CN110368525B - 一种用于附着龈重建的口腔膜及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种用于附着龈重建的口腔膜及其制备方法。该制备方法包括：(1)将去端肽I型胶原蛋白溶解于酸液中，配制成胶原蛋白酸液；(2)胶原蛋白酸液进行脱泡、冷冻干燥，得到海绵物；(3)将海绵物进行辊压，辊轮的温度设置为30～40℃，得到所述口腔膜。利用该方法制得的口腔膜的膜表面形成致密的光滑的薄膜，提高了其力学性能，可进行缝合，这种人工合成的软组织移植材料无需从患者自身采集组织，因此缩短了手术的时间，降低了并发症的发生率，最大程度上减少了疼痛。

Description

一种用于附着龈重建的口腔膜及其制备方法

技术领域

本发明涉及生物医用材料技术领域，尤其涉及一种用于附着龈重建的口腔膜及其制备方法。

背景技术

牙周组织由硬组织(如支撑牙齿的牙槽骨)和软组织(例如牙龈)构成，软组织包括附着于牙槽骨的附着龈和不附着于硬组织的游离龈。附着龈起自游离龈沟并延伸至膜龈联合与牙槽粘膜相接，因与游离龈均为角化牙龈，两者合称角化龈。足够的附着龈对维持天然牙或者种植牙周围的牙龈健康和防止结缔组织的丧失有重要的意义。患者角化龈或者附着龈不足，牙龈退缩，牙根暴露，影响美观；活动义齿修复时如果附着龈不足，会影响义齿固位力，甚至无法佩戴；种植修复时，附着龈宽度不足可导致种植体牙周龈等组织退缩，种植体暴露；正畸治疗中牙齿唇侧移动引起的唇颊侧牙槽骨快速吸收导致唇颊侧附着龈变窄、牙龈退缩等。可见附着龈不足是口腔多个学科会面临的问题。

常用的附着龈重建方法包括根向复位瓣术、游离牙龈移植及上皮下结缔组织移植等。根向复位瓣术技术要求高，切开过程中有贯通牙龈的风险，因为血管的严重受损可能导致组织坏死，缝合困难，术后肿胀，可能延缓二期愈合；牙种植体游离牙龈移植的软组织常来源于自体咀嚼粘膜，临床上多选择上颌尖牙远中至第一磨牙近中的硬腭黏膜，该粘膜能承受咀嚼压力和摩擦力，血供丰富，局部感染机会相对较少，切取后组织自生能力强，不影响美观，恢复后无异常感觉，术后并发症少，是优先考虑的组织供区，但是瓣供血差，不易成活，抗感染能力弱，瓣易吸收，且游离牙龈移植、上皮下结缔组织移植需要腭侧供区组织，造成二次软组织创伤。

因此发明一种合成人工材料，避免在上皮下结缔组织移植腭侧供区组织，减少给患者痛苦是亟待解决的问题。胶原是由多糖蛋白分子组成，是结缔组织的主要蛋白成分，占机体总蛋白的20％-30％。机体中大约一半的胶原蛋白存在于皮肤中，胶原蛋白占真皮和筋腱干重的70％，相当于体重的6％。以胶原为主要材料制备附着龈重建口腔薄膜能达到附着龈重建的目的。专利用于牙周软组织再生的组合物及其制备方法(公开号CN 101472622A)指出将底物基质材料为(1)透明质酸及其衍生物(2)胶原及其衍生物(3)血纤蛋白和血纤蛋白原(4)血浆和血小板中的一种或多种并混有间充质干细胞或牙龈成纤细胞以注射的方式注射到牙龈退缩区，能够很好的促进了附着龈及牙间乳头的再生，由于采用注射的方式要求具有一定的流动性，但是基质材料太多或太少时，都会损害注射时向组织的渗透，导致易于形成具有微小凸起和凹陷的注射部位形状和组织，影响附着龈的重建。

发明内容

本发明的目的在于提供一种用于附着龈重建的口腔薄膜及该薄膜的制备方法。薄膜的成分为I型胶原蛋白，此I型胶原蛋白经过去端肽处理，生物相容性好，降解速度可控，易于成型，并通过调节辊压机的温度，在膜表面形成致密的光滑的薄膜，提高了其力学性能，可进行缝合。这种人工合成的软组织移植材料无需从患者自身采集组织，因此缩短了手术的时间，降低了并发症的发生率，最大程度上减少了疼痛。

为了实现上述目的，本发明提供了如下技术方案：

1、一种用于附着龈重建的口腔膜的制备方法，包括如下步骤：

(1)将去端肽I型胶原蛋白溶解于酸液中，配制成胶原蛋白酸液；

(2)将胶原蛋白酸液进行脱泡、冷冻干燥，得到海绵物；

(3)将海绵物进行辊压，辊轮的温度设置为30～40℃，得到所述口腔膜。

2、根据技术方案1所述的制备方法，通过辊压得到厚度为0.8～1.5mm的口腔膜；和/或

通过辊压得到上表面和下表面均光滑的口腔膜。

3、根据技术方案1所述的制备方法，辊轮的温度设置为35±2℃。

4、根据技术方案1所述的制备方法，在所述胶原蛋白酸液中，所述去端肽I型胶原蛋白的质量百分浓度为0.5％～1.5％。

5、根据技术方案4所述的制备方法，用于溶解去端肽I型胶原蛋白的酸液选自醋酸溶液、盐酸溶液、硝酸溶液中的任一种或多种。

6、根据技术方案1所述的制备方法，所述去端肽I型胶原蛋白按照如下方法进行制备：

(a)将动物组织进行预处理；

(b)将预处理后的动物组织切割成片；

(c)将切割成片的动物组织置于脱脂液中浸泡；

(d)将经步骤(c)处理后的动物组织置于酸性溶液中，加入胃蛋白酶进行酶解；

(e)将酶解液进行离心，取离心后的上清液，使用盐溶液析出胶原蛋白絮状物；

(f)将胶原蛋白絮状物进行梯度透析，得到去端肽I型胶原蛋白。

7、根据技术方案6所述的制备方法，所述梯度透析包括如下步骤：

首先在pH＝3透析液中透析5～6天，每天更换一次透析液，然后在pH＝4透析液中透析5～6天，每天早晚更换两次透析液，最后在纯化水中透析1～2天。

8、根据技术方案6所述的制备方法，用于配制所述盐溶液的盐为氯化钠、氯化钾、碳酸钠、碳酸钾中的任一种或多种；

用于配制所述酸性溶液的酸为醋酸、柠檬酸、磷酸中的任一种或多种；和/或

所述脱脂液为碳酸氢钠溶液，浓度为0.5～5wt％。

9、根据技术方案6所述的制备方法，所述动物组织为皮肤和/或跟腱；

所述预处理包括去除脂肪和/或去除筋膜，然后冷冻。

10、一种用于附着龈重建的口腔膜，采用技术方案1至9任一项所述制备方法制得，所述口腔膜具有如下一个或多个性质：

所述口腔膜的成分为I型胶原蛋白；

所述口腔膜的上表面和下表面均光滑；

所述口腔膜的厚度为0.8～1.5mm；

所述口腔膜的降解周期为15～17天。

有益效果

本发明的上述技术方案具有如下优点：

本发明提供的一种附着龈重建口腔膜，通过改变辊压机辊轴的温度，优选35±2℃，制备出表面具有薄膜层的胶原膜，提高了薄膜的力学性能，避免了为提高力学强度采用化学交联时，交联剂的残留。

本发明提供了一种于附着龈重建口腔薄膜，该膜两面光滑，附着龈手术重建时，利于消灭无效腔，以及尽快使移植皮片再血管化。

本发明提供的一种附着龈重建薄膜，此薄膜是由I型胶原蛋白组成，胶原蛋白具有诸多优异的生物学性质，如低免疫性：胶原分子结构中的重复性单元大，免疫原性非常低，对机体无排异反应，亲和性好，一般生物机体不会对其产生慢性的排斥现象；较好的细胞适应性和促进细胞增殖作用：哺乳动物细胞外基质结构的骨架就是由胶原蛋白构成的，胶原蛋白在为细胞提供支撑和保护作用的同时也与细胞紧密粘附并与细胞的生长及表型表达有着密切关系。而且胶原蛋白之中富含二氨基二羧基氨基酸碳水化合物，这种物质具有很强的亲水性，十分适合成纤维细胞在此种基质上的生长与粘附。组织相容性：胶原蛋白本身就是构成细胞外基质起到支撑作用的骨架，所以胶原材料与细胞周围的基质有着良好的相容性，并成为细胞与组织正常生理功能整体的一部分，发挥着重要作用。

本发明提供的一种附着龈重建口腔薄膜，具有生物体内可降解性，降解周期为15～17天，而临床研究中软组织生长旺盛期为2周-3周，此膜降解速度与软组织生长速率相匹配。

本发明提供的一种附着龈重建口腔薄膜，代替在游离牙銀移植及上皮下结缔组织移植侧颚区自体软组织，避免了给患者造成的二次创伤。

附图说明

图1是本发明提供的制备方法的流程示意图；

图2是利用本发明提供的制备方法制得的口腔膜的外观形貌；

图3是利用本发明提供的制备方法制得的口腔膜的切面图；

图4是利用本发明提供的制备方法制得的口腔膜的电泳图；

图5是口腔膜的抗缝线强度测试图。

具体实施方式

为使本发明的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将结合本发明实施例，对本发明的技术方案进行清楚、完整地描述。显然，所描述的实施例是本发明的一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动的前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

本发明提供了一种用于附着龈重建的口腔膜的制备方法，参考图1，该制备方法包括如下步骤：

(1)将去端肽I型胶原蛋白溶解于酸液中，配制成胶原蛋白酸液；

(2)将胶原蛋白酸液进行脱泡、冷冻干燥，得到海绵物；

(3)将海绵物进行辊压，辊轮的温度设置为30～40℃，更优选为35±2℃，得到所述口腔膜。

本发明将冷冻干燥后得到的胶原海绵进行辊压，通过控制辊压时辊轮的温度在30～40℃(例如，可以为30℃、31℃、32℃、33℃、34℃、35℃、36℃、37℃、38℃、39℃、40℃，更优选为35±2℃)可以在将海绵压为薄膜，该薄膜的上表面和下表面均光滑。发明人在研究中发现，若是辊压时的温度过高(此处温度指的是辊轮的温度)，容易导致薄膜表面成分出现变性；若是温度过低，制备的薄膜容易浸泡后吸水，厚度变厚明显，植入口腔后患者异物感明显，舒适度下降。

利用该方法制得的口腔膜，可以通过控制辊压条件将口腔膜的厚度控制在0.8～1.5mm，例如，可以为0.8mm、0.9mm、1.0mm、1.1mm、1.2mm、1.3mm、1.4mm、1.5mm。

在本发明中，所用的去端肽I型胶原蛋白可以参考现有方法进行制备，也可以按照本发明提供的如下方法进行制备：

(a)将动物组织进行预处理；所用的动物组织可以为动物的皮肤，也可以为动物的跟腱，例如，可以为牛跟腱；这里的预处理包括去除脂肪和/或去除筋膜，然后将去除脂肪和/或去除筋膜的动物组织进行冷冻；

(b)将预处理后的动物组织切割成片，切割的薄片的厚度可以控制在0.8～1.0mm；

(c)将切割成片的动物组织置于脱脂液中浸泡；脱脂液可以选用现有技术已有的具有脱脂功能的试剂，本发明优选采用浓度为0.5～5wt％(例如，可以为0.5wt％、1wt％、1.5wt％、2wt％、2.5wt％、3wt％、3.5wt％、4wt％、4.5wt％、5wt％)的碳酸氢钠溶液；

(d)将经步骤(c)处理后的动物组织置于酸性溶液中，用于配制所述酸性溶液的酸可以选用醋酸、柠檬酸、磷酸中的任一种或多种，然后加入胃蛋白酶进行酶解，酶解温度优选为0～5℃，酶解时间可以控制在72～96小时；

(e)将获得的酶解液进行离心，取离心后的上清液，使用盐溶液析出胶原蛋白絮状物，用于配制所述盐溶液的盐可以选用氯化钠、氯化钾、碳酸钠、碳酸钾中的任一种或多种；

(f)将胶原蛋白絮状物进行透析，为了保证透析外液的环境变化比较温和避免透析外液变化过剧，从而引起透析内液中的胶原不可逆析出，本发明采用梯度透析的方式，逐渐降低外液乙酸的浓度，最后使用纯化水透析来完成胶原的提纯，得到去端肽I型胶原蛋白；

具体地，所述梯度透析可以按照如下方式进行：首先在pH＝3透析液中透析5～6天，每天更换一次透析液，然后在pH＝4透析液中透析5～6天，每天早晚更换两次透析液，最后在纯化水中透析1～2天。

在一些实施方式中，配制胶原蛋白酸液时，所用的去端肽I型胶原蛋白的质量占到胶原蛋白酸液的0.5％～1.5％，例如，可以为0.5wt％、1wt％、1.5wt％。即，在所述胶原蛋白酸液中，所述去端肽I型胶原蛋白的质量百分浓度为0.5％～1.5％。用于溶解去端肽I型胶原蛋白的酸液可以为醋酸溶液、盐酸溶液、硝酸溶液中的任一种或多种。浓度对材料的厚度有影响，浓度太低，获得的材料厚度太薄；浓度太高，获得的材料太厚。

本发明还提供了一种用于附着龈重建的口腔膜，采用本发明提供的所述制备方法制得，其外观形貌以及切面形貌参考图2和图3，所述口腔膜具有如下一个或多个性质：

所述口腔膜的成分为I型胶原蛋白；

所述口腔膜的上表面和下表面均光滑；

所述口腔膜的厚度为0.8～1.5mm；

所述口腔膜的降解周期为15～17天。

以下是本发明列举的实施例。

实施例1

步骤S-1：去除牛跟腱上的脂肪和筋膜，清洗，冷冻；

步骤S-2：将冷冻后的牛跟腱切割成薄片，薄片的厚度控制在0.8～1.0mm；

步骤S-3：将S-2切割后的薄片置于0.8wt％的碳酸氢钠溶液中浸泡24h进行脱脂，然后用纯化水进行清洗；

步骤S-4：将脱脂后的薄片加入到pH为1的醋酸溶液中，添加胃蛋白酶，在温度为0℃下酶解72h以去除端肽；

步骤S-5：将步骤S-4所得的酶解液使用离心机离心，取上清液，使用氯化钠溶液析出胶原蛋白絮状物；

步骤S-6：将步骤S-5中获得的胶原蛋白絮状物加入透析袋中透析，采用梯度透析的方式进行透析，逐渐降低外液乙酸的浓度，最后使用纯化水透析来完成胶原的提纯，梯度透析的具体步骤包括：首先在pH＝3透析液中透析6天，每天更换一次透析液，然后在pH＝4透析液中透析6天，每天早晚更换两次透析液，最后在纯化水中透析1天。

步骤S-7：制备的胶原蛋白溶于0.1M的醋酸溶液中，配制成质量百分比浓度为0.5％的胶原蛋白溶液，采用真空脱泡及低温离心并用的方式脱泡，再将处理的溶液进行冷冻干燥。

步骤S-8：将获得的海绵置于辊压机上，辊压机上两个辊轮的温度设置为30±2℃，得到两面光滑的I型胶原蛋白薄膜，厚度为1.0±0.2mm。

步骤S-9：根据临床需求对步骤S-9获得的I型胶原蛋白薄膜进行切割、修剪。

(一)口腔膜成分的确定

Ⅰ型胶原蛋白属于纤维性胶原，白色、透明、无分支，分子呈细棒状，长280nm，直径1.5nm，相对分子量为300kDa，由两条α1(Ⅰ)链和一条α2(Ⅰ)链组成，有时两条α链会彼此重叠形成一条β链，或者三条α链彼此重合形成一条γ链，因此可以说胶原分子有三条α链组成，或者一条α链一条β链组成，或者说胶原是由一条γ链构成。上述结果可以通过SDS-PAGE凝胶电泳测试得到验证。

配制8％分离胶和5％浓缩胶，准确称取10mg附着龈重建口腔薄膜溶于5mL3％乙酸中，与非还原性上样缓冲液混合后于90℃下反应5min，离心取上清，降至室温后上样10μL(彩虹marker上样5μL)，180V电压下通电2h后考马斯亮蓝染液染色过夜，再以10％乙酸脱色液脱色4h，纯水冲洗后经全自动凝胶成像系统进行图像分析。

从SDS-PAGE凝胶电泳检测结果(电泳图参考图4)中可以看出，在与标准品进行比较时，附着龈重建口腔薄膜是由I型胶原蛋白组成。

(二)端肽去除表征

1.样品处理

准确称取10mg样品溶于10mLNH₄HCO₃溶液(0.05mol/L，pH8.0)中，在100℃热变性处理5min，降至室温后加入50μL胰蛋白酶溶液(1μg/μL，0.05mol/LNH₄HCO₃，pH8.0)，混合均匀后于37℃恒温酶解18h，酶解产物直接进行HPLC-MS析。

2.分析条件

色谱柱：ZorbaxSB-C18300A；流动相：A：水(0.1％三氟乙酸)；B：乙腈(0.1％三氟乙酸)；梯度：0-5min，5％B；5-40min，5-40％B；40-80min，40-75％B；流速：0.2mL/min；质谱条件：ESI电离，喷雾电压4.5kV，鞘气(N₂)流速60arb(400kPa)，扫描范围(m/z)为400-1800，正离子监测模式，精确质量数扫描和二级质谱扫描均为数据依赖性扫描，二级质谱碰撞能量均为35％。

3.检测结果

将样品进行蛋白搜库，如表1所示：

表1样品总蛋白搜库结果

注：ProteinIDs为蛋白种类编号，牛I型胶原端肽蛋白编号为P02465及P02453。

根据表1的比对结果，附着龈重建口腔薄膜端肽检测结果如表2所示：

表2附着龈重建口腔薄膜端肽检测结果

检测项目	检测结果
		I-α<sub>1</sub>N末端端肽	未检出
I-α<sub>1</sub>C末端端肽	未检出
		I-α<sub>2</sub>N末端端肽	未检出
I-α<sub>2</sub>C末端端肽	未检出

(三)降解实验

分别取附着龈重建口腔薄膜及对照品海奥口腔修复膜(烟台正海生物科技有限公司)各0.0157g于15ml的离心管中，每个样品加入10ml的1Unit/ml胶原蛋白水解酶溶液(Collagenasesolution)，于37℃的恒温恒湿箱下反应降解，直到样品结构完全瓦解为止。于一定时间段取出，目视观察样品结构并进行记录，如表3所示。

表3. 1Unit/ml胶原蛋白水解酶溶液下海奥口腔膜与附着龈重建口腔膜的降解时间

产品	1Unit/ml降解时间(小时)
		海奥口腔膜	24
附着龈重建口腔膜	29

临床医生反馈海奥口腔膜降解周期为2周，根据1Unit/ml胶原蛋白水解酶溶液下海奥口腔膜与附着龈重建口腔膜的降解时间，估算附着龈重建口腔膜的降解时间为15～17天。

(四)抗缝线强度

取口腔膜10×10mm置于生理盐水中浸泡1min、漂洗后，用扁平夹子夹住一边5mm处，垂直悬挂在支架上，下边3mm处穿一3/0的线环，线环上加挂80g砝码，5min后，薄膜不断裂(如图5所示)。

实施例2

步骤S-1：去除牛跟腱上的脂肪和筋膜，清洗，冷冻；

步骤S-2：将冷冻后的牛跟腱切割成薄片，薄片的厚度控制在0.8～1.0mm；

步骤S-3：将S-2切割后的薄片置于0.9wt％的碳酸氢钠溶液中浸泡18h进行脱脂，然后用纯化水进行清洗；

步骤S-4：将脱脂后的薄片加入到pH为3的柠檬酸溶液中，添加胃蛋白酶，在温度为14℃下酶解72h以去除端肽；

步骤S-5：将步骤S-4所得的酶解液使用离心机离心，取上清液，使用碳酸钠溶液析出胶原蛋白絮状物；

步骤S-6：将步骤S-5中获得的胶原蛋白絮状物加入透析袋中透析，采用梯度透析的方式进行透析，逐渐降低外液乙酸的浓度，最后使用纯化水透析来完成胶原的提纯，梯度透析的具体步骤包括：首先在pH＝3透析液中透析6天，每天更换一次透析液，然后在pH＝4透析液中透析6天，每天早晚更换两次透析液，最后在纯化水中透析1天。

步骤S-7：制备的胶原蛋白溶于0.3M的醋酸溶液中，配制成质量百分比浓度为0.75％的胶原蛋白溶液，采用真空脱泡及低温离心并用的方式脱泡，再将处理的溶液进行冷冻干燥。

步骤S-8：将获得的海绵置于辊压机上，辊压机上两个辊轮的温度设置为35±2℃，得到两面光滑的I型胶原蛋白薄膜，厚度为0.9-1.1mm。

步骤S-9：根据临床需求对步骤S-9获得的I型胶原蛋白薄膜进行切割、修剪。

实施例3

步骤S-1：去除牛跟腱上的脂肪和筋膜，清洗，冷冻；

步骤S-2：将冷冻后的牛跟腱切割成薄片，薄片的厚度控制在1～2mm；

步骤S-3：将S-2切割后的薄片置于1.0wt％的碳酸氢钠溶液中浸泡12h进行脱脂，然后用纯化水进行清洗；

步骤S-4：将脱脂后的薄片加入到pH为5的磷酸溶液中，在温度为25℃下酶解96h以去除端肽；

步骤S-5：将步骤S-4所得的酶解液使用离心机离心，取上清液，使用氯化钾溶液析出胶原蛋白絮状物；

步骤S-6：将步骤S-5中获得的胶原蛋白絮状物加入透析袋中透析，采用梯度透析的方式进行透析，逐渐降低外液乙酸的浓度，最后使用纯化水透析来完成胶原的提纯，梯度透析的具体步骤包括：首先在pH＝3透析液中透析6天，每天更换一次透析液，然后在pH＝4透析液中透析6天，每天早晚更换两次透析液，最后在纯化水中透析1天。

步骤S-7：制备的胶原蛋白溶于0.5M的醋酸溶液中，配制成质量百分比浓度为1％的胶原蛋白溶液，采用真空脱泡及低温离心并用的方式脱泡，再将处理的溶液进行冷冻干燥。

步骤S-8：将获得的海绵置于辊压机上，辊压机上两个辊轮的温度设置为40±2℃，得到两面光滑的I型胶原蛋白薄膜，厚度为1.0-1.2mm。

步骤S-9：根据临床需求对步骤S-9获得的I型胶原蛋白薄膜进行切割、修剪。

对比例1

对比例1的制备方法同实施例1基本上相同，不同之处在于：

在步骤S-8中，辊压机上两个辊轮的温度设置为20±2℃。

利用该方法制得的薄膜材料容易在浸泡水后材料明显变厚，植入口腔后有异物感，影响患者舒服度。

对比例2

对比例2的制备方法同实施例1基本上相同，不同之处在于：

在步骤S-8中，辊压机上两个辊轮的温度设置为50±2℃。

利用该方法制得的薄膜材料表面的胶原蛋白发生变性。

最后应说明的是：以上实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对其限制；尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，本领域的普通技术人员应当理解：其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换；而这些修改或者替换，并不使相应技术方案的本质脱离本发明各实施例技术方案的精神和范围。

Claims (9)

1.一种用于附着龈重建的口腔膜的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)将去端肽I型胶原蛋白溶解于酸液中，配制成胶原蛋白酸液；

(2)将胶原蛋白酸液进行脱泡、冷冻干燥，得到海绵物；

(3)将海绵物进行辊压，辊轮的温度设置为30～40℃，得到所述口腔膜；

通过辊压得到厚度为0.8～1.5mm的口腔膜；和

通过辊压得到上表面和下表面均光滑的口腔膜。

2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，辊轮的温度设置为35±2℃。

3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，在所述胶原蛋白酸液中，所述去端肽I型胶原蛋白的质量百分浓度为0.5％～1.5％。

4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，用于溶解去端肽I型胶原蛋白的酸液选自醋酸溶液、盐酸溶液、硝酸溶液中的任一种或多种。

5.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述去端肽I型胶原蛋白按照如下方法进行制备：

(a)将动物组织进行预处理；

(b)将预处理后的动物组织切割成片；

(c)将切割成片的动物组织置于脱脂液中浸泡；

(d)将经步骤(c)处理后的动物组织置于酸性溶液中，加入胃蛋白酶进行酶解；

(e)将酶解液进行离心，取离心后的上清液，使用盐溶液析出胶原蛋白絮状物；

(f)将胶原蛋白絮状物进行梯度透析，得到去端肽I型胶原蛋白。

6.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，所述梯度透析包括如下步骤：

首先在pH＝3透析液中透析5～6天，每天更换一次透析液，然后在pH＝4透析液中透析5～6天，每天早晚更换两次透析液，最后在纯化水中透析1～2天。

7.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，用于配制所述盐溶液的盐为氯化钠、氯化钾、碳酸钠、碳酸钾中的任一种或多种；

用于配制所述酸性溶液的酸为醋酸、柠檬酸、磷酸中的任一种或多种；和/或

所述脱脂液为碳酸氢钠溶液，浓度为0.5～5wt％。

8.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，所述动物组织为皮肤和/或跟腱；

所述预处理包括去除脂肪和/或去除筋膜，然后冷冻。

9.一种用于附着龈重建的口腔膜，其特征在于，采用权利要求1至8任一项所述制备方法制得，所述口腔膜具有如下一个或多个性质：

所述口腔膜的成分为I型胶原蛋白；

所述口腔膜的上表面和下表面均光滑；

所述口腔膜的厚度为0.8～1.5mm；

所述口腔膜的降解周期为15～17天。

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