CN110320362A - 死亡相关蛋白激酶1在制备皮肤癌术后预后评估试剂盒中的应用 - Google Patents

Abstract

本发明提供了死亡相关蛋白激酶1在制备皮肤癌术后预后评估试剂盒中的新应用。本发明人经过广泛而深入的研究，首次发现，采用免疫组化方法检测死亡相关蛋白激酶1在皮肤癌组织中的相对表达量，能够判断皮肤癌患者出现皮肤癌复发转移的风险。本发明的有益效果主要体现在：本发明提供了死亡相关蛋白激酶1在制备皮肤癌术后预后评估试剂盒中的应用，提示该蛋白能用于制备判断皮肤癌患者预后的蛋白质分子标记，对于皮肤癌病人术后监控和序贯治疗也具有重要的指导意义。

Description

死亡相关蛋白激酶1在制备皮肤癌术后预后评估试剂盒中的 应用

技术领域

本发明涉及死亡相关蛋白激酶1在制备皮肤癌术后预后评估试剂盒中的应用。

背景技术

皮肤癌即皮肤恶性肿瘤，根据肿瘤细胞的来源不同而有不同的命名，包括表皮、皮肤附属器、皮肤软组织、周围神经、黑素细胞、皮肤淋巴网状组织和造血组织等。还有一部分是发生在其他组织转移到皮肤的转移性肿瘤。

皮肤癌的发生发展及预后与癌基因的激活和抑癌基因功能失活密切关联，是多因素诱导，多基因参与的复杂病理过程。近年来，皮肤癌早期复发转移的分子机制是该领域的热门课题，深入阐明该分子机制，并在其特异性环节中导入靶向性治疗措施，有望很大幅度提高皮肤癌术后总体治疗效果。因此，探寻切实有效的皮肤癌皮肤切除术后早期复发相关预警分子标志，阐明其与皮肤癌早期复发转移的关系，这对提高皮肤癌术后治疗效果、评估皮肤癌早期复发风险、判断预后和个体化治疗有着至关重要的意义。

死亡相关蛋白激酶1是一种钙离子/钙调素调节的丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶，死亡相关蛋白激酶1可参与众多细胞内信号通路，调节细胞的增殖、凋亡、自噬、附着和失巢凋亡。从1995年发现至今，死亡相关蛋白激酶 1在癌症、中风以及心血管疾病中的作用正逐渐被揭示。研究发现死亡相关蛋白激酶1在p53突变或者缺失的乳腺癌细胞中可以促进乳腺癌细胞的增殖，而在p53野生型细胞中死亡相关蛋白激酶1却促进细胞凋亡。在癌症早期，死亡相关蛋白激酶1可以通过抑制细胞转化来阻止癌细胞扩散。

本发明研究发现在皮肤癌中的死亡相关蛋白激酶1表达与病人术后预后存在显著的关系，暗示死亡相关蛋白激酶1可作为皮肤癌的术后预后的有效预警蛋白。

皮肤癌做为对人类健康威胁最大的肿瘤之一，至今其发生的分子机制仍不清楚，对其的治疗也缺少特异性的分子靶点，而死亡相关蛋白激酶1 做为十分重要的肿瘤癌基因，目前尚无文献报道死亡相关蛋白激酶1与判断皮肤癌预后或皮肤癌转移相关。

发明内容

本发明目的是提供死亡相关蛋白激酶1在制备皮肤癌术后预后评估试剂盒中的新应用。

本发明采用的技术方案是：

死亡相关蛋白激酶1在制备皮肤癌术后预后评估试剂盒中的应用。

本发明人经过广泛而深入的研究，首次发现，采用免疫组化方法检测死亡相关蛋白激酶1在皮肤癌组织中的相对表达量，能够判断皮肤癌患者出现皮肤癌复发转移的风险。基于死亡相关蛋白激酶1表达量与皮肤癌复发转移的相关性，以该蛋白作为预后标记物对其表达量进行检测可以用于指导皮肤癌的预后判断，因此可将死亡相关蛋白激酶1作为分子标记，利用死亡相关蛋白激酶1单克隆抗体或多克隆抗体，结合免疫组化实验试剂，检测死亡相关蛋白激酶1在皮肤癌组织中的相对表达量。

所述试剂盒主要包括：人源死亡相关蛋白激酶1单克隆抗体或多克隆抗体、免疫组化实验试剂。所述免疫组化实验试剂为本领域免疫组化实验中的常用试剂。

发明人在发现，死亡相关蛋白激酶1在复发转移皮肤癌组织中表达低于未复发转移皮肤癌组织，可以推测死亡相关蛋白激酶1在皮肤癌术后复发转移发挥重要作用。查阅国内外文献，死亡相关蛋白激酶1与皮肤癌的发生以及复发转移的相关研究少，在本实验中，死亡相关蛋白激酶1在皮肤癌组织中的表达下调，而在癌旁和正常皮肤组织中则表达上调，且与未复发转移组相比，死亡相关蛋白激酶1在复发转移组中表达也下调，表明死亡相关蛋白激酶1可能作为促进因子参与皮肤癌发生发展过程。通过 Kaplan-Meier生存曲线分析，死亡相关蛋白激酶1表达程度与皮肤癌患者的预后有关，死亡相关蛋白激酶1低表达的患者预后不良(P<0.05)。

综上所述，死亡相关蛋白激酶1在皮肤癌组织中低表达，死亡相关蛋白激酶1的低表达与皮肤癌患者术后复发转移有关。死亡相关蛋白激酶1 可以作为皮肤癌预后的一个重要候选分子标记物。

优选的，所述人源死亡相关蛋白激酶1多克隆抗体由序列为SEQ ID NO.1所示的死亡相关蛋白激酶1免疫兔子获得，可自行制备，也可采用市购商品。

具体的，所述免疫组化实验试剂包括：二甲苯、乙醇、3％H₂O₂(水溶液)、3％BSA封闭液(以PBS配制)、DAB显色试剂、苏木素、辣根过氧化物酶(用于标记二抗)、PBS(pH7.4)、0.01M EDTA修复液。

本发明所述试剂盒的使用方法如下：

(a)病理标本来自于皮肤癌患者活检组织或术中、术后的病理取材。

(b)免疫组化方法利用SP染色法，具体步骤如下：

(c)制备皮肤癌组织石蜡切片，60℃烤箱过夜。

(d)切片脱腊。依次浸泡：二甲苯I：10min；二甲苯II：10min；二甲苯III：10min。

(e)切片水化。依次浸泡：无水乙醇：3min；90％(v/v)乙醇：3min； 80％乙醇：3min；75％乙醇：3min。

(f)PBS清洗3次，每次5min。

(h)EDTA抗原高压修复：切片放入0.01M EDTA修复液浸泡，沸水浴5min，冷却至室温。PBS清洗3次，每次5min。

(I)加入300μL的3％(w/w)过氧化氢水溶液，37℃10min。PBS清洗3次，每次5min。

(J)加入300μL的3％(w/w)BSA封闭液(PBS配制)，37℃1h。 PBS清洗3次，每次5min。

(K)加入一抗：死亡相关蛋白激酶1抗体浓度：1：500，4℃冰箱放置16h后取出，室温复温15min，然后PBS洗4次，每次5min。

(L)滴加二抗，所述的二抗为辣根过氧化物酶标记羊抗兔IgG(购自福州迈新试剂公司，即用型，无需稀释)，37℃45min。PBS洗4次，每次5min。

(M)PBS洗3次，每次5min。DAB(DAB显色试剂盒，购自上海生工)显色2-10min，镜下观察；双蒸水洗止显色，苏木素复染10s，用自来水冲洗浸泡。

(N)脱水。依次浸泡：75％乙醇:2min；80％乙醇：2min；90％乙醇： 2min；无水乙醇：2min。

(O)用电吹风吹干，加入中性树胶，盖玻片覆盖。

(P)利用显微镜和成像装置随机选取皮肤癌组织和癌旁组织3个视野拍摄，利用Aperio Image Scope软件对组织样本的相片进行扫描，扫描后采用该软件的Algorithms(Positive Pixel Count V9) 程序对每个样本进行阳性强度计算，计算数据如下：

(Q)每个组织样本的免疫组织化学评分计算为Positivity× Log10[255/Iavg]，其中Positivity＝NPositive/NTotal，即阳性率，计算方法为阳性象素数量/显色总数量；Iavg＝(Iwp+Ip+Isp)/(Nwp+Np+Nsp)，即阳性平均强度，计算方法为阳性平均强度＝(弱阳性象素总强度+阳性象素总强度+强阳性象素总强度)/(弱阳性象素数量+阳性象素数量+强阳性象素数量)，即为该组织的免疫组化评分，用于后续分析。

(L)采用SPSS18.0进行统计分析，检验指标与临床资料之间的计数资料采用Pearson卡方检验，计量资料采用t检验。检测指标与临床预后的分析采用KaPlan-Meier生存分析，对数秩和检验(log-ranktest)比较生存曲线的差别。本发明显示死亡相关蛋白激酶1与皮肤癌的预后具有显著的相关性，为预测皮肤癌的复发转移及术后的生存率提供一条全新途径，对皮肤癌患者的预后有重要作用。当癌组织死亡相关蛋白激酶1免疫组化评分低于0.347时，皮肤癌易出现复发转移，皮肤癌患者术后易死亡。

本发明的有益效果主要体现在：本发明提供了死亡相关蛋白激酶1 在制备皮肤癌术后预后评估试剂盒中的应用，提示该蛋白能用于制备判断皮肤癌患者预后的蛋白质分子标记，对于皮肤癌病人术后监控和序贯治疗也具有重要的指导意义。

附图说明

图1为死亡相关蛋白激酶1在皮肤癌患者术后无复发转移的组织样本中表达情况；

图2为死亡相关蛋白激酶1在皮肤癌患者术后复发转移的组织样本中表达情况；

图3为皮肤癌组织中死亡相关蛋白激酶1低表达组与高表达组生存曲线；

具体实施方式

下面结合具体实施例对本发明进行进一步描述，但本发明的保护范围并不仅限于此：

实施例1：

(a)病理标本来自于皮肤癌患者活检组织或术中、术后的病理取材。

(b)免疫组化方法利用SP染色法，具体步骤如下：

(c)制备皮肤癌组织石蜡切片，60℃烤箱过夜。

(d)切片脱腊。依次浸泡：二甲苯I：10min；二甲苯II：10min；二甲苯III：10min。

(e)切片水化。依次浸泡：无水乙醇：3min；90％(v/v)乙醇：3min； 80％乙醇：3min；75％乙醇：3min。

(f)PBS清洗3次，每次5min。

(h)EDTA抗原高压修复：切片放入0.01M EDTA修复液浸泡，沸水浴5min，冷却至室温。PBS清洗3次，每次5min。

(I)加入300μL的3％(w/w)过氧化氢水溶液，37℃10min。PBS清洗3次，每次5min。

(J)加入300μL的3％(w/w)BSA封闭液(PBS配制)，37℃1h。PBS 清洗3次，每次5min。

(K)加入一抗：死亡相关蛋白激酶1抗体浓度：1：500，4℃冰箱放置16h后取出，室温复温15min。PBS洗4次，每次5min。

(L)滴加二抗，所述的二抗为辣根过氧化物酶标记羊抗兔IgG(购自福州迈新试剂公司，即用型，无需稀释)，37℃45min。PBS洗4次，每次5min。

(M)PBS洗3次，每次5min。DAB(DAB显色试剂盒，购自上海生工)显色2-10min，镜下观察；双蒸水洗止显色，苏木素复染10s，用自来水冲洗浸泡。

(N)脱水。依次浸泡：75％乙醇：2min；80％乙醇：2min；90％乙醇：2min；无水乙醇：2min。

(O)用电吹风吹干，加入中性树胶，盖玻片覆盖。

(P)利用显微镜和成像装置随机选取皮肤癌组织和癌旁组织3个视野拍摄，利用Aperio Image Scope软件对组织样本的照片进行扫描，扫描后采用该软件的Algorithms(Positive Pixel Count V9) 程序对每个样本进行阳性强度计算，计算数据如下：

(Q)每个组织样本的免疫组织化学评分计算为Positivity× Log10[255/Iavg]，其中Positivity＝NPositive/NTotal，即阳性率，计算方法为阳性象素数量/显色总数量；Iavg＝(Iwp+Ip+Isp)/(Nwp+Np+Nsp)，即阳性平均强度，计算方法为阳性平均强度＝(弱阳性象素总强度+阳性象素总强度+强阳性象素总强度)/(弱阳性象素数量+阳性象素数量+强阳性象素数量)，即为该组织的免疫组化评分，用于后续分析。死亡相关蛋白激酶 1高低表达标准以30例皮肤癌组织中死亡相关蛋白激酶1表达评分的中位数(0.347)为界。

(L)采用SPSS18.0进行统计分析，检验指标与临床资料之间的计数资料采用Pearson卡方检验，计量资料采用t检验。检测指标与临床预后的分析采用KaPlan-Meier生存分析，对数秩和检验(log-ranktest)比较生存曲线的差别。

按照上述方法，本发明在30例皮肤癌病人的肿瘤组织中检测结果如图1-2所示：死亡相关蛋白激酶1无复发转移组中的表达(图1)高于复发转移组(图2)。

死亡相关蛋白激酶1与皮肤癌患者预后的关系：

通过Kaplan-Meier生存曲线分析，死亡相关蛋白激酶1的表达程度与皮肤癌患者的预后相关(图3)。

实施例2：

取某皮肤癌术后肿瘤样本进行石蜡包埋切片，并利用以上所述的免疫组织化学方法进行检测，经计算，其癌组织的死亡相关蛋白激酶1免疫组化组织评分为0.467。经过术后随访发现，该患者在术后第25个月发生皮肤癌复发转移，术后47个月死亡。

实施例3：

取某皮肤癌术后肿瘤样本进行石蜡包埋切片，并利用以上所述的免疫组织化学方法进行检测，经计算，其癌组织的死亡相关蛋白激酶1免疫组化组织评分为0.246。经过术后随访发现，该患者在术后3年均未发现转移复发，健在。

由以上试验结果可知，通过采用免疫组化的方法检测死亡相关蛋白激酶1分子相对表达量能预测皮肤癌远处转移风险以及患者术后的生存或死亡。当癌组织死亡相关蛋白激酶1的免疫组化评分低于0.347时，皮肤癌易出现复发转移，皮肤癌患者术后易死亡。显然死亡相关蛋白激酶1 与皮肤癌具有相关性，因此，以死亡相关蛋白激酶1作为蛋白质分子标记对其表达量进行检测能预测皮肤癌手术后复发转移等事件，并判断预后。

以上显示和描述了本发明的基本原理、主要特征和本发明的优点。本行业的技术人员应该了解，本发明不受上述实施例的限制，上述实施例和说明书中描述的只是说明本发明的原理，在不脱离本发明精神和范围的前提下本发明还会有各种变化和改进，这些变化和改进都落入要求保护的本发明范围内。本发明要求保护范围由所附的权利要求书及其等同物界定。

序列表

<110> 福建师范大学

<120> 死亡相关蛋白激酶1在制备皮肤癌术后预后评估试剂盒中的应用

<160> 1

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 1430

<212> PRT

<213> Human astrovirus

<400> 1

Met Thr Val Phe Arg Gln Glu Asn Val Asp Asp Tyr Tyr Asp Thr Gly

1 5 10 15

Glu Glu Leu Gly Ser Gly Gln Phe Ala Val Val Lys Lys Cys Arg Glu

20 25 30

Lys Ser Thr Gly Leu Gln Tyr Ala Ala Lys Phe Ile Lys Lys Arg Arg

35 40 45

Thr Lys Ser Ser Arg Arg Gly Val Ser Arg Glu Asp Ile Glu Arg Glu

50 55 60

Val Ser Ile Leu Lys Glu Ile Gln His Pro Asn Val Ile Thr Leu His

65 70 75 80

Glu Val Tyr Glu Asn Lys Thr Asp Val Ile Leu Ile Leu Glu Leu Val

85 90 95

Ala Gly Gly Glu Leu Phe Asp Phe Leu Ala Glu Lys Glu Ser Leu Thr

100 105 110

Glu Glu Glu Ala Thr Glu Phe Leu Lys Gln Ile Leu Asn Gly Val Tyr

115 120 125

Tyr Leu His Ser Leu Gln Ile Ala His Phe Asp Leu Lys Pro Glu Asn

130 135 140

Ile Met Leu Leu Asp Arg Asn Val Pro Lys Pro Arg Ile Lys Ile Ile

145 150 155 160

Asp Phe Gly Leu Ala His Lys Ile Asp Phe Gly Asn Glu Phe Lys Asn

165 170 175

Ile Phe Gly Thr Pro Glu Phe Val Ala Pro Glu Ile Val Asn Tyr Glu

180 185 190

Pro Leu Gly Leu Glu Ala Asp Met Trp Ser Ile Gly Val Ile Thr Tyr

195 200 205

Ile Leu Leu Ser Gly Ala Ser Pro Phe Leu Gly Asp Thr Lys Gln Glu

210 215 220

Thr Leu Ala Asn Val Ser Ala Val Asn Tyr Glu Phe Glu Asp Glu Tyr

225 230 235 240

Phe Ser Asn Thr Ser Ala Leu Ala Lys Asp Phe Ile Arg Arg Leu Leu

245 250 255

Val Lys Asp Pro Lys Lys Arg Met Thr Ile Gln Asp Ser Leu Gln His

260 265 270

Pro Trp Ile Lys Pro Lys Asp Thr Gln Gln Ala Leu Ser Arg Lys Ala

275 280 285

Ser Ala Val Asn Met Glu Lys Phe Lys Lys Phe Ala Ala Arg Lys Lys

290 295 300

Trp Lys Gln Ser Val Arg Leu Ile Ser Leu Cys Gln Arg Leu Ser Arg

305 310 315 320

Ser Phe Leu Ser Arg Ser Asn Met Ser Val Ala Arg Ser Asp Asp Thr

325 330 335

Leu Asp Glu Glu Asp Ser Phe Val Met Lys Ala Ile Ile His Ala Ile

340 345 350

Asn Asp Asp Asn Val Pro Gly Leu Gln His Leu Leu Gly Ser Leu Ser

355 360 365

Asn Tyr Asp Val Asn Gln Pro Asn Lys His Gly Thr Pro Pro Leu Leu

370 375 380

Ile Ala Ala Gly Cys Gly Asn Ile Gln Ile Leu Gln Leu Leu Ile Lys

385 390 395 400

Arg Gly Ser Arg Ile Asp Val Gln Asp Lys Gly Gly Ser Asn Ala Val

405 410 415

Tyr Trp Ala Ala Arg His Gly His Val Asp Thr Leu Lys Phe Leu Ser

420 425 430

Glu Asn Lys Cys Pro Leu Asp Val Lys Asp Lys Ser Gly Glu Met Ala

435 440 445

Leu His Val Ala Ala Arg Tyr Gly His Ala Asp Val Ala Gln Leu Leu

450 455 460

Cys Ser Phe Gly Ser Asn Pro Asn Ile Gln Asp Lys Glu Glu Glu Thr

465 470 475 480

Pro Leu His Cys Ala Ala Trp His Gly Tyr Tyr Ser Val Ala Lys Ala

485 490 495

Leu Cys Glu Ala Gly Cys Asn Val Asn Ile Lys Asn Arg Glu Gly Glu

500 505 510

Thr Pro Leu Leu Thr Ala Ser Ala Arg Gly Tyr His Asp Ile Val Glu

515 520 525

Cys Leu Ala Glu His Gly Ala Asp Leu Asn Ala Cys Asp Lys Asp Gly

530 535 540

His Ile Ala Leu His Leu Ala Val Arg Arg Cys Gln Met Glu Val Ile

545 550 555 560

Lys Thr Leu Leu Ser Gln Gly Cys Phe Val Asp Tyr Gln Asp Arg His

565 570 575

Gly Asn Thr Pro Leu His Val Ala Cys Lys Asp Gly Asn Met Pro Ile

580 585 590

Val Val Ala Leu Cys Glu Ala Asn Cys Asn Leu Asp Ile Ser Asn Lys

595 600 605

Tyr Gly Arg Thr Pro Leu His Leu Ala Ala Asn Asn Gly Ile Leu Asp

610 615 620

Val Val Arg Tyr Leu Cys Leu Met Gly Ala Ser Val Glu Ala Leu Thr

625 630 635 640

Thr Asp Gly Lys Thr Ala Glu Asp Leu Ala Arg Ser Glu Gln His Glu

645 650 655

His Val Ala Gly Leu Leu Ala Arg Leu Arg Lys Asp Thr His Arg Gly

660 665 670

Leu Phe Ile Gln Gln Leu Arg Pro Thr Gln Asn Leu Gln Pro Arg Ile

675 680 685

Lys Leu Lys Leu Phe Gly His Ser Gly Ser Gly Lys Thr Thr Leu Val

690 695 700

Glu Ser Leu Lys Cys Gly Leu Leu Arg Ser Phe Phe Arg Arg Arg Arg

705 710 715 720

Pro Arg Leu Ser Ser Thr Asn Ser Ser Arg Phe Pro Pro Ser Pro Leu

725 730 735

Ala Ser Lys Pro Thr Val Ser Val Ser Ile Asn Asn Leu Tyr Pro Gly

740 745 750

Cys Glu Asn Val Ser Val Arg Ser Arg Ser Met Met Phe Glu Pro Gly

755 760 765

Leu Thr Lys Gly Met Leu Glu Val Phe Val Ala Pro Thr His His Pro

770 775 780

His Cys Ser Ala Asp Asp Gln Ser Thr Lys Ala Ile Asp Ile Gln Asn

785 790 795 800

Ala Tyr Leu Asn Gly Val Gly Asp Phe Ser Val Trp Glu Phe Ser Gly

805 810 815

Asn Pro Val Tyr Phe Cys Cys Tyr Asp Tyr Phe Ala Ala Asn Asp Pro

820 825 830

Thr Ser Ile His Val Val Val Phe Ser Leu Glu Glu Pro Tyr Glu Ile

835 840 845

Gln Leu Asn Gln Val Ile Phe Trp Leu Ser Phe Leu Lys Ser Leu Val

850 855 860

Pro Val Glu Glu Pro Ile Ala Phe Gly Gly Lys Leu Lys Asn Pro Leu

865 870 875 880

Gln Val Val Leu Val Ala Thr His Ala Asp Ile Met Asn Val Pro Arg

885 890 895

Pro Ala Gly Gly Glu Phe Gly Tyr Asp Lys Asp Thr Ser Leu Leu Lys

900 905 910

Glu Ile Arg Asn Arg Phe Gly Asn Asp Leu His Ile Ser Asn Lys Leu

915 920 925

Phe Val Leu Asp Ala Gly Ala Ser Gly Ser Lys Asp Met Lys Val Leu

930 935 940

Arg Asn His Leu Gln Glu Ile Arg Ser Gln Ile Val Ser Val Cys Pro

945 950 955 960

Pro Met Thr His Leu Cys Glu Lys Ile Ile Ser Thr Leu Pro Ser Trp

965 970 975

Arg Lys Leu Asn Gly Pro Asn Gln Leu Met Ser Leu Gln Gln Phe Val

980 985 990

Tyr Asp Val Gln Asp Gln Leu Asn Pro Leu Ala Ser Glu Glu Asp Leu

995 1000 1005

Arg Arg Ile Ala Gln Gln Leu His Ser Thr Gly Glu Ile Asn Ile Met

1010 1015 1020

Gln Ser Glu Thr Val Gln Asp Val Leu Leu Leu Asp Pro Arg Trp Leu

1025 1030 1035 1040

Cys Thr Asn Val Leu Gly Lys Leu Leu Ser Val Glu Thr Pro Arg Ala

1045 1050 1055

Leu His His Tyr Arg Gly Arg Tyr Thr Val Glu Asp Ile Gln Arg Leu

1060 1065 1070

Val Pro Asp Ser Asp Val Glu Glu Leu Leu Gln Ile Leu Asp Ala Met

1075 1080 1085

Asp Ile Cys Ala Arg Asp Leu Ser Ser Gly Thr Met Val Asp Val Pro

1090 1095 1100

Ala Leu Ile Lys Thr Asp Asn Leu His Arg Ser Trp Ala Asp Glu Glu

1105 1110 1115 1120

Asp Glu Val Met Val Tyr Gly Gly Val Arg Ile Val Pro Val Glu His

1125 1130 1135

Leu Thr Pro Phe Pro Cys Gly Ile Phe His Lys Val Gln Val Asn Leu

1140 1145 1150

Cys Arg Trp Ile His Gln Gln Ser Thr Glu Gly Asp Ala Asp Ile Arg

1155 1160 1165

Leu Trp Val Asn Gly Cys Lys Leu Ala Asn Arg Gly Ala Glu Leu Leu

1170 1175 1180

Val Leu Leu Val Asn His Gly Gln Gly Ile Glu Val Gln Val Arg Gly

1185 1190 1195 1200

Leu Glu Thr Glu Lys Ile Lys Cys Cys Leu Leu Leu Asp Ser Val Cys

1205 1210 1215

Ser Thr Ile Glu Asn Val Met Ala Thr Thr Leu Pro Gly Leu Leu Thr

1220 1225 1230

Val Lys His Tyr Leu Ser Pro Gln Gln Leu Arg Glu His His Glu Pro

1235 1240 1245

Val Met Ile Tyr Gln Pro Arg Asp Phe Phe Arg Ala Gln Thr Leu Lys

1250 1255 1260

Glu Thr Ser Leu Thr Asn Thr Met Gly Gly Tyr Lys Glu Ser Phe Ser

1265 1270 1275 1280

Ser Ile Met Cys Phe Gly Cys His Asp Val Tyr Ser Gln Ala Ser Leu

1285 1290 1295

Gly Met Asp Ile His Ala Ser Asp Leu Asn Leu Leu Thr Arg Arg Lys

1300 1305 1310

Leu Ser Arg Leu Leu Asp Pro Pro Asp Pro Leu Gly Lys Asp Trp Cys

1315 1320 1325

Leu Leu Ala Met Asn Leu Gly Leu Pro Asp Leu Val Ala Lys Tyr Asn

1330 1335 1340

Thr Ser Asn Gly Ala Pro Lys Asp Phe Leu Pro Ser Pro Leu His Ala

1345 1350 1355 1360

Leu Leu Arg Glu Trp Thr Thr Tyr Pro Glu Ser Thr Val Gly Thr Leu

1365 1370 1375

Met Ser Lys Leu Arg Glu Leu Gly Arg Arg Asp Ala Ala Asp Phe Leu

1380 1385 1390

Leu Lys Ala Ser Ser Val Phe Lys Ile Asn Leu Asp Gly Asn Gly Gln

1395 1400 1405

Glu Ala Tyr Ala Ser Ser Cys Asn Ser Gly Thr Ser Tyr Asn Ser Ile

1410 1415 1420

Ser Ser Val Val Ser Arg

1425 1430

Claims (2)

1.死亡相关蛋白激酶1在制备皮肤癌术后预后评估试剂盒中的应用，其特征在于：以死亡相关蛋白激酶1作为分子标记，利用人源死亡相关蛋白激酶1单克隆抗体或人源死亡相关蛋白激酶1多克隆抗体，结合免疫组化实验试剂，检测死亡相关蛋白激酶1在皮肤癌组织中的相对表达量。

2.根据权利要求1所述的死亡相关蛋白激酶1在制备皮肤癌术后预后评估试剂盒中的应用，其特征在于：所述人源死亡相关蛋白激酶1多克隆抗体由序列为SEQ ID NO.1所示的死亡相关蛋白激酶1免疫兔子获得。