CN110476750B - 一种水稻苗期抗褐飞虱规模化鉴定与筛选方法 - Google Patents
一种水稻苗期抗褐飞虱规模化鉴定与筛选方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN110476750B CN110476750B CN201910784015.4A CN201910784015A CN110476750B CN 110476750 B CN110476750 B CN 110476750B CN 201910784015 A CN201910784015 A CN 201910784015A CN 110476750 B CN110476750 B CN 110476750B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- rice
- insect
- brown planthopper
- brown
- rice material
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- 241001556089 Nilaparvata lugens Species 0.000 title claims abstract description 137
- 235000007164 Oryza sativa Nutrition 0.000 title claims abstract description 133
- 235000009566 rice Nutrition 0.000 title claims abstract description 133
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 79
- 238000012216 screening Methods 0.000 title claims abstract description 25
- 240000007594 Oryza sativa Species 0.000 title 1
- 239000000463 material Substances 0.000 claims abstract description 143
- 241000209094 Oryza Species 0.000 claims abstract description 132
- 241000238631 Hexapoda Species 0.000 claims abstract description 41
- 238000009331 sowing Methods 0.000 claims abstract description 34
- 238000001784 detoxification Methods 0.000 claims abstract description 19
- 241000607479 Yersinia pestis Species 0.000 claims abstract description 17
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 claims abstract description 14
- 238000000746 purification Methods 0.000 claims abstract description 9
- 238000012360 testing method Methods 0.000 claims description 57
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 claims description 19
- 230000035784 germination Effects 0.000 claims description 11
- 239000004033 plastic Substances 0.000 claims description 11
- 238000010899 nucleation Methods 0.000 claims description 4
- 238000005070 sampling Methods 0.000 claims description 4
- 230000032669 eclosion Effects 0.000 claims description 3
- 230000007613 environmental effect Effects 0.000 claims description 3
- 230000007480 spreading Effects 0.000 claims description 2
- 238000009395 breeding Methods 0.000 abstract description 15
- 230000001488 breeding effect Effects 0.000 abstract description 9
- 230000008569 process Effects 0.000 abstract description 3
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 abstract description 2
- 201000010099 disease Diseases 0.000 abstract description 2
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 abstract description 2
- 239000003147 molecular marker Substances 0.000 description 17
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 13
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 11
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 7
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 239000004677 Nylon Substances 0.000 description 5
- 229920001778 nylon Polymers 0.000 description 5
- 240000001606 Adenanthera pavonina Species 0.000 description 4
- 235000011470 Adenanthera pavonina Nutrition 0.000 description 4
- 230000009418 agronomic effect Effects 0.000 description 4
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 4
- 238000011160 research Methods 0.000 description 4
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 3
- 239000003337 fertilizer Substances 0.000 description 3
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 3
- 238000013095 identification testing Methods 0.000 description 3
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 3
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 3
- 235000016709 nutrition Nutrition 0.000 description 3
- 230000035764 nutrition Effects 0.000 description 3
- 238000012795 verification Methods 0.000 description 3
- 235000017166 Bambusa arundinacea Nutrition 0.000 description 2
- 235000017491 Bambusa tulda Nutrition 0.000 description 2
- 241001330002 Bambuseae Species 0.000 description 2
- 235000015334 Phyllostachys viridis Nutrition 0.000 description 2
- 239000011425 bamboo Substances 0.000 description 2
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 description 2
- 230000003111 delayed effect Effects 0.000 description 2
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 2
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 2
- 210000001320 hippocampus Anatomy 0.000 description 2
- 206010022000 influenza Diseases 0.000 description 2
- 238000002791 soaking Methods 0.000 description 2
- 241000269350 Anura Species 0.000 description 1
- 235000015001 Cucumis melo var inodorus Nutrition 0.000 description 1
- 240000002495 Cucumis melo var. inodorus Species 0.000 description 1
- 206010061217 Infestation Diseases 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- 230000004075 alteration Effects 0.000 description 1
- 238000010009 beating Methods 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 238000004364 calculation method Methods 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 230000002349 favourable effect Effects 0.000 description 1
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 1
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 1
- 239000003750 molluscacide Substances 0.000 description 1
- 230000002013 molluscicidal effect Effects 0.000 description 1
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 1
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 1
- 239000000575 pesticide Substances 0.000 description 1
- 230000008635 plant growth Effects 0.000 description 1
- 239000002574 poison Substances 0.000 description 1
- 231100000614 poison Toxicity 0.000 description 1
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 1
- 230000000644 propagated effect Effects 0.000 description 1
- 210000001995 reticulocyte Anatomy 0.000 description 1
- 210000003660 reticulum Anatomy 0.000 description 1
- 239000011540 sensing material Substances 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 1
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 1
- 238000002834 transmittance Methods 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01G—HORTICULTURE; CULTIVATION OF VEGETABLES, FLOWERS, RICE, FRUIT, VINES, HOPS OR SEAWEED; FORESTRY; WATERING
- A01G22/00—Cultivation of specific crops or plants not otherwise provided for
- A01G22/20—Cereals
- A01G22/22—Rice
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01G—HORTICULTURE; CULTIVATION OF VEGETABLES, FLOWERS, RICE, FRUIT, VINES, HOPS OR SEAWEED; FORESTRY; WATERING
- A01G7/00—Botany in general
- A01G7/06—Treatment of growing trees or plants, e.g. for preventing decay of wood, for tingeing flowers or wood, for prolonging the life of plants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01K—ANIMAL HUSBANDRY; AVICULTURE; APICULTURE; PISCICULTURE; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
- A01K67/00—Rearing or breeding animals, not otherwise provided for; New or modified breeds of animals
- A01K67/033—Rearing or breeding invertebrates; New breeds of invertebrates
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Environmental Sciences (AREA)
- Biodiversity & Conservation Biology (AREA)
- Botany (AREA)
- Ecology (AREA)
- Forests & Forestry (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Animal Husbandry (AREA)
- Pretreatment Of Seeds And Plants (AREA)
Abstract
本发明涉及植物病虫害防治与水稻育种技术领域，具体涉及一种水稻苗期抗褐飞虱规模化鉴定与筛选方法。本发明通过将播种田划分为多个区域，将供试水稻材料与感虫对照对应播种于毗邻的区域，将经纯化、脱毒和规模化繁殖得到的各虫龄褐飞虱混合均匀，人工接虫至供试水稻材料和感虫对照，以供试水稻材料相对应的感虫对照为参照，进行供试水稻材料的褐飞虱抗性评价。该方法与现有的SSST方法相比，简化了操作流程，提高了鉴定效率，具有较高的鉴定准确性和稳定性，更适于进行抗褐飞虱水稻的大规模鉴定和筛选，具有很好的应用前景。
Description
技术领域
本发明涉及植物病虫害防治与水稻育种技术领域，具体涉及一种水稻苗期抗褐飞虱规模化鉴定与筛选方法。
背景技术
褐飞虱是水稻的主要害虫之一，培育农艺性状优良的抗褐飞虱水稻品种并进行推广是防治褐飞虱的重要手段。然而，由于水稻抗褐飞虱育种的复杂性与艰巨性，目前中国少有中抗褐飞虱及以上抗性的水稻品种通过审定。申请人通过多年实践发现，由于缺乏操作简便、鉴定结果准确、稳定的水稻苗期规模化抗褐飞虱鉴定与筛选方法，若想实现水稻抗褐飞虱育种的目标存在较大困难。
目前，抗褐飞虱性状的鉴定方法主要有标准苗期筛选法(SSST法)、存活率测定法、蜜露量测定法、成株期筛选法、植株生长指标的变化率以及电子刺吸仪监测技术(EPG法)等方法，其中，SSST法为目前最主要的使用方法。该方法是在框/盆中单粒等距多行行播，一框/盆中有一行或数行对照；由于精细操作，该方法适用于小批量材料进行鉴定与筛选，但较难满足水稻抗褐飞虱育种的规模化苗期抗褐飞虱鉴定与筛选需求。因此，亟需开发一种鉴定准确性和稳定性较高、适用于规模化抗褐飞虱鉴定与筛选的方法。
发明内容
为解决现有技术中存在的技术问题，本发明的目的在于提供一种具有较高的鉴定准确性和稳定性、适用于水稻苗期抗褐飞虱规模化鉴定和筛选的方法。
为实现上述目的，本发明的技术方案如下：
本发明提供一种水稻苗期抗褐飞虱规模化鉴定方法：将播种田划分为多个区域，将供试水稻材料与感虫对照对应播种于毗邻的区域，将经纯化、脱毒和规模化繁殖得到的各虫龄褐飞虱混合均匀，人工接虫至供试水稻材料和感虫对照，以供试水稻材料相对应的感虫对照为参照，进行供试水稻材料的褐飞虱抗性评价。
优选地，所述对应播种为每1～2个区域的供试水稻材料对应1个区域的感虫对照。
更优选地，所述播种田划分为多个块状格子。
本发明发现，通过上述方式将供试水稻材料与感虫对照毗邻对应播种，能够更好地控制感虫对照和供试水稻材料的试验条件的一致性，使得感虫对照真正发挥“对照”的作用，有效提高抗褐飞虱规模化鉴定的准确性和稳定性。
作为本发明的一种优选实施方式，所述块状格子为尺寸为(4～8)寸×(4～8)寸。
优选地，播种时，将相近数量的种子均匀摊开播入各区域中；控制相对应的感虫对照与供试水稻材料的发芽种子量、种子萌发情况和播种面积相接近；待所述供试水稻材料长至三叶时，剔除弱苗，将所述供试水稻材料与其相对应的感虫对照的发芽苗的密度与数量调整至相接近。
作为本发明的一种优选实施方式，播种田划分为4寸×4寸的方格，每格的播种量为30粒发芽水稻种子。
优选地，所述供试水稻材料包含已知的不同抗性等级的材料，以检测鉴定的有效性与稳定性。所述已知的不同抗性等级的材料包括但不限于RHT、珞扬69、Mudgo、93-11、TN1等。
在播种后围好薄膜，盖好网罩或尼龙网以防止褐飞虱等自由进出。做好水肥光温管理，以保证水稻种子的萌发和水稻苗的正常生长。
优选地，所述人工接虫为按平均每株苗接褐飞虱5-10头，并使感虫对照在5～10天内受害致死的标准进行。
在人工接虫过程中，保证供试水稻材料与其相对应的感虫对照的接虫量基本一致。
更优选将各虫龄褐飞虱混合后先经纯化，再混合均匀进行人工接虫。
与现有抗褐飞虱鉴定方法中人工接虫需要选择1-2龄或2-3龄幼虫不同，本发明中，只需将经纯化、脱毒和规模化繁殖的各虫龄褐飞虱混合均匀接虫即可实现较高的鉴定准确性和稳定性。
播种田可根据实际需要设置在温室、网室或环境条件适于抗虫鉴定的大田中。
作为本发明的优选实施方式，所述播种田位于带有玻璃顶的网室内，并且有光、温调节设施。
优选地，所述供试水稻材料的褐飞虱抗性评价为利用标准苗期筛选法，当相对应的感虫对照达到9级时，随机抽样多苗进行供试水稻材料的褐飞虱抗性评价。
更优选地，当相对应的感虫对照的受害达7级时观察并记录供试水稻材料的受害情况并登记分级，之后每日1次，直至相对应的感虫对照达9级，以相对应感虫对照达9级时供试水稻材料的受害等级作为供试水稻材料的抗性等级。
在鉴定规模较大时易出现鉴定不均匀的区块，对该区块应尽早补虫或延迟定级，直至95％以上的供试水稻材料定级完毕。
在供试水稻材料定级完毕后，杀灭褐飞虱等，将抗性较好的材料恢复后移栽至大田。
优选地，用于所述脱毒和规模化繁殖的养虫水稻为高感四种褐飞虱生物型(生物型1、生物型2、生物型3和生物型4)的不育系水稻材料。
本发明发现不育系水稻的营养物质大部分集中在茎秆中，与现有的抗褐飞虱鉴定方法中常用的养虫水稻TN1相比，采用不育系水稻材料作为养虫水稻，更易于褐飞虱的繁殖。
更优选地，所述不育系水稻材料为生育期长、营养丰富、遗传稳定的两系不育系材料。
作为本发明的优选实施方案，所述养虫水稻为隆科638S。
现有的抗褐飞虱鉴定方法中，褐飞虱的繁殖存在大规模繁殖困难、脱毒不彻底等问题。本发明发现，采用在多个种植有养虫水稻的温室或网室之间每代轮换、转移褐飞虱的方法更有利于褐飞虱取食营养，提高其繁殖效率，并减少褐飞虱在一个温室或网室多代繁殖带毒的概率，有效提高脱毒效果。
优选地，所述脱毒和规模化繁殖为在多个种植有所述养虫水稻的温室或网室之间每代轮换进行。
更优选地，在褐飞虱成虫中后期时将其收集纯化后转移至下一个种植有所述养虫水稻的温室或网室。若脱毒效果不明显时，将褐飞虱转移时期调整为褐飞虱羽化时。
养虫水稻的种植规格可根据温室或网室的面积等实际情况进行调整，作为本发明的一种实施方式，养虫水稻材料的种植规格为两厢或四厢，多本移栽，每厢长20米、宽3m，每两厢材料中间预留长20m、宽2.5m的抗性鉴定用地；每厢养虫材料放入褐飞虱成虫1万头至3万头直至其繁殖出下一代。
为更好地促进褐飞虱的规模化繁殖，优选通过调节所述养虫水稻的播期，使褐飞虱繁殖时养虫水稻处于分蘖盛期至孕穗期。
在脱毒和规模化繁殖过程中，保持网室杂虫较少、环境条件适宜(相对湿度75％以上，气温20-33℃)。
褐飞虱在脱毒和规模化繁殖前需先经过纯化处理，在人工接虫前也需要进行纯化处理，本发明发现褐飞虱在受到干扰时较杂虫更易跳动，并且跳得较高，利用该特点本发明提供了适用于大规模繁殖的褐飞虱纯化方法：用硬纸板在装有大量褐飞虱的塑料筐的筐底处来回晃动，将褐飞虱收集于所述硬纸板上，人工挑除收集到的杂虫。
优选地，用硬纸板在距离所述塑料筐的筐底的3-5cm处来回晃动。
作为本发明的一种实施方式，所述塑料筐的长×宽×高为60cm×40cm×40cm，硬纸板长宽为25cm×15cm。
从水稻上收集褐飞虱可采用将稻蔸上的褐飞虱轻轻拍入塑料筐中的方法。
所述人工挑除收集到的杂虫可采用削尖的铅笔进行。
作为本发明的优选方案，所述水稻苗期抗褐飞虱规模化鉴定方法包括以下步骤：
(1)褐飞虱的纯化：将稻蔸上的褐飞虱轻轻拍入塑料筐中，用硬纸板在装有褐飞虱的塑料筐的框底3-5cm处来回晃动，将褐飞虱收集于所述硬纸板上，人工挑除收集到的杂虫；
(2)褐飞虱的脱毒与规模化繁殖：选择高感4种褐飞虱生物型、生育期长、营养丰富、遗传稳定的两系不育系水稻材料作为养虫水稻；调节所述养虫水稻的播期，使褐飞虱繁殖时养虫水稻处于分蘖盛期至孕穗期；在条件适宜的多个种植有所述养虫水稻的温室或网室之间进行褐飞虱的脱毒与规模化繁殖；在褐飞虱成虫中后期或褐飞虱羽化时将其收集纯化后转移至下一个种植有所述养虫水稻材料的温网室，每代轮换；
(3)播种田的整理：在温室、网室或者气候条件适于抗虫鉴定的大田中，将播种田划分为若干个适于播种的块状格子；
(4)供试水稻材料和感虫对照的播种：将供试水稻材料与感虫对照对应播种于毗邻的块状格子，每1～2个块状格子的供试水稻材料对应1个块状格子的感虫对照；供试水稻材料包含已知的不同抗性等级的材料；播种时将相近数量的种子均匀摊开播入各区域中；控制相对应的感虫对照与供试水稻材料的发芽种子量、种子萌发情况和播种面积相接近；在播种后围好薄膜，盖好网罩或尼龙网，做好水肥光温管理；待所述供试水稻材料长至三叶时，剔除弱苗，将所述供试水稻材料和相对应的感虫对照的发芽苗的密度与数量调整至相接近；
(5)人工接虫：将经纯化、脱毒和规模化繁殖得到的各虫龄褐飞虱混合均匀，接虫至供试水稻材料和感虫对照，按平均每株苗接褐飞虱5～10头，并使感虫对照5～10天内受害致死的标准进行人工接虫，并保证供试水稻材料和其相对应的感虫对照的接虫量基本一致；
(6)供试水稻材料的褐飞虱抗性评价：利用标准苗期筛选法，以供试水稻材料相对应的感虫对照为参照，当相对应的感虫对照的受害达7级时观察并记录供试材料受害等级并登记分级，之后每日1次，当相对应的感虫对照达到9级时，随机抽样多苗进行供试材料的褐飞虱抗性评价，以相对应感虫对照达9级时供试水稻材料的受害等级作为供试水稻材料的抗性等级。
本发明还提供所述水稻苗期抗褐飞虱规模化鉴定方法在水稻褐飞虱抗性评价或抗褐飞虱水稻筛选中的应用。
本发明的有益效果至少包括：
(1)本发明的褐飞虱纯化方法较SSST法更为简便，既可用于褐飞虱规模化繁殖也可用于规模化人工接虫；
(2)本发明的养虫材料为高感四种褐飞虱生物型、生育期长、营养丰富、遗传稳定的不育系材料，较常用的养虫材料TN1更易于褐飞虱的繁殖，降低了褐飞虱的大规模繁殖难度；
(3)本发明的褐飞虱脱毒与规模化繁殖方法简单、易于实现规模化繁殖，且脱毒效果好；
(4)与SSST法不同，本发明的水稻苗期抗褐飞虱规模化鉴定方法不需要太多精细化操作(如单粒等间距行播、关注褐飞虱羽化时期、虫量计数、小心均匀放虫等)，只需在块状格子中将种子均匀摊开、人工接虫前调节供试材料和其相对应感虫对照的发芽苗密度与数量基本一致以及人工接虫情况基本一致、大致均匀即可；较SSST法更为简便，更适于进行规模化鉴定和筛选；
(5)本发明的抗虫性评价是对水稻块状群体进行抗虫性评价且供试材料与其相对应的感虫对照毗邻并两两比较；与SSST法相比，鉴定的准确性高，稳定性更好；
综上所述，与现有的SSST方法相比，本发明的水稻苗期抗褐飞虱规模化鉴定方法简化了操作流程，提高了鉴定效率、准确性和稳定性，具有很好的应用前景。
附图说明
图1为本发明实施例1中步骤1的褐飞虱收集纯化的示例性照片。
图2为本发明实施例1中步骤2的褐飞虱网室繁殖的示例性照片。
图3为本发明实施例1中步骤4的供试水稻材料播种的示例性照片。
图4为本发明实施例1中步骤5的人工接虫完毕后的示例性照片。
图5为本发明实施例1中步骤6的供试材料鉴定结束后的示例性照片。
具体实施方式
下面将结合实施例对本发明的优选实施方式进行详细说明。需要理解的是以下实施例的给出仅是为了起到说明的目的，并不是用于对本发明的范围进行限制。本领域的技术人员在不背离本发明的宗旨和精神的情况下，可以对本发明进行各种修改和替换。
下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。
下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
实施例1一种水稻苗期规模化抗褐飞虱鉴定与筛选方法
本实施例提供一种水稻苗期规模化抗褐飞虱鉴定与筛选方法，具体如下：
1、褐飞虱的收集与纯化：将稻蔸上的褐飞虱轻轻拍入塑料筐中，用硬纸板在装有褐飞虱的塑料筐的筐底3-5cm处来回晃动，将褐飞虱收集于硬纸板上(如图1所示)，采用削尖的铅笔人工挑除收集到的少量杂虫；
塑料筐的长×宽×高为60cm×40cm×40cm，硬纸板长宽为25cm×15cm。
2、褐飞虱的脱毒和大规模繁殖：
(1)褐飞虱的预饲养：选择隆科638S作为养虫水稻材料，将褐飞虱在隆科638S上饲养4代后进行褐飞虱的网室增殖。
(2)褐飞虱的网室增殖(如图2所示)：
在网室外提前2个月播种隆科638S，播种25天后将隆科638S多本移栽至网室内；移栽前，将网室清理干净、重施农药熏蒸以保证网室无杂虫或杂虫极少；用尼龙网堵好进、出水口，防止青蛙等进入，用杀螺剂杀除水生动物；
分两厢或四厢移栽，每厢长20米、宽3m，每两厢隆科638S中间预留长20m、宽2.5m的预留秧厢用地(抗性鉴定用地)；
待网室内隆科638S处于分蘖盛期至孕穗期时，每厢隆科638S上放入纯化的褐飞虱成虫约2万头；保持环境条件适宜(相对湿度75％以上，气温20-33℃)，气温不适宜则加盖薄膜或展开网室遮阳网；
在褐飞虱成虫中后期将其收集纯化后转移至下一个种植有隆科638S的网室，每代轮换。
3、将步骤2中网室中的预留秧厢用地做成长×宽为20米×2米的秧厢，将秧厢抹平(表面无明显坑洼)，用划行器将其划成10个20米长4寸宽的长条，每个长条分成220个4寸×4寸的方格。第1、4、7、10条播种感虫对照，第2、3、5、6、8、9条播种供试材料。
4、供试水稻材料和感虫对照的播种(如图3所示)：种子在50℃恒温箱破休眠48小时后浸种，浸种24h(中间清洗3次)后催芽，待大部分种子露白后将未露白种子放入35℃恒温箱中继续催芽，露白种子放在阴凉处摊开，最终使水稻材料萌发情况基本一致，播种在步骤3中的方格中；
以TN1作感虫对照，供试材料中加入5个不同抗性等级的水稻材料RHT、珞扬69、Mudgo、93-11、TN1以检测整个鉴定体系的有效性与稳定性。
播种时，每个方格内播种约30粒催芽较好的水稻种子，相对应的感虫对照方格内的种子的可发芽量、萌发情况、播种面积应与鉴定格内供试材料种子的可发芽量、萌发情况、播种面积接近，做好水肥光温管理；在秧厢四周离秧厢边缘10cm位置每隔2米打一根高为70cm的竹桩、围上50cm高的透明薄膜，盖上透光性良好的80目、22米长×2米宽尼龙网，将薄膜与尼龙网之间的缝隙用回形针别好，防止褐飞虱等自由进出。
5、人工接虫(如图4所示)：将步骤2中经脱毒和大规模繁殖获得的褐飞虱用于人工接虫；待供试水稻材料苗长至三叶，剔除弱苗，调节供试材料与其相对应感虫对照的发芽苗数量与密度接近；将繁殖得到的各虫龄褐飞虱混合均匀后，按平均每株苗接褐飞虱10头，最终使感虫对照10天内能受害致死的标准进行人工接虫，保证供试水稻材料和其相对应的感虫对照的接虫量基本一致；
6、供试水稻材料的褐飞虱抗性评价(如图5所示)：观察供试材料中不同抗性等级材料RHT、珞扬69、Mudgo、9311、TN1的抗性表现，其表现正常且稳定即证明整个鉴定体系正常有效；抗虫性评价是以供试材料相对应的感虫对照为参照，随机抽样多苗按标准苗期筛选法(SSST法)规定的标准进行抗虫性评价，受害等级标准如表1所示，计算各重复间的平均受害等级，其评价标准如表2所示。当相对应感虫对照受害达7级时观察并记录供试材料抗性表现并登记分级，之后每日1次，直至相对应感虫对照达9级。以相对应感虫对照达9级时供试材料的受害等级作为供试材料的抗性等级。对于鉴定不均匀的区块，尽早补虫或延迟定级，直至95％以上供试材料定级完毕。
表1受害等级标准
表2各重复间平均受害等级计算与评价标准
| 各重复间受害等级平均数 | 统计等级 | 抗性水平 |
| 0 | 0 | 免疫 |
| 0.1～1.9 | 1 | 高抗 |
| 2.0～3.9 | 3 | 抗虫 |
| 4.0～5.9 | 5 | 中抗 |
| 6.0～7.9 | 7 | 中感 |
| 8.0～9.0 | 9 | 感虫 |
试验例1鉴定方法的准确性分析(1)
利用实施例1的鉴定方法对水稻材料进行褐飞虱抗性鉴定。同时采用分子标记检测方法进行验证，具体如下：
将感虫水稻亲本华占、粤农丝苗、五山丝苗等与带BPH6基因的水稻抗虫亲本珞扬6号杂交，后代自交加代至F5，获得农艺性状较好材料441份。利用实施例1提供的水稻苗期规模化抗褐飞虱鉴定与筛选方法对这些材料进行抗性鉴定，获得110份抗性材料，利用BPH6基因内分子标记检测引物进行分子标记鉴定，分子标记检测引物序列如下：
BPH6-RF:ATAGTGAAGTTGAATCCGAAGG；
BPH6-RR:AGTGACTCAGCCTTGTGTTTCG；
BPH6-SF:AGGGCCTCTGGCGCTCTAC
BPH6-SR:AATGTGAAAGTGCAATTAGAAGGT。
经分子标记检测，发现在实施例1鉴定出的110份抗性材料中，95.45％的材料均具有283bp的特异扩增片段，结果表明，实施例1提供的鉴定方法的抗性鉴定结果准确度高。
试验例2鉴定方法的准确性分析(2)
利用实施例1的鉴定方法对水稻材料进行褐飞虱抗性鉴定。同时采用分子标记检测方法进行验证，具体如下：
将感虫的水稻亲本华占、粤农丝苗、五山丝苗等与带BPH9基因的水稻抗虫亲本珞扬9号杂交，后代自交加代至F5，获得农艺性状较好材料302份，利用实施例1提供的水稻苗期规模化抗褐飞虱鉴定与筛选方法对这些材料进行抗性鉴定，获得59份抗性材料，利用BPH9基因内分子标记检测引物进行分子标记鉴定，分子标记检测引物序列如下：
BPH9-RF:ACCATTGTTAGGCAGTTGTTCA；
BPH9-RR:CAGCCTCCTGAAGAGATCTTTCA；
BPH9-SF:ATTCGACTCCCTTTCTTGTTATCT；
BPH9-SR:AATGTCGCACCCAGCAGC。
经分子标记检测，发现在实施例1鉴定出的59份抗性材料中，93.22％的材料具有360bp的特异扩增片段，结果表明，实施例1提供的鉴定方法的抗性鉴定结果准确度高。
试验例3鉴定方法的准确性分析(3)
利用实施例1的鉴定方法对水稻材料进行褐飞虱抗性鉴定。同时采用分子标记检测方法进行验证，具体如下：
将感虫的水稻亲本华占、粤农丝苗、五山丝苗等与同时带BPH6和BPH9基因的水稻抗虫亲本珞扬69号杂交，后代自交加代至F5，获得农艺性状较好材料5404份，利用实施例1提供的水稻苗期规模化抗褐飞虱鉴定与筛选方法对这些材料进行抗性鉴定，获得1057份抗性材料，利用BPH6和BPH9基因内分子标记检测引物进行分子标记鉴定，分子标记检测引物序列如下：
BPH6基因内分子标记引物：
BPH6-RF:ATAGTGAAGTTGAATCCGAAGG；
BPH6-RR:AGTGACTCAGCCTTGTGTTTCG；
BPH6-SF:AGGGCCTCTGGCGCTCTAC；
BPH6-SR:AATGTGAAAGTGCAATTAGAAGGT。
BPH9基因内分子标记引物：
BPH9-RF:ACCATTGTTAGGCAGTTGTTCA；
BPH9-RR:CAGCCTCCTGAAGAGATCTTTCA；
BPH9-SF:ATTCGACTCCCTTTCTTGTTATCT；
BPH9-SR:AATGTCGCACCCAGCAGC。
经BPH6和BPH9基因内分子标记检测引物同时检测，发现在实施例1鉴定出的1057份抗性材料中，96.78％的材料具有Bph6基因特有的283bp扩增片段和Bph9基因特有的360bp扩增片段之一，结果表明，实施例1提供的鉴定方法的抗性鉴定结果准确度高。
试验例4褐飞虱抗性鉴定试验(1)
2017-2019年间，在海南陵水和长沙关山对隆平高科种业科学院提供的27154份恢复系(父本)选种材料采用实施例1的鉴定方法进行苗期褐飞虱抗性鉴定，结果见表3。从表3可以看出，抗性级别达到免疫水平的为0个；高抗的材料为265个，占选种材料总数的0.98％；抗虫材料1527个，占选种材料总数的5.62％；中抗材料7708个，占选种材料总数的28.38％；中感材料7745个，占选种材料总数的28.52％；感虫材料9909个，占选种材料总数的36.49％；由此可见，利用实施例1的方法的鉴定效果明显，抗感分明；同时，随着水稻材料抗虫鉴定的逐年进行，抗性材料的比率在不断提高。
表3恢复系选种材料苗期鉴定褐飞虱抗性
试验例5褐飞虱抗性鉴定试验(2)
在2017-2018年间年对隆平高科种业科学研究院提供的347个组合材料和2491个株系材料采用实施例1的鉴定方法进行了苗期抗褐飞虱鉴定，结果见表4。从表4可以看出，组合和株系材料中，高抗材料占总材料的0.70％，抗虫材料占总材料的6.06％，中抗材料占总材料比例为55.88％，中感褐飞虱材料占总数的25.19％，感虫材料占总材料的12.16％。由此可见，利用实施例1的方法的抗感鉴定效果明显。
表4组合以及株系材料鉴定褐飞虱抗性
试验例6褐飞虱抗性鉴定试验(3)
在2018年对隆平高科种业科学研究院自菲律宾引进的86个亲本材料采用实施例1的方法进行了苗期抗褐飞虱鉴定，结果见表5。从表5可以看出，亲本中，高抗材料占总材料的1.2％，抗虫材料占总材料的3.49％，中抗材料占总材料比例为6.98％，中感褐飞虱占总数的30.23％，感虫材料占总材料的58.14％，由此可见，利用实施例1的方法的抗感鉴定效果明显。
表5亲本褐飞虱抗性鉴定
虽然，在上文中已经一般性说明、具体实施方式及试验，对本发明作了详尽的描述，但在本发明的基础上，可以对之做成一些修改和改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本发明的基础上所做的修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。
序列表
<110> 湖南隆平高科种业科学研究院有限公司 袁隆平农业高科技股份有限公司湖南亚华种业科学研究院
<120> 一种水稻苗期抗褐飞虱规模化鉴定与筛选方法
<130> KHP191114121.1
<160> 8
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 1
atagtgaagt tgaatccgaa gg 22
<210> 2
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 2
agtgactcag ccttgtgttt cg 22
<210> 3
<211> 19
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 3
agggcctctg gcgctctac 19
<210> 4
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 4
aatgtgaaag tgcaattaga aggt 24
<210> 5
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 5
accattgtta ggcagttgtt ca 22
<210> 6
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 6
cagcctcctg aagagatctt tca 23
<210> 7
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 7
attcgactcc ctttcttgtt atct 24
<210> 8
<211> 18
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 8
aatgtcgcac ccagcagc 18
Claims (3)
1.一种水稻苗期抗褐飞虱规模化鉴定方法，其特征在于，将播种田划分为多个区域，将供试水稻材料与感虫对照对应播种于毗邻的区域，将经纯化、脱毒和规模化繁殖得到的各虫龄褐飞虱混合均匀，人工接虫至供试水稻材料和感虫对照，以供试水稻材料相对应的感虫对照为参照，进行供试水稻材料的褐飞虱抗性评价；
所述对应播种为每1～2个区域的供试水稻材料对应1个区域的感虫对照；
用于所述脱毒和规模化繁殖的养虫水稻为高感四种褐飞虱生物型的不育系材料隆科638S；
所述纯化为用硬纸板在距离装有大量褐飞虱的塑料筐的筐底的3-5cm处来回晃动将褐飞虱收集于所述硬纸板上，人工挑除收集到的杂虫；所述塑料筐的长×宽×高为60cm×40cm×40cm，硬纸板长宽为25cm×15cm；
所述脱毒和规模化繁殖为在褐飞虱成虫中后期或褐飞虱羽化时将其收集纯化后转移至下一个种植有所述养虫水稻的温室或网室，在多个种植有所述养虫水稻的温室或网室之间每代轮换进行；
所述区域为块状格子；
播种时，将相近数量的种子均匀摊开播入各区域中；控制相对应的供试水稻材料与感虫对照的发芽种子量、种子萌发情况和播种面积相接近；待所述供试水稻材料长至三叶时，剔除弱苗，将所述供试水稻材料与其相对应的感虫对照的发芽苗的密度与数量调整至相接近；
所述供试水稻材料包含已知的不同抗性等级的材料；
所述人工接虫为按平均每株苗接褐飞虱5～10头，并使感虫对照在5～10天内受害致死的标准进行，并保证供试水稻材料与其相对应的感虫对照的接虫量基本一致；
利用标准苗期筛选法，当相对应的感虫对照达到9级时，随机抽样多苗进行供试水稻材料的褐飞虱抗性评价。
2.根据权利要求1所述的鉴定方法，其特征在于，所述播种田位于温室、网室或环境条件适于抗虫鉴定的大田中。
3.权利要求1或2所述的鉴定方法在水稻褐飞虱抗性评价或抗褐飞虱水稻筛选中的应用。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201910784015.4A CN110476750B (zh) | 2019-08-23 | 2019-08-23 | 一种水稻苗期抗褐飞虱规模化鉴定与筛选方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201910784015.4A CN110476750B (zh) | 2019-08-23 | 2019-08-23 | 一种水稻苗期抗褐飞虱规模化鉴定与筛选方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN110476750A CN110476750A (zh) | 2019-11-22 |
| CN110476750B true CN110476750B (zh) | 2021-09-21 |
Family
ID=68553253
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201910784015.4A Active CN110476750B (zh) | 2019-08-23 | 2019-08-23 | 一种水稻苗期抗褐飞虱规模化鉴定与筛选方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN110476750B (zh) |
Families Citing this family (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN111264320A (zh) * | 2020-03-06 | 2020-06-12 | 湖南杂交水稻研究中心 | 一种水稻成株期褐飞虱抗性精准鉴定的方法 |
| CN111492884B (zh) * | 2020-05-08 | 2021-08-31 | 南宁市林业科学研究所 | 一种香椿采穗圃营建的方法 |
| CN114965884B (zh) * | 2022-05-17 | 2023-07-18 | 南京农业大学 | 一种室内监测稻田褐飞虱种群大小的方法 |
Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1286927A (zh) * | 1999-09-07 | 2001-03-14 | 中国水稻研究所 | 褐飞虱的全纯人工饲料 |
| CN101138333A (zh) * | 2007-10-23 | 2008-03-12 | 浙江省农业科学院 | 一种捕食性天敌对稻飞虱控制能力的田间评价方法 |
| CN108812125A (zh) * | 2018-06-12 | 2018-11-16 | 广西大学 | 一种水稻苗期抗稻褐飞虱规模化精准鉴定方法 |
| CN109197444A (zh) * | 2018-09-17 | 2019-01-15 | 四川省农业科学院水稻高粱研究所 | 田间筛抗/耐水稻二、三化螟兼抗稻纵卷叶螟材料的方法 |
| CN208675973U (zh) * | 2018-07-24 | 2019-04-02 | 武汉禾泰青生物科技有限公司 | 一种用于水稻抗褐飞虱鉴定的播种板 |
-
2019
- 2019-08-23 CN CN201910784015.4A patent/CN110476750B/zh active Active
Patent Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1286927A (zh) * | 1999-09-07 | 2001-03-14 | 中国水稻研究所 | 褐飞虱的全纯人工饲料 |
| CN101138333A (zh) * | 2007-10-23 | 2008-03-12 | 浙江省农业科学院 | 一种捕食性天敌对稻飞虱控制能力的田间评价方法 |
| CN108812125A (zh) * | 2018-06-12 | 2018-11-16 | 广西大学 | 一种水稻苗期抗稻褐飞虱规模化精准鉴定方法 |
| CN208675973U (zh) * | 2018-07-24 | 2019-04-02 | 武汉禾泰青生物科技有限公司 | 一种用于水稻抗褐飞虱鉴定的播种板 |
| CN109197444A (zh) * | 2018-09-17 | 2019-01-15 | 四川省农业科学院水稻高粱研究所 | 田间筛抗/耐水稻二、三化螟兼抗稻纵卷叶螟材料的方法 |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| 分子标记辅助选择改良水稻恢复系R666的褐飞虱抗性;林千顺;《中国优秀硕士学位论文全文数据库农业科技辑》;20170215;第15-16页 * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN110476750A (zh) | 2019-11-22 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN110476750B (zh) | 一种水稻苗期抗褐飞虱规模化鉴定与筛选方法 | |
| CN104046693B (zh) | 水稻品种9194抗黑条矮缩病位点qRBSDV9及其分子标记方法 | |
| EP2471353A1 (en) | A method of growing tobacco plants | |
| Eagles | Competition for light and nutrients between natural populations of Dactylis glomerata | |
| CN104585137A (zh) | 田间利用茴香蚜虫繁殖瓢虫防治烟草害虫的方法 | |
| Karlsson et al. | Effect of cultivar, traditional corm pre-treatment and watering on sprouting and early growth of enset (Ensete ventricosum) suckers | |
| CN103503836A (zh) | 菜蛾盘绒茧蜂人工繁殖生产方法 | |
| CN107190049B (zh) | 一种田间自然接种诱发水稻稻瘟病苗瘟以鉴定或筛选抗病水稻材料的方法 | |
| CN108739147B (zh) | 一种创制抗根肿病大白菜种质的方法 | |
| CN112877398A (zh) | 一种利用灰飞虱传毒接种鉴定玉米粗缩病抗性的方法 | |
| CN104046692A (zh) | 水稻品种9194抗黑条矮缩病位点qRBSDV11及其分子标记方法 | |
| CN103460933A (zh) | 热淋清颗粒药材头花蓼种植繁育用种子处理方法 | |
| CN107926868B (zh) | 一种基于雪莲果为寄主植物大量繁育丽蚜小蜂的方法 | |
| CN113693032B (zh) | 一种基于人工接种评价水稻品种抗水稻齿叶矮缩病的方法 | |
| CN108184580A (zh) | 一种水稻品种比较试验机插种植方法 | |
| CN113249429A (zh) | 一种适用于育种应用的规模化稻瘟病抗性鉴定方法 | |
| CN110150085A (zh) | 一种盐碱地日光温室芸豆栽培的基质和栽培方法 | |
| CN110432098A (zh) | 一种选育水稻抗稻瘟病育种中间材料的方法 | |
| CN114271158B (zh) | 一种大田成株期水稻褐飞虱抗性鉴定方法 | |
| RU2742263C9 (ru) | Способ отбора бобовых трав с высокой азотфиксирующей способностью | |
| CN117502385A (zh) | 一种基于虫体长度的水稻抗稻瘿蚊鉴定方法及其应用 | |
| Sakanoue | Seed development of red clover in mixed-sown meadows: model predictions | |
| RU2411714C1 (ru) | Способ получения высокопродуктивной интродукционной популяции serratula coronata | |
| CN106386116B (zh) | 一种用于大豆遗传完整性分析的繁殖更新方法 | |
| Suliansyah et al. | The result of several genotypes of Sigah red rice at two location in West Sumatera |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant |