CN110604085A

CN110604085A - 一种基于聚氨酯生物膜的凡纳滨对虾高密度标苗方法

Info

Publication number: CN110604085A
Application number: CN201910999131.8A
Authority: CN
Inventors: 宋志文; 刘佳; 徐爱玲; 杨帆; 唐敬超; 陆继哲; 牛原青; 周涛
Original assignee: Qingdao University of Technology
Current assignee: Qingdao University of Technology
Priority date: 2019-10-21
Filing date: 2019-10-21
Publication date: 2019-12-24
Anticipated expiration: 2039-10-21
Also published as: WO2021077662A1; KR20220093136A; CN110604085B

Abstract

本发明公开了一种基于聚氨酯生物膜的凡纳滨对虾高密度标苗方法，以聚氨酯泡沫作为生物膜载体；标苗过程在配备控温、曝气装置以及悬挂填料袋横梁的养殖池(桶)实现；利用海水素配制所需盐度人工海水；用孔径2～5毫米的网袋将挂膜聚氨酯填料悬挂在凡纳滨对虾标苗池中；按照密度1～3万尾/立方米水体投放凡纳滨对虾P5～P10苗，进行标苗过程管理；整个标苗过程为15～30天，可将凡纳滨对虾淡化至3‰盐度以下；标苗结束后，将填料袋冲洗去除悬浮物质后可重复使用。该方法利用海水素配制所需盐度人工海水，用预先挂膜的聚氨酯泡沫去除水体中氨和亚硝酸盐等有毒物质，无需添加有机碳源，实现凡纳滨对虾高密度标粗。

Description

一种基于聚氨酯生物膜的凡纳滨对虾高密度标苗方法

技术领域

本发明涉及凡纳滨对虾标苗技术，尤其涉及的是一种基于聚氨酯生物膜的凡纳滨对虾高密度标苗方法。

背景技术

我国是世界上最大的水产养殖国，养殖年产量居世界各国之首，其中对虾养殖面积在400万亩以上。凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)，也称南美白对虾，因其含肉率高、肉质鲜美，广受消费者喜爱，为世界三大经济虾种之一，具有生长快、养殖周期短、环境适应范围广、饵料要求低、抗逆性强、品质高、可冰鲜运输、加工性能好等优点，可以采取纯淡水、半咸水、海水多种养殖模式，产量占世界养殖虾总产量的70％。自1988年引入我国，经历了30年发展，已成为国内水产养殖的支柱性产业，年产量最高峰时达160多万吨，占全国养殖对虾总产量90％，占世界养殖产量50％，年产值逾500亿元。

凡纳滨对虾标苗也称“标粗”，是指将种苗场购进3～10日龄仔虾进行促壮淡化培育，使其达到体长1厘米以上，并将出池盐度调整到养殖户要求范围的过程。标苗对于提高虾苗成活率，缩短养成时间，养成管理和科学投饵有着重要意义。在标苗过程中，水质净化是首要解决的问题，而问题的关键是水体中氨和亚硝酸盐的去除。由于凡纳滨对虾标苗阶段养殖密度大，容易造成水体中氨和亚硝酸盐超标，导致虾苗生长缓慢，易受病害影响，成活率低。

目前改善标苗过程水质的方法主要有大量换水、生物絮团技术(Biofloctechnology，BFT)和循环水养殖系统模式(Recirculating aquaculture systems，RAS)等。频繁换水不仅浪费水资源，污染环境，还会致使虾苗产生应激。循环水养殖系统模式被认为是一种环境友好的养殖模式，但其投资、运营成本及技术要求高，大面积推广难度较大。生物絮团技术通过添加有机碳源，调节C/N比，提高水中异养菌数量，利用微生物同化无机氮，絮体被对虾二次摄食，达到调控水质、促进营养物质循环、降低饲料系数的目的，该技术虽然换水量较小，但是也存在缺陷：(1)技术操作和管理过程较为复杂，在实际生产中稳定控制难度较大；(2)采用投加有机碳源促进异养菌生长，对硝化菌群生长不利，如果调控不当，会造成氨和亚硝酸盐积累；(3)可能导致弧菌爆发和絮体积累。

生物膜法主要通过向系统中投加生物膜载体，让硝化功能微生物附着生长，不仅可以有效去除含氮化合物，尤其是高毒性的氨和亚硝酸盐，提高对虾的存活率和生长率，而且形成的生物膜可作为虾的额外食物来源，提供必要营养素，如不饱和脂肪酸、氨基酸和维生素等。

硝化功能微生物主要包括氨氧化微生物(氨氧化细菌AOB和氨氧化古菌AOA)和亚硝酸盐氧化菌(NOB)，AOB和AOA将氨转化为亚硝酸盐，NOB则进一步将亚硝酸盐转化为低毒性的硝酸盐。由于AOB、AOA和NOB属自养型微生物，代时长，繁殖速度慢、对环境因子变化敏感，使其在与异养菌竞争中处于劣势。如果将生物膜填料直接投加到养殖(标苗)池后，在其挂膜过程中水质会出现规律性变化。首先，养殖(标苗)池中存在一定数量的异养菌、氨氧化微生物和亚硝酸盐氧化菌，投加营养后，异养菌逐渐活跃起来，在吸收转化有机物同时，释放出氨，氨氧化微生物再将氨转化为亚硝酸盐。由于这两类微生物的繁殖速率相差极大，氨氧化微生物世代时间为24～36小时，而异养菌仅约20分钟，因而使其初期数量过于悬殊。随着异养菌繁殖，氨浓度也不断增加，当氨含量超出氨氧化微生物吸收消耗范围之外，氨在水体中迅速累积下来，并逐渐升高达到峰值。其后，随着氨氧化微生物不断增殖，氨氧化作用逐渐增强，氨浓度开始逐渐下降，随之亚硝酸盐浓度开始逐渐升高，亚硝酸盐氧化细菌开始发挥作用。与氨氧化细菌相比，亚硝酸盐氧化细菌代时更长，因此亚硝酸盐的转化更为缓慢，导致亚硝酸盐逐渐积累并出现峰值。由于标苗时间一般为20～30天，加上虾苗密度大，依靠直接投加填料自然挂膜过程会在标苗后期出现亚硝酸盐持续升高现象，导致虾苗生病或死亡。

发明内容

本发明的目的是为了克服现有凡纳滨对虾标粗方法中存在的水质调控难度大，虾苗成活率低、生长缓慢等问题，在充分考虑凡纳滨对虾生活习性、养殖池空间和硝化功能微生物特性的基础上，提供一种利用聚氨酯附着生物膜实现凡纳滨对虾高密度标苗方法，具有无需外加有机碳源，水质稳定性好，防止致病菌侵入，减少对虾发病率，可根据污染物浓度增减填料袋数量，使用方便等优点。

为了实现上述目的，本发明涉及的利用聚氨酯附着生物膜实现凡纳滨对虾高密度标苗方法通过如下技术方案实现：

一种基于聚氨酯生物膜的凡纳滨对虾高密度标苗方法，以聚氨酯泡沫作为生物膜载体，通过间歇曝气、能源物质供给调控氨氧化功能微生物和亚硝酸盐氧化细菌的增殖过程，预先形成具有较高硝化活性的生物膜，其亚硝酸盐氧化速率>1.0mg/g·h，并且亚硝酸盐氧化速率与氨氧化速率比值为4～8；标苗过程在配备控温、曝气装置以及悬挂填料袋横梁的0.2～60立方米水体的养殖池(桶)实现；利用海水素配制所需盐度人工海水；用孔径2～5毫米的网袋将挂膜聚氨酯填料悬挂在凡纳滨对虾标苗池中，投加量为标苗水体的0.5％～2.5％(V/V)；按照密度1～3万尾/立方米水体投放凡纳滨对虾P5～P10苗，进行标苗过程管理；整个标苗过程为15～30天，可将凡纳滨对虾淡化至3‰盐度以下；标苗结束后，将填料袋冲洗去除悬浮物质后可重复使用。

所述的基于聚氨酯生物膜的凡纳滨对虾高密度标苗方法，养殖池(桶)的最佳水体10～20立方米。

所述的基于聚氨酯生物膜的凡纳滨对虾高密度标苗方法，人工海水盐度范围可在3‰～45‰，优选的盐度范围为15‰～30‰。

所述的基于聚氨酯生物膜的凡纳滨对虾高密度标苗方法，以聚氨酯泡沫作为载体的生物膜的制备方法为：将1～2厘米聚氨酯泡沫立方块，清洗后按20％～40％(V/V)置于装有人工海水的塑料桶或帆布池或水泥池中，人工海水盐度根据所需盐度进行配制，范围在3‰～45‰，其中适宜标苗的盐度范围为15‰～30‰，还加入1％～3％(v/v)硝化细菌制剂，0.1％(v/v)微量元素液和0.01％(w/v)酵母膏；微量元素溶液配方为：

微量元素液配方

按50～300毫克/升亚硝氮浓度添加亚硝酸钠，每隔12小时测定亚硝氮浓度，当亚硝氮浓度低于0.5mg/L时，再次加入亚硝酸钠，累计添加4～6次，然后按照20～50毫克/升浓度加入氯化铵，每隔12小时测定氨氮浓度，当氨氮浓度小于0.1mg/L时，再次加入氯化铵，累计添加1～2次，即完成聚氨酯生物膜的培养过程。

所述的基于聚氨酯生物膜的凡纳滨对虾高密度标苗方法，在整个培养过程中，采用间歇曝气的方式，每隔2～4小时停止曝气15～30分钟，期间温度和溶解氧(DO)分别控制在28～30℃和4～6mg/L，时间持续20～25天。

凡纳滨对虾标苗池处理

本方法可在带有曝气、控温功能的塑料桶、水泥池、帆布池和PVC池中实现，水体可在0.2～60立方米范围，最佳水体为10～20立方米，池高1.0～1.2米。标苗池用聚维酮碘(10％)或二氧化氯消毒处理，冲洗后，加水(挂100目筛网)至一定水位(40～60厘米)，然后按照虾苗所需盐度投加海水素。将预先挂膜的聚氨酯泡沫装填在涤纶材质网袋中，网袋大小为20～60升，网孔大小2～5mm，网袋带有拉链开口以方便填料的装入和取出。按0.5～2.5％(V/V)在养殖池中放置网袋，同时在袋子中加入1个气石补充溶解氧。

(3)凡纳滨对虾苗种投放

按1～3万尾/立方水体投放P5～P10虾苗，如苗袋水温与标苗池差异较大，不要直接把苗倒入标苗池，一般情况下苗袋与标苗池水温每差1℃缓苗时间应增加0.5小时。如水温相差不到1℃，可直接倒入。

(4)标苗过程管理

淡化初期(1～3天),每天投喂卤虫3次,投喂时间为9:00、15:00、21:00，投喂量按照2g/1万尾(孵化率95％)。3天后除加蠕虫外，按10万尾虾苗每天投喂200-500g/天量投加虾料，5次/天投喂；再过3天后改为只投喂虾料。投料过程中应注意尽量远离填料袋。自投苗第3天开始淡化，每天盐度变化不高于1‰～3‰。每天上午添加淡水5～10厘米，3～5天后改为每天上午排水10～20厘米，接着加淡水5～10厘米，下午再加淡水5～10厘米，维持水位不变。盐度小于5‰后，每天上午排水20～30厘米接着添加淡水10～15厘米，下午添加10～15厘米，淡化至所需盐度。总计淡化15～30天。

标苗过程中，每隔20～30天，可将聚氨酯填料从网袋取出，用同盐度的清水冲洗，去除附着的悬浮物，然后将填料填袋后重新放入标苗池使用。

(5)日常检测指标

日常检测指标包括：水温、盐度、pH、溶解氧、氨氮、亚硝氮。

标苗期间控制温度28～30℃，溶解氧>6.0mg/L，氨氮<0.1mg/L，亚硝氮<0.5mg/L。

(6)出苗

出苗率可达80％以上，规格1.0～2.5厘米，所获苗种均健壮活泼、肌肉充实、肠道饱满，全身光洁无附着物，对外来刺激反应敏感，有顶水游动和沾壁行为。

(7)标苗结束后，填料袋用清水冲洗干净后，可以反复使用。

本发明针对凡纳滨对虾标苗过程的水质要求，利用氨氧化功能微生物和亚硝酸盐氧化细菌具有附着生长的特性，采用吸附的方法固定氨氧化功能微生物和亚硝酸盐氧化细菌，并通过间歇曝气、能源物质供给调控氨氧化功能微生物和亚硝酸盐氧化细菌的增殖过程，使一定数量且比例适当的氨氧化微生物和亚硝酸盐氧化菌在聚氨酯上生长形成稳定生物膜，并确定了聚氨酯生物膜氨氧化速率和亚硝酸盐氧化速率的大小和比值。然后将挂膜聚氨酯用网袋悬挂在凡纳滨对虾标苗池中，使标苗池中异养菌、氨氧化微生物、亚硝酸盐氧化菌数量达到平衡，从而在标苗过程中产生的氨和亚硝酸盐及时得到转化，不会出现氨和亚硝酸盐积累，实现凡纳滨对虾高密度标粗。该方法无需外加有机碳源，具有水质稳定性好，弧菌数量低，虾苗成活率高，可根据污染物浓度增减填料袋数量，使用方便等特点，特别适用于内陆地区高密度凡纳滨对虾标苗。

附图说明

图1聚氨酯泡沫挂膜前后及使用后表面形态变化(边长为1-2cm的立方体)；(A)挂膜前；(B)挂膜后；(C)使用10天后，(D)使用20天后。

图2聚氨酯泡沫挂膜后氨氧化率(AOR)和亚硝酸盐氧化率(NOR)随时间变化情况

图3为本发明涉及实施例2标苗池的结构图；1横梁，2水面，3填料袋，4气石，5阀门，6排水管。

图4为本发明涉及实施例2标苗过程中氨氮和亚硝氮浓度变化情况。

具体实施方式

以下结合具体实施例，对本发明进行详细说明。

下述实施例中所使用的试验方法如无特殊说明，均为常规方法；所使用的材料、试剂等，如无特殊说明，为可从商业途径得到的试剂和材料。

实施例1：

聚氨酯泡沫挂膜可以通过以下步骤实现：

将0.04m³聚氨酯泡沫(规格：2厘米)清洗后置于含0.1m³人工海水的塑料桶中，人工海水盐度为30‰，加入2％(v/v)硝化细菌制剂(青岛海益生环境科技有限公司)，0.1％(v/v)微量元素液和0.01％(w/v)酵母膏。微量元素液组成见表1。

表1微量元素液配方

在生物膜培养过程中，共分5次添加亚硝酸钠400g，每次添加80g。当亚硝氮浓度降至0.5mg/L以下时，再次加入亚硝酸钠；加完5次亚硝酸钠之后，分2次添加60g氯化铵，每次添加30克，当氨氮浓度小于0.5mg/L时，即完成聚氨酯生物膜的培养过程，在整个培养过程中，每隔2小时停止曝气15分钟，期间温度和溶解氧(DO)分别保持在28±1.0℃和4.5～6.0mg/L。

挂膜结束后，随机取8个聚氨酯泡沫单体，分成两组，加入到2个含有300毫升人工海水、0.1％(v/v)微量元素溶和0.01％(w/v)酵母膏的500毫升锥形瓶中，分别加入亚硝酸钠和氯化铵使氨氮和亚硝氮初始浓度为50mg/L和200mg/L，然后在150转/分，28℃条件下摇瓶培养，每12小时测量一次氨氮和亚硝酸盐氮浓度，按以下公式计算氨氧化率(AOR)和亚硝酸盐氧化率(NOR)。AOR或NOR＝K·V/W，其中K是氨氮或亚硝氮浓度(mg/L)散点图的斜率，V为溶液体积，W为4个氨酯泡沫单体的干重(g)，最终测定AOR为0.250mg/g·h，NOR为1.475mg/g·h，NOR与AOR比值为5.9。

采用荧光原位杂交方法(FISH)分析聚氨酯生物膜中氨氧化细菌(AOB)和亚硝酸盐氧化细菌(NOB)分布情况，其中AOB采用NS0190探针，序列为5’-CGATCCCTGCTTTTCTCC-3’，探针5’-端用FAM标记；NOB采用NIT3探针，序列为5’-5CCTGTGCTCCATGCTCCG-3’，探针5’-端用HEX标记，竞争性探针CNIT3序列为5’-CCTGTGCTCCAGGCTCCG-3’。检测结果见表2，聚氨酯生物膜中AOB丰度为24.8％，NOB丰度为72.7％。表明采用本发明方法能够很好地调控聚氨酯生物膜中氨氧化微生物和亚硝酸盐氧化菌的组成。

表2聚氨酯生物膜FISH检测

为了验证聚氨酯填料生物膜培养过程中亚硝酸钠和氯化铵投加比例的有效性，分别采用不同亚硝酸钠和氯化铵投加量培养聚氨酯填料生物膜，采用FISH方法分析其氨氧化菌和亚硝酸盐氧化菌丰度，挂膜结束后，每组随机取4个聚氨酯泡沫单体，加入到含有300毫升人工海水、0.1％(v/v)微量元素溶和0.01％(w/v)酵母膏的500毫升锥形瓶中，加入氯化铵使氨氮初始浓度为5mg/L，然后在150转/分，28℃条件下摇瓶培养，每4小时测量一次氨氮和亚硝酸盐氮浓度，确定实验过程中亚硝氮峰值浓度。实验结果见表3。从表中可以看出，采用亚硝酸钠/氯化铵为400g/60g投加比例，其亚硝酸盐氮峰值浓度最低，仅为0.06mg/L，而其他实验组亚硝酸盐氮峰值浓度都比较高，且随着氯化铵投加量的增加，AOB的丰度也越高，相应亚硝酸氮峰值浓度也越高。

表3不同亚硝酸钠和氯化铵投加量制备聚氨酯生物膜对氨氮的转化性能

为了验证采用上述聚氨酯泡沫挂膜方法的有效性，比较分析了不同挂膜方法的差异，分别采取溶解氧控制、间歇曝气、自然挂膜方法，实验在有效体积为20升的玻璃缸进行，玻璃缸内装有用海水素配制盐度30‰人工海水20升，实验组1～6号加入2％(v/v)硝化细菌制剂(青岛海益生环境科技有限公司)，0.1％(v/v)微量元素液和0.01％(w/v)酵母膏。用实验组7号采用自然挂膜方式，在玻璃缸中加入1.5克对虾饵料。采用加热棒控制水温28℃。将30％(V/V)聚氨酯清洗后浸没在水面之下。然后实验过程参考上述方法，共分5次添加亚硝酸钠80g，每次添加16g。当亚硝氮浓度降至0.5mg/L以下时，再次加入亚硝酸钠；加完5次亚硝酸钠之后，分2次添加12g氯化铵，每次添加6克，当氨氮浓度小于0.5mg/L时，即完成聚氨酯生物膜的培养过程，具体控制指标和实验结果见表4。在每隔2小时停止曝气15分钟的间歇曝气条件下，聚氨酯完成挂膜的时间最快(22天)，且最终AOR和BOR值最高。

表4 7种聚氨酯挂膜方法的控制指标和实验结果

将制成聚氨酯生物膜活性填料用塑料密封袋密封保存，每隔1个月测定氨氧化率(AOR)和亚硝酸盐氧化率(NOR)变化情况，结果见图2，从图2中可以看出经过1年时间，其氨氧化率(AOR)和亚硝酸盐氧化率(NOR)仍能维持较高活性，分别相当于初始值的48％和55％。

实施例2：

一种基于聚氨酯生物膜的凡纳滨对虾高密度标苗方法

标苗池由帆布材料制成，有效容积2.0m³(长：2.0m，宽：1.0m，高：1.2m)。池内安装两排共16个气石。池内开始时充填0.6m高人工海水，含盐量18‰。将0.04m³预先挂膜的聚氨酯泡沫装在两个网孔大小为2mm的涤纶网袋中，将网袋放置在标苗池中间，并保持浸没状态，每个网袋中加入一个气石。

将3万尾P8凡纳滨对虾虾苗投放到标苗池，初期(1～3天),每天投喂卤虫3次,投喂时间为9:00、15:00、21:00，投喂量按照2g/1万尾(孵化率95％)；3天后除加蠕虫外，按10万尾虾苗每天投喂200-500g/天量投加虾料，5次/天投喂；再过3天后改为只投喂虾料。投料过程中应注意尽量远离填料袋。标苗过程中，每天对虾苗生长和剩余饵料进行评估，并用于指导饲料配给。

自投苗第3天开始淡化，每天上午添加淡水10厘米，到第6天，水位升至100厘米，然后每天上午排水10厘米，接着加淡水5厘米，下午再加淡水5厘米，维持水位不变。盐度小于5‰后，每天上午排水20厘米接着添加淡水10厘米，下午添加10厘米。到第18天时，盐度降至2.9，继续养殖到第25天开始分苗。虾苗平均体长2.1cm，平均体重0.18克，成活率为85.2％。

在标苗过程中养殖水体氨氮浓度始终低于0.1毫克/升，亚硝氮浓度在前12天低于0.2毫克/升，之后有所上升，但始终低于0.5毫克/升；硝氮呈逐渐升高趋势，从2.1毫克/升增至8.3毫克/升，pH则由7.83降至7.35。

实施例3：

一种基于聚氨酯生物膜的凡纳滨对虾高密度标苗方法

为验证一种基于聚氨酯生物膜的凡纳滨对虾高密度标苗方法的有效性，选取2个水泥池进行验证，养殖池大小为4.0米×3.0米×1.2米，水深1.0米，水体体积为12.0立方米，用海水晶调节盐度为18‰，实验期间控制温度28℃，溶解氧7.0-8.5毫克/升；养殖池I加入3个挂膜聚氨酯填料网袋，网袋孔径2毫米，总体积为0.12立方米，占养殖水体总体积的1％。养殖池II不添加聚氨酯填料，只依靠换水净化水质。

分别将15万尾P5虾苗投放到两个标苗池，饵料投喂方法同实施例2。自投苗第3天开始淡化，标苗池I淡化方法与实施例2方法相同，其在整个标苗过程中其水质变化情况与实施例2也基本相同，氨氮始终在0.1毫克/升以下，亚硝氮在0.4毫克/升以下。标苗池II在前5天水质较为稳定，之后亚硝氮开始升高并在第8天的时候升至0.5毫克/升，之后不得不每天换水以保证亚硝氮在0.5毫克/升以下，到第15天每天换水量逐渐提高到60％～80％，对虾应激现象比严重。

标苗池I养殖到第25天开始分苗。虾苗平均体长2.1cm，平均体重0.18克，成活率为86.4％。标苗池II由于后期换水量大，对虾应激严重，只养殖到16天即结束标苗过程，虾苗平均体长1.1cm，平均体重0.12克，成活率为55.7％。

实施例4：

本实施例进一步验证聚氨酯生物膜在凡纳滨对虾养殖中的使用效果。选用1个水体体积为20立方米的水泥池进行凡纳滨对虾养殖试验，养殖池大小为5.0米×4.0米×1.2米，水深1.0米。将地下水经过沉淀、过滤处理后注入养殖池，加海水素使盐度为3‰，养殖池采用穿孔曝气管增氧，溶解氧7.0～8.5毫克/升。水温控制在28±1℃，养殖前期(1～2月)将按照实施例1方法制备挂膜聚氨酯泡沫0.1立方米装填在两个填料袋中，填料袋网孔为2毫米，养殖后期(3～4月)将挂膜聚氨酯泡沫体积增至0.2立方米。养殖过程中每7～10天排污一次，同时补充因蒸发和排污损失的水量。

投放按照实施例2方法标粗淡化的凡纳滨对虾2万尾(密度1000尾/立方米)，养殖过程中按常规方法投饵和水质管理，养殖期间每隔20天左右可以将填料包取出，在同盐度清水中清洗去除吸附的颗粒物，实现聚氨酯填料的吸附能力再生。

定期检测养殖池中的水质变化，主要检测指标包括：温度、pH、盐度、溶解氧、氨氮、亚硝酸盐氮、硝酸盐氮等。在养殖过程中水体氨氮、亚硝氮始终处于较低水平，氨氮小于0.1毫克/升，亚硝氮小于0.5毫克/升，经过96天的养殖，对虾成活率81.2％，饵料系数分别为1.38。

一个养殖周期结束后，采用清水将填料包冲洗干净，集中放置在1个养殖池中保存，保存条件：水体溶解氧4.0mg/L以上，到下一个养殖周期将填料袋重新悬挂在养殖池内使用。

应当理解的是，对本领域普通技术人员来说，可以根据上述说明加以改进或变换，而所有这些改进和变换都应属于本发明所附权利要求的保护范围。

序列表

<110> 青岛理工大学

<120> 一种基于聚氨酯生物膜的凡纳滨对虾高密度标苗方法

<160> 3

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 18

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 1

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<210> 2

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<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

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cctgtgctcc atgctccg 18

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<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 3

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Claims

1.一种基于聚氨酯生物膜的凡纳滨对虾高密度标苗方法，其特征在于，以聚氨酯泡沫作为生物膜载体，通过间歇曝气、能源物质供给调控氨氧化功能微生物和亚硝酸盐氧化细菌的增殖过程，预先形成具有较高硝化活性的生物膜，其亚硝酸盐氧化速率>1.0mg/g·h，并且亚硝酸盐氧化速率与氨氧化速率比值为4～8；标苗过程在配备控温、曝气装置以及悬挂填料袋横梁的0.2～60立方米水体的养殖池(桶)实现；利用海水素配制所需盐度人工海水；用孔径2～5毫米的网袋将挂膜聚氨酯填料悬挂在凡纳滨对虾标苗池中，投加量为标苗水体的0.5％～2.5％(V/V)；按照密度1～3万尾/立方米水体投放凡纳滨对虾P5～P10苗，进行标苗过程管理；整个标苗过程为15～30天，可将凡纳滨对虾淡化至3‰盐度以下；标苗结束后，将填料袋冲洗去除悬浮物质后可重复使用。

2.根据权利要求1所述的基于聚氨酯生物膜的凡纳滨对虾高密度标苗方法，其特征在于，养殖池(桶)的最佳水体10～20立方米。

3.根据权利要求1所述的基于聚氨酯生物膜的凡纳滨对虾高密度标苗方法，其特征在于，人工海水盐度范围可在3‰～45‰。

4.根据权利要求3所述的基于聚氨酯生物膜的凡纳滨对虾高密度标苗方法，其特征在于，人工海水盐度范围为15‰～30‰。

5.根据权利要求1所述的基于聚氨酯生物膜的凡纳滨对虾高密度标苗方法，其特征在于，以聚氨酯泡沫作为载体的生物膜的制备方法为：将1～2厘米聚氨酯泡沫立方块，按20％～40％(V/V)置于装有人工海水的塑料桶或帆布池或水泥池中，人工海水盐度根据所需盐度进行配制，还加入1％～3％(v/v)硝化细菌制剂，0.1％(v/v)微量元素液和0.01％(w/v)酵母膏；微量元素溶液配方为：

微量元素液配方

6.根据权利要求5所述的基于聚氨酯生物膜的凡纳滨对虾高密度标苗方法，其特征在于，在整个培养过程中，采用间歇曝气的方式，每隔2～4小时停止曝气15～30分钟，期间温度和溶解氧(DO)分别控制在28～30℃和4～6mg/L，时间持续20～25天。

7.根据权利要求5所述的基于聚氨酯生物膜的凡纳滨对虾高密度标苗方法，其特征在于，人工海水盐度范围在3‰～45‰。

8.根据权利要求7所述的基于聚氨酯生物膜的凡纳滨对虾高密度标苗方法，其特征在于，标苗的盐度范围为15‰～30‰。