CN110664842A - 一种用于细胞抗衰老的溶性因子制剂的制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开一种用于细胞抗衰老的溶性因子制剂的制备方法，包括以下步骤：取新鲜冷冻的血浆融化，升温得到融化血浆，然后经过离心机离心得到沉淀，再使用过滤器过滤得到滤液，静置得到二次沉淀；然后将沉淀进行溶解，溶解后再使用离心机离心，取上清液，将上清液使用SD法病毒灭活后，进行纯化，再进行除菌、分装、冻干，冻干结束后，作干热处理，即得。本发明得到的溶性因子制剂具有良好的活性回收率、试验有效率，同时，每吨血浆制得的因子制剂的含量较高，生产效率高；同时，本发明采用新鲜冷冻的血浆的冷冻时间为：0.5‑1.5年，冷冻时间合适，避免了因为冷冻时间较短或者较长导致血浆的质量受到影响，保证了细胞因子制剂的质量。

Description

一种用于细胞抗衰老的溶性因子制剂的制备方法
技术领域
本发明涉及抗衰老的因子制剂的制备领域，具体的是一种用于细胞抗衰老的溶性因子制剂的制备方法。
背景技术
细胞因子制剂，由免疫系统细胞以及其他类型细胞主动分泌的一类小分子量的可溶性蛋白质。包括淋巴因子干扰素、白介素、肿瘤坏死因子、趋势化因子和集落刺激因子等。是免疫系统细胞间，以及免疫统细胞与其他类型细胞间联络的核心，能改变分泌细胞自身或其他细胞的行为或性质，通过与细胞异的膜受体而起作用。
细胞因子制剂由于种类的不同，可以具有抗衰老作用：促进皮肤细胞再生，延缓皮肤老化，可以促进真皮层成纤维细胞的生长与分化，增加皮肤的修复能力，加速伤口愈合。另一方面，能加速皮肤新陈代谢的速率，促使表皮老化细胞更新脱落，并且使皮肤弹性明显提高，减少皱纹的产生，改善皮肤肤质。
在现有技术中，细胞因子制剂的活性回收率较低、定量血浆制得的因子制剂量较少，生产效率低。同时，原料血浆由于冷冻时间过长，也会导致抗衰老效率降低，影响医疗效果。
发明内容
为解决上述背景技术中提到的不足，本发明的目的在于提供一种用于细胞抗衰老的溶性因子制剂的制备方法，本发明得到的溶性因子制剂具有良好的活性回收率、试验有效率，同时，每吨血浆制得的因子制剂的含量较高，生产效率高；
同时，本发明采用新鲜冷冻的血浆的冷冻时间为：0.5-1.5年，冷冻时间合适，避免了因为冷冻时间较短或者较长导致血浆的质量受到影响，保证了细胞因子制剂的质量。
本发明的目的可以通过以下技术方案实现：
一种用于细胞抗衰老的溶性因子制剂的制备方法，所述因子制剂的制备方法包括以下步骤：
一、取新鲜冷冻的血浆，自然静置1-2小时，融化得到0℃的融化血浆；
二、取15-20℃的恒温温水，将步骤一得到的融化血浆进行升温，得到10℃的融化血浆；
三、将步骤二得到的融化血浆使用离心机离心10-15分钟，得到沉淀；
四、将步骤三得到的沉淀过滤2-3次，使用过滤器过滤得到滤液和杂质，取滤液，静置得到二次沉淀；
五、将上述得到的沉淀进行溶解，溶解后再使用离心机离心15-20分钟，用氢氧化铝吸附后，取上清液；
六、将上清液使用SD法病毒灭活后，进行纯化；
七、再进行除菌、分装、冻干，冻干结束后，作2-4天的80-90℃干热处理，即得，然后用于检测。
进一步地，所述步骤一中的血浆冷冻时间为1.5-2年，冷冻温度为-25±5℃。
进一步地，所述步骤二中的升温方法为水浴法。
进一步地，所述步骤三和步骤五中的离心力分别为：20000-25000g和25000-35000g。
进一步地，所述步骤六中采用以Toyopear l DEAE 650M为凝胶为填料的离子交换层析作纯化。
进一步地，所述检测项目包括活性回收率、每吨血浆制得的因子制剂的含量以及因子制剂用于细胞抗衰老检测试验有效率。
本发明的有益效果：
1、本发明得到的溶性因子制剂具有良好的活性回收率、试验有效率，同时，每吨血浆制得的因子制剂的含量较高，生产效率高；
2、本发明采用新鲜冷冻的血浆的冷冻时间为：0.5-1.5年，冷冻时间合适，避免了因为冷冻时间较短或者较长导致血浆的质量受到影响，保证了细胞因子制剂的质量；
3、本发明制得的细胞因子制剂稳定性好、活性高、安全有效、成本低廉，具有良好的临床应用前景。
具体实施方式
下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其它实施例，都属于本发明保护的范围。
实施例1：
一种用于细胞抗衰老的溶性因子制剂的制备方法，所述因子制剂的制备方法包括以下步骤：
一、取新鲜冷冻的血浆，血浆冷冻时间为1.5-2年，冷冻温度为-25±5℃，自然静置1-2小时，融化得到0℃的融化血浆；
二、取15-20℃的恒温温水，采用水浴法将步骤一得到的融化血浆进行升温，得到10℃的融化血浆；
三、将步骤二得到的融化血浆使用离心机离心10-15分钟，离心力为20000-25000g，得到沉淀；
四、将步骤三得到的沉淀过滤2-3次，使用过滤器过滤得到滤液和杂质，取滤液，静置得到二次沉淀；
五、将上述得到的沉淀进行溶解，溶解后再使用离心机离心15-20分钟，离心力为25000-35000g，用氢氧化铝吸附后，取上清液；
六、将上清液使用SD法病毒灭活后，采用以Toyopear l DEAE 650M为凝胶为填料的离子交换层析作纯化；
七、再进行除菌、分装、冻干，冻干结束后，作2-4天的80-90℃干热处理，即得，然后用于检测。
实施例2：
一种用于细胞抗衰老的溶性因子制剂的制备方法，所述因子制剂的制备方法包括以下步骤：
一、取新鲜冷冻的血浆，血浆冷冻时间为1-1.5年，冷冻温度为-25±5℃，自然静置1-2小时，融化得到0℃的融化血浆；
二、取15-20℃的恒温温水，采用水浴法将步骤一得到的融化血浆进行升温，得到10℃的融化血浆；
三、将步骤二得到的融化血浆使用离心机离心10-15分钟，离心力为20000-25000g，得到沉淀；
四、将步骤三得到的沉淀过滤2-3次，使用过滤器过滤得到滤液和杂质，取滤液，静置得到二次沉淀；
五、将上述得到的沉淀进行溶解，溶解后再使用离心机离心15-20分钟，离心力为25000-35000g，用氢氧化铝吸附后，取上清液；
六、将上清液使用SD法病毒灭活后，采用以Toyopear l DEAE 650M为凝胶为填料的离子交换层析作纯化；
七、再进行除菌、分装、冻干，冻干结束后，作2-4天的80-90℃干热处理，即得，然后用于检测。
实施例3：
一种用于细胞抗衰老的溶性因子制剂的制备方法，所述因子制剂的制备方法包括以下步骤：
一、取新鲜冷冻的血浆，血浆冷冻时间为0.5-1年，冷冻温度为-25±5℃，自然静置1-2小时，融化得到0℃的融化血浆；
二、取15-20℃的恒温温水，采用水浴法将步骤一得到的融化血浆进行升温，得到10℃的融化血浆；
三、将步骤二得到的融化血浆使用离心机离心10-15分钟，离心力为20000-25000g，得到沉淀；
四、将步骤三得到的沉淀过滤2-3次，使用过滤器过滤得到滤液和杂质，取滤液，静置得到二次沉淀；
五、将上述得到的沉淀进行溶解，溶解后再使用离心机离心15-20分钟，离心力为25000-35000g，用氢氧化铝吸附后，取上清液；
六、将上清液使用SD法病毒灭活后，采用以Toyopear l DEAE 650M为凝胶为填料的离子交换层析作纯化；
七、再进行除菌、分装、冻干，冻干结束后，作2-4天的80-90℃干热处理，即得，然后用于检测。
实施例4：
一种用于细胞抗衰老的溶性因子制剂的制备方法，所述因子制剂的制备方法包括以下步骤：
一、取新鲜冷冻的血浆，血浆冷冻时间为0.5-1.5年，冷冻温度为-25±5℃，自然静置1-2小时，融化得到0℃的融化血浆；
二、取15-20℃的恒温温水，采用水浴法将步骤一得到的融化血浆进行升温，得到10℃的融化血浆；
三、将步骤二得到的融化血浆使用离心机离心10-15分钟，离心力为20000-25000g，得到沉淀；
四、将步骤三得到的沉淀过滤2-3次，使用过滤器过滤得到滤液和杂质，取滤液，静置得到二次沉淀；
五、将上述得到的沉淀进行溶解，溶解后再使用离心机离心15-20分钟，离心力为25000-35000g，用氢氧化铝吸附后，取上清液；
六、将上清液使用SD法病毒灭活后，采用以Toyopear l DEAE 650M为凝胶为填料的离子交换层析作纯化；
七、再进行除菌、分装、冻干，冻干结束后，作2-4天的80-90℃干热处理，即得，然后用于检测。
将实施例1-4中得到的因子制剂用于检测，检测项目包括活性回收率，再计算得到每吨血浆制得的因子制剂的含量。然后取等量的因子制剂用于细胞抗衰老检测试验，得到试验结果，如下表所示：
检测项目 实施例1 实施例2 实施例3 实施例4
活性回收率 72.1％ 95.6％ 92.3％ 89.5％
试验有效率 88.14％ 95.14％ 98.14％ 94.14％
因子制剂的含量(IU) 125486 175450 165354 185473
由上表可见：实施例1相较于实施例2-4得到的因子制剂，从活性回收率、试验有效率以及因子制剂的含量三个方面来看，均相对较低；且实施例2-4得到的因子制剂表现在上述三个方面时，彼此之间相差不大。
实施例1-4中制备方法的区别在于血浆冷冻时间，其中实施例1中血浆的冷冻时间为：1.5-2年、实施例2中血浆的冷冻时间为：1-1.5年、实施例3中血浆的冷冻时间为：0.5-1年、实施例4中血浆的冷冻时间为：0.5-1.5年，由此可见血浆的冷冻时间不宜超过1.5年，以0.5-1.5年之前为宜。
在本说明书的描述中，参考术语“一个实施例”、“示例”、“具体示例”等的描述意指结合该实施例或示例描述的具体特征、结构、材料或者特点包含于本发明的至少一个实施例或示例中。在本说明书中，对上述术语的示意性表述不一定指的是相同的实施例或示例。而且，描述的具体特征、结构、材料或者特点可以在任何的一个或多个实施例或示例中以合适的方式结合。
以上显示和描述了本发明的基本原理、主要特征和本发明的优点。本行业的技术人员应该了解，本发明不受上述实施例的限制，上述实施例和说明书中描述的只是说明本发明的原理，在不脱离本发明精神和范围的前提下，本发明还会有各种变化和改进，这些变化和改进都落入要求保护的本发明范围内。

Claims (6)

1.一种用于细胞抗衰老的溶性因子制剂的制备方法，其特征在于，所述因子制剂的制备方法包括以下步骤：
一、取新鲜冷冻的血浆，自然静置1-2小时，融化得到0℃的融化血浆；
二、取15-20℃的恒温温水，将步骤一得到的融化血浆进行升温，得到10℃的融化血浆；
三、将步骤二得到的融化血浆使用离心机离心10-15分钟，得到沉淀；
四、将步骤三得到的沉淀过滤2-3次，使用过滤器过滤得到滤液和杂质，取滤液，静置得到二次沉淀；
五、将上述得到的沉淀进行溶解，溶解后再使用离心机离心15-20分钟，用氢氧化铝吸附后，取上清液；
六、将上清液使用SD法病毒灭活后，进行纯化；
七、再进行除菌、分装、冻干，冻干结束后，作2-4天的80-90℃干热处理，即得，然后用于检测。
2.根据权利要求1所述的一种用于细胞抗衰老的溶性因子制剂的制备方法，其特征在于，所述步骤一中的血浆冷冻时间为1.5-2年，冷冻温度为-25±5℃。
3.根据权利要求1所述的一种用于细胞抗衰老的溶性因子制剂的制备方法，其特征在于，所述步骤二中的升温方法为水浴法。
4.根据权利要求1所述的一种用于细胞抗衰老的溶性因子制剂的制备方法，其特征在于，所述步骤三和步骤五中的离心力分别为：20000-25000g和25000-35000g。
5.根据权利要求1所述的一种用于细胞抗衰老的溶性因子制剂的制备方法，其特征在于，所述步骤六中采用以Toyopearl DEAE 650M为凝胶为填料的离子交换层析作纯化。
6.根据权利要求1所述的一种用于细胞抗衰老的溶性因子制剂的制备方法，其特征在于，所述检测项目包括活性回收率、每吨血浆制得的因子制剂的含量以及因子制剂用于细胞抗衰老检测试验有效率。
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Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN103848886A (zh) * 2014-03-28 2014-06-11 成都蓉生药业有限责任公司 一种冷沉淀的制备方法以及用其制备凝血因子ⅷ制剂的方法
CN104086620A (zh) * 2014-06-11 2014-10-08 成都蓉生药业有限责任公司 一种制备冷沉淀的方法及其应用
CN108976297A (zh) * 2018-08-08 2018-12-11 广东双林生物制药有限公司 一种冷沉淀的制备方法及其在人凝血因子ⅷ生产中的应用

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN103848886A (zh) * 2014-03-28 2014-06-11 成都蓉生药业有限责任公司 一种冷沉淀的制备方法以及用其制备凝血因子ⅷ制剂的方法
CN104086620A (zh) * 2014-06-11 2014-10-08 成都蓉生药业有限责任公司 一种制备冷沉淀的方法及其应用
CN108976297A (zh) * 2018-08-08 2018-12-11 广东双林生物制药有限公司 一种冷沉淀的制备方法及其在人凝血因子ⅷ生产中的应用

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
马春会 等: ""新鲜冰冻血浆的临床应用"", 《中国输血杂志》 *

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