CN110317261A - 改进的两步超滤法生产人血白蛋白 - Google Patents
改进的两步超滤法生产人血白蛋白 Download PDFInfo
- Publication number
- CN110317261A CN110317261A CN201810260907.XA CN201810260907A CN110317261A CN 110317261 A CN110317261 A CN 110317261A CN 201810260907 A CN201810260907 A CN 201810260907A CN 110317261 A CN110317261 A CN 110317261A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- ultrafiltration
- human serum
- serum albumin
- molecule
- macromolecule
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 title claims abstract description 109
- 102000008100 Human Serum Albumin Human genes 0.000 title claims abstract description 40
- 108091006905 Human Serum Albumin Proteins 0.000 title claims abstract description 40
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims abstract description 33
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims abstract description 33
- 229920002521 macromolecule Polymers 0.000 claims abstract description 24
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims abstract description 22
- 241000700605 Viruses Species 0.000 claims abstract description 12
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 claims abstract description 12
- 239000012528 membrane Substances 0.000 claims abstract 2
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 19
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 claims description 18
- 238000000926 separation method Methods 0.000 claims description 15
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 14
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 14
- 150000003384 small molecules Chemical class 0.000 claims description 13
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 11
- 235000019441 ethanol Nutrition 0.000 claims description 9
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 9
- 239000008215 water for injection Substances 0.000 claims description 9
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 claims description 7
- 102000009027 Albumins Human genes 0.000 claims description 6
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 claims description 6
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 claims description 6
- 239000008280 blood Substances 0.000 claims description 6
- 238000011049 filling Methods 0.000 claims description 6
- 239000012460 protein solution Substances 0.000 claims description 6
- AZDRQVAHHNSJOQ-UHFFFAOYSA-N alumane Chemical group [AlH3] AZDRQVAHHNSJOQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 3
- 230000006835 compression Effects 0.000 claims 1
- 238000007906 compression Methods 0.000 claims 1
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 claims 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims 1
- 238000003825 pressing Methods 0.000 claims 1
- 238000011100 viral filtration Methods 0.000 claims 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 abstract description 5
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 abstract description 3
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 2
- 239000000047 product Substances 0.000 description 11
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 4
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 4
- ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N Potassium Chemical compound [K] ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000008021 deposition Effects 0.000 description 2
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 2
- 230000003204 osmotic effect Effects 0.000 description 2
- 238000009928 pasteurization Methods 0.000 description 2
- 229910052700 potassium Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000011591 potassium Substances 0.000 description 2
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 2
- 229910001415 sodium ion Inorganic materials 0.000 description 2
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 2
- 239000013589 supplement Substances 0.000 description 2
- 230000002016 colloidosmotic effect Effects 0.000 description 1
- 230000000994 depressogenic effect Effects 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 235000013601 eggs Nutrition 0.000 description 1
- 230000029142 excretion Effects 0.000 description 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 108010013207 macro aggregates of albumin Proteins 0.000 description 1
- 238000012856 packing Methods 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 230000006641 stabilisation Effects 0.000 description 1
- 238000011105 stabilization Methods 0.000 description 1
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/76—Albumins
- C07K14/765—Serum albumin, e.g. HSA
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Zoology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Separation Using Semi-Permeable Membranes (AREA)
Abstract
本发明涉及一种人血白蛋白的超滤工艺改进，可以有效的去除人血白蛋白产品中的高分子杂蛋白及多聚体分子。在巴氏病毒灭活前后分别采用分子截留量较高（80KD至100KD）、较小（10KD至30KD）的超滤膜进行2‑3次的超滤生产。收集含有人血白蛋白的滤过液、浓缩液作为产品。由于减少了高分子杂蛋白、蛋白多聚体的干扰，保证了产品有效期内的产品品质，使用疗效更有保障。
Description
技术领域
本专利属于生物制药领域，提供了一种改进的人血白蛋白生产的超滤法工艺，可以有效的去除人血白蛋白产品中的高分子杂蛋白及多聚体分子。
背景技术
《中国药典》（2015年版）中关于人血白蛋白的指标如下：成品检定项下3.3.3.7 多聚体含量，按3121人血白蛋白多聚体测定法测试，应不高于5%。多年来，该指标的法定标准没有变化。
由于含多聚体的白蛋白制品被注入人体后，可导致血液中白蛋白胶体渗透压下降，在体内排泄加快，正常人体血液中并不存在白蛋白多聚体。所以有必要有效的控制和减少人血白蛋白产品中的多聚体含量，目前采用的低温乙醇法生产工艺，人血白蛋白产品中多聚体含量一般为2.5%至3.5%之间。
吴敬林的研究文章“不同条件巴氏消毒和热稳定试验对人血白蛋白多聚体的影响”（医学文选，2000年06期）指出：人血白蛋白巴氏消毒过程和人血白蛋白成品贮存过程中的蛋白浓度时导致多聚体的含量增加的重要原因，在生产中应采用10%蛋白浓度进行巴氏消毒和分装，当采用20%浓度时，选用pH6.6，辛酸钠浓度为0.18mmol/克蛋白为最佳。
目前的生产工艺中没有针对于控制多聚体含量的方法，为此，有必要开发一种专门控制人血白蛋白产品中多聚体含量的方法。
发明内容
本专利的人血白蛋白超滤生产明确进行了多个超滤步骤的超滤生产，主要目的是去除人血白蛋白生产过程中可能形成的多聚体分子及大分子的杂蛋白。
本专利以目前人血白蛋白的超滤工艺（超滤膜截留分子量为10KD至30KD的超滤生产9遍）为基础，在超滤前及别是病毒灭活后在进行针对高分子杂蛋白及人血白都加了多聚体分离的超滤生产步骤，采用的超滤截留分子量为80KD至100KD。本专利的人血白蛋白的超滤生产过程如下：
第一步超滤分离为（去除高分子杂蛋白）：采用高分子截留量（如80KD至100KD）超滤除去高分子杂蛋白，按照超滤的平均速度计算，将拟去除的高分子溶液超滤1至10遍，确保高分子蛋白溶液中几乎没有人血白蛋白分子。
第二步超滤分离为（去除小分子蛋白及乙醇等小分子物质）：采用低分子截留量（如10KD至30KD）超滤除去小分子杂蛋白及小分子如乙醇及铝残留物，前3至6次为相同温度等体积的0.9%氯化钠溶液超滤，后3至6次为相同温度等体积的注射用水超滤，超滤完成后，进行超滤浓缩，浓缩至所需要的蛋白质浓度，如人血白蛋白浓度为20至30%。
第三步超滤分离（去除多聚体）为：巴氏病毒灭活后再次超滤去除多聚体分子，超滤完成并搅拌均匀后除菌灌装。
由于第一次超滤和第三次超滤是针对高分子及多聚体之类的分子量较正常白蛋白分子大的物质，所以可以将第一步超滤生产与第三步超滤生产合并，在白蛋白巴氏病毒灭活后进行超滤，超滤完成并搅拌均匀后除菌灌装。
采用本专利的超滤工艺，可以有效的去除人血白蛋白产品中的高分子杂蛋白及白蛋白的多聚体，提高人血白蛋白的稳定性，有效的保证产品有效期内的产品质量和使用疗效。
实施实例
实施实例1：三步超滤法生产人血白蛋白
以人血白蛋白生产的组分V沉淀纯化液为开始，组织人血白蛋白的超滤生产。
第一步超滤分离为（去除高分子杂蛋白）：采用高分子截留量（如80KD至100KD）超滤除去高分子杂蛋白，按照超滤的平均速度计算，将拟去除的高分子溶液用里一个罐体收集，超滤后补充相同温度的注射用水连续超滤1至10遍，确保高分子蛋白溶液中几乎没有人血白蛋白分子。用一个密闭的罐体收集超滤的滤过液。
超滤的浓缩液、滤过液可以分别用不同的罐体收集，也可以将浓缩液返回至超滤出罐，超滤至一定浓度后补充相同温度的注射用水继续进行超滤，连续2至10遍。
第二步超滤分离为（去除小分子蛋白及乙醇等小分子物质）：采用低分子截留量（如10KD至30KD）超滤除去小分子杂蛋白及小分子如乙醇及铝残留物，前3至6次为相同温度等体积的0.9%氯化钠溶液超滤，后3至6次为相同温度等体积的注射用水超滤，超滤完成后，进行超滤浓缩，浓缩至所需要的蛋白质浓度，如人血白蛋白浓度为20至30%。
这一步的超滤过程在一个密闭罐体内完成，超滤生产至超滤前蛋白溶液体积的50%后补充相同温度等体积的0.9%氯化钠溶液或者注射用水后再次启动超滤生产，连续进行不少于6次的超滤。
第三步超滤分离（去除多聚体）为：巴氏病毒灭活后再次超滤，采用高分子截留量（如80KD至100KD）超滤除去高分子的蛋白多聚体，超滤完成并搅拌均匀后除菌灌装。
用一个密闭的罐体收集超滤的滤过液，搅拌均匀后续复测产品的钾、钠离子含量及渗透压摩尔浓度。
上述产率过程涉及到病毒灭活前后的两个生产阶段，需注意病毒灭活前后的设备设施严格分开，最好是分区域进行。
实施实例2：两步超滤法生产人血白蛋白
以人血白蛋白生产的组分V沉淀纯化液为开始，组织人血白蛋白的超滤生产。
第一步超滤分离为（去除小分子蛋白及乙醇等小分子物质）：采用低分子截留量（如10KD至30KD）超滤除去小分子杂蛋白及小分子如乙醇及铝残留物，前3至6次为相同温度等体积的0.9%氯化钠溶液超滤，后3至6次为相同温度等体积的注射用水超滤，超滤完成后，进行超滤浓缩，浓缩至所需要的蛋白质浓度，如人血白蛋白浓度为20至30%。
这一步的超滤过程在一个密闭罐体内完成，超滤生产至超滤前蛋白溶液体积的50%后补充相同温度等体积的0.9%氯化钠溶液或者注射用水后再次启动超滤生产，连续进行不少于6次的超滤。
这一步超滤是目前的人血白蛋白生产的常规超滤工序控制。
第二步超滤分离（去除高分子杂蛋白及多聚体）为：巴氏病毒灭活后再次超滤，采用高分子截留量（如80KD至100KD）超滤除去高分子杂蛋白及高分子的蛋白多聚体，超滤完成并搅拌均匀后除菌灌装。
用一个密闭的罐体收集超滤的滤过液，搅拌均匀后续复测产品的钾、钠离子含量及渗透压摩尔浓度。
上述产率过程涉及到病毒灭活前后的两个生产阶段，需注意病毒灭活前后的设备设施严格分开，最好是分生产区域进行。
Claims (3)
1.本专利提供了一种人血白蛋白的超滤分离法，其特征在于：分别采用分子截留量较高（80KD至100KD）、较小（10KD至30KD）的超滤膜进行2-3次的超滤生产，以有效的去处人血白蛋白生产中的高分子杂蛋白及热处理过程中形成的多聚体。
2.按权利要求1，人血白蛋白两步超滤法生产的第一步超滤分离为：采用高分子截留量（如80KD至100KD）超滤除去高分子杂蛋白，按照超滤的平均速度计算，将拟去除的高分子溶液超滤1至10遍，确保高分子蛋白溶液中几乎没有人血白蛋白分子；第二步超滤分离为：采用低分子截留量（如10KD至30KD）超滤除去小分子杂蛋白及小分子如乙醇及铝残留物，前3至6次为相同温度等体积的0.9%氯化钠溶液超滤，后3至6次为相同温度等体积的注射用水超滤，超滤完成后，进行超滤浓缩，浓缩至所需要的蛋白质浓度，如人血白蛋白浓度为20至30%；第三步超滤分离为：巴氏病毒灭活后再次超滤去除多聚体分子，超滤完成并搅拌均匀后除菌灌装。
3.按权利要求1，以去除人血白蛋白产品中多聚体含量为目的的人血白蛋白两步超滤法生产的第一步超滤分离为：采用低分子截留量（如10KD至30KD）超滤除去小分子杂蛋白及小分子如乙醇及铝残留物，前3至6次为相同温度等体积的0.9%氯化钠溶液超滤，后3至6次为相同温度等体积的注射用水超滤，超滤完成后，进行超滤浓缩，浓缩至所需要的蛋白质浓度，如人血白蛋白浓度为20至30%，第二步超滤分离为：60℃10小时巴氏病毒灭活后采用高分子截留量（如80KD至100KD）超滤除去高分子杂蛋白，按照超滤的平均速度计算，将拟去除的高分子溶液超滤1至10遍，确保高分子蛋白溶液中几乎没有人血白蛋白分子，之后再次进行人血白蛋白产品的配制，配制完成后进行除菌灌装。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201810260907.XA CN110317261A (zh) | 2018-03-28 | 2018-03-28 | 改进的两步超滤法生产人血白蛋白 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201810260907.XA CN110317261A (zh) | 2018-03-28 | 2018-03-28 | 改进的两步超滤法生产人血白蛋白 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN110317261A true CN110317261A (zh) | 2019-10-11 |
Family
ID=68109640
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201810260907.XA Pending CN110317261A (zh) | 2018-03-28 | 2018-03-28 | 改进的两步超滤法生产人血白蛋白 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN110317261A (zh) |
Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20140094411A1 (en) * | 2012-10-03 | 2014-04-03 | Csl Behring Llc | Method of purifying proteins |
| CN105037487A (zh) * | 2015-08-12 | 2015-11-11 | 山东泰邦生物制品有限公司 | 一种人血白蛋白的制备方法 |
| CN105722583A (zh) * | 2014-02-06 | 2016-06-29 | 甘布罗伦迪亚股份公司 | 用于血液净化的膜 |
| CN107216383A (zh) * | 2017-07-13 | 2017-09-29 | 同路生物制药有限公司 | 一种人血白蛋白的制备方法及该人血白蛋白 |
-
2018
- 2018-03-28 CN CN201810260907.XA patent/CN110317261A/zh active Pending
Patent Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20140094411A1 (en) * | 2012-10-03 | 2014-04-03 | Csl Behring Llc | Method of purifying proteins |
| CN105722583A (zh) * | 2014-02-06 | 2016-06-29 | 甘布罗伦迪亚股份公司 | 用于血液净化的膜 |
| CN105037487A (zh) * | 2015-08-12 | 2015-11-11 | 山东泰邦生物制品有限公司 | 一种人血白蛋白的制备方法 |
| CN107216383A (zh) * | 2017-07-13 | 2017-09-29 | 同路生物制药有限公司 | 一种人血白蛋白的制备方法及该人血白蛋白 |
Non-Patent Citations (3)
| Title |
|---|
| HOLST, S.等: "Ultrafiltration as an Alternative to Reprecipitation and Lyophilization in Cohn Fractionation", 《ULTRAFILTRATION MEMBRANES AND APPLICATIONS》 * |
| 中国科学院上海生物化学研究所三室: "超滤法及其应用", 《生物化学与生物物理进展》 * |
| 杨晓波等: "人血白蛋白提取工艺的对比分析与改进方案", 《生命科学仪器》 * |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US11292827B2 (en) | Method for producing high-concentration collagen for using as medical material | |
| EP3228625B1 (en) | Preparation method for water-soluble conchiolin and acid-soluble conchiolin | |
| CN107868808B (zh) | 一种提高燕窝唾液游离酸的方法 | |
| CN105018555A (zh) | 一种大鲵皮胶原蛋白肽的制备方法 | |
| CN104513843B (zh) | 一种多糖和蛋白肽的联合制备方法 | |
| CN103333240B (zh) | 从组分ⅳ沉淀中回收人血白蛋白的方法 | |
| US7851441B2 (en) | Water-soluble elastin, process for producing same, and food and medicine containing same | |
| CN102241771B (zh) | 一种防治雏鸭病毒性肝炎的鸭卵黄抗体及制备方法 | |
| JP2014521415A (ja) | 複合コラーゲンスポンジ及びその製造方法 | |
| CN105131109A (zh) | 一种胶原蛋白的提取方法 | |
| CN104788559B (zh) | 一种生物医用鼠尾胶原蛋白的提取方法 | |
| CN107550933A (zh) | 一种定向释放功能的外泌体复合胶原生物支架及其制备方法和用途 | |
| JPH0348888B2 (zh) | ||
| CN103285031B (zh) | 解聚海参糖胺聚糖在制备防治血栓栓塞疾病药物中的应用 | |
| KR101916759B1 (ko) | 고농도, 고순도의 동종 콜라겐 제조 방법 및 동종 콜라겐 지지체의 제조방법 | |
| CN104721877B (zh) | 一种无菌胶原贴敷料及其制备方法 | |
| CN104017073A (zh) | 一种胶原蛋白的制备方法 | |
| CN110317261A (zh) | 改进的两步超滤法生产人血白蛋白 | |
| CN105647848A (zh) | 鹿血清的分离制备方法 | |
| CN109504731A (zh) | 一种羊胎盘活性肽的制备方法 | |
| CN105011176B (zh) | 以刺梨为原料的sod制品及其制备方法 | |
| CN107383185A (zh) | 一种高纯度牛血清白蛋白的提取方法 | |
| CN1586499A (zh) | 小牛血去蛋白提取物、其眼膏制剂及其制备方法 | |
| CN108926703A (zh) | 骨肽葡萄糖注射液 | |
| CN107303385B (zh) | 一种脑蛋白水解物溶液的制备方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| WD01 | Invention patent application deemed withdrawn after publication |
Application publication date: 20191011 |
|
| WD01 | Invention patent application deemed withdrawn after publication |