CN110638745A - 一种her-2人源化单克隆抗体长效缓释制剂及其制备方法 - Google Patents

一种her-2人源化单克隆抗体长效缓释制剂及其制备方法 Download PDF

Info

Publication number
CN110638745A
CN110638745A CN201910568810.XA CN201910568810A CN110638745A CN 110638745 A CN110638745 A CN 110638745A CN 201910568810 A CN201910568810 A CN 201910568810A CN 110638745 A CN110638745 A CN 110638745A
Authority
CN
China
Prior art keywords
monoclonal antibody
humanized monoclonal
block copolymer
polymer
sustained
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN201910568810.XA
Other languages
English (en)
Inventor
俞麟
陈晓斌
丁建东
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Fudan University
Zhuhai Fudan Innovation Research Institute
Original Assignee
Fudan University
Zhuhai Fudan Innovation Research Institute
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Fudan University, Zhuhai Fudan Innovation Research Institute filed Critical Fudan University
Priority to CN201910568810.XA priority Critical patent/CN110638745A/zh
Publication of CN110638745A publication Critical patent/CN110638745A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Images

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
    • A61K9/0019—Injectable compositions; Intramuscular, intravenous, arterial, subcutaneous administration; Compositions to be administered through the skin in an invasive manner
    • A61K9/0024—Solid, semi-solid or solidifying implants, which are implanted or injected in body tissue
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/335—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin
    • A61K31/337—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin having four-membered rings, e.g. taxol
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/7028—Compounds having saccharide radicals attached to non-saccharide compounds by glycosidic linkages
    • A61K31/7034—Compounds having saccharide radicals attached to non-saccharide compounds by glycosidic linkages attached to a carbocyclic compound, e.g. phloridzin
    • A61K31/704—Compounds having saccharide radicals attached to non-saccharide compounds by glycosidic linkages attached to a carbocyclic compound, e.g. phloridzin attached to a condensed carbocyclic ring system, e.g. sennosides, thiocolchicosides, escin, daunorubicin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/30—Macromolecular organic or inorganic compounds, e.g. inorganic polyphosphates
    • A61K47/34—Macromolecular compounds obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyesters, polyamino acids, polysiloxanes, polyphosphazines, copolymers of polyalkylene glycol or poloxamers
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/06—Ointments; Bases therefor; Other semi-solid forms, e.g. creams, sticks, gels
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2863—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against receptors for growth factors, growth regulators
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/32—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against translation products of oncogenes
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Neurosurgery (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Inorganic Chemistry (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)

Abstract

本发明公开了一种HER‑2人源化单克隆抗体长效缓释制剂，包括2‑50wt％的两亲性嵌段共聚物混合物，0.05‑10wt％的HER‑2人源化单克隆抗体和40～88wt％的溶媒，所述两亲性嵌段共聚物混合物水溶液在0‑55℃之间的储能模量与损耗模量有交点。本发明利用HER‑2人源化单克隆抗体随药物扩散与凝胶降解的双重作用以实现平稳而缓慢的释放，从而抑制肿瘤的复发，提高药物利用率；在0.05‑10wt％剂量范围内的可以显著降低其心脏毒性；并且，改变嵌段共聚物载体的混合比例可有效调控药物的释放动力学，有效降低给药频率。另外，本发明还公开了所述HER‑2人源化单克隆抗体长效缓释制剂的制备方法，该方法条件简单、实用性强、具有很好的市场应用潜力。

Description

一种HER-2人源化单克隆抗体长效缓释制剂及其制备方法
技术领域
本发明属于医药领域，具体涉及一种HER-2人源化单克隆抗体长效缓释制剂。
背景技术
乳腺癌占所有女性癌症发病数的四分之一，而其存活率仅为29.8％。研究发现，20％-25％的乳腺癌患者存在表皮生长因子2(HER-2)过度表达，这类患者肿瘤恶性程度高、转移和复发发生早、预后差，对化疗与激素疗法不敏感。赫赛汀(曲妥珠单抗)是美国食品药品监管总局于1998年批准的应用于对抗HER-2抗原、增加HER-2阳性乳腺癌患者化疗敏感性的人源性单克隆抗体。其作用原理为靶向抑制癌细胞的P13K和MAPK信号通路，阻止血管生成与DNA修复，从而促进细胞周期停滞与细胞凋亡，并且可以与化疗、激素阻滞疗法联合使用以提高癌症治疗效率。然而其心脏毒性是赫赛汀临床应用的重要问题之一，HER-2蛋白的抑制一方面导致肌原纤维损伤从而抑制兴奋-收缩耦联，另一方面影响Erk1/2磷酸化过程，而MAPK/Erk1/2信号通路与心肌纤维细胞稳定性有关。赫赛汀的心脏毒性其临床表现为左心室射血分数(LVEF)下降，当LVEF下降到一定程度时，患者将不得不停止用药。
现有赫赛汀的制剂形式一般为注射针剂，治疗时，需按照患者体重按照初次负荷量为4mg/kg，90分钟内静脉输入，之后每周维持给药量2mg/kg，30分钟内静脉输入。但是每周一次的脉冲式静脉给药药物利用率低，给药频繁，患者依从性差。
同时，考虑到现有临床治疗乳腺癌的主要是手术治疗，而目前临床手术后面临的一个重要问题在于肿瘤的原位复发。现有研究表明，乳腺癌的原位复发风险大约在6％～16％。因而，降低原位复发风险的有效方法之一就是通过术后药物的局部缓释，使得药物浓度在病灶部位长时间维持在有效治疗浓度之上，提高药物利用率实现肿瘤原位复发概率的降低的同时降低其毒副作用。
因此，开发一种可以实现药物原位递送且可实现局部持续平缓给药的HER-2人源化单克隆抗体长效缓释制剂成为了本领域技术人员亟需解决的问题。
发明内容
有鉴于此，本发明的目的是针对现有技术中存在的问题，提供一种HER-2人源化单克隆抗体长效缓释制剂，通过两亲性嵌段共聚物混合得到的溶胶凝胶使该缓释制剂可以在体温下自发形成热致水凝胶，再与HER-2人源化单克隆抗体共混使该缓释制剂可以方便高效的注射入保乳手术后的缺损部位，并迅速原位形成凝胶，在通过药物扩散和凝胶降解的双重作用下实现平稳而缓慢的释放，从而实现HER-2人源化单克隆抗体的原位递送和局部持续平缓给药。
为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案：
一种HER-2人源化单克隆抗体长效缓释制剂，包括：2-50wt％的两亲性嵌段共聚物混合物，0.05-10wt％的HER-2人源化单克隆抗体和40～88wt％的溶媒；所述两亲性嵌段共聚物混合物的水溶液在0-55℃之间的储能模量与损耗模量有交点。
相应地，所述0.05-10wt％的HER-2人源化单克隆抗体在长效缓释制剂中的浓度范围为0.5～100mg/mL。
值得说明的是，考虑到HER-2人源化单克隆抗体长效缓释制剂的实际应用环境，优选的所述两亲性嵌段共聚物混合物水溶液的储能模量与损耗模量有交点在0～37℃之间，更为优选的为20～35℃之间。
考虑到本发明所述的两亲性嵌段共聚物混合物水溶液的储能模量与损耗模量交点在0-55℃之间，在低于交点温度时，所述HER-2人源化单克隆抗体长效缓释制剂处于流动的凝胶状态，随温度升高至交点以上时，可以自发形成热致水凝胶。因此，本发明的长效缓释制剂可以方便高效的注射入保乳手术后的缺损部位，并迅速原位形成凝胶。
并且，考虑到HER-2人源化单克隆抗体的心脏毒性，而药物的原位递送及局部缓释可以有效降低该副作用的发生。因此，本发明利用两亲性嵌段共聚物混合物作为HER-2人源化单克隆抗体长效缓释制剂中的药物载体，利用其高度可控的物化性能调节缓释制剂的释放动力学，使药物释放周期与载体材料降解周期相匹配，进一步降低脉冲式给药带来的血药浓度的峰谷波动；同时，HER-2人源化单克隆抗体可以随着药物扩散与凝胶降解的双重作用下实现平稳而缓慢的释放，使得药物浓度在病灶部位长时间维持在有效治疗浓度之上，在提高药物利用率的同时还可以降低其副作用。
进一步的地，所述两亲性嵌段共聚物包括亲水嵌段和疏水嵌段；
所述亲水嵌段为平均分子量是450-30000的聚乙二醇(PEG)，且所述亲水嵌段占所述两亲性嵌段共聚物的10-90wt％；
所述疏水嵌段为平均分子量是72-30000的聚(乳酸-乙醇酸)共聚物(PLGA)、聚乳酸(PLA)中的一种或多种，且所述疏水嵌段占所述两亲性嵌段共聚物的90-10wt％。
值得说明的，将所述亲水嵌段记为A，所述疏水嵌段记为B，所述嵌段共聚物可以为ABA或BAB型的三嵌段共聚物、AB型的两嵌段共聚物、A-g-B或B-g-A型的接枝共聚物、(A-B)n或(B-A)n的星形嵌段共聚物以及A(BA)n或B(AB)n构型的多嵌段共聚物，其中n为2至10的整数。
更进一步地，所述疏水嵌段包括聚DL-乳酸(PLA)、聚D-乳酸(PDLA)、聚L-乳酸(PLLA)、聚(DL-乳酸-乙醇酸)(PLGA)、聚(L-乳酸-乙醇酸)(PLLGA)、聚(D-乳酸-乙醇酸)(PDLGA)中的一种或多种，且所述聚(DL-乳酸-乙醇酸)(PLGA)、聚(L-乳酸-乙醇酸)(PLLGA)、聚(D-乳酸-乙醇酸)(PDLGA)中的乳酸与乙醇酸的质量比为(1:1)～(30:1)。
再进一步地，所述两亲性嵌段共聚物混合物中包括至少一种不具有热致凝胶化性质的两亲性嵌段共聚物，所述不具有热致凝胶化性质的两亲性嵌段共聚物包括10～65wt％的疏水嵌段或50～90wt％的疏水嵌段。
一些情况下，所述两亲性嵌段共聚物混合物包括至少一种两亲性嵌段共聚物包括10～65wt％的疏水嵌段，本身在0-55℃范围内只能溶解于水中，因而单独不能呈现热致凝胶化；以及，至少一种两亲性嵌段共聚物包括50～90wt％的疏水嵌段，其本身不能溶于水或不能完全溶解于水中，因而单独也不能呈现热致凝胶化。
另外一些情况下，所述两亲性嵌段共聚物混合物包括至少一种两亲性嵌段共聚物包括10～65wt％的疏水嵌段，本身在0-55℃范围内只能溶解于水中而不具有热致凝胶化的性质；同时，至少一种两亲性嵌段共聚物包括50～90wt％的疏水嵌段，在0-55℃范围内不能溶于水或不能完全溶解于水中。
进一步地，所述HER-2人源化单克隆抗体能够特异性地与人体内的HER-2蛋白结合，抑制肿瘤生长，且所述HER-2人源化单克隆抗体包括赫赛汀、赛普汀、Kanjinti、Trazimera、Ontruzant、Herzuma或Ogivir。
值得说明的是，由于HER-2人源化单克隆抗体是一种具有生物活性的蛋白质，而可以与人体内的HER-2蛋白特异性结合的单抗均可以与HER-2人源化单克隆抗体具有相同的作用效果。因此，虽然本发明对所述HER-2人源化单克隆抗体的范围作出了具体限定，但应当理解，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他可与人体内的HER-2蛋白特异性结合的单抗，都属于本发明保护的范围。
进一步地，所述溶媒包括纯水、生理盐水、缓冲溶液、细胞培养液、动植物及人体的体液、组织培养液或者其它不以有机溶剂为主体的介质。
进一步地，所述的一种HER-2人源化单克隆抗体长效缓释制剂还包括0.0001-15wt％的调节剂用于调节药物释放速率，所述调节剂包括糖、盐、羧甲基纤维素钠、(碘)甘油、二甲硅油、丙二醇、卡波姆、甘露醇、山梨醇、表面活性剂、吐温20、吐温40、吐温80、木糖醇、低聚糖、软骨素、甲壳素、壳聚糖、胶原蛋白、明胶、蛋白胶、透明质酸、聚乙二醇中的一种或多种的组合。
进一步地，所述的一种HER-2人源化单克隆抗体长效缓释制剂还包括与所述HER-2人源化单克隆抗体联合的化疗、激素疗法药物，所述化疗、激素疗法药物包括紫杉醇、多西紫杉醇或阿霉素。
本发明的另一目的在于，提供所述的HER-2人源化单克隆抗体长效缓释制剂的制备方法。
为了实现上述目的，本发明提供如下技术方案：
所述的HER-2人源化单克隆抗体长效缓释制剂的制备方法，步骤包括：
(I)将两亲性嵌段共聚物混合物低温溶解于溶媒中，得到载体溶液，并在-20℃以下储存，备用；
(II)将步骤(I)中的所述载体溶液升温至4℃复溶，并加入HER-2人源化单克隆抗体，混匀后得到HER-2人源化单克隆抗体长效缓释制剂。
在另一些实施情形中，所述步骤(I)可替换为：将两亲性嵌段共聚物混合物和HER-2人源化单克隆抗体分别低温溶解于溶媒中，得到载体溶液和主药溶液，并将所述载体溶液、主药溶液单独分装储存；
相应的，所述步骤(II)为：将步骤(I)中所述的载体溶液、主药溶液升温至4℃复溶混匀，得到HER-2人源化单克隆抗体长效缓释制剂。
值得说明的是，所述低温为小于等于所述两亲性嵌段共聚物混合物的溶胶－凝胶转变温度的温度。所述主药溶液可以替换为HER-2人源化单克隆抗体注射液。
与现有技术相比，本发明优点在于：
1、本发明的HER-2人源化单克隆抗体长效缓释制剂具有热致成胶特性，能够在室温或低于室温时处于溶液状态，在人体温度时转变成为凝胶状态，从而可利用其“物理靶向性”定向地给药于手术缺损部位、手术病发部位附近或临近皮下组织中；
2、HER-2人源化单克隆抗体长效缓释制剂在体内原位凝胶化之后，包裹的药物可以缓慢释放(每天增加的累计释放量大于0.1％)，取得长效地防复发效果；
3、通过调节聚合物的组成、聚合物的混合比例可以调控药物的释放动力学，从而释药周期从数周到数月的调节，并且可使药物释放周期与载体材料降解周期相匹配，进一步使得药物毒副作用降低，降低肿瘤复发率；
4、相比于每周一次脉冲式地皮下或静脉注射溶液针剂，在局部持续而又平缓的释放合适剂量的HER-2人源化单克隆抗体能够在减少给药频率、提高药物利用率的同时有效降低或防止其心脏毒性；
5、相比于现有缓释制剂中的载药量21mg/mL，本发明中的有效剂量为0.5-100mg/mL，在提高载药量的同时，还通过调控缓释制剂的局部缓释特性(性质)降低了HER-2人源化单克隆抗体的毒副作用，并进一步增大缓释制剂重HER-2人源化单克隆抗体及其联合用药的负载量；
6、体外实验证明，本发明有效缓释HER-2人源化单克隆抗体时间可达到80天，与现有技术中42天的释放时间相比，本发明不仅大大延长了HER-2人源化单克隆抗体的缓释时间，还可以使得载药量对药物释放行为无显著影响。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据提供的附图获得其他的附图
图1为实施例9中Polymer-1(25wt％)溶液的变温动态流变曲线。
图2为实施例22中Mixture-1(25wt％)溶液的变温动态流变曲线。
图3为实施例23中Mixture-2(25wt％)溶液的变温动态流变曲线。
图4为实施例27中载药浓度为5mg/mL的HER-2人源化单克隆抗体的Mixture-1(25wt％)凝胶制剂的体外释放曲线。
图5为实施例28载浓度为5mg/mL的HER-2人源化单克隆抗体的Mixture-2(25wt％)凝胶制剂的体外释放曲线。
图6为实验例1载药浓度为1.25,2.5,5mg/mL的HER-2人源化单克隆抗体的Mixture-1(25wt％)凝胶制剂的体外释放曲线。
图7为实验例2的术后抑制肿瘤复发曲线。
图8为实验例2治疗周期后动物模型的左心室射血分数。
图9为实验例3治疗周期后动物模型的左心室射血分数。
具体实施方式
下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
为更好地理解本发明，下面通过以下实施例对本发明作进一步具体的阐述，但不可理解为对本发明的限定，对于本领域的技术人员根据上述发明内容所作的一些非本质的改进与调整，也视为落在本发明的保护范围内。
实施例1
一种两亲性嵌段共聚物，在250mL三颈瓶中称取30g PEG 1500，使用真空酯密封各口后，在机械搅拌下130℃真空除水3h。随后通氩气降温至100℃，加入D,L-丙交酯40g和乙交酯8g，充分搅拌；加入含有60mg辛酸亚锡的甲苯溶液，抽真空15min以除去甲苯后升温至150℃在氩气保护下反应12h。随后降温至110℃抽真空3h以除去未反应的单体，然后用80℃去离子水洗涤初产物3次，经冷冻干燥得到最终产物，得BAB型三嵌段聚合物PLGA-PEG-PLGA，产率约80％。对该嵌段聚合物性质进行测定，测定结果如表1所示。通过凝胶渗透色谱(GPC，聚苯乙烯为标样)测得上述BAB型三嵌段聚合物(PLGA-PEG-PLGA，Polymer-1)的数均与重均分子量(Mn，Mw)分别为5550和6330，分子量分布系数(Mw/Mn，
Figure BDA0002110242990000071
)为1.14,此共聚物(Polymer-1)可以溶解在水中，但是各个浓度条件下随着温度的升高均不能发生溶胶-凝胶转变。
实施例2
一种两亲性嵌段共聚物，在250mL三颈瓶中称取30g PEG 1500，使用真空酯密封各口后，在机械搅拌下130℃真空除水3h。随后通氩气降温至100℃，加入摩尔比为1:1的D-丙交酯和乙交酯共计48g，充分搅拌；加入含有60mg辛酸亚锡的甲苯溶液，抽真空15min以除去甲苯后升温至150℃在氩气保护下反应12h。随后降温至110℃抽真空3h以除去未反应的单体，然后用80℃去离子水洗涤初产物3次，经冷冻干燥得到最终产物，得BAB型三嵌段聚合物PDLGA-PEG-PDLGA，产率约87％。对该嵌段聚合物性质进行测定，测定结果如表1所示。通过凝胶渗透色谱(GPC，聚苯乙烯为标样)测得上述BAB型三嵌段聚合物(PDLGA-PEG-PDLGA，Polymer-8)的数均与重均分子量(Mn，Mw)分别为5100和6320，分子量分布系数(Mw/Mn，
Figure BDA0002110242990000081
)为1.24，此共聚物(Polymer-8)可以溶解在水中，但是各个浓度条件下随着温度的升高均不能发生溶胶-凝胶转变。
实施例3
一种两亲性嵌段共聚物，在250mL三颈瓶中称取20g PEG 1000，使用真空酯密封各口后，在机械搅拌下130℃真空除水3h。随后通氩气降温至100℃，加入D,L-丙交酯46.6g和乙交酯9.4g，充分搅拌；加入含有60mg辛酸亚锡的甲苯溶液，抽真空15min以除去甲苯后升温至150℃在氩气保护下反应12h。随后降温至110℃抽真空3h以除去未反应的单体，然后用80℃去离子水洗涤初产物3次，经冷冻干燥得到最终产物，得BAB型三嵌段聚合物PLGA-PEG-PLGA，产率约80％。对该嵌段聚合物性质进行测定，测定结果如表2所示。通过凝胶渗透色谱(GPC，聚苯乙烯为标样)测得上述BAB型三嵌段聚合物(PLGA-PEG-PLGA，Polymer-9)的数均与重均分子量(Mn，Mw)分别为5590和7040，分子量分布系数(Mw/Mn，
Figure BDA0002110242990000082
)为1.26,此共聚物(Polymer-9)本身不能溶解于水中，因而不具有热致凝胶化的性质。
实施例4
一种两亲性嵌段共聚物，在250mL三颈瓶中称取单端甲氧基聚乙二醇(mPEG 550)22g，使用真空酯密封各口后，在机械搅拌下130℃真空除水3h。随后通氩气降温至100℃，加入摩尔比为30:1的DL-丙交酯和乙交酯共计92g，充分搅拌；加入含有120mg辛酸亚锡的甲苯溶液，抽真空15min以除去甲苯后升温至150℃在氩气保护下反应12h。随后降温至110℃抽真空3h以除去未反应的单体，把粗产物溶于二氯甲烷溶液中，冷乙醚沉淀，产率约为82％。对该嵌段聚合物性质进行测定，测定结果如表2所示。通过凝胶渗透色谱(GPC，聚苯乙烯为标样)测得上述聚合物(mPEG-PLGA，Polymer-11)的数均与重均分子量(Mn，Mw)分别为4300和5160，分子量分布系数(Mw/Mn，
Figure BDA0002110242990000091
)为1.20，此共聚物(Polymer-11)本身不能完全溶解于水中，因而不具有热致凝胶化的性质。
实施例5
一种两亲性嵌段共聚物，在250mL三颈瓶中称取20g PEG 1000，使用真空酯密封各口后，在机械搅拌下130℃真空除水3h。随后通氩气降温至100℃，加入摩尔比为2:1的L-丙交酯和乙交酯共计56g，充分搅拌；加入含有60mg辛酸亚锡的甲苯溶液，抽真空15min以除去甲苯后升温至150℃在氩气保护下反应12h。随后降温至110℃抽真空3h以除去未反应的单体，然后用80℃去离子水洗涤初产物3次，经冷冻干燥得到最终产物，得BAB型三嵌段聚合物PLLGA-PEG-PLLGA，产率约80％。对该嵌段聚合物性质进行测定，测定结果如表2所示。通过凝胶渗透色谱(GPC，聚苯乙烯为标样)测得上述BAB型三嵌段聚合物(PLLGA-PEG-PLLGA，Polymer-12)的数均与重均分子量(Mn，Mw)分别为6090和7060，分子量分布系数(Mw/Mn，
Figure BDA0002110242990000092
)为1.16,此共聚物(Polymer-12)本身不能溶解于水中，因而不具有热致凝胶化的性质。
实施例6
一种两亲性嵌段共聚物，在250mL三颈瓶中称取单端甲氧基聚乙二醇(mPEG 550)11g，使用真空酯密封各口后，在机械搅拌下130℃真空除水3h。随后通氩气降温至100℃，加入摩尔比为20:1的DL-丙交酯和乙交酯共计25g，充分搅拌；加入含有50mg辛酸亚锡的甲苯溶液，抽真空15min以除去甲苯后升温至150℃在氩气保护下反应12h。随后降温至110℃抽真空3h以除去未反应的单体，把粗产物溶于二氯甲烷溶液中，冷乙醚沉淀，产率约为88％。将此两嵌段共聚物溶于无水甲苯，投入等当量的HDMI，60℃回流反应8小时，旋蒸浓缩后加入到大量无水乙醚中，在-20℃冰箱中冷冻过夜沉淀，过滤即可除去杂质，经真空干燥48小时得到mPEG-PLGA-mPEG。对该嵌段聚合物性质进行测定，测定结果如表3所示。通过凝胶渗透色谱仪(GPC)(采用聚苯乙烯作为标样，以THF为流动相)测定所述ABA嵌段共聚物(mPEG-PLGA-mPEG,Polymer-17)的数均与重均分子量分别为5000和6250，分子量分布系数(Mw/Mn，
Figure BDA0002110242990000102
)为1.25。此共聚物(Polymer-17)本身在水中具有可逆的热致凝胶化的性质。
实施例7
按照实施例1至6所给出的基本步骤，通过调节PEG的分子量和聚酯嵌段的共聚单体的组成、结构，合成一系列嵌段共聚物，所得嵌段共聚合物及其部分性质参数列于表1至表3。
表1
Figure BDA0002110242990000101
Figure BDA0002110242990000111
表2
Figure BDA0002110242990000112
Figure BDA0002110242990000121
表3
Figure BDA0002110242990000122
Figure BDA0002110242990000131
表1和表2所列出的嵌段共聚物均不具有热可逆凝胶的性能，其中表1所列出的嵌段共聚物只是能够在0-55℃范围内溶解于水中形成稳定的溶液，但是不能发生溶胶-凝胶转变，即不具有热致凝胶化性质；表2中所列出的嵌段共聚物不能溶解于水或者只能部分溶解于水中，也不具有热致凝胶化性质；表3中所列出的嵌段共聚物不但能溶解在水中，而且能够随着升温发生可逆的溶胶-凝胶转变，即具有热致凝胶化性质。
根据本发明所述的基本事实，从表1中选择一种或多种嵌段共聚物与表2中的一种或多种嵌段共聚物按照一定比例进行物理混合，同时加入HER-2人源化单克隆抗体，该体系即可用于预防HER-2阳性乳腺癌复发，该材料低温时溶于水中高温时形成物理凝胶，具有本发明前文所述的可逆溶胶-凝胶相转变性质。同样，也可以从表1和/或表2中选取一种或多种嵌段共聚物与表3中的一种或多种嵌段共聚物按照一定的比例进行物理混合，同时加入HER-2人源化单克隆抗体，该体系也可用于预防HER-2阳性乳腺癌复发。
本领域常采用流变与导管法测试被用于测试混合物水凝胶的相转变点。为更好地理解本发明，下面通过实施例8～23对本发明作进一步具体的阐述，以使本领域技术人员可以清楚知晓本发明的两亲性嵌段共聚物混合物水溶液的储能模量与损耗模量交点的温度范围判断方法。
实施例8
一种两亲性嵌段共聚物的热致凝胶化性质判断方法，称取适量的表1中嵌段共聚物Polymer-1，以生理盐水作为溶媒，配制一系列聚合物质量百分数2wt％～40wt％的溶液，进行倒管法测试，具体将载有0.5mL样品溶液的2mL样品瓶浸没在水浴中，平衡15min后立即倒置180°，若在30s内样品不发生明显流动，则认为样品已处于凝胶态，此时的温度则是溶胶-凝胶转变温度。倒管法测试的结果表明，所得Polymer-1的溶液在所测试的0～55℃温度范围内始终为易流动的流体，不能发生溶胶-凝胶相转变，因此不具有热致凝胶化的性质。
实施例9
一种两亲性嵌段共聚物的热致凝胶化性质判断方法，取适量25wt％Polymer-1嵌段共聚物溶液，采用旋转流变仪测量聚合物水体系的储能模量和损耗模量等流变学性质随温度的变化。在固定剪切频率(f＝1.59Hz)下，以0.5℃/min的升温速率进行温度扫描，结果记录于图1。如图1所示，25wt％的Polymer-1聚合物溶液在测试温度下储能模量与损耗模量无交点，不能发生溶胶-凝胶相转变，因此不具有热致凝胶化的性质。
实施例10
一种两亲性嵌段共聚物的热致凝胶化性质判断方法，称量适量的表1中嵌段共聚物Polymer-4，以去离子水为溶媒，配置成一系列聚合物质量百分数含量为2wt％～50wt％的溶液，倒管法测试的结果表明，所得到的Polymer-4的溶液在0～55℃温度范围内始终为易流动的流体，不能发生溶胶-凝胶相转变，不具有热致凝胶化的性质。
实施例11
一种两亲性嵌段共聚物的热致凝胶化性质判断方法，称取适量的表1中的嵌段共聚物Polymer-8，以PBS(pH＝7.4)溶液作为溶媒，配置聚合物质量百分数为2wt％～30wt％的溶液。倒管法测试的结果表明，所得到的Polymer-8的溶液在0～55℃范围内始终为易流动的流体，不能发生如前所述的溶胶-凝胶转变，不具有热致凝胶化的性质。
参照实施例8-11所述实验方法，表1中的聚合物均可溶于水形成聚合物水溶液，经过倒管法测试表明，表1中的聚合物溶液均不能发生可逆的溶胶-凝胶转变，即不具有热致凝胶化的性质。
实施例12
一种两亲性嵌段共聚物的热致凝胶化性质判断方法，称取适量的表2中嵌段共聚物Polymer-9，以生理盐水为溶媒，在一系列聚合物质量百分数含量为0.1wt％～30wt％的范围内，发现Polymer-9不能溶解或不能完全溶解于水中，静置之后观察到聚合物沉淀于水中，因而Polymer-9不具有热致凝胶化的性质。
实施例13
一种两亲性嵌段共聚物的热致凝胶化性质判断方法，称取适量的表2中嵌段共聚物Polymer-14，以PBS(pH＝7.4)为溶媒，在一系列聚合物质量百分数含量为0.1wt％～20wt％的范围内，Polymer-14的水体系均未得到均匀透明的溶液，静置之后观察到聚合物沉淀于水中，因而Polymer-14也不具有热致凝胶化的性质。
参照实施例12-13所述实验方法，表2中的其它聚合物也不能溶解或不能完全溶解于水中，因而也均不具有可逆热致凝胶化性质。
实施例14
一种两亲性嵌段共聚物的热致凝胶化性质判断方法，称取适量的表3中嵌段共聚物Polymer-15，以水为溶媒，配置成一系列聚合物质量百分数含量为10wt％～25wt％的溶液，倒管法测试的结果表明，所得到的Polymer-15的溶液随着温度的升高，可以发生可逆的溶胶-凝胶相转变，根据浓度的不同，相转变温度可控制在33～39℃温度范围内，因此Polymer-15具有热致凝胶化的性质。
实施例15
一种两亲性嵌段共聚物的热致凝胶化性质判断方法，称取适量的表3中的嵌段共聚物Polymer-22，以生理盐水为溶媒，配置25wt％的Polymer-22水溶液。倒管法测试表明，随着温度的升高25wt％的Polymer-22溶液发生溶胶-凝胶相转变，且相转变温度为36℃，正好介于室温和生理温度之间，因此Polymer-22具有热致凝胶化的性质。
参照实施例14-15所述实验方法，表3中的其它聚合物在合适的浓度下，也可以低温溶解于水中，随着升温发生溶胶-凝胶相转变，因而均具有可逆热致凝胶化性质。
实施例16
一种两亲性嵌段共聚物混合物的热致凝胶化性质判断方法，将表1中的嵌段共聚物Polymer-1和表2中的嵌段共聚物Polymer-9等质量混合，加入适量生理盐水，搅拌使混合物溶解，配置成聚合物重量百分比12.5wt％～25wt％的水溶液。倒管法测试表明，所得到的聚合物混合物溶液随着温度的升高，可以发生可逆的溶胶-凝胶相转变，通过调节聚合物混合物的浓度，相转变温度可控制在31～35℃温度范围内。
实施例17
一种两亲性嵌段共聚物混合物的热致凝胶化性质判断方法，准确称取表1中的嵌段共聚物Polymer-1，加入生理盐水，在冰箱的冷藏室(4℃)中搅拌使聚合物溶解，然后加入与Polymer-1等质量的嵌段共聚物Polymer-9，继续在冰箱的冷藏室(4℃)中搅拌，不溶解的嵌段共聚物Polymer-9被增溶到溶液中，得到聚合物混合物重量百分比在12.5wt％～25wt％的水溶液。倒管法测试表明，所得材料能发生可逆的溶胶-凝胶转变，且相转变温度与实施例19中所测结果相一致。
实施例18
一种两亲性嵌段共聚物混合物的热致凝胶化性质判断方法，准确称取表1中的嵌段共聚物Polymer-1，加入适量生理盐水，在冰箱的冷藏室(4℃)中搅拌使聚合物溶解。按照重量比Polymer-1/Polymer-9＝3/7，向该溶液中加入嵌段共聚物Polymer-9，继续在冰箱的冷藏室(4℃)中搅拌，得到聚合物重量百分比在25wt％的混合聚合物溶液，此混合物溶液记为Mixture-1。倒管法测试结果表明，所得聚合物混合物水溶液在23℃时发生溶胶-凝胶转变，形成原位凝胶。
实施例19
一种两亲性嵌段共聚物混合物的热致凝胶化性质判断方法，按照重量比Polymer-1/Polymer-9＝1/1，准确称取表1中的嵌段共聚物Polymer-1和表2中的嵌段共聚物Polymer-9，将两种聚合物混合并加入生理盐水，在冰箱冷藏室(4℃)中搅拌使混合物溶解，得到聚合物重量百分比25wt％的聚合物混合物溶液，此混合物溶液记为Mixture-2。倒管法测试表明，所得聚合物混合物水溶液能发生可逆的溶胶-凝胶转变，并且相转变温度在31℃。
实施例20
一种两亲性嵌段共聚物混合物的热致凝胶化性质判断方法，准确称取表3中的嵌段共聚物Polymer-19，加入适量去离子水，在冰箱的冷藏室(4℃)中搅拌使聚合物溶解。按照重量比Polymer-19/Polymer-11＝3/2，向该溶液中加入表2中的嵌段共聚物Polymer-11，继续在冰箱的冷藏室(4℃)中搅拌，不溶解的嵌段共聚物Polymer-11被增溶到溶液中，得到聚合物重量百分比在21wt％的聚合物混合物溶液。倒管法测试结果表明，所得聚合物混合物溶液能发生可逆的溶胶-凝胶转变，并且能在生理温度(37℃)条件下形成原位凝胶。
实施例21
一种两亲性嵌段共聚物混合物的热致凝胶化性质判断方法，按照重量比Polymer-2/Polymer-10/Polymer-15＝20：20：60的原则，准确称取Polymer-2(表1)、Polymer-10(表2)和Polymer-15(表3)并进行简单地物理混合，随后加入生理盐水，在冰箱冷藏室(4℃)中搅拌使混合物溶解，可得到聚合物重量百分比在25wt％的溶液。倒管法测试表明，所得聚合物混合物溶液能发生可逆的溶胶-凝胶转变，并且能在生理温度(37℃)条件下形成原位凝胶。
实施例22
一种两亲性嵌段共聚物混合物的热致凝胶化性质判断方法，取适量实施例18制备的嵌段共聚物混合溶液Mixture-1，采用旋转流变仪测量聚合物水体系的储能模量和损耗模量等流变学性质随温度的变化。在固定剪切频率(f＝1.59Hz)下，以0.5℃/min的升温速率进行温度扫描，结果记录于图2。如图2所示，25wt％的Mixture-1聚合物溶液在室温下储能模量较小，体系具有很好的流动性，而在15℃附近储能模量急剧上升，溶液-凝胶的相转变点为24℃。
实施例23
一种两亲性嵌段共聚物混合物的热致凝胶化性质判断方法，取适量实施例19制备的嵌段共聚物混合溶液Mixture-2，采用旋转流变仪测量聚合物水体系的储能模量和损耗模量等流变学性质随温度的变化。在固定剪切频率(f＝1.59Hz)下，以0.5℃/min的升温速率进行温度扫描，结果记录于图3。如图3所示，25wt％的Mixture-2聚合物溶液在室温下储能模量较小，体系具有很好的流动性，而在22℃附近储能模量急剧上升，溶液-凝胶的相转变点为31℃。
实施例24
一种两亲性嵌段共聚物混合物，在37℃的pH＝7.4的PBS中，模拟Polymer-1和Polymer-9按照3/7，1/1混合得到的25wt％的皮下注射材料的体外降解行为。利用GPC跟踪聚合物分子量及分子量分布随降解时间的变化，以及测定残余凝胶的重量随降解时间的变化。根据该材料中所含的嵌段共聚物的结构可知，该聚合物的降解主要依靠酯键的水解发生降解。从降解结果来看，凝胶的体外降解周期超过4周。
实施例25
一种两亲性嵌段共聚物混合物，在37℃的pH＝7.4PBS中，模拟Polymer-2/Polymer-10/Polymer-15按20:20:60重量比混合所得到20wt％的皮下注射材料的体外降解行为。利用GPC跟踪聚合物分子量及分子量分布随降解时间的变化，以及测定残余凝胶的重量随降解时间的变化。根据该材料中所含的嵌段共聚物的结构可知，该聚合物的降解主要是依靠酯键的水解发生降解的。从降解结果来看，凝胶的体外降解周期超过6周。
实施例26
一种两亲性嵌段共聚物混合物，Polymer-1和Polymer-9按照3/7的重量比混合，以生理盐水为溶媒，配制了25wt％的聚合物混合物溶液，经辐照灭菌。取上述溶液约0.1mL，以ICR小鼠为模型实验动物，将上述溶液注射到处于麻醉状态的小鼠背部皮下。每隔一定时间处死小鼠，跟踪组合物凝胶在小鼠体内的降解。结果表明，该注射材料可在体内维持四周，第五周以后已无明显可见的凝胶。同时，实验过程中注射部位没有发生水肿、组织坏死等现象。
实施例27
一种HER-2人源化单克隆抗体长效缓释制剂，将表1中的嵌段共聚物Polymer-1和表2中的嵌段共聚物Polymer-9以质量比3/7混合，加入适量生理盐水，在冰箱的冷藏室(4℃)中搅拌使混合物溶解，配置成聚合物重量百分比为25wt％的水溶液，随后添加5mg/mL(0.5wt％)HER-2人源化单克隆抗体，搅拌均匀得到载药聚合物溶液。经过倒管法测试表明，所得溶液能在生理温度发生溶胶-凝胶转变，即在低于生理温度条件下呈易流动的溶液态，当温度升高至生理温度则发生溶胶-凝胶转变，形成原位凝胶。体外药物释放实验表明，HER-2人源化单克隆抗体可以从凝胶中缓慢释放(每天增加的累计释放量大于0.1％)超过10周，结果记录于图4。
实施例28
一种HER-2人源化单克隆抗体长效缓释制剂，将表1中的嵌段共聚物Polymer-1和表2中的嵌段共聚物Polymer-9等重量混合，加入适量生理盐水，在冰箱的冷藏室(4℃)中搅拌使混合物溶解，配置成聚合物重量百分比为25wt％的水溶液，随后添加5mg/mL(0.5wt％)HER-2人源化单克隆抗体，搅拌均匀得到载药聚合物溶液。经过倒管法测试表明，所得溶液能在生理温度发生溶胶-凝胶转变，即在低于生理温度条件下呈易流动的溶液态，当温度升高至生理温度则发生溶胶-凝胶转变，形成原位凝胶。体外药物释放实验表明，HER-2人源化单克隆抗体可以从凝胶中缓慢释放超过三周，结果记录于图5。
实施例29
一种HER-2人源化单克隆抗体长效缓释制剂，按重量比Polymer-2：Polymer-15＝1:2，准确称取表1中的嵌段共聚物Polymer-2和表3中的嵌段共聚物Polymer-15并混合，加入生理盐水，在冰箱的冷藏室(4℃)中搅拌使混合物溶解，得到含聚合物混合物25wt％的溶液，最后再添加4mg/mL(0.4wt％)HER-2人源化单克隆抗体，搅拌均匀。经过倒管法测试表明，所得溶液能在生理温度发生溶胶-凝胶转变，即在低于生理温度条件下呈易流动的溶液态，当温度升高至生理温度则发生溶胶-凝胶转变，形成原位凝胶。体外药物释放实验表明，HER-2人源化单克隆抗体可以从凝胶中缓慢释放超过5周。
实施例30
一种HER-2人源化单克隆抗体长效缓释制剂，按重量比Polymer-19：Polymer-11＝3:2，准确称取表2中的嵌段共聚物Polymer-11和表3中的嵌段共聚物Polymer-19并混合，加入生理盐水，在冰箱的冷藏室(4℃)中搅拌使混合物溶解，得到含聚合物混合物25wt％的溶液，最后再添加1mg/mL(0.1wt％)HER-2人源化单克隆抗体，搅拌均匀。经过倒管法测试表明，所得溶液能在生理温度发生溶胶-凝胶转变，即在低于生理温度条件下呈易流动的溶液态，当温度升高至生理温度则发生溶胶-凝胶转变，形成原位凝胶。体外药物释放实验表明，HER-2人源化单克隆抗体可以从凝胶中缓慢释放超过6周。
实施例31
一种HER-2人源化单克隆抗体长效缓释制剂，按重量比Polymer-2/Polymer-10/Polymer-15＝2:2:6，准确称取表1中的嵌段共聚物Polymer-2、表2中的嵌段共聚物Polymer-10和表3中的嵌段共聚物Polymer-15并混合，加入生理盐水，在冰箱的冷藏室(4℃)中搅拌使混合物溶解，得到含聚合物混合物20wt％的溶液，最后再添加2mg/mL(0.2wt％)HER-2人源化单克隆抗体，搅拌均匀。经过倒管法测试表明，所得溶液能在生理温度发生溶胶-凝胶转变，即在低于生理温度条件下呈易流动的溶液态，当温度升高至生理温度则发生溶胶-凝胶转变，形成原位凝胶。体外药物释放实验表明，HER-2人源化单克隆抗体可以从凝胶中缓慢释放超过4周。
实施例32
一种HER-2人源化单克隆抗体长效缓释制剂，按重量比Polymer-14/Polymer-19＝1:3，准确称取表2中的嵌段共聚物Polymer-14和表3中的嵌段共聚物Polymer-19并混合，加入生理盐水，在冰箱的冷藏室(4℃)中搅拌使混合物溶解，得到含聚合物混合物23wt％的溶液，最后再添加15mg/mL(1.5wt％)HER-2人源化单克隆抗体，搅拌均匀。经过倒管法测试表明，所得溶液能在生理温度发生溶胶-凝胶转变，即在低于生理温度条件下呈易流动的溶液态，当温度升高至生理温度则发生溶胶-凝胶转变，形成原位凝胶。体外药物释放实验表明，HER-2人源化单克隆抗体可以从凝胶中缓慢释放超过12周。
实施例33
一种HER-2人源化单克隆抗体长效缓释制剂，按重量比Polymer-7/Polymer-11＝1:4，准确称取表1中的嵌段共聚物Polymer-7和表2中的嵌段共聚物Polymer-11并混合，加入PBS，在冰箱的冷藏室(4℃)中搅拌使混合物溶解，得到含聚合物混合物21wt％的溶液，最后再添加10mg/mL(1wt％)HER-2人源化单克隆抗体，搅拌均匀。经过倒管法测试表明，所得溶液能在生理温度发生溶胶-凝胶转变，即在低于生理温度条件下呈易流动的溶液态，当温度升高至生理温度则发生溶胶-凝胶转变，形成原位凝胶。体外药物释放实验表明，HER-2人源化单克隆抗体可以从凝胶中缓慢释放超过11周。
实施例34
一种HER-2人源化单克隆抗体长效缓释制剂，将表1中的嵌段共聚物Polymer-1和表2中的嵌段共聚物Polymer-9等重量混合，加入适量生理盐水，在冰箱的冷藏室(4℃)中搅拌使混合物溶解，配置成聚合物重量百分比为20wt％的水溶液，随后添加0.5mg/mL(0.05wt％)HER-2人源化单克隆抗体，搅拌均匀得到载药聚合物溶液。经过倒管法测试表明，所得溶液能在生理温度发生溶胶-凝胶转变，即在低于生理温度条件下呈易流动的溶液态，当温度升高至生理温度则发生溶胶-凝胶转变，形成原位凝胶。体外药物释放实验表明，HER-2人源化单克隆抗体可以从凝胶中有效释放超过2周。
实施例35
一种HER-2人源化单克隆抗体长效缓释制剂，将实施例27中的长效缓释制剂加入2mg/mL的紫杉醇，HER-2人源化单克隆抗体和紫杉醇均可以从凝胶中缓慢释放超过10周。
实施例36
一种HER-2人源化单克隆抗体长效缓释制剂，将实施例32中的长效缓释制剂加入4mg/mL的紫杉醇，HER-2人源化单克隆抗体和紫杉醇均可以从凝胶中缓慢释放超过12周。
实施例37
一种HER-2人源化单克隆抗体长效缓释制剂，将实施例31中的长效缓释制剂加入5mg/mL的多西紫杉醇，HER-2人源化单克隆抗体和多西紫杉醇均可以从凝胶中缓慢释放超过4周。
实施例38
一种HER-2人源化单克隆抗体长效缓释制剂，将实施例27中的长效缓释制剂加入5mg/mL的阿霉素，HER-2人源化单克隆抗体可以从凝胶中缓慢释放超过10周，而阿霉素可以缓慢释放超过4周。
实施例39
一种HER-2人源化单克隆抗体长效缓释制剂，将实施例32中的长效缓释制剂加入10mg/mL的阿霉素，HER-2人源化单克隆抗体可以从凝胶中缓慢释放超过12周，而阿霉素可以缓慢释放超过4周。
实施例40
一种HER-2人源化单克隆抗体长效缓释制剂，将实施例34中的长效缓释制剂加入2mg/mL的阿霉素，HER-2人源化单克隆抗体和阿霉素均可以从凝胶中缓慢释放超过2周。
实施例41
一种HER-2人源化单克隆抗体长效缓释制剂，将实施例27中的长效缓释制剂加入1％的蔗糖调节剂调节药物释放速率，可实现药物体外9周的释放。
实施例42
一种HER-2人源化单克隆抗体长效缓释制剂，将实施例32中的长效缓释制剂加入5％的蔗糖调节剂调节药物释放速率，可实现药物体外10周的释放。
实施例43
一种HER-2人源化单克隆抗体长效缓释制剂，将实施例27中的长效缓释制剂加入5％的聚乙二醇400调节剂调节药物释放速率，可实现药物体外8周的释放。
实施例44
一种HER-2人源化单克隆抗体长效缓释制剂，将实施例32中的长效缓释制剂加入11％的聚乙二醇200调节剂调节药物释放速率，可实现药物体外8周的释放。
实施例45
一种HER-2人源化单克隆抗体长效缓释制剂，将实施例27中的长效缓释制剂加入2％的山梨醇调节剂调节药物释放速率，可实现药物体外60天的释放。
实施例46
一种HER-2人源化单克隆抗体长效缓释制剂，将实施例31中的长效缓释制剂加入5％的甘露醇调节剂调节药物释放速率，可实现药物体外3周的释放。
实施例47
一种HER-2人源化单克隆抗体长效缓释制剂，将实施例27中的长效缓释制剂加入8％的木糖醇调节剂调节药物释放速率，可实现药物体外6周的释放。
为了进一步验证本发明的优异效果，发明人还进行了如下实验：
实验例1
将表1中的嵌段共聚物Polymer-1和表2中的嵌段共聚物Polymer-9以质量比3/7混合，加入适量生理盐水，在冰箱的冷藏室(4℃)中搅拌使混合物溶解，配置成聚合物重量百分比为25wt％的水溶液，随后分别添加1.25，2.5，5mg/mLHER-2人源化单克隆抗体，搅拌均匀得到载药聚合物溶液。体外药物释放实验表明，HER-2人源化单克隆抗体的药物释放行为未显著受到载药量影响，结果记录于图6。
实验例2
将表1中的嵌段聚合物Polymer-1和表2中的嵌段共聚物Polymer-9按照3/7混合，用生理盐水配置得到25wt％的溶液，经辐照灭菌，加入1.25,2.5,5mg/mL HER-2人源化单克隆抗体，在冰箱中冷藏(4℃)室中搅拌均匀，即可得注射制剂。以Balb/c裸鼠为模型动物，将HER-2阳性乳腺癌细胞SK-BR-3注入小鼠乳房垫内，形成荷瘤小鼠，待肿瘤长至约100mm3后在无菌环境下对肿瘤进行切除，残留1mm3左右瘤块，构建复发模型，待伤口缝合完24小时后注射上述注射制剂，同时将生理盐水作为空白对照，每周注射一次的1.25mg/mL单抗溶液制剂作为阳性对照。本实施例结果表明，本发明提供的预防HER-2阳性乳腺癌复发的凝胶复合物缓释制剂能够有效抑制HER-2阳性肿瘤复发，结果记录于图7；通过检测最大剂量组表明该凝胶制剂可以防止心脏毒性的产生,但是每周注射HER-2人源化单克隆抗体溶液组却导致左心室射血分数降低，其心脏毒性结果记录于图8。图中*代表两组数据具有显著性差异，且p<0.05，**代表两组数据具有显著性差异，且p<0.01；***代表两组数据具有显著性差异，且p<0.001。
实验例3
将表1中的嵌段聚合物Polymer-1和表2中的嵌段共聚物Polymer-9按照3/7混合，用生理盐水配置得到25wt％的溶液，经辐照灭菌，加入5,10mg/mLHER-2人源化单克隆抗体，在冰箱中冷藏(4℃)室中搅拌均匀，即可得注射制剂。以Balb/c裸鼠为模型动物，将HER-2阳性乳腺癌细胞SK-BR-3注入小鼠乳房垫内，形成荷瘤小鼠，待肿瘤长至约50mm3后在注射上述注射制剂，同时将生理盐水作为空白对照，每周注射一次的1.25mg/mL单抗溶液制剂作为阳性对照，四周后运用超声心动图对其左心室射血分数进行表征。本实施例结果表明，本发明提供的预防HER-2阳性乳腺癌复发的凝胶复合物缓释制剂在有效剂量内能够防止心脏毒性的产生,而过高的剂量则会引起左心室射血分数降低，其心脏毒性结果记录于图9。
对所公开的实施例的上述说明，使本领域专业技术人员能够实现或使用本发明。对这些实施例的多种修改对本领域的专业技术人员来说将是显而易见的，本文中所定义的一般原理可以在不脱离本发明的精神或范围的情况下，在其它实施例中实现。因此，本发明将不会被限制于本文所示的这些实施例，而是要符合与本文所公开的原理和新颖特点相一致的最宽的范围。

Claims (10)

1.一种HER-2人源化单克隆抗体长效缓释制剂，其特征在于，包括：2-50wt％的两亲性嵌段共聚物混合物，0.05-10wt％的HER-2人源化单克隆抗体和40～88wt％的溶媒；所述两亲性嵌段共聚物混合物的水溶液在0-55℃之间的储能模量与损耗模量有交点。
2.根据权利要求1所述的一种HER-2人源化单克隆抗体长效缓释制剂，其特征在于，所述两亲性嵌段共聚物包括亲水嵌段和疏水嵌段；
所述亲水嵌段为平均分子量是450-30000的聚乙二醇，且所述亲水嵌段占所述两亲性嵌段共聚物的10-90wt％；
所述疏水嵌段为平均分子量是72-30000的聚(乳酸-乙醇酸)共聚物、聚乳酸中的一种或多种，且所述疏水嵌段占所述两亲性嵌段共聚物的90-10wt％。
3.根据权利要求2所述的一种HER-2人源化单克隆抗体长效缓释制剂，其特征在于，所述疏水嵌段包括聚DL-乳酸、聚D-乳酸、聚L-乳酸、聚(DL-乳酸-乙醇酸)、聚(L-乳酸-乙醇酸)、聚(D-乳酸-乙醇酸)中的一种或多种，且所述聚(DL-乳酸-乙醇酸)、聚(L-乳酸-乙醇酸)、聚(D-乳酸-乙醇酸)中的乳酸与乙醇酸的质量比为(1:1)～(30:1)。
4.根据权利要求3所述的一种HER-2人源化单克隆抗体长效缓释制剂，其特征在于，所述两亲性嵌段共聚物混合物中包括至少一种不具有热致凝胶化性质的两亲性嵌段共聚物，所述不具有热致凝胶化性质的两亲性嵌段共聚物包括10～65wt％的疏水嵌段或50～90wt％的疏水嵌段。
5.根据权利要求1所述的一种HER-2人源化单克隆抗体长效缓释制剂，其特征在于，所述HER-2人源化单克隆抗体能够特异性地与人体内的HER-2蛋白结合，抑制肿瘤生长，且所述HER-2人源化单克隆抗体包括赫赛汀、赛普汀、Kanjinti、Trazimera、Ontruzant、Herzuma或Ogivir。
6.根据权利要求1所述的一种HER-2人源化单克隆抗体长效缓释制剂，其特征在于，所述溶媒包括纯水、生理盐水、缓冲溶液、细胞培养液、动植物及人体的体液、组织培养液或者其它不以有机溶剂为主体的介质。
7.根据权利要求1所述的一种HER-2人源化单克隆抗体长效缓释制剂，其特征在于，还包括0.0001-15wt％的调节剂，所述调节剂包括糖、盐、羧甲基纤维素钠、(碘)甘油、二甲硅油、丙二醇、卡波姆、甘露醇、山梨醇、表面活性剂、吐温20、吐温40、吐温80、木糖醇、低聚糖、软骨素、甲壳素、壳聚糖、胶原蛋白、明胶、蛋白胶、透明质酸、聚乙二醇中的一种或多种。
8.根据权利要求1所述的一种HER-2人源化单克隆抗体长效缓释制剂，其特征在于，还包括与所述HER-2人源化单克隆抗体联合的化疗、激素疗法药物，所述化疗、激素疗法药物包括紫杉醇、多西紫杉醇或阿霉素。
9.如权利要求1～6任一所述的HER-2人源化单克隆抗体长效缓释制剂的制备方法，其特征在于，步骤包括：
(I)将两亲性嵌段共聚物混合物低温溶解于溶媒中，得到载体溶液，并在-20℃以下储存，备用；
(II)将步骤(I)中的所述载体溶液升温至4℃复溶，并加入HER-2人源化单克隆抗体，混匀后得到HER-2人源化单克隆抗体长效缓释制剂。
10.根据权利要求9所述的一种HER-2人源化单克隆抗体长效缓释制剂的制备方法，其特征在于，所述步骤(I)可替换为：将两亲性嵌段共聚物混合物和HER-2人源化单克隆抗体分别低温溶解于溶媒中，得到载体溶液和主药溶液，并将所述载体溶液、主药溶液单独分装储存；
相应的，所述步骤(II)为：将步骤(I)中所述的载体溶液、主药溶液升温至4℃复溶混匀，得到HER-2人源化单克隆抗体长效缓释制剂。
CN201910568810.XA 2019-06-27 2019-06-27 一种her-2人源化单克隆抗体长效缓释制剂及其制备方法 Pending CN110638745A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201910568810.XA CN110638745A (zh) 2019-06-27 2019-06-27 一种her-2人源化单克隆抗体长效缓释制剂及其制备方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201910568810.XA CN110638745A (zh) 2019-06-27 2019-06-27 一种her-2人源化单克隆抗体长效缓释制剂及其制备方法

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN110638745A true CN110638745A (zh) 2020-01-03

Family

ID=69009398

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201910568810.XA Pending CN110638745A (zh) 2019-06-27 2019-06-27 一种her-2人源化单克隆抗体长效缓释制剂及其制备方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN110638745A (zh)

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN113248723A (zh) * 2021-04-13 2021-08-13 康汉医药(广州)有限公司 一种蛋白药物缓释制剂的制备方法
CN117547654A (zh) * 2023-12-04 2024-02-13 上海长征医院 一种仿生负载rhBMP-2骨修复材料及其制备方法与应用

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101862454A (zh) * 2009-04-20 2010-10-20 复旦大学 一种物理交联的水凝胶组合物及其制备方法和应用
US20110070188A1 (en) * 2009-09-18 2011-03-24 Protherics Salt Lake City, Inc. Bab triblock polymers having improved release characteristics
CN104784105A (zh) * 2015-04-17 2015-07-22 北京大学 一种单克隆抗体药物的凝胶组合物

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101862454A (zh) * 2009-04-20 2010-10-20 复旦大学 一种物理交联的水凝胶组合物及其制备方法和应用
US20110070188A1 (en) * 2009-09-18 2011-03-24 Protherics Salt Lake City, Inc. Bab triblock polymers having improved release characteristics
CN104784105A (zh) * 2015-04-17 2015-07-22 北京大学 一种单克隆抗体药物的凝胶组合物

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN113248723A (zh) * 2021-04-13 2021-08-13 康汉医药(广州)有限公司 一种蛋白药物缓释制剂的制备方法
CN117547654A (zh) * 2023-12-04 2024-02-13 上海长征医院 一种仿生负载rhBMP-2骨修复材料及其制备方法与应用

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JP5121790B2 (ja) 薬剤送達のための生物分解性ブロックコポリマー組成物
TW592726B (en) PLA/PLGA oligomers combined with block copolymers for enhancing solubility of a drug in water
AU2001294828B2 (en) Thermogelling biodegradable aqueous polymer solution
Wu et al. Engineering bioresponsive hydrogels toward healthcare applications
US20050042293A1 (en) Polymeric systems for drug delivery and uses thereof
Kanwar et al. In situ forming depot as sustained-release drug delivery systems
Lym et al. Sulfamethazine-based pH-sensitive hydrogels with potential application for transcatheter arterial chemoembolization therapy
US9364545B2 (en) Thermosensitive injectable hydrogel for drug delivery
US20040077780A1 (en) Thermogelling oligopeptide polymers
JPH11510837A (ja) 薬物送達のための制御された放出薬剤および組織処置薬剤としての使用のためのマルチブロック生分解性ヒドロゲル
Tran et al. Injectable drug-eluting elastomeric polymer: a novel submucosal injection material
CN107952079B (zh) 一种联合给药的热致凝胶缓释注射剂及其制备方法
CN111150702B (zh) 一种凝胶药物缓释制剂及其制备方法与应用
Jin et al. Injectable corilagin/low molecular weight chitosan/PLGA-PEG-PLGA thermosensitive hydrogels for localized cancer therapy and promoting drug infiltration by modulation of tumor microenvironment
US20150099808A1 (en) Amphiphilic copolymers and compositions containing such polymers
Singh et al. Injectable in-situ gelling controlled release drug delivery system
CN101283966A (zh) 一种生物降解性水凝胶控释制剂及其制备方法和应用
CA2998541A1 (en) Gelling compositions for treating malignant tumours and/or preventing tumour recurrence
CN103998069A (zh) 可吸收的原位凝胶形成系统、其制备方法及用途
CN110638745A (zh) 一种her-2人源化单克隆抗体长效缓释制剂及其制备方法
CN1916050B (zh) 可注射温敏性聚(丙交酯-乙交酯-对二氧六环酮)-聚乙二醇嵌段共聚物水凝胶
Zhai et al. Local sustained release of PD-1 monoclonal antibody and lenvatinib by thermo-sensitive hydrogel for improving tumor immunotherapy
TW202216118A (zh) 可注射的高藥物載量奈米合成膠體及其製備方法
Fomina et al. Biocompatible hydrogels based on biodegradable polyesters and their copolymers
CN111110626A (zh) 一种基于疏水改性吉西他滨衍生物的凝胶药物缓释制剂及其制备方法与应用

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination