CN110651559A - 一种组培育苗用霍山石斛蒴果的保存方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开组培育苗用霍山石斛蒴果的保存方法，涉及霍山石斛技术领域，本发明包括以下步骤：(1)采摘霍山石斛蒴果；(2)霍山石斛蒴果的预处理；(3)保存容器的处理；(4)在无菌操作台上，将步骤(2)中预处理的霍山石斛蒴果包裹干燥的透气材料，在干燥皿中放入干燥剂，然后将包裹透气材料的霍山石斛蒴果放入干燥皿中；(5)将步骤(4)中装有霍山石斛蒴果的干燥皿放入冷藏箱中保存。本发明的有益效果在于：本发明采用冷藏保存方法，可以防止种子因脱水导致过度失水影响种子的萌发率，霍山石斛蒴果的保存时间最长可达到12个月。

Description

一种组培育苗用霍山石斛蒴果的保存方法
技术领域
本发明涉及霍山石斛技术领域，具体涉及一种组培育苗用霍山石斛蒴果的保存方法。
背景技术
霍山石斛蒴果的成熟时间一般为10月至11月初，其蒴果为椭圆形，里面有几万至十万颗种子，在蒴果完全成熟时，会从尾部果蒂处裂开，种子会随风飘出。因此组培育苗的霍山石斛蒴果的最佳采收时期为其完全成熟前期。组培育苗的最佳播种时间为其采收后的1个月之内。因为霍山石斛蒴果采收后不易存储，产生脱水干裂，裂开后的蒴果消毒不彻底，不符合无菌播种的要求，不能使用。因此组培育苗的播种只能选择在采收后的1个月之内必须完成。
专利CN201310059779.X公开一种山葵种子的保藏方法，该方法包括如下步骤：果实干燥→快速除果皮→种子消毒→种子晾干→种子冷冻保存。本发明方法不仅能实现山葵种子的长期保存，而且还能使山葵种子在保存期内不易发生霉变，并保持较高的活力和萌发率。
由于霍山石斛播种的时间比较集中，霍山石斛组培育苗的周期为10-12个月；若是在11月份播种要到第二年秋天才能够出苗栽种，这就错过了春天的最佳栽培时机，而且由于播种时间集中，在继代转分苗时很集中，导致集中转接需要投入大量的熟练工才能完成任务，而转接完又大量闲置，造成用工不均衡。
发明内容
本发明所要解决的技术问题在于提供一种延长霍山石斛蒴果保存期的保存方法。
本发明通过以下技术手段实现解决上述技术问题的：
一种组培育苗用霍山石斛蒴果的保存方法，包括以下步骤：
(1)适时采摘霍山石斛蒴果；
(2)霍山石斛蒴果的预处理：去除霍山石斛蒴果的坏死组织，于干燥条件下紫外灭菌1h，灭菌过程中每10min翻转一次；
(3)保存容器的处理：对冷藏箱进行消毒和灭菌处理，对干燥皿进行消毒处理，对透气材料进行灭菌后干燥；
(4)在无菌操作台上，将步骤(2)中预处理的霍山石斛蒴果包裹干燥的透气材料，在干燥皿中放入干燥剂，然后将包裹透气材料的霍山石斛蒴果放入干燥皿中；
(5)将步骤(4)中装有霍山石斛蒴果的干燥皿放入冷藏箱中，保存温度为0-6℃。
有益效果：本发明采用冷藏保存方法，可以防止种子因脱水导致过度失水影响种子的萌发率，萌发后的种苗粗壮，变异率低；
本发明为带果荚保存，可以有效保护种子，使种子的萌发率不受影响，霍山石斛蒴果的保存时间最长可达到12个月；本发明不破坏霍山石斛蒴果的结构，最大程度保证种子的水分，减少后续播种的缓冲期，减少蒴果果皮的带菌几率，减少因果皮腐烂而影响种子的储存时间；
本发明保存过程中采用的材料、器材容易获得，成本低；
本发明中霍山石斛蒴果采用紫外消毒，不需要通过含有水分的酒精、升汞消毒，可以防止霍山石斛蒴果因反复接触水和干燥导致蒴果裂开，影响后期的播种处理；
霍山石斛蒴果的预处理步骤的目的是清除霍山石斛蒴果表面的杂菌，防止在储存过程中杂菌感染，影响蒴果的储存效果；
通过本发明的保存方法，不受种子采收季节的限制，可以随时取出进行消毒后即可播种。
优选的，在霍山石斛蒴果成熟裂开前采收。
优选的，采收时间为10月底至11月初。
优选的，在晴朗天气进行采收。
有益效果：霍山石斛蒴果在11月中旬会完全成熟，蒴果也会随着温度降低空气干燥而裂开；因此需要在蒴果完全成熟裂开之前选择晴朗的天气采收，可以避免果荚沾水。
优选的，所述冷藏箱进行消毒和灭菌的步骤包括：用酒精擦拭冷藏箱进行消毒，然后打开箱门晾干，关闭箱门用紫外进行灭菌30min，密封备用。
优选的，所述干燥皿的消毒步骤包括：用酒精对干燥皿进行擦拭，然后置于洁净操作台晾干。
优选的，所述透气材料为纱布。
优选的，所述纱布包裹的厚度为12-15层。
优选的，当需要进行播种时，取出种子，放入75％酒精中浸泡30min，然后捞出晾干，紫外灭菌30min，灭菌过程中每2-3min翻转一次。
优选的，保存过程中，若干燥剂颜色变色，则重复步骤(4)，并更换干燥剂。
优选的，所述干燥剂的体积为干燥皿容量的50％-60％。
本发明的优点在于：
(1)本发明采用冷藏保存方法，可以防止种子因脱水导致过度失水影响种子的萌发率，萌发后的种苗粗壮，变异率低；
(2)本发明为带果荚保存，可以有效保护种子，使种子的萌发率不受影响，霍山石斛蒴果的保存时间最长可达到12个月；本发明不破坏霍山石斛蒴果的结构，最大程度保证种子的水分，减少后续播种的缓冲期，减少蒴果果皮的含菌率，减少因果皮腐烂而影响种子的储存时间；
(3)本发明保存过程中采用的材料、器材容易获得，成本低；本发明中霍山石斛蒴果采用紫外消毒，不需要通过含有水分的酒精、升汞消毒，可以防止霍山石斛蒴果因反复接触水和干燥导致蒴果裂开，影响后期的播种处理；
(4)通过本发明的保存方法，不受种子采收季节的限制，可以随时取出进行消毒后即可播种。
具体实施方式
为使本发明实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将结合本发明实施例，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
下述实施例中所用的试验材料和试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径获得。
实施例中未注明具体技术或条件者，均可以按照本领域内的文献所描述的技术或条件或者按照产品说明书进行。
实施例1
一种组培育苗用霍山石斛蒴果的保存方法，包括以下步骤：
(1)于10月底，在霍山石斛蒴果成熟裂开前，选择晴朗天气采收霍山石斛蒴果；
(2)霍山石斛蒴果的预处理：去除霍山石斛蒴果的坏死组织，于干燥条件下紫外灭菌1h，灭菌过程中每10min翻转一次；
(3)保存容器的处理：
a.用75％酒精擦拭冷藏箱进行消毒，然后打开箱门晾干，关闭箱门用紫外进行灭菌30min，密封备用；
b.用75％酒精对干燥皿进行擦拭，然后置于洁净操作台晾干；
c.将纱布置于121℃灭菌20min后，然后对纱布进行烘干，烘干温度为80℃，烘干时间为2h；
(4)在无菌操作台上，将步骤(2)中预处理的霍山石斛蒴果包裹12层干燥的纱布，在干燥皿中放入硅胶，硅胶加入的体积为干燥皿容量的50％，然后将包裹纱布的霍山石斛蒴果放入干燥皿中；放置过程中，霍山石斛蒴果不接触硅胶，放置霍山石斛种子脱水过快；
(5)将步骤(4)中装有霍山石斛蒴果的干燥皿放入冷藏箱中，保存温度为2℃。
(6)观察干燥剂硅胶的颜色，若硅胶变色，则重复步骤(4)，同时更换硅胶；
(7)使用时在无菌环境下取出保存中的霍山石斛蒴果，取出种子，种子拿出后放入75％酒精中浸泡30min，然后捞出晾干，紫外灭菌30min，灭菌过程中每2min翻转一次，使种子紫外灭菌彻底；
(8)采用专利《一种促进霍山石斛种子萌发的培养基及播种方法》中公开的接种培养方法进行播种。
采用本实施例中的冷藏保存方法，可以防止种子因脱水导致过度失水影响种子的萌发率，萌发后的种苗粗壮，变异率低；
本实施例中的保存方法为带果荚保存，可以有效保护种子，使种子的萌发率不受影响，霍山石斛蒴果的保存时间最长可达到12个月；本发明不破坏霍山石斛蒴果的结构，最大程度保证种子的水分，减少后续播种的缓冲器，减少蒴果果皮的含菌率，减少因果皮腐烂而影响种子的储存时间；
本实施例中的保存过程中采用的材料、器材容易获得，成本低；
本实施例中的霍山石斛蒴果采用紫外消毒，不需要通过含有水分的酒精、升汞消毒，可以防止霍山石斛蒴果因反复接触水和干燥导致蒴果裂开，影响后期的播种处理；
纱布的作用是及时的吸收蒴果表面的水分，防止因水分过多使蒴果表皮腐烂；纱布接触干燥剂可以有效的降低干燥皿的湿度；
本实施例中的保存方法，不受种子采收季节的限制，可以随时取出进行消毒后即可播种；本实施例中保存方法适用于组培苗用。
实施例2
一种组培育苗用霍山石斛蒴果的保存方法，包括以下步骤：
(1)于11月初，在霍山石斛蒴果成熟裂开前，选择晴朗天气采收霍山石斛蒴果；
(2)霍山石斛蒴果的预处理：去除霍山石斛蒴果的坏死组织，于干燥条件下紫外灭菌1h，灭菌过程中每10min翻转一次；
(3)保存容器的处理：
a.用75％酒精擦拭冷藏箱进行消毒，然后打开箱门晾干，关闭箱门用紫外进行灭菌30min，密封备用；
b.用75％酒精对干燥皿进行擦拭，然后放洁净操作台晾干。
c.将纱布置于121℃灭菌20min后，然后对纱布进行烘干，烘干温度为80℃，烘干时间为2h；
(4)在无菌操作台上，将步骤(2)中预处理的霍山石斛蒴果包裹13层干燥的纱布，在干燥皿中放入硅胶，硅胶加入的体积为干燥皿容量的55％，然后将包裹纱布的霍山石斛蒴果放入干燥皿中；放置过程中，霍山石斛蒴果不接触硅胶，放置霍山石斛种子脱水过快；
(5)将步骤(4)中装有霍山石斛蒴果的干燥皿放入冷藏箱中，保存温度为4℃。
(6)观察干燥剂硅胶的颜色，若硅胶变色，则重复步骤(4)，同时更换硅胶；
(7)使用时在无菌环境下取出保存中的霍山石斛蒴果，取出种子，种子拿出后放入75％酒精中浸泡30min，然后捞出晾干，紫外灭菌30min，灭菌过程中每2min翻转一次，使种子紫外灭菌彻底；
(8)采用专利《一种促进霍山石斛种子萌发的培养基及播种方法》中公开的接种培养方法进行播种。
采用本实施例中的冷藏保存方法，可以防止种子因脱水导致过度失水影响种子的萌发率，萌发后的种苗粗壮，变异率低；
本实施例中的保存方法为带果荚保存，可以有效保护种子，使种子的萌发率不受影响，霍山石斛蒴果的保存时间最长可达到12个月；本发明不破坏霍山石斛蒴果的结构，最大程度保证种子的水分，减少后续播种的缓冲器，减少蒴果果皮的含菌率，减少因果皮腐烂而影响种子的储存时间；
本实施例中的保存过程中采用的材料、器材容易获得，成本低；
本实施例中的霍山石斛蒴果采用紫外消毒，不需要通过含有水分的酒精、升汞消毒，可以防止霍山石斛蒴果因反复接触水和干燥导致蒴果裂开，影响后期的播种处理；
纱布的作用是及时的吸收蒴果表面的水分，防止因水分过多使蒴果表皮腐烂；纱布接触干燥剂可以有效的降低干燥皿的湿度；
本实施例中的保存方法，不受种子采收季节的限制，可以随时取出进行消毒后即可播种。
实施例3
一种组培育苗用霍山石斛蒴果的保存方法，包括以下步骤：
(1)于11月初，在霍山石斛蒴果成熟裂开前，选择晴朗天气采收霍山石斛蒴果；
(2)霍山石斛蒴果的预处理：去除霍山石斛蒴果的坏死组织，于干燥条件下紫外灭菌1h，灭菌过程中每10min翻转一次；
(3)保存容器的处理：
a.用75％酒精擦拭冷藏箱进行消毒，然后打开箱门晾干，关闭箱门用紫外进行灭菌30min，密封备用；
b.用75％酒精对干燥皿进行擦拭，然后放洁净操作台晾干，
c.将纱布置于121℃灭菌20min后，然后对纱布进行烘干，烘干温度为80℃，烘干时间为2h；
(4)在无菌操作台上，将步骤(2)中预处理的霍山石斛蒴果包裹14层干燥的纱布，在干燥皿中放入硅胶，硅胶加入的体积为干燥皿容量的60％，然后将包裹纱布的霍山石斛蒴果放入干燥皿中；放置过程中，霍山石斛蒴果不接触硅胶，放置霍山石斛种子脱水过快；
(5)将步骤(4)中装有霍山石斛蒴果的干燥皿放入冷藏箱中，保存温度为4℃。
(6)观察干燥剂硅胶的颜色，若硅胶变色，则重复步骤(4)，同时更换硅胶；
(7)使用时在无菌环境下取出保存中的霍山石斛蒴果，取出种子，种子拿出后放入75％酒精中浸泡30min，然后捞出晾干，紫外灭菌30min，灭菌过程中每2min翻转一次，使种子紫外灭菌彻底；
(8)采用专利《一种促进霍山石斛种子萌发的培养基及播种方法》中公开的接种培养方法进行播种。
采用本实施例中的冷藏保存方法，可以防止种子因脱水导致过度失水影响种子的萌发率，萌发后的种苗粗壮，变异率低；
本实施例中的保存方法为带果荚保存，可以有效保护种子，使种子的萌发率不受影响，霍山石斛蒴果的保存时间最长可达到12个月；本发明不破坏霍山石斛蒴果的结构，最大程度保证种子的水分，减少后续播种的缓冲器，减少蒴果果皮的含菌率，减少因果皮腐烂而影响种子的储存时间；
本实施例中的保存过程中采用的材料、器材容易获得，成本低；
本实施例中的霍山石斛蒴果采用紫外消毒，不需要通过含有水分的酒精、升汞消毒，可以防止霍山石斛蒴果因反复接触水和干燥导致蒴果裂开，影响后期的播种处理；
纱布的作用是及时的吸收蒴果表面的水分，防止因水分过多使蒴果表皮腐烂；纱布接触干燥剂可以有效的降低干燥皿的湿度；
本实施例中的保存方法，不受种子采收季节的限制，可以随时取出进行消毒后即可播种。
对比例1
霍山石斛蒴果采收后，于无菌条件下将霍山石斛蒴果置于0-6℃储存。
对比例2
将霍山石斛蒴果采收后，于无菌条件下将种子从蒴果中取出，放入无菌容器中，然后冷冻储存，储存温度在-10℃以下。
实施例4
(一)萌发率和变异率测定
(1)采用实施例1、对比例1、对比例2中的保存方法，对霍山石斛种子的萌发率进行测定，每组做5个平行实验，按照种子刚采摘时的萌发率作为100％计算；
测定方法：
a、霍山石斛蒴果处理
将储存的霍山石斛蒴果放入75％的酒精中至淹没为止，浸泡30min，然后放在无菌的接种盘中在无菌操作台上晾干，备用。
b、霍山石斛种子悬浮液的制备
无菌室超净工作台面上，用手术刀在果荚的尾部切开一个小口子，用镊子夹住果柄，将切口对准瓶口，用另一只镊子轻轻敲打夹住果柄的镊子，将种子均匀的散落无菌水中；并在无菌的环境下用磁力搅拌机悬浮液搅拌均匀，并用悬浮计数法在显微镜下用计数板检测种子在悬浮液的密度，以100粒/ml的密度为宜。
c、无菌播种
在无菌操台上，用灭菌后的移液枪从种子悬浮液中抽取1ml，放入固体培养基中，盖好瓶盖缓慢晃动，直至瓶内的悬浮液均匀的平铺在培养基表面为止。放入培养框中，送至培养室培养。
d、萌发率测定
在光强2000lux，温度25℃的条件下培养30天后，种子萌发变绿变大，可以计数。抽取样本10瓶进行萌发计数，萌发率的平均数即记为本次种子的萌发率。
(2)采用实施例1、对比例1、对比例2中的保存方法，对霍山石斛蒴种子的变异率进行测定，每组做5个平行实验；
变异率的测定方法：
依照萌发率测定的步骤将种子萌发后进行转接，待种子长成有茎秆、有叶子的小苗时进行测定，根据林业行业标准《霍山石斛种苗繁育技术规程》的相关规定进行测定。平行试验10组，取平均值。
(二)萌发率和变异率测定结果
(1)萌发率测定结果如表1所示；
表1为不同保存方法下的霍山石斛种子保存时间和萌发率结果
Figure BDA0002263720080000121
从表1可以看出，采用本发明的保存方法，在不影响种子萌发率的情况下，可以延长保存时间。实施例2、实施例3的萌发率测定结果和实施例1的测定结果基本相同。
(1)变异率测定结果如表2所示；
表2为不同保存方法下的霍山石斛种子保存时间和变异率结果
Figure BDA0002263720080000122
从表2可以看出，采用对比例1中的保存方法，能够于冷藏条件下储存1-3个月，霍山石斛蒴果在常温条件下储存7-15天就会因开裂然染菌，采用实施例1中的保存方法，其在保存3-12个月后，变异率较低。
以上实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对其限制；尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，本领域的普通技术人员应当理解：其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换；而这些修改或者替换，并不使相应技术方案的本质脱离本发明各实施例技术方案的精神和范围。

Claims (10)

1.一种组培育苗用霍山石斛蒴果的保存方法，其特征在于：包括以下步骤：
(1)采摘霍山石斛蒴果；
(2)霍山石斛蒴果的预处理：去除霍山石斛蒴果的坏死组织，于干燥条件下紫外灭菌1h，灭菌过程中每10min翻转一次；
(3)保存容器的处理：对冷藏箱进行消毒和灭菌处理，对干燥皿进行消毒处理，对透气材料进行灭菌后干燥；
(4)在无菌操作台上，将步骤(2)中预处理的霍山石斛蒴果包裹干燥的透气材料，在干燥皿中放入干燥剂，然后将包裹透气材料的霍山石斛蒴果放入干燥皿中；
(5)将步骤(4)中装有霍山石斛蒴果的干燥皿放入冷藏箱中，保存温度为0-6℃。
2.根据权利要求1所述的组培育苗用霍山石斛蒴果的保存方法，其特征在于：在霍山石斛蒴果成熟裂开前采收。
3.根据权利要求2所述的组培育苗用霍山石斛蒴果的保存方法，其特征在于：采收时间为10月底至11月初。
4.根据权利要求3所述的组培育苗用霍山石斛蒴果的保存方法，其特征在于：在晴朗天气进行采收。
5.根据权利要求1所述的组培育苗用霍山石斛蒴果的保存方法，其特征在于：所述冷藏箱进行消毒和灭菌的步骤包括：用酒精擦拭冷藏箱进行消毒，然后打开箱门晾干，关闭箱门用紫外进行灭菌30min，密封备用。
6.根据权利要求1所述的组培育苗用霍山石斛蒴果的保存方法，其特征在于：所述干燥皿的消毒步骤包括：用酒精对干燥皿进行擦拭，然后烘干。
7.根据权利要求1所述的组培育苗用霍山石斛蒴果的保存方法，其特征在于：所述透气材料为纱布。
8.根据权利要求7所述的组培育苗用霍山石斛蒴果的保存方法，其特征在于：所述纱布包裹的厚度为12-15层。
9.根据权利要求1所述的组培育苗用霍山石斛蒴果的保存方法，其特征在于：当需要进行播种时，取出种子，放入75％酒精中浸泡30min，然后捞出晾干，紫外灭菌30min，灭菌过程中每2-3min翻转一次。
10.根据权利要求1所述的组培育苗用霍山石斛蒴果的保存方法，其特征在于：保存过程中，若干燥剂颜色变色，则重复步骤(4)，并更换干燥剂。
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