CN110358845A - 一种辨别牛肉产品物种来源的引物及方法 - Google Patents

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张龚炜
左福元
张文秀
吴雨徽
王玲
罗宗刚
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    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
    • C12Q1/6876—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes
    • C12Q1/6888—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for detection or identification of organisms

Abstract

本发明属于物种来源辨识技术领域，公开了一种辨别牛肉产品物种来源的引物及方法，所述辨别牛肉产品物种来源的引物为1组特异性识别牛S100A7基因的引物。将酚‑氯仿抽提法纯化的样品总DNA作为PCR检测的模板，制备20μL PCR反应体系，并按照反应程序实施PCR；用1.2％琼脂糖凝胶电泳检测PCR产物，将符合要求的PCR产物进行sanger测序；根据c.101G>A、c.114C>T、c.133G>A、c.141+14T>A处的4个变异位点基因型判定牛肉产品的物种来源。本发明通过在核基因水平上筛选出牦牛、黄牛、犏牛和水牛间的物种特异性变异位点，建立快速、准确的牛肉产品物种来源追溯方法。

Description

一种辨别牛肉产品物种来源的引物及方法
技术领域
本发明属于物种来源辨识技术领域，尤其涉及一种辨别牛肉产品物种来源的引物及方法。
背景技术
目前，最接近的现有技术：牦牛是我国青藏高原特有牛种，是藏族人民重要的生产生活资料。同时，利用黄牛和牦牛开展种间杂交，其杂交后代犏牛在产肉性能方面具有明显的杂种优势，对提高藏区牧民经济收入和缓解牧区载畜量方面起重要作用。由于牦牛、犏牛肉质优良、味美，高蛋白、低脂肪，且是天然绿色食品，其价格与其他牛肉存在较大差距。在牛肉产品市场上出现了很多用其他来源牛肉假冒牦牛肉产品的现象。因此，对牛肉产品的物种来源进行快速、准确的鉴别，是保证广大消费者权益的重要手段。
目前已知的牛肉物种来源追溯方法中，(1)《DNA barcoding reveals commercialfraud related toyakjerky sold in China》一文中对线粒体16S rRNA基因和细胞色素c基因(cytochrome c oxidase subunit 1)进行测序后分析来区分肉品来源；(2)《牦牛肉产品的分子追溯研究》论文、《一种鉴别牦牛肉干产品肉种来源的三重PCR-RFLP方法》专利中，通过在线粒体细胞色素b基因(472bp)区域发现牦牛、黄牛和水牛各自的特异性酶切位点，通过PCR后利用HgaI、ApaI和PflMI限制性内切酶进行三重酶切，根据酶切片段大小实现对牛肉产品的牦牛、黄牛和水牛来源鉴定。即通过三重PCR-RFLP分析，实现快速鉴别牦牛肉、黄牛肉和水牛肉。以上两种方法并未涉及对犏牛来源的分析。实际生产中，犏牛通常是利用黄牛为父本与牦牛为母本开展种间杂交而产生。由于线粒体基因具有母系遗传的特性，利用线粒体进行牛肉产品物种来源分析时，无法区分犏牛与牦牛来源。
综上所述，现有技术存在的问题是：由于线粒体基因具有母系遗传的特性，利用线粒体进行牛肉产品物种来源分析时，无法区分犏牛与牦牛来源。
发明内容
针对现有技术存在的问题，本发明提供了一种辨别牛肉产品物种来源的引物及方法。
本发明是这样实现的，一种辨别牛肉产品物种来源的引物，所述辨别牛肉产品物种来源的引物为1组特异性识别牛S100A7基因的引物(F:5’-AGTCTGCCAATCTCCTTCAC-3’，R:5’-CACACATTTTCCTACTTTGC-3’)。
本发明的另一目的在于提供一种使用所述辨别牛肉产品物种来源的引物的辨别牛肉产品物种来源的方法，所述辨别牛肉产品物种来源的方法包括以下步骤：
第一步，将酚-氯仿抽提法纯化的样品总DNA作为PCR检测的模板，制备20μL PCR反应体系，并按照反应程序实施PCR；
第二步，用1.2％琼脂糖凝胶电泳检测PCR产物，将符合要求的PCR产物进行sanger测序；根据c.101G>A、c.114C>T、c.133G>A、c.141+14T>A处的4个变异位点基因型判定牛肉产品的物种来源。
进一步，所述反应程序为94℃变性/25s，60℃退火/25s，72℃延伸反应/25s，30次循环。
综上所述，本发明的优点及积极效果为：本发明通过在核基因水平上筛选出牦牛、黄牛(包括瘤牛和普通牛)、犏牛(普通牛与牦牛杂交后代)和水牛间的物种特异性变异位点，建立快速、准确的牛肉产品物种来源追溯方法。
附图说明
图1是本发明实施例提供的辨别牛肉产品物种来源的方法流程图。
图2是本发明实施例提供的不同物种来源的S100A7基因序列变异情况示意图。
具体实施方式
为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。
下面结合附图对本发明的应用原理作详细的描述。
本发明实施例提供的辨别牛肉产品物种来源的引物1组特异性识别牛S100A7基因的引物。引物序列为SEQ ID NO：1。
F:5’-AGTCTGCCAATCTCCTTCAC-3’，
R:5’-CACACATTTTCCTACTTTGC-3’。
如图1所示，本发明实施例提供的辨别牛肉产品物种来源的方法包括以下步骤：
S101：将酚-氯仿抽提法纯化的样品总DNA作为PCR检测的模板，制备20μL PCR反应体系，并按照反应程序(94℃变性/25s，60℃退火/25s，72℃延伸反应/25s，30次循环)实施PCR；
S102：用1.2％琼脂糖凝胶电泳检测PCR产物，将符合要求的PCR产物利用R引物为测序引物进行单向sanger测序。根据c.101G>A、c.114C>T、c.133G>A、c.141+14T>A处的4个变异位点基因型判定牛肉产品的物种来源。
本发明实施例提供的辨别牛肉产品物种来源的方法包括以下步骤：在c.101G>A(图2的2289位置)、c.114C>T(图2的2276位置)、c.133G>A(图2的2257位置)、c.141+14T>A(图2的2235位置)四个变异位点中，黄牛基因型分别为GG\CC\GG\TT，牦牛基因型分别为AA\TT\AA\AA，而犏牛中则是这四个位点都处于杂合状态，即基因型为GA\CT\GA\TA。在水牛中，c.114C>T(2276)位点与牦牛和黄牛都不同，基因型为GG。因此，c.114C>T(2276)位点基因型可直接区分牛肉产品来源于牦牛(TT基因型)、黄牛(CC基因型)、犏牛(CT基因型)、水牛(GG基因型)，其余三个位点为牦牛特异性位点，可更加明确产品是否为纯正牦牛来源。
下面结合实验对本发明的技术效果作详细的描述。
利用本发明的方法，对已知物种来源的60个黄牛、60个牦牛、15个犏牛、20个水牛样本进行检测，这些样本完全符合上述不同物种所具有的特定基因型，即鉴别牛物种来源的准确率可达100％。
以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
序列表
<110> 西南大学
<120> 一种辨别牛肉产品物种来源的引物及方法
<160> 1
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 40
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 1
agtctgccaa tctccttcac cacacatttt cctactttgc 40

Claims (4)

1.一种辨别牛肉产品物种来源的方法，其特征在于，所述辨别牛肉产品物种来源的方法对c.101G>A、c.114C>T、c.133G>A、c.141+14T>A处的4个变异位点基因型判定物种来源。
2.如权利要求1所述的辨别牛肉产品物种来源的方法，其特征在于，所述辨别牛肉产品物种来源的方法包括以下步骤：
第一步，将酚-氯仿抽提法纯化的样品总DNA作为PCR检测的模板，制备20μL PCR反应体系，并按照反应程序实施PCR；
第二步，用1.2％琼脂糖凝胶电泳检测PCR产物，将符合要求的PCR产物利用R引物为测序引物进行单向sanger测序；根据c.101G>A、c.114C>T、c.133G>A、c.141+14T>A处的4个变异位点基因型判定牛肉产品的物种来源。
3.如权利要求2所述的辨别牛肉产品物种来源的方法，其特征在于，所述反应程序为94℃变性/25s，60℃退火/25s，72℃延伸反应/25s，30次循环。
4.一种如权利要求1所述辨别牛肉产品物种来源的方法使用的辨别牛肉产品物种来源的引物，其特征在于，所述辨别牛肉产品物种来源的引物为1组特异性识别牛S100A7基因的引物序列为SEQ ID NO：1。
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Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101712996A (zh) * 2009-12-14 2010-05-26 中国科学院昆明动物研究所 一种快速鉴别5种家畜肉和肉干制品种类的方法
CN105734160A (zh) * 2016-04-30 2016-07-06 江苏省家禽科学研究所 畜禽肉猪牛羊源性成分pcr鉴定用引物体系及pcr鉴定方法与试剂盒
CN106367496A (zh) * 2016-08-30 2017-02-01 中国科学院华南植物园 一套猕猴桃物种关联特异单核苷酸分子标记及其检测引物组和应用
CN106755341A (zh) * 2016-11-30 2017-05-31 中国农业科学院兰州畜牧与兽药研究所 一种牦牛与黄牛肉源性鉴别的方法
CN107201409A (zh) * 2017-07-24 2017-09-26 中国农业科学院农业质量标准与检测技术研究所 用于肉牛个体及肉品溯源鉴定的snp标记组合及其应用

Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101712996A (zh) * 2009-12-14 2010-05-26 中国科学院昆明动物研究所 一种快速鉴别5种家畜肉和肉干制品种类的方法
CN105734160A (zh) * 2016-04-30 2016-07-06 江苏省家禽科学研究所 畜禽肉猪牛羊源性成分pcr鉴定用引物体系及pcr鉴定方法与试剂盒
CN106367496A (zh) * 2016-08-30 2017-02-01 中国科学院华南植物园 一套猕猴桃物种关联特异单核苷酸分子标记及其检测引物组和应用
CN106755341A (zh) * 2016-11-30 2017-05-31 中国农业科学院兰州畜牧与兽药研究所 一种牦牛与黄牛肉源性鉴别的方法
CN107201409A (zh) * 2017-07-24 2017-09-26 中国农业科学院农业质量标准与检测技术研究所 用于肉牛个体及肉品溯源鉴定的snp标记组合及其应用

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
ZONGGANG LUO等: "Nonsynonymous DNA variation in the functional domain of the S100A7， ‐A8, ‐A9 genes in taurine cattle and yak", 《ANIMAL GENETICS》 *

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