CN110585188A - 脂类及脂类化合物用作药物治疗疼痛及其应用方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了脂类及脂类化合物用作药物治疗疼痛及其应用方法，包括以下脂类的组合物，二十碳五烯酸乙酯(EE‑EPA)、二十二碳五烯酸乙酯(EE‑DPA)二十二碳六烯酸乙酯(EE‑DHA)、亚油酸乙酯(EE‑LA)、花生四烯酸乙基酯(EE‑AA)、12‑羟基二十酸乙酯(EE‑12‑HETE)，亚油酸(LA)、二十二碳六烯酸(DHA)，花生四烯酸(AA)、二十碳五烯酸(EPA)、二十二碳五烯酸(DPA)和12‑羟二十酸(12‑HETE)，其中该DPA系全顺式‑7、10、13、16、19‑碳五烯酸(DPA‑7)，等等，以及多种脂类的组合使用，允许在组合的同时以最佳剂量，通过鞘内，硬膜外，或鼻内给药，这些径路允许重复并连续给药,直接作用于中枢神经系统，使其在抑制或预防疼痛的同时尽量减少这些药物的潜在副作用和阿片类药物的副作用。

Description

脂类及脂类化合物用作药物治疗疼痛及其应用方法

技术领域

本发明涉及脂类作为药物、脂类改良药物及应用方法，特别涉及脂类及脂类化合物用作药物治疗疼痛及其应用方法。

背景技术

持续性疼痛(或慢性疼痛)影响每年超过3亿人。创伤、手术或其他疾病引起的神经性疼痛(NP)是典型的持续性疼痛。NP与多发性病变的神经通路机制有关。与许多其他形式的持续性疼痛一样，常用治疗药物通常对NP无效[Jensen等人，cur.opin.neurol.22(5)：467-74(2009)；Vranken等人，神经系统药物化学制剂9(1)：71-8(2009年)]，如阿片类、非甾体类抗炎药(NSAIDs)、抗惊厥药和抗抑郁药，这些药物通常导致多重副作用，包括长期依赖、成瘾和/或滥用。这种疼痛病每年社会支出超过16000亿美元。不适当的疼痛治疗导致生活质量低下以及社会和情感障碍、成瘾和滥用。因此，有迫切需要找到更有效和适用的止痛药物和预防方法。

因此，发明脂类及脂类化合物治疗疼痛用作药物及其应用方法来解决上述问题很有必要。

发明内容

本发明的目的在于提供脂类及脂类化合物用作药物治疗疼痛及其应用方法，这个脂类化合物包含脂类，改良脂类，可用于NP治疗。本发明还可用于预防或改善阿片类耐药性，戒断、依赖性，成瘾和滥用及毒性。

为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：脂类及脂类化合物用作药物治疗疼痛，包括以下脂类的组合物，二十碳五烯酸乙酯(EE-EPA)、二十二碳五烯酸乙酯(EE-DPA)二十二碳六烯酸乙酯(EE-DHA)、亚油酸乙酯(EE-LA)、花生四烯酸乙基酯(EE-AA)、12-羟基二十酸乙酯(EE-12-HETE)，其包含脂类-亚油酸(LA)、二十二碳六烯酸(DHA)组中选择，花生四烯酸(AA)、二十碳五烯酸(EPA)、二十二碳五烯酸(DPA)和12-羟二十酸(12-HETE)，其中该DPA系全顺式-7、10、13、16、19-碳五烯酸(DPA-7)，其中该DPA系全顺式-4,7,10,13,16-二十二碳五烯酸(DPA-4)，及多种脂类的组合使用；

包括向有需要的个人施用包含(i)有效量阿片类药物和(ii)上述脂类花生四烯酸(AA)、二十二碳五烯酸(DPA)、12-羟二十碳三烯酸(12-HETE)、二十碳五烯酸(EPA)、二十碳五烯酸乙酯(EE-EPA)、二十二碳五烯酸(DPA)、二十二碳五烯酸乙酯(EE-DPA)二十二碳六烯酸(DHA)、二十二碳六烯酸乙酯(EE-DHA)、亚油酸(LA)亚油酸乙酯(EE-LA)、花生四烯酸(AA)、花生四烯酸乙酯(EE-AA)；12-羟基二十碳四烯酸(12-HETE)，12-羟基二十酸乙酯(EE-12-HETE)及其组合。

优选的，所述脂类及脂类化合物用作药物治疗疼痛的应用方法：

1)其中所述个人患有疼痛；

2)其中应用系用于治疗或预防疼痛；

3)其中该疼痛系神经病变性疼痛或慢性疼痛；

4)其中，所述地方当局是给药到中枢神经系统(CNS)；

5)其中所述为鞘内途径(包括注射和导管)；

6)其中鞘内注射系经由腰椎穿刺输注；

7)其中该输注系经由导管和泵来进行；

8)其中鞘内给药是通过连续输注进行的；

9)其中所述连续输液是通过泵进行的；

10)其中所述局部给药是硬膜外给药管理；

11)其中该硬膜外投与系经由导管；

12)其中所述输液是通过泵进行的；

13)其中所述硬膜外给药是通过连续的灌输；

14)其中该连续输注系经由泵；

15)其中该鼻内投与系经由气雾剂；

16)其中该气溶胶系经由雾化器产生；

优选的，所述脂类及脂类化合物用作药物治疗疼痛的应用方法：

1)其中所述个人患有疼痛；

2)其中该疼痛系神经病变性疼痛或慢性疼痛；

3)其中所述管理用于预防或改善阿片类药物耐受性、戒断、毒性和/或依赖性；

4)其中所述阿片类为吗啡；

5)其中该脂类之投与系局部投与；

6)其中该局部投与系对中枢神经系统(CNS)投与；

7)其中所述局部给药是鞘内给药；

8)其中该鞘内投与系经由导管；

9)其中该导管包含泵；

10)其中鞘内投与系经由持续输液；

11)其中所述连续输液是通过泵进行的；

12)其中所述局部给药是硬膜外给药管理；

13)其中该硬膜外投与系经由导管；

14)其中所述导管包括泵；

15)其中所述硬膜外给药是通过连续的灌输；

16)其中所述连续输液是通过微泵进行的；

17)其中该投与系经鼻内；

18)其中该鼻内投与系经由雾剂；

19)其中该气溶胶系经由雾化器产生；

20)其中该投与系经由从鞘内、硬膜外和鼻内选择的路线。

优选的，所述脂类及脂类化合物用作药物治疗疼痛的应用方法，其特征在于：其中所述脂类和/或所述脂类组和物以约1纳摩尔(nM)至约5000nM的浓度投与；

其中浓度系约10nM；

其中浓度系约100nM；

其中浓度系约1000nM；

其中浓度系约5000nM。

本发明的技术效果和优点：

本发明可用自然存在于人体中的脂类治疗神经病变性疼痛或慢性疼痛，用量小，而且有效作用时间长。它为治疗难治性顽固性神经病变性疼痛或慢性疼痛提供了新的武器。本发明也可用于减少阿片剂量，对抗阿片类药物耐受性，降低阿片类药物毒性，增强阿片类药物治疗慢性疼痛的疗效，本发明还可用于预防或改善阿片类耐药性，戒断、依赖性，成瘾和滥用及毒性，本发明中鼻内、鞘内和硬膜外给药径路或其组合可将脂类从局部传递到中枢神经系统去治疗持续性疼痛，此外，这些径路允许重复并连续给药,直接作用于中枢神经系统，使脂类成分在预防或减轻疼痛的同时尽量减少这些药物的潜在副作用，本发明可以提高鸦片类药物止痛的效果，减少病人对鸦片类药物的耐药性，适用于各种各样的难治性神经病变性疼痛或慢性疼痛。

附图说明

图1为本发明的四组老鼠(正常老鼠、神经病变性疼痛老鼠、脊髓电刺激老鼠和脊髓电刺激无反应老鼠)的脊髓背角脂类释放水平；图2为本发明的在鞘内或硬膜外注射LA后脚底触觉反射阈值的变化；图3为本发明的在鞘内或硬膜外注射AA后脚底触觉反射阈值的变化；图4为本发明的在鞘内或硬膜外注射DHA后脚底触觉反射阈值的变化；图5为本发明的在鞘内注射EPA后脚底触觉反射阈值的变化；图6为本发明的鞘内(A组)或硬膜外(B组)注射EPA或EE-EPA后脚底触觉反射阈值的变化；图7为本发明的在鞘内注射DPA-7后脚底触觉反射阈值的变化；图8为本发明的在鞘内注射DPA-4后脚底触觉阈值的变化；图9为本发明的一个将鞘内注射12-HETE后足底触觉反射阈值的变化；图10为本发明的吗啡和纳洛酮对神经细胞的作用；图11为本发明的、吗啡导致神经细胞凋亡；图12为本发明的二十二碳五烯酸-4，二十碳五烯酸阻止了脂多糖引起的神经细胞凋亡；图13为本发明的酶联免疫吸附试验检测细胞因子(光谱吸收值450nM)(IL-1β、IL-4、IL-6、TNFα和IFNγ)；图14为本发明的酶联免疫吸附试验检测TLR4(光谱吸收值450nM)；图15为本发明的二十二碳五烯酸-4，二十碳五烯酸阻止了大鼠对于吗啡的耐受。

具体实施方式

下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

图1显示了四组老鼠(正常老鼠、神经病变性疼痛老鼠、脊髓电刺激老鼠和脊髓电刺激无反应老鼠)的脊髓背角脂类释放水平。在脊髓背角中，脊髓电刺激增加了脊髓中LA、AA、DHA和13OH的水平；而在脊髓电刺激无反应的大鼠中没有观察到这些。SCS诱导的LA、AA、DHA和13-OH增加抑制了疼痛。SCS反应的大鼠与SCS无反应的大鼠或神经病变性疼痛的大鼠相比，LA、AA、DHA和13-OH的释放显著增加了(*p<0.05，*p<0.01；n＝6只大鼠)。单因素方差分析，加曼—曼惠特尼检验；所有数据均以平均值+标准误表示)，图中LA：亚油酸，AA：花生四烯酸，DHA：二十二碳六烯酸，DPA：二十二碳五烯酸，13-OH：13-OH十八碳三烯酸，9-OH：9-OH十八碳三烯酸。数据显示大鼠脊髓中的亚油酸，花生四烯酸，和二十二碳六烯酸在对照组及脊髓电刺激反应组明显高于神经病变性疼痛组和脊髓电刺激不反应组，而13-OH十八碳三烯酸和9-OH十八碳三烯酸仅在脊髓电刺激反应组增高(**p<0.01；*p<0.05)。

图2是在鞘内或硬膜外注射LA后脚底触觉反射阈值的变化。在Seltzer神经病变性疼痛大鼠注射LA后，15分钟时它的脚底触觉反射阈值开始升高，30-45分钟时，这个阈值恢复到正常老鼠水平，指示疼痛被抑制。10和100μM剂量的抑制作用时间为6小时。LA与生理盐水作用对照差别显著(*P<0.05；*P<0.01；*P<0.001；n＝3-6只大鼠。单因素方差分析，加曼—曼惠特尼检验；所有数据均以平均值+标准误表示)，箭头指示鞘内注射时间。亚油酸1，10，100M鞘内注射使足底触痛反射阈值增高到正常水平。亚油酸10和100M有效作用时间更长。比较于有盐水鞘内注射，亚油酸鞘内注射显著增高了足底触痛反射阈值(***p<0.001)。

图3是在鞘内或硬膜外注射AA后脚底触觉反射阈值的变化。在Seltzer神经病变性疼痛大鼠注射AA后，15分钟时它的脚底触觉反射阈值开始升高，30-45分钟时，这个阈值恢复到正常老鼠水平，指示疼痛被抑制。10和100μM剂量的抑制作用时间为6小时。AA与生理盐水作用对照差别显著(*P<0.05；*P<0.01；*P<0.001；n＝3-6只大鼠。单因素方差分析，加曼—曼惠特尼检验；所有数据均以平均值+标准误表示)，箭头指示鞘内注射时间。花生四烯酸1，10，100M鞘内注射使足底触痛反射阈值增高到正常水平。花生四烯酸10和100M有效作用时间更长。比较于有盐水鞘内注射，花生四烯酸鞘内注射显著增高了足底触痛反射阈值(***p<0.001)。

图4是在鞘内或硬膜外注射DHA后脚底触觉反射阈值的变化。在Seltzer神经病变性疼痛大鼠注射DHA后，15分钟时它的脚底触觉反射阈值开始升高，30-45分钟时，这个阈值恢复到正常老鼠水平，指示疼痛被抑制。然而，对DHA的疼痛抑制作用在100或1000μM的DHA剂量下，持续时间短于LA和AA。DHA与生理盐水作用对照差别显著(*p<0.05；*p<0.01；*p<0.001；n＝3-6只大鼠。单因素方差分析，加曼—曼惠特尼检验；所有数据均以平均值+标准误表示)，箭头指示为鞘内注射时间。二十二碳六烯酸100和1000M鞘内注射使足底触痛反射阈值增高到正常水平，而花生四烯酸10M没有作用。比较于盐水和花生四烯酸10M鞘内注射，花生四烯酸100和1000M鞘内注射显著增高了足底触痛反射阈值(***p<0.001；**p<0.01；*p<0.05)。

图5是在鞘内注射EPA后脚底触觉反射阈值的变化。神经病变性疼痛大鼠鞘内注射EPA后，神经性病变疼痛被抑制。鞘内注射EPA使神经性病般疼痛大鼠的脚底触觉反射阈值在30和300nM剂量下恢复正常。即使是3nM的剂量，鞘内注射单次给药也能提高脚底触觉反射阈值，EPA:二十碳五烯酸。箭头指示为鞘内注射时间。二十碳五烯酸3,30和300nM鞘内注射使足底触痛反射阈值增高到正常水平；二十碳五烯酸3nM增高了足底触痛反射阈值，但没有达到正常水平。

图6是鞘内(A组)或硬膜外(B组)注射EPA或EE-EPA后脚底触觉反射阈值的变化。神经病变性疼痛大鼠鞘内或硬膜外注射EPA和EE-EPA后，神经病变疼痛被抑制。(a)神经病变性疼痛大鼠鞘内注射EPA和EE-EPA的一次剂量为3、30或300nM(10μl)时，神经病变性疼痛抑制作用时间达6小时。疼痛抑制呈剂量依赖性方式(n＝3只大鼠，每组)，而媒剂注射(人工脑脊液含有1/100000MeOH)没有任何影响。(b)硬膜外注射EPA和EE-EPA也能抑制这种神经病变性疼痛，其方式与鞘内注射相似(每组3只大鼠)，EPA：二十碳五烯酸.EPA-EE：二十碳五烯酸乙酯。二十碳五烯酸和二十碳五烯酸乙酯鞘内注射后，足底触痛反射阈值增高。二十碳五烯酸和二十碳五烯酸乙酯硬膜外注射后，足底触痛反射阈值也增高。鞘内和硬膜外的反应时间未见明显差别。

图7是在鞘内注射DPA-7后脚底触觉反射阈值的变化。神经病变性疼痛大鼠细胞鞘内注射所有顺式-7，10，13，16，19-二十二碳五烯酸(DPA-7)后，神经性病变疼痛被抑制，DPA-7：二十二碳五烯酸-7。3，30，和300nM二十二碳五烯酸-7鞘内注射后，足底触痛反射阈值增高，但只有300nM二十二碳五烯酸-7使足底触痛反射阈值增高到正常水平。

图8是在鞘内注射DPA-4后脚底触觉阈值的变化。图表显示所有鞘内给药顺式-4，7，10，13，16-二十二碳五烯酸(DPA-4)抑制神经性疼痛，DPA-4：二十二碳五烯酸-4。3，30，和300nM二十二碳五烯酸-4鞘内注射后，足底触痛反射阈值都增高到正常水平。二十二碳五烯酸-4的镇痛作用强于二十二碳五烯酸-7。

图9是一个将鞘内注射12-HETE后脚底触觉反射阈值的变化。神经病变性疼痛大鼠鞘内注射12-HETE后，神经性病变疼痛被抑制。在Seltzer神经病变性疼痛大鼠注射12-HETE后，在300nM的剂量下使脚底触觉反射阈值恢复正常，12-HETE：12-羟二十碳四烯酸。30和300nM12-羟二十碳四烯酸鞘内注射后，足底触痛反射阈值都增高，但只有300nM12-羟二十碳四烯酸使足底触痛反射阈值增高到正常水平。12-羟二十碳四烯酸的作用潜伏期较长。

图10描述了吗啡和吗啡加上一种或多种药物对培养中的细胞(神经元和星形胶质细胞)的影响。对照(contr)：未经处理的细胞。吗啡(MOR)：多数星形胶质细胞凋亡，多数神经元维持正常形态学。吗啡加纳洛酮(MOR/NALOX)：多数星形胶质细胞凋亡，而多数神经元保持相对正常。吗啡加DPA(MOR/DPA)：神经元和星形胶质细胞形态正常。吗啡加EPA(MOR/EPA)：结果类似与吗啡加DPA。吗啡加LPS-RS(MOR/LPS-RS)：结果类似于吗啡加DPA/EPA处理。(箭表示典型的两极神经元；空心箭表示星形胶质细胞；箭头表示凋亡的星形胶质细胞)标尺：20μM，Contr:对照组；Mor:吗啡治疗组；Mor/Nalox:吗啡加纳洛酮治疗组；Mor/DPA:吗啡加二十二碳五烯酸-4治疗组；Mor/EPA:吗啡加二十碳五烯酸治疗组；Mor/LPS-RS:吗啡加脂多糖-RS治疗组。吗啡(10g/ml和100g/ml)引起神经细胞凋亡(Mor)，好像神经胶质细胞死亡多于神经元。纳洛酮(10,100,1000M)，吗啡受体的拮抗剂，不阻止吗啡100g/ml引发的神经细胞死亡。二十二碳五烯酸-4(30,300nM)和二十碳五烯酸(30,300nM)明显阻止吗啡100g/ml引发的神经细胞凋亡。脂多糖-RS(TLR4受体的拮抗剂；500ng/日)部分阻止了吗啡100g/ml引发的神经细胞死亡。

图11描绘了末端脱氧核苷酸转移酶dUTP端标记(TUNEL)和β-微管蛋白I染色。(a)未经处理的细胞的β-微管蛋白I和胶质纤维酸蛋白(GFAP)染色。星形胶质细胞(绿色，GFAP标记)和神经元(红色，β-微管蛋白标记)约为4到6。在本文所公开的模型中，神经元与星形胶质细胞比例接近5比5，也可以是6比4或4比6。细胞核被DAPI染色。(b)到(f):TUNEL(绿色)、β-微管蛋白I(红色)和DAPI(蓝色)染色。(b)和(c)细胞分别接受吗啡10μg和100μg/ml/天的处理：裸核，由星形胶质细胞完全丧失胞质而变成裸核(一些神经元也可能由于细胞质完全丧失而变成裸核)，TUNEL阳性(箭头)，少数TUNEL阳性核也为β-微管蛋白I正(箭)，A、对照组；B、吗啡(10g/ml)治疗组；C、吗啡(100

g/ml)治疗组；D、吗啡(100g/ml)加二十二碳五烯酸-4治疗组；E、吗啡(100g/ml)加二十碳五烯酸治疗组；F、吗啡(100g/ml)加脂多糖-RS治疗组。吗啡10g/ml(B)和100

g/ml(C)引发了神经细胞死亡，呈TUNEL染色阳性(箭和箭头)。箭头指示细胞体完全消失，只剩细胞核。二十二碳五烯酸-4300nM(D)和二十碳五烯酸300nM(E)阻止了吗啡100

g/ml引发的神经细胞死亡。脂多糖-RS部分阻止了吗啡100g/ml引发的神经细胞死亡，而效果不如二十二碳五烯酸-4，二十碳五烯酸明显。(*p<0.05；**p<0.01)。

图12显示DPA和EPA阻止细胞培养中TLR4的激活。(a)HAPI细胞(脑源性小胶质细胞系)培养显示TLR4(绿色)和IL-1β(红色)在对照组中的表达。在将LPS(1μg/ml)加入培养物6小时后，细胞凋亡(箭)，TLR4表达呈块状(箭头)。DPA或EPA(300nM)单独应用于培养时阻止TLR4的表达。(b)TLR4荧光颗粒由Leica软件计数，为四个样本的平均值。HAPI细胞显示高TLR4荧光颗粒。在LPS刺激后，TLR4进一步增加。当将DPA或EPA注射到培养基中时，TLR4的表达是大大减少了。当DPA或EPA与LPS一起使用时，TLR4的表达与对照组或LPS处理的细胞相比也被显著阻断(*p<0.01；单因素方差分析，加曼-惠特尼检验)。(c)碎核和裸核从四个样本的平均值计算凋亡细胞。在脂多糖刺激下，许多细胞凋亡，表现为碎裂和裸露的细胞核增多(箭头)。当DPA或EPA与LPS一起处理时，碎裂和裸露的核显著降低(*p<0.01；单因素方差分析，加曼-惠特尼检验)，

A、Contr:对照组；LPS:脂多糖治疗组；EPA:二十碳五烯酸治疗组；EPA/LPS:二十碳五烯酸加脂多糖治疗组；DAP:二十二碳五烯酸-4治疗组；DPA/LPS:二十二碳五烯酸-4加脂多糖治疗组。脑源性小胶质细胞(系)在细胞培养中表达toll样受体4(TLR4)，脂多糖激活TLR4引起细胞凋亡，如荧光斑块指示。红色TLR4,绿色TUNEL。二十二碳五烯酸-4和二十碳五烯酸阻断了多糖引起的TLR4表达和细胞凋亡。(B.荧光斑块数)。

B、二十二碳五烯酸-4和二十碳五烯酸明显减少了荧光斑块数。(C.碎核裸核数)。

C、二十二碳五烯酸-4和二十碳五烯酸明显减少了碎核裸核数。(**p<0.01)。

图13描述了细胞因子和MAPK途径的酶联免疫吸附分析。(a)与未经处理的对照细胞相比，在神经细胞培养、吗啡治疗导致IL-1β、IL-6、TNFα和IFNγ表达增加。(b)与未经处理的细胞相比，吗啡处理明显增高MAPK-ERK通路中ERK1/2和JNK1/2/3的表达。样本从三个培养皿采集，用酶联免疫吸附试验(ELISA)对样本测式。数据显示为平均值+标准误，

Control：对照组；Morphine：吗啡治疗组；Mor+DPA：吗啡加二十二碳五烯酸-4治疗组；Mor+EPA：吗啡加二十碳五烯酸治疗组；Mor+TLR4-Ant：吗啡加TLR4拮抗剂治疗组；Mor+Nal:DPA：二十二碳五烯酸-4治疗组；EPA:二十碳五烯酸治疗组；TLR4-Ant：TLR4拮抗剂治疗组；Na：纳洛酮治疗组；ERK1/2：细胞外信号调节激酶1和2；p38MAPK：p38丝裂原活化蛋白激酶；JNK1/2/3：c-JunN-末端蛋白激酶1/2/3。

A、炎性细胞因子酶联免疫吸附试验检测。与未经处理的对照组细胞相比，吗啡处理细胞的TNFα和IFNγ的产生有增加的趋势。与吗啡治疗相比，吗啡加二十二碳五烯酸-4、二十碳五烯酸或纳洛酮治疗显示IL-1β、IL-4、IL-6、TNFα和IFNγ表达呈下降趋势。IL-4在吗啡加TLR4拮抗剂治疗组和TLR4拮抗剂治疗组显著增高。

图14描述了不同治疗的TLR4酶联免疫吸附测定分析。样本收集和酶联免疫吸附分析的方法与图8所示相同。TLR4表达仅在吗啡处理和吗啡加纳洛酮处理的细胞中被诱导，说明DPA和EPA对TLR4的影响与吗啡不同,DPA和EPA抑制TLR4的表达，

Control：对照组；Morphine：吗啡治疗组；Mor+DPA：吗啡加二十二碳五烯酸-4治疗组；Mor+EPA：吗啡加二十碳五烯酸治疗组；Mor+TLR4-Ant：吗啡加TLR4拮抗剂治疗组；Mor+Nal:吗啡加纳洛酮治疗组；DPA：二十二碳五烯酸-4治疗组；EPA：二十碳五烯酸治疗组；TLR4-Ant：TLR4拮抗剂治疗组；Nal：纳洛酮治疗组。吗啡等药物在细胞培养中是否影响TLR4的表达。酶联免疫吸附试验结果表明，吗啡和吗啡加纳洛酮处理可以诱导TLR4的表达增高，而其他处理没有明显的TLR4增加。TLR4诱导与吗啡和吗啡加纳洛酮诱导的神经细胞培养中的细胞凋亡一致(图10和11)。

图15显示了给予鞘内注射(I.T.)脂类或吗啡的最大可能的抗伤害作用百分比[Thepercentmaximalpossibleanti-nociceptiveeffect(％MPAE)].DPA或EPA剂量为3nM(与吗啡无协同作用)加10μg吗啡在给正常大鼠鞘内注射,每日两次，持续7天时，吗啡的最大可能的抗伤害作用百分比没有显著降低。与单独使用吗啡的大鼠相比,吗啡的最大可能抗伤害作用百分比显著降低。公式％MPAE＝[(药物有效作用阈值–基础阈值)/(10-基础阈值)]x100(常数10))。图15a和b显示了吗啡治疗和吗啡加脂类治疗后MPAE的百分比变化。这些结果表明，当与吗啡一起使用时，脂类可以阻止吗啡耐受，而在细胞培养中，脂类可以阻止吗啡诱导神经细胞凋亡。此外，脂类可用于治疗吗啡耐受性和依赖性，因为脂类下调吗啡诱导的炎性因子和凋亡因子增加，例如IL-1β、IL-6、TNFα、ERK、p38和TLR4，

Mor:吗啡10g鞘内注射。Mor/DPA:吗啡10mg加二十二碳五烯酸-43nM鞘内注射。Mor/EPA:吗啡10g加二十碳五烯酸3nM鞘内注射.DPA:二十二碳五烯酸-43nM鞘内注射.EPA:二十碳五烯酸3nM鞘内注射.Mor/Veh:吗啡10g加载体鞘内注射。

注射每日二次，持续7天。A.热刺激引发的甩尾试验。B.足底触痛反射阈值试验。吗啡的最大可能的抗伤害作用百分比随着吗啡注射的天数逐渐减低。二十二碳五烯酸-4或二十碳五烯酸与吗啡共同注射，二十二碳五烯酸-4，二十碳五烯酸阻止了吗啡引起的最大可能的抗伤害作用百分比减低。二十二碳五烯酸-4，二十碳五烯酸单独注射对痛反射阈值没有影响。吗啡加载体鞘内注射与吗啡单独注射结果一致。。

本文揭示了LA、DHA和AA在持续性疼痛实验模型中的选择性和特异性镇痛作用。据观察，SCS对NP的抑制依赖于LA、DHA和AA的释放。此外，在SCS成功抑制NP的大鼠中，脂类在脊髓背角的释放显著增加。在SCS不单独抑制疼痛的大鼠中，当鞘内或硬膜外注射极低剂量的脂类(LA、A和DHA)时，SCS抑制了疼痛。此外，在这些大鼠中，当以100μm/10μl的剂量给药时，LA、AA和DHA也能抑制疼痛。这里，揭示了游离脂肪酸在中枢神经系统(CNS)的疼痛缓解。当通过鞘内或硬膜外途径(剂量范围为1纳摩尔(nM)至1000毫摩尔(μm))对中枢神经系统进行药物给药时，单独或联合使用LA、DHA和AA可有效抑制持续性疼痛，包括在大鼠Seltzer模型中难以治疗NP。本文还公开了二十二碳五烯酸(DPA)、二十碳五烯酸(EPA)和12-HETE在以下情况下具有相似的镇痛性能：用作局部治疗的药物成分，用于预防或治疗疼痛。此外，这些脂类还可以拮抗吗啡诱导的细胞凋亡和耐受性。当与吗啡一起使用时，这些脂类降低了阿片类药物的剂量，对抗了吗啡的耐受性，降低了阿片类药物的毒性，并增强了阿片类药物的疗效。

实施例一：在seltzer神经病变大鼠的十一胸椎安装电极。

阴极(3x2x0.2mm银片)置于背侧硬膜外间隙。阳极(直径4mm铜片)为植入椎旁皮下组织。这些金属丝被皮下穿成微接触固定在颈部皮肤上。通过微接触将SCS电极连接到带有恒流单元CCU1的GrassS44刺激器(GrassInstr.，Quinsey，MA)。刺激参数设置为：刺激频率50Hz,，脉冲宽度0.2ms，强度在0.4和1.5mA之间，相当于诱导运动反应所需的2/3强度。在大鼠身体的下部(这些参数尽可能与那些参数匹配用于临床实践)。应用SCS30分钟。在SCS期间，vonfrey测试每5分钟进行一次以评估SCS效果。

脊髓电刺激(SCS)通过脊髓背角脂类释放抑制持续性疼痛。

SCS增加了与疼痛抑制相关的DHA、AA、LA、13-OH和9-OH水平，这是用大鼠Seltzer模型在脊髓DH中通过质谱(MS)检测到的。然而，未观察到DHA、AA、LA、13-OH和9-OH水平的增加。这些结果表明，这些脂类参与调节SCS对持续性疼痛的作用。图1说明了脊髓(左侧L3-L5背段)脂类提取物中的FFA水平，在SCS后1小时进行MS分析。在SCS反应大鼠中，LA、AA、DHA和13-OH显著增加，而在SCS无反应大鼠中，这些脂类没有增加。SCS诱导的LA、DHA、AA和13-OH升高与疼痛抑制相关。

局部给予某些游离脂肪酸可以增强脊髓电刺激的效果。

在大鼠Seltzer模型中，SCS诱导GABA释放进入细胞外空间以抑制疼痛，GABA释放不足是导致SCS失败的原因。这些结果导致使用巴氯芬(一种GABAB受体激动剂)来提高NP患者的SCS疗效，SCS无应答患者的成功率超过50％。在这里，LA、AA和DHA也有望在SCS无反应大鼠体内局部(100-1000纳米，10微升)注射时提高SCS的疗效。

鞘内和硬膜外LA抑制持续性疼痛。

LA是AA、13-OH和9-OH产品的前体分子。当以1、10或100μm(10μl体积)的剂量(鞘内或硬膜外注射)给患有神经病变性疼痛的大鼠给药时，LA可抑制疼痛达6小时，如正常化的停药阈值所示。图2描述了LA对触觉反射阈值的影响。

鞘内和硬膜外AA抑制持续性疼痛。

与LA相比，AA对疼痛抑制的作用相似。当AA是通过鞘内或硬膜外途径注射，剂量为1、10或100μm(体积为10μl)，其在经历神经性疼痛的大鼠中，抑制性疼痛也长达6小时。这些结果是如图3所示。

鞘内和硬膜外二十二碳六烯酸抑制持续性疼痛。

DHA是一种ω-3脂肪酸。当DHA通过鞘内注射或硬膜外注射剂量为100或1000μm(体积为10μl)，可抑制大鼠疼痛。经历神经性疼痛长达4小时。然而，10μm的DHA并未显示抑制作用。请参阅图4。

13-OH和9-OH在鞘内和硬膜外更易溶于乙醇。在10μm(该系统最大剂量)的乙醇中注射13-OH对疼痛抑制作用较弱，而9-OH则没有作用。

这些发现表明亚油酸、二十二碳六烯酸或花生四烯酸酸能抑制硬膜内或硬膜外局部注射时的持续疼痛。单次脂类注射可抑制疼痛至少6小时。此外，这些脂类包括亚油酸(LA)、二十二碳六烯酸(DHA)、花生四烯酸(AA，13-OH，以及9-oh)，当SCS有效缓解疼痛时，在脊髓的DH中释放。令人惊讶的是，当给予中枢神经系统时，LA、DHA和AA是具有神经性疼痛的大鼠的有效镇痛成分，而那些单独对SCS无反应的大鼠在将SCS与少量达到中枢神经系统高局部浓度的一种或多种脂类结合时变得无痛。

总之，当在脊髓的DH中释放时，披露的脂类对于解释SCS的镇痛作用和抑制疼痛至关重要(必要和足够)，并且代表了当局部输送到中枢神经系统时预防和治疗疼痛的新范例。此外，血液中的脂类模式可能反映了脊髓后角的脂类释放，因此血液中的脂类模式可作为安装刺激器前预测脊髓后角疗效的生物标志物。

实施例二：Seltzer模型和神经行为测试。

如Seltzer等人所述，将对雄性Sprague-Dawley大鼠(250g)进行左侧坐骨神经损伤程序。[Seltzer等人，疼痛。43(2)：205-18(1990年)]神经的1/2-1/3背侧部分将在大腿上中水平处紧密结扎。在一个有日光般照明的安静的房间里，动物在收集数据前将适应实验环境15分钟3次。数据将在上午9:30至下午3:30之间收集。

脚底触觉阈值反射试验：

在底为金属网的玻璃容器(20×20cm)中，动物接受触觉异常疼痛测试，在测试中无害的触摸刺激可能诱导短暂的。从0.01克到30克的一系列von-frey细丝WoodDale，IL)从1g开始，作用于大鼠的足底，并增加或减少。如果一根细丝在5个刺激中3次诱导一足底的触觉反射，则该值记录为它的触觉阈值。当出现戒断阈值达到8克或以下时，视为异常疼痛。没有疼痛定义为20g或更高(26-32)【Cui等人，Pain88(3)：239-48(2000)；Cui等人，Biochem.Biophys.Res.Commun.350(2)：358-63(2006)；Tender等人，SpineJ.8(2)：351-8(2008)；Cui等人，J.Neurosci.30(45)：15286-97(2010)；Tender等人，SpineJ.10(8)：715-20(2010)；Cui等人，J.Biol.Chem.285(50)：38951-60(2010)；Tender等人，神经外科68(4)：1048-55(2011)】。

鞘内导管安装。

通过L5和L6椎板之间的21g套管将PE10导管(在远端延伸至稍细的直径)引入椎管(蛛网膜下腔)，并推进大鼠的腰膨大处。近端部分在皮肤下挖隧道，在背部上部引出，随着时间的推移进行注射，以确定最佳剂量、剂量方案和最佳治疗路线。通过注射6微升(50毫克/毫升)的木聚卡因来验证导管的位置，从而在麻醉过程中产生短暂的腿部松弛性麻痹。清除CSF也表明插管成功。在动物身上，这种导管最多可以保存两周。

硬膜外导管安装。

在L5和L6椎体之间进行一个小的椎板切除术，露出硬脑膜。一个PE10导管，在远端延伸到一个稍细的直径，并引入硬膜外空间，推进到L2椎体水平(约4cm)。近端部分在皮肤下挖隧道，在背部上部引出，随着时间的推移进行注射，以确定最佳剂量、剂量方案和最佳治疗路线。通过注射6μl(50mg/ml)木聚卡因来验证导管的位置，从而在麻醉过程中产生腿部暂时性松弛性麻痹。这种导管在动物体内最多可保存两周。

鞘内和硬膜外注射脂类成分。

根据制造说明溶解有或没有药物载体的FFA成分。A10-通过鞘内和硬膜外PE10导管或使用精密泵持续输注，缓慢注入含有1、10100或1000nM(1μM)、10、100和1000μM或3、30、300和3000nM每种脂类或脂类组合的剂量。对于单次注射，在监测神经行为反应确定的最佳时间进行适当的体积(所用注射体积为10μL)或重复注射。为了优化治疗反应，尽量减少局部和全身暴露于FFA成分，可以使用切开泵连续输注。在确定最佳剂量后不同时间处死大鼠，采用质谱分析测定中枢神经系统(脑脊液)浓度，以确定使用该途径的脂类成分的药效学。

鼻内使用气雾剂脂类成分。

含或不含药物载体的FFA成分将根据制造说明溶解。通过鼻气雾剂向麻醉大鼠投与含有1、10100或1000nM(1μM)、10、100和1000μM每种脂类或脂类组合的10μl气雾剂剂量。单次最大10μl气雾化一次，或在通过监测神经行为反应确定的最佳时间重复鼻腔给药。在确定最佳剂量后不同时间处死大鼠，采用质谱分析测定中枢神经系统(脑脊液)浓度，以确定使用该途径的脂类成分的药效学。

脊髓电刺激。

在胸11处进行小的椎板切除术，在背侧硬膜外间隙放置一个银阴极(3x2x0.2mm)。将阳极(直径4mm)植入椎旁皮下组织。这些金属丝是通过皮下隧道固定在颈部皮肤上的微接触。通过微接触的SCS电极将连接到带有恒流单元CCU1(GrassInstr.，Quinsey，MA)的GrassS44刺激器。刺激参数将设置为：刺激频率50赫兹，脉宽0.2毫秒，强度在0.4至1.5毫安之间，相当于诱导躯干背部肌肉收缩所需2/3强度(这些参数与临床实践中使用的参数尽可能接近)。SCS将应用30分钟。在SCS期间，每5分钟进行一次vonFrey试验，以评估SCS效果。如果SCS将戒断阈值提高到20g或以上，则将大鼠归类为有反应。如果大鼠对SCS没有反应，或者阈值水平低于15g，则称为无反应。在SCS作用达到最大水平后30分钟，将L3-5脊髓段切除，进行脂类、微RNA和免疫组化分析。在最近的研究中，使用了双极电极【Yang等人，神经科学199:470-80(2011)】。因此，将双极电极安装到10只大鼠体内，以测试这些电极是否比单极电极对SCS更有效。对于脂类的剂量滴定，将使用同大鼠进行剂量滴定和SCS。

实施例三：评价了五种镇痛脂类分子(ALMS)：二十碳五烯酸(EPA)、二十碳五烯酸乙酯(EE-EPA)、全顺式-7,10,13,16,19-二十二碳五烯酸(DPA-7；ω-3脂肪酸)、全顺式-4,7,10,13,16-二十二碳五烯酸(DPA-4；ω-6脂肪酸)和12-羟基二十碳四烯酸(12-HETE)，用于抑制神经性疼痛。在一次大剂量注射时直接鞘内给药于seltzer神经病变大鼠(背部1/3纤维的左侧坐骨神经结扎)。用3-6只大鼠(见图5-9)通过评估PAW机械触觉反射阈值((vonFrey纤维试验)来测试每个ALM。低于8g的阈值表示疼痛。预计止痛药会将阈值提高到正常水平(在这些实验中为20g或更多；26g为截止值)。

在10μl体积中以3nM、30nM和300nM的剂量对5个ALM进行测试，其分别约相当于0.01ng、0.1ng和1ng。注射后3至6小时，每15分钟记录一次ALM鞘内剂量的触觉反射阈值反应的时间进程。请参阅图5。这些结果表明，EPA以剂量依赖性的方式抑制神经病变性疼痛，并且在鞘内空间单次注射后效果持久。

图6表明鞘内或硬膜外注射EPA和EPA-EE可抑制神经性疼痛。从注射药物到停药阈值的潜伏期增加，EPA与EPA-EE治疗无明显差异，提示EPA-EE可直接抑制疼痛。如果EPA-EE必须转换为EPA以抑制疼痛，代谢物程序将需要更长的时间来发挥对疼痛的抑制作用。鞘内注射和硬膜外注射之间没有明显的有效潜伏期，提示EPA和EPA-EE被迅速转移到脊柱中心。这些特征对于疼痛治疗是有利的。

图7显示鞘内全顺式-7，10，13，16，19-二十二碳五烯酸(DPA-7)抑制神经性疼痛。DPA-7是一种ω-3脂肪酸。当通过鞘内注射给予单剂量时，DPA-7将脚底触觉阈值标准化为300纳米。剂量为3或30nM后，阈值适度升高。这些结果表明，DPA-7能以剂量依赖性的方式抑制神经病变性疼痛，并且这些效应在鞘内注射一次后似乎会持续很长时间。

在相关实验中，如图8所示，鞘内注射全顺式-4,7,10,13,16-二十二碳五烯酸(DPA-4)可抑制神经性疼痛。DPA-4是一种ω-6脂肪酸和DPA-7的异构体。DPA-4与DPA-7具有相同的分子量，化合物之间的唯一区别是第一个双键的位置。鞘内单剂量的DPA-4使脚底触觉阈值在3、30和300纳米时正常化。与DPA-7相比，DPA-4显示出更好的抑制曲线。这种结构-活性关系表明，这种ω-6脂肪酸比ω-3脂肪酸异构体更有效。这些结果表明，DPA-4能以剂量依赖性的方式抑制神经病变性疼痛，并且这些作用在鞘内注射一次后似乎是持久的。

图9显示鞘内注射12-HETE可抑制神经性疼痛。当对神经性疼痛大鼠(大鼠Seltzer模型)给予12-HETE时，它在300nM的剂量下使脚底触觉阈值正常化。鞘内给药30nM后，阈值保持适度升高，3nM剂量12-HETE对机械性撤药阈值无明显影响。在两个神经病变大鼠中测试每种剂量。这些结果表明，12-HETE能以剂量依赖性的方式抑制神经性疼痛，并且这些作用在鞘内腔单次注射后似乎是持久的。

实施例四：吗啡治疗后神经细胞凋亡与吗啡耐受有关。以前的研究使用纯神经元细胞或胶质细胞培养来评价吗啡对细胞凋亡的影响。考虑到神经元和星形胶质细胞之间存在相互作用，以对抗吗啡诱导的细胞凋亡，采用混合神经元和星形胶质细胞培养法检测吗啡对这些细胞的影响，这是一种7-10天大鼠神经细胞模型。在开始药物治疗前，细胞在37℃下培养5天。将吗啡(1，10，或100μg/ml/天)、吗啡(100μg/ml/天)、纳洛酮(10或100μm/天)、吗啡(100μg/ml/天)、DPA(300nm/天)、吗啡(100μg/ml/天)、EPA(300nm/天)、吗啡(100μg/ml/天)和LPS-RS(TLR4受体拮抗剂，500ng/ml/天)加入细胞培养5天。拍照时间为最后一次治疗后24小时。

用吗啡治疗5天后(1、10或100μg/ml/天(据报道用于诱导细胞凋亡的吗啡剂量在培养基中为10至100μg/ml/天)，本研究结果表明，10和100μg/ml/天均以剂量依赖性方式诱导细胞凋亡。令人惊讶的是，吗啡诱导的星形胶质细胞凋亡比神经元多(图10)。联合应用阿片受体拮抗剂纳洛酮达100μm，并未完全阻断细胞凋亡。相反，联合应用DPA(30-300nM)或EPA(30-300nM)几乎完全阻止了吗啡诱导的细胞凋亡。控制(Contr)：未经处理的培养细胞。如图10所示，吗啡(MOR)：大多数星形胶质细胞发生凋亡，而大多数神经元保持正常形态。吗啡加纳洛酮(MOR/NALOX)：星形胶质细胞凋亡，大部分神经元相对正常；吗啡加DPA(MOR/DPA)：神经元和星形胶质细胞均保持正常形态，提示DPA对吗啡诱导的凋亡具有保护作用。吗啡加EPA(MOR/EPA)：结果与吗啡加DPA相似，表明EPA也对吗啡诱导的细胞凋亡具有保护作用。吗啡加LPS-RS(MOR/LPS-RS)：结果与吗啡加DPA/EPA治疗相似，提示DPA/EPA可能拮抗TLR4。

结果表明，脂类组分可以阻断吗啡诱导的细胞凋亡，说明本发明的脂类组分可以预防或改善阿片类药物的毒性和耐受性。

实施例五：对来自实施例4的治疗细胞进行描绘了末端脱氧核苷酸转移酶dUTP端标记(TUNEL)和β-微管蛋白I免疫染色以确认星形细胞和神经元凋亡(图11)。经过5天的处理后，DPA或EPA加吗啡处理的细胞对吗啡诱导的细胞凋亡表现出较强的抵抗力(图11d、e和c)，与相同剂量的吗啡处理的细胞相比，LPS-RS(TLR4拮抗剂)对细胞凋亡也表现出部分的保护作用(图11f和c)。这些结果表明，DPA和EPA对吗啡诱导的细胞凋亡具有保护作用。

吗啡100μg/ml/天处理的细胞比10μg/ml/天处理的细胞表现出更多的TUNEL阳性核，表明吗啡以剂量依赖性方式诱导神经细胞凋亡。吗啡100μg/ml/天加DPA300nM/天治疗：与吗啡100μg/ml/天治疗相比，仅观察到少数TUNEL阳性核，表明DPA对吗啡诱导的细胞凋亡具有保护作用(图11(d))。吗啡100μg/ml/天加上EPA300nM/天处理：细胞表现出类似于DPA加吗啡处理的细胞，表明EPA对吗啡诱导的细胞凋亡也有保护作用(图11(e))。吗啡100μg/ml/天加上LPS-RS500ng/天治疗：与吗啡100μg/ml/天处理的细胞相比，TLR4拮抗剂LPS-RS降低了TUNEL阳性核，表明LPS-RS对吗啡诱导的细胞凋亡具有部分保护作用(图11(f))。这些照片是在治疗5天后拍摄的。图11右侧面板中的条形图总结了每种治疗的TUNEL阳性核。从三个培养皿,me每个培养皿的四个显微镜视场中平均得到了阳性TUNEL核的数目。吗啡100μg/ml/日处理组与吗啡100μg/ml/日加DPA或EPA处理组细胞凋亡细胞有显著性差异(*p<0.01；单因素方差分析，随后进行Mann-Whitney检验)。另外，凋亡细胞显示吗啡100μg/ml/天和吗啡100μg/ml/天加上LPS-RS有显著差异。治疗后的细胞(*p<0.05；单因素方差分析，随后进行曼惠特尼试验)。

研究还表明，DPA和EPA通过抑制HAPI(一种脑源性小胶质细胞系)细胞培养中的toll样受体4(TLR4)阻止了小胶质细胞的激活(图12)。因此，图12显示DPA和EPA在细胞培养中阻断TLR4的激活。此外，DPA或EPA阻断了LPS诱导的TLR4表达和细胞凋亡，表明ALMS通过阻断TLR4和小胶质细胞下游促炎细胞因子抑制NP，也可能通过阻断神经元和星形胶质细胞的TLR4表达。这些数据支持DPA和EPA对TLR4激活有抑制作用，并降低下游促炎细胞因子。

实施例六：用酶联免疫吸附试验检测细胞因子(IL-1β、IL-4、IL-6、TNFα和IFNγ)是否对吗啡诱导的DPA和EPA细胞因子的改变有不同的影响。酶联免疫吸附试验结果表明，与未经处理的对照细胞相比，吗啡处理细胞的TNFα和IFNγ的产生有增加的趋势(图13a)。与吗啡治疗相比，吗啡加DPA、EPA或纳洛酮治疗显示IL-1β、IL-4、IL-6、TNFα和IFNγ表达呈下降趋势。然而，与其他治疗相比，吗啡加TLR4拮抗剂、LPS-RS治疗和单独LPS-RS治疗显示出IL-1β增加的趋势。这些结果表明，在神经细胞培养中，DPA、EPA和纳洛酮与吗啡一起使用可能会降低促炎细胞因子，TLR4拮抗剂LPS-RS单独或与吗啡一起使用可能会增加IL-1β，这表明LPS-RS影响的细胞因子及途径不同于ALMS。

DPA,EPA与吗啡治疗的细胞相比，DPA、EPA和纳洛酮加吗啡治疗显示这些促炎细胞因子的产生减少(图13)。与其他治疗相比，单独使用TLR4拮抗剂LPS-RS和LPS-RS加吗啡治疗均显示出较高的IL-1β增加趋势。结果表明，LPS-RS对IL-1β有不同的影响。单独使用DPA、EPA和纳洛酮作为对照，对细胞因子没有影响。

DPA和EPA加吗啡治疗可阻止吗啡诱导的ERK1/2和JNK1/2/3表达增加(图13)。然而，纳洛酮加吗啡、纳洛酮单独治疗和LPS-RS单独治疗显示出与吗啡治疗细胞相似的表达增加。ERK1/2和JNK1/2/3的增加/激活可导致细胞凋亡。与未治疗的细胞相比，所有治疗的细胞中p38有丝分裂原激活蛋白激酶没有显著增加，这表明p38在治疗的第5天下调。

在细胞培养中有丝分裂原激活蛋白激酶(MAPK)-细胞外信号调节激酶(ERK)途径中进一步检测了ERK1/2、p38和JNK1/2/3，结果表明吗啡诱导了ERK1/2和JNK1/2/3，而吗啡加上DPA、EPA或LPS-RS拮抗了诱导作用(图13)。然而，吗啡加纳洛酮或纳洛酮单独治疗显示了ERK1/2的诱导，类似于吗啡治疗。ERK1/2通常被认为是一种细胞存活保护剂，但在一定条件下能诱导细胞凋亡。本文的研究结果表明，吗啡和纳洛酮可能通过促凋亡蛋白Bax和Caspase3的激活，在神经细胞培养中增加ERK1/2，从而诱导细胞凋亡。

实施例七：在实施例4的细胞培养中用不同的处理检查TLR4。结果表明，吗啡和吗啡加纳洛酮处理可以诱导TLR4的表达，而其他处理没有明显的TLR4增加(图14)。TLR4诱导与吗啡和吗啡加纳洛酮诱导的神经细胞培养中的细胞凋亡一致(图10和11)。

二十碳五烯酸(EPA)拮抗大鼠吗啡耐受性。图15表明DPA和EPA能阻止大鼠吗啡耐受。PAW触觉反射延迟为由鞘内注射(i.t.)(1)EPA(3nM)；(2)吗啡(10mg)；(3)或吗啡(10mg/kg)加上EPA(3nM)，每天注射两次，持续7天。暴露于吗啡(10mg)的大鼠在第3天和之后的MPAE下降了50％以上。大鼠(n＝3)单独注射EPA(3nM)每天两次，连续7天，MPAE百分比没有显著变化。然而，当大鼠在静脉注射EPA(3nM)加吗啡(10mg/kg)每天两次后7天，MPAE的百分比与单独注射吗啡(10mg/kg)的大鼠相比没有显著下降(*p<0.01，**p<0.001)。因此，EPA(3nM)加吗啡防止大鼠MPAE下降。这些结果表明吗啡诱导的耐受性可以通过镇痛脂类分子来预防。

当DPA或EPA剂量为3nM(与吗啡无协同作用)加10μg吗啡在给正常大鼠鞘内注射,每日两次，持续7天时，吗啡的最大可能的抗伤害作用百分比没有显著降低。与单独使用吗啡的大鼠相比,吗啡的最大可能抗伤害作用百分比显著降低。公式％MPAE＝[(药物有效作用阈值–基础阈值)/(10-基础阈值)]x100(常数10))。图15a和b显示了吗啡治疗和吗啡加脂类治疗后MPAE的百分比变化。这些结果表明，当与吗啡一起使用时，脂类可以阻止吗啡耐受，而在细胞培养中，脂类可以阻止吗啡诱导神经细胞凋亡。此外，脂类可用于治疗吗啡耐受性和依赖性，因为脂类下调吗啡诱导的炎性因子和凋亡因子增加，例如IL-1β、IL-6、TNFα、ERK、p38和TLR4。

需要说明的是：本发明通过提供给中枢神经系统有效的脂类成分治疗或防止持续性疼痛(即慢性疼痛)的方法，开辟了一个新领域。这些成分可通过直接鞘内注射，间接硬膜外注射，或经鼻内途径。

这些脂类的选择性和特异性镇痛作用在持续性疼痛的实验动物模型中得到了证实。脊髓刺激(SCS)是疼痛门控理论的一个分支，仍然是治疗NP的有效方法之一。因此，SCS每年用于多达50000名慢性疼痛患者。目前，对于SCS成功治疗NP的机制知之甚少，SCS抑制NP依赖于脂类(亚油酸、二十二碳六烯酸、花生四烯酸、13oh-c18:2和9OH-C18:2),这可能为治疗NP提供新的方法。只有在SCS成功抑制NP的动物中，脂类在大鼠脊髓背角(dh)中的释放才会显著增加。在仅SCS不能抑制疼痛的动物中，鞘内或硬膜外以低剂量脂类(LA、AA和DHA)联合SCS可抑制疼痛。因此，低剂量的LA、AA和DHA提高SCS的有效性。

本文所用术语“治疗有效量”或“有效量”是指足以治疗、改善或预防所确定的疾病或状况，或显示可检测的治疗、预防、抑制或抑制作用的化合物的量。例如，可以通过改善临床条件或减少症状。受试者的确切有效量将取决于受试者的身体。体重、大小和健康；疾病的性质和程度；治疗或选择给药的治疗组合。如果药物已获得美国食品药品监督管理局(FDA)的批准，“治疗有效量”或“有效量”也指由FDA或其对应的医疗机构批准的用于治疗已确定疾病或状况的剂量。

如本文所用，“需要止痛”的个人或患者被理解为将从本文的组成部分的应用中受益的患者。此类患者包括患有神经性疼痛或慢性疼痛的患者。患者可能患有任何疾病或状况，对于这些疾病或状况，用本发明的组成物进行的治疗可能有助于改善症状。这种疾病或状况包括但不限于疼痛。与伤害有关(包括但不限于创伤、磨损和截肢)；神经退行性变(包括但不限于多发性硬化症、肌营养不良症、帕金森氏病、糖尿病和其他神经病)、感染(例如，不含局限性、带状疱疹和艾滋病毒)、炎症、手术(例如，但不限于，开胸手术、疝气修补、关节成形术和乳腺癌手术)和化学毒性(例如，化疗药物的副作用)。四十、术语“脂类组成”在本文中可与术语“镇痛剂”互换使用脂分子(ALM)和“游离脂肪酸”(FFA)，每一种都是本文所指。

术语“脂类组成”在本文中与术语“镇痛脂类分子(ALM)”和“游离脂肪酸”(FFA)可互换使用，并且每一种都是指本发明的脂类组成。

本文所用的“阿片类”是本领域理解的术语。在本发明的组成和方法中有用的阿片类的实例包括但不限于：阿杜明，阿芬太尼、异隐酮、烯丙肾上腺素、阿普罗定、苯胺、阿普啡、苄基吗啡，小檗碱、双壳聚糖、双壳聚糖、贝西曲胺、丁丙诺啡、布洛卡宾、布托啡醇、氯硝嗪、可待因、脱吗啡、右旋吗啡、脱唑嗪、二丙酰胺、二吗啡，二氢可待因、二氢吗啡、二甲氧萘醇、二甲基硫喷妥钠，丁酸二氧乙酰酯、二异丙酮、依他唑啉、乙庚嗪、乙甲基硫铵，乙基吗啡、依托尼汀、芬太尼、海洛因、氢可待因、氢吗啡酮、羟基哌替啶，异美沙酮、酮苯美酮、左旋孤儿醇、左旋苯甲酰吗啡、洛芬太尼、哌替啶，美他嗪醇、异唑嗪、美沙酮、美托邦、吗啡、肉豆蔻碱、麻醉剂、尼可莫啡，去甲肾上腺素，去甲酮，去甲吗啡，去甲吗啡，去甲吗啡，鸦片，羟考酮、羟吗啡酮、罂粟碱、五唑嗪、苯那酮、菲罗芬，非那唑嗪、非那哌啶、匹米诺定、吡硝胺、普洛哌嗪、普罗美多、丙啶，丙氧芬、舒芬太尼、度冷丁、戊巴比妥、曲马多以及上述任何一种的药用盐。

LA和AA是多不饱和ω-6脂肪酸。亚油酸是一种必需的油脂，存在于植物油中，必须在饮食中摄入，以保障人体健康。AA是一种重要的亚油酸代谢产物，在活细胞中含有多达40％的磷脂酰肌醇脂肪酸，构成神经元和细胞膜。神经病大鼠脊髓背角LA和AA显著增加，SCS使其减低阈值正常化，提示LA和AA在中枢神经系统镇痛中的作用。本文显示了LA和AA在输送至中枢神经系统时抑制持续性疼痛。在大鼠中，1μmLA和AA剂量的鞘内给药的镇痛作用持续4小时，在更高剂量下持续6小时。

DHA是一种多不饱和ω-3脂肪酸，是活细胞中α-亚麻酸的一种代谢产物。DHA也构成大脑的重要结构。最近有报道口服DHA治疗慢性疼痛的病例。然而，通过口服途径(全身给药)达到疼痛通路中所需的局部剂量所需的DHA量将不实际或不安全。然而，局部剂量的DHA和其他FFA可以达到更高的浓度，而不会产生副作用和不必要的全身用药，从而达到高效的镇痛作用。

在某些方面，单独或组合使用额外的脂类成分。有LA、EE-LA、DHA、EE-DHA、AA、EE-AA、DPA-4、DPA-7、EE-DPA-4/7、EPA、EE-EPA，或12-HETE和EE-12-HETE。这些额外的FFA成分包括药物含有载体、增溶剂、稳定剂等的组合物，均用于预防或治疗疼痛或预防或改善阿片类药物耐受性、戒断、毒性和/或依赖。本发明的FFA组成与每个FFA的量不同。其组合可用于治疗包括疼痛在内的不同形式的疼痛。与伤害有关(包括但不限于创伤、磨损和截肢)；神经退行性变(包括但不限于多发性硬化、肌肉营养不良和糖尿病)、感染(例如但不限于带状疱疹和艾滋病毒)、炎症，手术(例如但不限于开胸、疝气修补、关节成形术和乳腺癌手术)、化学毒性(如化疗药物)。由于特定的病理状态预计每种FFA成分在痛觉调节和治疗疼痛方面都有不同的作用。同时服用两种或两种以上的脂类会最大化治疗效果和降低脂类高剂量的副作用。

在本发明的任何方面或实施例中，FFA成分的体积本发明提供了一种剂量，其包含每种脂类的从约1纳摩尔(nM)到约1000微摩尔(μM)或本发明的脂类组合。例如，FFA本发明的组成提供了一种剂量，其包含从约1nM到约500μM，或从约1nM到约250μM，或从约1nM到约200μM，或从约1nM到约150μM，或约1nM至约100μM，或约1nM至约50μM，或从约1nM到约25μM，或从约1nM到约10μM，或从约1nM到约5μM，或约1nM至约1μM，或约1nM至约500nM，或约1nM到约100nM，或约1nM到约50nM，或约5nM到约1000μM，或从约5nM到约500μM，或从约5nM到约250μM，或从约5nM至约200μm，或约5nM至约150μm，或约5nM至约100μM，或约5nM至约50μM，或约5nM至约25μM，或约5nM至约20μm，或约5nM至约10μm，或约5nM至约500nM，或从约5nM到约100nM，或从约5nM到约50nM，或从约10nM到约1000μM，或约10nM至约500μM，或约10nM至约250μM，或从约10nM到约200μM，或从约10nM到约150μM，或从约10nM至约100μm，或约10nM至约50μm，或约10nM至约25μM，或约10nM至约20μM，或约10nM至约500nM，或从约10nM到约100nM，或从约10nM到约50nM，或从约100nM到约1000μM，或约100nM至约500μM，或约100nM至约250μM，或从约100nM到约200μM，或从约100nM到约150μM，或从约100nM至约50μm，或约100nM至约25μm，或约100nM至约10μM，或约100nM至约5μM，或约100nM至约1μM，或从约100nM到约500nM，或从约100nM到约400nM，或从约100nM到约至约200nM，或约200nM至约1000μm，或约200nM至约500μM，或约200nM至约250μM，或约200nM至约200μM，或从约200nM到约150μM，或从约200nM到约50μM，或从约200nM至约25μM，或约200nM至约10μM，或约200nM至约5μM，或约200nM至约1μM，或约200nM至约500nM，或约200nM至约400nM，或约500nM至约1000μm，或约500nM约500μM，或约500nM至约250μM，或约500nM至约200μM，或约500nM至约150μM，或约500nM至约50μM，或约500nM至约25μM，或约500nM至约10μM，或约500nM至约5μM，或约500nM至每种脂类或脂类组合的约500nM至约1μM。在各种实施例中，本发明的FFA组成提供的剂量包含约1nM，或约5nM，或约10nM，或约15nM，或约20nM，或约25nM，或约30nM，或约40nM，或约50nM，或约60nM，或约70nM，或约80nM，或约90nM，或约100nM，或约150nM，或约200nM，或约250nM，或约300nM，或约350nM，或约400nM，或约450nM，或约500nM，或约550nM，或约600nM，或约650nM，或约700nM，或约750nM，或约800nM，或约850nM、或约900nM、或约950nM、或约1μM、或约5μM、或约10μM、或约15μM、或约20μM、或约25μM、或约30μM、或约35μM，或约40μM、或约45μM、或约50μM、或约100μM、或约150μM、或约200μM、或约250μM、或约300μM、或约350μM、或约400μM、或约450μM，或约500μM、或约550μM、或约600μM、或约650μM、或约700μM，或约750μM、或约800μM、或约850μM、或约900μM、或约950μM、或约1000μM的每种脂类或脂类组合。

在其他实施方案中，本发明的FFA组成提供剂量包含至少约1nM、或至少约5nM、或至少约10nM、或至少约15nM，或至少约20nM，或至少约25nM，或至少约30nM，或至少约40nM，或至少约50nM，或至少约60nM，或至少约70nM，或至少约80nM，或至少约90nM，或至少约100nM，或至少约150nM，或至少约200nM，或至少约250nM，或至少约300nM，或至少约350nM，或至少约400nM，或至少约450nM，或至少约500nM，或至少约550nM，或至少约600nM、或至少约650nM、或至少约700nM、或至少约750nM，或至少约800nM，或至少约850nM，或至少约900nM，或至少约950nM，或至少约1μM，或至少约5μM，或至少约10μM，或至少约15μM，或至少约20μM，或至少约25μM，或至少约30μM，或至少约35μM、或至少约40μM、或至少约45μM、或至少约50μM、或至少约100μM、或至少约150μM、或至少约200μM、或至少约250μM，或至少约300μM、或至少约350μM、或至少约400μM、或至少约450μM、或至少约500μM、或至少约550μM、或至少约600μM、或至少约650μM、或至少约700μM、或至少约750μM、或至少约800μM、或每种脂类的至少约850μM、或至少约900μM、或至少约950μM或脂类的组合。

在又一实施例中，本发明的FFA组成提供剂量包含小于约1nM、小于约5nM、小于约10nM或小于约15nM，或小于约20nM，或小于约25nM，或小于约30nM，或小于约40nM，或小于约50nM，或小于约60nM，或小于约70nM，或小于约80nM，或小于约90nM，或小于约100nM，或小于约150nM，或小于约200nM，或小于约250nM，或小于约300nM，或小于约350nM，或小于约400nM，或小于约450nM，或小于约500nM，或小于约550nM，或小于约600nM，或小于约650nM，或小于约700nM，或小于约750nM，或小于约800nM，或小于约850nM，或小于约900nM，或小于约950nM，或小于约1μM，或小于约5μM，或小于约10μM，或小于约15μM，或小于约20μM，或小于约25μM，或小于约30μM，或小于约35μM，或小于约40μM，或小于约45μM，或小于约50μM，或小于约100μM，或小于约150μM，或小于约200μM，或小于约250μM，或小于约300μM，或小于约350μM，或小于约400μM，或小于约450μM，或小于约500μM，或小于约550μM，或小于约600μM，或小于约650μM，或小于约700μM，或小于约750μM，或小于约800μM，或小于约850μM，或小于约900μM，或小于约950μM，或小于约1000μM的每种脂类或脂类组合。

脂类镇痛配方比

有镇痛作用的游离脂肪酸主要分为两大类：ω-3脂肪酸和ω-6脂肪酸.我们的试用表明DPA-4(ω-6)加DPA-7(ω-3)协同使用，可以将低剂量并延长镇痛作用时间。两者比例7:3，6:4,5:5,4:6,3:7.因此类推DPA-4加EPA，或AA，或其它脂类，7:3，6:4,5:5,4:6,3:7，也可将低剂量并延长镇痛作用时间。当三种脂类协同使用，比例可为1:3:6,2:3:5,3:3:4.这样可将低剂量，延长镇痛作用时间，并减少耐药性。

在本发明的任一方面或实施例中，通过鞘内途径、硬膜外途径、鼻内途径或其组合施用本发明的FFA组合物。中枢神经系统脂类的安全性已在动物实验和人类临床应用中得到证实。例如，脂类被用于抗肿瘤药物递送，或通常作为不溶性药物的药物载体给中枢神经系统治疗患者【Sharma等人，J.Nanosci.Nanotechnol.11(8)：667—62(2011年)；Chiang等人，nM技术22(41)：415102(2011年)；Huang等人，Plos.One6(8)：E23134(2011)；Berton等人，最近的PAT药物Deliv.Formul.5(3)：188-200(2011年)]脂类通过鞘内注射两性霉素B(一种抗真菌药物)。其毒性低于传统口服或静脉注射脱氧胆酸盐。两性霉素B(AMB)Clemons等人，抗微生物制剂，化疗45(2)：612-5(2001)】。

在某些实施例中，带或不带药物载体或稳定剂的FFA组合物的输送可与泵或装置一起使用，该泵或装置通过鞘内途径(IT)在延长的时间段内输送FFA组合物。

鞘内途径(IT)在各种实施例中用于注射FFA组合物，包括这些脂肪酸成分的组合，以防止或减轻持续性疼痛或管理需要此类治疗的患者的阿片类药物副作用。该方法可与SCS结合使用，或与本文公开的其他组成和方法结合使用。IT路径可用于单次注射，或与一次或多次注射的留置导管的灌输相关，或通过泵进行大剂量注射。

硬膜外途径(EP)可用于注射游离脂肪酸组成物，包括FFA的组合，以预防或减轻需要此类治疗的患者的持续疼痛或管理阿片类药物副作用。该方法可与SCS结合使用，或与本发明的其他组成和方法结合使用。EP路径可用于单次注射，或与反复注射或连续给药(例如通过泵)的留置导管的灌注有关。在一些实施例中，所述给药是一种连续给药，其将需要所述治疗的患者最大程度地预防或治疗疼痛所需的剂量减至最低，同时也将全身和局部中枢神经系统暴露减至最低，以避免副作用并最大程度地提高所用FFA成分的安全性。通过EP路线输送的浓度较低的较大体积代表本发明的另一个实施例。例如且不限于，剂量体积包括至少约1mL，或至少约5mL，或至少约10mL，或至少约15mL，或至少约20mL，或至少约25mL，或至少约30mL，或至少约40mL，或至少约50mL，或至少约60mL，或至少约70mL，或至少约80mL，或考虑至少约90mL，或至少约100mL的一种或多种FFA。在某些实施例中，可将具有或不具有药物载体、稳定剂或防腐剂的FFA组合物的输送与泵或装置一起使用，该泵或装置通过EP路径在延长的时间段内输送FFA组合物。硬膜外空间也是一个方便的运送途径，因为可以运送大量的货物。硬膜外腔代表一个贮存器，它可以将FFA成分长时间输送到中枢神经系统，以延长对持续性疼痛的保护或治疗。

在本发明的进一步实施例中使用鼻内途径(IN)，以将FFA成分输送到中枢神经系统，以防止或减轻需要此类治疗的患者的持续疼痛或管理阿片类药物副作用。该方法可与SCS结合使用，或与本发明的其他组成和方法结合使用。进路可用于单一治疗或重复治疗。在一些实施例中，该方法包括使用鼻喷雾剂以产生用于给药的方便气雾剂。在某些实施例中，可将具有或不具有药物载体、稳定剂或防腐剂的FFA组合物的递送与喷雾器装置一起使用，以产生通过鼻粘膜最大限度地吸收中枢神经系统的气溶胶。

应了解，本发明的药物释放成分的设计取决于各种因素，例如，患者或病况的治疗、改善或预防。在一些实施例中，例如，通过控制含有所述成分的配方的扩散或侵蚀/降解速率，发生所述成分的持续、扩展或受控释放。在一些实施例中，a信息披露的组成应具有一个持续的发布期，从大约1周到大约10周，从大约2周到大约8周，从大约3周到大约7周，从大约4周到大约6周，以及其中的任何范围。在一些实施例中，a信息披露的组成应具有约6小时至大约3周，从大约12小时到大约2周，从大约18小时到大约10天，从约1天到约7天，从约2天到约6天，或任何范围。在一般来说，持续释放时间应在4小时到26周之间；或者，从大约6小时到大约12周；或者从大约1天到大约8周。

在各种实施例中，常规剂型(即非持续释放)或缓释剂型包括一种、二种、三种、四种或四种以上脂类和/或阿片类药物。在一些实施例中，脂类选自以下组：二十碳五烯酸乙酯(EE-EPA)，全顺式-7,10,13,16,19二十二碳五烯酸乙酯(EE-DPA-7)、全顺式-4,7,10,13,16-二十二碳五烯酸乙酯(EE-DPA-4)，二十二碳六烯酸乙酯(EE-DHA)、亚油酸乙酯(EE-LA)、花生四烯酸乙基酯(EE-AA)、12-羟基二十碳三烯酸乙酯(EE-12-HETE)、二十碳五烯酸(EPA)，全顺式-7,10,13,16，19-二十二碳五烯酸(DPA-7)，全顺式-4,7,10,13,16-二十二碳五烯酸(DPA-4)、二十二碳六烯酸(DHA)、亚油酸(LA)、花生四烯酸(AA)和12-羟基二十酸三酯(12-HETE)。在实施例中，包括服用阿片类药物时，阿片类药物选自羟考酮，氢可待因、曲马多、可待因和上述任何一种的药用盐。在另一个实施例，阿片类药物选自阿杜明、阿芬太尼、异隐啡碱、烯丙基普罗定、α-羟丙基罗定、苯胺、阿扑啡、苄基吗啡、小檗碱、双琥珀酸，比古辛、苯扎硝胺、丁丙诺啡、波卡宾、布托啡诺、氯硝嗪、地吗啡，右旋吗胺、脱唑嗪、二丙酰胺、二吗啡酮、二氢可待因、二氢吗啡，二甲氧西林、二甲苯酚、二甲基硫喷妥钠、丁酸二氧乙酰酯、二异丙酮，依他唑啉、乙庚嗪、乙基甲基硫铵、乙基吗啡、依托尼他嗪、芬太尼，海洛因、氢吗啡酮、羟基哌替啶、异美沙酮、酮苯美酮、左旋孤酚，左旋苯甲酰吗啡、洛芬太尼、美哌替啶、美他嗪、异唑啉、美沙酮、美托邦，吗啡、肉豆蔻碱、麻醉剂、尼可吗啡、去甲肾上腺素、去甲酮、纳洛啡，纳布芬、去甲吗啡、去甲哌酮、鸦片、氧吗啡酮、罂粟碱、戊佐辛，非那多松、菲莫芬、非那唑啉、非那哌啶、匹米诺丁、吡瑞坦、普洛哌嗪、普罗美多、丙哌啶、丙氧芬、舒芬太尼、度冷丁、替利定和上述任何一种的药盐。在一个实施例中，规则的或扩展的释放剂型包括一种脂类。在另一个实施例中，规则的或扩展的释放剂型包括一种脂类和一种阿片类药物。在又一实施例中，剂量形式包括吗啡和EE-EPA或EPA。在另一个实施例中，常规或缓释剂型包括吗啡和EE-DPA或DPA。在另一个实施例，常规或延长释放剂型包括吗啡和EE-DHA或DHA。在另一实施例中，常规或延长释放剂型包括吗啡和EE-LA或LA。在另一实施例中，常规或延长释放剂量形式包括吗啡和EE-AA或AA。在另一个实施例中，常规或缓释剂型包括吗啡和12-HETE或EE-12-HETE。

最后应说明的是：以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，对于本领域的技术人员来说，其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (4)

1.脂类及脂类化合物用作药物治疗疼痛，包括以下脂类的组合物，二十碳五烯酸乙酯(EE-EPA)、二十二碳五烯酸乙酯(EE-DPA)二十二碳六烯酸乙酯(EE-DHA)、亚油酸乙酯(EE-LA)、花生四烯酸乙基酯(EE-AA)、12-羟基二十酸乙酯(EE-12-HETE)，其包含脂类-亚油酸(LA)、二十二碳六烯酸(DHA)组中选择，花生四烯酸(AA)、二十碳五烯酸(EPA)、二十二碳五烯酸(DPA)和12-羟二十酸(12-HETE)，其中该DPA系全顺式-7、10、13、16、19-碳五烯酸(DPA-7)，其中该DPA系全顺式-4,7,10,13,16-二十二碳五烯酸(DPA-4)，及多种脂类的组合使用；

包括向有需要的个人施用包含(i)有效量阿片类药物和(ii)上述脂类花生四烯酸(AA)、二十二碳五烯酸(DPA)、12-羟二十碳三烯酸(12-HETE)、二十碳五烯酸(EPA)、二十碳五烯酸乙酯(EE-EPA)、二十二碳五烯酸(DPA)、二十二碳五烯酸乙酯(EE-DPA)二十二碳六烯酸(DHA)、二十二碳六烯酸乙酯(EE-DHA)、亚油酸(LA)亚油酸乙酯(EE-LA)、花生四烯酸(AA)、花生四烯酸乙酯(EE-AA)；12-羟基二十碳四烯酸(12-HETE)，12-羟基二十酸乙酯(EE-12-HETE)及其组合。

2.根据权利要求1所述的脂类及脂类化合物用作药物治疗疼痛的应用方法，其特征在于：

1)其中所述个人患有疼痛；

2)其中应用系用于治疗或预防疼痛；

3)其中该疼痛系神经病变性疼痛或慢性疼痛；

4)其中，所述地方当局是给药到中枢神经系统(CNS)；

5)其中所述为鞘内途径(包括注射和导管)；

6)其中鞘内注射系经由腰椎穿刺输注；

7)其中该输注系经由导管和泵来进行；

8)其中鞘内给药是通过连续输注进行的；

9)其中所述连续输液是通过泵进行的；

10)其中所述局部给药是硬膜外给药管理；

11)其中该硬膜外投与系经由导管；

12)其中所述输液是通过泵进行的；

13)其中所述硬膜外给药是通过连续的灌输；

14)其中该连续输注系经由泵；

15)其中该鼻内投与系经由气雾剂；

16)其中该气溶胶系经由雾化器产生。

3.根据权利要求1所述的脂类及脂类化合物用作药物治疗疼痛的应用方法，其特征在于：

1)其中所述个人患有疼痛；

2)其中该疼痛系神经病变性疼痛或慢性疼痛；

3)其中所述管理用于预防或改善阿片类药物耐受性、戒断、毒性和/或依赖性；

4)其中所述阿片类为吗啡；

5)其中该脂类之投与系局部投与；

6)其中该局部投与系对中枢神经系统(CNS)投与；

7)其中所述局部给药是鞘内给药；

8)其中该鞘内投与系经由导管；

9)其中该导管包含泵；

10)其中鞘内投与系经由持续输液；

11)其中所述连续输液是通过泵进行的；

12)其中所述局部给药是硬膜外给药管理；

13)其中该硬膜外投与系经由导管；

14)其中所述导管包括泵；

15)其中所述硬膜外给药是通过连续的灌输；

16)其中所述连续输液是通过微泵进行的；

17)其中该投与系经鼻内；

18)其中该鼻内投与系经由雾剂；

19)其中该气溶胶系经由雾化器产生；

20)其中该投与系经由从鞘内、硬膜外和鼻内选择的路线。

4.根据权利要求2和权利要求3所述的脂类及脂类化合物用作药物治疗疼痛的应用方法，其特征在于：其中所述脂类和/或所述附加物脂类以约1纳摩尔(nM)至约5000nM的浓度投与；

其中浓度系约10nM；

其中浓度系约100nM；

其中浓度系约1000nM；

其中浓度系约5000nM。