CN110455932B - 一种测定贝莎罗汀软胶囊加酶溶出的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种测定贝莎罗汀软胶囊加酶溶出的方法，该方法主要包括溶出介质的配制、供试品溶液的制备、对照品溶液的制备以及测定。该方法更加真实的反映了贝莎罗汀软胶囊体内溶出释放行为，克服了因囊材中明胶的交联导致体外释放度降低的问题，客观反映了贝莎罗汀软胶囊的实际溶出行为和制剂质量。
Description
技术领域
本发明涉及医药领域，具体是涉及一种测定贝莎罗汀软胶囊加酶溶出的方法。
背景技术
贝莎罗汀是一种新型维甲酸类似物，是新一代作用于RXR受体的药物，主要用于治疗皮肤T-细胞淋巴瘤、非小细胞肺癌、乳腺癌及牛皮癣。但其属于生物药剂学分类系统(BCS)II类化合物，溶解性差，生物利用度低。鉴于软胶囊具有稳定性高、抗氧化、服用方便、生物利用度高等特点，将贝莎罗汀与软件囊结合开发出能够提高药物稳定性、减小患者服用量的贝莎罗汀软胶囊。
然而软件囊受温度，湿度，氧化，热敏，UV光照等环境影响，容易导致囊壳中明胶与内容物发生化学相互作用，此时胶囊内外表面形成薄膜，在溶出实验中观察到薄膜成胶状物质，很难释放或者不破裂，即出现软胶囊交联结合现象，使得制剂溶胀不破，限制了药物的释放，影响胶囊制剂体外溶出度的测定。软胶囊交联是很常见现象，早期测试采用转移已经胶囊的内容物至新的胶囊壳中，再进行溶出测定。在1990年，FDA通过研究肯定了在加入酶的溶出介质中，能够产生稳定的溶出效率。体外溶出特性等变化情况，可客观地反映体内溶出行为，软胶囊交联结合现象使得传统的溶出度测定方法有待优化，开发贝莎罗汀软胶囊加酶溶出方法，更客观地反映体内溶出行为，具有重要意义。
发明内容
为了解决上述技术问题，本发明提供了一种测定贝莎罗汀软胶囊加酶溶出的方法。
本发明提供的测定贝莎罗汀软胶囊加酶溶出的方法，包括如下步骤：
(1)配制磷酸缓冲溶液：配制0.05M磷酸二氢钾溶液2100ml与0.2M氢氧化钠溶液450ml，加水至6升，用磷酸或氢氧化钠调节PH至7.5±0.05；
用上述磷酸缓冲液配制溶出介质A：往4升磷酸缓冲液加入80.0mg胰酶，搅拌均匀即得；
用上述磷酸缓冲液配制溶出介质B：往2升磷酸缓冲液中加入30gHDTMA，在37℃下搅拌1h即得；
(2)运行溶出仪:设定条件为浆法，溶出转速75rpm/min/min，温度37℃，溶出时间45分钟；
(3)供试品溶液的制备：往溶出杯中加入600ml溶出介质A，仪器运行至37℃加入贝莎罗汀软胶囊，然后加入预热至37℃的300ml溶出介质B；
(4)对照品溶液的制备：称取80mg贝莎罗汀化合物标准品至100ml容量瓶中，先用30ml的甲醇溶解，再用溶出介质定容；
(5)测定：采用HPLC法测定供试品溶液中贝莎罗汀的含量。
优选的，步骤(5)所述HPLC法的色谱条件为：
HPLC色谱柱规格型号：Phenomenex Kinetex，2.6um，C18，100A，100mm×4.6mm；
等度洗脱，流动相：PH为3.0±0.05的0.1M醋酸铵缓冲液：乙腈＝20：80；
流速：1.0mL/min；
柱温：35℃；
波长：270nm；
进样体积：10μL；
运行时间：10min。
优选的，步骤(3)所述溶出介质B的加入时间为溶出介质A加入后15min。
优选的，步骤(4)所述溶出介质为溶出介质A和溶出介质B的混合溶液，其中，溶出介质A与溶出介质B的体积比为2：1。
本发明能够达到以下技术效果：
1、本发明对溶出介质的选择、用量、加入时间进行了较为系统的研究，为测定贝莎罗汀软胶囊溶出度提供了良好的试验参数。
2、提供了一种测定贝莎罗汀软胶囊加酶溶出的方法，该方法更加真实的反映了贝莎罗汀软胶囊体内溶出释放行为，克服了因囊材中明胶的交联导致体外释放度降低的问题，客观反映了贝莎罗汀软胶囊的实际溶出行为和制剂质量。
附图说明
图1是溶出介质的HPLC色谱图，其中溶出介质是指溶出介质A和溶出介质B的混合溶液，且溶出介质A与溶出介质B的体积比为2：1；
图2是本发明空白溶液的HPLC色谱图；
图3是本发明对照品溶液的HPLC色谱图；
图4是本发明供试品溶液的HPLC色谱图。
具体实施方式
为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合附图及实施例，对本发明进行进一步详细说明。本发明的附加方面和优点将在下面的描述中部分给出，部分将从下面的描述中变得明显，或通过本发明的实践了解到。应当理解，以下描述仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。而且，本发明各个实施方式中所涉及到的技术特征只要彼此之间未构成冲突就可以相互组合。
实施例1：测定贝莎罗汀软胶囊加酶溶出的方法
(1)配制磷酸缓冲溶液：配制0.05M磷酸二氢钾溶液2100ml与0.2M氢氧化钠溶液450ml，加水至6升，用磷酸或氢氧化钠调节PH至7.5±0.05；
用上述磷酸缓冲液配制溶出介质A：往4升磷酸缓冲液加入80.0mg胰酶，搅拌均匀即得；
用上述磷酸缓冲液配制溶出介质B：往2升磷酸缓冲液中加入30gHDTMA，在37℃下搅拌1h即得；
(2)运行溶出仪:设定条件为浆法，溶出转速75rpm/min，温度37℃，溶出时间45分钟；
(3)供试品溶液的制备：往溶出杯中加入600ml溶出介质A，仪器运行至37℃加入贝莎罗汀软胶囊，溶出介质A加入后15min加入预热至37℃的300ml溶出介质B；
(4)对照品溶液的制备：称取80mg贝莎罗汀化合物标准品至100ml容量瓶中，先用30ml的甲醇溶解，再用溶出介质定容，所述溶出介质为溶出介质A和溶出介质B的混合溶液，其中，溶出介质A与溶出介质B的体积比为2：1；
(5)测定：采用下述HPLC色谱条件法测定供试品溶液中贝莎罗汀的含量：
HPLC色谱柱规格型号：Phenomenex Kinetex，2.6um，C18，100A，100mm×4.6mm；
等度洗脱，流动相：PH为3.0±0.05的0.1M醋酸铵缓冲液：乙腈＝20：80；
流速：1.0mL/min；
柱温：35℃；
波长：270nm；
进样体积：10μL；
运行时间：10min。
实施例2：溶出方法学研究
1.溶出转速与溶出介质分步加：考察了溶出介质A中胰酶加入量20mg/L，溶出时间45min，溶出体积900ml，转速分别为50rpm/min、75rpm/min、100rpm/min时，溶出介质A与溶出介质B混合加入与分步加入的溶出度，结果如表1所示，其中900ml(A+B)指的是一步加入溶出介质，溶出介质中包括本发明所述的磷酸缓冲溶液、胰酶和HDTMA，配制方法为：往6L的磷酸盐缓冲液中加入80mg胰酶和30g HDTMA，在37℃下搅拌1h。
表1溶出转速与溶出介质分步加的结果
结果表明，直接加入900ml溶出介质，软胶囊不溶解。分步加入，且溶出介质A多于溶出介质B时，软胶囊溶出效果好。在不同的转速下，溶出度不同，75rpm/min时，软胶囊就很好的溶出，而在75rpm/min时，分别加入600ml溶出介质A和300ml溶出介质B溶出效果最好。
2.溶出介质A中胰酶加入量的考察：根据USP溶出<711>规定，溶出介质酶活性不能超过2000Unit/L(相当于胰酶20mg/L)。在转速75rpm/min，先加入600ml溶出介质A，15min后再加入300ml溶出介质B的条件下，考察加酶量不同时的溶出效果，结果如表2所示。
表2胰酶加入量的考察结果
由上表可知，胰酶加入量越多越好，因此，根据USP要求，确定溶出介质A中胰酶加入量为20mg/L。
3.溶出介质B加入时间:根据USP溶出<711>规定，溶出介质分步加入时，第一步溶解时间不大于15min。在转速75rpm/min，胰酶量20mg/L条件下，考察加入600ml溶出介质A后5min、10min、15min时加入溶出介质B的溶出效果。
表3溶出介质B加入时间的考察
由上表可知，贝莎罗汀软胶囊在溶出介质A中溶解的时间越长，最后溶出的效果越好，因此在加入溶出介质15min后再加入溶出介质B。
实施例3：HPLC方法学验证
1.线性
1.1对照品储备液的制备
称取80mg贝莎罗汀化合物标准品至100ml容量瓶中(浓度为800ug/mL)，先用30ml的甲醇溶解，再用溶出介质(溶出介质A与溶出介质B的体积比为2：1)定容。
1.2按表4精密移取对照品储备液
表4对照品储备液的移取
| 样品 | 对照品储备液的体积 | 定容体积 | 浓度(ug/mL) |
| 1 | 2mL | 100mL | 16 |
| 2 | 4mL | 100mL | 32 |
| 3 | 4mL | 50mL | 64 |
| 4 | 5mL | 50mL | 80 |
| 5 | 15mL | 100mL | 120 |
1.3采用HPLC测的线性为y＝26835.929x+6749.964，R2＝1.000。
2.精密度
根据本发明的溶出方法，随机选取6粒贝莎罗汀软胶囊，同时测定在45min时的溶出度，结果如表5所示，精密度良好。
表5精密度测试结果
| 样品 | 峰面积 | 溶出度(％) |
| 1 | 2215564 | 100.1 |
| 2 | 2111839 | 95.4 |
| 3 | 2175637 | 98.2 |
| 4 | 2235749 | 101.0 |
| 5 | 2294391 | 103.6 |
| 6 | 2180115 | 98.5 |
| 平均值 | 99.5 | |
| ％RSD | 2.8 |
3.重复性
另一个分析人员在不同的时间，使用不同的仪器，色谱柱，按照精密度方法测定6个样品，测试结果如表6所示。
表6重复性测试结果
| 样品 | 溶出度％ |
| 1 | 94.5 |
| 2 | 99.2 |
| 3 | 99.9 |
| 4 | 97.3 |
| 5 | 94.8 |
| 6 | 99.4 |
| 平均值 | 97.5 |
| ％RSD | 2.5 |
| 差值 | 2.0 |
4.稳定性
将表5精密度项下的样品5分别放置24h、48h、72h再测定含量，结果如表7所示。
表7稳定性测试结果
| 时间 | 24 | 48 | 72 |
| 峰面积 | 2284054 | 2286038 | 2298712 |
| 含量％ | 101.6 | 102.7％ | 103.8％ |
5.回收
5.1空白储备溶液：根据贝莎罗汀软胶囊处方比例制备不含贝莎罗汀的空白样品，取5例空白样品至90ml溶解得到空白储备溶液；
5.2空白溶液：转移空白储备溶液5ml至250ml，作为空白溶液；
5.3称取不同重量的贝莎罗汀化合物标准品在相同的空白溶液中溶解，根据表8配制目标浓度50％，100％，150％的样品。
表8回收储备液的配制
| 水平 | 贝莎罗汀/mg | 空白储备溶液/ml | 定容体积/mL | 浓度(ug/mL) |
| 50％ | 10 | 5 | 250 | 40. |
| 100％ | 20 | 5 | 250 | 80 |
| 150％ | 30 | 5 | 250 | 120 |
5.4根据下表配制回收样品，一式三份，用稀释剂定容，回收率检测结果如表9所示。
表9回收率检测结果
本领域的技术人员容易理解，以上所述仅为本发明的实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
Claims (4)
1.一种测定贝莎罗汀软胶囊加酶溶出的方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：
（1）配制磷酸缓冲溶液：配制0.05M磷酸二氢钾溶液2100ml与0.2M氢氧化钠溶液450ml，加水至6升，用磷酸或氢氧化钠调节PH至7.5±0.05；
用上述磷酸缓冲液配制溶出介质A：往4升磷酸缓冲液加入80.0mg胰酶，搅拌均匀即得；
用上述磷酸缓冲液配制溶出介质B：往2升磷酸缓冲液中加入30g HDTMA，在37℃下搅拌1h即得；
（2）运行溶出仪:设定条件为浆法，溶出转速75rpm/min，温度37℃，溶出时间45分钟；
（3）供试品溶液的制备：往溶出杯中加入600ml溶出介质A，仪器运行至37℃加入贝莎罗汀软胶囊，然后加入预热至37℃的300ml溶出介质B；
（4）对照品溶液的制备：称取80mg贝莎罗汀化合物标准品至100ml容量瓶中，先用30ml的甲醇溶解，再用溶出介质定容；所述溶出介质为溶出介质 A 和溶出介质 B 的混合溶液；
（5）测定：采用HPLC法测定供试品溶液中贝莎罗汀的含量。
2.根据权利要求1所述的测定贝莎罗汀软胶囊加酶溶出的方法，其特征在于，所述步骤（5）中HPLC法的色谱条件为：
HPLC色谱柱规格型号：Phenomenex Kinetex，2.6um，C18，100A，100mm×4.6mm；
等度洗脱，流动相：PH为3.0±0.05的0.1M醋酸铵缓冲液：乙腈=20：80；
流速：1.0 mL/min；
柱温：35℃；
波长：270 nm；
进样体积：10μL；
运行时间：10 min。
3.根据权利要求1所述的测定贝莎罗汀软胶囊加酶溶出的方法，其特征在于，所述步骤（3）中溶出介质B的加入时间为溶出介质A加入后15min 。
4.根据权利要求1所述的测定贝莎罗汀软胶囊加酶溶出的方法，其特征在于，所述步骤（4）中溶出介质A与溶出介质B的体积比为2：1 。
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