CN110631882A - 一种瑞氏吉姆萨染色在线实时混合染液的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种瑞氏吉姆萨染色在线实时混合染液的方法，通过瑞氏染色机中的嵌入式系统协同工作，在线实时混合染液。本发明应用到瑞氏染色仪中，可根据染色需求灵活配置瑞氏染色A液和B液的混合比例，进行在线实时混合，经混合液染色后，细胞上色均匀、残渣极少，利于观察；混合液现混现用并实时监控混合时长，防止混合时间过长出现过多悬浮物，影响后续染色效果；混合器使用完毕后可自动进行混合器内部清洗，保证混合器内部的清洁。实现瑞氏染色仪的全自动化，本发明有效减少残渣且染色均匀，保证了瑞氏染色的效果。
Description
技术领域
本发明涉及瑞氏吉姆萨染色技术领域，特别涉及一种瑞氏吉姆萨染色在线实时混合染液的方法。
背景技术
瑞氏吉姆萨染色法是瑞氏吉姆萨染液对细胞染色，是目前最常用而又简单的方法，主要用于血液和骨髓的染色，其染色原理是碱性蛋白质的嗜酸性颗粒与酸性染料伊红结合，染成粉红色；酸性的细胞核蛋白和淋巴细胞胞浆与碱性染料美蓝或天青结合，染成紫蓝色；中性颗粒呈等电状态与伊红和美蓝均可结合，染成淡紫色。而染色过程中的pH对细胞染色也有巨大影响，由于细胞内蛋白质系两性电解质，所带电荷随溶液pH而定，在偏酸性环境中下正电荷增多，易与伊红结合，染色偏红；在偏碱性环境中负电荷增多，易与美蓝或天青结合，染色偏蓝。因此细胞染色对氢离子浓度十分敏感，所以在染色过程中必须使用缓冲液，从而保证检测结果准确率。
传统手工染色步骤：
在一般瑞氏吉姆萨染色流程中，先对样本用滴管滴注瑞氏吉姆萨染色液A液覆盖住菌片为宜；
用滴管等量或者按比例多次用滴管滴注瑞氏吉姆萨染色液B液；
用吸耳球将两种染液吹匀，进行染色，时间约15-20分钟。
手工染色的缺陷：
由于在染色过程中是用滴管先后滴注染液，不能保证A液与B液按正确比例混合，而且需要吸耳球吹匀，两种染液混合后会有反应，慢慢产生漂浮物因此染色过程耗时、耗力，会出现杂质颗粒多、杂质的沉降，易残留附着在涂片表面，影响细胞染色的正确判读。
由于瑞氏染色仪内载玻片是竖直插在载波盘上，如果按照传统的染色方法进行染色，需要先喷上瑞氏吉姆萨染液A液，后几秒内就会流下来，再喷B液时，载玻片上根本做不到两种染液的混合，染色失败。机染不能有效的实现。
发明内容
本发明的目的是提供一种瑞氏吉姆萨染色在线实时染液混合的方法，拟解决现有的机染染色技术中的缺陷，减少出现杂质沉降残留、染色异常等现象，提高样本染色效果。
实现本发明目的的具体技术方案是：
一种瑞氏吉姆萨染色在线实时混合染液的方法，其特征在于，该方法包括以下具体步骤：
步骤1：取瑞氏色素和吉姆萨色素溶于分析纯甲醇溶液中配置成的溶液存放7-14天后，把溶解好的溶液过滤后，配置成A液；配制好的A液加入瑞氏染色机的A液容器；其中，瑞氏色素与吉姆萨色素物质量的比为1∶1；
步骤2：取无水磷酸二氢钾和无水磷酸氢二钠加蒸馏水使其全部溶解配置成B液；配制好的B液加入瑞氏染色机的B液容器；其中，无水磷酸二氢钾与无水磷酸氢二钠物质量的比为1.5∶1；
步骤3：将A泵泵压设定在0.8-1.3mpa；流量在130-190ml/min；B泵泵压设定0.9-1.4mpa；流量在120-170ml/min；根据A泵、B泵的流速和时间，按照A液、B液的比例1∶1~4计算所需瑞氏吉姆萨染液A、B液容量后，用A泵从A液容器中泵出A液注入混合器，用B泵从B液容器中泵出B液注入混合器；
步骤4：混合后用C泵从混合器中抽出混合液到喷头进行染色；泵出时记录泵流量和时间，计算使用混合液的量和混合器中的余量；
步骤5：监控定时器实时监测混合时长，时间设定1-5小时，在下一次染色前检测是否超过时限，若超过时限，混合器的泵自动工作，清空混合器内液体，使混合器内溶液为零；若不超时限，检测继续；
步骤6：在染色前若混合器中的余量未达到最低染色量，按照A液、B液的比例1∶1~4计算所需瑞氏吉姆萨染液A、B液容量，A液填充入混合器、B液填充入混合器，直至容量达到要求，进行混合，混合后用C泵从混合器中泵出混合液到喷头进行染色；
步骤7：每12小时清洗混合器和管路；先将酒精注入混合器中，等待5-7分钟，将管壁、泵、喷头内的附着物溶解后，再用泵将酒精泵出，排空管路；
步骤8：循环重复步骤1-7，实现在线实时混合染液。
本发明采取混合器装置进行染色液在线实时混合，现用现混且实时监控混合时长；根据染色效果，还可调整混合比例。本发明由于采取以上技术方案，其具有以下优点：
1）根据染色需求灵活设置染色液A、B混合比例，比例可以设定1∶1~1∶4，进行全自动染色；
2）染色液可在线实时混合，现混现用，细胞上色均匀、残渣极少，利于观察；
3）实时监控混合染液混合时长，防止混合时间超时引起过多的悬浮物，影响染色效果；
4）仪器定期自动对混合器内部清洗，清除混合液残渣，防止堵塞管路。
附图说明
图1为本发明混合器工作流程图；
图2为本发明混合过程流程图；
图3为本发明混合器监控流程图。
具体实施方式
下面结合附图对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
本发明包括以下具体步骤：
1）称取瑞氏色素0.8g和吉姆萨色素0.8g溶于500ml的无水甲醇溶液中存放7-14天后，把溶解好的染液过滤后就是配置成的A液。配制好的A液提前加入瑞氏染色机的A液样品容器；
2）称取无水磷酸二氢钾0.3g和无水磷酸氢二钠0.2g加蒸馏水至1000ml使其全部溶解，配置成B液。配制好的B液提前加入瑞氏染色机的B液样品容器；
3）参阅图1，将A液用泵从A液样品容器中抽出10ml~20ml液体注入混合器底部，再将B液用泵从B液样品容器中抽出10ml~80ml注入混合器底部，泵压自动将两种混合液混合，混合后用泵从混合器中抽出混合液到喷头进行染色；泵出时记录泵流量和时间，计算使用混合液的量和混合器中的余量；
4）监控定时器实时监测混合时长，时间设定1-5小时，在下一次染色前检测是否超过时限，若超过时限，混合器的泵自动工作，清空混合器内液体，使混合器内溶液为零；若不超时限，检测继续；
5）在染色前若混合器中的余量未达到最低染色量，按照A液、B液的比例1∶1~4计算所需瑞氏吉姆萨染液A、B液容量，A液填充入混合器、B液填充入混合器，直至容量达到要求，进行混合，混合后用泵从混合器中抽出混合液到喷头进行染色；
6）混合液中慢慢产生的漂浮物会造成混合器、管路、泵、喷头内蓄积，需定时每12小时清洗混合器和管路；先将酒精20ml注入混合器中，等待5-7分钟，将管壁、泵、喷头内的附着物溶解后，再用泵将酒精泵出，排空管路；
7）循环重复步骤1）-6），实现在线实时混合染液。
实施例
本实施例包括以下步骤：
1）准备瑞氏吉姆萨染色液A液500ml、瑞氏吉姆萨染色液B液500ml、混合器及监控定时器；
2）如图2所示，瑞氏染色机工作，混合液混合时，A泵泵压设定在1.0mpa；流量在150ml/min；B泵泵压设定0.9mpa；流量在140ml/min。根据A、B泵的流速和时间，按照A、B液的比例1∶1进行计算所需瑞氏吉姆萨染液A、B液容量后，用A泵从A液容器中抽出A液25ml注入混合器，用B泵从B液容器中抽出B液25ml注入混合器，混合液的总量定为50ml；
3）混合后用泵从混合器中抽出混合液到喷头进行染色；泵出时记录泵流量和时间，计算使用混合液的量和混合器中的余量；单次染色结束。
4）参阅图3，监控定时器实时监测混合时长，时间设定1小时，在下一次染色前检测是否超过时限，若超过时限，混合器的泵自动工作，清空混合器内液体，使混合器内溶液为零；若不超时限，检测继续；
5）在染色前若混合器中的余量少于最低染色所需染色液容量30ml，只有10ml，需要再混合液体的量是50-10=40ml按照A液、B液的比例1∶1计算所需瑞氏吉姆萨染液A、B液容量，A液20ml填充入混合器、B液20ml填充入混合器，直至总容量达到要求50ml，混合后用泵从混合器中抽出混合液到喷头进行染色；
6）混合液中慢慢产生的漂浮物会造成混合器、管路、泵、喷头内蓄积，需定时每12小时清洗混合器和管路；先将酒精注入混合器中，等待5-7分钟，将管壁、泵、喷头内的附着物溶解后，再用泵将酒精泵出，排空管路；
7）循环重复步骤1-5，实现在线实时混合染液。
对如何判断混合器染液容量是否达到最低染色所需染色液容量进行进一步说明。
最低染色所需染色液容量是指一次染色过程中需要的最小染色量，设定为30ml，计算方法是先用混合器泵流速和和喷出染液染色的时间算出使用染液的量，用总量减去使用量等于剩余染液容量。
参阅图3，在染色仪开机时，监控定时器即时且持续处于开启状态，通过监控定时器记录混合器的液体输入时间，根据流量计算输入染液容量，更新混合器剩余染液容量。
同时，通过监控定时器记录混合器的染液输出时间，根据流量计算输出染液容量，更新混合器剩余染液容量。
以上所述仅为本发明的优选实施例，并非因此限制本发明的专利范围，凡是在本发明的发明构思下，利用本发明说明书及附图内容所作的等效结构变换，或直接/间接运用在其他相关的技术领域均包括在本发明的专利保护范围内。
Claims (3)
1.一种瑞氏吉姆萨染色在线实时混合染液的方法，其特征在于，该方法包括以下具体步骤：
步骤1：取瑞氏色素和吉姆萨色素溶于分析纯甲醇溶液中配置成的溶液存放7-14天后，把溶解好的溶液过滤后，配置成A液；配制好的A液加入瑞氏染色机的A液容器；其中，瑞氏色素与吉姆萨色素物质量的比为1∶1；
步骤2：取无水磷酸二氢钾和无水磷酸氢二钠加蒸馏水使其全部溶解配置成B液；配制好的B液加入瑞氏染色机的B液容器；其中，无水磷酸二氢钾与无水磷酸氢二钠物质量的比为1.5∶1；
步骤3：将A泵泵压设定在0.8-1.3mpa；流量在130-190ml/min；B泵泵压设定0.9-1.4mpa；流量在120-170ml/min；根据A泵、B泵的流速和时间，按照A液、B液的比例1∶1~4计算所需瑞氏吉姆萨染液A、B液容量后，用A泵从A液容器中泵出A液注入混合器，用B泵从B液容器中泵出B液注入混合器；
步骤4：混合后用C泵从混合器中抽出混合液到喷头进行染色；泵出时记录泵流量和时间，计算使用混合液的量和混合器中的余量；
步骤5：监控定时器实时监测混合时长，时间设定1-5小时，在下一次染色前检测是否超过时限，若超过时限，混合器的泵自动工作，清空混合器内液体，使混合器内溶液为零；若不超时限，检测继续；
步骤6：在染色前若混合器中的余量未达到最低染色量，按照A液、B液的比例1∶1~4计算所需瑞氏吉姆萨染液A、B液容量，A液填充入混合器、B液填充入混合器，直至容量达到要求，进行混合，混合后用C泵从混合器中泵出混合液到喷头进行染色；
步骤7：每12小时清洗混合器和管路；先将酒精注入混合器中，等待5-7分钟，将管壁、泵、喷头内的附着物溶解后，再用泵将酒精泵出，排空管路；
步骤8：循环重复步骤1-7，实现在线实时混合染液。
2.根据权利要求1所述的在线实时混合染液的方法，其特征在于，所述计算使用混合液的量和混合器中的余量，具体为：混合液的使用量是根据C泵的流速和时间计算得出，混合器中的余量是根据总量减去使用量。
3.根据权利要求1所述的在线实时混合染液的方法，其特征在于，所述最低染色量是染色的最少使用量设定为20~30ml。
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