CN110511387B

CN110511387B - 透明质酸-g-聚酪氨酸-硫辛酸共聚物、聚多肽纳米粒及其制备方法与应用

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Publication number: CN110511387B
Application number: CN201910819116.0A
Authority: CN
Inventors: 邓超; 方慧敏; 顾晓雷; 钟志远
Original assignee: Suzhou University
Current assignee: Suzhou University
Priority date: 2019-08-30
Filing date: 2019-08-30
Publication date: 2022-04-15
Anticipated expiration: 2039-08-30
Also published as: CN110511387A

Abstract

本发明公开了一种透明质酸‑g‑聚酪氨酸‑硫辛酸共聚物、聚多肽纳米粒及其制备方法与应用。首先，通过开环聚合以及羧基与氨基的反应得到HA‑PTyr‑LA共聚物，该方法简便可控，且制得的聚合物具有良好的生物相容性和生物降解性。然后，用该聚合物经自组装得到粒径可控、稳定性好、具有还原响应性和高载药量的纳米粒。该纳米药物能在体内长循环，有效地富集到肿瘤部位，进而较好地抑制4T1皮下肿瘤的生长，更能有效地防止乳腺癌细胞在肺部的远端转移。

Description

透明质酸-g-聚酪氨酸-硫辛酸共聚物、聚多肽纳米粒及其制备方法与应用

技术领域

本发明涉及一种生物相容性、生物可降解的透明质酸、聚酪氨酸材料及其应用，具体涉及一种硫辛酸-聚酪氨酸修饰的透明质酸接枝聚多肽材料的合成及由其制备的一种可逆交联的聚多肽纳米粒在憎水性化疗药物高效包载和靶向递送中的应用。

背景技术

聚多肽具有优异的生物相容性、良好的可降解性、易于修饰等特点，被越来越多地用于构建药物递送系统。目前已经有多种聚多肽纳米药物进入临床试验阶段；然而，现有聚多肽纳米载体仍存在着一些缺点，如注射到体内后药物易早释、肿瘤靶向效果差、药物到达肿瘤组织后释放缓慢等。因此，需要研发新的方法以构建高载药效率、交联稳定和靶向释放的纳米药物，可望大大提高现有纳米药物对肿瘤的治疗功效。

发明内容

本发明设计合成了硫辛酸-聚酪氨酸接枝的透明质酸共聚物及由其制备得到的可逆交联和肿瘤靶向的聚多肽纳米粒用于憎水性抗肿瘤药物的高效包载和靶向递送，结果表明聚多肽纳米药物可以有效地提高治疗效果，并能减小毒副作。

为达到上述目的，本发明采用的技术方案为：一种具有式I结构的透明质酸-g-聚酪氨酸-硫辛酸共聚物（HA-g-PTyr-LA）：

其中，m为35～150，n为7～20，x为30～110，y为m-x；优选的，m为45～95，n为10～15，x为35～70。

本发明公开了上述透明质酸-g-聚酪氨酸-硫辛酸共聚物（HA-g-PTyr-LA）的制备方法，包括如下步骤：

（1）在氮气条件下，以单端为氨基的硫辛酸（LA-NH₂）为小分子引发剂，通过开环聚合L-酪氨酸N-羧基内酸酐（Tyr-NCA）得到聚酪氨酸（LA-PTyr）；

（2）以透明质酸、硫辛酸-聚酪氨酸(LA-PTyr)为原料，反应得到透明质酸-g-聚酪氨酸-硫辛酸共聚物HA-g-PTyr-LA。

本发明还公开了聚多肽纳米载体的制备方法，所述纳米粒的制备方法包括如下步骤：

（2）以透明质酸、硫辛酸-聚酪氨酸(LA-PTyr)为原料，反应得到透明质酸-g-聚酪氨酸-硫辛酸共聚物HA-g-PTyr-LA；

（3）搅拌下，将透明质酸-g-聚酪氨酸-硫辛酸共聚物的溶液滴加到缓冲溶液中，滴加完毕后透析得到聚多肽纳米粒；或者

搅拌下，将透明质酸-g-聚酪氨酸-硫辛酸共聚物的溶液滴加到缓冲溶液中，滴加完毕后透析、交联得到聚多肽纳米粒。

本发明还公开了一种纳米药物及其制备方法，所述纳米药物的制备方法为：搅拌下，将式I结构的透明质酸-g-聚酪氨酸-硫辛酸共聚物与药物的混合溶液滴加到缓冲溶液中，滴加完毕后透析得到纳米药物；或者

搅拌下，将式I结构的透明质酸-g-聚酪氨酸-硫辛酸共聚物与药物的混合溶液滴加到缓冲溶液中，滴加完毕后透析、交联得到纳米药物。

上述技术方案中，步骤（1）中，L-酪氨酸N-羧基内酸酐、单端为氨基的硫辛酸的摩尔比为7～20∶1，开环聚合的温度为30℃，时间为72小时。

上述技术方案中，步骤（1）中，开环聚合在溶剂中进行，溶剂优选DMF。

上述技术方案中，步骤（2）中，先用活化剂活化透明质酸，再与硫辛酸-聚酪氨酸反应得到透明质酸-g-聚酪氨酸-硫辛酸共聚物（HA-g-PTyr-LA）；所述活化剂为1-乙基-(3-二甲氨基丙基)碳二亚胺盐盐酸盐和N-羟基琥珀酰亚胺。

上述技术方案中，步骤（2）中，硫辛酸-聚酪氨酸与透明质酸的羧基的摩尔比为0～0.5∶1，不含0，比如0.10、0.30和0.40；反应的温度30℃，反应24小时。

上述透明质酸-g-聚酪氨酸-硫辛酸共聚物（HA-g-PTyr-LA）的制备方案的具体反应步骤可举例如下：

将Tyr-NCA（4.9mmol）溶解于12 mL DMF中，在氮气环境下，慢慢滴加至溶有LA-NH₂（0.4 mmol）的DMF（4 mL）溶液中，置于30 ℃ 油浴中反应；然后用过量的冰乙醚沉淀，离心后收集沉淀置于真空干燥箱中干燥24 h得到聚合物LA-PTyr；

将HA (900 mg, 2.4 mmol -COOH)充分溶解于二次水(35 mL)中，然后再向该溶液中加入EDC（460 mg, 2.4 mmol）和NHS（138 mg, 1.2 mmol）,待溶液澄清后用1.2 M HCL将反应溶液的pH值调节在5.0进行HA羧基的活化，活化时间为30 分钟；然后用2.0 M NaOH调节反应溶液的pH到9.0，然后，将LA-PTyr（1800 mg, 0.8 mmol）的DMSO (50 mL)溶液缓慢加入上述溶液中，在30 ^oC下搅拌反应24 小时；反应结束后，先用DMSO透析2天，随后再用一次水继续透析两天（Spectra/Pore, MWCO 7000），最后冷冻干燥得到白色固体HA-g-PTyr-LA。

上述制备方案可表示如下：

本发明中，药物为憎水性抗肿瘤药物；纳米药物中，可逆交联的聚多肽纳米粒可通过憎水作用和π-π堆积作用，实现对憎水小分子药物的高效包载和肿瘤靶向递送。

本发明制备方法中，透明质酸-g-聚酪氨酸-硫辛酸共聚物的溶液、透明质酸-g-聚酪氨酸-硫辛酸共聚物与药物的混合溶液中，溶剂为DMSO；缓冲溶液为pH 7.4，5 mM的PB缓冲溶液；搅拌速度为500 rpm；透析为在截留分子量为3.5 K的透析袋中以pH 7.4的HEPES缓冲溶液为介质透析6 h，每1 h换一次透析介质；交联在37℃ 200 rpm的摇床中交联12 h，优选交联后将混合溶液转移到透析袋中用PB ( pH 7.4, 5 mM)透析2小时；优选交联剂为DTT。

本发明进一步公开了上述透明质酸-g-聚酪氨酸-硫辛酸共聚物在制备抗肿瘤药物载体或者抗肿瘤药物中的应用；所述纳米药物在制备抗肿瘤药物中的应用。

由于上述技术方案的应用，本发明与现有技术相比具有下列优点：

本发明设计制备的HA-g-PTyr-LA共聚物具有良好的生物相容性和生物降解性，且制备简单、重复可控；设计构建的聚多肽纳米粒子具有粒径可控（60~100 nm）、交联稳定和还原响应性的特性；同时，还可通过憎水作用和π-π堆积作用，实现对抗肿瘤小分子药物的高效包载；另外，纳米载体表面的靶向分子多糖实现了该纳米药物的肿瘤靶向递送；同时制备方法简单，所用原料来源广泛且便宜，具有良好的应用前景。

附图说明

图1是实施例一中LA-PTyr的核磁氢谱图（A）；MALDI-TOF谱图（B）；

图2是实施例二中HA-g-PTyr-LA的核磁氢谱图；

图3是实施例三和实施例四中载药纳米粒子的粒径分布及透射电子显微镜图（A）；载药纳米粒的稳定性（B）；还原响应性（C）；体外释放行为（D）；

图4是实施例五中CMHN空纳米载体对4T1细胞的细胞毒性（A）；载药纳米粒（DTX-CMHN）对4T1细胞的毒性（B）；

图5是实施例六中载药纳米粒子的抗肿瘤细胞迁移和侵袭细性能：图（A）划痕图片；（B）划痕面积比；（C）迁移细胞百分比；（D）侵袭细胞百分比；

图6是实施例七中DTX-CMHN、DTX-MHN和free DTX的药代动力学结果图（A）；DTX-CMHN、DTX-MHN和free DTX的生物分布（B）；

图7是实施例八中纳米药物（DTX-CMHN）对4T1乳腺癌体内抗原发和转移瘤的功效，（A）肿瘤体积生长曲线；（B）为小鼠体重变化果；（C）为生存曲线；

图8是实施例八中纳米药物（DTX-CMHN）对4T1乳腺癌体内抗原发和转移瘤的功效，（A）肺部荧光强度；（B）肺部结节数；（C）肺部重量。

具体实施方式

本发明中，透明质酸-g-聚酪氨酸-硫辛酸共聚物的制备方法如下：

（1）在氮气条件下，以单端为氨基的硫辛酸为引发剂，通过开环聚合L-酪氨酸N-羧基内酸酐得到硫辛酸-聚酪氨酸；

（2）以硫辛酸-聚酪氨酸、透明质酸为原料，反应得到具有式I结构的透明质酸-g-聚酪氨酸-硫辛酸共聚物。

下面结合附图以及实施例对本发明作进一步描述：

实施例一 LA-PTyr聚多肽的合成

首先，LA-PTyr是以LA-NH₂作为引发剂开环聚合Tyr-NCA单体得到的。具体如下，将Tyr-NCA（4.9 mmol）溶解于12mL DMF中，在氮气环境下，慢慢滴加至溶有LA-NH₂（0.4 mmol）的DMF（4 mL）溶液中，置于30 ℃油浴中反应，反应71小时后，用过量的冰乙醚沉淀，离心后收集沉淀置于真空干燥箱中干燥24 h得到聚合物LA-PTyr，产率：96%。

LA-PTyr核磁表征及MALDI-TOF见附图1，¹H NMR （400 MH_Z, DMSO-d ₆）9.10 (-OH),7.74-7.93 (-CONH-), 6.93 and 6.57 (-C₆H₅), 4.42 (-CONHCH-), 3.59 (methyne ofLA), 3.10-3.21 (-SSCH₂CH₂-, -CH₂CH₂NHCOCH-), 2.99 (–CONHCH₂–), 2.73-2.88 (-C₆H₅CH₂-), 2.37 (-SSCH₂CH₂-), 2.00 (-CH₂CH₂CONH-), 1.84 (-SSCH₂CH₂-), 1.48 和1.63 (-SSCHCH₂CH₂CH₂-), 1.30 (-SSCHCH₂CH₂CH₂-, -CONHCH₂CH₂CH₂-)。

实施例二HA-g-PTyr-LA的合成

将HA (900 mg, 2.4 mmol –COOH，m为52.8)充分溶解于二次水(35 mL)中并加入EDC（460 mg, 2.4 mmol）和NHS（138 mg, 1.2 mmol）,之后用1.2 M HCL将反应溶液的pH值调节在5.0左右进行HA羧基的活化，30 分钟后用2.0 M NaOH调节反应溶液的pH到9.0左右，同时加入20 mL 的DMSO，然后缓慢加入LA-PTyr（1800 mg, 0.8 mmol）的DMSO (50 mL)溶液，在30 ^oC下搅拌反应24 小时；反应结束后，先用DMSO透析2天，随后再用一次水继续透析两天（Spectra/Pore, MWCO 7000），最后冷冻干燥得到白色固体为明质酸-g-聚酪氨酸-硫辛酸共聚物HA-g-PTyr-LA，产率：86.7%。上述制备方案可表示如下：

HA-g-PTyr-LA核磁表征见附图2，¹H NMR （600 MHz，DMSO-d ₆-D₂O ）HA:4.10,3.23-3.71,1.79；LA-PTyr：6.84,6.56,4.40，3.89，2.97-3.10，2.64-2.77，2.24，2.00，1.84，1.58，1.45，1.06-1.25。LA-PTyr的取代度（DS）定义为100个糖单元中LA-PTyr所占的百分比，通过UV计算出HA-g-PTyr-LA聚合物中LA-PTyr的取代度为11.1，即m为52.8，n为12.0，x为41.7,y为11.1；将LA-PTyr/-COOH的摩尔投料比调节成0.10和0.40，DS则变为4.2和15.3。

实施例三纳米粒子（CMHN）的制备和药物的包载

纳米粒子CMHN的制备以及对DTX的装载采用的是透析法，在室温搅拌下，将HA-g-PTyr-LA（m为52.8，n为12.0，x为m-y,y为11.1、4.2或者15.3）的DMSO溶液（0.1 mL,10 mg/mL）与DTX的DMSO溶液（5-10 wt.%的理论载药量，10 mg/mL）混合均匀，然后逐滴加入到0.9mL 的PB (pH 7.4, 5 mM)缓冲液中，滴加过程中以500 rpm的转速搅拌。滴加完毕后将载药纳米粒子溶液转移到截留分子量为3500的透析袋中用PB ( pH 7.4, 5 mM)透析6小时, 每1小时换一次透析介质得到载药纳米粒子（DTX-MHN）。透析结束后在通氮气的环境下，向纳米粒子溶液中加入15 μL（1 mg/mL）的DTT溶液,并置于37 ^oC、200 rpm的摇床中交联12小时,接着将混合溶液转移到透析袋中用PB ( pH 7.4, 5 mM)透析2小时即可得到DTX-CMHN。当继续增加聚酪氨酸的取代度（y>15.3），载药纳米粒的粒径和PDI会随之增大。表征分别见表1，载药纳米粒的粒径分布及透射电子显微镜图参见图3A，纳米粒的稀释稳定性和FBS参见图3B。

实施例四载药纳米粒子的体外药物释放

为了检测DTX-CMHN对细胞内还原环境的敏感性，将DTX-CMHN置于含有10 mM GSH的PB（pH 7.4, 5 mM）溶液中孵育，DTX-CMHN在GSH的作用下，双硫键的结构遭到破坏，转化为巯基，增加了纳米粒子的亲水性，所以纳米粒子在2小时内能够迅速溶胀，粒径变大。反之，在非还原条件下DTX-CMHN在PB（pH 7.4, 5 mM）溶液中孵育24小时后的粒径变化较小（图 3C）。同时，测定了DTX-CMHN在不同介质和不同时间点的药物释放量。结果显示，由于交联纳米粒子的致密结构以及DTX和酪氨酸苯环之间存在较强的π-π堆积作用，在不含GSH的PB溶液中，DTX-CMHN药物释放较为缓慢，24小时累积释放的DTX仅有16.5%；在10 mM GSH的还原环境中该交联纳米粒子却能够快速响应并释放出药物，4小时释放出54.9%的药物，24小时释放出89.4%的DTX（图 3D）。尤其是本发明得到的载药纳米粒稀释100倍后粒径基本没有变化，如果采用分子量为35万的HA替换实施例二的HA，得到的DCL10%的载药纳米粒粒径83nm，但是稀释100倍后变为149nm，不适用。

实施例五MTT法测试纳米粒子的细胞毒性

在室温搅拌下，将HA-g-PTyr-LA（m为52.8，n为12.0，x为41.7,y为11.1）的DMSO溶液（0.1 mL,10 mg/mL）逐滴加入到0.9 mL 的PB (pH 7.4, 5 mM)缓冲液中，滴加过程中以500 rpm的转速搅拌。滴加完毕后将纳米粒子溶液转移到截留分子量为3500的透析袋中用PB ( pH 7.4, 5 mM)透析6小时, 每1小时换一次透析介质得到载药纳米粒子（DTX-MHN），透析结束后在通氮气的环境下，向纳米粒子溶液中加入15 μL（1 mg/mL）的DTT溶液,并置于37 ^oC、200 rpm的摇床中交联12小时,接着将混合溶液转移到透析袋中用PB ( pH 7.4, 5mM)透析2小时即可得到CMHN。

将80 μL 4T1细胞以2×10³个/孔的密度铺于96孔板孵育12小时,所用血清为RPMI-1640培养基（含体积比分别为10%胎牛血清、1% 100 IU/mL 抗青霉素和100 μg/mL抗链霉素）。然后将20 μL DTX-CMHN和自由的DTX（free DTX）溶液加入孔中，使得每孔DTX的浓度为预定的浓度。细胞与药物共孵育4小时后移除培养基以除去没有被细胞摄取的纳米药物，并换上新鲜培养基继续孵育44小时，44小时后每孔加入10 μL MTT的PBS溶液（5 mg/mL）再将细胞培养4小时后移出上层培养基，接着加入150 μL DMSO 溶解活细胞产生甲瓒，充分溶解甲瓒后用酶标仪测试570 nm波长处的吸光值。空纳米载体的细胞毒性用同样的方法测定。

图4是实施例五中CMHN空载体对4T1细胞的细胞毒性（A）；载药纳米粒子DTX-CMHN对4T1细胞的毒性（B）。从结果可以看出，空载体对4T1细胞几乎没有毒性，而载药后该纳米粒可以显著杀伤4T1细胞。

实施例六载药纳米粒子的抗肿瘤细胞迁移和侵袭性能

划痕实验操作为：将100 μL 4T1细胞以5×10⁵个/孔的密度铺于6孔板孵育12小时使其贴壁并且覆盖率达到95%左右，然后用20 μL的枪头在孔内划痕，并用PBS洗两次，换上分别含有DTX-CMHN和自由药free DTX的无血清培养基孵育4小时，孵育4小时后换上不含药物的无血清培养基，32小时后在显微镜下观察并拍摄伤口愈合的图像。

Transwell迁移（Migration）实验将分别用DTX-CMHN、free DTX药物预处理4小时的4T1细胞以1 × 10⁵个/孔的密度铺于小室上层孵育44小时,侵袭（Invasion）实验需提前将Matrigel基质胶置于4 ^oC过夜溶解，灭菌枪头放于-20 ^oC冰箱降温，溶解好的Matrigel用无血清培养基稀释8倍，吸取80 μL稀释后的液体加入transwell小室内，放入培养箱待Matrigel基质胶凝固后使用。封闭实验先用HA水溶液处理。在这两个实验中，小室上层铺上1 × 10⁵个细胞，下室即24孔板内加入500 μL含10% FBS的培养基，44小时后用4%甲醛固定15分钟, 再用湿润的棉签将未穿过底膜的细胞擦去，在24孔板中加入400 μL 0.1%结晶紫溶液，将小室放入染色30分钟，PBS冼2次，倒扣风干后随将小室置于干净的24孔板内，倒置显微镜下随机选取3个视野拍照并用ImageJ图像处理软件对细胞计数进行统计分析。

图5是实施例六中细胞划痕图片（A）；划痕面积比（B）；细胞迁移划痕图片（C）；迁移细胞百分比（D）；侵袭细胞百分比（E）。实验结果可以看出未经处理的细胞孵育36小时后创伤基本完全愈合，说明4T1细胞具有良好的迁移能力，细胞经DTX-CMHN处理后的创伤愈合程度几乎可以忽略不计。迁移和侵袭实验结果显示，与PBS和HA/DTX-CMHN组相比，DTX-CMHN在很大程度上抑制了4T1细胞从小室上层迁移到小室下层的能力。

实施例七载药纳米粒子的药代动力学、生物分布

本发明中所有的动物操作均符合苏州大学动物实验中心和苏州大学动物保护和使用委员会的批准规定。

在DTX-CMHN 血液循环实验的研究中，选用健康的5周龄的Balb/c白鼠静脉注射DTX-CMHN 、DTX-MHN、free DTX(5 mg DTX equiv./kg,n=3)。给药结束后在既定的时间点眼眶取血，取出的血液经离心后收集20 μL血清加入800 μL含10 mM DTT的甲醇溶液来萃取DTX, 再经离心机离心20分钟 (30065g)后取出上清液放入通风橱内待甲醇完全挥发干加入200 μL乙腈，最后通过HPLC测出DTX的浓度。纳米粒子的药代动力学曲线通过Origin 9软件用二次指数衰减拟合得到。

采用4T1皮下荷瘤小鼠研究了DTX-CMHN的生物分布行为，在裸鼠皮下注射50 μL细胞悬浮液(1×10⁶个/mL),待肿瘤体积长至约100 mm³后通过尾静脉注射DTX-CMHN、DTX-MHN、free DTX (5 mg DTX equiv./kg,n=3)到小鼠体内，6小时后处死小鼠并收集主要脏器（心、肝、脾、肺、肾）和肿瘤，将脏器和肿瘤清洗干净进行称重，之后向每个组织中加入600 μL无水甲醇裂解组织，随后用匀浆机（IKA T25）将其研磨匀浆，结束后加入1 mL含10 mM DTT的无水甲醇在4 ^oC冰箱过夜提取各组织中的DTX, 经离心后取出上层清液将甲醇挥发干净并加入200 μL乙腈。DTX的含量由HPLC测得，结果表示为每克组织中的药物量占注射药物总量的百分比（%ID/g）。

图6是实施例七中DTX-CMHN、DTX-MHN、free DTX的药代动力学结果图（A）和生物分布（B）。药代动力学结果可以说明相比于未交联纳米药物（t_1/2=2.11 h）和自由药（t_1/2=0.75h），交联胶束（t_1/2=5.75 h）可以提高化疗药物多西他赛的血液循环时间。生物分布试验进一步表明DTX-CMHN可以减少药物对其它器官的毒副作用，提高药物的生物利用度。

实施例八载药纳米粒子对4T1皮下瘤小鼠的体内治疗实验

建立4T1皮下肿瘤模型，在裸鼠右侧大腿皮下注射50 μL的 4T1细胞悬浮液(5×10⁵个/mL)，待肿瘤体积长至50-100 mm³左右开始静脉给药，给药剂量为10 mg/kg，每隔两天给药一次，一共给药4次。在治疗过程中，每天对各组小鼠的体重和肿瘤体积进行检测，肿瘤体积的计算公式为：V = L×W×W/2，其中L为肿瘤的长度，W为肿瘤宽度，单位为mm。第13天每组各牺牲一只小鼠取出除肺部外的主要脏器和肿瘤用于组织学分析，采用正置荧光显微镜对各组织的切片进行拍照，并用蛋白免疫印迹法分析肿瘤部位的微管蛋白含量。为了评价DTX-CMHN对4T1乳腺癌在肺部转移的抑制情况，每组随机取三只小鼠通过荧光素酶显像法进行检测，在第27天将各组小鼠经颈椎脱臼法处死并取其肺部用PBS清洗后进行成像，称重、拍照，同时对其肺部上的结节计数，之后用福尔马林浸泡送肺部切片。

图7是实施例八中DTX-CMHN对4T1乳腺癌的体内原发瘤的抑制效果：（A）肿瘤体积生长曲线；（B）小鼠体重变化；（C）生存曲线；（D）肿瘤部位的Western blot测试。在治疗实验中，治疗组小鼠的皮下肿瘤生长较为缓慢，小鼠体重并没有明显的下降，Western blot结果清楚的显示DTX-CMHN组肿瘤细胞内β3微管蛋白的表达更少，这说明与对照组free DTX和PBS相比，DTX-CMHN能够更有效地抑制微管蛋白表达。

图8是实施例八中DTX-CMHN对4T1乳腺癌转移瘤的抑制效果：肺部荧光强度（A）；肺部结节数（B）；肺部重量（C）。小鼠肺部成像结果显示，在第27天对照组free DTX和PBS小鼠肺部的荧光强度分别是治疗组DTX-CMHN的7.5倍和9.4倍。同时， DTX-CMHN组小鼠肺部的结节个数与另外两组相比非常少，且肺的重量较小，肺部表面较为光滑。这一结果说明纳米药物DTX-CMHN不仅可以抑制4T1乳腺癌皮下肿瘤的生长，更能有效地抑制肿瘤细胞在肺部的转移。

Claims

1.一种具有式I结构的透明质酸-g-聚酪氨酸-硫辛酸共聚物；

其中，m为45～95，n为10～15，x为35～70,y为m-x。

2.权利要求1所述透明质酸-g-聚酪氨酸-硫辛酸共聚物的制备方法，包括如下步骤：

（1）在氮气条件下，以单端为氨基的硫辛酸为引发剂，通过开环聚合L-酪氨酸N-羧基内酸酐得到硫辛酸-聚酪氨酸；L-酪氨酸N-羧基内酸酐、单端为氨基的硫辛酸的摩尔比为7～20∶1；

（2）以硫辛酸-聚酪氨酸和透明质酸为原料，反应得到所述透明质酸-g-聚酪氨酸-硫辛酸共聚物；硫辛酸-聚酪氨酸与透明质酸的羧基的摩尔比为0～0.5∶1，不含0。

3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，步骤（1）中，开环聚合的温度为30℃，时间为72小时。

4.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，步骤（2）中，先用活化剂活化透明质酸，再与硫辛酸-聚酪氨酸反应得到透明质酸-g-聚酪氨酸-硫辛酸共聚物；反应的温度30℃，反应24小时。

5.一种聚多肽纳米粒，其特征在于，所述聚多肽纳米粒的制备方法包括如下步骤：

（1）在氮气条件下，以单端为氨基的硫辛酸为小分子引发剂，通过开环聚合L-酪氨酸N-羧基内酸酐得到聚酪氨酸；L-酪氨酸N-羧基内酸酐、单端为氨基的硫辛酸的摩尔比为7～20∶1；

（2）以透明质酸、硫辛酸-聚酪氨酸为原料，反应得到透明质酸-g-聚酪氨酸-硫辛酸共聚物；硫辛酸-聚酪氨酸与透明质酸的羧基的摩尔比为0～0.5∶1，不含0；

6.根据权利要求5所述聚多肽纳米粒，其特征在于，透明质酸-g-聚酪氨酸-硫辛酸共聚物的溶液中，溶剂为DMSO；缓冲溶液为pH 7.4 5 mM的PB；透析为在截留分子量为3.5 K的透析袋中以pH 7.4 5 mM的PB缓冲溶液为介质透析6 h，每1h换一次透析介质；交联在37℃200 rpm的摇床中交联12 h。

7.一种纳米药物，其特征在于，所述纳米药物的制备方法包括如下步骤：

（3）搅拌下，将所述透明质酸-g-聚酪氨酸-硫辛酸共聚物与药物DTX的混合溶液滴加到缓冲溶液中，滴加完毕后透析得到纳米药物；或者

搅拌下，将所述透明质酸-g-聚酪氨酸-硫辛酸共聚物与药物DTX的混合溶液滴加到缓冲溶液中，滴加完毕后透析、交联得到纳米药物。

8.根据权利要求7所述纳米药物，其特征在于，透明质酸-g-聚酪氨酸-硫辛酸共聚物与药物的混合溶液中，溶剂为DMSO；缓冲溶液为pH 7.4 5 mM的PB；透析为在截留分子量为3.5K的透析袋中以pH 7.4 5 mM的PB缓冲溶液为介质透析6 h，每1h换一次透析介质；交联在37℃ 200 rpm的摇床中交联12 h。

9.权利要求1所述透明质酸-g-聚酪氨酸-硫辛酸共聚物在制备抗肿瘤药物载体或者抗肿瘤药物中的应用；所述药物的活性成分为DTX。

10.权利要求7所述纳米药物在制备抗肿瘤药物中的应用。