CN110585054B

CN110585054B - 一种用于皮肤修复的组合物

Info

Publication number: CN110585054B
Application number: CN201910772689.2A
Authority: CN
Inventors: 项琪; 黄亚东; 薛来武
Original assignee: Guangzhou Jinan University Medical Biotechnology Research And Development Center Co ltd; Guangzhou Jida Biotechnology Co ltd
Current assignee: Guangzhou Jinan University Medical Biotechnology Research And Development Center Co ltd; Guangzhou Jida Biotechnology Co ltd
Priority date: 2019-08-21
Filing date: 2019-08-21
Publication date: 2022-05-17
Anticipated expiration: 2039-08-21
Also published as: CN110585054A

Abstract

本发明公开了一种用于皮肤修复的组合物，由活性物质和辅料组成，所述活性物质包括脯氨酰羟化酶和精氨酸/赖氨酸多肽。活性物质还包括可溶性胶原和三肽‑1铜。本发明精氨酸/赖氨酸多肽具有促进其它活性蛋白透皮吸收的功能，与脯氨酰羟化酶合用，促进脯氨酰羟化酶经皮肤进入体内，与体内脯氨酰羟化酶协同羟基化体内已有的前胶原上的脯氨酸成为羟脯氨酸，加速形成具有三螺旋结构的胶原，促进创面修复、降低色素沉着；同时胶原因脯氨酰羟化酶的存在，能较好地维持三螺旋结构，部分胶原附着在皮肤表面，形成隔离膜保护层，保湿锁水，提供皮肤修复的内环境。

Description

一种用于皮肤修复的组合物

技术领域

本发明涉及化妆品技术领域，具体地说，涉及一种用于皮肤修复的组合物。

背景技术

胶原是一类特殊的蛋白质，最基本的分子结构为原胶原单体。原胶原是由三条α-肽链相互拧成三股螺旋状构的纤维状蛋白质，其一级结构(Gly-x-y)_n重复序列是形成三螺旋结构的必要条件,其中x常为脯氨酸,y常为羟脯氨酸或羟赖氨酸。蛋白质的功能决定于它的结构，只有具有完整三螺旋稳定结构的胶原才能发挥它所有的功效，因此具有三螺旋结构的胶原被称为活性胶原。但是羟脯氨酸和羟赖氨酸在DNA序列中并没有编码，不能直接翻译得到(Gly-x-y)n，而通常是由具有编码的脯氨酸残基(Gly-x-x)n或赖氨酸残基被羟基化得到(Gly-x-y)n，最后形成三螺旋结构。活性胶原与组织的形成、成熟、细胞间信息的传递，与细胞增生分化、运动、细胞免疫、肿瘤转移以及关节润滑、伤口愈合、钙化作用、血液凝固和衰老等有着密切关系，也与许多结缔组织胶原病的发生密切相关。胶原在皮肤应用方面可以降低色素沉着、促进创面愈合并可被吸收。

脯氨酰羟化酶(Prolyl 4-hydroxylase，P4H)是一种高度丰富的多功能酶，在蛋白翻译后修饰中起关键作用，翻译后修饰可改变蛋白构象及蛋白质-蛋白质相互作用，并能够进一步进行修饰。最有名的是在胶原合成中参与了前原胶原中脯氨酰残基的羟基化，对新合成的前胶原链形成正确折叠，保持三螺旋结构具有重要意义。脯氨酰羟化酶能在蛋白翻译后修饰改变蛋白构象及蛋白质和蛋白质之间的作用。它能对前胶原中的脯氨酸残基羟基化成羟脯氨酸，从而使胶原蛋白形成正确的三螺旋结构，具有生物活性功能。

目前市面上含有胶原的用于修复痘印的护肤品，其胶原或多或少被水解，其三螺旋结构松开(结构改变)，成为3条自由的肽链，生物活性下降，甚至失活只能起到皮肤物理屏障的作用。另一方面，皮肤修复，创面愈合的过程涉及体内自身胶原的合成，但胶原从转录到翻译，再到折叠修饰的过程是比较缓慢的，而且若胶原过表达有可能导致皮肤创面愈合后形成凸起性疤痕。

发明内容

本发明的目的是克服现有技术的不足，提供一种协同增效的，促进体内(内源性)、体外(外源性)胶原蛋白形成三螺旋结构，发挥胶原降低色素沉着、促进创面愈合平整、控油保水功效的组合物。

为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

一种用于皮肤修复的组合物，由活性物质和辅料组成，所述活性物质包括脯氨酰羟化酶和精氨酸/赖氨酸多肽。

作为优选的，在上述的用于皮肤修复的组合物中，所述活性物质还包括可溶性胶原。

作为优选的，在上述的用于皮肤修复的组合物中，所述活性物质还含有三肽-1铜。

作为优选的，在上述的用于皮肤修复的组合物中，所述脯氨酰羟化酶和精氨酸/赖氨酸多肽的重量比为0.01～10：0.01～10。

作为优选的，在上述的用于皮肤修复的组合物中，所述可溶性胶原、脯氨酰羟化酶、精氨酸/赖氨酸多肽、三肽-1铜的重量比为0.01～10：0.01～10：0.01～10：0.01～10：0.01～10。

含有上述用于皮肤修复的组合物的护肤水，由如下重量百分数的组分组成：0.01％～10％可溶性胶原、0.01％～10％脯氨酰羟化酶、0.01％～10％精氨酸/赖氨酸多肽，余量为水。

含有上述用于皮肤修复的组合物的护肤水，由如下重量百分数的组分组成：0.01％～10％可溶性胶原、0.01％～10％脯氨酰羟化酶、0.01％～10％精氨酸/赖氨酸多肽、0.1～5％朝鲜白头翁(PULSATILLA KOREANA)提取物、0.0～5％齿缘墨角藻(FUCUSSERRATUS)提取物、1～10％酵母发酵提取物、0.0～5％积雪草(CENTELLA ASIATICA)提取物提取物、透明质酸钠、余量为水。

含有上述用于皮肤修复的组合物的冻干粉，通过添加赋形剂经冷冻干燥制备而成，所述赋形剂为甘露醇、乳糖、右旋糖苷、氯化钠、葡萄糖、明胶、海藻糖、聚乙烯吡咯烷酮、蔗糖、麦芽糖的中一种或多种。

含有上述用于皮肤修复的组合物的面膜液，由如下重量百分数的组分组成：0.01％～10％可溶性胶原、0.01％～10％脯氨酰羟化酶、0.01％～10％精氨酸/赖氨酸多肽、余量为辅料和水。

与现有技术相比，本发明具有如下有益效果：本发明精氨酸/赖氨酸多肽具有促进其它活性蛋白透皮吸收的功能，与脯氨酰羟化酶合用，促进脯氨酰羟化酶经皮肤进入体内，与体内脯氨酰羟化酶协同羟基化体内已有的前胶原上的脯氨酸成为羟脯氨酸，加速形成具有三螺旋结构(生物活性)的胶原，促进创面修复、降低色素沉着；同时组合物内的胶原因脯氨酰羟化酶的存在，能较好地维持三螺旋结构(生物活性)，部分胶原附着在皮肤表面，形成隔离膜保护层，保湿锁水，提供皮肤修复的内环境；精氨酸/赖氨酸多肽具有抗皱功效，可以协同组合物其他组分降低胶原过表达而导致的凸起性疤痕形成的风险。添加三肽-1铜可以协同组合物其他组分促使皮肤上皮组织再生。

本发明的组合物可以与适当溶剂混合溶解均匀后使用，或者研磨成粉末，直接涂抹于皮肤表面。本发明采用的胶原是可溶性的，分子量较小，较易吸收，而现有的原胶原形成聚合成胶原纤维不能溶解，只能溶胀，不利于分水均匀分布，分子量大，较难吸收。

本发明制成冻干粉使得能够在室温长期稳定保存，溶液或纯多肽在常温的状态下，多肽类物质容易降解失活。

本发明的组合物可以作为护肤品添加剂，如添加到洁面乳、护肤水、面膜等。

附图的说明

图1为受试者使用本发明的用于皮肤修复的组合物(实施例1)前，及使用4周后的瘢痕痘印变化；图中的标号A为使用前，B为使用4周后。

图2为本发明用于皮肤修复的组合物(实施例2)冻干粉促细胞增殖试验结果。

图3为皮肤镜观察使用前后皮肤的变化(×50)，

A1：实施例1组合物使用前，A2：实施例1组合物使用后；

B1：实施例2组合物使用前，B2：实施例2组合物使用后；

C1：实施例3组合物使用前；C2：实施例3组合物使用后。

图4为抑菌实验液体培养基浊度比较；图中标号A:空白对照组；B:阳性对照组；C:阴性对照组；D～I为实施例2组合物稀释液，其中1:20、1:40、1:80、1:160、1:320、1:640指稀释倍数。

图5为抑菌实验试管吸光度比较

n＝3)；vs阳性对照组*P<0.05，**P<0.01，***P<0.001；vs阴性对照组^#P<0.05，^##P<0.01，^###P<0.001。

具体实施方式

以下通过实施例形式的具体实施方式，对本发明的上述内容作进一步的详细说明。但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下实施例。

表1

将上述配方的各个物质按照比例混合均匀，溶胀或溶解于水即得。

实施例4：用于皮肤修复的冻干粉的制备。

将对比例、实施例1-3分别加入约5％的甘露醇，经冷冻干燥即得冻干粉。

实施例5：用于皮肤修复的护肤水的制备。

称取如下重量百分数的组分：1％可溶性胶原、0.5％脯氨酰羟化酶、10％精氨酸/赖氨酸多肽、3％朝鲜白头翁(PULSATILLA KOREANA)提取物、3％齿缘墨角藻(FUCUSSERRATUS)提取物、5％秦椒(ZANTHOXYLUM PIPERITUM)酵母发酵果提取物、3％积雪草(CENTELLA ASIATICA)提取物、透明质酸钠、余量为水。充分混合，均质，得到护肤水。

实施例6：组合物修复皮肤屏障试验

受试者有效人数为100例；18～45岁；Fitzpatrick III或IV型皮肤；具有痤疮后色素沉着等现象；受试部位近三个月没有参与皮肤治疗，美容或是其它皮肤测试；近半年没有进行化学剥脱或激光治疗，并签署知情同意书。

组合物使用：清洁面部，待干燥后，将取1～2mL溶液全脸涂抹。对比组(n＝15)涂对比例，实验组(n＝15)涂抹实施例1-3的配方。一天早晚各1次，连续使用4周。正式测试在符合标准的房间内(温度：20℃～22℃，湿度：40％～60％)静坐30min，不能喝水和饮料。

使用CK皮肤测试仪对受试者使用前后的U区(左颧骨)及T区(额头)的平均油脂含量、经皮水份流失率(TEWL)、痘印的黑色素以及红色素进行检测。检测结果如表2。

表2

可见使用对比例和实施例1的组合物，受试者的皮肤U区TEWL值均下降，实验组(实施例1)TEWL下降更为明显，证明实施例1更能保湿锁水；实验组使用实施例1组合物4w后红色素下降十分明显，见说明书图1，可以显著淡化痘印，而且创面愈合平整，少见凸起性疤痕。

实施例7：组合物的细胞增殖试验

人正常成纤维原代细胞用含90％DMEM+10％FBS培养基常规培养至对数生长期，用0.25％胰酶消化，离心收集细胞，用含10％FBS的90％DMEM培养基重悬细胞，以5×10⁴个/mL的细胞数目接种于96孔板。培养24h后，换无血清DMEM培养基培养，24h后将培养基吸出后分别加入实施例2的配方1系列稀释倍数的冻干粉溶液和阳性对照EGF(12.5ng/mL)，空白组只加无血清DMEM培养基。给药后放入培养箱继续培养72h，加入10μl MTT(噻唑蓝0.5mg/ml，购自美国sigma)，培养箱中孵育4h后，吸出孔中溶液并加入100μl DMSO，振荡后于570nm波长下检测吸光度OD值。增殖率％＝(给药组OD值/空白对照组OD值-1)×100％。

结果如说明书图2所示，组合物能促进细胞增殖，换言之可以促进创面愈合。

实施例8组合物祛痘印皮肤镜检查

组合物使用：清洁面部，待干燥后，将取1～2mL溶液全脸涂抹。对比组(n＝15)涂对比例，实验组(n＝15)涂抹实施例1-3的组合物。一天早晚各1次，连续使用4周。使用皮肤镜对使用产品前后选定的红色痘印处进行观察。

结果如图3，与使用前相比，使用实施例1-3的组合物4w后，红色痘印变淡，痘印得到明显改善。

实施例9抑制痤疮丙酸杆菌实验

往灭菌培养基中接种经过活化后的丙酸座疮杆菌菌液(每100mL加入1mL)后摇匀，往灭菌试管中加入含菌液的培养基1mL，并加入上述各浓度储备液1mL，加入系列稀释倍数的实施例1组合物，配置成终浓度为1:20、1:40、1:80、1:160、1:320、1:640的混合体系，放入37℃培养箱中，厌氧培养48h后观察结果。以无菌液培养基与水混合体系作为空白，以氨苄青霉素(0.05mg/mL)为阳性对照，纯水为阴性对照，不加菌液的培养基作为空白对照。比较各试管的浊度并在600nm波长下检测各试管溶液的OD值。

实验结果见图4，各组试管厌氧培养48h后，对浊度进行比对，结果显示，空白对照组、阳性对照组和1：20浓度的实施例2组合物所在试管澄清透明，未见不溶物，而阴性对照组及其余系列浓度的试管均呈现不同程度的浑浊。检测各试管OD值，结果见图5。结果显示与阴性对照组比较，阳性对照组和各稀释倍数的实施例2组合物均有显著性差异(P<0.01)。与阳性对照组比较，阴性对照组和各稀释倍数的冻干粉溶液均有显著性差异(P<0.01)，1:20浓度的实施例2组合物与阳性对照组之间无显著差异(P>0.05)。表明实施例2组合物有抑菌作用，其中1:20浓度组抑菌作用明显。

Claims

1.一种用于皮肤修复的组合物，由活性物质和辅料组成，其特征在于，所述活性物质包括脯氨酰羟化酶和精氨酸/赖氨酸多肽；所述脯氨酰羟化酶和精氨酸/赖氨酸多肽的重量比为0.01~10：0.01~10。

2.根据权利要求1所述的用于皮肤修复的组合物，其特征在于，所述活性物质还包括可溶性胶原。

3.根据权利要求2所述的用于皮肤修复的组合物，其特征在于，所述活性物质还含有三肽-1铜。

4.根据权利要求3所述的用于皮肤修复的组合物，其特征在于，

所述可溶性胶原、脯氨酰羟化酶、精氨酸/赖氨酸多肽、三肽-1铜的重量比为0.01~10：0.01~10：0.01~10：0.01~10。

5.一种含有权利要求1所述组合物的护肤水，其特征在于由如下重量百分数的组分组成：0.01%~10%可溶性胶原、0.01%~10%脯氨酰羟化酶、0.01%~10%精氨酸/赖氨酸多肽，余量为水。

6.一种含有权利要求1所述组合物的冻干粉，其特征在于，通过添加赋形剂经冷冻干燥制备而成，所述赋形剂为甘露醇、乳糖、右旋糖苷、氯化钠、葡萄糖、明胶、海藻糖、聚乙烯吡咯烷酮、蔗糖、麦芽糖的中一种或多种。

7.一种含有权利要求1所述组合物的面膜液，其特征在于由如下重量百分数的组分组成：0.01%~10%可溶性胶原、0.01%~10%脯氨酰羟化酶、0.01%~10%精氨酸/赖氨酸多肽、余量为辅料和水。