CN110496192A - 一种通过调节肠道菌群平衡防治动脉粥样硬化的天然药物制剂 - Google Patents

一种通过调节肠道菌群平衡防治动脉粥样硬化的天然药物制剂 Download PDF

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Abstract

一种通过调节肠道菌群平衡防治动脉粥样硬化的天然药物制剂，属于中药研究技术领域。由重量百分含量的以下组分组成：黑玉米芯花青提取纯化物40%‑50%，含羞草总黄酮提取纯化物10%‑25%，檵花叶丹宁提取纯化物20%‑30%，姜黄素10%‑20%。上述一种通过调节肠道菌群平衡防治动脉粥样硬化的天然药物制剂的技术方案，其配方合理、绿色环保，安全性好，适合长期服用。通过各组分成分相互之间的协同增进，对动脉粥样硬化大鼠具有明显的治疗作用。该特殊组成使得产品治疗动脉粥样硬化的功效显著，服用方便。同时本发明所用主要原料黑玉米芯为植物废弃物，原料来源丰富、变废为宝、提高了资源的再利用率。

Description

一种通过调节肠道菌群平衡防治动脉粥样硬化的天然药物 制剂
技术领域
本发明属于中药研究技术领域，具体为一种通过调节肠道菌群平衡防治动脉粥样硬化的天然药物制剂。
背景技术
动脉粥样硬化是心脑血管疾病的病理学基础。有调查显示，我国心脑血管疾病的死亡率已超过肿瘤，成为危害健康的第一杀手。随着人们生活水平的不断提高，高脂、高糖、高热量饮食引发一系列代谢类疾病，如高血压、高血脂、糖尿病、肥胖、脂肪肝、心脑血管疾病等，据调查，代谢类疾病特别是高血脂而引发的血管疾病发病率及死亡率逐年上升，这些疾病严重威胁着人类健康。目前已有很多西药可以有效的降低血脂和改善动脉粥样硬化，但大量服用又会产生肝中毒、肾毒性、胃肠道功能紊乱等副作用。因此寻找天然产物有效预防和治疗动脉粥样硬化具有重要意义。
健康的肠道菌群对维持机体健康极其重要。从2008年起，陆续有美国国立卫生研究院（NIH）成立了人体微生态计划和欧盟开展了肠道微生态计划，自此肠道菌群成为了国际上的研究热点。目前微生物分析技术也大大提高，出现了PCR技术、宏基因组测序和代谢组学分析等，使人们更能清楚了解肠道微生物的结构和组成，肠道菌群的功能及外界环境对肠道菌群的影响。人体大约携带了1.275kg 的细菌，其中大约1.0kg 的细菌是定植在人体胃肠道中，约有500 多种。正常情况下，肠道菌群中的微生物与人体是共生共存的，以人体内的营养成分维持生存和代谢，同时与人体共同抵抗外界的环境变化，进行代谢消化和免疫活动维持人体健康 。当肠道菌群紊乱后又会引起炎症性肠病、肥胖 、糖尿病 、肝硬化、胃肠癌等疾病。有人发现将健康者的粪便移植到心血管疾病患者肠道中，明显降低了患者冠状动脉粥样硬化性心脏病风险。补充乳酸菌可以调节ApoE-小鼠肠道菌群，从而改善了胆固醇代谢和动脉粥样硬化。益生菌的细胞膜或细胞壁可以通过吸收或结合胆固醇从而降低其浓度。肠道粘膜受损时，肠道中的革兰氏阴性菌死亡后释放的脂多糖(LPS)会大量渗入血液中，从而引起全身慢性炎症反应促进了动脉粥样硬化的形成。肠道菌群不仅因自身组成和结构改变会引起动脉粥样硬化的形成，还能通过调控远端的基因组织或信号通路促进动脉粥样硬化形成。随着国际上对肠道菌群的高度重视，越来越多的研究发现肠道菌群在动脉粥样硬化的发展和治疗上发挥着重要。如有人对218名患动脉粥样硬化的病人和187名健康人粪便进行宏基因组测序，发现患者肠道菌群组成与健康人存在显著差异，肠杆菌科和链球菌相对丰度显著增加，偏离了健康人的丰度。肠道菌群会将胆碱类物质代谢成三甲胺物质，经肝脏氧化生成氧化三甲胺，促进动脉粥样硬化斑块形成。
玉米芯是用玉米棒脱粒加工再经过筛选制成，一般占玉米穗的20-30％左右，具有组织均匀、硬度适宜、韧性好、吸水性强、耐磨性能好等优点。黑玉米是近年来选育出的富含花青素的紫黑色玉米，黑玉米棒脱粒后的梗子称为玉米芯。黑玉米芯的成分主要含丰富的花青素、丰富的纤维素、半纤维素、粗蛋白质、粗脂肪、粗纤维等成分。一般的玉米芯都是当作废弃物弃去或者通过加工做成猪饲料使用，资源浪费非常严重。
花青素又名花色素、花色苷，是一种天然水溶性色素，广泛存在于植物的花、果实、叶片细胞液泡中，并随着液泡pH变化使其呈现不同的色彩。在酸性条件下呈红色，在碱性条件呈蓝色。花青素的结构属于典型的多酚黄酮类物质。由于芳香环上连接的取代基种类、数量和位置不同而形成了多种花青素，其中在食品中常见的花青素主要为天竺葵色素、矢车菊素、飞燕草素、芍药花色素、矮牵牛素及锦葵色素。在自然界中，已经超过 635 种花色苷的结构被鉴定出来了，大部分由糖苷配基与葡萄糖、半乳糖、芸香糖、鼠李糖等结合形成花色苷的形式存在，其中矢车菊素-3-O-葡萄糖苷是最常见的一种花色苷，在很多植物中都存在；而游离形式的花青素极少见。花青素广泛存在于植物的液泡中，使植物呈现红色、紫色或蓝色。目前在我们吃的食物中越来越常见。花青素不仅可以使水果蔬菜等植物具有鲜艳的色泽，而且由于其特殊的结构和化学成分赋予了花青素多种生物活性，如强抗氧化性、抗炎、抑菌、抗衰老、抗癌作用以及对肝脏和视力具有保护作用。并随着农业与生物技术的发展，选育和开发利用紫黑色的食物的研究也已引起了人们的重视，出现了越来越多的富含花青素的水果、蔬菜、谷物、豆类等植物，并且这些食物与我们的生活息息相关，但其中的花青素种类与含量又不尽相同，从而使其生物活性也存在差异。
含羞草为豆科含羞草属多年生草本植物含羞草的全草，又名感应草、喝呼草、知羞草、怕羞草、害羞草和夫妻草等。主要集中分布于我国台湾、福建、广东、海南、广西、云南等地，是这些地区的繁盛类植物。含羞草中含有大量对人体有益的活性物质,包括黄酮类、酚类、生物活性多糖、生物碱和其他微量元素。含羞草是一种绿色的草本植物，全草可以入药，全年可以采收。它味甘，性寒，可以入心经和肝经以及大肠经，凉血解毒和清热利湿都是它的药用功效。能抗菌，对大肠杆菌有很好的抑菌作用。含羞草的作用有很多，它能消肿止痛，也能调节神经，对人类的神经衰弱和失眠多梦有很好的调理作用。据报道含羞草中的黄酮及酚性黄酮类成分具有很强的抗炎、抑菌、抗氧化和清除自由基、抗癌防癌等功效。
檵花叶为金缕梅科植物檵花的叶或茎叶。叶含黄酮类、丹宁和没食子酸。具有清热止泻、活血止血作用。具有治暑热泻痢，扭闪伤筋，创伤出血，目痛，喉痛等药理作用。对檵花叶的化学成份研究发现，其主要成分为槲皮素等黄酮类，可水解丹宁和没食子酸等。其中的可水解丹宁和没食子酸具有显著的抗炎抑菌、收敛止血、抗氧化清除自由基等活性。
姜黄素是姜黄的主要活性成分，是一种强大抗氧化剂。能抵消自由基的危害。此外，姜黄素还能促进身体自身抗氧化酶的活性。姜黄素还具有改善脑功能并降低大脑疾病的风险，能提高大脑脑源性神经营养因子的水平，这能有效延缓，甚至逆转一些大脑疾病，以及与脑功能降低有关的衰老性疾病。此外，它还能促进记忆力。心脏病是导致死亡的最大风险因素之一。姜黄素能帮助逆转心脏病的发病过程。姜黄对心脏的主要好处是促进内皮功能。已证实血管内皮功能障碍是心脏病的主要驱动因素，与内皮不能调节血压，凝血和其它因素有关。此外，姜黄素还能减轻炎症和氧化，这也是导致心脏病的重要因素。姜黄素还是一种天然抗炎化合物，它帮助抵御外来入侵物，并在修复损伤方面扮演一定角色。如果没有发炎，细菌等病原体很容易控制身体并杀死我们。尽管急性炎症有益，但慢性会变成问题，并会不恰当的抵抗身体自身组织。实际上，许多慢性疾病都与长期低水平炎症有关，如心脏病，癌症，代谢综合征和各种退化性疾病等。因此，能帮助抵御慢性炎症的任何事情都对预防，甚至治疗这些疾病有好处。
发明内容
针对现有技术中存在的上述问题，本发明的目的在于设计提供一种通过调节肠道菌群平衡防治动脉粥样硬化的天然药物制剂的技术方案，其配方合理、绿色环保，安全性好，适合长期服用。通过各组分成分相互之间的协同增进，对动脉粥样硬化大鼠具有明显的治疗作用。该特殊组成使得产品治疗动脉粥样硬化的功效显著，服用方便。同时本发明所用主要原料黑玉米芯为植物废弃物，原料来源丰富、变废为宝、提高了资源的再利用率。
所述的一种通过调节肠道菌群平衡防治动脉粥样硬化的天然药物制剂，其特征在于由重量百分含量的以下组分组成：黑玉米芯花青提取纯化物40%-50%，含羞草总黄酮提取纯化物10%-25%，檵花叶丹宁提取纯化物20%-30%，姜黄素10%-20%；
所述的黑玉米芯花青提取纯化物采用以下方法制备：将低温风干的黑玉米芯置于组织破碎提取器中，加入固液比为1:4-1:6的pH 3.0的50%-60%的乙醇溶液室温破碎提取1-3min；抽滤，所得滤渣加入固液比为1:3-1:5的pH 3.0的50%-60%的乙醇溶液，改用超声提取法室温超声提取1次，提取30-40 分钟，抽滤；合并组织破碎提取液和超声提取液，在40-50℃条件下闪蒸浓缩至原体积的1/4-1/6，得到浓缩液；将浓缩液通过大孔吸附树脂DiaionHP 2MGL柱色谱进行总花青素的富集纯化；先用蒸馏水淋洗至洗脱液呈无色透明后，改用pH4.0的55-65%的乙醇溶液洗脱，收集紫红色的色素洗脱液，在40-50℃条件下旋转蒸发仪中真空浓缩干燥或冷冻干燥，得黑玉米芯花青素提取纯化物干粉；
所述的含羞草总黄酮提取纯化物采用以下方法制备：取干燥粉碎的含羞草粗粉，采用料液比1:3-1:6的60%-75%乙醇做溶剂超声提取2-3次，每次20-40分钟；合并提取液，在50-60℃条件下闪蒸浓缩至原体积的1/8-1/10，将浓缩液分别采用石油醚、乙酸乙酯和正丁醇萃取，分别在50-60℃条件下闪蒸浓缩结合旋蒸浓缩至干，得到各部位；合并乙酸乙酯部位和正丁醇部位，通过Diaion HP-20 大孔吸附树脂柱色谱柱色谱进行富集纯化，分别用去离子水、10%乙醇、20%乙醇、40%乙醇、60%乙醇、70%丙酮进行梯度洗脱；合并40%乙醇、60%乙醇部位，在50-60℃条件下减压浓缩干燥，得到含羞草总黄酮提取纯化物；
所述的檵花叶丹宁提取纯化物采用以下方法制备：取干燥粉碎的檵花叶粗粉，采用料液比1:5-1:8的70%丙酮做溶剂进行组织破碎提取1-3分钟，抽滤；滤液在40-50℃条件下闪蒸浓缩后，采用Diaion HP-20 大孔吸附树脂柱色谱，分别用去离子水、10%甲醇、20%甲醇、40%甲醇、60%甲醇、70%丙酮进行梯度洗脱；合并20%甲醇和40%甲醇洗脱部位，采用真空薄膜浓缩装置在40-50℃条件下闪蒸浓缩，结合旋蒸浓缩干燥，得到檵花叶提取纯化物。
所述的一种通过调节肠道菌群平衡防治动脉粥样硬化的天然药物制剂，其特征在于黑玉米芯花青提取纯化物42%-48%，含羞草总黄酮提取纯化物12%-23%，檵花叶丹宁提取纯化物22%-28%，姜黄素12%-18%。
所述的一种通过调节肠道菌群平衡防治动脉粥样硬化的天然药物制剂，其特征在于所述的黑玉米芯花青提取纯化物制备方法中：将低温风干的黑玉米芯置于组织破碎提取器中，加入固液比为1:5的pH 3.0的40%的乙醇溶液室温破碎提取2 min；抽滤，所得滤渣加入固液比为1:4的pH 3.0的55%的乙醇溶液，改用超声提取法室温超声提取1次，提取30-40分钟，抽滤；合并组织破碎提取液和超声提取液，在45℃条件下闪蒸浓缩至原体积的1/5，得到浓缩液；将浓缩液通过大孔吸附树脂Diaion HP 2MGL柱色谱进行总花青素的富集纯化；先用蒸馏水淋洗至洗脱液呈无色透明后，改用pH 4.0的60%的乙醇溶液洗脱，收集紫红色的色素洗脱液，在45℃条件下旋转蒸发仪中真空浓缩干燥或冷冻干燥，得黑玉米芯花青素提取纯化物干粉。
所述的一种通过调节肠道菌群平衡防治动脉粥样硬化的天然药物制剂，其特征在于所述的含羞草总黄酮提取纯化物采用以下方法制备：取干燥粉碎的含羞草粗粉，采用料液比1:4-1:5的65%-70%乙醇做溶剂超声提取2-3次，每次25-35分钟；合并提取液，在55-58℃条件下闪蒸浓缩至原体积的1/9，将浓缩液分别采用石油醚、乙酸乙酯和正丁醇萃取，分别在55-58℃条件下闪蒸浓缩结合旋蒸浓缩至干，得到各部位；合并乙酸乙酯部位和正丁醇部位，通过Diaion HP-20 大孔吸附树脂柱色谱柱色谱进行富集纯化，分别用去离子水、10%乙醇、20%乙醇、40%乙醇、60%乙醇、70%丙酮进行梯度洗脱；合并40%乙醇、60%乙醇部位，在50-60℃条件下减压浓缩干燥，得到含羞草总黄酮提取纯化物。
所述的一种通过调节肠道菌群平衡防治动脉粥样硬化的天然药物制剂，其特征在于所述的檵花叶丹宁提取纯化物采用以下方法制备：取干燥粉碎的檵花叶粗粉，采用料液比1:6-1:7的70%丙酮做溶剂进行组织破碎提取2分钟，抽滤；滤液在45-48℃条件下闪蒸浓缩后，采用Diaion HP-20 大孔吸附树脂柱色谱，分别用去离子水、10%甲醇、20%甲醇、40%甲醇、60%甲醇、70%丙酮进行梯度洗脱；合并20%甲醇和40%甲醇洗脱部位，采用真空薄膜浓缩装置在45-47℃条件下闪蒸浓缩，结合旋蒸浓缩干燥，得到檵花叶提取纯化物。
上述一种通过调节肠道菌群平衡防治动脉粥样硬化的天然药物制剂，功效成分纯度高、品质好，功效显著。与现有技术相比，本发明具有的特点如下：
1.本发明中对檵花叶采用70%丙酮进行组织破碎提取。该溶剂对植物组织具有很强的穿透力和溶解能力，能在短时间内快速将植物组织中的多酚类成分转溶于溶剂中。破碎提取是利用高速旋转的特殊刀具将原料打碎成匀浆状，通过粉碎、搅拌、混合、均质化等，将粉碎和提取过程同时完成，特别适合对丹宁等多酚类极其不耐热成分的提取。具有提取速度快、完全，一次提取只需几分钟；不加热，保护不耐热成分不受破坏，节省时间、溶剂和能源等突出的优势。该提取方法能最大限度的将多酚类功效成分提取完全，并能稳定的保留的转溶和获得，保证了丹宁及多酚类成分的高提取率和转移率。
2.本发明对黑玉米芯采用破碎提取和超声提取相结合的优化组合提取。根据花青素类结构遇热、光、空气的不稳定性，在加热、湿度、空气、光等因素影响下更容易被氧化和降解的特征，在提取黑玉米芯花青素时，本发明将组织破碎提取法和超声提取法相结合，通过室温组织破碎提取将植物组织细胞中的功效成分快速高效的转溶在溶剂中，再结合室温超声提取，将破碎和提取过程合二为一，同时完成了破碎、混合、搅拌、均质化和提取的过程，使组织细胞中的成分快速转移到溶剂中，实现了提取的快速、完全和高效提取，且最大限度的保证功效成分的结构不受到破坏，在较短的时间内提尽了功效成分，确保了功效成分的高保存率和转移率。
3.本发明对含羞草采用室温超声提取，既能保证含羞草黄酮的高效提取，又能确保在室温下提取，含羞草中的黄酮类热敏性成分不受破坏。该提取方法能避免热回流提取可能带来的的对功效成分的影响，具有提取率高、功效成分的保留率的特点。
4.本发明中各种浓缩过程均采用闪蒸浓缩。该浓缩方法使药液的受热温度低、受热时间短，浓缩效率高。且能避免其他浓缩方法可能带来的对功效成分的破坏。本发明所用主要原料黑玉米芯为黑玉米棒脱粒后的梗子，为植物废弃物，原料来源丰富、变废为宝、提高了资源的再利用率和经济价值。
5.本发明的黑玉米芯花青素提取纯化物的制备是采用含水乙醇破碎提取、闪蒸浓缩，结合超声提取、闪蒸浓缩，通过大孔吸附树脂富集纯化、用含水乙醇进行梯度洗脱，合并一定的洗脱部位、闪蒸浓缩等特殊的提取纯化工艺制成的有效部位。本发明的含羞草总黄酮提取纯化物的制备是采用含水乙醇超声提取、闪蒸浓缩，用极性大小不同的溶剂梯度萃取、闪蒸浓缩，取某一萃取部位通过大孔吸附树脂富集纯化、用含水乙醇进行梯度洗脱，合并一定的洗脱部位、闪蒸浓缩等特殊的提取纯化工艺制成的有效部位。檵花叶提取纯化物的制备是采用含水丙酮组织破碎提取、闪蒸浓缩，通过大孔吸附树脂富集纯化、采用含水甲醇进行梯度洗脱，合并一定的洗脱部位、闪蒸浓缩等更为特殊的提取纯化工艺制成的有效部位。
7.本发明采用黑玉米芯花青素提取纯化物、含羞草总黄酮提取纯化物、檵花叶丹宁提取纯化物和姜黄素按照一定的重量百分比进行特殊配伍制成的天然药物制剂，具有特殊的功效。本发明提供的配方合理、绿色环保，安全性好，适合长期服用。通过各组分成分相互之间的协同增进作用，整体治疗功效显著。通过明显改善肠道菌群的多样性和丰富度，提升肠道有益菌群的丰度，起到显著的保护肠道菌群和治疗动脉粥样硬化的作用。该特殊组成使得产品治疗动脉粥样硬化疾病的功效显著，服用方便。
附图说明
图1为本发明实施例1对动脉粥样硬化大鼠TC含量的影响图；
图2为本发明实施例1对动脉粥样硬化大鼠TG含量的影响图；
图3为本发明实施例1对动脉粥样硬化大鼠LDL-C含量的影响图；
图4为本发明实施例1对动脉粥样硬化大鼠HDL-C含量的影响图；
图5为本发明实施例1对动脉粥样硬化大鼠TNF-α含量的影响图；
图6为本发明实施例1对动脉粥样硬化大鼠IL-6含量的影响图；
图7为本发明实施例1对动脉粥样硬化大鼠的动脉粥样硬化指数AI1的影响图；
图8为本发明实施例1对动脉粥样硬化大鼠的动脉粥样硬化指数AI2的影响图；图9为本发明实施例1对动脉硬化大鼠的组织病理学影响图；
图10为本发明实施例1对动脉粥样硬化大鼠小肠组织病理学的影响图；
图11为本发明实施例1对主动脉中NF-kB和VCAM-1表达的影响图，图11中A：NF-kB和VCAM-1蛋白表达，B：NF-kB和VCAM-1相对表达量；
图12为本发明实施例1对肝脏中SREBP-2和CYP7A1表达的影响图，图12中A：SREBP-2和CYP7A1蛋白表达，B：SREBP-2和CYP7A1相对表达量；
图13为本发明实施例1对动脉粥样硬化大鼠肠道菌群多样性的影响图；
图14为本发明实施例1对动脉粥样硬化大鼠肠道菌群相对丰度的影响图；
图15为本发明实施例1对动脉粥样硬化大鼠肠道双歧杆菌属（Bifidobacterium）相对丰度的影响图；
图16为本发明实施例1对动脉粥样硬化大鼠肠道菌乳酸杆菌属（Lactobacillus）相对丰度的影响图；
图17为本发明实施例1对动脉粥样硬化大鼠肠道菌艾克曼菌属（Akkermansiaceae）相对丰度的影响图；
图18为本发明实施例1对动脉粥样硬化大鼠肠道菌毛螺菌属（Lachnospiraceae_NK4A136_group）相对丰度的影响图；
图19为本发明实施例1对动脉粥样硬化大鼠肠道菌罗斯氏菌属（Roseburia）相对丰度的影响图；
图20为本发明实施例1对动脉粥样硬化大鼠肠道菌普雷沃氏菌属（Prevotellaceae_NK3B31_group）相对丰度的影响图。
具体实施方式
以下结合说明书附图和具体实施例对本发明作进一步说明。
实施例1
1.所述的黑玉米芯花青素提取纯化物的制备方法如下：将低温风干的黑玉米芯置于组织破碎提取器中，加入固液比为1:6的pH 3.0的50%的乙醇溶液室温破碎提取2min。抽滤，所得滤渣加入固液比为1:5的pH 3.0的50%的乙醇溶液，改用超声提取法室温超声提取1次，提取40 分钟，抽滤。合并组织破碎提取液和超声提取液，在40℃条件下闪蒸浓缩至原体积的1/6，得到浓缩液。将浓缩液通过大孔吸附树脂Diaion HP 2MGL柱色谱进行总花青素的富集纯化。先用蒸馏水淋洗至洗脱液呈无色透明后，改用pH 4.0的60%的乙醇溶液洗脱，收集紫红色的色素洗脱液，在40℃条件下旋转蒸发仪中真空浓缩干燥或冷冻干燥，得黑玉米芯花青素提取纯化物干粉，称重计算得率，样品避光干燥保存。得到的黑玉米芯花青素提取纯化物的收率为11.2%，提取纯化物中总花色素的含量达到23.6%。
2.所述的含羞草总黄酮提取纯化物的制备方法如下：取干燥粉碎的含羞草粗粉，采用料液比1:6的70%乙醇做溶剂超声提取3次，每次30分钟。合并提取液，在50℃条件下闪蒸浓缩至原体积的1/10。将浓缩液分别采用石油醚、乙酸乙酯和正丁醇萃取，分别在50℃条件下闪蒸浓缩结合旋蒸浓缩至干，得到各部位。合并乙酸乙酯部位和正丁醇部位，通过Diaion HP-20 大孔吸附树脂柱色谱柱色谱进行富集纯化，分别用去离子水、10%乙醇、20%乙醇、40%乙醇、60%乙醇、70%丙酮进行梯度洗脱。合并40%乙醇、60%乙醇部位，在50℃条件下减压浓缩干燥，得到含羞草总黄酮提取纯化物。得到的含羞草总黄酮提取纯化物的收率为18.2%，提取纯化物中总黄酮的含量达到32.6%。
3.所述的檵花叶丹宁提取纯化物的制备方法如下：取干燥粉碎的檵花叶粗粉，采用料液比1:8的70%丙酮做溶剂进行组织破碎提取2分钟，抽滤。滤液在40℃条件下闪蒸浓缩后，采用Diaion HP-20 大孔吸附树脂柱色谱，分别用去离子水、10%甲醇、20%甲醇、40%甲醇、60%甲醇、70%丙酮进行梯度洗脱。合并20%甲醇和40%甲醇洗脱部位，采用真空薄膜浓缩装置在40℃条件下闪蒸浓缩，结合旋蒸浓缩干燥，得到檵花叶提取纯化物。得到的檵花叶丹宁提取纯化物的收率为21.8%，提取纯化物中丹宁类成分的含量达到32.4%。
4.将黑玉米芯花青素提取纯化物、含羞草总黄酮提取纯化物、檵花叶丹宁提取纯化物和姜黄素按照重量百分比配比，其中黑玉米芯花青提取纯化物40%，含羞草总黄酮提取纯化物20%，檵花叶丹宁提取纯化物25%，姜黄素15%。均匀混合后装入胶囊中，或定量包装成袋得到天然药物制剂。
实施例2
1.所述的黑玉米芯花青素提取纯化物的制备方法如下：将低温风干的黑玉米芯置于组织破碎提取器中，加入固液比为1:4的pH 3.0的55%的乙醇溶液室温破碎提取2 min。抽滤，所得滤渣加入固液比为1:3的pH 3.0的55%的乙醇溶液，改用超声提取法室温超声提取1次，提取30 分钟，抽滤。合并组织破碎提取液和超声提取液，在45℃条件下闪蒸浓缩至原体积的1/5，得到浓缩液。将浓缩液通过大孔吸附树脂Diaion HP 2MGL柱色谱进行总花青素的富集纯化。先用蒸馏水淋洗至洗脱液呈无色透明后，改用pH 4.0的65%的乙醇溶液洗脱，收集紫红色的色素洗脱液，在45℃条件下旋转蒸发仪中真空浓缩干燥或冷冻干燥，得黑玉米芯花青素提取纯化物干粉，称重计算得率，样品避光干燥保存。得到的黑玉米芯花青素提取纯化物的收率为9.3%，提取纯化物中总花色素的含量达到22.4%。
2.所述的含羞草总黄酮提取纯化物的制备方法如下：取干燥粉碎的含羞草粗粉，采用料液比1:3的60%乙醇做溶剂超声提取2次，每次20分钟。合并提取液，在55℃条件下闪蒸浓缩至原体积的1/8。将浓缩液分别采用石油醚、乙酸乙酯和正丁醇萃取，分别在55℃条件下闪蒸浓缩结合旋蒸浓缩至干，得到各部位。合并乙酸乙酯部位和正丁醇部位，通过Diaion HP-20 大孔吸附树脂柱色谱柱色谱进行富集纯化，分别用去离子水、10%乙醇、20%乙醇、40%乙醇、60%乙醇、70%丙酮进行梯度洗脱。合并40%乙醇、60%乙醇部位，在55℃条件下减压浓缩干燥，得到含羞草总黄酮提取纯化物。得到的含羞草总黄酮提取纯化物的收率为17.5%，提取纯化物中总黄酮的含量达到26.4%。
3.所述的檵花叶丹宁提取纯化物的制备方法如下：取干燥粉碎的檵花叶粗粉，采用料液比1:5的70%丙酮做溶剂进行组织破碎提取1分钟，抽滤。滤液在45℃条件下闪蒸浓缩后，采用Diaion HP-20 大孔吸附树脂柱色谱，分别用去离子水、10%甲醇、20%甲醇、40%甲醇、60%甲醇、70%丙酮进行梯度洗脱。合并20%甲醇和40%甲醇洗脱部位，采用真空薄膜浓缩装置在45℃条件下闪蒸浓缩，结合旋蒸浓缩干燥，得到檵花叶提取纯化物。得到的檵花叶丹宁提取纯化物的收率为19.2%，提取纯化物中丹宁类成分的含量达到30.7%。
4.将黑玉米芯花青素提取纯化物、含羞草总黄酮提取纯化物、檵花叶丹宁提取纯化物和姜黄素按照重量百分比配比，其中黑玉米芯花青提取纯化物45%，含羞草总黄酮提取纯化物25%，檵花叶丹宁提取纯化物20%，姜黄素10%。均匀混合后装入胶囊中，或定量包装成袋得到天然药物制剂。
实施例3
1.所述的黑玉米芯花青素提取纯化物的制备方法如下：将低温风干的黑玉米芯置于组织破碎提取器中，加入固液比为1:5的pH 3.0的50%的乙醇溶液室温破碎提取2 min。抽滤，所得滤渣加入固液比为1:4的pH 3.0的55%的乙醇溶液，改用超声提取法室温超声提取1次，提取35分钟，抽滤。合并组织破碎提取液和超声提取液，在50℃条件下闪蒸浓缩至原体积的1/5，得到浓缩液。将浓缩液通过大孔吸附树脂Diaion HP 2MGL柱色谱进行总花青素的富集纯化。先用蒸馏水淋洗至洗脱液呈无色透明后，改用pH 4.0的65%的乙醇溶液洗脱，收集紫红色的色素洗脱液，旋转蒸发仪中在45℃条件下真空浓缩干燥或冷冻干燥，得黑玉米芯花青素提取纯化物干粉，称重计算得率，样品避光干燥保存。得到的黑玉米芯花青素提取纯化物的收率为11.3%，提取纯化物中总花色素的含量达到23.6%。
2.所述的含羞草总黄酮提取纯化物的制备方法如下：取干燥粉碎的含羞草粗粉，采用料液比1:5的65%乙醇做溶剂超声提取2次，每次30分钟。合并提取液，在60℃条件下闪蒸浓缩至原体积的1/9。将浓缩液分别采用石油醚、乙酸乙酯和正丁醇萃取，分别在60℃条件下闪蒸浓缩结合旋蒸浓缩至干，得到各部位。合并乙酸乙酯部位和正丁醇部位，通过Diaion HP-20 大孔吸附树脂柱色谱柱色谱进行富集纯化，分别用去离子水、10%乙醇、20%乙醇、40%乙醇、60%乙醇、70%丙酮进行梯度洗脱。合并40%乙醇、60%乙醇部位，减压浓缩干燥，得到含羞草总黄酮提取纯化物。得到的含羞草总黄酮提取纯化物的收率为17.9%，提取纯化物中总黄酮的含量达到32.7%。
3.所述的檵花叶丹宁提取纯化物的制备方法如下：取干燥粉碎的檵花叶粗粉，采用料液比1:7的70%丙酮做溶剂进行组织破碎提取2分钟，抽滤。滤液在50℃条件下闪蒸浓缩后，采用Diaion HP-20 大孔吸附树脂柱色谱，分别用去离子水、10%甲醇、20%甲醇、40%甲醇、60%甲醇、70%丙酮进行梯度洗脱。合并20%甲醇和40%甲醇洗脱部位，采用真空薄膜浓缩装置在50℃条件下闪蒸浓缩，结合旋蒸浓缩干燥，得到檵花叶提取纯化物。得到的檵花叶丹宁提取纯化物的收率为21.3%，提取纯化物中丹宁类成分的含量达到31.6%。
4.将黑玉米芯花青素提取纯化物、含羞草总黄酮提取纯化物、檵花叶丹宁提取纯化物和姜黄素按照重量百分比配比，其中黑玉米芯花青提取纯化物50%，含羞草总黄酮提取纯化物15%，檵花叶丹宁提取纯化物20%，姜黄素15%。均匀混合后装入胶囊中，或定量包装成袋得到天然药物制剂。
以下结合相应的试验数据对本发明作进一步说明。
1.黑玉米芯花青素提取纯化物中总花青素的含量测定
采用pH示差法测定黑玉米芯花青素提取纯化物中总花青素的含量。缓冲溶液的配制：pH 1.0 的缓冲溶液的配制为：精确称取1.49 g 氯化钾粉末和量取1.7 mL浓盐酸，分别用蒸馏水定容至100 mL，将0.2M氯化钾溶液与0.2 M盐酸溶液按25:67的比例混合。再用氯化钾溶液调整pH值到1.0 ± 0.1。pH 4.5 的缓冲溶液的配制为：精确称取1.64 g醋酸钠粉末，用蒸馏水定容至100 mL，用浓盐酸调整pH值到4.5 ± 0.1。待测品溶液的配制：参照pH示差法测定黑玉米芯花青素提取纯化物中总花青素含量的方法。精确称取黑玉米芯花青素提取纯化物干粉20.0 mg，用蒸馏水溶解和定容至10 mL。然后移取1 mL样液2份，分别用pH1.0与pH 4.5的缓冲溶液定容至10 mL。避光稳定反应1 h后分别在510nm和700nm处测定吸光度。按照下列公式计算：
公式中各符号的含义见下表。
用pH示差法对黑玉米芯花青素提取纯化物中总花青素含量进行测定，测定结果换算成百分含量，黑玉米芯花青素提取纯化物中总花青素的含量为23.84%。由结果可以看出，黑玉米芯中富含花青素，且含量要显著高于黑玉米。
2.实施例1治疗动脉粥样硬化的动物实验
（1）动物、药品与仪器：实验动物为SPF级SD雄性大鼠70只，3-4周龄，体重180-200g。先在温度20±2℃，湿度60±5%下光照和黑暗各12小时的环境中适应性饲养一周。所有的动物实验操作均符合中国和国际动物保护指导要求。维生素D3（浓度51万IU/g）；胆固醇（纯度大于98%）；胆酸钠（纯度大于98%）；丙基硫氧嘧啶（纯度大于98%）；胆固醇（TC）试剂盒，甘油三酯（TG）试剂盒，低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）试剂盒，高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）试剂盒，肿瘤坏死因子－α（TNF-α）试剂盒，白细胞介素-6（IL-6）试剂盒（南京建成生物工程研究所）。PL2002型电子分析天平；KQ-250B型超声波清洗器；Millipore Simplicity型超纯水器；WFZ UV-2000型紫外可见分光光度计（尤尼克仪器有限公司）；Multiskan FC型酶标仪；
移液枪；LG10-2.4A高速离心机；JJ-12J 脱水机；AP280-2包埋机；HM335E半自动石蜡切片机；JB-L5冻台；KD-P组织摊片机；DGX-9003B烤箱；10212432C载玻片及盖玻片；ST5010莱卡染色机；NIKON ECLIPSE TI-SR 导致荧光显微镜；96孔酶标板。
（2）动脉粥样硬化大鼠模型的构建：从70只SD大鼠中随机选取13只作为空白对照组（NC）给予普通饲料喂养，其他的大鼠给予腹腔注射70万IU/kg·BW的维生素D3造模，每隔一天注射1次，分4次给完，同时给予高脂饲料喂养。高脂饲料包含3.5 %胆固醇, 0.5%胆酸钠, 0.2%丙硫氧嘧啶，5 %白糖, 10 %猪油, 80.8 %基础饲料。饲养8周后，从空白对照组随机抽取3只和造模组选取5只，腹主动脉取血，测定血清TG、TC、HDL-C、LDL-C的含量，造模组TG、TC和LDL-C含量明显高于空白对照组，HDL-C含量明显下降，同时，检测出主动脉内膜明显增厚，有胆固醇结晶，钙盐沉积的症状，标志动脉粥样硬化大鼠模型构建成功。
（3）实验动物分组与给药：将造模成功的大鼠随机分成5组，每组10只，分别为模型组（AS），辛伐他汀（50mg/kg·BW）阳性组（SIM），实施例1的低剂量（50mg/kg·BW， Low）、实施例1的中剂量（100mg/kg·BW，Mid）、实施例1的高剂量（200mg/kg·BW，Hig）用药组。给药方法：每日灌胃1次，连续灌胃一个月，空白对照组（NC）和模型组（AS）分别灌胃等量的生理盐水，期间所有大鼠都自由饮水和给予普通饲料。每日观察大鼠的外观、毛色、精神状态、饮食及饮水状态，每周定时记录大鼠体重。末次给药禁食不禁水24小时后，所有大鼠称重，按3ml/kg·BW剂量腹腔注射10%的水合氯醛将大鼠麻醉，在无菌条件下进行腹主动脉取血备用，然后取出肝脏、胸腔主动脉和小肠组织，用生理盐水清洗，新鲜组织冻藏于-80℃冰箱备用，剩下的用4%多聚甲醛固定。同时收集盲肠内容物用于肠道菌群检测。
（4）血脂及动脉粥样硬化指数的测定方法：取完血后，5000转离心10分钟分离出血清，根据试剂盒说明书测定血清中总胆固醇（TC）、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）、炎症因子TNF-α和IL-6的含量，计算动脉粥样硬化指数：AI1=（TC-HDL）/HDL和AI2=LDL/HDL。所有的数据均利用SPSS软件（版本16.0）进行单因素方差分析和Tukey多重比较分析。实验结果均表示为平均值±SD，P值小于0.05被认为具有统计学意义。
（5）实施例1对动脉粥样硬化大鼠血脂、血清炎症因子和AI的影响：TG、TC、LDL-C和HDL-C是血清中的主要的脂类物质，其中TG、TC和LDL-C的内核里还含有丰富的脂质，当其在血清中的浓度过高时，易沉积在血管壁上，逐渐发展为斑块，是动脉粥样硬化的重要的危险因素。HDL-C有助于将血浆中的脂质运送回肝脏，进行代谢，具有调节血管脂质的功能。因此，测定血清中TG、TC、LDL-C和HDL-C的浓度能观测动脉粥样硬化发展状况。由图1-6可以看出，模型组大鼠血清中的TC、TG、LDL-C含量显著高于NC组（P<0.01）。但经过辛伐他汀和中、高剂量的实施例1药物组治疗6周后，TC、TG和LDL-C的含量都显著降低，特别是高剂量组，与AS组相比具有显著性差异。与NC组大鼠相比，模型组大鼠HDL-C的含量也明显降低（P<0.01），但辛伐他汀阳性组和中、高剂量的实施例1用药组通过治疗显著改善了HDL-C的含量，且效果与药物剂量成正相关。
动脉粥样硬化主要由于机体脂质代谢紊乱，血液中脂质和胆固醇水平增高导致大动脉或中等动脉内膜产生的炎症反应性疾病。 TNF-α具有促发炎症引起多种疾病的作用，IL-6作为炎症免疫反应的主要介质参与机体的各种调节作用。炎症因子TNF-α和IL-6始终贯穿于动脉粥样硬化整个发生发展的过程，因此检测血清中TNF-α和IL-6水平能反映动脉粥样硬化发展的程度。由图1-6可知，模型组大鼠的炎症因子TNF-α和IL-6水平与NC组相比都明显的增高，表明动脉粥样硬化会引起炎症反应，经过辛伐他汀药和中、高剂量的实施例1的药物组治疗后，TNF-α和IL-6的水平相比于模型组发生了明显的下降。辛伐他汀是目前临床上用于调节血脂和减缓动脉粥样硬化作用的一种药物，而实验结果表明，实施例1降低炎症因子的作用要优于辛伐他汀药，且实施例1的治疗效果随剂量增加而增加。实施例1可能会通过改善炎症反应而发挥改善动脉粥样硬化的作用。
动脉粥硬化指数是国际医学界制定的一个衡量动脉硬化程度的指标。根据其值大小可以初步判定动脉硬化的严重程度，从而可以预测引发心脑血管疾病的危险性。由图7-8得知，模型组大鼠的动脉粥样硬化指数AI1和AI2要显著高于NC组（P<0.05），但经辛伐他汀和中、高剂量的实施例1治疗6周后，AI1和AI2值发生明显的下降，试验结果表明实施例1能明显减轻动脉硬化的程度，大大降低了发生心脑血管疾病的危险性。
实施例1中含有大量的花青素、黄酮、丹宁等多酚类成分，实施例1具有明显的调节脂质代谢和改善动脉粥样硬化的作用，这可能与这些花青素及多酚类激活了胆固醇7α 羟化酶（CYP7A1）而促进胆固醇的代谢有关。此外花青素、黄酮、丹宁等多酚类成分具有极强的抗氧化性，可清除机体中大量的自由基，抑制低密度脂蛋白和高密度脂蛋白被氧化，从而减轻动脉粥样硬化。
（6）组织病理学检测与分析：将肝脏和主动脉组织用4％多聚甲醛固定24小时后，用乙醇进行逐级脱水，再包埋在石蜡中，切成5μm厚的切片，脱蜡后用苏木精和伊红（H＆E）染色，并在光学显微镜下观察进行病理学分析。已知在人类动脉硬化的血管壁中发现含有大量的钙离子，且钙离子作为第二信使参与平滑肌细胞的迁移和增殖, 以及分泌细胞外基质，从而加快了动脉粥样硬化的形成。而在动脉粥样硬化动物模型中加入钙离子拮抗剂可抑制动脉粥样硬化的形成。本实验利用70万IU的维生素D3腹腔注射加高脂饲料喂养构建动脉粥样硬化大鼠模型。大剂量的维生素D3和6周高脂喂养会引起血钙升高，从而促进钙盐在主动脉中膜沉积，使血管内皮细胞受损或钙化，大量的单核细胞和低密度脂蛋白胆固醇进入血液，并在血管内皮沉积形成动脉粥样硬化斑块。见图3。NC组胸腔主动脉血管各层结构基本完整，无内膜增厚和平滑肌细胞增殖的症状。与正常组相比，模型组大鼠主动脉内膜出现大量的泡沫细胞，纤维帽和胆固醇结晶，脂质和钙盐沉积使内膜明显增厚，有的还出现钙化脱落的现象，动脉中膜萎缩，平滑肌细胞增殖并排列紊乱，弹力纤维变性，崩解和断裂，局部出现炎症细胞浸润。经实施例1的药物治疗的SIM组，内膜增厚现象和脂质沉积等症状明显减轻，平滑肌细胞排列较整齐。在低、中、高剂量的花青素用药组，动脉内膜增厚现象随剂量增加而减轻，胆固醇结晶明显减少，平滑肌细胞排列趋于有序。
肝脏是脂质代谢的主要场所，当长期高脂饮食时，会使肝脏组织受应激损伤。由图9看出，NC组肝细胞无显著病变特征，可见正常的肝细胞索和肝血窦，肝细胞形状规则，胞质丰满。动脉粥样硬化模型组肝细胞出现脂肪性病变，肝细胞胞质内局部出现大小不等，圆形、有张力的空泡，将胞核推挤向一侧，而且局部有炎症细胞浸润。SIM组与模型组相比，肝细胞脂肪性病变明显减轻，但还是局部有炎细胞浸润。经实施例1药物治疗组用药后，肝细胞脂肪性病变和炎症细胞浸润都较模型组明显减轻。其中，高剂量治疗组改善肝细胞脂肪性病变的效果接近SIM组，而改善炎症细胞浸润情况较SIM组强。这一试验结果表明，实施例1对肝脏组织没有毒害作用，且明显改善了肝脏组织脂肪性病变的作用。
实验结果表明，实施例1显著降低了血清中TG、TC、LDL-C、TNF-α、IL-6水平和AI1、AI2指数，HDL-C水平明显增加了；胸腔主动脉内膜泡沫细胞减少，脂质和钙盐沉积引起的增厚情况明显改善，且内膜增厚和炎症细胞浸润情况得到改善，肝脏组织的脂肪性病变明显得到改善。表明实施例1具有很好的调节血脂和抑制炎症反应和改善动脉、肝脏组织病理损伤，从而发挥治疗动脉粥样硬化的作用，且与实施例1的剂量成正相关。
3.实施例1通过肠道菌群调节发挥治疗动脉粥样硬化疾病的作用机制。
动脉粥样硬化的形成是动脉对内膜损伤作出炎症反应的结果，因此有效抑制动脉炎症反应将对治疗动脉粥样硬化具有重要作用。肠道菌群失调可触发慢性炎症反应，并且越来越多的研究证实，动脉粥样硬化的发生和发展与肠道菌群具有密切联系，如肠道菌群代谢胆碱类生成三甲胺物质，经肝脏氧化生成氧化三甲胺，促进动脉粥样硬化斑块形成。将健康者的粪便移植到心血管疾病患者肠道中，可明显降低患者冠状动脉粥样硬化性心脏病风险。
（1）实验材料与仪器：新鲜的小肠、胸腔主动脉和肝脏组织；Trizol试剂；RIPALysis缓冲液；
BCA蛋白浓度测定试剂盒；粪便抽提试剂盒；抗体（一抗和二抗）；16SrDNA测序分析；MetaVx™文库构建试剂盒（GENEWIZ）；IlluminaMiSeq测序平台（GENEWIZ）；Qubit 2.0Fluorometer（Invitrogen Carlsbad）；VSEARCH（1.9.6）（GENEWIZ）；PL2002型电子分析天平；KQ-250B型超声波清洗器；Millipore Simplicity型超纯水器；WFZ UV-2000型紫外可见分光光度计；Multiskan FC型酶标仪；移液枪；LG10-2.4A高速离心机；JJ-12J 脱水机；AP280-2包埋机；HM335E半自动石蜡切片机；JB-L5冻台；KD-P组织摊片机；DGX-9003B烤箱；10212432C载玻片及盖玻片；ST5010莱卡染色机；NIKON ECLIPSE TI-SR 导致荧光显微镜；Tissuelyser-24组织匀浆器；PowerPac定时稳流稳压电泳仪；BIO-RAD电泳槽；96孔酶标板；微量核酸蛋白浓度测定仪；Qubit 2.0 Fluorometer。
（2）小肠组织病理学检测及分析：取新鲜小肠组织进行HE染色，见图10。小肠粘膜是人体最大的免疫活性器官，可以保护机体免受微生物的侵害。因此保持小肠组织完整对维持机体稳定具有重要意义。由图10看出，NC组大鼠的小肠绒毛排列良好且肠隐窝结构完整。然而，模型组小肠组织结构异常，肠壁破损，小肠绒毛紊乱、塌陷和部分肿胀坏死，绒毛上皮细胞退化消失，这些特征共同表明动脉粥样硬化大鼠小肠组织发生了严重的组织学病变。经过辛伐他汀和实施例1的药物组治疗后，都明显减轻了小肠组织损伤，肠完整性和粘膜屏障得到改善，且实施例1药物组的治疗效果与其剂量成正比，高剂量用药组小肠绒毛排列较整齐。
（3）组织蛋白的提取与浓度测定：（a）称取0.2克动脉和0.1克肝脏组织块用冷PBS洗涤去除血污，剪成小块放入匀浆器中，加入1mL的蛋白酶抑制剂，震荡30秒。将装有匀浆液的离心管振荡，冰浴30分钟，使组织细胞完全裂解。离心，收集上清液即为总蛋白溶液。（b）根据BCA试剂盒说明测定提取的总蛋白浓度，制备的标准曲线，在562nm波长处检测吸光值，再根据标准曲线定量各组织样本的蛋白浓度。
（4）蛋白免疫印迹检测方法：（a）蛋白变性：加入上样缓冲液混匀，在100℃煮沸10分钟, 使蛋白充分变性。（b）电泳：试剂准备为：配制电泳缓冲液（pH=8.3），转膜缓冲液（pH=8.3），TBST缓冲液。配胶：根据蛋白的片段大小分别配制适宜浓度的分离胶和5%浓缩胶。电泳：各组取50µg的蛋白质上样，在75V恒定电压下电泳10分钟，再换120V电压电泳1小时，直至溴酚蓝刚跑出即可终止电泳。（c）免疫印迹：转膜完成后，取下载有蛋白质的膜，加入对应一抗NF-kB p65(1:500)，VCAM-1(1:1000)，SREBP-1(1:)，CYP7A1(1:)，β-Actin(1:1000)，4℃摇床孵育过夜；回收一抗，用TBST缓冲液洗脱，再加入二抗（抗兔1:3000），室温孵育30分钟后，用TBST洗脱，用化学发光检测系统检测目的蛋白条带，计算蛋白相对表达量。
（5）实施例1对相关蛋白表达的影响：动脉粥样硬化主要是机体脂质代谢紊乱导致血液中胆固醇水平增高，从而引发大或中动脉内膜损伤而产生的炎症反应性疾病。通过对动脉粥样硬化大鼠主动脉中炎症因子相关蛋白和肝脏中脂质代谢相关蛋白的表达进行检测，也可以清楚地了解通过肠道菌群的调节来缓解动脉粥样硬化的分子机制。由图11-12看出，与NC组相比，动脉粥样硬化模型组大鼠主动脉中VCAM-1和NF-kB的表达显著上调，但在辛伐他汀阳性组和黑枸杞花青素纯化物实施例1用药组中，这两种蛋白的表达显著降低，且与黑枸杞花青素纯化实施例1物呈现一定的剂量依耐性（P<0.05）。核转录因子（NF-kB）是调控动脉粥样硬化许多相关蛋白质表达的关键因子，它可激活多种与免疫和炎症反应相关的因子，包括白细胞介素因子，肿瘤坏死因子、黏附分子等，从而加快泡沫细胞的形成、平滑肌细胞增生与迁移，导致动脉粥样硬化形成。血管细胞黏附分子-1（VCAM-1）是一种介导细胞与细胞、细胞与细胞外基质间黏附及相互作用的膜表面的糖蛋白，组织损伤和炎症反应会刺激其在动脉血管内皮细胞上表达。在动脉粥样硬化大鼠（模型组大鼠）的动脉中NF-kB被激活，从而促进了动脉血管内皮VCAM-1的表达并增加了血浆中炎症因子IL-6和TNF-α的含量。当用实施例1的药物治疗后，NF-kB的表达显著下调，从而有效缓解了动脉粥样硬化炎症反应。血清胆固醇含量增高也是引起动脉粥样硬化的关键因素之一，动脉粥样硬化发展的早期阶段，主要是由于机体脂质代谢紊乱，低密度脂蛋白增加，高密度脂蛋白降低，当过量的低密度脂蛋白被氧化成具有毒性的氧化型低密度脂蛋白进入血液中后，会造成血管内皮细胞损伤引发炎症反应和内膜脂质沉积，同时，其被巨噬细胞表面的清道夫受体吞噬转变为泡沫细胞，从而就发展成了动脉粥样硬化。胆固醇7α- 羟化酶(CYP7A1)和胆固醇调节元件结合蛋白-2（SREBP-2）是肝脏中调节胆固醇代谢的关键酶。CYP7A1是调节胆固醇代谢成胆汁酸排出体外重要的蛋白，而SREBP-2是调节胆固醇合成相关基因的重要蛋白。由图9看出，在动脉粥样硬化大鼠肝脏中CYP7A1的表达明显下降而SREBP-2的表达明显上调，且与NC组大鼠相比均具有显著性差异（P<0.05）。经过辛伐他汀和实施例1的药物治疗后，SREBP-2和CYP7A1的表达均得到恢复。
（6）高通量测序检测肠道菌群组分的方法：根据粪便基因组DNA抽提试剂盒的说明提取盲肠内容物总DNA，并测定浓度。进行IlluminaMiSeq测序平台的16S rDNA, V3-V4区域扩增和测序文库构建及生物信息学分析。利用MetaVx™ 文库构建试剂盒构建测序文库，再运用Bcl2fastq (v2.17.1.14)、VSEARCH（1.9.6）、Qiime（1.9.1）和R语言软件进行序列结果优化与分析。在97%相似的水平下对所有序列进行物种操作单元（OUT）划分，分类注释使用RDP分类器进行。在OUT划分结果基础上，再对各个样本进行α多样性指数分析、β多样性指数分析，得到各样本物种丰富度、均匀度和群落结构差异等信息。
（7）实施例1对动脉硬化大鼠肠道菌群结构的影响：在人体肠道中微生物数量高达39万亿，其中以细菌为主。大部分细菌在肠道内与人体营养共生共存，不仅可以帮助人体消化ͅ吸收、提供能量与营养物质，而且还可以促进短链脂肪酸、胆汁酸分泌、构建免疫体系以防御病原体入侵。但也有一些致病菌的生长处于抑制状态，一旦肠道微生态失调，它们就会快速繁殖从而引起各种慢性疾病，如肠炎、肥胖、II 型糖尿病、心血管疾病、老年痴呆症等多种疾病。根据α多样性指数分析，Chao1指数表示肠道菌群丰度变化，Shannon指数表示肠道菌群多样性变化。肠道菌群多样性越高，抵抗外界干扰的能力越强。当环境损害致某些菌种失活后，生态系统中功能相似的微生物可以补偿缺失物种的功能。由图13-14可知，模型组大鼠的肠道菌群丰度和多样性与NC组相比都显著下降，经辛伐他汀和实施例1药物治疗后，SIM组大鼠的肠道菌群丰度和多样性都升高了，但与模型组相比无统计学差异；而实施例1药物组的肠道菌群丰度和多样性都上升了，且药物剂量越高，Chao1和Shannon值与模型组相比差异性越显著（P<0.05）。
人体肠道中存在着大约30个属550多种细菌，在门水平上，可分为厚壁菌门、拟杆菌门、变形菌门、放线菌门、疣微菌门等，其中以厚壁菌门和拟杆菌门为主，数量占到肠道细菌总数的98%。在大鼠肠道菌群中主要包含了厚壁菌门、拟杆菌门、变形菌门、放线菌门、疣微菌门、柔膜菌门和patescibacteria。对各个菌门定量分析发现，各组都是以厚壁菌门与拟杆菌门为主，其相对丰度约为85%-99%。在NC组厚壁菌门相对丰度为85%，拟杆菌门为12%。但在模型组中，厚壁菌门相对丰度显著增加（94%），拟杆菌门显著降低（4%）。经辛伐他汀和实施例1药物治疗后，厚壁菌门和拟杆菌门的相对丰度均有所恢复，但辛伐他汀阳性组厚壁菌门相对丰度发生极显著降低，其相对丰度比NC组还低9%，而其他菌门的相对丰度增加，以疣微菌门最为突出。与模型组相比，在低、中、高剂量用药组中，厚壁菌门相对丰度（分别为89%、87%、85%）明显降低了，拟杆菌门相对丰度明显增加，也促进了疣微菌门的繁殖。拟杆菌门是肠道菌群中唯一编码糖降解酶的菌，其相对丰度下降不利于机体糖的代谢，从而会引起肥胖，糖尿病等代谢类疾病。有研究报道，在肥胖或糖尿病患者肠道中，厚壁菌门相对丰度较高，拟杆菌门相对丰度较低。将厚壁菌门相对丰度较高，拟杆菌门相对丰度较低的肥胖小鼠的粪便移植到正常的小鼠肠道中，能成功的复制出肥胖小鼠。说明实施例1改善动脉粥样硬化可能是通过抑制了厚壁菌门的增多，促进了拟杆菌门增殖导致的。在纲和目水平上，发现优势菌以梭菌为主、其次是乳杆菌和拟杆菌。与NC组相比，这三种主要优势菌的相对丰度在动脉粥样硬化模型组都明显降低，但丹毒丝菌纲（Erysipelotrichia）相对丰度增加；辛伐他汀和实施例1的药物治疗后显著恢复了这些优势菌，且抑制了丹毒丝菌和肠杆菌。丹毒丝菌纲被报道常常出现在高脂高糖饮食的肥胖小鼠肠道菌群中。由在科水平上，相比于NC组，在模型组的大鼠肠道中优势菌（毛螺菌科、双歧杆菌科、乳酸菌科、Akkermansiaceae）的相对丰度明显降低，丹毒丝菌科（Erysipelotrichacea）、Peptostreptococcaceae和肠杆菌科相对丰度明显增加。经治疗后，辛伐他汀组和实施例1用药组的大鼠肠道中毛螺菌科、双歧杆菌科和乳酸杆菌科的相对丰度均明显上升，其中高剂量的实施例1药物促进毛螺菌科和乳酸杆菌科繁殖的能力特别显著，结果表明实施例1具有明显的改善肠道菌群的作用。已知机体中胆固醇的代谢主要在肝脏中大部分转变为胆汁酸的形式被利用或排出体外。胆固醇先在肝脏中经过一系列的酶催化合成胆汁盐，胆汁盐需被胆汁盐水解酶水解成游离胆汁酸排出体外。双歧杆菌属和乳酸杆菌属是维持机体健康的主要的益生菌，有研究报道胆汁盐水解酶主要在肠道双歧杆菌属、乳酸杆菌属、肠球菌属和梭状杆菌中表达，因此胆固醇的代谢与肠道菌群中某些益生菌的丰度具有密切联系。在属水平上，在模型组大鼠肠道中的双歧杆菌属（Bifidobacterium）和乳酸杆菌属（Lactobacillus）的相对丰度显著低于NC组，但经过辛伐他汀和不同剂量的药物组治疗后均恢复了这两种菌的相对丰度，且高剂量的实施例1促进这两种益生菌的增殖能力要强于辛伐他汀药物（P<0.05）。由图15-20还发现，模型组大鼠肠道菌群中毛螺菌属（Lachnospiraceae_NK4A136_group）、Akkermansia和罗斯氏菌属（Roseburia）的相对丰度分别为5.8%、1.5%和1.4%，与NC组相比，这3种菌群相对丰度显著降低（P<0.05）。阳性组的Akkermansia菌相对丰度（9.1%）与模型组相比明显提高，且其相对丰度要高于NC组。而实施例1药物治疗后对使Akkermansia、Lachnospiraceae_NK4A136_group和罗斯氏菌属的相对丰度明显提高，且剂量越高，提高效果越明显（P<0.05）。Akkermansia是一种定植在盲肠黏液层中的细菌，可降解黏蛋白产生丙酸，具有保护肠黏膜屏障减少脂多糖渗入和蛋白质沉积的作用。毛螺菌属和罗斯氏菌属是肠道中两种常见的产生短链脂肪酸的菌，他们可以将机体无法消化的多糖和可溶性纤维素酵解产生短链脂肪酸，它们不仅可以为肠道细胞提供能量物质，还可直接被吸收进入血液循环抑制机体NF-kB炎症信号通路，从而降低血管内皮炎症因子，起到很好的抗炎作用。经过16S rDNA测序结果显示，在模型组的大鼠肠道中普雷沃氏菌属的相对丰度相比于NC组明显升高，但经辛伐他汀和实施例1药物治疗后，其相对丰度均发生显著降低，且相对丰度恢复到正常状况（P<0.05）。因此，实施例1可通过抑制普雷沃氏菌的生长改善了动脉粥样硬化。
动脉粥样硬化是一种脂质代谢紊乱引起的动脉炎症性疾病，动脉粥样硬化的发展与肠道菌群紊乱具有紧密联系。对动脉粥样硬化大鼠盲肠内容物进行16S rDNA测序和对主动脉、肝脏组织中相关通路检测发现：动脉粥样硬化大鼠小肠组织遭到破坏，肠道菌群发生了紊乱，而采用实施例1药物治疗后显著改善了小肠组织病理学损伤，改善了小肠绒毛和肠道屏障的的完整性，增加肠壁渗透性，抑制脂多糖大量渗入血液引起的炎症；同时还增加了肠道菌群的多样性及丰度。增加了拟杆菌门、双歧杆菌科、乳酸杆菌科、产生短链脂肪酸的菌（毛螺菌属、罗斯氏菌属和Akkermansia）的相对丰度，降低了厚壁菌门、丹毒丝菌纲、肠杆菌科和Prevotellaceae_NK3B31_group的相对丰度, 从而抑制了主动脉血管炎症通路NF-kB和VCAM-1的表达，起到改善动脉血管内皮细胞损伤和血管炎症的作用，并且上调了肝脏胆固醇代谢蛋白CYP7A1的表达，下调了胆固醇合成蛋白SREBP-2的表达，抑制了胆固醇的合成，促进胆固醇代谢成更多游离胆汁酸排出。实施例1通过调节肠道菌群与炎症反应和脂质代谢的相互作用而发挥了改善和治疗动脉粥样硬化的作用。
以本发明实施例2-3进行上述试验，也能达到本发明所述的有益效果。最后应说明的是：以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，对于本领域的技术人员来说，其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (5)

1.一种通过调节肠道菌群平衡防治动脉粥样硬化的天然药物制剂，其特征在于由重量百分含量的以下组分组成：黑玉米芯花青提取纯化物40%-50%，含羞草总黄酮提取纯化物10%-25%，檵花叶丹宁提取纯化物20%-30%，姜黄素10%-20%；
所述的黑玉米芯花青提取纯化物采用以下方法制备：将低温风干的黑玉米芯置于组织破碎提取器中，加入固液比为1:4-1:6的pH 3.0的50%-60%的乙醇溶液室温破碎提取1-3min；抽滤，所得滤渣加入固液比为1:3-1:5的pH 3.0的50%-60%的乙醇溶液，改用超声提取法室温超声提取1次，提取30-40 分钟，抽滤；合并组织破碎提取液和超声提取液，在40-50℃条件下闪蒸浓缩至原体积的1/4-1/6，得到浓缩液；将浓缩液通过大孔吸附树脂DiaionHP 2MGL柱色谱进行总花青素的富集纯化；先用蒸馏水淋洗至洗脱液呈无色透明后，改用pH4.0的55-65%的乙醇溶液洗脱，收集紫红色的色素洗脱液，在40-50℃条件下旋转蒸发仪中真空浓缩干燥或冷冻干燥，得黑玉米芯花青素提取纯化物干粉；
所述的含羞草总黄酮提取纯化物采用以下方法制备：取干燥粉碎的含羞草粗粉，采用料液比1:3-1:6的60%-75%乙醇做溶剂超声提取2-3次，每次20-40分钟；合并提取液，在50-60℃条件下闪蒸浓缩至原体积的1/8-1/10，将浓缩液分别采用石油醚、乙酸乙酯和正丁醇萃取，分别在50-60℃条件下闪蒸浓缩结合旋蒸浓缩至干，得到各部位；合并乙酸乙酯部位和正丁醇部位，通过Diaion HP-20 大孔吸附树脂柱色谱柱色谱进行富集纯化，分别用去离子水、10%乙醇、20%乙醇、40%乙醇、60%乙醇、70%丙酮进行梯度洗脱；合并40%乙醇、60%乙醇部位，在50-60℃条件下减压浓缩干燥，得到含羞草总黄酮提取纯化物；
所述的檵花叶丹宁提取纯化物采用以下方法制备：取干燥粉碎的檵花叶粗粉，采用料液比1:5-1:8的70%丙酮做溶剂进行组织破碎提取1-3分钟，抽滤；滤液在40-50℃条件下闪蒸浓缩后，采用Diaion HP-20 大孔吸附树脂柱色谱，分别用去离子水、10%甲醇、20%甲醇、40%甲醇、60%甲醇、70%丙酮进行梯度洗脱；合并20%甲醇和40%甲醇洗脱部位，采用真空薄膜浓缩装置在40-50℃条件下闪蒸浓缩，结合旋蒸浓缩干燥，得到檵花叶提取纯化物。
2.如权利要求1所述的一种通过调节肠道菌群平衡防治动脉粥样硬化的天然药物制剂，其特征在于黑玉米芯花青提取纯化物42%-48%，含羞草总黄酮提取纯化物12%-23%，檵花叶丹宁提取纯化物22%-28%，姜黄素12%-18%。
3. 如权利要求1所述的一种通过调节肠道菌群平衡防治动脉粥样硬化的天然药物制剂，其特征在于所述的黑玉米芯花青提取纯化物制备方法中：将低温风干的黑玉米芯置于组织破碎提取器中，加入固液比为1:5的pH 3.0的40%的乙醇溶液室温破碎提取2 min；抽滤，所得滤渣加入固液比为1:4的pH 3.0的55%的乙醇溶液，改用超声提取法室温超声提取1次，提取30-40 分钟，抽滤；合并组织破碎提取液和超声提取液，在45℃条件下闪蒸浓缩至原体积的1/5，得到浓缩液；将浓缩液通过大孔吸附树脂Diaion HP 2MGL柱色谱进行总花青素的富集纯化；先用蒸馏水淋洗至洗脱液呈无色透明后，改用pH 4.0的60%的乙醇溶液洗脱，收集紫红色的色素洗脱液，在45℃条件下旋转蒸发仪中真空浓缩干燥或冷冻干燥，得黑玉米芯花青素提取纯化物干粉。
4. 如权利要求1所述的一种通过调节肠道菌群平衡防治动脉粥样硬化的天然药物制剂，其特征在于所述的含羞草总黄酮提取纯化物采用以下方法制备：取干燥粉碎的含羞草粗粉，采用料液比1:4-1:5的65%-70%乙醇做溶剂超声提取2-3次，每次25-35分钟；合并提取液，在55-58℃条件下闪蒸浓缩至原体积的1/9，将浓缩液分别采用石油醚、乙酸乙酯和正丁醇萃取，分别在55-58℃条件下闪蒸浓缩结合旋蒸浓缩至干，得到各部位；合并乙酸乙酯部位和正丁醇部位，通过Diaion HP-20 大孔吸附树脂柱色谱柱色谱进行富集纯化，分别用去离子水、10%乙醇、20%乙醇、40%乙醇、60%乙醇、70%丙酮进行梯度洗脱；合并40%乙醇、60%乙醇部位，在50-60℃条件下减压浓缩干燥，得到含羞草总黄酮提取纯化物。
5. 如权利要求1所述的一种通过调节肠道菌群平衡防治动脉粥样硬化的天然药物制剂，其特征在于所述的檵花叶丹宁提取纯化物采用以下方法制备：取干燥粉碎的檵花叶粗粉，采用料液比1:6-1:7的70%丙酮做溶剂进行组织破碎提取2分钟，抽滤；滤液在45-48℃条件下闪蒸浓缩后，采用Diaion HP-20 大孔吸附树脂柱色谱，分别用去离子水、10%甲醇、20%甲醇、40%甲醇、60%甲醇、70%丙酮进行梯度洗脱；合并20%甲醇和40%甲醇洗脱部位，采用真空薄膜浓缩装置在45-47℃条件下闪蒸浓缩，结合旋蒸浓缩干燥，得到檵花叶提取纯化物。
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Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN112768014A (zh) * 2021-01-08 2021-05-07 中国科学院兰州化学物理研究所 一种预测用于多糖分离的大孔吸附树脂类型的方法
CN115039885A (zh) * 2021-05-14 2022-09-13 艾兰得生物科技研究泰州有限公司 一种具有抑制奇异变形杆菌生长作用的副干酪乳杆菌及其益生菌组合物、发酵液和应用

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101474240A (zh) * 2009-01-22 2009-07-08 浙江林学院 一种从含羞草中提取总黄酮的方法

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101474240A (zh) * 2009-01-22 2009-07-08 浙江林学院 一种从含羞草中提取总黄酮的方法

Non-Patent Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
南京中医药大学编著: "《中药大辞典》", 31 March 2006, 上海科学技术出版社 *
牟玉兰等: "含羞草总黄酮含量的测定与挥发油化学组分的测定", 《石化技术》 *
王金亭: "天然黑玉米色素研究与应用进展", 《粮食与油脂》 *
赵立平等: "《微生物组学与精准医学》", 31 December 2017, 上海交通大学出版社 *
郑建仙: "《植物活性物质生产关键技术与典型范例》", 30 November 2006, 科学技术文献出版社 *
龚梓初等: "《自然健康》", 31 January 2012, 第二军大学出版社 *

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN112768014A (zh) * 2021-01-08 2021-05-07 中国科学院兰州化学物理研究所 一种预测用于多糖分离的大孔吸附树脂类型的方法
CN115039885A (zh) * 2021-05-14 2022-09-13 艾兰得生物科技研究泰州有限公司 一种具有抑制奇异变形杆菌生长作用的副干酪乳杆菌及其益生菌组合物、发酵液和应用
CN115039885B (zh) * 2021-05-14 2023-11-03 江苏艾兰得营养品有限公司 一种具有抑制奇异变形杆菌生长作用的副干酪乳杆菌及其益生菌组合物、发酵液和应用

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