＝0.001)和高磷酸盐的猫(β，-0.17；95％CI，-0.24至-0.10；P<0.001)中ln[FGF-23]与血浆tMg均负相关。

表4

表4通用线性模型可识别血浆总镁浓度(mg/dL)的预测因子。R²多变量模型＝0.69。^*所有变量均计入IRIS分期。β，回归系数；95％CI，95％置信区间；IRIS，国际肾脏兴趣学会协会；ln[PTH]，对数转化的血浆甲状旁腺激素浓度；ln[FGF-23]，对数转化的血浆成纤维细胞生长因子23的浓度。

血浆总镁与存活率的关系

在270.4患者-年(中位数1.3[0.5，2.3]年)的总随访期间，有150只猫死亡，20只失去随访，4只存活至2016年7月1日以后。诊断为氮血症CKD后的前12个月全因死亡(all-cause mortality)的风险对于整个群体是43％(72/167)，对于在基线为正常镁血的猫是35％(48/136)，对于在基线为低镁血症的猫是80％(16/20)，对于在基线为高镁血症的猫是73％(8/11)。在诊断为CKD时，所有猫的全因死亡的发生率分别为0.56/每患者-年，对正常镁血的猫是0.48/每患者-年，并且对患有低镁血症的猫和患有高镁血症的猫为1.34/每患者-年。

表5列出了这三种镁类别的基线特征。在正常镁血的猫中有16％(23/143)，低镁血症猫中有5％(1/20)进行了删失，而高镁血症猫中没有一只。镁类别之间的删失的病例比例没有显著差异(P＝0.240)。Cox回归指示低镁血症和高镁血症与增加的死亡风险相关(表5A和图7)。调整混杂因素后，低镁血症仍然是死亡率的独立预测因子。在最终回归模型中合并的猫(n＝119)的基线特征与由于信息缺失而忽略的猫(n＝55，数据未显示)的基线特征之间没有统计学上的显著差异。

在完全调整模型中血浆tMg被视为连续变量，血浆tMg与血浆tMg<2.07mg/dL的猫的死亡率负相关(HR，0.04；95％CI，0.01-0.27；P＝0.001；n＝57；平均tMg，1.83mg/dL)。在tMg≥2.07mg/dL的猫中，这种关联是非线性的，而且不显著(HR，0.67；95％CI，0.24-1.85；P＝0.438；n＝65；平均tMg，2.37mg/dL)。然而，在最高四分位数(highest quartile)中，tMg与死亡率显著相关(tMg≥2.26mg/dL：HR，0.12；95％CI，0.02-0.76；P＝0.025；n＝31，平均tMg，2.62mg/dL)。

通过单变量Cox比例风险分析探索了血浆镁浓度和磷酸盐状态与全因死亡率之间的预定义相互作用。与正常磷酸盐的猫相比(n＝89)，诊断为CKD时IRIS分期高磷酸盐的猫(n＝85)具有增加的死亡风险(HR，1.57；95％CI，1.13-2.16；P＝0.007)。但是，考虑到血浆镁的浓度，与正常磷酸盐的猫(NP-HM：HR，0.53；95％CI，0.33-0.84；P＝0.008，和NP-LM：HR，0.51；95％CI，0.31-0.83；P＝0.007)以及血浆镁的量较高的高磷酸盐的猫(HP-HM：HR，0.60；95％CI，0.36-0.99；P＝0.043)相比，只有血浆镁的量较低的高磷酸盐猫具有显著增加的死亡风险。与NP-HM组作为未暴露的联合参考类别相比，HP-LM组观察到偏离加和性，具有相对过量风险为0.79，暗示镁和磷酸盐之间的相互作用与存活率有关(表5B)。

表5

表5时间不变的Cox回归结果可确定氮血症CKD猫的死亡率的基线预测因子。A.主要分析单变量和多变量回归结果。B.亚分析的单变量结果检查了磷酸盐和镁之间的预先指定的相互作用。HR，危险比；95％CI，95％置信区间；FGF-23，成纤维细胞生长因子23；BCS，身体状况评分；PCV，红细胞压积；PTH，甲状旁腺激素；USG，尿比重；UPC，尿蛋白与肌酐之比；NP，正常磷酸盐的(normophosphatemic)；HP，高磷酸盐的(hyperphosphatemic)；LM，低血浆镁；HM，高血浆镁；RERI，由于相互作用导致的相对超额风险。

血浆总镁与CKD进展的关系

81只猫有足够的随访数据可供包括在进展分析中，其中29只猫(36％)在诊断的前12个月内显示CKD的进展。明显更高比例的低镁血症猫患有进展型CKD(表2)。在单变量逻辑回归分析中，低镁血症与进展型疾病的几率增加相关，但在调整了其他变量后，镁的影响失去了显著性。在最终回归模型中，只有较高的基线血浆FGF-23仍是与进行性进展型CKD风险相关的重要预测因子(内戈尔科(Nagelkerke)R²，0.21；表6)。既没有在高磷酸盐的猫和正常磷酸盐的猫之间，也没有在4个磷酸镁组之间(P＝0.628)观察到进展风险的统计学显著差异(P＝0.194)。因此，未进一步探讨血浆镁和磷酸盐联合暴露的效果与进展型CKD的关系。

表6

表6单变量二元逻辑回归结果确定了猫诊断为氮血症CKD的前12个月内进展型CKD的预测因子。只有ln[FGF-23]仍是多因素回归进展的独立风险因子。OR，优势比；95％CI，95％置信区间；FGF-23，成纤维细胞生长因子23；PCV，红细胞压积。

讨论

观察性队列(observational cohort)的结果证明，患有氮血症CKD的猫中血浆tMg与血浆FGF-23浓度呈负相关关系。低镁血症和增加的全因死亡风险之间存在显著的独立关联。发现镁状态(magnesium status)与进展型CKD风险之间的独立关联的证据不足。在其他分析中，确定了低镁血症和全身性高血压之间的可能联系，并且较高血浆tMg显示降低与高磷酸盐血症(hyperphosphatemia)相关的死亡风险。

研究中发现，跨越CKD不同分期中镁代谢异常的分布与以前报道的猫数量较少的情况相当。³³高镁血症被认为是由于肾脏不能过滤足够的镁而导致的，^35,36并且主要发现于患有严重肾功能不全的猫中。CKD中低镁血症被认为是继发于损害的肠道吸收或增加的镁的肾脏排泄，导致骨和肌肉储备减少。^{35,37-3935,37-39}患有低镁血症的猫的尿镁排泄似乎更高，这可能预示肾脏镁的浪费是其根本原因。^39,40然而，这是基于少量的观察结果，用于评估镁的FE的点式样品方法(spot sample method)在猫中缺乏准确性。⁴¹

低镁血症与全身性高血压独立相关。镁通过多种机制(例如细胞内钙浓度的调节，一氧化氮生成和血管钙化)在血管阻力(vascular resistance)中发挥积极作用。^42-51镁与血压之间的关系在人类医学中是众所周知的，^39,52-57并且在犬体中注入镁(magnesiuminfusion)可导致血管阻力和SBP降低。⁵⁸醛固酮增多症(Hyperaldosteronism)常见于患有系统性高血压的氮血症猫中，^59,60并且可能是低镁血症和高血压之间的可能联系，因为醛固酮会刺激尿镁排泄，^61，62而镁则抑制醛固酮的释放。^63,64没有血浆醛固酮浓度信息可用于包括在本研究内的猫。低钾血症和低钙血症与猫、狗和人类的镁缺乏症有关，^98,65-68但并非同一队列中常见的并发发现。

在患有CKD的猫群体中发现血浆tMg与FGF-23呈负相关，并且先前已在血液透析的人CKD患者中发现。⁶⁹⁶⁹对啮齿动物研究的结果暗示，血浆FGF-23浓度受饮食中镁摄入量的影响，^30,31,70接受含镁泻药或磷酸盐结合剂的血液透析患者的血清FGF-23浓度低于未接受PO镁的患者。^69,70另一方面，一项检查口服镁对人CKD 3期和4期患者血清钙化倾向影响的研究报道，FGF-23浓度没有明显降低。⁷²镁与FGF-23之间关系的潜在机制仍有待阐明，但可以假设FGF-23对肾镁的处理有影响，因为它也显示出调节管状磷酸盐^73,74、钙⁷⁵和钠⁷⁶重吸收的作用。醛固酮(aldosterone)通过成骨细胞(osteoblast)刺激FGF-23表达，⁷⁷因此，高醛固酮增多症(二选一地，低镁血症的原因或继发于高镁血症)可能会导致循环中升高的FGF-23。

诊断为氮血症CKD时低镁血症是猫死亡率的独立预测因子。以前没有在CKD的猫中进行存活研究，没有评估过镁状态的影响，^5-7尽管低镁血症和高镁血症都与重症监护病房(intensive care unit)住院的猫的降低的存活率有关。⁷⁸对人CKD患者的多项观察性研究报道，血液透析-患者^25，28以及非透析依赖型CKD患者^24,26二者中，低镁血症与增加的死亡率之间均存在联系。此外，在血液透析-患者中，与高磷酸盐血症相关的死亡风险似乎已被血清镁浓度改变。²⁷高磷酸盐血症是猫CKD的公认风险因素，^6，7结果表明，较高的镁的量可减少猫高磷酸盐血症导致的死亡风险。一个可能的解释可能是镁对磷酸盐诱导的血管钙化的抑制作用，²¹尽管只有很少的报道存在涉及CKD猫的软组织和血管钙化。^2，79，80此外，磷酸盐和镁均会影响血浆FGF-23，血浆FGF-23已被确定为CKD猫的重要预后因素，⁵尽管在这里介绍的分析中，它仍然不能作为存活率的重要预测因子。在上述针对CKD的人的存活率模型中未包括基线FGF-23。调整其他变量后，猫中高镁血症导致的较高死亡风险消失了，这可能是由于其在终末期CKD中的优势所致。但是，必须指出的是，该结果是基于较少的观察结果，导致95％的置信区间很宽。

低镁血症是猫中进展成氮血症的危险因素，但与人类相似，²⁴该关联在多变量分析中失去了。此外，已证明镁可以抑制磷酸盐诱导的对鼠近端肾小管细胞的损害，²³以及人CKD患者高磷酸盐血症引起的肾功能下降程度。²³尽管在患有CKD的猫中高磷酸盐血症和肾纤维化之间的关系是众所周知的，^8,81-83在本研究中，未发现高磷酸盐血症对疾病进展的影响的证据，也未发现镁与磷酸盐之间的相互作用与氮血症的进展有关。这些分析可能受到患有镁紊乱的猫的短生存时间的影响，因为当随访时间较短时，证明血浆肌酐的逐步增加更为困难。

在猫纳入所述队列后测量血浆tMg，因此选择过程对相关感兴趣的暴露是盲目的。但是，只选择了具有血浆FGF-23信息的猫。通过比较所包括的猫和因信息缺失而被排除在外的猫的基线数据，可以解决这种潜在的偏差根源。低镁血症和高镁血症的患病率可能被低估了，因为这些频率是在单个时间点而不是在给定的时间间隔内评估的，而患有这些紊乱的猫表征为更高的死亡风险。

低镁血症和高镁血症对进展和存活率的真实影响可能由于分类偏差而被低估了。首先，基于单个基线测量将不同镁类别的猫分组可能会引入回归稀释偏倚(regressiondilution bias)。在其CKD过程中会发生低镁血症的人类患者中，基线镁浓度较低，²⁴但尚不清楚患有CKD的猫血浆中镁的量以什么方式随时间变化。其次，tMg由3个部分组成：离子化的镁、蛋白质结合的镁和复合的镁(complexed magnesium)。¹⁹在猫肾移植受者和患有糖尿病的猫中，tMg高估了离子化镁的状态，^65,84因此，具有离子化的低镁血症的猫可能已被归入正常镁血类别，如果用低镁观察到的影响是由于离子化而不是tMg状态引起的，则将引入均衡性错误分类。但是，只有1％的体内镁位于细胞外液中，并且在测量tMg或生物活性离子化镁是否最能代表镁状态方面尚无共识，并且这些方法之间没有很好的一致性。^35,39,85尽管进行了多变量分析，但仍不能消除残留混杂的可能性，并且维生素D代谢物、血液气体、骨参数和血浆醛固酮浓度的不完整信息阻止了研究镁与这些变量之间的关系。

该研究确定了低血浆总镁与较高的血浆FGF-23浓度和降低的猫CKD存活率有关，这与探究tMg与FGF-23和患有CKD人类生存率之间关系的研究结果一致。^{24,26,28,69,71}这些观察是从自然发生的CKD的第一意见实践中的客户拥有的猫中得出的，应该与其他宠物猫种群有关。但是，多项观察是从相对较小的猫的队列中进行的，因此，这些发现需要其他研究在不同猫种群中进行验证。血浆tMg的连续测量将允许对本研究中探索的关联性进行纵向分析，并且特别有利于评估血浆镁与氮血症进展之间的关系。这些发现确实暗示，应将血浆镁添加到对患有CKD的猫进行评估的常规血浆生化检测组中，因为这种分析物会增加预后信息，并有助于鉴定患有明显的矿物质-骨紊乱的猫。

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91.FGF-23 ELISA试剂盒，Kainos实验室，东京,日本.

92.完整的PTH免疫放射测定法–包被的微珠版本(Total intact PTHimmunoradiometric assay–coated bead version)，3KG600，Scantibodies，Santee，CA，USA.

93.iSTAT 1快速现场分析仪(iSTAT 1 point-of-care analyzer)，雅培护理点公司(Abbott Point of Care Inc.),普林斯顿(Princeton),NJ,USA.

94.密歇根州兰辛市，密歇根州立大学人口与动物健康诊断中心(Michigan StateUniversity Diagnostic Center for Population and animal Health,Lansing,MI).

95.适用于Windows的IBM SPSS Statistics版本24，IBM公司(IBM Corp.),Armonk,NY,USA and GraphPad Prism 7,GraphPad Software,拉荷亚(La Jolla),CA,USA.

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尽管已经详细描述了本公开的主题及其优点，但应该理解，在不脱离由所附权利要求限定的本发明的精神和范围的情况下，可以进行各种改变、替换和变更。此外，本申请的范围不旨在限于说明书中描述的过程、机器、制造、物质组成、装置、方法和步骤的特定实施方案。本领域普通技术人员将从所公开主题的公开内容中容易地理解，根据本公开的主题，可以使用执行与本文所述的相应实施方案基本相同的功能或实现基本相同的结果的现有或将会发展的过程、机器、制造、物质组成、装置、方法或步骤。因此，所附权利要求旨在在其范围内包括这样的过程、机器、制造、物质组成、装置、方法或步骤。

在本申请中引用了专利、专利申请、出版物、产品描述和方案，其公开内容出于所有目的通过引用整体并入本文。

Claims (31)

1.一种在有需要的动物中治疗或延缓慢性肾脏疾病(CKD)进展的方法，其中所述方法包括：

a.测定动物血液样品中的镁的量；

b.将所述镁的量与预定参考值进行比较；其中所述预定参考值基于对照群体中血液中的平均镁水平；和

c.如果所述镁的量低于所述预定参考值，则向所述动物提供包含镁或其盐的组合物以治疗所述动物。

2.一种在有需要的动物中治疗或延缓慢性肾脏疾病(CKD)进展的方法，其中与预定参考值相比，该动物具有镁缺乏症，所述方法包括：

施用包含有效量的镁或其盐的组合物，并且其中所述预定参考值基于对照群体中血液中的平均镁水平。

3.一种在有需要的动物中治疗或延缓慢性肾脏疾病(CKD)进展的方法，其中所述方法包括：

a.测定动物血液样品中的镁的量；

b.将所述镁的量与预定参考值进行比较；其中所述预定参考值基于对照群体中血液中的平均镁水平；和

c.如果所述镁的量低于第一预定值或高于第二预定参考值，则为所述动物提供治疗方案。

4.根据权利要求3所述的方法，其中所述治疗方案包括选自由以下所组成的组中的至少一种治疗方案：给予包含有效量的镁或其盐的组合物，减少磷酸盐的摄入，减少蛋白质的摄入，给予多不饱和脂肪酸，给予磷酸盐粘合剂疗法，给予钾，减少饮食中钠的摄入，及它们的组合。

5.根据权利要求3所述的方法，其中所述治疗方案包括选自由以下所组成的组中的至少一种治疗方案：饮食疗法、血液透析、肾脏替代疗法、戒断对肾脏有害的化合物、肾脏移植、延缓或避免肾脏破坏程序、改变利尿给药，及它们的组合。

6.根据前述任一权利要求所述的方法，所述方法进一步包括以下步骤：测定动物血液样品中FGF23的量；以及将所述FGF23的量与第三预定参考值进行比较；其中所述预定参考值基于对照群体中血液中的平均FGF23水平，并且其中与所述第二预定参考值相比更高的FGF23水平指示更高的有效治疗可能性。

7.一种诊断和治疗有慢性肾脏病(CKD)风险的动物的方法，其中所述方法包括：

a.从动物获得血液样品；

b.测定动物血液样品中的镁的量；

c.将所述镁的量与预定参考值进行比较；其中所述预定参考值基于对照群体中血液中的平均镁水平；

d.如果所述镁的量低于第一预定值或高于第二预定参考值，则诊断所述动物有患CKD的风险；和

e.如果所述镁的量低于第一预定值或高于第二预定参考值，则为所述动物提供治疗方案。

8.根据权利要求7所述的方法，所述方法进一步包括以下步骤：测定所述动物的血液样品中FGF23的量；将所述FGF23的量与第三预定参考值进行比较；并且其中所述预定参考值基于对照群体中血液中的平均FGF23水平，并且其中与所述第二预定参考值相比更高的FGF23水平指示更高的有效治疗可能性。

9.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述治疗方案包括选自由以下所组成的组中的至少一种治疗方案：给予包含有效量的镁或其盐的组合物、减少磷酸盐的摄入、减少蛋白质的摄入、给予多不饱和的脂肪酸、给予磷酸盐结合剂疗法、给予钾、减少饮食中钠的摄入，以及它们的组合。

10.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述治疗方案包括选自由以下所组成的组中的至少一种治疗方案：饮食疗法、血液透析、肾脏替代疗法、戒断损害肾脏的化合物、肾脏移植、延缓或避免损害肾脏程序、改变利尿的给药，及它们的组合。

11.根据前述权利要求中任一项所述的方法，所述方法还包括：

a.测定血液样品中至少一种选自由磷酸盐、肌酐、血尿素氮(BUN)和甲状旁腺激素(PTH)所组成的组中的其他生物标志物的量，和

b.将至少一种其他生物标志物的量与第四预定参考值进行比较，

其中所述磷酸盐、肌酐、血尿素氮(BUN)和/或甲状旁腺激素(PTH)的量高于第四预定参考值预示有效治疗的可能性更高。

12.根据前述权利要求中任一项所述的方法，所述方法进一步包括将所述动物保持在组合物上足够的时间段以减少所述动物中FGF23的量。

13.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述血液样品中的镁的量小于对照群体中血液中的镁的平均量的约50％。

14.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述血液样品中的FGF23或所述其他生物标志物的量至少为对照群体的血液中的FGF23或所述其他生物标志物的平均量的约150％。

15.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其特征在于，所述方法还包括测定动物的血压，将所述血压与第五预定参考值进行比较，以及如果所述血压高于第五预定参考值，则实施高血压的预防或治疗方案。

16.根据权利要求15所述的方法，其中，所述血压是收缩压或舒张压。

17.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述镁处于镁配位络合物中。

18.根据权利要求9所述的方法，其中所述治疗方案是给予包含有效量的镁或其盐的组合物。

19.权利要求18的方法，其中所述镁的量的范围为约50mg/1000Kcal至约500mg/1000Kcal。

20.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中每天至少一次向所述动物提供所述包含镁的组合物。

21.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述镁的量通过质谱、荧光或发光来测定。

22.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述FGF23的量通过酶联免疫吸附测定法(ELISA)测定。

23.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述动物是伴侣动物，例如狗或猫。

24.一种宠物食品组合物，所述组合物包含有效量的镁或其盐，用于在有需要的动物中治疗或延缓慢性肾脏疾病(CKD)的进展。

25.根据权利要求24所述的宠物食品组合物，其中，所述镁处于镁配位络合物中。

26.根据权利要求24所述的宠物食品组合物，其中所述镁的量在约50mg/1000Kcal与约500mg/1000Kcal之间。

27.根据权利要求2所述的宠物食品组合物，其中所述镁的量为每日份量或单位剂量约50mg至约100mg。

28.根据权利要求22所述的宠物食品组合物，其中，所述镁的量不超过所述宠物食品组合物的重量的约0.25％重量。

29.镁在有需要的动物中用于治疗或延缓慢性肾脏疾病(CKD)的用途，其中与预定参考值相比，该动物患有镁缺乏症，并且其中所述预定参考值基于对照群体的血液中的平均镁水平。

30.血液中镁水平作为生物标志物预测和/或量化动物慢性肾脏疾病的用途，其中与预定参考值相比的镁水平为需要饮食干预以治疗有需要的动物中的慢性肾脏疾病提供了基础。

31.一种在动物中诊断慢性肾脏疾病(CKD)的方法，所述方法包括：

a.测定动物血液样本中的镁的量；

b.将所述镁的量与预定参考值进行比较；其中所述预定参考值基于对照群体的血液中的平均镁水平；和

其中低于第一预定值或高于第二预定参考值的镁的量指示CKD的存在或可能性。

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