CN110537506B - 一种野生拉萨裂腹鱼人工繁殖方法 - Google Patents

Abstract

本发明提供了一种野生拉萨裂腹鱼人工繁殖方法，包括如下步骤：A、亲鱼采集：在每年4月上旬‑5月下旬于雅鲁藏布江收集拉萨裂腹鱼亲鱼；B、人工催产：催产前，先用麻醉剂将亲鱼麻醉，再分别给雌鱼和雄鱼打催产针；C、人工授精：将亲鱼用麻醉剂麻醉后，再采集精液和卵子，采用干法授精；D、受精卵孵化：肌节出现期以前，将受精卵置于孵化框内流水孵化；受精卵发育到肌节出现期后，剔除死卵，将受精卵移入鱼卵孵化器中孵化；E、鱼苗开口。实现拉萨裂腹鱼规模化人工繁殖。

Description

一种野生拉萨裂腹鱼人工繁殖方法

技术领域

本发明属于鱼类的养殖技术领域，特别涉及一种野生拉萨裂腹鱼人工繁殖方法。

背景技术

拉萨裂腹鱼俗称拉萨弓鱼，仅分布于西藏地区雅鲁藏布江中上游干、支流及附属水体，资源量少，生长速度缓慢，性成熟年龄较迟，为我国的特有种，也是西藏地区主要的经济鱼类之一。受传统和宗教的影响，藏民不食鱼，目前拉萨裂腹鱼还有一定数量种群。然而，自20世纪50年代以来，大量外来人口入藏开发，捕鱼强度不断增强，尤其是最近年来，随着人们生活水平的提高，吃“高原鱼”在很多地方成了一种时尚；拉萨裂腹鱼的需求量快速增长，捕捞量不断加大，远超过了增长速度。许多入侵种在雅鲁藏布江中已经形成了自然种群，与土著鱼类竞争食物和生态位，也造成目前拉萨裂腹鱼的种群数量锐减。同时，放流西藏本土鱼是西藏传统文化，每年西藏人民要放流大量鱼苗到河流里面，据不完全统计，仅在萨卡达瓦节期间，市场销售放流鱼总额达1亿人民币。目前，西藏本土鱼均为从野外捕捞而来，人工养殖的西藏本土鱼的养殖场数量和规模太小，目前还没有人工养殖本土鱼进入市场。因此，研究、保护拉萨腹鱼资源迫在眉睫。

开展野生拉萨裂腹鱼的人工繁殖是其资源保护及合理利用的一项重要举措。CN109644902提供了一种拉萨裂腹鱼人工繁育方法，包括如下步骤：1)将野生拉萨裂腹鱼驯养后得繁殖亲鱼；2)对繁殖亲鱼分两针注射由绒毛膜促性腺激素、促黄体素释放激素类似物和地欧酮构成的催产激素进行人工催产，得到受精卵；3)采用10～15℃的微流水对受精卵进行人工孵化，至孵化出苗，得到拉萨裂腹鱼幼苗；4)将拉萨裂腹鱼幼苗放养至池塘，孵化出苗10天后开始投喂食物，至长成得到拉萨裂腹鱼。该专利未给拉萨裂腹鱼的适宜繁殖季节；统一采用2针注射，需要更频繁的检查催产亲鱼是否可产，每一次检查都对亲鱼有较大损伤和应激；亲鱼为野生亲鱼驯化，驯化时间最少需要1年，而且成活率极低，成本太高；在拉萨裂腹鱼适宜水温12℃条件下，鱼苗出膜10天投喂食物，不满足饥饿时间。

发明内容

为实现拉萨裂腹鱼的规模化生产，本发明提供了一种野生拉萨裂腹鱼人工繁殖方法，适用于大规模拉萨裂腹鱼的人工繁殖。

本发明采用的技术方案是：

一种野生拉萨裂腹鱼人工繁殖方法，包括以下步骤：

A、亲鱼采集

在每年4月上旬-5月下旬于雅鲁藏布江收集拉萨裂腹鱼亲鱼，并选择身体健壮、发育良好的作为拉萨裂腹鱼亲鱼；

B、人工催产

催产前，先用麻醉剂将亲鱼麻醉，再分别给雌鱼和雄鱼打催产针；雌鱼：根据亲鱼性腺成熟度确定采用1针注射或者2针注射。成熟度较好的亲本采用1针注射法，每千克雌鱼注射10 mg DOM+10μg LHRH-A₂，成熟度较差的亲本采用2针注射法，第一针每千克雌鱼注射2 mg DOM+2μg LHRH-A₂，24h后注射第二针，每千克雌鱼注射8 mg DOM+8μg LHRH-A₂；雄鱼：雄鱼采用1针注射法，在雌鱼注射催产药物24h后，每千克雄鱼注射5 mg DOM+5μg LHRH-A₂；

C、人工授精

将亲鱼用麻醉剂麻醉后，再采集精液和卵子，采用干法授精。

D、受精卵孵化

从受精卵到肌节出现期以前，将受精卵置于孵化框内流水孵化；受精卵发育到肌节出现期后，剔除死卵，将受精卵移入鱼卵孵化器中孵化，直到鱼苗全部出膜；所述的鱼卵孵化器为从底部向上溢水的圆柱型孵化器。

E、鱼苗开口

培育水温12℃条件下，鱼苗出膜第18天后，开始投喂食物，直接投喂微粒子配合饲料投喂，每天投喂1次。

本发明所述的亲鱼是指选择雌鱼体重在1050 g以上，体长48.5 cm以上，年龄12龄以上；腹部膨大、柔软，有明显的卵巢轮廓，肛门略突出、发红，倒提腹腔下塌；雄鱼体重在346 g以上，体长34 cm以上，年龄在9龄以上，腹部狭长，且吻端出现明显珠星，轻压腹部，泄殖孔有乳白色精液流出的雄鱼。

本发明所述成熟度较好的亲本是指：腹部膨大、柔软，泄殖孔略突出、发红，倒提腹腔下塌明显，轻压腹部泄殖孔出现少量卵粒；所述成熟度较差的亲本是指：腹部膨大较硬，泄殖孔无突出、发红特征，倒提腹部下榻不明显，轻压腹部，泄殖孔无卵粒。

本发明所述的麻醉剂是指150mg/L的MS-222。

本发明在雌鱼采用1针注射后的72-96h进行采卵，2针注射后的96-120h进行采卵；雄鱼注射后的48h进行采精。

本发明亲鱼培育水温12℃，水温越低，效应时间越长。本发明研究发现，水温过低（8-10℃）或者过高≥16℃，拉萨裂腹鱼均不能顺利催产。在水温12℃条件下，拉萨裂腹鱼催产率高，可达90%以上。

苗出膜后移入平列槽中培育，在开口18天内，鱼苗放养密度为20-25尾/L；18天以后，鱼苗放养密度为5-15尾/L。方便观察和管理，鱼苗开口效果好，成活率高。12℃下，8天以前鱼苗游动能力弱，全部趴在底部，9天以后鱼苗慢慢上浮，但未摄食；18天以后，鱼苗开始摄食，过高的密度易导致缺氧和水质恶化，导致鱼苗大批量死亡。

所述的微粒子配合饲料是指山东升索渔用饲料研究中心配合饲料。

优选地，采用微粒子配合饲料S1，连续投喂1个月，随着鱼苗个体增大，转喂微粒子配合饲料S2 2个月，鱼苗个体增大，转投微粒子配合饲料S3。

配合饲料的蛋白含量为50-55%，脂肪含量10%，筛选得到符合鱼苗生产需求，配合饲料S1的粒径为0.1 mm，配合饲料S2粒径为0.2 mm，配合饲料S3的粒径为0.3mm，能更好激起鱼苗食欲，生长速度更快。

本发明在所述D步骤的整个孵化过程中，所述孵化框孵化占时32%，鱼卵孵化器孵化占时68%。

本发明所述的鱼卵孵化器包括孵化桶和设置在孵化桶内的进水管，所述孵化桶的底部为弧形面，所述底部设置有进水口，所述进水管上均布有多个出水孔且一端封闭，所述进水管开放的一端可拆卸连接所述进水口，所述孵化桶外部的进水口处设置有连接管，所述连接管上设置有阀门，所述孵化桶的上部开设有溢水口，所述溢水口连接外部的溢水管。

优选地，所述的鱼卵孵化器从底部进水口泵入曝气后的井水，水温12-16 ℃，溶解氧≥8 mg/L，出水孔的水流速为0.1-0.2m/s。

控制水流速0.1-0.2m/s，拉萨裂腹鱼受精卵在肌节出现期以前对水流和震动非常敏感，水流速低于0.1m/s，受精卵不能上下翻滚，堆积在底部，容易局部缺氧和滋生水霉；水流速高于0.2m/s后，受精卵适应不了受精卵上下翻滚幅度太大，容易从孵化器顶部溢出，同时水流速高于0.3m/s后，死亡率显著升高，鱼苗畸形率显著升高。

优选地，孵化密度为0.1万粒每升水，在0.1-0.2m/s水流速下，受精卵均匀上下翻滚，受精卵充满整个孵化器90%，充分利用孵化器空间，同时又不会从孵化器顶部溢出；受精卵孵化密度高于0.1万粒每升水后，受精卵容易从孵化器顶部溢出。

本发明的有益效果在于：

1、本发明通过对人工注射激素方式进行严格控制， 雌鱼催产率90%以上，雄鱼催产率100%，平均受精率92.39%，孵化率88.46%，较现有繁殖方法有更高的催产率；实现拉萨裂腹鱼规模化人工繁殖。

2、本发明鱼苗出膜第18天后，开始投喂食物，筛选出最优的微粒子配合饲料，控制投喂频率为每天1次，有利于拉萨裂腹鱼的生长和成活率。

3、本发明结合拉萨裂腹鱼受精卵敏感期特点，包括肌节出现期以前平列槽孵化方式孵化和肌节出现期以后圆柱溢水型孵化器孵化。适用于大规模拉萨裂腹鱼人工繁殖，在保证受精卵孵化率和控制鱼苗畸形率的前提下，有效节约孵化空间，有效降低人力投入。

附图说明

图1为拉萨裂腹鱼仔鱼的初次摄食率与成活率。

图2 是拉萨裂腹鱼不同发育时期受精卵在连续震动下死亡百分比。

图3是连续震动下拉萨裂腹鱼受精卵不同受精时间死亡百分比。

图4为本发明鱼卵孵化器的结构图。

附图标记：1、孵化桶，2、进水管，3、连接管，4、溢水管，11、进水口，12、溢水口，21、出水孔，31、阀门。

具体实施方式

为了更加清楚、详细地说明本发明的目的技术方案，下面通过相关实施例对本发明进行进一步描述。以下实施例仅为具体说明本发明的实施方法，并不限定本发明的保护范围。

实施例1

一种野生拉萨裂腹鱼人工繁殖方法，包括以下步骤：

A、亲鱼采集

在每年4月上旬-5月下旬于雅鲁藏布江收集拉萨裂腹鱼亲鱼，并选择身体健壮、发育良好的作为拉萨裂腹鱼亲鱼；

B、人工催产

催产前，先用麻醉剂将亲鱼麻醉，再分别给雌鱼和雄鱼打催产针；雌鱼：根据亲鱼性腺成熟度确定采用1针注射或者2针注射。成熟度较好的亲本采用1针注射法，每千克雌鱼注射10 mgDOM+10μg LHRH-A₂，成熟度较差的亲本采用2针注射法，第一针每千克雌鱼注射2mgDOM+2μg LHRH-A₂，24h后注射第二针，每千克雌鱼注射8 mgDOM+8μg LHRH-A₂；雄鱼：雄鱼采用1针注射法，在雌鱼注射催产药物24h后，每千克雄鱼注射5 mgDOM+5μg LHRH-A₂；

C、人工授精

将亲鱼用麻醉剂麻醉后，再采集精液和卵子，采用干法授精；

D、受精卵孵化

从受精卵到肌节出现期以前，将受精卵置于孵化框内流水孵化；受精卵发育到肌节出现期后，剔除死卵，将受精卵移入鱼卵孵化器中孵化，直到鱼苗全部出膜；

E、鱼苗开口

培育水温12℃条件下，鱼苗出膜第18天后，开始投喂食物，直接投喂微粒子配合饲料，每天投喂1次。

本发明于每年4月上旬-5月下旬于雅鲁藏布江收集拉萨裂腹鱼亲鱼，4月前，拉萨裂腹鱼性腺发育普遍不成熟，收回后的亲鱼，催产效应时间特别长，且催产率低，亲鱼死亡率高；5月下旬以后亲鱼大部分为产后亲鱼，只有雅鲁藏布江上游少数地方亲鱼未产，但是上游亲鱼性腺发育很不同步，催产效应时间不一，且催产率极低。

针对人工催产，拉萨裂腹鱼野生雌鱼发育不整齐，一般两针注射是针对性腺发育成熟度不够好的亲鱼，第一针催熟，第二针催产。统一采用2针法，性腺成熟度好的亲鱼效应时间较短，性腺成熟度差的亲鱼效应时间长，需要更频繁的检查催产亲鱼是否可产，每一次检查都对亲鱼有较大损伤和应激。

本发明对性腺成熟度较好的亲鱼采用1针注射法，在第72h、96h检查两次，92%以上亲鱼生产；性腺成熟度较差的亲鱼，采用2针注射法，在第96h、120h检查两次，90%以上亲鱼生产。

针对人工孵化，本发明在拉萨裂腹鱼的繁殖生产中，发现裂腹鱼受精卵存在对水流敏感的现象。直接采用鱼卵孵化器孵化，上溢的水流会引起受精卵上下翻滚，造成受精卵死亡。本发明经研究指出拉萨裂腹鱼在肌节出现期后的受精卵耐震动能力明显增强，在流动水体内仍能保持与平静水体相当的成活率，可在此时将鱼卵从孵化框转入鱼卵孵化器中，有效节约孵化空间，加快受精卵孵化周转速度，降低人力投入。

针对鱼苗开口，通过饥饿实验发现：拉萨裂腹鱼鱼苗在出膜第18天肠道开始摄食，肠道能观察到食物，使用人工配合饲料投喂5h后，仔鱼的初次摄食率（43.33±20.81）%，可见部分仔鱼虽有摄食，但摄食量仅占肠道部分，未完全充满肠道；出膜23天后仔鱼摄食效果较好，几乎充满全部肠道；出膜25天仔鱼的平均摄食率提高到（89.26±11.13）%；出膜29天仔鱼的平均摄食率达到最高的（100.00±0.00）%；此后摄食率逐渐下降，在41天时，饥饿仔鱼的初次摄食率下降为（48.33±10.41）%，低于最高初次摄食率一半，因此，拉萨裂腹鱼仔鱼耐受饥饿的不可逆点（PNR）即为41日龄。

实施例2

本实施例在实施例1的基础上：

所述的亲鱼是指选择雌鱼体重在1050 g以上，体长48.5 cm以上，年龄12龄以上；腹部膨大、柔软，有明显的卵巢轮廓，肛门略突出、发红，倒提腹腔下塌；雄鱼体重在346 g以上，体长34 cm以上，年龄在9龄以上，腹部狭长，且吻端出现明显珠星，轻压腹部，泄殖孔有乳白色精液流出的雄鱼。

实施例3

本实施例在实施例1的基础上：

所述成熟度较好的亲本是指：腹部膨大、柔软，泄殖孔略突出、发红，倒提腹腔下塌明显，轻压腹部泄殖孔出现少量卵粒；所述成熟度较差的亲本是指：腹部膨大较硬，泄殖孔无突出、发红特征，倒提腹部下榻不明显，轻压腹部，泄殖孔无卵粒。

实施例4

本实施例在实施例1的基础上：

所述的麻醉剂是指150mg/L的MS-222。

实施例5

本实施例在实施例1的基础上：

所述的麻醉剂是指150mg/L的MS-222。

在雌鱼采用1针注射后的72-96h进行采卵，2针注射后的96-120h进行采卵；该效应时间内的雌鱼催产比例最高。

雄鱼注射后的48h进行采，该效应时间内的雄鱼精液量最高。

实施例6

本实施例在实施例1的基础上：

苗出膜后移入平列槽中培育，在开口18天内，鱼苗放养密度为20-25尾/L；18天以后，鱼苗放养密度为5-15尾/L。

实施例7

本实施例在实施例1的基础上：

苗出膜后移入平列槽中培育，在开口18天内，鱼苗放养密度为20-25尾/L（此密度下，鱼苗存活率高，开口摄食率高）；18天以后，鱼苗放养密度为5-15尾/L（此密度下，鱼苗成活率高）。

所述的微粒子配合饲料是指山东升索渔用饲料研究中心配合饲料，

微粒子配合饲料，连续投喂1个月，随着鱼苗个体增大，转喂S2；S2投喂2个月以后，鱼苗个体增大，转投S3。

鱼苗开口实验

本发明在苗出膜后的1-42天对鱼苗进行投喂，对比了多种鱼饲料，结果见表1和2，结果证明山东升索的微粒子配合饲料对鱼的生长和存活率都是最佳的。

表1 不同开口饲料对拉萨裂腹鱼生长的影响

表2 不同开口饲料对拉萨裂腹鱼存活率的影响

进一步地，在培育水温12-13℃条件下，鱼苗出膜第18d后，开始投喂食物，饥饿不可逆点为41d，直接投喂微粒子配合饲料投喂，每天投喂1次。拉萨裂腹鱼仔鱼的初次摄食率与成活率见图1，说明适宜开口投喂时间为18-28天。

拉萨裂腹鱼鱼苗在出膜第18天肠道开始摄食，肠道能观察到食物，使用人工配合饲料投喂5h后，仔鱼的初次摄食率（43.33±20.81）%，可见部分仔鱼虽有摄食，但摄食量仅占肠道部分，未完全充满肠道；出膜23天后仔鱼摄食效果较好，几乎充满全部肠道；出膜25天仔鱼的平均摄食率提高到（89.26±11.13）%；出膜29天仔鱼的平均摄食率达到最高的（100.00±0.00）%；此后摄食率逐渐下降，在41天时，饥饿仔鱼的初次摄食率下降为（48.33±10.41）%，低于最高初次摄食率一半，因此，拉萨裂腹鱼仔鱼耐受饥饿的不可逆点（PNR）即为41日龄。

随仔鱼开始投喂时间的延长，饥饿仔鱼的成活率速度先趋于稳定，在30日龄后下降速度明显加快，其中在28日龄之前成活保持在90%以上；29日龄之后降至90%以下，随日龄增长不断下降；在36日龄饥饿仔鱼成活降至50%以下，达到（44.00±21.17）%，即达到仔鱼的半致死时间，用出膜后36日龄。

所述的微粒子配合饲料是指山东升索渔用饲料研究中心配合饲料，

优选地，采用微粒子配合饲料S1，连续投喂1个月，随着鱼苗个体增大，转喂微粒子配合饲料S2 2个月，鱼苗个体增大，转投微粒子配合饲料S3。

配合饲料的蛋白含量为50-55%，脂肪含量10%，筛选得到符合鱼苗生产需求，配合饲料S1的粒径为0.1 mm，配合饲料S2粒径为0.2 mm，配合饲料S3的粒径为0.3mm，能更好激起鱼苗食欲，生长速度更快。

进一步地，在苗出膜后的1-42天，采用微粒子配合饲料S1对鱼苗进行投喂，将鱼苗分6组，每组分别按2h、4h、6h、8h、12h和24h的投喂频率来投喂，观察每组鱼苗的生长情况和成活率。由表3和4的结果可见，24h的投喂频率最佳。

表3 不同投喂频率对拉萨裂腹鱼生长的影响

表4 不同投喂频率对拉萨裂腹鱼存活率的影响

本发明经长期在西藏自治区对拉萨裂腹鱼受精卵的发育观察实验，得出不同温度条件下拉萨裂腹鱼受精卵发育到各时期所需时间变化图（图1），并通过建立数学模型，拟合得出表5的回归方程。

表5 不同温度下异齿裂腹鱼胚胎发育各时期和发育时间的回归方程

肌节出现期为受精卵发育的第20个发育阶段，将20带入表5的“x”，可计算出不同温度下受精卵发育到肌节出现期所需要的时间（h）。根据计算出的时间，选取孵化受精卵在解剖镜下观察，再次确认是否发育到肌节出现期。如未发育到，可每隔2h观察1次。

研究发现，水温越高，发育到肌节出现期所需时间越短，适于拉萨裂腹鱼受精卵孵化的温度是12-16℃，表6列举出在12、14、16℃发育到肌节出现期所需时间，为不同温度下拉萨裂腹鱼受精卵从平列槽中转移到孵化器中时间节点提供依据。

表6不同温度下拉萨裂腹鱼受精卵胚胎发育到肌节出现期所需时间

震荡实验

将受精卵于平列槽孵化盘中孵化，孵化盘为48cm×35cm×4cm。从受精到出膜，每一个发育时期随机捞取鱼卵300粒，平均分为2个组。1组为试验组，置于水浴恒温振荡器（SHZ-A）震荡，震荡频率分别为100 r/min（换算为水流速为0.3m/s），水温12℃，直到下一个发育时期，解剖镜下，统计受精卵死亡数量；1组为对照组，置于长21cm×宽7cm×高4cm孵化盘中孵化，孵化盘置于长2.8m×宽0.5m×深25cm平列槽中，从一端进如曝气后的井水，水交换量为3次/小时，平列槽中水流速0.01-0.02m/s，溶氧≥8mg/L，水温12.0℃，发育到下一个时期后，统计死卵数量。

连续震动下拉萨裂腹鱼受精卵的死卵情况见图2和图3。由图2可见，拉萨裂腹鱼在肌节出现期后连续震动下死亡百分比明显降低，由图3可见，连续震动下拉萨裂腹鱼受精卵在受精卵95小时后死亡百分比明显降低，与12℃的肌节出现时间刚好吻合。

实施例8

本实施例在实施例1的基础上：

在所述D步骤的整个孵化过程中，所述孵化框孵化占时32%，鱼卵孵化器孵化占时68%。这是根据培育水温12℃，计算得出的肌节出现期所占整个孵化期的时间。

实施例9

本实施例在实施例1的基础上：

如图4所示，一种拉萨裂腹鱼鱼卵孵化器，包括孵化桶1和设置在孵化桶内的进水管2，所述孵化桶1的底部为弧形面，所述底部设置有进水口11，所述进水管2上均布有多个出水孔21且一端封闭，所述进水管2开放的一端可拆卸连接所述进水口11，所述孵化桶1外部的进水口处设置有连接管3，所述连接管3上设置有阀门31，所述孵化桶1的上部开设有溢水口12，所述溢水口12连接外部的溢水管4。

鱼卵孵化前，将孵化器的连接管3连接外部水源，水流持续从孵化器底部的进水口11进入进水管2，并从进水管的出水孔21喷入孵化器，从孵化器的上部溢水口12溢出，使水充满整个孵化器。放入受精卵，拉萨裂腹鱼的受精卵为沉性卵，会向下沉，出水孔21喷出的水柱打在孵化器的弧形底部，水柱反射回来，使受精卵在水流作用下保持均匀上下翻滚，同时，弧形面底部无死角不会造成鱼卵在底部堆积而死卵；受精卵孵化后，轻质的卵膜漂浮在水面上，在持续水流作用下从上部的溢水口12溢出。受精卵完全孵化后，轻质的卵膜排出，鱼苗留下在孵化器中，将孵化器的连接管3连接外部的鱼池，取下孵化器内的进水管2，孵化器内的鱼苗随水流一起从进水口11排出到下方的鱼池中，完成鱼苗的收集。

本发明的鱼卵孵化器，占地面积小，单位面积可孵化受精卵数量大大增加；受精卵死亡后，鱼卵发白，密度变小，可随着水流从孵化器上端流出，因此不用剔除死卵，节约大量人力财力。

本发明的鱼卵孵化器的底部呈平缓过度的弧形面，由于拉萨裂腹鱼受精卵为沉性卵，底部为弧形面的柱形孵化器能形成自下而上的水流，可使受精卵能上下翻滚，无水流死角，鱼卵不会堆积在死角内。

实施例10

本实施例在实施例9的基础上：

所述的鱼卵孵化器孵化包括以下步骤：

A、将鱼卵孵化器从底部连接外部水源，保持持续进水；

B、将受精卵移入鱼卵孵化器，受精卵在底部水流作用下上下翻滚；

C、出苗后的卵膜和死卵漂浮在水面上，并顺水流从鱼卵孵化器上部的溢水口排出；

D、将鱼卵孵化器从底部连接外部鱼池，取出鱼卵孵化器内的进水管，鱼苗随水流一起从鱼卵孵化器底部排出到鱼池中，完成鱼苗的收集。

实施例11

本实施例在实施例9的基础上：

所述的鱼卵孵化器从底部进水口泵入曝气后的井水，水温12℃，溶解氧≥8 mg/L，出水孔的水流速为0.1-0.2m/s。

实施例12

本实施例在实施例9的基础上：

所述的鱼卵孵化器从底部进水口泵入曝气后的井水，水温16 ℃，溶解氧≥8 mg/L，出水孔的水流速为0.1-0.2m/s。

所述鱼卵孵化器的孵化密度为0.1万粒每升水。

实施例13

本实施例在实施例9的基础上：

所述的鱼卵孵化器从底部进水口泵入曝气后的井水，水温14℃，溶解氧≥8 mg/L，出水孔的水流速为0.1-0.2m/s。

所述鱼卵孵化器的孵化密度为0.1万粒每升水。

进一步地，所述出水孔的孔径为2-3mm。利于控制水流速，不会因为水速过高损伤到鱼卵。

所述出水孔的高度不高于弧形底面的高度，保证出水孔喷出的水都能打到弧形面上反射回来。

所述的可拆卸连接是指螺纹连接。

所述溢水口距底部的高度为55-65cm。不会因为距离过低而使受精卵从溢水口排出。

如表7所示，本发明在肌节出现期前分别采用孵化框孵化和本发明的鱼卵孵化器孵化，做了三组实验，得出孵化框孵化的鱼卵成活率更高；肌节出现期后分别采用孵化框孵化和本发明的鱼卵孵化器孵化，同样做了三组实验，二者鱼苗出膜率相当。可见，本发明在拉萨裂腹鱼受精卵肌节出现期后转入鱼卵孵化器孵化，不影响鱼苗的成活率和出膜率，设备占地面积小，在转入鱼卵孵化器的同时，孵化框可进行第二批受精卵孵化，孵化周转快，且不用剔除死卵，节约大量人力财力。

表7 拉萨裂腹鱼受精卵孵化鱼卵成活率和出膜率对比

实施例14

（1）亲鱼收集季节

每年4月上旬-5月下旬为拉萨裂腹鱼繁殖季节，在4月上旬-5月下旬于雅鲁藏布江收集拉萨裂腹鱼亲本。

（2）亲鱼选择

雌鱼体重应在1050 g以上，体长48.5 cm以上，年龄12龄以上；腹部膨大、柔软，有明显的卵巢轮廓，肛门略突出、发红，倒提腹腔下塌。雄鱼体重应在346 g以上，体长34 cm以上，年龄在9龄以上，腹部狭长，且吻端出现明显追星，轻压腹部，泄殖孔有乳白色精液流出的雄鱼。

（3）亲鱼培育水环境

亲鱼培育池为水泥池，内部贴瓷砖，规格为长4m×宽3m×深1m。亲鱼培育用水为曝气后的井水，水质清澈无污染，水温12-13℃，溶氧≥6mg/L，pH8.0-8.5，池水每小时交换2次

（4）人工催产：

雌鱼：

根据亲鱼性腺成熟度确定采用1针注射或者2针注射。成熟度较好亲本（腹部膨大、柔软，泄殖孔略突出、发红，倒提腹腔下塌明显，轻压腹部泄殖孔出现少量卵粒）采用1针注射法，每千克雌鱼注射10 mgDOM+10μg LHRH-A2，催产效应时间72-96h。成熟度较差的亲本（腹部膨大较硬，泄殖孔无突出、发红特征，倒提腹部下榻不明显，轻压腹部，泄殖孔无卵粒）采用2针注射法，第一针每千克雌鱼注射2 mgDOM+2μg LHRH-A2，24h后注射第二针每千克雌鱼注射8 mgDOM+8μg LHRH-A2，效应时间为96-120h。催产激素均在胸鳍基部注射。

雄鱼：

雄鱼均采用1针注射法，在雌鱼注射催产药物24h后，每千克雄鱼注射5 mgDOM+5μgLHRH-A2；效应时间为48h。

（5）人工授精：

人工采精：雄鱼采用150mg/L的MS-222麻醉后，倒提，毛巾擦干体表水分（尤其是泄殖孔附近），将精液剂入干燥洁净的EP管中，EP管保存鱼冰盒中。精液采集需要在室内或者遮阴处操作，尽量避光。采集好的精液显微镜观察活力，活力好（使用1 ml注射器针头滴一滴水于经灭菌锅灭菌并烘干的载玻片上轻轻摊成薄薄的水层，另使用新的1 ml注射器针头针蘸取些许精子迅速涂于载玻片上水层中，40×10倍显微镜下观察，整个视野中70% 精子呈“旋涡”状运动，无法看清精子的运动路线，时间不少于40s）的精液保留，质量差的精液淘汰。质量好的精液可在冰盒或者4℃冰箱中有效保存24h，因此采集精液需要在24h内使用

卵子采集：

效应时间达到后，检查雌鱼，将能顺利产卵的雌鱼（轻压腹部，鱼卵能顺利流出）于150mg/L的MS-222麻醉后，倒提，毛巾擦干体表水分（尤其是泄殖孔附近），剂卵入洁净内壁光滑的盆中。

人工授精：

鱼卵挤出后，迅速倒入质量合格的精液，用羽毛快速搅拌均匀，加少量清水，匀速搅拌60s，然后使用清水洗卵4-5次，洗去有精液的水，待水盆中水清澈干净后，倒入孵化盘中孵化。

（6）受精卵孵化：

从受精卵到肌节出现期以前，将受精卵置于孵化框内流水孵化；受精卵发育到肌节出现期后，剔除死卵，将受精卵移入鱼卵孵化器中孵化，直到鱼苗全部出膜；

（7）鱼苗开口

培育水温12-13℃条件下，鱼苗出膜第18d后，开始投喂食物，饥饿不可逆点为41d，直接投喂微粒子配合饲料投喂，每天投喂1次。

以上所述实施例仅表达了本发明的具体实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对本发明专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。

Claims (9)

1.一种野生拉萨裂腹鱼人工繁殖方法，其特征在于，包括以下步骤：

A、亲鱼采集

在每年4月上旬-5月下旬于雅鲁藏布江收集拉萨裂腹鱼亲鱼，并选择身体健壮、发育良好的作为拉萨裂腹鱼亲鱼；

B、人工催产

催产前，先用麻醉剂将亲鱼麻醉，再分别给雌鱼和雄鱼打催产针；雌鱼：根据亲鱼性腺成熟度确定采用1针注射或者2针注射，成熟度较好的亲本采用1针注射法，每千克雌鱼注射10 mg DOM+10μg LHRH-A₂，成熟度较差的亲本采用2针注射法，第一针每千克雌鱼注射2 mgDOM+2μg LHRH-A₂，24h后注射第二针，每千克雌鱼注射8 mg DOM+8μg LHRH-A₂；雄鱼：雄鱼采用1针注射法，在雌鱼注射催产药物24h后，每千克雄鱼注射5 mg DOM+5μg LHRH-A₂；

C、人工授精

将亲鱼用麻醉剂麻醉后，再采集精液和卵子，采用干法授精；

D、受精卵孵化

从受精卵到肌节出现期以前，将受精卵置于孵化框内流水孵化；受精卵发育到肌节出现期后，剔除死卵，将受精卵移入鱼卵孵化器中孵化，直到鱼苗全部出膜；

E、鱼苗开口

培育水温12℃条件下，鱼苗出膜第18天后，开始投喂食物，直接投喂微粒子配合饲料，每天投喂1次；所述的微粒子配合饲料是指山东升索渔用饲料研究中心配合饲料；

所述的鱼卵孵化器包括孵化桶和设置在孵化桶内的进水管，所述孵化桶的底部为弧形面，所述底部设置有进水口，所述进水管上均布有多个出水孔且一端封闭，所述进水管开放的一端可拆卸连接所述进水口，所述孵化桶外部的进水口处设置有连接管，所述连接管上设置有阀门，所述孵化桶的上部开设有溢水口，所述溢水口连接外部的溢水管。

2.根据权利要求1所述野生拉萨裂腹鱼人工繁殖方法，其特征在于，所述的亲鱼是指选择雌鱼体重在1050 g以上，体长48.5 cm以上，年龄12龄以上；腹部膨大、柔软，有明显的卵巢轮廓，肛门略突出、发红，倒提腹腔下塌；雄鱼体重在346 g以上，体长34 cm以上，年龄在9龄以上，腹部狭长，且吻端出现明显珠星，轻压腹部，泄殖孔有乳白色精液流出的雄鱼。

3.根据权利要求1所述野生拉萨裂腹鱼人工繁殖方法，其特征在于，所述成熟度较好的亲本是指：腹部膨大、柔软，泄殖孔略突出、发红，倒提腹腔下塌明显，轻压腹部泄殖孔出现少量卵粒；所述成熟度较差的亲本是指：腹部膨大较硬，泄殖孔无突出、发红特征，倒提腹部下榻不明显，轻压腹部，泄殖孔无卵粒。

4.根据权利要求1所述野生拉萨裂腹鱼人工繁殖方法，其特征在于，所述的麻醉剂是指150mg/L的MS-222。

5.根据权利要求1所述野生拉萨裂腹鱼人工繁殖方法，其特征在于，雌鱼采用1针注射后的72-96h进行采卵，2针注射后的96-120h进行采卵；雄鱼注射后的48h进行采精。

6.根据权利要求1所述野生拉萨裂腹鱼人工繁殖方法，其特征在于，鱼苗出膜后移入平列槽中培育，在开口18天内，鱼苗放养密度为20-25尾/L；18天以后，鱼苗放养密度为5-15尾/L。

7.根据权利要求1所述野生拉萨裂腹鱼人工繁殖方法，其特征在于，在所述D步骤的整个孵化过程中，所述孵化框孵化占时30-40%，鱼卵孵化器孵化占时60-70%。

8.根据权利要求1所述野生拉萨裂腹鱼人工繁殖方法，其特征在于，所述的鱼卵孵化器从底部进水口泵入曝气后的井水，水温12-16 ℃，溶解氧≥8 mg/L，出水孔的水流速为0.1-0.2m/s。

9.根据权利要求1所述野生拉萨裂腹鱼人工繁殖方法，其特征在于，所述鱼卵孵化器的孵化密度为0.1万粒每升水。

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