CN110447661B - 金龟子绿僵菌在制备防治马铃薯晚疫病的药剂中的应用 - Google Patents

Abstract

本发明属于含有微生物真菌的杀生剂技术领域，具体涉及一种金龟子绿僵菌在制备防治马铃薯晚疫病的药剂中的应用。所述金龟子绿僵菌为金龟子绿僵菌CQMa421菌株，该菌株对马铃薯晚疫病的致病菌具有显著的抑制作用。

Description

金龟子绿僵菌在制备防治马铃薯晚疫病的药剂中的应用

技术领域

本发明属于含有微生物真菌的杀生剂技术领域，具体涉及一种金龟子绿僵菌在制备防治马铃薯晚疫病的药剂中的应用。

背景技术

马铃薯是世界第四大粮食作物，仅次于水稻、小麦和玉米(“我国马铃薯晚疫病的研究现状和建议”，金光辉等，黑龙江农业科学，2002年第6期，第28页左栏第1段第1-2行，公开日2002年12月31日)。然而，由鞭毛菌亚门真菌致病疫霉引起的马铃薯晚疫病已成为马铃薯生产中最严重的真菌性病害(“马铃薯晚疫病的发病特点与综合防治措施”，吕键等，安徽农学通报，2012年第18卷第16期，第99页左栏第1段第1行至第2段第2行，公开日2012年12月31日；“我国马铃薯晚疫病的研究现状和建议”，金光辉等，黑龙江农业科学，2002年第6期，第28页左栏第1段第2-4行，公开日2002年12月31日)。

马铃薯晚疫病的致病菌在病薯内越冬、越夏，成为田间初侵染源。带菌种薯及遗留在土壤中的病薯萌芽时，病菌即开始活动，逐步向植株地上茎叶部分发展，成为中心病株。其上产孢子囊，经气流传播进行再侵染，也可随雨水进入土壤，通过伤口，皮孔和芽眼侵入块茎，以菌丝体在块茎内越冬(“马铃薯晚疫病的发病特点与综合防治措施”，吕键等，安徽农学通报，2012年第18卷第16期，第99页左栏第4段第1-5行，公开日2012年12月31日)。如此循环往复，加重了马铃薯晚疫病病害的发生和流行。

感染了晚疫病的马铃薯多从下部叶片开始，叶尖或叶缘产生圆形或不定形病斑，水渍状，绿褐色小斑点，叶缘有灰黑色晕环，边缘分界不明晰，湿度大时外缘出现一圈白霉；天气干燥时病部变褐干枯，如薄纸状，质脆易裂，叶柄染病多形成不规则褐色条斑，严重发病的植株叶片萎垂、卷曲，终致全株黑腐；块茎染病表面呈黑褐色大斑块，皮下薯肉亦呈褐色，逐渐扩大腐烂(“马铃薯晚疫病的发病特点与综合防治措施”，吕键等，安徽农学通报，2012年第18卷第16期，第99页左栏第3段第1-7行，公开日2012年12月31日)。

马铃薯晚疫病的流行性强，毁灭性大，严重影响了马铃薯产量(“马铃薯晚疫病发生为害及防治技术”，李拴曹等，安徽农学通报，2015年第21卷第21期，第77页左栏第1段第1-6行，公开日2015年12月31日)。

因此，开发防治马铃薯晚疫病的药剂迫在眉睫。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于提供一种金龟子绿僵菌CQMa421菌株在制备防治马铃薯晚疫病的药剂中的应用。

为实现上述目的，本发明的技术方案为：

金龟子绿僵菌CQMa421菌株在制备防治马铃薯晚疫病的药剂中的应用。

所述防治是指物质具有的能够减轻或防止病原微生物危害作物的能力。

所述马铃薯晚疫病是指由鞭毛菌亚门真菌致病疫霉引发的病害。

发明人在研究过程中意外发现，金龟子绿僵菌CQMa421菌株对马铃薯晚疫病的致病菌具有显著的抑制作用，对于马铃薯晚疫病的防治效果显著。

进一步，所述药剂包括金龟子绿僵菌CQMa421干孢子粉、纳米氧化铝、羧甲基纤维素钠、十二烷基硫酸钠、木质素磺酸钠、抗氧化剂和高岭土。

发明人在研究过程中意外发现，在本发明的制剂中添加抗氧化剂能够显著提高制剂的防效。

进一步，所述金龟子绿僵菌干孢子粉中孢子含量≥200亿个孢子/g，含水量≤5％wt。

进一步，所述抗氧化剂为1,2-双(3,5-二叔丁基-4-羟基-苯基丙酸)胼(即抗氧剂1024)。

进一步，所述药剂由金龟子绿僵菌CQMa421干孢子粉35％-52％、纳米氧化铝1％-2％、羧甲基纤维素钠3％-5％，十二烷基硫酸钠0.5％-2％、木质素磺酸钠4％-8％、抗氧化剂1％-3％和高岭土余量组成，均以质量百分比计。

进一步，所述药剂由金龟子绿僵菌CQMa421干孢子粉40％-50％、纳米氧化铝1.3％-1.7％、羧甲基纤维素钠3.5％-4.5％，十二烷基硫酸钠1％、木质素磺酸钠6％、抗氧化剂2％和高岭土余量组成，均以质量百分比计。

本发明的目的之二在于保护金龟子绿僵菌制剂，所述制剂包括金龟子绿僵菌CQMa421干孢子粉、纳米氧化铝、羧甲基纤维素钠、十二烷基硫酸钠、木质素磺酸钠、抗氧化剂和高岭土。

进一步，所述金龟子绿僵菌干孢子粉中孢子含量≥200亿个孢子/g，含水量≤5％wt。

进一步，所述抗氧化剂为1,2-双(3,5-二叔丁基-4-羟基-苯基丙酸)胼(即抗氧剂1024)。

进一步，所述金龟子绿僵菌制剂，由金龟子绿僵菌CQMa421干孢子粉35％-52％、纳米氧化铝1％-2％、羧甲基纤维素钠3％-5％，十二烷基硫酸钠0.5％-2％、木质素磺酸钠4％-8％、抗氧化剂1％-3％和高岭土余量组成，均以质量百分比计。

进一步，所述金龟子绿僵菌制剂，由金龟子绿僵菌CQMa421干孢子粉40％-50％、纳米氧化铝1.3％-1.7％、羧甲基纤维素钠3.5％-4.5％，十二烷基硫酸钠1％、木质素磺酸钠6％、抗氧化剂2％和高岭土余量组成，均以质量百分比计。

本发明的有益效果在于：

本发明的菌株对于马铃薯晚疫病的致病菌具有显著的抑制作用。

本发明的菌株对马铃薯晚疫病的保护作用显著。

本发明的制剂在播种前拌种以及在发病初期喷雾均对马铃薯晚疫病有良好的防效。

本发明的制剂具有绿色环保、无残留、保存期长、相对化学农药抗性产生更慢的优点。

具体实施方式

所举实施例是为了更好地对本发明的内容进行说明，但并不是本发明的内容仅限于所举实施例。所以熟悉本领域的技术人员根据上述发明内容对实施方案进行非本质的改进和调整，仍属于本发明的保护范围。若未特别指明，实施例中所用的技术手段为本领域技术人员所熟知的常规手段。

相互作用测定：

生防菌菌株：金龟子绿僵菌CQMa421菌株由重庆大学基因工程中心分离、鉴定、保存；哈茨木霉菌Cx5(中科农科院植保所)；利用黑麦培养基培养上述菌株，26℃培养10天后备用。

马铃薯晚疫病致病菌(Phytophthora infestans(Mont.)de Bary)：从马铃薯晚疫病病薯上分离、纯化得到；利用黑麦培养基18度避光培养10天后备用。

相互作用测定方法具体为：

将洁净的载玻片(75mm×25mm)放在培养皿(直径8cm)中，灭菌后，倒入已融化的黑麦培养基，待培养基凝固后，取出载玻片，去掉载玻片底部的培养基，将其放入带有潮湿滤纸的灭菌培养皿中备用；

分别打取金龟子绿僵菌CQMa421菌株、哈茨木霉菌Cx5及马铃薯晚疫病致病菌(Phytophthora infestans(Mont.)de Bary)菌落边缘菌盘(d＝6mm)，接种在覆有黑麦培养基的载玻片的两端，距玻片中心2cm，以只接种金龟子绿僵菌CQMa421菌株或马铃薯晚疫病致病菌(Phytophthora infestans(Mont.)de Bary)菌株为对照，每处理重复5次；

待生金龟子绿僵菌421菌株与马铃薯晚疫病致病菌(Phytophthora infestans(Mont.)de Bary)菌丝出现对峙区域时，测量菌落的趋向半径，按照公式

计算马铃薯晚疫病菌的被抑制率，结果如表1所示。

表1相互作用测试结果

备注：表中半径数值为三次重复的平均值±标准差。

由表1可知，金龟子绿僵菌CQMa421菌株对马铃薯晚疫病菌菌丝的抑制率高达58.33％。由此证明，金龟子绿僵菌CQMa421菌株对马铃薯晚疫病菌菌丝的生长有比较明显的抑制能力。

室内马铃薯晚疫病的保护作用测定

金龟子绿僵菌CQMa421菌株：由重庆大学基因工程中心分离、鉴定、保存的菌株。

马铃薯晚疫病菌(Phytophthora infestans(Mont.)de Bary)：从马铃薯晚疫病病薯上分离、纯化得到，将菌株接种到黑麦培养基上，28℃培养至产孢稳定天后置于冰箱中备用。

供试植物：供试马铃薯品种为费乌瑞它，易感马铃薯晚疫病，选取苗龄30天左右，生长健康的温室盆栽苗，选取长势、大小一致的复叶，剪下作为接种材料。

保护作用测定方法具体为：

利用灭菌0.1％wt吐温80溶液将金龟子绿僵菌CQMa421菌株分生孢子配制成1×10⁶、1×10⁷、1×10⁸孢子/ml喷施于叶片上，同时以0.2％wt可杀得药剂喷施于叶片上，以无菌水为空白对照组，每处理3片叶共15片小叶作为3次重复，而后将叶片放在铺有滤纸的磁盘内，待自然晾干(约1h)后，用喉头喷雾器接种马铃薯晚疫病菌游动孢子悬浮液(孢子囊浓度为1×10⁵个/ml，4℃冰箱放置2h促使游动孢子释放用于接种)，18℃培养箱保湿培养，3-4d后调查发病情况；试验重复进行两次。

病情分级标准采用中华人民共和国国家标准(GB/T17980.34-2000)。0级：无病斑；1级：病斑面积占整个叶面积5％以下；3级：病斑面积占整个叶面积11％-20％；7级：病斑面积占整个叶面积21％-50％；9级：病斑面积占整个叶面积50％以上。

防治效果(％)＝(空白对照组病情指数-处理组病情指数)/空白对照组病情指数×100％；

病情指数＝(∑(各级病叶数×相对级数值)/(调查叶片总数×9))×100；

各个处理组除药剂不同外，其他处理方式相同；

结果如表2所示。

表2保护作用测试结果

备注：表中数据为平均值±标准差(n＝3)，小写字母不同表示差异显著(p<0.05)。

由表2可知，金龟子绿僵菌CQMa421菌株在1×10⁷孢子/ml浓度下对马铃薯晚疫病的保护作用与0.2％可杀得三千相当，在1×10⁸孢子/ml浓度下的保护作用显著优于0.2％可杀得。由此证明，金龟子绿僵菌CQMa421菌株对马铃薯晚疫病的保护作用显著。

实施例1

一种含金龟子绿僵菌CQMa421的可湿性粉剂，其中金龟子绿僵菌干孢子粉(纯孢子粉，含孢量205亿孢子/克、含水量4.2％wt)添加量为45％wt，纳米氧化铝1.5％wt、羧甲基纤维素钠4％wt、十二烷基硫酸钠1％wt、木质素磺酸钠6％wt，抗氧化剂-1024 1％wt，用高岭土补足100％wt。

所述可湿性粉剂的制备方法具体为：

将除干孢子粉外的其他原料混合均匀，经气流粉碎后，按规定比例加入绿僵菌CQMa421干孢子粉并混合均匀，即得到所述金龟子绿僵菌CQMa421可湿性粉剂。

实施例2

一种含金龟子绿僵菌CQMa421的可湿性粉剂，其中金龟子绿僵菌干孢子粉(纯孢子粉，含孢量205亿孢子/克、含水量4.2％wt)添加量为45％wt，纳米氧化铝1.5％wt、羧甲基纤维素钠4％wt、十二烷基硫酸钠1％wt、木质素磺酸钠6％wt，抗氧化剂-1024 2％wt，用高岭土补足100％wt。

所述可湿性粉剂的制备方法具体为：

将除干孢子粉外的其他原料混合均匀，经气流粉碎后，按规定比例加入绿僵菌CQMa421干孢子粉并混合均匀，即得到所述金龟子绿僵菌CQMa421可湿性粉剂。

实施例3

一种含金龟子绿僵菌CQMa421的可湿性粉剂，其中金龟子绿僵菌干孢子粉(纯孢子粉，含孢量205亿孢子/克、含水量4.2％wt)添加量为45％wt，纳米氧化铝1.5％wt、羧甲基纤维素钠4％wt、十二烷基硫酸钠1％wt、木质素磺酸钠6％wt，抗氧化剂-1024 3％wt，用高岭土补足100％wt。

所述可湿性粉剂的制备方法具体为：

将除干孢子粉外的其他原料混合均匀，经气流粉碎后，按规定比例加入绿僵菌CQMa421干孢子粉并混合均匀，即得到所述金龟子绿僵菌CQMa421可湿性粉剂。

对比例1

一种含金龟子绿僵菌CQMa421的可湿性粉剂，其中金龟子绿僵菌干孢子粉(纯孢子粉，含孢量205亿孢子/克、含水量4.2％wt)添加量为45％，纳米氧化铝1.5％wt、羧甲基纤维素钠4％wt、十二烷基硫酸钠1％wt、木质素磺酸钠6％wt，高岭土补足100％wt(未添加抗氧化剂-1024)。

所述可湿性粉剂的制备方法具体为：

将除干孢子粉外的其他原料混合均匀，经气流粉碎后，按规定比例加入绿僵菌CQMa421干孢子粉并混合均匀，即得到所述金龟子绿僵菌CQMa421可湿性粉剂。

马铃薯晚疫病防治田间试验(重庆璧山)：

用实施例1-3及对比例1的可湿性粉剂和化学对照药剂与播种前拌种、发病初期喷雾防治马铃薯晚疫病；

于播种前，将实施例1-3及对比例1的制剂稀释100倍、150倍及200倍，化学对照药剂8％氟环·咯菌腈稀释20倍，在播种前1天切好薯块，边喷洒药剂边搅拌，使薯块均匀着药，摊开阴干后播种，试验地连年播种马铃薯，往年马铃薯晚疫病发病较重。每处理三个重复，每小区20平米，调查出苗率；各个处理组除药剂不同外，其他处理方式相同；结果如表3所示。

在另外一块未拌种处理的马铃薯地里开展喷雾防治田间试验，于发病初期，将实施例1-3及对比例1的制剂稀释400、600及800倍，化学对照药剂47％烯酰·唑嘧菌稀释500倍，均匀喷雾，每处理三个重复，每小区20平米。于药后10天及20天后调查各小区发病情况，计算发病叶片和病级；各个处理组除药剂不同外，其他处理方式相同；最终计算防治效果，结果如表4所示；其中，病级指数＝[∑(各级病叶数×相对级数)÷(调查总叶数×9)]×100，防效＝[1-(空白区药前病级指数×处理区药后病级指数)÷(空白区药后病级指数×处理区药前病级指数]×100％。

表3各药剂拌种处理马铃薯薯块后的出苗情况

备注：小写字母不同表示处理间差异显著(p<0.05)。

由表3可知，实施例1-3的制剂拌种的马铃薯薯块的出苗率与对照药剂8％氟环·咯菌腈相当，且实施例1-3的制剂拌种的马铃薯薯块的出苗率高于对比例1。由此证明，本发明的制剂拌种对马铃薯有很好的保护作用，在本发明的制剂中添加1％-3％的抗氧化剂-1024对制剂的防效有显著的提高。

表4各药剂喷雾防治马铃薯晚疫病田间防效

备注：小写字母不同表示差异显著(p<0.05)。

由表4可知，实施例1-3的制剂稀释400-800倍对马铃薯晚疫病有较好的防效，与47％烯酰·唑嘧菌相当；且实施例1-3的制剂的防效显著高于对比例1。由此证明，本发明的制剂对马铃薯晚疫病有较好的防效，且保存期长，在本发明的制剂中添加1-3％的抗氧化剂-1024对制剂的防效有显著的提高。

综上，本发明的制剂在播种前拌种以及在发病初期喷雾均对马铃薯晚疫病有良好的防效。

此外，应当理解，虽然本说明书按照实施方式加以描述，但并非每个实施方式仅包含一个独立的技术方案，说明书的这种叙述方式仅仅是为清楚起见，本领域技术人员应当将说明书作为一个整体，各实施例中的技术方案也可以经适当组合，形成本领域技术人员可以理解的其他实施方式。

Claims (4)

1.金龟子绿僵菌CQMa421菌株在制备防治马铃薯晚疫病的药剂中的应用；所述药剂包括金龟子绿僵菌CQMa421干孢子粉、纳米氧化铝、羧甲基纤维素钠、十二烷基硫酸钠、木质素磺酸钠、抗氧化剂和高岭土；

所述金龟子绿僵菌干孢子粉中孢子含量≥200亿个孢子/ g，含水量≤5%wt；

所述药剂中孢子浓度为1*10⁶-1*10⁸孢子/ml。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述抗氧化剂为1,2-双(3,5-二叔丁基-4-羟基-苯基丙酸)胼。

3.根据权利要求1或2所述的应用，其特征在于，所述药剂由金龟子绿僵菌CQMa421干孢子粉35%-52%、纳米氧化铝1%-2%、羧甲基纤维素钠3%-5%，十二烷基硫酸钠0.5%-2%、木质素磺酸钠4%-8%、抗氧化剂1%-3%和高岭土余量组成，均以质量百分比计。

4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述药剂由金龟子绿僵菌CQMa421干孢子粉40%-50%、纳米氧化铝1.3%-1.7%、羧甲基纤维素钠3.5%-4.5%，十二烷基硫酸钠1%、木质素磺酸钠6%、抗氧化剂2%和高岭土余量组成，均以质量百分比计。