CN110558286B - 一种脾虚湿阻型单纯性肥胖动物模型的建立方法 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及一种脾虚湿阻型单纯性肥胖动物模型的建立方法,包括S1:购买健康清洁级、体重180~220g的雄性SD品系大鼠;S2:适应性喂养:对购买回的健康老鼠,先使用普通饲料+高脂饲料混合喂养1周,计算摄食量/每克体重;再以大于等于摄食量/每克体重为基准,使用高脂饲料适应性喂养1周;S3:建立脾虚湿阻肥胖模型,将挑出的老鼠在22~28℃、空气湿度40~50%的环境中,按照一定方式喂养周期8~11周结束后,分别测定每只老鼠单个体重,挑选出体重≥500g的老鼠;S4:对挑选出的老鼠按照一定的指标评分判断及选出建模成功的脾虚湿阻型单纯性肥胖动物模型。本发明提供的造模方法,获得与人类病症相似的脾虚湿阻型单纯性肥胖动物模型,为治疗脾虚湿阻型单纯性肥胖作参考。

Description

一种脾虚湿阻型单纯性肥胖动物模型的建立方法
技术领域
本发明涉及医学技术领域,具体涉及一种脾虚湿阻型单纯性肥胖动物模型的建立方法,建立一种供医药研究使用的脾虚湿阻型单纯性肥胖动物模型。
背景技术
单纯性肥胖症是现代社会中最常见的营养障碍性疾病,是指无明确的内分泌、遗传原因,因热量摄入超过消耗而引起脂肪组织在体内堆积过多,导致体重超常的病症,并除外继发性肥胖。单纯性肥胖在世界范围内的发病率正在逐年升高,其与高血压、糖尿病、血脂代谢紊乱、心脑血管等疾病的发生率密切相关,严重危害人类的健康,成为全球范围内的公共卫生问题。有科学家在历经 40 年对186 个国家进行 BMI 调查后,于 2016 年在医学杂志《柳叶刀》发布了一份研究结果:全球肥胖人口从1975年的1.05亿升至2014年增加至6.41亿,全球胖子人数首超瘦子。中国拥有 4320 万肥胖男性和 4640 万肥胖女性,肥胖人口位居世界首位。由此可见,不论是世界的肥胖问题还是中国的肥胖问题都是相当严重的。如何控制肥胖,有效防止与单纯性肥胖相关疾病的发生,并更进一步对单纯性肥胖发病机制进行深入研究成为摆在我们面前的一个严峻课题。
单纯性肥胖从中医症型而言,分为脾虚湿阻型、阴虚内热型、肝瘀气滞型等多种症型,其中尤以脾虚湿阻型单纯性肥胖为临床常见,肥胖者素体脾虚之人,脾失健运,水湿不布,反而聚湿生痰,痰湿留于机体产生肥胖。《景岳全书·杂证谟·非风》记载:“肥人多湿多滞,……宜于前治痰之法随宜暂用。”痰湿与肥胖的伴随关系已被普遍认同,临床常见一些肥胖患者腹部肥满松软,面部皮肤油脂较多,多汗且黏,胸闷,痰多,口黏腻或甜,喜食甘,舌苔腻,脉滑等。痰湿肥胖的病机主要为“多痰”,“多痰”是指痰湿体质或久作痰涎,以痰湿壅盛、瘀滞为主要病理特征。由此可见,脾虚湿阻型单纯性肥胖与常规的营养过剩、遗传性肥胖有根本区别。
脾虚湿阻是肥胖产生的重要病机脾为“后天之本”。《素问•至真要大论篇》云:“诸湿肿满,皆属于脾。”《医门法律》曰:“肥人湿多”。沈金鳌《杂病源流犀烛》亦云:“人之肥者气必虚”。《石室秘录》云“肥人多痰……虚则气不能运行”。历代医家皆认为肥胖者可表现出“气虚”和“痰湿”的病理征象。肥胖发生的内因若由脾气不足引起,将导致脾胃运化功能失调,聚生水湿;若病因为情志失调,损伤肝脾,将导致脾虚湿阻。外因如饮食不节,过食肥甘厚腻,损伤脾胃,则生痰湿之邪;若劳逸失度,伤气伤肉,气血津液运转失调,也将导致脾气虚衰,水湿不化。因此,无论是何种原因导致的肥胖,机体皆有脾虚湿阻的过程。
脾虚湿阻型单纯性肥胖患者的典型症状是纳差腹满、肢体困重、疲乏无力等。许多患者就诊时常常自诉吃了一点点食物就觉得腹胀不适,即使适量运动也很难消除这种腹胀感。
为了针对性地开展有关脾虚湿阻型单纯性肥胖的临床治疗、研发新药和筛选等相关主题研究、并对治疗脾虚湿阻型单纯性肥胖作用机制进行深入研究,都需要构建与人类病症相似的脾虚湿阻型单纯性肥胖的动物模型。
发明内容
为了解决现有技术的上述问题,本发明提供一种脾虚湿阻型单纯性肥胖动物模型的建立方法,利用该方法获得与人类病症相似的脾虚湿阻型单纯性肥胖动物模型,以提供医疗单位、医学院校进行脾虚湿阻型单纯性肥胖症的治疗方案、药物研发和筛选、及其对治疗脾虚湿阻型单纯性肥胖作用机制研究等方面的使用。
技术方案:
一种脾虚湿阻型单纯性肥胖动物模型的建立方法,包括如下步骤:
S1:购买40~100只健康清洁级、体重180~220g的雄性SD品系大鼠;
S2:适应性喂养;
S21:对购买回的健康老鼠,先使用普通饲料+高脂饲料混合喂养1周;每天定时测量前一天同时刻所加饲料的剩余量,由饲料的剩余量计算消耗量,用消耗量除以食用该饲料的老鼠总体重,计算摄食量/每克体重;
S22:再以大于等于摄食量/每克体重为基准,使用高脂饲料适应性喂养1周;
S3:脾虚湿阻肥胖模型建立:将挑出的老鼠在22~28℃、空气湿度40~50%的环境中,
A、在该喂养周期的前20~30天,按照如下方式喂养及锻炼:若以喂养起始的第一天为单日、第二天为双日、第三天为单日…至结束,以此类推,则:单日高脂饲料喂养,且以大于等于摄食量/每克体重作为施加饲料的标准;双日禁食高脂饲料,并按照30g每只每天喂食低脂蛋白饲料;在该20~30天内每日锻炼老鼠自由游泳达到耐力极限,然后持续用高脂饲料继续喂养至8-11周;或者
B、以大于等于摄食量/每克体重作为施加饲料的标准,以高脂饲料自始喂养8-11周;在喂养周期的第1-21天,用冰糖水按每日2次每次2ml/只灌胃,同时锻炼老鼠自由游泳达到耐力极限;
在上述两种喂养周期8~11周结束后,分别测定每只老鼠单个体重,挑选出体重≥500g的老鼠。
本发明的一个较佳实施例,在步骤S21中,先使用普通饲料+高脂饲料混合喂养1周期间,其中前三天是普通饲料和高脂饲料按3:1的质量比混合喂养,后四天是普通饲料和高脂饲料按2:1的质量比混合喂养。
本发明的一个较佳实施例中,每份普通饲料具体组成是:水分9.2%,粗蛋白19.98%,粗脂肪5.28%,粗灰分5.20%,粗纤维4.12%,无氮浸出物52.0%,钙1.24%,磷0.92%,钙:磷=1.35,赖氨酸1.34%,蛋氨酸+胱氨酸0.72%,能量352kcal;
每份高脂饲料具体的组成是普通饲料88.9%,胆固醇1%,黄油10%,猪胆盐0.1%,所述普通饲料的粗蛋白含量为30%;
每份低脂蛋白饲料具体组成是:水分9.2%,粗蛋白10%,粗脂肪5.28%,粗灰分5.20%,粗纤维4.12%,无氮浸出物52.0%,钙1.24%,磷0.92%,钙:磷=1.35,赖氨酸1.34%,蛋氨酸+胱氨酸0.72%,余量为脂肪,能量352kcal;上述百分比组成均为质量百分比。
本发明的一个较佳实施例中,在步骤S21中,将5~10只老鼠为一组进行喂养,一共准备5~8组;以摄食情况最好的一组老鼠为基础计算摄食量/每克体重。
本发明的一个较佳实施例中,在所述步骤S21中,摄食量/每克体重为1.0~1.5g饲料/g体重。
本发明的一个较佳实施例中,在所述步骤S3中,每日锻炼老鼠自由游泳达到耐力极限是指:在水深20cm、水温20±2℃的水槽中,每日1次,至大鼠游泳即将下沉即为耐力极限。
本发明的一个较佳实施例中,所述步骤S3的冰糖水灌胃持续时间为15-25天,高脂喂养至11周,锻炼期间为16-30天。
本发明的一个较佳实施例中,在步骤S3喂养周期8~11周结束后,挑选出的体重≥500g的大鼠按照下述指标评分判断及选出建模成功的脾虚湿阻型单纯性肥胖动物模型,症状评分≥10分则造模成功;
造模筛选指标及症状评分:
a.行为:倦怠,无0分,有1分;扎堆,无0分,有1分;嗜卧无0分,有1分;动作缓慢,轻度缓慢1分,重度2分,动作缓慢判断指标包括悬空拉尾抵抗力弱2分;
b.精神状态:正常0分,萎靡1分,常眯眼1分,反应迟钝2分;
c.毛发、耳尾及肛门部:毛发耳尾肛门均正常0分,毛发稀疏1分,枯黄无光泽2分,耳尾血色淡1分;
d.排便:正常0分,大便稀溏、便软不成形1分,泻下如水样2分;
e.造模五周后,正常0分,大鼠进食量少1分,体重增长缓慢或下降2分;
f.体温下降,数字式医用远红外热成像仪观察到动物远红外辐射的温度变化一般1分,明显2分;
g.舌体胖大质淡苔白滑,质正常淡红无苔0分,淡红有薄苔1分。
本发明的有益效果:
1.本发明提供的脾虚湿阻型单纯性肥胖动物模型的建立方法,获得与人类病症相似的脾虚湿阻型单纯性肥胖动物模型,以提供医疗单位、医学院校进行脾虚湿阻型单纯性肥胖症的治疗方案、药物研发和筛选等研究使用,为治疗方案或药物在人体上的临床试验及其对治疗脾虚湿阻型单纯性肥胖作用机制研究作参考。
2.本研究针对脾虚湿阻型单纯性肥胖模型,通过实验摸索,在对比其他研究的基础上,增加了造模的时间,相比一般单纯性肥胖大鼠造模实验时间上要多3个星期,后期验证更符合人的临床特征,并采用交叉排除方法,排除后期实验造模大鼠是脾肾两虚、肝郁气滞及其他中医证型的可能。
具体实施方式
为了更好的解释本发明,以便于理解,下面结合具体实施例,对本发明作详细描述。
实施例1
本实施例提供一种脾虚湿阻型单纯性肥胖动物模型的建立方法,其包括如下步骤:
S1:购买70只健康清洁级、体重在200~220g的雄性SD品系大鼠,对购买回的70只健康老鼠,分成7组,每10只住一个长2m宽1m高1m的笼,随机抽取六组为模型组,一组为正常对照组,对于正常对照组,采用普通饲料喂养,不限制正常饮食和饮水。模型组按照以下步骤S2-S4进行造模,以下如无特别说明,均为模型组。
S2:适应性喂养,具体包括:
S21:在第一周内:前三天,先使用普通饲料:高脂饲料按3:1的质量比混合喂养老鼠,每天固定时间加新的饲料并称量前一天所加饲料的剩余量,如果没有剩余量,则再加饲料时就按30%的增幅增加饲料量。后面四天,使用普通饲料:高脂饲料按2:1的质量比混合喂养。通过前三天的喂养摸清每组老鼠大致的食量,并让老鼠适应新的饲养环境、及高脂饲料。后面四天,进一步让老鼠适应新环境和高脂饲料,并计算摄食量/每克体重。
每份普通饲料具体组成是:水分9.2%,粗蛋白19.98%,粗脂肪5.28%,粗灰分5.20%,粗纤维4.12%,无氮浸出物52.0%,钙1.24%,磷0.92%,钙:磷=1.35,赖氨酸1.34%,蛋氨酸+胱氨酸0.72%,能量352kcal;每份高脂饲料具体的组成是普通饲料88.9%,胆固醇1%,黄油10%,猪胆盐0.1%,所述普通饲料的粗蛋白含量为30%;上述百分比组成均为质量百分比。
计算摄食量/每克体重的方法是,每天固定时间,如每日上午9点加新的饲料并称量前一天所加饲料的剩余量,由原施加饲料量减去剩余量,为该笼老鼠的总摄食量,总摄食量除以老鼠总体重,得到该笼老鼠的摄食量/每克体重。最后,在这6组老鼠中,选择摄食量最高的一组老鼠为基准,作为最后确定的摄食量/每克体重,本实施例中,最终得到的摄食量结果为1.5g/g体重。
S22:再以大于等于摄食量/每克体重为基准,使用所述高脂饲料适应性喂养1周,观察老鼠的摄食状况,对摄食状况一直保持良好的老鼠,转入下一步的肥胖造模;
S3:将挑出的老鼠在25~28℃、空气湿度45~50%的环境中,按照如下方式喂养:
以大于等于摄食量/每克体重作为施加饲料的标准,以高脂饲料自始喂养11周;在喂养周期的第1-21天,用冰糖水按每日2次每次2ml/只灌胃,同时锻炼老鼠自由游泳达到耐力极限,即在水深20cm、水温20℃的水槽中,每日1次,至大鼠游泳即将下沉即为耐力极限;在持续喂养至11周结束后,测定每只老鼠单个体重,挑选出体重≥500g的老鼠。
S4:最后,继续用高脂饲料喂养大鼠数周后,造模完成,挑选出的体重≥500g的大鼠脾虚湿阻型单纯性肥胖的动物模型。
基于脾虚湿阻型单纯性肥胖患者的纳差腹满、肢体困重、疲乏无力等典型症状,结合一些阐述脾虚湿阻性单纯性肥胖的文献,采用下列指标作为筛选指标及症状评分标准的依据:
a.行为:倦怠,无0分,有1分;扎堆,无0分,有1分;嗜卧无0分,有1分;动作缓慢,轻度缓慢1分,重度2分,动作缓慢判断指标包括悬空拉尾抵抗力弱2分;
b.精神状态:正常0分,萎靡1分,常眯眼1分,反应迟钝2分;
c.毛发、耳尾及肛门部:毛发耳尾肛门均正常0分,毛发稀疏1分,枯黄无光泽2分,耳尾血色淡1分;
d.排便:正常0分,大便稀溏、便软不成形1分,泻下如水样2分;
e.造模五周后,正常0分,大鼠进食量少1分,体重增长缓慢或下降2分;
f.体温下降,数字式医用远红外热成像仪观察到动物远红外辐射的温度变化一般1分,明显2分;
g.舌体胖大质淡苔白滑,质正常淡红无苔0分,淡红有薄苔1分;从前期实验模型组60只大鼠中挑选体重≥500g且症状评分≥10分的大鼠50只,将此50只大鼠编为后续实验模型组;
参考文献列举:
[1]陈霞.电针结合阴阳调理灸治疗脾虚湿阻型单纯性肥胖的临床研究[D].湖北中医药大学硕士学位论文,2018:4-10.
[2]李苗苗.穴位埋线法与电针疗法治疗脾虚湿阻型单纯性肥胖的临床研究[D].北京中医药大学硕士学位论文,2018:16-19.
[3]钟衡,郭锡全,覃彪民等.毫火针治疗脾虚湿阻型单纯性肥胖的临床观察[J].广州中医药大学学报,2019,36(1):78-82.
[4]姚琦,喻松仁,白洋.肥胖从痰湿论治的研究概况[J].江西中医药,2019,6(6):71-74.
[5]孟高达.参苓白术散治疗脾虚湿阻型功能性腹泻模型大鼠的实验研究[D]. 辽宁中医药大学硕士学位论文,2015:9.
上述评分标准有以下几个优势:
1充分结合临床;
2依托最新参考文献;
3由科研团队药理学背景人员制定。
依据临床多年治疗脾虚湿阻型单纯性肥胖的经验,结合中医诊疗指南中医证型的分型依据,在充分考虑到中医证型之间的差异性的基础上,然后通过选择一些具有专一性及可重复性强的检测方式及检测指标,对依据上述评分标准选出的50只造模成功的大鼠和正常喂养的10只大鼠,进行医用远红外热成像检测和舌像分析,同时选取体重、甘油三酯、总胆固醇、高密度脂蛋白、低密度脂蛋白、肌酐、谷丙转氨酶、谷草转氨酶、肠肽激素、胃动素等生化指标作为评价脾虚湿阻肥胖模型成功的依据。采用指标多样化,交叉排除其他中医证型的可能,具体检测及分析结果如下:
(1)医用远红外热成像检测
采用维恩伟业生产标准为YZB/渝0066-20 09数字式医用远红外热成像仪,探测器的像元数:320×240,测温范围:0-50℃,测温精确度:±1℃,观察到动物远红外辐射的温度变化,随时储存图像,测量区域温度,并进行图像分析。试验时室温保持24-27℃,相对湿度40%-60%之间,室内热源均匀,背景墙温度均匀一致。室内无明显空气流动及强红外辐射源存在等,以确保所测数据精确。根据测试需要,确定实验动物的适当位置,再行仪器聚焦,调整测温水平,采取矩形方式测量温度。红外成像显示,正常组大鼠腹部脂肪分布均匀,颜色呈现绿色至粉色,温度显示较高(25.25±1.29);模型组大鼠腹部脂肪较多,颜色呈现蓝色至深蓝色,温度显示较低(22.68±1.50),说明腹部有脂肪堆积。
(2)舌像具体分析
造模结束后,采用佳能EOS 5D MARK IV单反相机对大鼠的舌进行拍照,正常组大鼠舌像图可见其舌苔薄白,舌质淡红;模型组大鼠舌像图,可见其舌体胖大,舌质淡,苔白滑。
(3)50只造模成功的大鼠与10只正常组大鼠部分实验数据对比
A、模型组与正常组大鼠血液生化指标数据对比
Figure DEST_PATH_IMAGE001
统计学处理: 所有检测结果均采用 SPSS 17.0软件进行统计学处理,数据用均值±标准差
Figure DEST_PATH_IMAGE002
表示,组间比较采用 t 检验,P<0.05为差异有显著性意义。
由上表可见,单纯性肥胖大鼠血清 TG、TCH、HDL和LDL浓度变化显示,肥胖组血清TG、TCH、HDL浓度明显高于正常组,而血清LDL浓度较正常组升高。
模型组与正常组血脂蛋白检查结果比较及与肥胖的相关性:模型组血清中TG、TCH、HDL和LDL明显高于正常组,差异有统计学意义(P< 0.001或P<0.05) 。
B、模型组与正常组肝肾功能比较
Figure DEST_PATH_IMAGE003
由上表可见单纯性肥胖大鼠血清Cr、ALT及AST的浓度变化,模型组血清Cr、ALT、AST浓度无明显差别。
模型组与正常组血脂蛋白检查结果比较及与肥胖的相关性:模型组血清中Cr、AST和ALT较正常组无明显变化,差异无统计学意义(P>0.05)。说明造模后,模型组肝肾功能与正常组没有显著差异,不存在造模过程中大鼠肝肾脏器的损伤。
C、模型组与正常组体重差异对比
Figure DEST_PATH_IMAGE004
所有检测结果均采用 SPSS 17.0软件进行统计学处理,数据用均值±标准差
Figure DEST_PATH_IMAGE005
表示,组间比较采用 t 检验,P<0.001为差异有显著性意义。
由表可见:模型组的体重数值明显高于正常组,差异有统计学意义(P< 0.001)。
D、模型组与正常组肠肽激素、胃动素差异对比
Figure DEST_PATH_IMAGE006
模型组胃排空能力及舒张胃肠平滑肌下降。
总结:根据后期实验模型组肝肾功能与正常组没有显著差异,说明造模过程中大鼠肝肾不存在脏器的损伤,可以交叉排除后期实验模型组大鼠是脾肾两虚、肝郁气滞等其他中医证型的可能,同时后期实验模型组肠肽激素、胃动素与正常组的明显差异,说明模型组胃排空能力及舒张胃肠平滑肌下降,符合中医脾虚湿阻中脾气虚致脾气升发无力、脾失健运的客观描述。同时,模型组大鼠血清甘油三酯、总胆固醇、高密度脂蛋白明显高于正常组。
上述检测及分析结果说明,按照本发明的造模方法及症状评分标准的脾虚湿阻型单纯性肥胖动物肥胖模型造模成功。
实施例2
本实施例与实施例1的区别在于,在步骤S1中购买40只健康清洁级、体重在180~200g的雄性SD品系大鼠,分成5组,每组8只,分别为正常对照组,模型组,高剂量中药组,中剂量中药组,低剂量中药组。
所述中药为固本祛湿化痰降脂方,其每份的成分组成以重量份表示为茯苓12份、白术12份、党参9份、山药12份、炒薏苡仁9份、枳实12份、陈皮12份、丹参12份、北山楂9份、砂仁6份、甜叶菊1份、荷叶9份、绿萝花6份、红曲9份、决明子9份和泽泻9份。低剂量组、中剂量组及高剂量组折算用量分别为2.03g/(kg.d)、4.06g/(kg.d)及8.12g/(kg.d)。药材制备方法水煎煮 2 次(砂仁后下、荷叶先煎),合并滤液,高中低三剂量分别熬成880ml左右,每只大鼠每天灌胃4ml,每日1次,连续给药4周。
除正常对照组外,其余各组大鼠在23~25℃、空气湿度40~45%的环境中,按照如下方式喂养及锻炼25天:
若以喂养起始的第一天为单日、第二天为双日、第三天为单日…至结束,以此类推,则:单日高脂饲料喂养,且以大于等于摄食量/每克体重作为施加饲料的标准;双日禁食高脂饲料,并按照30g每只每天喂食低脂蛋白饲料;在该25天内每日锻炼老鼠自由游泳达到耐力极限,即在水深20cm、水温18℃的水槽中,每日1次,至大鼠游泳即将下沉即为耐力极限,然后持续用高脂饲料喂养至8-11周。
每份低脂蛋白饲料具体组成是:水分9.2%,粗蛋白10%,粗脂肪5.28%,粗灰分5.20%,粗纤维4.12%,无氮浸出物52.0%,钙1.24%,磷0.92%,钙:磷=1.35,赖氨酸1.34%,蛋氨酸+胱氨酸0.72%,余量为脂肪,能量352kcal;上述百分比组成均为质量百分比。
进行各组间的甘油三酯、总胆固醇、高密度脂蛋白、低密度脂蛋白浓度含量的比较,结果如下,模型组与正常组比较,均有显著性差异,各给药组与模型组比较亦有显著性差异。说明造模成功,并且该模型通过药物治疗是可以恢复正常的。
E、各给药组与模型组指标比较
Figure DEST_PATH_IMAGE007
25天后,除正常组、模型组外,其余各组大鼠分别按照不同剂量中药实施灌胃给药21天,然后处理动物,通过检测大鼠血液的甘油三酯、总胆固醇、高密度脂蛋白、低密度脂蛋白的含量,观察药物对肥胖模型大鼠的干预药效研究。通过本实施例可以进一步验证所述动物模型造模方法的可行性,及中药干预肥胖有一定的疗效。
以上所述仅为本发明的较佳实施例,凡依据本发明申请专利范围所做的均等变化修饰,皆应属本发明的涵盖范围。

Claims (6)

1.一种脾虚湿阻型单纯性肥胖动物模型的建立方法,其特征在于,包括如下步骤:
S1:购买40~100只健康清洁级、体重180~220g的雄性SD品系大鼠;
S2:适应性喂养;
S21:对购买回的健康大鼠,先使用普通饲料+高脂饲料混合喂养1周;每天定时测量前一天同时刻所加饲料的剩余量,由饲料的剩余量计算消耗量,用消耗量除以食用该饲料的大鼠总体重,计算摄食量/每克体重;
S22:再以大于等于摄食量/每克体重为基准,使用高脂饲料适应性喂养1周;
S3:脾虚湿阻肥胖模型建立:将挑出的大鼠在22~28℃、空气湿度40~50%的环境中,
A、在该喂养周期的前20~30天,按照如下方式喂养及锻炼:若以喂养起始的第一天为单日、第二天为双日、第三天为单日…至结束,以此类推,则:单日高脂饲料喂养,且以大于等于摄食量/每克体重作为施加饲料的标准;双日禁食高脂饲料,并按照30g每只每天喂食低脂蛋白饲料;在该20~30天内每日锻炼大鼠自由游泳达到耐力极限,然后持续用高脂饲料继续喂养至8-11周;或者
B、以大于等于摄食量/每克体重作为施加饲料的标准,以高脂饲料自始喂养8-11周;在喂养周期的第1-21天,用冰糖水按每日2次每次2ml/只灌胃,同时锻炼大鼠自由游泳达到耐力极限;
在上述两种喂养周期8~11周结束后,分别测定每只大鼠单个体重,挑选出体重≥500g的大鼠;
挑选出的体重≥500g的大鼠按照下述指标评分判断及选出造模成功的脾虚湿阻型单纯性肥胖动物模型,症状评分≥10分则造模成功;
造模筛选指标及症状评分:
a.行为:倦怠,无0分,有1分;扎堆,无0分,有1分;嗜卧无0分,有1分;动作缓慢,轻度缓慢1分,重度2分;
b.精神状态:正常0分,萎靡1分,常眯眼1分,反应迟钝2分;
c.毛发、耳尾及肛门部:毛发耳尾肛门均正常0分,毛发稀疏1分,枯黄无光泽2分,耳尾血色淡1分;
d.排便:正常0分,大便稀溏、便软不成形1分,泻下如水样2分;
e.造模五周后,正常0分,大鼠进食量少1分,体重增长缓慢或下降2分;
f.体温下降,数字式医用远红外热成像仪观察到动物远红外辐射的温度变化一般1分,明显2分;
g.舌体胖大质淡苔白滑,质正常淡红无苔0分,淡红有薄苔1分。
2.根据权利要求1所述的一种脾虚湿阻型单纯性肥胖动物模型的建立方法,其特征在于:在步骤S21中,先使用普通饲料+高脂饲料混合喂养1周期间,其中前三天是普通饲料和高脂饲料按3:1的质量比混合喂养,后四天是普通饲料和高脂饲料按2:1的质量比混合喂养。
3.根据权利要求1所述的一种脾虚湿阻型单纯性肥胖动物模型的建立方法,其特征在于:
每份普通饲料具体组成是:水分9.2%,粗蛋白19.98%,粗脂肪5.28%,粗灰分5.20%,粗纤维4.12%,无氮浸出物52.0%,钙1.24%,磷0.92%,钙:磷=1.35,赖氨酸1.34%,蛋氨酸+胱氨酸0.72%,能量352kcal;
每份高脂饲料具体的组成是普通饲料88.9%,胆固醇1%,黄油10%,猪胆盐0.1%;
每份低脂蛋白饲料具体组成是:水分9.2%,粗蛋白10%,粗脂肪5.28%,粗灰分5.20%,粗纤维4.12%,无氮浸出物52.0%,钙1.24%,磷0.92%,钙:磷=1.35,赖氨酸1.34%,蛋氨酸+胱氨酸0.72%,余量为脂肪,能量352kcal;上述百分比组成均为质量百分比。
4.根据权利要求1所述的一种脾虚湿阻型单纯性肥胖动物模型的建立方法,其特征在于:在步骤S21中,将5~10只大鼠为一组进行喂养,一共准备5~8组;以摄食情况最好的一组大鼠为基础计算摄食量/每克体重。
5.根据权利要求1所述的一种脾虚湿阻型单纯性肥胖动物模型的建立方法,其特征在于:在所述步骤S21中,摄食量/每克体重为1.0~1.5g饲料/g体重。
6.根据权利要求1所述的一种脾虚湿阻型单纯性肥胖动物模型的建立方法,其特征在于,在所述步骤S3的A、B中,锻炼大鼠自由游泳达到耐力极限是指:在水深20cm、水温20±2℃的水槽中,每日1次,至大鼠游泳即将下沉即为耐力极限。
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