CN110393191A - 一种椰子提取物及其用途 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种椰子提取物，其特征在于，所述椰子提取物按重量份计，包括如下组成部分：乳酸:8.1wt％‑12.3wt％；十二烷基苯磺酸钠70.1wt％‑90.1wt％。本发明的有益效果在于：为核盘菌引起的菌核病的抑制和病情控制提供了一种低毒，抑制率高，抑菌时间短的椰子提取物。与现有的抑菌产品相比，本产品的优势还包括：消毒方式简单，采用的产品天然无残留。

Description

一种椰子提取物及其用途
技术领域
本发明涉及植物化学制剂领域，具体涉及一种椰子提取物及其用途。
背景技术
目前果桑产业在全国蓬勃发展，但桑椹菌核病(sclerote disease of mulberryfruit)严重影响桑葚的产量和质量，发生严重的年份甚至于造成绝收。桑椹菌核病是由真菌引起的一类桑树病害，病菌在桑树开花时开始侵入，最后桑树结实，病果呈灰白色，有臭味，失去其商品和食用价值。桑椹菌核病又称“白果病”。已知病原菌有桑实杯盘菌(Ciboriashiraiana)、肉阜状杯盘菌(Ciboria carunculoides)、桑椹核地杖菌 (Scleromitulashiraiana)和核盘菌(Sclerotinia sclerotiorum)。生产上普遍使用化学药剂如多菌灵等进行防治，但是化学药剂多数对人体均有一定的毒副作用，经常食用会影响身体健康。
核盘菌(Sclerotinia sclerotiorum)是一种危害作物和蔬菜的世界性的重要的植物病原菌。核盘菌可以广泛地侵染很多单子叶和双子叶植物。目前对菌核病的防治主要依靠化学农药，然而化学防治不仅成本高、污染环境，而且防效也不理想；同时，食品的安全性也受到严重影响。
如果能够找到一种物质对人体无害而又能够对病原菌起到很好的抑制作用，那么将能够对目前的果桑产业带来良好的发展前景。
发明内容
为了克服现有技术存在的上述缺陷，本发明的目的之一在于提供一种椰子提取物。
本发明的目的之二在于所述椰子提取物的用途。
为了实现本发明的目的之一，所采用的技术方案是：
一种椰子提取物，其中，所述椰子提取物按重量份计，包括如下组成部分：
乳酸:8.1wt％-12.3wt％；
十二烷基苯磺酸钠70.1wt％-90.1wt％。
在本发明的一个优选实施例中，所述乳酸包括L乳酸或DL乳酸。
为了实现本发明的目的之二，所采用的技术方案是：
一种椰子提取物的用途，其中，所述用途为对引起菌核病的病原菌核盘菌的抑制作用。
在本发明的一个优选实施例中，所述的抑制作用为，将所述椰子提取物稀释不超过500倍，并进行抑菌处理不低于3天。
在本发明的一个优选实施例中，所述的抑制作用为，将所述椰子提取物稀释不超过500倍，并进行抑菌处理不低于5天。
在本发明的一个优选实施例中，所述菌核病的侵染对象包括双子叶植物和单子叶植物。
在本发明的一个优选实施例中，所述的双子叶植物包括十字花科、菊科、豆科、茄科、伞形科、蔷薇科当中的任意一种。
在本发明的一个优选实施例中，所述的菌核病的侵染对象为桑葚。
本发明的有益效果在于：为核盘菌引起的菌核病的抑制和病情控制提供了一种低毒，抑制率高，抑菌时间短的椰子提取物。与现有的抑菌产品相比，本产品的优势还包括：消毒方式简单，采用的产品天然无残留。
附图说明
图1为从桑树分离鉴定的核盘菌示意图；
图2为椰子提取物对核盘菌的MIC测定结果示意图；
图3为椰子提取物对核盘菌菌丝生长的抑制效果示意图1；
图4为椰子提取物对核盘菌菌丝生长的抑制效果示意图2；
图5为椰子提取物对核盘菌菌丝生长的抑制效果示意图3。
具体实施方式
具体的实施例步骤如下：
1、材料与方法
1.1供试菌株
在中国农业科学院蚕业研究所桑树上采集发病的桑葚，将病原菌分离、纯化，根据桑葚菌核病主要病原的核糖体ITS序列设计引物，经 PCR扩增、测序、序列比对，鉴定分离纯化的病原菌为核盘菌 (Sclerotinia sclerotiorum)(见图1)。将鉴定好的病原菌在PDA 培养基上扩繁后放置于4℃冰箱保存。
1.2供试杀菌剂供试杀菌剂为椰子提取物，由海厄滋(上海)生物科技有限公司提供，商品名为“可食用的消毒液”。
1.3器材与试剂灭菌
将所需的器材、试管和水等在均121℃下灭菌20min备用。
1.4试验方法
1.4.1最小抑菌浓度(MIC)的测定
1.4.1.1试验用稀释液的配制取10.0ml杀菌剂原液加入52.5ml无菌水稀释，然后依次稀释五个浓度，最后得到 160.0、80.0、40.0、20.0、10.0、5.0μl/ml六个浓度的杀菌剂稀释液。1.4.1.2含药培养基的配制试验使用PDB培养基，配制500ml培养基需要土豆100g、葡萄糖10g、加水至 500ml。取18支试管，每支试管分装9ml培养基，然后121℃下灭菌20min。
在14支培养基中分别加入浓度为160.0、80.0、40.0、20.0、10.0、 5.0、5.0μl/ml的杀菌剂各1ml摇匀，每个浓度2个重复，最终制作成2 组不含药培养基和7组含药培养基，7组含药培养基药物最终浓度分别为16.0、8.0、4.0、2.0、1.0、0.5、0.5μl/ml(最后一组作为杀菌剂对照组)，分别为稀释62.5、125、250、500、1000、2000倍。
1.4.1.3菌种接种
使用打孔器在培养好的核盘菌上打孔取5mm的菌丝块，放入6组不同稀释倍数的含药培养基和1组不含药培养基中，形成6组实验组，1 组菌种对照，1组杀菌剂对照，1组PDB培养基对照，每组3个重复。
1.4.1.4培养与结果判定
将所有的培养试管放入25℃的恒温培养箱中培养，3d后开始观察菌种生长情况，而后每隔24h观察一次生长情况，5d时待实验组观察到明显的生长差别后，取样在显微镜下观察菌种生长情况确认结果。
1.4.2菌丝生长速率法测定杀菌剂对核盘菌的毒力
1.4.2.1含药培养基的配制
实验使用PDA培养基，配制500ml培养基需要土豆100g、葡萄糖10g、琼脂8～10g、加水至500ml。取9支大试管，每个试管装入36ml培养基，然后121℃下灭菌20min。
灭菌完成后待温度降至50℃左右取出，每支试管分装3个培养皿，分装前先在 7支试管内分别加入浓度为160.0、80.0、40.0、20.0、10.0、5.0、5.0μl/ml 的杀菌剂各4ml摇匀，最终制作成2组不含药培养基和7组含药培养基， 7组含药培养基药物最终浓度分别为16.0、8.0、4.0、2.0、1.0、0.5、 0.5μl/ml(最后一组作为杀菌剂对照组)。
1.4.2.2菌种接种使用打孔器在培养好的核盘菌上打孔取5mm的菌丝块，分别放入6组不同稀释倍数的含药培养基和1组不含药培养基中央，每个培养基上放一块，形成6组实验组，1组菌种对照，1组杀菌剂对照，1组PDA培养基对照，每组4个重复。
1.4.2.3培养与结果测定
将所有的培养皿放入25℃的恒温培养箱中培养，3d后使用十字交叉法测定菌落直径，每隔24h测定一次，与菌种对照组比较计算抑制生长率。抑制率＝(对照组菌落直径-实验组菌落直径)/(对照组菌落直径-菌块直径)×100％。
2、结果与分析
2.1椰子提取物对核盘菌的抑菌效果
5d观察到明显的生长差异，在显微镜下观察后确认的生长情况如表1。杀菌剂浓度为1.0μl/ml的实验组菌丝有少量的生长，浓度为0.5μl/ml 的实验组能够观察到明显的大量的菌丝，其他实验组均未发现有新菌丝的生长，可以判定杀菌剂在2.0μl/ml及以上浓度时有非常好的抑菌效果，最小抑菌浓度(MIC)为2.0μl/ml(即原液稀释500倍)(见图2)。
表1为椰子提取物对桑葚核盘菌的抑菌作用。
+-：核盘菌有少量生长。
2.1椰子提取物对核盘菌菌丝生长的抑制作用
培养时观察菌丝的生长情况，杀菌剂对照组和PDA培养基对照组均未发现杂菌污染，3d、4d、5d时分别测量菌落直径，菌种对照组和各处理组菌落生长状况及抑制率如下表2、3、4。
椰子提取物浓度为16.0、8.0、4.0、2.0μl/ml的处理组到培养5d 时均未发现有菌丝生长，抑制率均达到100％；1.0μl/ml的处理组在培养 3d、4d、5d时的抑制率分别为85.9％、80.6％和78.4％；0.5μl/ml的处理组在培养3d、4d、5d时的抑制率分别为59.5％、43.9％和41.0％。
说明2.0μl/ml及以上浓度的椰子提取物对核盘菌菌丝的生长具有优良的抑制作用。(见图3、4、5)
表2为培养3天各处理菌丝生长情况及抑制率
表2
表3为培养4天各处理菌丝生长情况及抑制率
表3
表4为培养5天各处理菌丝生长情况及抑制率
表4
3、结论
浓度为2.0μl/ml(500倍稀释)及以上的椰子提取物“可食用的消毒液”对核盘菌有明显的抑菌效果，可用于对桑葚菌核病的防治。该杀菌剂提取自自然生长的椰子，没有化学污染，对人体无害，可食用，除了对桑葚菌核病的防治，也可以推广到其他水果或经济作物的生产上，避免因菌核病而带来巨大的经济损失。

Claims (8)

1.一种椰子提取物，其特征在于，所述椰子提取物按重量份计，包括如下组成部分：
乳酸:8.1wt％-12.3wt％；
十二烷基苯磺酸钠70.1wt％-90.1wt％。
2.如权利要求1所述的一种椰子提取物，其特征在于，所述乳酸包括L乳酸或DL乳酸。
3.如权利要求1或2当中任意一项所述的一种椰子提取物的用途，其特征在于，所述用途为对引起菌核病的病原菌核盘菌的抑制作用。
4.如权利要求3所述的一种椰子提取物的用途，其特征在于，所述的抑制作用为，将所述椰子提取物稀释不超过500倍，并进行抑菌处理不低于3天。
5.如权利要求3所述的一种椰子提取物的用途，其特征在于，所述的抑制作用为，将所述椰子提取物稀释不超过500倍，并进行抑菌处理不低于5天。
6.如权利要求3所述的一种椰子提取物的用途，其特征在于，所述菌核病的侵染对象包括双子叶植物和单子叶植物。
7.如权利要求6所述的一种椰子提取物的用途，其特征在于，所述的双子叶植物包括十字花科、菊科、豆科、茄科、伞形科、蔷薇科当中的任意一种。
8.如权利要求3所述的一种椰子提取物的用途，其特征在于，所述的菌核病的侵染对象为桑葚。
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