CN110665065B - 一种负载去铁胺的人工骨膜及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种负载DFO的人工骨膜及其制备方法，属于骨科植入材料领域，它是由可降解的高分子为主要原材料，并加入具有成骨功能的DFO分子，通过静电纺丝的方法制备DFO‑高分子材料共混人工骨膜，通过纤维共混、表面吸附，和(或)负载加入聚合物微球后再与可降解的高分子材料溶液混合，之后可选择利用化学键将带有氨基的DFO键合到DFO‑高分子材料共混人工骨膜表面，达到缓慢持久释放的效果。本发明具有良好的成骨活性，在缺损局部形成屏障，能够有效的防止病原生物的侵入以及异位骨化的发生，并且本发明人工骨膜具有较好的生物相容性、力学强度及降解性，可作为骨组织缺损的移植修复材料使用。

Description

一种负载去铁胺的人工骨膜及其制备方法

技术领域

本发明属于生物医学材料技术领域，具体一种负载去铁胺(DFO)的人工骨膜及其制备方法。

背景技术

骨缺损是骨科临床的常见疾病，可由创伤、感染及肿瘤等多种因素引起，是骨科治疗的难题之一。目前，临床常用的治疗方法是骨移植，即利用骨支架填充骨缺损，并诱导骨再生。但骨支架植入后，其修复过程基本是一种被动的连接和填充过程，缺少对缺损环境的主动感知。部分支架虽辅以外源性细胞因子，能够起到一定的促进血管新生及骨再生的作用，但仍旧难以模拟体内骨重建过程，因而没有获得令人满意的治疗效果(T.Garg,A.K.Goyal,Biomaterial-based scaffolds--current status and future directions,Expert Opin Drug Deliv,11(2014)767-789)。骨膜是骨骼的重要组成部分，具有强大的成骨潜能及隔离功能。已有研究报道，骨膜移植能够成功修复不同大小，特别是大段骨组织缺损。如：文献J.Xue,Y.Niu,M.Gong,R.Shi,D.Chen,L.Zhang,Y.Lvov,Electrospunmicrofiber membranes embedded with drug-loaded clay nanotubes for sustainedantimicrobial protection,ACS Nano,9(2015)1600-1612.和K.Doi,K.Sakai,Vascularized periosteal bone graft from the supracondylar region of thefemur,Microsurg,15(1994)305-315.以及J.F.Funk,G.Matziolis,D.Krocker,C.Perka,Promotion of bone healing through clinical application of autologousperiosteum derived stem cells in a case of atrophic non-union,Z OrthopUnfall,145(2007)790-794.中的报道。与单纯骨支架移植相比，骨膜的移植能够在缺损部位富集更多的骨修复细胞，能够诱导形成天然的骨结构和合适的血管网络，从而引导骨组织再生。同时，骨膜可在缺损局部形成屏障结构，减少感染和异位骨化的发生，为损伤的修复提供良好的局部微环境。自体骨膜供体少且存在供区坏死等问题，异体骨膜易发生免疫排斥并且具有潜在的疾病传播风险(X.Zhang,H.A.Awad,R.J.O'Keefe,R.E.Guldberg,E.M.Schwarz,Aperspective:engineering periosteum for structural bone graft healing,ClinOrthopRelat Res,466(2008)1777-1787.)。因而，有必要在体外制备能够模拟天然骨膜的结构与功能的人工骨膜，并且具有良好的发展前景。

静电纺丝(简称电纺)技术可以生产出纳米级直径的聚合物纤维。电纺纳米纤维具有独特的微观结构和力学性能，可模拟细胞外基质的结构和生物学功能，具有大的比表面积和孔隙率，十分适合用于生物膜材料的制备J.Xue,J.Xie,W.Liu,Y.Xia,ElectrospunNanofibers:New Concepts,Materials,and Applications,AccChem Res,50(2017)1976-1987。去铁胺(Defetoxamine,DFO)是一种美国食品和药品管理局认证的药物，已被应用于治疗神经退行性疾病、铁粒幼细胞白血病和再生障碍性贫血等引起的铁血黄素沉着症。在前期研究中，研究者们发现DFO具有一定的成血管及成骨活性。但是，目前研究中负载DFO的材料只局限在将DFO分子吸附或利用化学键连接在支架材料表面，DFO释放量有限，且存在突释问题，很难保证骨组织修复后期的需求(邓廉夫，陈皓，齐进，崔文国.一种外用敷料及其制备方法和应用.2016-10-12)。

目前，还尚未有“人工骨膜”产品用于临床，现有研究中的人工骨膜有：①使用纳米钙磷盐与胶原纤维经压制、冷冻干燥等过程制备的矿化胶原人工骨膜(陶春生，仇志烨，宋天喜，张自强，崔福斋.一种矿化胶原人工骨膜及其制备方法.2014-10-15.)；②经电喷技术制备的负载BMP、VEGF等生物活性因子的可降解高分子多孔膜(王身国，王宏鹤，刘浩，任红文.生物可吸收人工骨膜及其制备方法.2008-02-27.)；③负载全氟碳聚合物微粒、具有增氧功能的静电纺丝膜(何丹农，王萍，朱君，王杰，朱海娥，金彩虹.具有组织增氧功能的骨膜材料及其制备方法和应用.2018-03-20.)等，尚未见具有缓释DFO功能的人工骨膜的研究及相关产品。因此，有必要制备一种能够缓慢、持续释放DFO分子的人工骨膜以改善大段骨缺损的临床治疗难题。

发明内容

为了克服上述现有技术的缺点，本发明的目的在于提供一种负载DFO的人工骨膜及其制备方法，以解决大段骨缺损的临床治疗难题。

为了达到上述目的，本发明采用以下技术方案予以实现：

本发明公开了一种负载DFO的人工骨膜，该负载DFO的人工骨膜是向溶解高分子材料的有机溶液中加入DFO，然后通过静电纺丝法制得DFO-高分子材料共混人工骨膜，再通过缩合剂将DFO键合至所述DFO-高分子材料共混人工骨膜的表面后制得；

该负载DFO的人工骨膜具有无规则排列的纳米级纤维结构。

优选地，该负载DFO的人工骨膜的平均搭桥孔径为0.5～10μm，纤维直径为50～500nm，膜厚度为50～500μm。

优选地，所述高分子材料为可降解脂肪族聚酯材料或可降解天然高分子材料。

进一步优选地，所述可降解脂肪族聚酯材料为聚乳酸、聚己内酯、聚乳酸-羟基乙酸共聚物、聚乳酸-己内酯共聚物和聚乳酸-羟基乙酸-己内酯共聚物中的一种或几种；

所述可降解天然高分子材料为Ⅰ型胶原蛋白、明胶、壳聚糖、淀粉、纤维素和弹性蛋白中的一种或几种。

优选地，所述的有机溶液为六氟异丙醇、三氟乙醇、乙酸和甲酸中的一种。

优选地，高分子材料占溶解有高分子材料的有机溶液的总质量的4％～10.5％。

优选地，所述DFO占人工骨膜质量的0.5％～5％。

优选地，所述缩合剂为羰基二咪唑。

本发明还公开了上述的负载DFO的人工骨膜的制备方法，包括以下步骤：

1)将高分子材料溶解于有机溶剂中，充分搅拌均匀直至高分子材料完全溶解，得到均匀溶液；

2)向步骤1)制得的均匀溶液中加入DFO和/或负载DFO的聚合物微球，充分搅拌均匀，制得静电纺丝溶液；

3)以步骤2)制得的静电纺丝溶液进行静电纺丝，制得混有DFO的静电纺丝纤维膜；

4)将混有DFO的静电纺丝纤维膜通风放置2～7天后，得到DFO-高分子材料共混人工骨膜；

5)利用缩合剂将DFO分子键合到步骤4)中所得DFO-高分子材料共混人工骨膜的表面，通风橱中放置2～7天，再用交联剂处理0.5～24h，通风放置干燥后，经灭菌处理，制得负载DFO的人工骨膜。

优选地，步骤3)中，静电纺丝处理具体操作如下：

以不锈钢滚筒为接收装置，滚筒转动速率为300～1000rpm，纺丝液流动速率为0.5～10mL/h，电压为7～30kV，接收距离8～30cm，纺丝时间0.5～30h，得到厚度为50～500μm的混有DFO的静电纺丝纤维膜。

与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：

本发明公开的负载DFO的人工骨膜的制备方法，使用可降解高分子化合物为基体材料，经交联后，既具有优异的生物相容性，又具有良好的力学性能；添加DFO分子增加了人工骨膜对细胞的募集与促进干细胞或前体细胞的成骨分化功能。同时，在采用上述原材料的基础上通过静电纺丝法制备的电纺纳米纤维膜作为人工骨膜，具有如下特点：第一，能够最大程度模拟细胞外基质结构，更加利于细胞的迁移、粘附与生长；第二，大的比表面积使人工骨膜易于进行表面改性，以及能够负载更多的DFO；第三，高孔隙率利于细胞的粘附、代谢与信号交流，相互连通的纳米孔同时阻止细菌及成纤维细胞的长入，减少感染及异位骨化的发生。

本发明利用高分子化合物与DFO的特性和静电纺丝技术制备具有成骨功能的纳米纤维膜，有作为人工骨膜的潜在价值，其具体优势如下：

1、大比表面积——有利于细胞粘附；

2、高孔隙率——有利于营养交换、细胞代谢与信号交流；

3、小于组织细胞尺寸的孔——防止感染与异位骨化；

4、可降解性——植入后无需二次手术取出；

5、良好的生物相容性——不易发生免疫排斥；

6、药物缓释——延长药物作用时间。

附图说明

图1为本发明人工骨膜的结构示意图；

图2为本发明实施例1制得的人工骨膜实物照片；

图3为本发明实施例1制得的人工骨膜的扫描电镜图像；

图4为实施例1制得的人工骨膜的体外降解性能；

图5为实施例1制得的人工骨膜的DFO释放曲线图；

图6为实施例1制得的人工骨膜中DFO浓度与细胞毒性的关系；

图7显示根据实施例1制得的人工骨膜对细胞中成骨标志物之一碱性磷酸酶(ALP)活性的影响；

图8显示实施例1制得的人工骨膜对细胞中其它成骨标志物的表达的影响；

图9显示根据实施例1制得的人工骨膜对细胞终末期向成骨分化标志物钙结节形成的影响。

具体实施方式

为了使本技术领域的人员更好地理解本发明方案，下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分的实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都应当属于本发明保护的范围。

此外，术语“包括”和“具有”以及他们的任何变形，意图在于覆盖不排他的包含，例如，包含了一系列步骤或单元的过程、方法、系统、产品或设备不必限于清楚地列出的那些步骤或单元，而是可包括没有清楚地列出的或对于这些过程、方法、产品或设备固有的其它步骤或单元。

下面结合附图对本发明做进一步详细描述：

参见图1，为本发明公开的负载DFO的人工骨膜的结构示意图，由可降解的高分子为主要原材料，并加入具有成骨功能的DFO分子，通过静电纺丝的方法制备DFO-高分子材料共混人工骨膜，通过纤维共混、表面吸附，和(或)加入聚合物微球后再与可降解的高分子材料溶液混合，之后可选择利用化学键将带有氨基的DFO键合到DFO-高分子材料共混人工骨膜表面，达到缓慢持久释放的效果。

一、具体实施例

实施例1制备DFO-胶原共混人工骨膜

步骤1，将1.6g医用级I型胶原蛋白粉末溶于20mL六氟异丙醇中，37℃磁力搅拌48h使其充分溶解得到均匀胶原蛋白溶液；

步骤2，向步骤1所得胶原蛋白溶液中加入DFO，加入量为溶液总质量的1％，37℃磁力搅拌均匀，得到静电纺丝溶液；

步骤3，将步骤2中所得溶液进行静电纺丝，以不锈钢滚筒为接收装置，滚筒转动速率为600rpm，纺丝液流动速率为1.0mL/h，电压22kV，接收距离150mm，纺丝时间20h，得到厚度约为450μm的静电纺丝纤维膜；

步骤4，将步骤3中所得DFO-胶原共混纤维膜在通风橱中室温放置2天，制得具有一定力学强度的DFO-胶原共混人工骨膜；

步骤5，利用羰基二咪唑将DFO分子键合到步骤4中所得人工骨膜表面，后在通风橱中室温放置2天；

步骤6，用25％戊二醛在4℃交联12h，通风放置干燥后，经75％乙醇及紫外照射灭菌，即得DFO-胶原人工骨膜。

参见图2，为实施例1制得的人工骨膜的实物照片，其厚度为450±20μm；将大块的人工骨膜切割成小块，用于后续试验和表征。图3显示了实施例1制得的人工骨膜的扫描电镜图像，从图中可以看到，纤维直径较为统一，为500nm，并随机链接成网状结构。DFO能够很好的溶于纳米纤维内，没有明显的杂质及液滴出现。该人工骨膜的牵张拉力强度在4～15MPa，其力学性能可满足手术操作及植入后的支撑作用。

实施例2

步骤1，将1.6g明胶粉末溶于20mL乙酸中，37℃磁力搅拌48h使其充分溶解得到均匀明胶溶液；

步骤2，向步骤1所得明胶溶液中加入DFO，加入量为溶液总质量的0.6％，37℃磁力搅拌均匀，得到静电纺丝溶液；

步骤3，将步骤2中所得溶液进行静电纺丝，以不锈钢滚筒为接收装置，滚筒转动速率为500rpm，纺丝液流动速率为3.0mL/h，电压15kV，接收距离200mm，纺丝时间8h，得到厚度约为200μm的静电纺丝纤维膜；

步骤4，将步骤3中所得DFO-明胶共混的静电纺丝纤维膜在通风橱中室温放置3天，用羰基二咪唑将DFO键合到其表面；

步骤5，将步骤4中所得纤维膜经25％戊二醛在4℃交联10h，制得具有一定力学强度的DFO-明胶人工骨膜。

实施例3

步骤1，将1.6g壳聚糖粉末溶于20mL三氟乙醇中，37℃磁力搅拌48h使其充分溶解得到均匀壳聚糖溶液；

步骤2，向步骤1所得壳聚糖溶液中加入DFO，加入量为溶液总质量的0.8％，37℃磁力搅拌均匀，得到静电纺丝溶液；

步骤3，将步骤2中所得溶液进行静电纺丝，以不锈钢滚筒为接收装置，滚筒转动速率为300rpm，纺丝液流动速率为10mL/h，电压7kV，接收距离80mm，纺丝时间6h，得到厚度约为300μm的静电纺丝纤维膜；

步骤4，将步骤3中所得DFO-壳聚糖共混的静电纺丝纤维膜在通风橱中室温放置4天，用羰基二咪唑将DFO键合到其表面；

步骤5，将步骤4中所得纤维膜经25％戊二醛在4℃交联20h，制得具有一定力学强度的DFO-壳聚糖人工骨膜。

实施例4

步骤1，将1.6g淀粉粉末和1.6g纤维素溶于20mL甲酸中，37℃磁力搅拌48h使其充分溶解得到均匀淀粉-纤维素溶液；

步骤2，向步骤1所得淀粉-纤维素溶液中加入DFO，加入量为溶液总质量的1％，37℃磁力搅拌均匀，得到静电纺丝溶液；

步骤3，将步骤2中所得溶液进行静电纺丝，以不锈钢滚筒为接收装置，滚筒转动速率为1000rpm，纺丝液流动速率为8mL/h，电压25kV，接收距离250mm，纺丝时间27h，得到厚度约为500μm的静电纺丝纤维膜；

步骤4，将步骤3中所得DFO-淀粉-纤维素共混的静电纺丝纤维膜在通风橱中室温放置7天，用羰基二咪唑将DFO键合到其表面；

步骤5，将步骤4中所得电纺纤维膜经25％戊二醛在4℃交联24h，制得具有一定力学强度的DFO-淀粉-纤维素人工骨膜。

实施例5

步骤1，将1.6g聚乳酸溶于20mL乙酸中，37℃磁力搅拌48h使其充分溶解得到均匀聚乳酸溶液；

步骤2，向步骤1所得聚乳酸溶液中加入DFO，加入量为溶液总质量的5％，37℃磁力搅拌均匀，得到静电纺丝溶液；

步骤3，将步骤2中所得溶液进行静电纺丝，以不锈钢滚筒为接收装置，滚筒转动速率为1000rpm，纺丝液流动速率为10mL/h，电压30kV，接收距离300mm，纺丝时间30h，得到厚度约为300μm的静电纺丝纤维膜；

步骤4，将步骤3中所得DFO-聚乳酸共混的静电纺丝纤维膜在通风橱中室温放置5天，用羰基二咪唑将DFO键合到其表面。

步骤5，将步骤4中所得电纺纤维膜经25％戊二醛在4℃交联12h，制得具有一定力学强度的DFO-聚乳酸人工骨膜。

二、本发明制得的负载DFO的人工骨膜的性能检测

1、人工骨膜的体外降解性能检测

按照0.1cm^-1面积/体积比将人工骨膜置于1×PBS(pH7.4，37℃)中，并在预设时间点收取样本。每组三份样品在40℃环境中烘干并称重，随后放置在37℃保温箱内保存。每次测量前，将样本从保温箱取出并再次烘干(40℃)。基于重量损失情况的降解指数(Di)通过以下公式计算获得：

在该公式中，W₀代表支架原始重量，W_t代表不同浸泡时间点(t)的人工骨膜重量。每组每次降解实验选用至少3个样本并重复3次，取平均值绘制图表。人工骨膜降解速率及其变化状况如图4所示。在体外，人工骨膜置于PBS中20天后，其干重约为初始重量的60％(即在体外约有40％的材料被降解)；30天后，其干重约为初始重量的30％(即在体外约有70％的材料被降解)；40天后，其干重不足初始重量的10％(即在体外90％以上的材料被降解)。

2、人工骨膜中DFO释放性能表征

将10mm×10mm大小的人工骨膜(含DFO 1.0wt％)完全浸泡于10mL 1×PBS中(pH7.4，室温)并持续搅拌5天以确保人工骨膜所载药物的最大限度释放。吸取少许溶液并加入FeCl₃以便与溶液中的DFO结合。应用紫外可见分光光度计，在485nm波长处检测OD值并与DFO标准曲线对比得出溶液中DFO含量。与理论载药量进行对比，得出载药效率。用上述相同方法预处理人工骨膜并在预设时间点吸取少量的溶液，测量并换算得出不同时间点的DFO释放量，每次药物释放实验取至少3个样本并重复3次，取平均值绘制药物缓释曲线。实验结果见图5。

从图5的释放曲线可以看到，本发明制得的人工骨膜中的DFO能够在7周内近似实现100％的释放，由此满足骨缺损修复过程所需的释放性能要求。

3、人工骨膜中DFO的含量与生物毒性的关系

将不同DFO含量的人工骨膜分别切成10mm×10mm大小并置于24孔培养板底，按照5×10⁴/孔的密度接种人MSC细胞(hMSC)，于37℃，5％CO₂培养箱中培养，隔天更换培养液。分别于第1、2、3天随机取出24孔板，去除原有培养液并加入含有CCK-8(cell counting kit,Dojindo Kagaku,Japan)的培养液，于37℃，5％CO₂培养箱中培养2h后，立即检测其在450nm波长处的吸光值。每次至少3个样本，实验重复3次。

结果如图6所示，从图6的结果中可以看到，当人工骨膜中DFO含量在0.5％～5.0wt％之间时，与空白对照组相比，药物没有明显细胞毒性。而当DFO浓度继续增加，细胞增殖即受到明显抑制，提示出现药物细胞毒性。因此，选用1.0wt％的人工骨膜，细胞毒性小，且能够有效诱导hMSC向成骨方向分化。

4、人工骨膜对细胞成骨分化的影响

使用以上实施例1所制备的不同组别工骨膜与hMSC进行共培养，检测了人工骨膜对细胞成骨分化能力的影响。

具体地，将DFO含量为0.6wt％、0.8wt％、1.0wt％的人工骨膜切成15mm×15mm大小的方块预置于六孔板底，按照2×10⁵细胞密度接种hMSC，放置于37℃、5％CO₂培养箱中培养，隔天更换培养液。于细胞生长的第7、14、21天终止培养，分别检测细胞中细胞碱性磷酸酶(ALP)活性、成骨分化蛋白(OCN、OPN、ColI)表达以及钙沉积情况。每次每组至少3个样本，实验重复3次。

实验结果如下：

1)人工骨膜对hMSC细胞中ALP活性的影响

在相应的时间点收集各组细胞全细胞蛋白，使用ALP活性检测试剂盒(南京建成)检测ALP活性，使用BCA法对蛋白进行定量。吸光值OD使用全波长酶标仪进行检测，结果使用SPSS17.0软件进行统计。P＜0.05定义为具有统计学差异。

检测结果如图7所示，共培养7天和14天后，与人工骨膜共培养的hMSC细胞中ALP活性显著增加，且对骨膜中DFO具有剂量依赖性。

2)人工骨膜对hMSC细胞中OCN、OPN、ColI蛋白的影响

分别在共培养7、14、21天后，终止培养，弃去培养液，使用PBS洗3次，细胞经4％多聚甲醛固定15min后使用含有0.02％Triton X-100的PBS破膜，于室温孵育相应荧光抗体2小时，DAPI复染细胞核后在荧光显微镜下检测相应蛋白荧光强度，拍照保存照片。使用ImageJ软件进行荧光强度分析，结果使用SPSS17.0软件进行统计。P＜0.05定义为具有统计学差异。

OCN、OPN、ColI蛋白表达如图8所示。OCN、OPN、ColI蛋白高表达是成骨的必要条件。从图8中可以看出，随着人工骨膜中DFO含量的增加，hMSC中OCN、OPN、ColI的表达逐渐增高，促进新骨的生成。

3)人工骨膜对hMSC细胞中钙沉积的影响

分别在共培养7、14、21天后，终止培养，弃去培养液，使用PBS洗3次，细胞经4％多聚甲醛固定15min后使用茜素红S染液对细胞进行染色，使用PBS洗去多余染液后显微镜下拍照。使用ImageJ软件进行光密度分析，使用SPSS17.0软件进行统计。P＜0.05定义为具有统计学差异。

图9显示了与不同人工骨膜共培养的hMSC细胞中钙沉积情况。图中可见，hMSC细胞中钙沉积量随着DFO含量增加有增加趋势。

综上所述，本发明公开的负载DFO的人工骨膜，由可降解的高分子为主要原材料，并加入具有成骨功能的DFO分子，通过静电纺丝的方法制备DFO-高分子材料共混人工骨膜，通过纤维共混、表面吸附，和(或)负载加入聚合物微球后再与可降解的高分子材料溶液混合，之后可选择利用化学键将带有氨基的DFO键合到DFO-高分子材料共混人工骨膜表面，达到缓慢持久释放的效果。本发明的负载DFO的人工骨膜具有良好的成骨活性，在缺损局部形成屏障，能够有效的防止病原生物的侵入以及异位骨化的发生，并且本发明人工骨膜具有较好的生物相容性、力学强度及降解性。可作为骨组织缺损的移植修复材料使用。

以上内容仅为说明本发明的技术思想，不能以此限定本发明的保护范围，凡是按照本发明提出的技术思想，在技术方案基础上所做的任何改动，均落入本发明权利要求书的保护范围之内。

Claims (9)

1.一种负载DFO的人工骨膜，其特征在于，该负载DFO的人工骨膜是向含有机溶液的高分子溶液或高分子熔体中加入DFO，然后通过静电纺丝法制得DFO-高分子材料共混人工骨膜，再通过缩合剂将DFO键合至所述DFO-高分子材料共混人工骨膜的表面后制得；

该负载DFO的人工骨膜的纤维具有无规则排列或定向排列的纳米级纤维结构；

所述DFO占人工骨膜质量的0.5％～5％。

2.根据权利要求1所述的负载DFO的人工骨膜，其特征在于，该负载DFO的人工骨膜的平均搭桥孔径为0.5～10μm，纤维直径为50～500nm，膜厚度为50～500μm。

3.根据权利要求1所述的负载DFO的人工骨膜，其特征在于，所述高分子材料为可降解聚酯类合成高分子材料或可降解天然高分子材料。

4.根据权利要求3所述的负载DFO的人工骨膜，其特征在于，所述可降解聚酯类合成高分子材料为聚乳酸、聚己内酯、聚乳酸-羟基乙酸共聚物、聚乳酸-己内酯共聚物和聚乳酸-羟基乙酸-己内酯共聚物中的一种或几种；

所述可降解天然高分子材料为Ⅰ型胶原蛋白、明胶、壳聚糖、淀粉、纤维素和弹性蛋白中的一种或几种。

5.根据权利要求1所述的负载DFO的人工骨膜，其特征在于，所述的有机溶液为六氟异丙醇、三氟乙醇、乙酸和甲酸中的一种。

6.根据权利要求1所述的负载DFO的人工骨膜，其特征在于，高分子材料占溶解有高分子材料的有机溶液的总质量的4％～10.5％。

7.根据权利要求1所述的负载DFO的人工骨膜，其特征在于，所述缩合剂为羰基二咪唑。

8.权利要求1～7中任意一项所述的负载DFO的人工骨膜的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

1)将高分子材料溶解于有机溶剂中，充分搅拌均匀直至高分子材料完全溶解，得到均匀溶液；

2)向步骤1)制得的均匀溶液中加入DFO和/或负载DFO的聚合物微球，充分搅拌均匀，制得静电纺丝溶液；

3)以步骤2)制得的静电纺丝溶液进行静电纺丝，制得混有DFO的静电纺丝纤维膜；

4)将混有DFO的静电纺丝纤维膜通风放置2～7天后，得到DFO-高分子材料共混人工骨膜；

5)利用缩合剂将DFO分子键合到步骤4)中所得DFO-高分子材料共混人工骨膜的表面，通风橱中放置2～7天，再用交联剂处理0.5～24h，通风放置干燥后，经灭菌处理，制得负载DFO的人工骨膜。

9.根据权利要求8所述的负载DFO的人工骨膜的制备方法，其特征在于，步骤3)中，静电纺丝处理具体操作如下：

以不锈钢滚筒为接收装置，滚筒转动速率为300～1000rpm，纺丝液流动速率为0.5～10mL/h，电压为7～30kV，接收距离8～30cm，纺丝时间0.5～30h，得到厚度为50～500μm的混有DFO的静电纺丝纤维膜。

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