CN110455604A - 表皮真菌取样染色方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提供一种表皮真菌取样染色方法。该表皮真菌取样染色方法包括：提供具有检测区域的透明检测卡，检测区域附着有一层透明粘性材料层，且透明粘性材料层表面覆盖有一层保护膜；采用经过消毒处理的取样梳顺着待测试者的头发方向梳若干次，使得皮屑粘在取样梳上；揭去透明检测卡上的保护膜，将取样梳粘有皮屑的齿尖反复粘靠在透明粘性材料层表面，使得足够量的皮屑粘在透明粘性材料层上；将等量的A染液、B染液依次滴加于透明粘性材料层表面，静置后去离子水冲洗；将透明检测卡转移至显微镜下进行镜检。本方法具有取样方便、样品易于转移不易被污染、样品易于固定，染色时间短等特点，提高了取样染色的成功率和效率。
Description
技术领域
本发明属于真菌检测处理技术领域，具体涉及一种表皮真菌取样染色方法。
背景技术
表皮的真菌检测对于皮肤、毛发的疾病诊断和预防有着重要的指导作用。其中，直接取样染色镜检是最为快速的判断方法之一，还可以为进一步的培养鉴定提供关键的指导信息。
传统的表皮取样方法是用手术刀或者载玻片末端刮取测试部位的皮屑，收集于适当的包装内，然后转移至实验室，并在载玻片上染色镜检。这种取样和染色方法存在以下缺陷：(1)头部皮肤的取样在有头发的部位不适合用刀片或者载玻片；(2)刮取的样品需要用包装转移，多次转移容易损失样品和混入污染物；(3)皮屑样品转移至载玻片后难以固定，在染色过程中被染液和洗液冲走导致样品丢失，是的染色操作难度大；(4)样品重的皮屑和真菌会被同时染色，即使使用特定的染液，也难以在颜色上显著区分皮屑和真菌，导致附着或者隐藏于皮屑之中的真菌难以识别。此外，整个取样染色非常依赖操作人员的经验、水平。
发明内容
针对目前表皮真菌取样染色存在取样难度大、样品容易被污染、染色操作难且样品易丢失、不易区分皮屑和真菌等问题，本发明提供一种表皮真菌取样染色方法。
为实现上述发明目的，本发明的技术方案如下：
一种表皮真菌取样染色方法，包括以下步骤：
步骤S01.提供透明检测卡，所述透明检测卡上具有检测区域，所述检测区域附着有一层透明粘性材料层，且所述透明粘性材料层表面覆盖有一层保护膜；
步骤S02.采用经过消毒处理的取样梳顺着待测试者的头发方向梳若干次，使得皮屑粘在所述取样梳上；
步骤S03.揭去所述透明检测卡上的保护膜，将所述取样梳粘有皮屑的齿尖反复粘靠在所述透明粘性材料层表面，使得足够量的皮屑粘在所述透明粘性材料层上；
步骤S04.将A染液滴加于所述透明粘性材料层表面，随后将与所述A染液等量的B染液滴加在所述透明粘性材料层表面，静置后采用去离子水冲洗；
步骤S05.将所述透明检测卡转移至显微镜下进行镜检，获取皮屑和真菌信息。
本发明的技术效果为：
相对于现有技术，本发明提供的表皮真菌取样染色方法，由于直接将取样梳获得的样品转移至透明检测卡上，取样方便、样品易于转移不易被污染并且样品易于被固定并且染色和清洗不易洗脱，同时染色时间短，提高了取样染色的成功率和效率。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例中的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
图1为本发明透明检测卡俯视示意图；
图2为图1沿A-A线的剖视示意图；
图3为采用常规取样染色方法对表皮真菌进行取样染色的效果；
图4为本发明实施例1对表皮真菌进行取样染色的染色效果；
图5为本发明实施例2对表皮真菌进行取样染色的染色效果；
图6为本发明实施例3对表皮真菌进行取样染色的染色效果；
其中，100-透明检测卡，1-透明区域，2-标签区域；11-检测区域；111-透明粘性材料层，112-保护膜。
具体实施方式
为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合附图及实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。
本发明提供一种表皮真菌取样染色方法。
详见图1、2，该表皮真菌取样染色方法需要涉及一种透明检测卡100，该透明检测卡100包括透明区域1和标签区域2，其中透明区域1上固定有检测区域11，该检测区域11上粘贴有透明粘性材料层111，并且在透明粘性材料层111正上方贴附有一层保护膜112，避免透明粘性材料层111在使用前被污染，在使用时，将保护膜112揭除；标签区域2可以用于粘贴待测试者的信息，并且操作人员可以手持标签区域2以便于操作。上述透明检测卡100分成透明区域1和标签区域2，并不是代表只有透明区域1是透明的，其主要是用于区分两个不同的区域，整个透明检测卡100都是透明的材质做成，当然标签区域2可以是非透明材质。
上述表皮真菌取样染色方法包括以下步骤：
步骤S01.提供如图1、2所述的透明检测卡100；
步骤S02.采用经过消毒处理的取样梳顺着待测试者的头发方向梳若干次，使得皮屑粘在所述取样梳上；
步骤S03.揭去所述透明检测卡100上的保护膜112，将所述取样梳粘有皮屑的齿尖反复粘靠在所述透明粘性材料层表面，使得足够量的皮屑粘在所述透明粘性材料层上；
步骤S04.将A染液滴加于所述透明粘性材料层表面，随后将与所述A染液等量的B染液滴加在所述透明粘性材料层表面，静置后采用去离子水冲洗；
步骤S05.将所述透明检测卡转移至显微镜下进行镜检，获取皮屑和真菌信息。
下面对上述表皮真菌取样染色方法做进一步的解释说明。
步骤S01中，粘性材料层111使用的黏性材料优选为丙烯酸，丙烯酸为透明材质，不会被染液染色，有弹性、粘性好，便于粘附表皮样品，并且表面光滑平整性好，方便在显微镜下清晰的观察样品的形态。进一步优选地，透明检测区域11的面积为(70～350)mm2，该透明检测区域11可以是方形区域、圆形区域等。更为优选地为圆形区域，该面积和圆形区域有利于粘取表皮样品，有利于染液的均匀分布和扩散，还能减少染液的使用量。
优选地，所述透明粘性材料层111的厚度为(0.5～1.5)mm，厚度不宜过后，超过1.5mm后对于表皮样品的粘附没有任何提高的作用，反而会浪费丙烯酸，太薄，如厚度小于0.5mm，取样梳容易直接破坏透明粘性材料层111。
步骤S02中，取样梳为塑料梳，即常见的塑料梳篦，最好取样梳有专门的手持部位和非手持部位，以免在取样过程中手等外界因素对取样造成干扰甚至污染取到的表皮样品。在取样过程中，取样梳顺着待测试者的头发方向在不同位置上3～5次，即可，梳发时，尽量保持始终只使用梳子的一侧，梳发过程中取样梳的齿尖要触及头皮，但避免用力过度导致头皮破损，如果梳子粘有头发，应当使用镊子取下梳子表面的头发，并且镊子取头发时应当避免触碰齿尖以免样品损失。
取样结束，如果不直接进行现场检测，可以将取样梳保存在干净的密封袋中，在阴凉干燥的环境下保存，保存时间尽量少于一周，在一周之内检测。
步骤S03中，将取到的表皮样品转移至透明检测卡100上时，先揭除检测区域表面的保护膜112，揭除保护膜112时，应当避免触碰粘性材料层111，以免造成污染。将取样梳粘有皮屑的齿尖轻轻触碰粘性材料层111表面，取样梳来回触碰若干次，即可使得皮屑样品转移至粘性材料层111表面。如果皮屑样品量不够，还可以将取样梳其他部位平贴于粘性材料层111表面，或者进行二次取样。
步骤S04中，所述A染液为伊红和氢氧化钾的混合溶液，其所述混合溶液中伊红的质量浓度为0.8％～1.2％，氢氧化钾的质量浓度为8.5％～12.5％。具体地，A染液中，伊红的质量浓度可以是1.0％，氢氧化钾的质量浓度可以是10％。
所述B染液为龙胆紫、乳酸及甘油的三混溶液，且所述三混溶液中龙胆紫的质量浓度为0.8％～1.5％、乳酸的质量浓度为18％～25％、甘油的质量浓度为15％～25％。具体地，B染液中龙胆紫的质量浓度可以是1.0％、乳酸的质量浓度可以是20％、甘油的质量浓度可以是20％。
具体是将A染液滴加至粘性材料层111表面，随后将与A染液等量的B染液滴加至粘性材料层111表面，静置10s～15s即可完成染色，并且可以采用去离子水清洗。
优选地，所述A染液的滴加量为(80～120)μL；所述B染液的滴加量为(80～120)μL。滴加量太少，不能够完全染色，滴加量过多，造成浪费。
步骤S05中，显微镜镜检，具体操作方法请参照显微镜使用手册。
如将染色后的透明检测卡100，检测区域11朝上卡在显微镜载物台上，将检测区域11移动至镜头正下方，先用10倍物镜观察，定位至有皮屑黏附的区域，然后转至40倍，微调焦距直至呈现一个清晰的画面，注意：调节载物台上下时，尤其使用40倍物镜时注意要避免检测区域接触到物镜。
为更有效的说明本发明的技术方案，下面通过多个具体实施例说明。
实施例1
一种表皮真菌取样染色方法，包括以下步骤：
(1).提供玻璃材质的透明检测卡，所述透明检测卡上具有检测区域，所述检测区域附着有一层丙烯酸层，丙烯酸层呈圆形，厚度为1mm，面积为153.86mm2，所述丙烯酸层表面覆盖有一层保护膜；
(2).采用经过消毒处理的取样梳顺着待测试者的头发方向梳3次，每次梳头发的不同部位，使得皮屑粘在所述取样梳上；
(3).揭去玻璃材质透明检测卡上的保护膜，将所述取样梳粘有皮屑的齿尖粘靠于所述丙烯酸层表面，并将所述取样梳其他粘有皮屑的其他部位粘靠在所述丙烯酸层表面，使得足够量的皮屑粘在所述丙烯酸层上；
(4).将由质量浓度为1.0％的伊红和质量浓度为10％的氢氧化钾形成的A染液滴加于所述丙烯酸层表面，滴加100μL，随后将与所述A染液等量的B染液(B染液中，龙胆紫的质量浓度为1.0％、乳酸的质量浓度为20％、甘油的质量浓度为20％)滴加在所述丙烯酸层表面，静置15s后采用去离子水冲洗；
(5).将所述玻璃材质透明检测卡转移至显微镜下进行镜检，获取皮屑和真菌信息；
检测结果如图4所示，在10倍物镜下能看到皮屑，大部分为透明，少部分被染成蓝紫色。在有马拉色菌的样品中，能看到皮屑周围有细小颗粒，放大至40倍，可看到被染色成蓝紫色的颗粒呈米粒状，部分颗粒一端会有小突起，则为典型的马拉色菌，A部分表示游离的马拉色菌，B部分表示无菌的皮屑，C部分表示皮屑上附着大量真菌。
而采用如背景技术里提到的常规取样染色方法对表皮真菌进行取样染色，染色结果如图3所示。从图3可知，皮屑同样被染色，并且率先被染色，导致真菌难以被识别。
实施例2
一种表皮真菌取样染色方法，包括以下步骤：
(1).提供玻璃材质的透明检测卡，所述透明检测卡上具有检测区域，所述检测区域附着有一层丙烯酸层，丙烯酸层呈圆形，厚度为0.5mm，面积为346.18mm2，所述丙烯酸层表面覆盖有一层保护膜；
(2).采用经过消毒处理的取样梳顺着待测试者的头发方向梳3次，每次梳头发的不同部位，使得皮屑粘在所述取样梳上；
(3).揭去玻璃材质透明检测卡上的保护膜，将所述取样梳粘有皮屑的齿尖粘靠在所述丙烯酸层表面，并将所述取样梳其他粘有皮屑的其他部位粘靠在所述丙烯酸层表面，使得足够量的皮屑粘在所述丙烯酸层上；
(4).将由质量浓度为1.2％的伊红和质量浓度为10％的氢氧化钾形成的A染液滴加于所述丙烯酸层表面，滴加100μL，随后将与所述A染液等量的B染液(B染液中，龙胆紫的质量浓度为0.8％、乳酸的质量浓度为18％、甘油的质量浓度为15％)滴加在所述丙烯酸层表面，静置15s后采用去离子水冲洗；
(5).将所述玻璃材质透明检测卡转移至显微镜下进行镜检，获取皮屑和真菌信息。
检测结果如图5所示。从图5可知，40倍物镜下能清晰看到皮屑呈现透明或浅蓝色，周围存在大量被染成蓝色的球形真菌，并能看到出芽生殖迹象，经形态学初步判定为马拉色菌。
实施例3
一种表皮真菌取样染色方法，该实施例通过邮寄样品梳方式检测。
(1).样品的获取：受测人因为不在本地，不方便当场检测，通过寄了一把清洁消毒的样品梳，受测人本人用样品梳按本发明的操作说明梳过头皮后将样品梳放入无菌密封袋，常温保存，于一周内通过邮寄方式寄至检测实验室进行检测。
(2).提供玻璃材质的透明检测卡，所述透明检测卡上具有检测区域，所述检测区域附着有一层丙烯酸层，丙烯酸层呈圆形，厚度为1.5mm，面积为78.5mm2，所述丙烯酸层表面覆盖有一层保护膜；
(3).揭去玻璃材质透明检测卡上的保护膜，将所述取样梳粘有皮屑的齿尖粘靠在所述丙烯酸层表面，并将所述取样梳其他粘有皮屑的其他部位粘靠在所述丙烯酸层表面，使得足够量的皮屑粘在所述丙烯酸层上；
(4).将由质量浓度为0.8％的伊红和质量浓度为12.5％的氢氧化钾形成的A染液滴加于所述丙烯酸层表面，滴加100μL，随后将与所述A染液等量的B染液(B染液中，龙胆紫的质量浓度为0.8％、乳酸的质量浓度为25％、甘油的质量浓度为25％)滴加在所述丙烯酸层表面，静置15s后采用去离子水冲洗；
(5).将所述玻璃材质透明检测卡转移至显微镜下进行镜检，获取皮屑和真菌信息。
检测结果如图6所示。从图6可知在40倍下可以看到透明或浅蓝色皮屑周围有大量被染成蓝色的球形和米粒型真菌，经形态学初步判定为马拉色菌属的两种真菌。同时证明取样后取样梳常温保存一周，未发现对检测结果造成影响。
以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包括在本发明的保护范围之内。
Claims (9)
1.一种表皮真菌取样染色方法，其特征在于，包括以下步骤：
步骤S01.提供透明检测卡，所述透明检测卡上具有检测区域，所述检测区域附着有一层透明粘性材料层，且所述透明粘性材料层表面覆盖有一层保护膜；
步骤S02.采用经过消毒处理的取样梳顺着待测试者的头发方向梳若干次，使得皮屑粘在所述取样梳上；
步骤S03.揭去所述透明检测卡上的保护膜，将所述取样梳粘有皮屑的齿尖反复粘靠在所述透明粘性材料层表面，使得足够量的皮屑粘在所述透明粘性材料层上；
步骤S04.将A染液滴加于所述粘性材料层表面，随后将与所述A染液等量的B染液滴加在所述透明粘性材料层表面，静置后采用去离子水冲洗；
步骤S05.将所述透明检测卡转移至显微镜下进行镜检，获取皮屑和真菌信息。
2.如权利要求1所述的表皮真菌取样染色方法，其特征在于，所述A染液为伊红和氢氧化钾的混合溶液，其所述混合溶液中伊红的质量浓度为0.8％～1.2％，氢氧化钾的质量浓度为8.5％～12.5％；
所述B染液为龙胆紫、乳酸及甘油的三混溶液，且所述三混溶液中龙胆紫的质量浓度为0.8％～1.5％、乳酸的质量浓度为18％～25％、甘油的质量浓度为15％～25％。
3.如权利要求1所述的表皮真菌取样染色方法，其特征在于，所述A染液的滴加量为(80～120)μL；所述B染液的滴加量为(80～120)μL。
4.如权利要求1所述的表皮真菌取样染色方法，其特征在于，所述检测区域的面积为(70～350)mm2。
5.如权利要求1所述的表皮真菌取样染色方法，其特征在于，所述透明粘性材料层的厚度为(0.5～1.5)mm。
6.如权利要求1所述的表皮真菌取样染色方法，其特征在于，所述透明粘性材料层的粘性材料为丙烯酸。
7.如权利要求1所述的表皮真菌取样染色方法，其特征在于，所述取样梳为清洁消毒过的塑料梳。
8.如权利要求1所述的表皮真菌取样染色方法，其特征在于，所述静置时间为(10～15)s。
9.如权利要求1所述的表皮真菌取样染色方法，其特征在于，所述透明检测卡还包括标签区，所述标签区用于标记待测试者的信息。
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