CN110438057B - 一种蓝光控制的动态调控系统及其应用 - Google Patents

一种蓝光控制的动态调控系统及其应用 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种蓝光控制的动态调控系统及其应用，具体公开了一种蓝光控制的动态调控系统及其在乙偶姻生产中的应用，属于生物工程技术领域。本发明通过分子生物学手段，选择了蓝光光敏蛋白，利用光敏蛋白特异性响应特定波长的光源特性和无需外源添加诱导剂的优势，通过在工程大肠杆菌中引入靶向FtsZ+FtsA的动态调控基因线路，实现了在无机盐培养基中生产乙偶姻。通过本发明生产的乙偶姻产量可达63g/L，转化率达0.57g/g葡萄糖。

Description

一种蓝光控制的动态调控系统及其应用
技术领域
本发明涉及一种蓝光控制的动态调控系统及其应用，具体涉及一种蓝光控制的动态调控系统及其在乙偶姻生产中的应用，属于生物工程技术领域。
背景技术
动态调控系统是代谢工程领域中新兴的代谢流调控手段，其区别于静态调控的主要特征是在发酵过程中，工程菌株会根据发酵时间、生理状态、胞内代谢物浓度、胞外环境变化做出相应的酶活调整，进而影响代谢流分布，提高产品生产能力。动态调控系统具有发酵过程无需人为调控、不需要外源添加诱导剂的优势，在生产高附加值化合物中具有显著优势。
目前的动态调控系统，主要是依靠群体感应系统进行控制的，即系统的触发器是由本源或者异源的群体感应系统组成。当菌体浓度达到一定浓度时，群体感应系统释放积累的小分子物质会作用于调控系统受体，使调控系统做出相应动作。如2017年，ApoorvGupta等人表于Nature biotechnology的动态系统，该系统由EsaI群体感应系统和靶蛋白C末端添加降解标签组合而成，当菌体浓度达到一定阈值时，靶蛋白的被降解，胞内绝对浓度达到0，从而实现酶活关闭，调控代谢流的目的和效果。该系统具有路径独立特征，并成功应用于肌醇、葡萄糖二酸和乙偶姻的生产应用。除此之外，2017年，Xinyuan He等人发表于ACSsynthetic biology的AND逻辑门动态调控系统由群体感应系统和稳定期感应蛋白组成。当菌体浓度达到一定阈值时，启动靶蛋白的转录表达，从而实现代谢流调控目的和效果。该系统运用于PHB生产时，提高了1-2倍PHB产量。综上所述，两种动态调控系统均需要引入异源群体感应系统，然而，异源群体感应系统往往由多个转录调控蛋白组成，它的引入无疑会影响菌株的生长和发酵性能，同时限制了路径酶的表达数量。
乙偶姻是制备香精香料的前体，在大肠杆菌中由丙酮酸路径合成。传统的生产乙偶姻的方法通过过表达路径酶，实现乙偶姻的积累。然而，乙偶姻的生产受到比表面积的限制，引起溶氧传质不均匀的问题，直接影响乙偶姻在大肠杆菌中的生长和积累。因此，提供一种在简单培养基中高产乙偶姻的方法，对于工业制备乙偶姻具有重要的意义。
发明内容
本发明的第一个目的是提供一种基因工程菌，共同表达含有蓝光响应的光敏蛋白EL222、蓝光光敏蛋白响应组分和靶蛋白，所述光敏蛋白EL222氨基酸序列如SEQ ID NO.11所示；所述蓝光光敏蛋白响应组分包括启动子Plux或启动子PJ23119，启动子Plux的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示，启动子PJ23119的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示。
在本发明的一种实施方式中，所述蓝光的光照强度包括0.2W/cm2-0.8W/cm2。
在本发明的一种实施方式中，所述蓝光光敏蛋白EL222的核苷酸序列如SEQ IDNO.1所示。
在本发明的一种实施方式中，所述靶蛋白包括分裂蛋白FtsZ和分裂蛋白FtsA，所述分裂蛋白FtsZ的氨基酸序列如SEQ ID NO.12所示，所述分裂蛋白FtsA的氨基酸序列如SEQ ID NO.13所示。
在本发明的一种实施方式中，以PTrc-E-PJ23119-BudAB-NOX和pBLind-FtsZ-FtsA为表达载体。
PTrc-E质粒的构建方法为：
(1)以商业化质粒pTargetF(Addgene Plasmid#62226)为基础，采用全质粒PCR的方式，在rrnB T1终止子后插入T7Te终止子序列，以减少泄露表达；采用全质粒PCR的方式，去除sgRNA表达框，获得仅含有Pj23119组成型启动子和双终止的工程质粒PJ23119；
(2)以海滨红色杆菌(Marinobacter litoralis)基因组为模板，设计带有B0034RBS序列(如SEQ ID NO.4所示)的引物，扩增获得含有B0034RBS的EL222片段，将该片段插入至PJ23119质粒中，获得PJ23119-EL222质粒，反向扩增获得PTrc-EL222，即PTrc-E。
pBLind-mKate质粒的构建方法为：以mKate合成基因片段(如SEQ ID NO.5所示)为模板，设计带有B0034RBS序列的引物，扩增获得含有B0034RBS的mKate基因，同源重组连接到PJ23119质粒上，同时反向扩增得到pBLind质粒，同源重组方式获得pBLind-mKate质粒。
PJ23119-BudAB-NOX质粒的构建方法为：以粘质沙雷氏菌(Serratia marcescens)H30基因组为模板，设计带有B0034RBS序列的引物，分别扩增获得含有B0034RBS的budA(如SEQ ID NO.6所示)、budB片段(如SEQ ID NO.7所示)，将budA、budB两个片段采用多片段一步同源重组的方式，插入至PJ23119的表达框中，获得PJ23119-BudAB质粒；以短乳杆菌(Lactobacillus brevis)基因组为模板，扩增nox基因，将nox基因片段(如SEQ ID NO.8所示)采用多片段一步同源重组的方式，插入至PJ23119-BudAB的表达框中，获得PJ23119-BudAB-NOX质粒。
所述PTrc-E-PJ23119-BudAB-NOX质粒的构建方法为：以PJ23119-BudAB-NOX质粒为模板，通过同源重组扩增出PJ23119-BudAB-NOX片段，然后以PTrc-EL222为载体，酶切，同源重组，插入PTrc-EL222表达框，获得PTrc-E-PJ23119-BudAB-NOX质粒。
所述pBLind-FtsZ-FtsA质粒的构建方法为：利用同源重组的方法将pBLind-mKate质粒中的mKate荧光蛋白替换成大肠杆菌内源的ftsZ(如SEQ ID NO.9所示)和ftsA基因(如SEQ ID NO.10所示)。
在本发明的一种实施方式中，以E.coli F0601为宿主细胞。
本发明的第二个目的是提供一种调控靶蛋白基因表达的方法，是在基因工程菌发酵过程中补充蓝光以控制靶蛋白的表达，所述基因工程菌共同表达含有蓝光响应的光敏蛋白EL222、蓝光光敏蛋白响应组分和靶蛋白，所述光敏蛋白EL222氨基酸序列如SEQ IDNO.11所示；所述蓝光光敏蛋白响应组分包括启动子Plux或启动子PJ23119，启动子Plux的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示，启动子PJ23119的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示。
本发明的第三个目的是提供一种生产乙偶姻的方法，应用了上述基因工程菌进行发酵。
在本发明的一种实施方式中，所述发酵的培养基包括NBS无机盐培养基。
在本发明的一种实施方式中，所述发酵的条件为35-38℃，200-220rpm，初始OD600为0.04-0.1，发酵70-75h；或，发酵条件为35-38℃，480-530rpm，接种量为5-10％，通气量为1-2vvm，发酵90-100h。
本发明的第四个目的是提供上述的基因工程菌在制备靶蛋白或在生物、制药、食品或化工领域内的应用。
本发明的第五个目的是提供上述的一种调控靶蛋白基因表达的方法或上述的一种生产乙偶姻的方法在制备目的蛋白或生物、制药、食品或化工领域内的应用。
在本发明的一种实施方式中，所述靶蛋白包括酶蛋白或非酶蛋白。
本发明提供了一种构建动态调控基因线路的方法，具有发酵过程外源添加诱导剂的优势和时空特异性。此外，该方法设计简单，系统元件少，菌株生长负荷低。通过构建乙偶姻生产工程菌株和引入动态调控基因线路，在无机盐培养基中可以积累高达63g/L的乙偶姻，其转化率达0.57g/g葡萄糖，具有较好的应用前景。
附图说明
图1：不同光照强度下蓝光响应的荧光过程曲线，A:蓝光激活元件的可行性；B:蓝光激活的光照强度依赖性；C:蓝光激活过程的荧光曲线；D:蓝光激活的光照周期依赖性。
图2：质粒图谱，A:PTrc-E-PJ23119-budAB-nox；B:pBLind-FtsZ-FtsA。
图3：乙偶姻生产菌株的基因工程改造靶点。
图4：乙偶姻摇瓶发酵参数。
图5：乙偶姻5L发酵罐参数。
具体实施方式
材料与方法
质粒构建采用经典分子生物手段进行。
荧光过程曲线测定采用SpectraMax M3微孔板酶标仪(Molecular Devices,Sunnyvale,CA)进行测定，控制环境温度30度。
种子培养基：LB培养基，成分包含蛋白胨10g/L，酵母粉5g/L，氯化钠10g/L。
发酵培养基：NBS无机盐培养基，成分包含葡萄糖50g/L、CaCl2·2H2O 15mg/L、微量元素液0.667mL/L、灭菌后补加MgSO4·7H2O 0.25g/L，VB1 0.5mg/L，盐酸甜菜碱1mM。微量元素液的配置方法为FeCl3·6H2O 2.4g/L、CoCl2·6H2O 0.3g/L、CuCl2 0.15g/L、ZnCl2·4H2O0.3g/L、NaMnO4 0.3g/L、H3BO3 0.075g/L、MnCl2·4H2O 0.5g/L，溶于0.1M HCl中配制。
发酵样品制备：取发酵液样品，12000rpm离心5min，取上清液稀释后，过0.22μm水系膜过滤，滤液作为用来液相色谱分析。
乙偶姻含量的测定：戴安高效液相色谱仪(配紫外可见检测器)，采用伯乐AminexHPX-87H(300×7.8mm，9μm)色谱柱，流动相为浓度0.005M的H2SO4，流动相经0.22μm滤膜过滤，超声脱气，流速为0.6mL/min，柱温为35℃，在紫外检测波长210nm下检测。
涉及的启动子、基因或相关元件等的核苷酸序列见表1。
表1核苷酸序列
Figure BDA0002174459900000041
Figure BDA0002174459900000051
Figure BDA0002174459900000061
Figure BDA0002174459900000071
Figure BDA0002174459900000081
Figure BDA0002174459900000091
实施例1不同光照强度和光脉冲周期下蓝光激活元件的评价
将PTrc-E和pBLind-mKate质粒转入到E.coli F0601(构建方法见：Dong X,Chen X,Qian Y,et al.Metabolic engineering of Escherichia coli W3110 to produce L-malate[J].Biotechnology&Bioengineering,2016,114(3):656-664.)中，获得工程菌株，将其置于LB培养基中培养，使用SpectraMax M3微孔板酶标仪对上述工程菌株进行连续荧光测定。当菌株处于450nm蓝光条件下，蓝光光敏蛋白EL222结合到Plux或PJ23119启动子前，实现荧光蛋白mKate的表达。
在黑暗或者450nm蓝光光照条件下进行实验，结果如图1所示，A图表明了该蓝光系统的光照强度的剂量依赖性，随着蓝光光照强度的增加，mKate荧光蛋白表达量从242.68OD(a.u.)提高至2980.52OD(a.u.)；B图表明，当蓝光光照强度增加至0.8W/cm2时，mKate荧光蛋白表达量从272.89OD(a.u.)提高至2932.56OD(a.u.)；C图表明，随着时间(0-14h)和光照强度(0.2-0.8W/cm2)的不断增加，mKate的表达量逐渐提高；D图表明，当蓝光光脉冲周期增加至100％时，mKate荧光蛋白表达量从272.89OD(a.u.)提高至3082.56OD(a.u.)。
实施例2动态基因线路引入乙偶姻生产菌株的摇瓶发酵性能
如图3所示，以PTrc-E-PJ23119-BudAB-NOX和pBLind-FtsZ-FtsA(质粒图谱见图2)为表达载体，将不同的动态基因线路引入至E.coli F0601菌株中，共获得D1-D7等7株工程菌株，D1-D2菌株分别表示仅表达PTrc-E-PJ23119-BudAB-NOX、pBLind-FtsZ-FtsA时获得的工程菌株，D3-D7工程菌株为共同表达PTrc-E-PJ23119-BudAB-NOX和pBLind-FtsZ-FtsA时获得的工程菌株，D3-D7分别表示蓝光光照强度分别为0.2W/cm2、0.25W/cm2、0.3W/cm2、0.4W/cm2、0.8W/cm时的工程菌株。
如图4和5所示，在NBS无机盐培养基中检测菌株生长及产物合成情况。摇瓶发酵结果表明，D1-D2菌株的乙偶姻产量从13.5g/L提高19.5g/L，细胞分裂D阶段从52min缩短到31min，细胞相对存活率和比表面积分别提高到81％和3.02μm-1。D7菌株其发酵性能为乙偶姻积累量27.5g/L。
实施例3动态基因线路引入乙偶姻生产菌株的发酵罐发酵性能
在5L发酵罐中检测D7菌株的发酵性能。温度恒定37℃，500rpm，初始接种量控制为5％，通气量1vvm，发酵周期为72h。发酵结束时，乙偶姻积累量达63g/L，转化率达0.57g/g葡萄糖。
虽然本发明已以较佳实施例公开如上，但其并非用以限定本发明，任何熟悉此技术的人，在不脱离本发明的精神和范围内，都可做各种的改动与修饰，因此本发明的保护范围应该以权利要求书所界定的为准。
SEQUENCE LISTING
<110> 江南大学
<120> 一种蓝光控制的动态调控系统及其应用
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atctggatcg cccgttatct ttacagcttc cgtgcccgtc agctgttgat ctccaacggc 1260
cagcaaacca tgggggtggc attgccgtgg gccatcggtg cggcgctggt gcgccccggc 1320
gacaaggtgg tgtctatatc cggtgacggc ggcttcatgc agtcgagcat ggagctggag 1380
accgcggtgc ggctgaaaaa caacatcgtg cacgtgatct gggtcgataa cgcctacaac 1440
atggtggaaa tgcaggaagt gaacaaatac cagcgcaagt ccggcgtgga gttcgggccg 1500
attgacttca aggcctacgc ggaatcctgc ggcgcggtcg gtttcgccgt gcagtcggtg 1560
gaagatctgc ggccgatgct gcgcaaggcg atggcgatcc aggggccggt agtggtggcc 1620
atcccggtcg actatgccga caactataag ctgatggcgc agatgaactt cagccagatg 1680
atttaa 1686
<210> 8
<211> 1392
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 8
atgaaaatca ttagcattaa attcgtgctc ggcggcaaca tcatgaaggt gaccgtggtt 60
ggctgtaccc atgccggcac cttcgcgatc aagcagattc tggcggaaca cccagacgcc 120
gaggtgacgg tttacgagcg caacgacgtg atcagctttc tcagctgtgg catcgcgctg 180
tatctgggtg gtaaagtggc cgacccacaa ggtctgtttt acagcagccc ggaagaactg 240
caaaagctgg gcgcgaacgt gcagatgaac cataacgttc tggccatcga tccggaccag 300
aagaccgtga ccgtggagga tctgaccagc catgcgcaga ccacggagag ctacgacaag 360
ctcgttatga ccagcggtag ctggccaatc gtgccaaaga tcccgggcat tgacagcgac 420
cgcgttaaac tgtgcaagaa ctgggcccat gcgcaagcgc tgatcgagga tgccaaggaa 480
gcgaaacgca tcacggtgat cggtgcgggt tacattggcg ccgaactggc cgaggcctat 540
agcaccaccg gccatgacgt gaccctcatc gacgccatgg atcgtgtgat gccgaagtac 600
ttcgacgccg acttcaccga cgttatcgaa caagattatc gcgaccatgg tgtgcagctc 660
gcgctgagcg aaaccgtgga aagctttacg gacagcgcca ccggcctcac cattaagacc 720
gataagaaca gctatgagac cgatctggcg attctgtgca ttggcttccg tccgaatacc 780
gatctgctga aaggcaaagt ggatatggcg ccaaacggcg cgatcatcac cgatgactac 840
atgcgcagca gcaacccgga catctttgcc gccggcgata gcgccgccgt gcattacaac 900
ccgacgcatc agaacgccta tatcccactg gccaccaatg ccgttcgcca aggcatcctc 960
gtgggcaaaa atctggttaa gccgacggtg aagtacatgg gcacgcagag cagcagtggt 1020
ctggcgctct acgatcgtac catcgttagt accggtctga cgctggcggc ggcgaaacag 1080
caaggcgtga atgcggaaca agttatcgtg gaagacaact accgcccgga gttcatgcca 1140
agcacggaac cagtgctgat gagtctggtg ttcgatccag acacccatcg cattctgggc 1200
ggtgcgctga tgagtaaata cgacgtgagc cagagcgcga atacgctgag tgtgtgcatc 1260
cagaacgaga atacgattga cgatctggcc atggtggata tgctgttcca gccgaacttc 1320
gaccgcccgt tcaactatct gaacattctg gcgcaagccg cgcaagccaa agttgcgcag 1380
agcgtgaatg cg 1392
<210> 9
<211> 1152
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 9
atgtttgaac caatggaact taccaatgac gcggtgatta aagtcatcgg cgtcggcggc 60
ggcggcggta atgctgttga acacatggtg cgcgagcgca ttgaaggtgt tgaattcttc 120
gcggtaaata ccgatgcaca agcgctgcgt aaaacagcgg ttggacagac gattcaaatc 180
ggtagcggta tcaccaaagg actgggcgct ggcgctaatc cagaagttgg ccgcaatgcg 240
gctgatgagg atcgcgatgc attgcgtgcg gcgctggaag gtgcagacat ggtctttatt 300
gctgcgggta tgggtggtgg taccggtaca ggtgcagcac cagtcgtcgc tgaagtggca 360
aaagatttgg gtatcctgac cgttgctgtc gtcactaagc ctttcaactt tgaaggcaag 420
aagcgtatgg cattcgcgga gcaggggatc actgaactgt ccaagcatgt ggactctctg 480
atcactatcc cgaacgacaa actgctgaaa gttctgggcc gcggtatctc cctgctggat 540
gcgtttggcg cagcgaacga tgtactgaaa ggcgctgtgc aaggtatcgc tgaactgatt 600
actcgtccgg gtttgatgaa cgtggacttt gcagacgtac gcaccgtaat gtctgagatg 660
ggctacgcaa tgatgggttc tggcgtggcg agcggtgaag accgtgcgga agaagctgct 720
gaaatggcta tctcttctcc gctgctggaa gatatcgacc tgtctggcgc gcgcggcgtg 780
ctggttaaca tcacggcggg cttcgacctg cgtctggatg agttcgaaac ggtaggtaac 840
accatccgtg catttgcttc cgacaacgcg actgtggtta tcggtacttc tcttgacccg 900
gatatgaatg acgagctgcg cgtaaccgtt gttgcgacag gtatcggcat ggacaaacgt 960
cctgaaatca ctctggtgac caataagcag gttcagcagc cagtgatgga tcgctaccag 1020
cagcatggga tggctccgct gacccaggag cagaagccgg ttgctaaagt cgtgaatgac 1080
aatgcgccgc aaactgcgaa agagccggat tatctggata tcccagcatt cctgcgtaag 1140
caagctgatt aa 1152
<210> 10
<211> 1263
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 10
atgatcaagg cgacggacag aaaactggta gtaggactgg agattggtac cgcgaaggtt 60
gccgctttag taggggaagt tctgcccgac ggtatggtca atatcattgg cgtgggcagc 120
tgcccgtcgc gtggtatgga taaaggcggg gtgaacgacc tcgaatccgt ggtcaagtgc 180
gtacaacgcg ccattgacca ggcagaattg atggcagatt gtcagatctc ttcggtatat 240
ctggcgcttt ctggtaagca catcagctgc cagaatgaaa ttggtatggt gcctatttct 300
gaagaagaag tgacgcaaga agatgtggaa aacgtcgtcc ataccgcgaa atcggtgcgt 360
gtgcgcgatg agcatcgtgt gctgcatgtg atcccgcaag agtatgcgat tgactatcag 420
gaagggatca agaatccggt aggactttcg ggcgtgcgga tgcaggcaaa agtgcacctg 480
atcacatgtc acaacgatat ggcgaaaaac atcgtcaaag cggttgaacg ttgtgggctg 540
aaagttgacc aactgatatt tgccggactg gcatcaagtt attcggtatt gacggaagat 600
gaacgtgaac tgggtgtctg cgtcgtcgat atcggtggtg gtacaatgga tatcgccgtt 660
tataccggtg gggcattgcg ccacactaag gtaattcctt atgctggcaa tgtcgtgacc 720
agtgatatcg cttacgcctt tggcacgccg ccaagcgacg ccgaagcgat taaagttcgc 780
cacggttgtg cgctgggttc catcgttgga aaagatgaga gcgtggaagt gccgagcgta 840
ggtggtcgtc cgccacggag tctgcaacgt cagacactgg cagaggtgat cgagccgcgc 900
tataccgagc tgctcaacct ggtcaacgaa gagatattgc agttgcagga aaagcttcgc 960
caacaagggg ttaaacatca cctggcggca ggcattgtat taaccggtgg cgcagcgcag 1020
atcgaaggtc ttgcagcctg tgctcagcgc gtgtttcata cgcaagtgcg tatcggcgcg 1080
ccgctgaaca ttaccggttt aacggattat gctcaggagc cgtattattc gacggcggtg 1140
ggattgcttc actatgggaa agagtcacat cttaacggtg aagctgaagt agaaaaacgt 1200
gttacagcat cagttggctc gtggatcaag cgactcaata gttggctgcg aaaagagttt 1260
taa 1263
<210> 11
<211> 209
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> 11
Gly Ala Asp Asp Thr Arg Val Glu Val Gln Pro Pro Ala Gln Trp Val
1 5 10 15
Leu Asp Leu Ile Glu Ala Ser Pro Ile Ala Ser Val Val Ser Asp Pro
20 25 30
Arg Leu Ala Asp Asn Pro Leu Ile Ala Ile Asn Gln Ala Phe Thr Asp
35 40 45
Leu Thr Gly Tyr Ser Glu Glu Glu Cys Val Gly Arg Asn Cys Arg Phe
50 55 60
Leu Ala Gly Ser Gly Thr Glu Pro Trp Leu Thr Asp Lys Ile Arg Gln
65 70 75 80
Gly Val Arg Glu His Lys Pro Val Leu Val Glu Ile Leu Asn Tyr Lys
85 90 95
Lys Asp Gly Thr Pro Phe Arg Asn Ala Val Leu Val Ala Pro Ile Tyr
100 105 110
Asp Asp Asp Asp Glu Leu Leu Tyr Phe Leu Gly Ser Gln Val Glu Val
115 120 125
Asp Asp Asp Gln Pro Asn Met Gly Met Ala Arg Arg Glu Arg Ala Ala
130 135 140
Glu Met Leu Arg Thr Leu Ser Pro Arg Gln Leu Glu Val Thr Thr Leu
145 150 155 160
Val Ala Ser Gly Leu Arg Asn Lys Glu Val Ala Ala Arg Leu Gly Leu
165 170 175
Ser Glu Lys Thr Val Lys Met His Arg Gly Leu Val Met Glu Lys Leu
180 185 190
Asn Leu Lys Thr Ser Ala Asp Leu Val Arg Ile Ala Val Glu Ala Gly
195 200 205
Ile
<210> 12
<211> 383
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> 12
Met Phe Glu Pro Met Glu Leu Thr Asn Asp Ala Val Ile Lys Val Ile
1 5 10 15
Gly Val Gly Gly Gly Gly Gly Asn Ala Val Glu His Met Val Arg Glu
20 25 30
Arg Ile Glu Gly Val Glu Phe Phe Ala Val Asn Thr Asp Ala Gln Ala
35 40 45
Leu Arg Lys Thr Ala Val Gly Gln Thr Ile Gln Ile Gly Ser Gly Ile
50 55 60
Thr Lys Gly Leu Gly Ala Gly Ala Asn Pro Glu Val Gly Arg Asn Ala
65 70 75 80
Ala Asp Glu Asp Arg Asp Ala Leu Arg Ala Ala Leu Glu Gly Ala Asp
85 90 95
Met Val Phe Ile Ala Ala Gly Met Gly Gly Gly Thr Gly Thr Gly Ala
100 105 110
Ala Pro Val Val Ala Glu Val Ala Lys Asp Leu Gly Ile Leu Thr Val
115 120 125
Ala Val Val Thr Lys Pro Phe Asn Phe Glu Gly Lys Lys Arg Met Ala
130 135 140
Phe Ala Glu Gln Gly Ile Thr Glu Leu Ser Lys His Val Asp Ser Leu
145 150 155 160
Ile Thr Ile Pro Asn Asp Lys Leu Leu Lys Val Leu Gly Arg Gly Ile
165 170 175
Ser Leu Leu Asp Ala Phe Gly Ala Ala Asn Asp Val Leu Lys Gly Ala
180 185 190
Val Gln Gly Ile Ala Glu Leu Ile Thr Arg Pro Gly Leu Met Asn Val
195 200 205
Asp Phe Ala Asp Val Arg Thr Val Met Ser Glu Met Gly Tyr Ala Met
210 215 220
Met Gly Ser Gly Val Ala Ser Gly Glu Asp Arg Ala Glu Glu Ala Ala
225 230 235 240
Glu Met Ala Ile Ser Ser Pro Leu Leu Glu Asp Ile Asp Leu Ser Gly
245 250 255
Ala Arg Gly Val Leu Val Asn Ile Thr Ala Gly Phe Asp Leu Arg Leu
260 265 270
Asp Glu Phe Glu Thr Val Gly Asn Thr Ile Arg Ala Phe Ala Ser Asp
275 280 285
Asn Ala Thr Val Val Ile Gly Thr Ser Leu Asp Pro Asp Met Asn Asp
290 295 300
Glu Leu Arg Val Thr Val Val Ala Thr Gly Ile Gly Met Asp Lys Arg
305 310 315 320
Pro Glu Ile Thr Leu Val Thr Asn Lys Gln Val Gln Gln Pro Val Met
325 330 335
Asp Arg Tyr Gln Gln His Gly Met Ala Pro Leu Thr Gln Glu Gln Lys
340 345 350
Pro Val Ala Lys Val Val Asn Asp Asn Ala Pro Gln Thr Ala Lys Glu
355 360 365
Pro Asp Tyr Leu Asp Ile Pro Ala Phe Leu Arg Lys Gln Ala Asp
370 375 380
<210> 13
<211> 420
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> 13
Met Ile Lys Ala Thr Asp Arg Lys Leu Val Val Gly Leu Glu Ile Gly
1 5 10 15
Thr Ala Lys Val Ala Ala Leu Val Gly Glu Val Leu Pro Asp Gly Met
20 25 30
Val Asn Ile Ile Gly Val Gly Ser Cys Pro Ser Arg Gly Met Asp Lys
35 40 45
Gly Gly Val Asn Asp Leu Glu Ser Val Val Lys Cys Val Gln Arg Ala
50 55 60
Ile Asp Gln Ala Glu Leu Met Ala Asp Cys Gln Ile Ser Ser Val Tyr
65 70 75 80
Leu Ala Leu Ser Gly Lys His Ile Ser Cys Gln Asn Glu Ile Gly Met
85 90 95
Val Pro Ile Ser Glu Glu Glu Val Thr Gln Glu Asp Val Glu Asn Val
100 105 110
Val His Thr Ala Lys Ser Val Arg Val Arg Asp Glu His Arg Val Leu
115 120 125
His Val Ile Pro Gln Glu Tyr Ala Ile Asp Tyr Gln Glu Gly Ile Lys
130 135 140
Asn Pro Val Gly Leu Ser Gly Val Arg Met Gln Ala Lys Val His Leu
145 150 155 160
Ile Thr Cys His Asn Asp Met Ala Lys Asn Ile Val Lys Ala Val Glu
165 170 175
Arg Cys Gly Leu Lys Val Asp Gln Leu Ile Phe Ala Gly Leu Ala Ser
180 185 190
Ser Tyr Ser Val Leu Thr Glu Asp Glu Arg Glu Leu Gly Val Cys Val
195 200 205
Val Asp Ile Gly Gly Gly Thr Met Asp Ile Ala Val Tyr Thr Gly Gly
210 215 220
Ala Leu Arg His Thr Lys Val Ile Pro Tyr Ala Gly Asn Val Val Thr
225 230 235 240
Ser Asp Ile Ala Tyr Ala Phe Gly Thr Pro Pro Ser Asp Ala Glu Ala
245 250 255
Ile Lys Val Arg His Gly Cys Ala Leu Gly Ser Ile Val Gly Lys Asp
260 265 270
Glu Ser Val Glu Val Pro Ser Val Gly Gly Arg Pro Pro Arg Ser Leu
275 280 285
Gln Arg Gln Thr Leu Ala Glu Val Ile Glu Pro Arg Tyr Thr Glu Leu
290 295 300
Leu Asn Leu Val Asn Glu Glu Ile Leu Gln Leu Gln Glu Lys Leu Arg
305 310 315 320
Gln Gln Gly Val Lys His His Leu Ala Ala Gly Ile Val Leu Thr Gly
325 330 335
Gly Ala Ala Gln Ile Glu Gly Leu Ala Ala Cys Ala Gln Arg Val Phe
340 345 350
His Thr Gln Val Arg Ile Gly Ala Pro Leu Asn Ile Thr Gly Leu Thr
355 360 365
Asp Tyr Ala Gln Glu Pro Tyr Tyr Ser Thr Ala Val Gly Leu Leu His
370 375 380
Tyr Gly Lys Glu Ser His Leu Asn Gly Glu Ala Glu Val Glu Lys Arg
385 390 395 400
Val Thr Ala Ser Val Gly Ser Trp Ile Lys Arg Leu Asn Ser Trp Leu
405 410 415
Arg Lys Glu Phe
420

Claims (6)

1.一种基因工程菌，其特征在于，共同表达了光敏模块、报告模块和乙偶姻途径；所述光敏模块上含有蓝光响应的光敏蛋白EL222；所述报告模块上包含蓝光光敏蛋白响应组分启动子P lux 和靶蛋白；所述乙偶姻途径含有启动子P J23119 、nox基因、budA基因和budB基因；所述蓝光响应的光敏蛋白EL222氨基酸序列如SEQ ID NO.11所示；所述启动子P lux 的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示，启动子P J23119 的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示；所述靶蛋白包括分裂蛋白FtsZ和分裂蛋白FtsA，所述分裂蛋白FtsZ的氨基酸序列如SEQ ID NO.12所示，所述分裂蛋白FtsA的氨基酸序列如SEQ ID NO.13所示；所述budA基因的核苷酸序列如SEQ IDNO.6所示，所述budB基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.7所示；
以E. coliF0601为宿主细胞；
所述nox基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.8所示。
2.如权利要求1所述的基因工程菌，其特征在于，编码所述蓝光响应的光敏蛋白EL222的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。
3.一种生产乙偶姻的方法，其特征在于，应用权利要求1或2所述的基因工程菌进行发酵。
4.如权利要求3所述的方法，其特征在于，所述发酵的培养基为NBS无机盐培养基。
5.如权利要求3或4所述的方法，其特征在于，所述发酵的条件为35-38℃，200-220rpm，初始OD600为0.04-0.1，发酵70-75h；或，发酵条件为35-38℃，480-530 rpm，接种量为5-10%，通气量为1-2vvm，发酵90-100h。
6.权利要求1或2所述的基因工程菌在制备乙偶姻中的应用。
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* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN110551669B (zh) * 2019-09-05 2022-05-06 江南大学 一种近红外光控制的动态调控系统及其应用
CN111557918B (zh) * 2020-04-22 2022-03-25 天津大学 一种光响应型工程菌肠道靶向光遗传载体系统及构建方法和应用
CN113462688B (zh) * 2021-06-30 2022-07-29 华中科技大学 一种蓝光调节启动子、蓝光调节启动子的融合基因、蓝光介导调节质粒及构建方法和应用

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN107674880A (zh) * 2016-08-02 2018-02-09 胡育诚 细长聚球藻pcc 7942的基因表达调控系统及其应用
CN107937437A (zh) * 2017-11-22 2018-04-20 中国科学院武汉物理与数学研究所 一种昆虫细胞的光控表达载体及应用
US10005820B2 (en) * 2011-02-15 2018-06-26 Vaxiion Therapeutics, Llc Therapeutic compositions and methods for antibody and Fc-containing targeting molecule-based targeted delivery of bioactive molecules by bacterial minicells

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US10005820B2 (en) * 2011-02-15 2018-06-26 Vaxiion Therapeutics, Llc Therapeutic compositions and methods for antibody and Fc-containing targeting molecule-based targeted delivery of bioactive molecules by bacterial minicells
CN107674880A (zh) * 2016-08-02 2018-02-09 胡育诚 细长聚球藻pcc 7942的基因表达调控系统及其应用
CN107937437A (zh) * 2017-11-22 2018-04-20 中国科学院武汉物理与数学研究所 一种昆虫细胞的光控表达载体及应用

Non-Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Blue light-mediated transcriptional activation and repression of gene expression in bacteria;Premkumar Jayaraman等;《Nucleic Acids Research》;20160628;第44卷(第14期);第6994–7005页，参见第6995页右栏第1段-第6996页左栏第1段、第6996页右栏倒数第1段-第6997页右栏第1段、图1 *
MULTISPECIES: cell division protein FtsA [Proteobacteria];NCBI Reference Sequence：WP_000588474.1;《GenBank》;20190603;参见序列及相关信息 *
MULTISPECIES: cell division protein FtsZ [Proteobacteria];NCBI Reference Sequence：WP_000462776.1;《GenBank》;20190614;参见序列及相关信息 *
光控基因表达系统;陈显军等;《生命科学》;20190430;第31卷(第4期);第343-354页，参见全文 *

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