CN110398469A - 一种用于确定体液葡萄糖水平的反应液及方法 - Google Patents

一种用于确定体液葡萄糖水平的反应液及方法 Download PDF

Info

Publication number
CN110398469A
CN110398469A CN201910641690.1A CN201910641690A CN110398469A CN 110398469 A CN110398469 A CN 110398469A CN 201910641690 A CN201910641690 A CN 201910641690A CN 110398469 A CN110398469 A CN 110398469A
Authority
CN
China
Prior art keywords
reaction solution
glucose
reaction
body fluid
glucose level
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN201910641690.1A
Other languages
English (en)
Inventor
刘博引
徐洪涛
陈裕殷
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Beijing Zhiji Future Medical Technology Co Ltd
Original Assignee
Beijing Zhiji Future Medical Technology Co Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Beijing Zhiji Future Medical Technology Co Ltd filed Critical Beijing Zhiji Future Medical Technology Co Ltd
Priority to CN201910641690.1A priority Critical patent/CN110398469A/zh
Publication of CN110398469A publication Critical patent/CN110398469A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N21/00—Investigating or analysing materials by the use of optical means, i.e. using sub-millimetre waves, infrared, visible or ultraviolet light
    • G01N21/17—Systems in which incident light is modified in accordance with the properties of the material investigated
    • G01N21/25—Colour; Spectral properties, i.e. comparison of effect of material on the light at two or more different wavelengths or wavelength bands
    • G01N21/31—Investigating relative effect of material at wavelengths characteristic of specific elements or molecules, e.g. atomic absorption spectrometry
    • G01N21/314—Investigating relative effect of material at wavelengths characteristic of specific elements or molecules, e.g. atomic absorption spectrometry with comparison of measurements at specific and non-specific wavelengths
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N21/00—Investigating or analysing materials by the use of optical means, i.e. using sub-millimetre waves, infrared, visible or ultraviolet light
    • G01N21/75—Systems in which material is subjected to a chemical reaction, the progress or the result of the reaction being investigated
    • G01N21/77—Systems in which material is subjected to a chemical reaction, the progress or the result of the reaction being investigated by observing the effect on a chemical indicator
    • G01N21/78—Systems in which material is subjected to a chemical reaction, the progress or the result of the reaction being investigated by observing the effect on a chemical indicator producing a change of colour
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N21/00—Investigating or analysing materials by the use of optical means, i.e. using sub-millimetre waves, infrared, visible or ultraviolet light
    • G01N21/17—Systems in which incident light is modified in accordance with the properties of the material investigated
    • G01N21/25—Colour; Spectral properties, i.e. comparison of effect of material on the light at two or more different wavelengths or wavelength bands
    • G01N21/31—Investigating relative effect of material at wavelengths characteristic of specific elements or molecules, e.g. atomic absorption spectrometry
    • G01N21/314—Investigating relative effect of material at wavelengths characteristic of specific elements or molecules, e.g. atomic absorption spectrometry with comparison of measurements at specific and non-specific wavelengths
    • G01N2021/3148—Investigating relative effect of material at wavelengths characteristic of specific elements or molecules, e.g. atomic absorption spectrometry with comparison of measurements at specific and non-specific wavelengths using three or more wavelengths

Abstract

本发明实施例公开了一种用于确定体液葡萄糖水平的反应液及方法，所述反应液包括酶、色原体、缓冲液以及胶体制剂混合而成；其中，所述酶用于与待测样品液中的葡萄糖反应获得反应产物；所述色原体用于与所述反应产物反应形成具有可供仪器检测的可被特定波长光波识别的产物；所述胶体制剂用于可脱离试纸存在的酶、色原体、缓冲液以及待测样品液的反应载体。本发明实施例的用于确定体液葡萄糖水平的反应液，在现有技术的基础上进一步增强了检测反应液的成色与光的反射、透射率，从而提高了检测灵敏度与检测下限。

Description

一种用于确定体液葡萄糖水平的反应液及方法
技术领域
本发明实施例涉及医学检测技术领域，具体涉及一种用于确定体液葡萄糖水平的方法。
背景技术
根据医学标准，糖尿病的诊断主要包括以下5种检测形式/体系：(1)空腹血糖；(2)口服葡萄糖耐量试验；(3)餐后2小时；(4)随机血糖；(5)糖化血红蛋白A1C含量。(1)、(3)和(4)所涉及的检测形式对于没有患过糖尿病的大众来说并不陌生。然而，在执行现行的糖尿病诊断金标准时，被检者是需要口服100ml葡萄糖含量为75g的水溶液，并在2小时后检测血糖，以确诊糖尿病的。该检测形式即为(2)口服葡萄糖耐量试验(Oral Glucose ToleranceTest---OGTT)。(5)中所涉及的是一种通过检测糖基化的血红蛋白数量来间接判断血糖浓度的方法。
众所周知，血糖检测需要抽取一定量的血液。体检项目中，一般抽取几毫升的血液。市场上广泛流行的血糖检测仪则需要通过挑破手指收集血液。这两种检测形式都会对被检者的皮肤组织造成一定程度上的损伤。对于普通人来说，偶然的一到两次抽血检查并不会影响正常生活。然而对于老人、婴幼儿或病患来说，这一过程往往还会伴随着精神层面的不适，以及日常生活方面的不便。
市面上有不少公司推出了微创/无创血糖检测产品。这些检测产品涵盖了诸多检测形式，其中一部分产品运用了红外线、超声波、电磁波、无线电波以及酶联半导体传感器等技术来实现对葡萄糖的检测。以红外光波为主的检测形式，主要是通过对人体某个部位，如手指、胳膊、耳朵等，发射对葡萄糖分子有选择性的特定波长的红外线，并检测、对比该红外线在透射人体组织前后的信号强度，来反映血糖浓度的。这一技术一般被用来检测人体组织液中的葡萄糖。由于检测对象存在于有流动性的液体中，所以因液体流速不统一所带来的检测误差，会直接影响血糖检测的准确性和可重复性。除此以外，由于不同人之间皮肤组织成分(脂肪)、厚度等都存在差异，这些都会给检测环节带来较难量化的偏差，并最终导致检测结果的不准确。
另一类血糖检测产品整合了超声波、电磁波以及热感等检测手段，针对葡萄糖因浓度的变化所伴随的组织液电阻抗、声波阻抗以及热传导特性的变化，来关联葡萄糖的浓度。然而，在组织液中，除葡萄糖以外的很多代谢物都可能对上述三个指标产生影响，这就意味着该技术手段对葡萄糖的特异性并不高，从而影响检测结果。类似的检测手段还被用于检测人体血氧总量和代谢产生的总热量，以间接推算血糖水平。由于该方法涉及较多关联因素，如温度、湿度、血液流动，所以实际检测所得的结果也综合了每项指标检测所累积的误差。况且，在人体中，除葡萄糖以外还有其它糖类以及脂肪的代谢，都会改变代谢产生的总热量。这类检测手段对葡萄糖的特异性也不是很好。
综上所述，传统中在对人体的血糖进行检测的方法中，其检测的过程比较繁琐，且具有创伤，检测不能有效针对个体化差异，亟待研发一种新的确定血糖水平的方法。
发明内容
为此，本发明实施例提供一种体液葡萄糖水平检测反应液以及检测方法，以解决现有技术中由于检测载体透光性能差和个体间体液样本环境差异而导致的检测灵敏度不足和检测标准不统一的问题。
为了实现上述目的，本发明实施例提供如下技术方案：
一种用于确定体液葡萄糖水平的反应液，所述反应液包括酶、色原体、缓冲液以及胶体制剂混合而成；其中，所述酶用于与待测样品液中的葡萄糖反应获得反应产物；
所述色原体用于与所述反应产物反应形成具有可供仪器检测的可被特定波长光波识别的产物；
所述胶体制剂用于作为酶、色原体、缓冲液以及待测样品液的反应载体。
优选的，所述酶为葡萄糖氧化酶、己激糖酶、葡萄糖激酶、醛糖还原酶、过氧化氢酶和葡萄糖-6-磷酸脫氢酶中的一种或几种。
优选的，所述色原体为3,3',5,5'-四甲基联苯胺、3-羟基-2,4,6-三溴苯甲酸、3,5-二氯-2-羟基苯磺酸钠和4-氨基安替比林、NADP+中的一种或几种。
优选的，所述缓冲液为磷酸盐缓冲液、乙酸钠、柠檬酸和三羟甲基氨基甲烷盐酸盐缓冲液中的一种或几种。
优选的，所述缓冲液的pH在5.0～8.1之间。
优选的，所述胶体制剂的溶质为海藻酸钠、明胶、壳聚糖、琼脂糖和丙烯酰胺中的一种或几种。
优选的，所述胶体制剂的溶质质量分数为0.5％到10％。
本发明实施例还提供一种应用所述的反应液确定体液葡萄糖水平的方法，其包括以下步骤：
取至少三个反应液，分别为第一反应液、第二反应液和第三反应液，其中，所述第一反应液配制时，不含色原体；
向所述第一反应液、第二反应液、第三反应液分别加入等体积的待测样品液，第三反应液中还加入含有已知浓度的葡萄糖的标准样品液，37℃反应10-30min；
利用光学仪器分别检测反应后的所述第一反应液、第二反应液以及第三反应液的颜色深度，获得相应的检测信号，分别为a、b以及c；
通过公式计算待测样品液的浓度为((b-a)*y)/(c-b)，其中，y为已知葡萄糖的浓度，a为第一反应液的检测信号，b为第二反应液的信号，c为第三反应液的检测信号。
优选的，所述反应液中的酶为葡萄糖氧化酶、己激糖酶、葡萄糖激酶、醛糖还原酶、过氧化氢酶和葡萄糖-6-磷酸脫氢酶中的一种或几种。
优选的，所述反应液中的色原体为3,3',5,5'-四甲基联苯胺、3-羟基-2,4,6-三溴苯甲酸、3,5-二氯-2-羟基苯磺酸钠和4-氨基安替比林、氧化型辅酶II中的一种或几种。
本发明实施例用于确定体液葡萄糖水平方法的检测原理为：
原理一：如图1所示，待测样品液中的葡萄糖在葡萄糖氧化酶的作用下被氧化成葡糖醛酸，此反应过程中伴随着过氧化氢的生成。过氧化氢作为强氧化剂，在过氧化氢酶的作用下，可将3,3',5,5'-四甲基联苯胺、3-羟基-2,4,6-三溴苯甲酸或3,5-二氯-2-羟基苯磺酸钠等色原体氧化，致使其发生颜色变化。其中，较佳的，3-羟基-2,4,6-三溴苯甲酸或3,5-二氯-2-羟基苯磺酸钠的显色还需要在反应溶液中添加4-氨基安替比林，以达到更好的效果。最后，反应液的颜色的深度通过波长为370nm或652nm的吸光度来量化其浓度，并用来关联标准液中葡萄糖的浓度。
原理二：如图2所示，待测样品液中的葡萄糖在己激糖酶的作用下，以ATP为能量基质，被氧化磷酸化成葡萄糖-6-磷酸。葡萄糖-6-磷酸在葡萄糖-6-磷酸脱氢酶的作用下被转化成6-磷酸葡糖酸内脂。这一过程伴随着NADP+转化成为NADPH。其中，NADPH可以通过检测波长为340nm或470nm(荧光法，激发光为340nm)的吸光度来量化其浓度，并用来关联标准液中的葡萄糖浓度。
本发明实施例具有如下优点：
本发明实施例用于确定体液葡萄糖水平的反应液及方法，所述胶体制剂以比色/荧光分析法为基础，通过整合胶体制剂的成分，使整个检测载体在未与检测物质接触前，处于一种无色、透明的状态，有效地减少了非目标物质对光线的吸收和反射可能带来的信号损失或干扰，进一步增强了检测反应中成色与光反射、透射的效率，从而放大了检测灵敏度的窗口，从而提高了检测灵敏度与检测下限。同时，胶体制剂在应用中可以对很少量的液体样本产生信号，有效地避免了体液样本不易收集的困难。并提高了检测下限。
本发明实施例用于确定体液葡萄糖水平的方法还针对不同人体液生物环境的差异，制定了相应的检测形式，对体液样本检测信号值进行修正，并通过这种方法计算出体液样本中实际的葡萄糖浓度。实现了个性化的葡萄糖浓度信号生成，并提高了检测体系对体液样本生物环境多元化的适应性。利用所述检测胶体对唾液样本进行检测，通过颜色对比，可以直接用肉眼区分葡萄糖浓度差在100μM或以上的样本，方便快速获得定性实验结果。同时，所述检测胶体所需要的唾液样本量可以低至10μl，节约了收集唾液样本所需要的时间。
本发明实施例用于确定体液葡萄糖水平的方法不但可以省去单独建立线性关联的步骤，还考虑到了不同人体液样本生物环境的差异，降低了这一差异在计算样本中实际的葡萄糖浓度所能带来的干扰。
附图说明
为了更清楚地说明本发明的实施方式或现有技术中的技术方案，下面将对实施方式或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍。显而易见地，下面描述中的附图仅仅是示例性的，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据提供的附图引伸获得其它的实施附图。
图1为本发明实施例提供的检测原理一示意图；
图2为本发明实施例提供的检测原理二示意图。
具体实施方式
以下由特定的具体实施例说明本发明的实施方式，熟悉此技术的人士可由本说明书所揭露的内容轻易地了解本发明的其他优点及功效，显然，所描述的实施例是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
实施例1
本发明实施例中，反应液是将4U/ml葡萄糖氧化酶、0.1U/ml过氧化氢酶、0.416M3,3',5,5'-四甲基联苯胺、0.1M柠檬酸缓冲液，缓冲液的pH值为5.5，体积为50μl。
本发明实施例用于确定体液葡萄糖水平的方法包括以下步骤：
取上述三份反应液，分别为第一反应液、第二反应液和第三反应液,各50μl，且第一反应液不含有3,3',5,5'-四甲基联苯胺；
向所述第一反应液、第二反应液和第三反应液分别加入体积为50μl的待测唾液样品液，第三反应液中额外加入体积为1μl且浓度为4000μM的葡萄糖的标准样品液，37℃反应30min；
利用波长为652nm的光波分别检测反应后的所述第一反应液、第二反应液以及第三反应液的颜色深度，获得相应的检测信号，分别为a＝0.036、b＝0.228以及c＝0.349；第三反应液中额外加入的1μl葡萄糖标准液由于占整个反应溶液的比例很小，体积忽略不计，即整个反应体系添加了浓度近似于40μM的葡萄糖。
通过公式((b-a)*y)/(c-b)计算出待测唾液样品液的浓度为62.96μM。
实施例2
本发明实施例中，反应液是将20U/ml葡萄糖氧化酶、0.5U/ml过氧化氢酶、25mM 3-羟基-2,4,6-三溴苯甲酸、2.5mM 4-氨基安替比林、0.2M柠檬酸缓冲液，缓冲液的pH值为6.0，胶体制剂质量分数为5％的明胶溶液混合而成，体积为100μl。
本发明实施例用于确定体液葡萄糖水平的方法包括以下步骤：
取上述三份反应液，分别为第一反应液、第二反应液和第三反应液,各100μl，且第一反应液不含有3,5-二氯-2-羟基苯磺酸钠和4-氨基安替比林；
向所述第一反应液、第二反应液和第三反应液分别加入体积为100μl的待测唾液样品液，第三反应液中额外加入体积为1μl且浓度为8000μM的葡萄糖的标准样品液，37℃反应30min；
利用波长为520nm的光波分别检测反应后的所述第一反应液、第二反应液以及第三反应液的颜色深度，获得相应的检测信号，分别为a＝0.044、b＝0.316以及c＝0.574；第三反应液中额外加入的1μl溶液由于占整个反应溶液的比例很小，忽略不计，即整个反应体系添加了浓度近似于80μM的葡萄糖。通过公式((b-a)*y)/(c-b)计算出待测样品液的浓度为84.65μM。
实施例3
本发明实施例中，反应液是将20U/ml葡萄糖氧化酶、0.5U/ml过氧化氢酶、25mM 3,5-二氯-2-羟基苯磺酸钠、2.5mM 4-氨基安替比林、0.1M磷酸盐缓冲液，缓冲液的pH值为6.0，胶体制剂质量分数为4％的明胶溶液混合而成，体积为100μl。
本发明实施例用于确定体液葡萄糖水平的方法包括以下步骤：
取上述三份反应液，分别为第一反应液、第二反应液和第三反应液,各100μl，且第一反应液不含有3,5-二氯-2-羟基苯磺酸钠和4-氨基安替比林；
向所述第一反应液、第二反应液和第三反应液分别加入体积为100μl的待测唾液样品液，第三反应液中额外加入体积为1μl且浓度为4000μM的葡萄糖的标准样品液，37℃反应30min；
利用波长为520nm的光波分别检测反应后的所述第一反应液、第二反应液以及第三反应液的颜色深度，获得相应的检测信号，分别为a＝0.051、b＝0.537以及c＝0.779；第三反应液中额外加入的1μl溶液由于占整个反应溶液的比例很小，忽略不计，即整个反应体系添加了浓度近似于40μM的葡萄糖。通过公式((b-a)*y)/(c-b)计算出待测样品液的浓度为80.09μM。
实施例4
本发明实施例中，反应液是将0.3U己激糖酶、3mM ATP、0.3U葡萄糖-6-磷酸脱氢酶、0.3mM NADP+、10mM二氯化镁、0.2M三羟甲基氨基甲烷盐酸盐缓冲液，缓冲液的pH值为8.0，胶体制剂为质量分数为5％的海藻酸钠溶液混合而成。
本发明实施例用于确定体液葡萄糖水平的方法包括以下步骤：
取上述三份反应液，分别为第一反应液、第二反应液和第三反应液,各100μl，且第一反应液不含NADP+；
向所述第一反应液、第二反应液和第三反应液分别加入体积为100μl的待测唾液样品液，第三反应液中额外加入体积为1μl且浓度为4000μM的葡萄糖的标准样品液，37℃反应30min；
利用波长为340nm的光波分别检测反应后的所述第一反应液、第二反应液以及第三反应液的颜色深度，获得相应的检测信号，分别为a＝0.157、b＝0.319以及c＝0.476；第三反应液中额外加入的1μl溶液由于占整个反应溶液的比例很小，忽略不计，即整个反应体系添加了浓度近似于40μM的葡萄糖。通过公式((b-a)*y)/(c-b)计算出待测样品液的浓度为82.07μM。
本发明实施例1至实施例4中，光学检测仪器使用峰值落在紫外线A波段(320～400nm)、蓝光波段(450～485nm)、绿光波段(500～565nm)或红光波段(620～750nm)的光波，作为入射光，并分别测定相应波长光波在透射第一反应液、第二反应液以及第三反应液之后，吸光度被用来关联待测样本液中葡萄糖的浓度。由于不同的样本环境因素，如高盐、偏酸性，会对所述反应液检测体系中酶的活性产生不同程度的抑制作用，即使是浓度一定的葡萄糖在不同的样本环境中也会导致不同吸光度信号的生成。使用上述方法，将额外的已知浓度的葡萄糖，在基本不影响样本中各物质浓度、样本环境酸碱性的情况下，可以测得该额外添加的已知浓度的葡萄糖对应的吸光度信号值，之后通过结合三个反应液生成的信号值，可以更准确地反映样本中实际的葡萄糖水平。除此之外，该检测过程无需像传统的比色法单独准备一系列待检物质标准品，避免更多的人为操作。
本发明实施例1-4中的用于确定体液葡萄糖水平的方法，经制备后可以用透明的聚丙烯管承载或均匀覆盖在经如壳聚糖等胶体制剂包被的试纸条上。在检测开始之前，所述胶体应被预热至室温或37℃，以保证反应效率，从而达到节约检测时间的目的。
本发明实施例1-4中，光学检测仪器为酶标仪或分光光度计，以实现精准关联反应液颜色深度和吸光度的信号值。
本发明实施例1-4中，检测信号及待测样品液中葡萄糖的浓度测定结果如表1所示：
表1
本发明实施例关联样品液中的葡萄糖浓度通过以下方法实现：
至少包括三个反应液，第一反应液、第二反应液以及第三反应液，其中，将第一反应液中的色原体去掉，即使得第一反应液中不含有色原体，第三反应液中含有基本反应成分的基础上，在添加待测样品液的同时，添加了已知浓度的葡萄糖。第三反应液的葡萄糖浓度应尽可能接近相关体液中葡萄糖浓度范围内的某个值，这样可以保证葡萄糖浓度与待测样品液检测的第二反应液的颜色深度之间有更好的线性关联。
在检测过程中，三个反应液同时与等体积的待测样品液接触，发生反应，达到10-30min反应时间后，利用光学仪器进行检测，获得三个反应液生成的三个信号强度值a、b和c。该强度信号值的强度遵循比尔-朗伯定律(Beer–Lambert law)，即A＝i(λ)*j*k。其中，i(λ)为吸光度(波长为λ)，j为吸收系数，k为所分析对象基质的浓度。其中，a为不含色原体的第一反应液所生成的信号强度值，b为第二反应液所生成的信号强度值，c为添加微量额外葡萄糖的第三反应液反应所生成的信号强度值，所以a<b<c。根据这三个信号值计算体待测液体样本中实际的葡萄糖浓度。其中，假设第三反应液中，所添加的额外的葡萄糖的浓度为y，则待测样品液中的葡萄糖浓度通过以下公式计算出来：((b-a)*y)/(c-b)。
本发明实施例中，当反应液与等量体积的含有葡萄糖的样本接触后，在室温条件下，10-30min之后可以完成反应，利用原理一检测时，此时可以用肉眼判别颜色的深度。为了能更准确地推算出样本中检测目标的浓度，可以预先以已知浓度的葡萄糖的标准作为检测对象，分别进行检测，并将已经成色的反应液照相用图像分析软件对颜色深度进行量化，建立颜色深度与葡萄糖浓度之间的线性关联，并将这些关联作为参照，与实际检测结果相比较，或直接使用相关光学检测仪器，对反应液中的色原体进行直接量化，利用原理二检测时，省去图像截取与软件分析步骤。
上述待测样品液中葡萄糖浓度的计算方法是将已知浓度的葡萄糖加入到待测样品液中，并通过对比不添加额外葡萄糖的体液样本所生成的信号，使体液环境中的已知的葡萄糖浓度与检测信号对应，再通过该对应关系关联待测样品液中实际的葡萄糖浓度。由于个体之间的差异，每个人的体液所存在的生物环境都不同，如酸碱度、粘稠度、分子成分等。这些不一致的因素都会给检测结果带来不一样的偏差。上述检测方法，通过信号带入方法可以将潜在的信号干扰因素归一化，在一定程度上将提升检测准确度。
虽然，上文中已经用一般性说明及具体实施例对本发明作了详尽的描述，但在本发明基础上，可以对之作一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。
参考文献
1.Sener,A.et al.Salivary glucose concentration and excretion innormal and diabetic subjects.J.Biomed.Biotechnol.(2009).doi:10.1155/2009/430426
2.Gupta,S.,Sandhu,S.V.,Bansal,H.&Sharma,D.Comparison of salivary andserum glucose levels in diabetic patients.J.Diabetes Sci.Technol.(2015).doi:10.1177/1932296814552673
3.Mirzaii-Dizgah,I.,Mirzaii-Dizgah,M.-R.&Mirzaii-Dizgah,M.-H.Stimulated Saliva Glucose as a Diagnostic Specimen for Detection ofDiabetes Mellitus.J.Arch.Mil.Med.(2015).doi:10.5812/jamm.14609
4.Dhanya,M.&Hegde,S.Salivary glucose as a diagnostic tool in TypeIIdiabetes mellitus:A case-control study.Niger.J.Clin.Pract.(2016).doi:10.4103/1119-3077.183314
5.Gupta,S.et al.Correlation of salivary glucose level with bloodglucose level in diabetes mellitus.J.Oral Maxillofac.Pathol.(2017).doi:10.4103/jomfp.jomfp_222_15
6.Goodson,J.M.et al.The salivary microbiome is altered in thepresence of a high salivary glucose concentration.PLoS One(2017).doi:10.1371/journal.pone.0170437
7.Moyer,J.,Wilson,D.,Finkelshtein,I.,Wong,B.&Potts,R.CorrelationBetween Sweat Glucose and Blood Glucose in Subjects with Diabetes.DiabetesTechnol.Ther.(2012).doi:10.1089/dia.2011.0262
8.Harman-Boehm,I.et al.Noninvasive glucose monitoring:A novelapproach.in Journal of Diabetes Science and Technology(2009).doi:10.1177/193229680900300205

Claims (10)

1.一种用于确定体液葡萄糖水平的反应液，其特征在于，所述反应液包括酶、色原体、缓冲液以及胶体制剂混合而成；其中，所述酶用于与待测样品液中的葡萄糖反应获得反应产物；
所述色原体用于与所述反应产物反应形成具有可供仪器检测的可被特定波长光波识别的产物；
所述胶体制剂用于作为酶、色原体、缓冲液以及待测样品液的反应载体。
2.如权利要求1所述的用于确定体液葡萄糖水平的反应液，其特征在于，
所述酶为葡萄糖氧化酶、己激糖酶、葡萄糖激酶、醛糖还原酶、过氧化氢酶和葡萄糖-6-磷酸脫氢酶中的一种或几种。
3.如权利要求1所述的用于确定体液葡萄糖水平的反应液，其特征在于，
所述色原体为3,3',5,5'-四甲基联苯胺、3-羟基-2,4,6-三溴苯甲酸、3,5-二氯-2-羟基苯磺酸钠和4-氨基安替比林、NADP+中的一种或几种。
4.如权利要求1所述的用于确定体液葡萄糖水平的反应液，其特征在于，
所述缓冲液为磷酸盐缓冲液、乙酸钠、柠檬酸和三羟甲基氨基甲烷盐酸盐缓冲液中的一种或几种。
5.如权利要求4所述的用于确定体液葡萄糖水平的反应液，其特征在于，
所述缓冲液的pH在5.0～8.1之间。
6.如权利要求1所述的用于确定体液葡萄糖水平的反应液，其特征在于，
所述胶体制剂的溶质为海藻酸钠、明胶、壳聚糖、琼脂糖和丙烯酰胺中的一种或几种。
7.如权利要求6所述的用于确定体液葡萄糖水平的反应液，其特征在于，
所述胶体制剂的溶质质量分数为0.5％到10％。
8.一种应用权利要求1至7中任一项所述的反应液确定体液葡萄糖水平的方法，其特征在于包括以下步骤：
取至少三个反应液，分别为第一反应液、第二反应液和第三反应液，其中，所述第一反应液配制时，不含色原体；
向所述第一反应液、第二反应液、第三反应液分别加入等体积的待测样品液，第三反应液中还加入含有已知浓度的葡萄糖的标准样品液，37℃反应10-30min；
利用光学仪器分别检测反应后的所述第一反应液、第二反应液以及第三反应液的颜色深度，获得相应的检测信号，分别为a、b以及c；
通过公式计算待测样品液的浓度为((b-a)*y)/(c-b)，其中，y为已知葡萄糖的浓度，a为第一反应液的检测信号，b为第二反应液的信号，c为第三反应液的检测信号。
9.如权利要求8所述的方法，其特征在于，
所述反应液中的酶为葡萄糖氧化酶、己激糖酶、葡萄糖激酶、醛糖还原酶、过氧化氢酶和葡萄糖-6-磷酸脫氢酶中的一种或几种。
10.如权利要求8所述的方法，其特征在于，
所述反应液中的色原体为3,3',5,5'-四甲基联苯胺、3-羟基-2,4,6-三溴苯甲酸、3,5-二氯-2-羟基苯磺酸钠和4-氨基安替比林、氧化型辅酶II中的一种或几种。
CN201910641690.1A 2019-07-16 2019-07-16 一种用于确定体液葡萄糖水平的反应液及方法 Pending CN110398469A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201910641690.1A CN110398469A (zh) 2019-07-16 2019-07-16 一种用于确定体液葡萄糖水平的反应液及方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201910641690.1A CN110398469A (zh) 2019-07-16 2019-07-16 一种用于确定体液葡萄糖水平的反应液及方法

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN110398469A true CN110398469A (zh) 2019-11-01

Family

ID=68325649

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201910641690.1A Pending CN110398469A (zh) 2019-07-16 2019-07-16 一种用于确定体液葡萄糖水平的反应液及方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN110398469A (zh)

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101793703A (zh) * 2009-02-04 2010-08-04 苏州艾杰生物科技有限公司 乳糖诊断/测定试剂(盒)及乳糖浓度测定方法
CN102175670A (zh) * 2010-12-30 2011-09-07 北京九强生物技术股份有限公司 血液1,5-脱水葡萄糖醇的检测方法及试剂盒
CN103743738A (zh) * 2014-01-25 2014-04-23 福州大学 一种便携式葡萄糖测试管
CN109916894A (zh) * 2019-04-12 2019-06-21 吉林省汇酉生物技术股份有限公司 一种定量测定葡萄糖浓度的干化学试剂片及其制备方法

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101793703A (zh) * 2009-02-04 2010-08-04 苏州艾杰生物科技有限公司 乳糖诊断/测定试剂(盒)及乳糖浓度测定方法
CN102175670A (zh) * 2010-12-30 2011-09-07 北京九强生物技术股份有限公司 血液1,5-脱水葡萄糖醇的检测方法及试剂盒
CN103743738A (zh) * 2014-01-25 2014-04-23 福州大学 一种便携式葡萄糖测试管
CN109916894A (zh) * 2019-04-12 2019-06-21 吉林省汇酉生物技术股份有限公司 一种定量测定葡萄糖浓度的干化学试剂片及其制备方法

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
吉头杰 等: "含铝、汞工艺料液中微量铀的测定", 《中国核科学技术进展报告（第二卷）》 *
李凌: "《生物化学与分子生物学实验指导》", 31 August 2015, 人民军医出版社 *

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Soni et al. Smartphone based non-invasive salivary glucose biosensor
Montagnana et al. Overview on self-monitoring of blood glucose
US7004901B2 (en) Method and kit for the transdermal determination of analyte concentration in blood
TW592664B (en) Noninvasive transdermal systems for detecting an analyte in a biological fluid and methods
US20010023324A1 (en) Glucose detector and method for diagnosing diabetes
CN112292595B (zh) 用于检测和定量流体中氨和铵的系统和方法
CN109154564A (zh) 无创性血液分析
Wiener Whole blood glucose: what are we actually measuring?
Bader et al. Clinical significance of saliva urea and creatinine levels in patients with chronic kidney disease
Mrag et al. Saliva diagnostic utility in patients with type 2 diabetes: Future standard method
Bodington et al. Point-of-care testing technologies for the home in chronic kidney disease: a narrative review
Liu et al. Simultaneous quantitation from infrared spectra of glucose concentrations, lactate concentrations, and lecithin/sphingomyelin ratios in amniotic fluid
FI13179Y1 (fi) Laite aivovamman havaitsemiseksi kohteessa
Sudha et al. Quantification of sweat urea in diabetes using electro-optical technique
Wu et al. A new generation of sensors for non-invasive blood glucose monitoring
JPH09113439A (ja) 生体成分測定方法及びこれを用いた生体成分測定装置
CN110398469A (zh) 一种用于确定体液葡萄糖水平的反应液及方法
Hutter et al. Point-of-care and self-testing for potassium: Recent advances
US11254967B2 (en) Salivary urea nitrogen rapid detection
CN103725749A (zh) 一种1,5-脱水葡糖醇的氧化酶法测定方法
KR101300172B1 (ko) 혈액 분석용 광섬유 센서 장치
Cheng et al. A low-cost paper-based blood urea nitrogen optical biosensor for renal surveillance in fingertip blood
Woo et al. The advance of technology as a prelude to the laboratory of the twenty-first century
US7198756B2 (en) Non-invasive measurement of pH
Nakamoto et al. Correlation between saliva glycated and blood glycated proteins

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
RJ01 Rejection of invention patent application after publication
RJ01 Rejection of invention patent application after publication

Application publication date: 20191101