CN110419448A - 一种看麦娘组培快繁方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种看麦娘组培快繁方法，包括外植体准备、外植体消毒和接种培养、生根培养、组培苗炼苗与移栽等步骤，本发明建立了一套完整的看麦娘组织培养体系，为其实现快速繁殖打下基础。现有技术中看麦娘种子保存寿命短，种子繁殖发芽率低，通过组织培养技术，可以有效的克服上述问题，大大缩短看麦娘的繁殖时间，提高其繁殖效率。

Description

一种看麦娘组培快繁方法
技术领域
本发明涉及组培快繁技术领域，具体涉及一种看麦娘组培快繁方法。
背景技术
看麦娘，拉丁文名：Alopecurus aequalis Sobol.禾本科、看麦娘属一年生。秆少数丛生，细瘦，光滑，节处常膝曲，叶鞘光滑，短于节间；叶舌膜质，叶片扁平，圆锥花序圆柱状，灰绿色，小穗椭圆形或卵状长圆形，颖膜质，基部互相连合，脊上有细纤毛，侧脉下部有短毛；外稃膜质，先端钝，等大或稍长于颖，下部边缘互相连合，隐藏或稍外露；花药橙黄色，花果期4-8月
看麦娘可引种栽培，种子细小而轻，千粒重仅0.76～0.83g。种子发芽率低，据报道，发芽率很少超过56％，种子寿命短，贮存1年后发芽率则可降低10％，2年后降低20～30％，3年后丧失了播种价值。
由于种子繁殖率低，该种植物的繁殖受到限制，影响其进一步的扩大繁殖，而组织培养技术可以克服其存在的这种问题，能够加快其繁殖速率。
目前，关于看麦娘组织培养方面的技术报道较少。
发明内容
本发明的目的在于提供一种看麦娘组培快繁方法，该方法能够快速的对草原看麦娘进行繁殖。
为实现上述目的，本发明的技术方案为：
一种看麦娘组培快繁方法，所述方法包括如下步骤：
(1)外植体准备
实验地挖出看麦娘，自来水冲洗掉泥土，去掉老根烂叶，种在干净花盆的基质中，浇清水见湿，放在阳光、通风处，培养一个月；
(2)外植体消毒和接种培养
从花盆中取出看麦娘剪下新萌发的芽，自来水冲洗，去掉多余的包叶，然后置于工作台上，消毒处理，再用无菌滤纸吸干水分，去掉多余包叶切下芽接种在接种培养基上；所述接种培养基为MS+6-BA1mg/L+NAA 0.5mg/L+糖30g/L；每瓶只接一个芽；培养条件为：25+1℃，光照时间12小时，光照强度1000Lx，培养介质pH值为6.2；
(3)继代增殖培养
接种后培养3-5天开始生长，将分化的芽接到继代增殖培养基上进行继代增殖，所述继代增殖培养基为：N6+1/2MS+6-BA2.5mg/L+NAA 0.25mg/L+糖30g/L，每40天接转一次；培养条件为：25+1℃，光照时间12小时，光照强度1000Lx，培养介质pH值为6.2；
(4)当继代增殖到所需苗量时，接种到生根培养基1/2MS+NAA 0.2mg/L+糖20g/L中诱导生根，20-25天左右生根；生根培养培养条件为：25+1℃，光照时间12小时，光照强度1000Lx，培养介质pH值为6.2；
(5)组培苗炼苗与移栽
组培苗根长出2～3cm时出瓶，出瓶前练苗一周；先将培养瓶移至温室，自然条件下炼苗一周，然后解开封口膜取出小苗洗净根部附着的培养基，用多菌灵或百菌清1000倍液清洗并浸泡幼苗根部，防治病害的发生；移栽到经消毒的基质中，温度控制在24-26℃，湿度控制在70％，15d以后逐渐降低湿度，直至将移栽苗置于自然条件下，炼苗移栽期间适当遮光，使光照强度为自然光的50％。
优选地，步骤(1)所述基质为珍珠岩。
优选地，所述消毒处理方法为：用70％酒精消毒30秒，无菌水洗3次，5％次氯酸钠消毒5分钟，无菌水清洗4次，0.1％升汞消毒7分钟，无菌水清洗6次。
优选地，步骤(3)所述继代增殖培养时接种芽数不少于两个。更加优选地，继代增殖培养时接种芽数为3个，每3个芽为一堆，每个培养瓶中放置4-5堆。
优选地，步骤(4)所述生根方式为单芽生根或丛状生根。
优选地，步骤(5)所述的栽培基质是腐殖土、园土和沙子以1∶1∶1的体积比混合而成。
本发明具有如下优点：
本发明建立了一套完整的看麦娘组织培养体系，为其实现快速繁殖打下基础。
现有技术中看麦娘种子保存寿命短，种子繁殖发芽率低，通过组织培养技术，可以有效的克服上述问题，大大缩短看麦娘的繁殖时间，提高其繁殖效率。
发明人在试验中发现，如果采用现有技术中最常用的一个芽进行继代增殖，其增殖效率并不理想，而采用3个芽进行继代增殖时，增殖效率最佳。并且在一个培养瓶中，放置的芽堆数也对其增殖效率有影响，试验验证，培养瓶中放置的堆数在4-5个效果最好。
具体实施方式
下面将通过具体实施例来对本发明进行进一步的解释，然而应当理解，可以以各种形式实现本发明而不应被这里阐述的实施例所限制。相反，提供这些实施例是为了能够更透彻地理解本发明，并且能够将本发明的范围完整的传达给本领域的技术人员。
如在通篇说明书及权利要求当中所提及的“包含”或“包括”为一开放式用语，故应解释成“包含但不限定于”。说明书后续描述为实施本发明的较佳实施方式，然所述描述乃以说明书的一般原则为目的，并非用以限定本发明的范围。本发明的保护范围当视所附权利要求所界定者为准。
实施例
一种看麦娘组培快繁方法，所述方法包括如下步骤：
(1)外植体准备
实验地挖出看麦娘，自来水冲洗掉泥土，去掉老根烂叶，种在干净花盆的基质中，浇清水见湿，放在阳光、通风处，培养一个月；
(2)外植体消毒和接种培养
从花盆中取出看麦娘剪下新萌发的芽，自来水冲洗，去掉多余的包叶，然后置于工作台上，消毒处理，再用无菌滤纸吸干水分，去掉多余包叶切下芽接种在接种培养基上；所述接种培养基为MS+6-BA1mg/L+NAA 0.5mg/L+糖30g/L；每瓶只接一个芽；培养条件为：25+1℃，光照时间12小时，光照强度1000Lx，培养介质pH值为6.2；
(3)继代增殖培养
接种后培养3-5天开始生长，将分化的芽接到继代增殖培养基上进行继代增殖，所述继代增殖培养基为：N6+1/2MS+6-BA2.5mg/L+NAA 0.25mg/L+糖30g/L，每40天接转一次；培养条件为：25+1℃，光照时间12小时，光照强度1000Lx，培养介质pH值为6.2；
(4)当继代增殖到所需苗量时，接种到生根培养基1/2MS+NAA 0.2mg/L+糖20g/L中诱导生根，20-25天左右生根；生根培养培养条件为：25+1℃，光照时间12小时，光照强度1000Lx，培养介质pH值为6.2；
(5)组培苗炼苗与移栽
组培苗根长出2～3cm时出瓶，出瓶前练苗一周；先将培养瓶移至温室，自然条件下炼苗一周，然后解开封口膜取出小苗洗净根部附着的培养基，用多菌灵或百菌清1000倍液清洗并浸泡幼苗根部，防治病害的发生；移栽到经消毒的基质中，温度控制在24-26℃，湿度控制在70％，15d以后逐渐降低湿度，直至将移栽苗置于自然条件下，炼苗移栽期间适当遮光，使光照强度为自然光的50％。
作为本实施例的优选技术方案，步骤(1)所选用的基质为珍珠岩。
作为本实施例的优选技术方案，进一步地，所述消毒处理方法为：用70％酒精消毒30秒，无菌水洗3次，5％次氯酸钠消毒5分钟，无菌水清洗4次，0.1％升汞消毒7分钟，无菌水清洗6次。
作为本实施例的优选技术方案，步骤(3)所述继代增殖培养时接种芽数不少于两个，并且通过试验验证，最佳接种芽数为3个。并且，每3个芽为一堆，每个培养瓶中放置4-5堆时增殖效率最佳。
其中，步骤(4)所述生根方式可以为为单芽生根或丛状生根，并且试验验证，丛状生根缓苗和成苗更好。
作为本实施例的优选技术方案，步骤(5)所述的栽培基质是腐殖土、园土和沙子以1∶1∶1的体积比混合而成。
试验部分
为了进一步得出本发明的有益效果及突出本发明的发明点，发明人还进行了如下有效试验。
1、选用金边’大看麦娘(Alopecurus pratensis‘Aureovariegatus’)作为试验品种。
在增殖培养阶段，发明人分别采用1、2、3、4、5个芽进行继代增殖，其余的培养条件均相同，统计其从开始增殖培养到生根所需要的时间，具体如下：
表1从开始增殖培养到生根所需要的时间
从对比结果可以看出，芽数多的生根所需时间普遍要短于芽数少的时间，现有技术中大部分增殖培养都采用一个芽进行增殖的方法对于本发明来讲并不是最佳技术方案，虽然也能生根，但是生根所需要的时间为34天，时间长，而采用3个芽时，从开始增殖培养到生根所需要的时间仅为20天，而随着芽数的增加，当芽数增加到4或5个时，从开始增殖培养到生根所需要的时间反而更长。可见，对于本发明来讲，采用3个芽时增殖培养所需时间最短，能够缩短整个组织培养的时间，增殖效率最佳。
另外发明人又做了不同接种芽数对其他指标的影响，具体统计结果见表2。
表2不同芽个数对增殖培养的影响
接种芽数 增殖数 增殖倍数 芽均高/cm 丛生芽形成数 形成率/％ 生长势
1 1.5 1.5 4.3 10 50 弱
2 5.0 2.5 5.2 15 75 弱
3 13.8 4.6 6.3 20 100 强
4 16 4.0 5.9 18 100 强
5 16 3.2 5.7 18 100 较强
结论：
从上述对比试验可以看出，不同接种芽数对增殖倍数、芽高乃至最后的生长势均有显著的影响，当接种1个芽时，增殖倍数最低，生长势也最弱，随着接种芽数的增加，增殖倍数逐渐提高，生长势也变强，当接种芽数达到3个时，增殖倍数最高，芽高、丛生芽数量也达到最高，生长势也达到最强，而随着接种芽数的再次增加，无论是增殖倍数、芽高、丛生芽数量还是最终的生长势都产生负面影响。因此，通过上述试验证明，接种芽数为3个时，无论是增殖还是生长势，效果最好。
2、在上述实验的基础上，发明人继续进行了如下试验：采用3个芽为一堆，每个培养瓶中分别培养1、2、3、4、5、6、7、8、9堆，培养瓶的规格为直径6.2cm、100ml三角瓶。具体结果统计见表3。
表3不同培养堆数对增殖培养的影响
接种堆数 增殖数 增殖倍数 生长势
1 14.1 4.7 较强
2 29.4 4.9 较强
3 46.8 5.2 较强
4 67.2 5.6 强
5 93 6.2 强
6 91.8 5.1 较强
7 90.3 4.3 弱
结论：通过上述对比试验可以看出接种堆数的不同对后期的增殖倍数和生长势也有显著的影响，整体来看，也是呈现出抛物线的趋势，随着接种堆数的提高，增殖倍数逐渐增加，当接种堆数为5个时，增殖倍数最高，达到6.2，然后增殖倍数呈现出下降的趋势。结果表明，当接种堆数在4-5个时，增殖倍数达到最高，生长势也达到最强。
虽然，上文中已经用一般性说明及具体实施例对本发明作了详尽的描述，但在本发明基础上，可以对之作一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。

Claims (7)

1.一种看麦娘组培快繁方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：
(1)外植体准备
实验地挖出看麦娘，自来水冲洗掉泥土，去掉老根烂叶，种在干净花盆的基质中，浇清水见湿，放在阳光、通风处，培养一个月；
(2)外植体消毒和接种培养
从花盆中取出看麦娘剪下新萌发的芽，自来水冲洗，去掉多余的包叶，然后置于工作台上，消毒处理，再用无菌滤纸吸干水分，去掉多余包叶切下芽接种在接种培养基上；所述接种培养基为MS+6-BA 1mg/L+NAA 0.5mg/L+糖30g/L；每瓶只接一个芽；培养条件为：25+1℃，光照时间12小时，光照强度1000Lx，培养介质pH值为6.2；
(3)继代增殖培养
接种后培养3-5天开始生长，将分化的芽接到继代增殖培养基上进行继代增殖，所述继代增殖培养基为：N6+1/2MS+6-BA 2.5mg/L+NAA 0.25mg/L+糖30g/L，每40天接转一次；培养条件为：25+1℃，光照时间12小时，光照强度1000Lx，培养介质pH值为6.2；
(4)生根培养
当继代增殖到所需苗量时，接种到生根培养基1/2 MS+NAA 0.2mg/L+糖20g/L中诱导生根，20-25天生根；生根培养培养条件为：25+1℃，光照时间12小时，光照强度1000Lx，培养介质pH值为6.2；
(5)组培苗炼苗与移栽
组培苗根长出2～3cm时出瓶，出瓶前练苗一周；先将培养瓶移至温室，自然条件下炼苗一周，然后解开封口膜取出小苗洗净根部附着的培养基，用多菌灵或百菌清1000倍液清洗并浸泡幼苗根部，防治病害的发生；移栽到经消毒的基质中，温度控制在24-26℃，湿度控制在70％，15d以后逐渐降低湿度，直至将移栽苗置于自然条件下，炼苗移栽期间适当遮光，使光照强度为自然光的50％。
2.根据权利要求1所述的看麦娘组培快繁方法，其特征在于，步骤(1)所述基质为珍珠岩。
3.根据权利要求1所述的看麦娘组培快繁方法，其特征在于，所述消毒处理方法为：用70％酒精消毒30秒，无菌水洗3次，5％次氯酸钠消毒5分钟，无菌水清洗4次，0.1％升汞消毒7分钟，无菌水清洗6次。
4.根据权利要求1所述的看麦娘组培快繁方法，其特征在于，步骤(3)所述继代增殖培养时接种芽数不少于2个。
5.根据权利要求4所述的看麦娘组培快繁方法，其特征在于，步骤(3)所述继代增殖培养时接种芽数为3个，每3个芽为一堆，每个培养瓶中放置4-5堆。
6.根据权利要求1所述的看麦娘组培快繁方法，其特征在于，步骤(4)所述生根方式为丛状生根。
7.根据权利要求1所述的看麦娘组培快繁方法，其特征在于，步骤(5)所述的栽培基质是腐殖土、园土和沙子以1：1：1的体积比混合而成。
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